作为抗菌干预的新型靶的腺苷酰环化酶
专利汇可以提供作为抗菌干预的新型靶的腺苷酰环化酶专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及通过给予有效量的细菌腺苷酰环化酶调节剂 预防 或 治疗 由细菌感染引起的 疾病 的方法。本发明还提供用于预防或治疗疾病的药物组合物，所述组合物含有 治疗有效量 的细菌腺苷酰环化酶调节剂。本发明还提供鉴定细菌腺苷酰环化酶的选择性调节剂的筛选方法，所述调节剂不会显著调节患者的腺苷酰环化酶。本发明还提供培养细菌病原体的方法和体外诱导致病状态的方法。，下面是作为抗菌干预的新型靶的腺苷酰环化酶专利的具体信息内容。
1.一种治疗患有细菌感染引起的疾病的患者的方法，所述方法包括：给予患者治疗量的细菌腺苷酰环化酶调节剂。
2. 权利要求1的方法，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的 量有效地显著阻止细菌由非致病状态变为致病状态，或者其中所给予 的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量使细菌由致病状态基本上回复为非 致病状态。
3. 权利要求2的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻 止感染细菌改变形状。
4. 权利要求2的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻 止感染细菌产生毒素。
5. 权利要求2的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻 止感染细菌发芽。
6. 权利要求2的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻 止感染细菌形成生物膜。
7. 权利要求2的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻 止感染细菌提高或降低生长速率。
8. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂抑制细 菌腺苷酰环化酶。
9. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂活化细 菌腺苷酰环化酶。
10. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂对感 染细菌具有显著的杀细菌作用。
11. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂对感 染细菌具有显著的细菌抑制作用。
12. 权利要求1的方法，其中所给予的细菌腺苦酰环化酶调节剂 的量不抑制或阻止细菌生长。
13. 权利要求l的方法，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量不杀死细菌。
14. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂影响 一种感染细菌的多于一种的细菌腺苦酰环化酶。
15. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺普酰环化酶调节剂影响 多于一种的感染细菌的多于一种的细菌腺苦酰环化酶。
16. 权利要求1的方法，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂 的量不影响细菌是否进入致病状态。
17. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶为 C(VHC03/pH敏感型。
18. 权利要求17的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苦酰环 化酶对(302的反应。
19. 权利要求17的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苦酰环 化酶对HCCb的反应。
20. 权利要求17的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苦酰环 化酶对pH的反应。
21. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶选自I类、 III类和IV类腺苷酰环化酶。
22. 权利要求l的方法，其中所述感染由选自以下的细菌引起： 革兰氏阴性细菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性细 菌、革兰氏阳性球菌和革兰氏阳性杆菌。
23. 权利要求l的方法，其中所述细菌感染由螺旋菌引起。
24. 权利要求l的方法，其中所述细菌感染由肠道细菌引起。
25. 权利要求24的方法，其中所述感染由选自以下的肠道细菌引 起：大肠軒菌(Esc/2en.c/n'a <%»〃)、 肠道沙门氏菌(iSa/mowe〃a ewfm'ca)、 志贺氏菌（幼/^//<3)、痢疾志贺氏菌（幼^6//<3 (i"e"fen'ae)、霍乱弧菌c/zo/erae)、创伤弧菌(F"/Zw'o vw/w折cw力、葛寸溶血弧菌(mn'o /7ara/zaemo(v"'CKS)、 创伤弧菌(Wn'o W一c一 、 . S肠弯曲菌(C膽py/o6ac^力'廳')、克雷伯氏菌(A7血,e〃a)、肠杆菌(五"敏o6a"er)、 沙雷氏菌属CSerrato)、变形杆菌(尸ratew力、普罗威登斯菌(尸raW^fe"da) 和摩才艮氏菌(Morga恥Z/")。
26.权利要求1的方法，其中所述感染由选自以下的细菌引起： 炭疽杆菌(^ac/〃w^ a"决rac/力、蜡状芽孑包杆菌(5a"7/ws ceretw)、破伤风 冲炎菌(C7os?W(i!.wm fefam')、 肉毒才复菌(C7o"n.wm 6ofw//m«w)、产气荚膜冲复 菌(C7o血W訓/?e/yh'"gem)、艰难梭菌(C7o血W鹏d骄"7e)、 结核分枝 軒菌(綺co6a"en'訓 励ercw/c^)、 嗜肺军团菌(丄e一we〃a p"ewmo/?/7/〃a)、 霍乱弧菌(F/6n'o c/w/era)、 金黄色葡萄球菌 (5"to/?/^/ococcws awrew力、表皮葡萄球菌(加/?/y^/ococews e/?/tfe/7mVfe)、 腐生葡萄球菌(iStep/^/ococcws saprc;p/^"cws)、 化脓链球菌 (5Vre/?tococcws/^oge"as)、 无乳链球菌(iS/re/7tococcMS aga/a;cf/fle)、 粪肠 球菌(五她racoccwjy^c"嗣、牛链球菌(5W/?tococcws Z?ov&)、肺炎链球 菌(5W/3tococcws j9"g,o"/ag)、 草绿色链球菌(5Vr，ococcus v/n.(iflm1)、 铜绿,支单胞菌(尸sewc/owo"as aerwg/"ora)、 白喉#•状杆菌 (Coo^"e^cten'wm
27. 权利要求1的方法，其中所述感染由铜绿假单胞菌 (尸化W(iomowas aerwgz'wosa)引起。
28. 权利要求1的方法，其中所述感染由抗一种或多种抗细菌剂 的细菌引起。
29. 权利要求l的方法，其中所述患者为真核生物。
30. 权利要求l的方法，其中所述患者为植物。
31. 权利要求1的方法，其中所述患者为动物。
32. 权利要求l的方法，其中所述患者为鸟类。
33. 权利要求32的方法，其中所述鸟类为家禽。
34. 权利要求l的方法，其中所述患者为鱼类。
35. 权利要求l的方法，其中所述患者为哺乳动物。
36. 权利要求35的方法，其中所述哺乳动物为家畜或宠物。
37. 权利要求36的方法，其中所述家畜选自牛、猪和绵羊。
38. 权利要求36的方法，其中所述宠物选自狗、猫和马。
39. 权利要求35的方法，其中所述哺乳动物为人。
40. 权利要求39的方法，其中所述人为免疫功能受损的人。
41. 权利要求40的方法，其中所述免疫功能受损的人选自HIV 感染患者、化疗患者、血癌患者、移植接受者、接受免疫抑制药物的 患者、接受阿片类药物的患者和灼伤者。
42. 权利要求39的方法，其中所述人患有机会性肺感染。
43. 权利要求42的方法，其中所述人选自：哮喘患者、嚢性纤维 化患者、肉样瘤病患者。
44. 权利要求39的方法，其中所述人已经接触空气传播的传染原。
45. 权利要求44的方法，其中所述人选自肺结核患者和炭疽感染 患者。
46. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂不抑 制患者的腺苷酰环化酶。
47. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂相对 于患者的腺苷酰环化酶是选择性的。
48. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂相对 于患者的腺苷酰环化酶的选择性足以实现对感染细菌的治疗作用，而 不会对患者的腺苷酰环化酶产生毒性调节。
49. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂选自 小分子、适体和干扰RNA。
50. 权利要求1的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂选自：KH7.102，KH7.羅，KH7.109，
51. 权利要求l的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂选自 儿茶酚雌激素及其衍生物。
52. 权利要求1的方法，所述方法进一步包括给予一种或多种其 它治疗剂。
53. 权利要求52的方法，其中所述其它治疗剂为抗细菌剂。
54. —种预防患者罹患由细菌感染引起的疾病的方法，所述方法 包括给予患者治疗量的细菌腺苦酰环化酶调节剂。
55. 权利要求54的方法，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂 的量有效地显著阻止细菌由非致病状态变为致病状态，或者其中细菌 腺苷酰环化酶调节剂使细菌由致病状态基本上回复为非致病状态。
56. 权利要求55的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著 阻止感染细菌改变形状。
57. 权利要求55的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著 阻止感染细菌产生毒素。
58. 权利要求55的方法，其中所述细菌腺普酰环化酶调节剂显著 阻止感染细菌发芽。
59. 权利要求55的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著 阻止感染细菌形成生物膜。
60. 权利要求55的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著 阻止感染细菌提高或降低生长速率。
61. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂抑制 细菌腺苷酰环化酶。
62. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂活化 细菌腺苷酰环化酶。
63. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂对感 染细菌具有显著的杀细菌作用。
64. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂对感 染细菌具有显著的细菌抑制作用。
65. 权利要求54的方法，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂 的量不抑制或阻止细菌生长。
66. 权利要求54的方法，其中所给予的细菌腺苦酰环化酶调节剂 的量不杀死细菌。
67. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂影响 一种感染细菌的多于一种的细菌腺苦酰环化酶。
68. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂影响 多于一种的感染细菌的多于一种的细菌腺香酰环化酶。
69. 权利要求54的方法，其中所给予的细菌腺苦酰环化酶调节剂 的量不影响细菌是否进入致病状态。
70. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶为 C(VHC03/pH敏感型。
71. 权利要求70的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苷酰环化酶对C02的反应。
72. 权利要求70的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苷酰环 化酶对HC03的反应。
73. 权利要求70的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苷酰环 化酶对pH的反应。
74. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶选自I类、 III类和IV类腺苦酰环化酶。
75. 权利要求54的方法，其中所述感染由选自以下的细菌引起： 革兰氏阴性细菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性细 菌、革兰氏阳性球菌和革兰氏阳性杆菌。
76. 权利要求54的方法，其中所述细菌感染由螺旋菌引起。
77. 权利要求54的方法，其中所述细菌感染由肠道细菌引起。
78. 权利要求77的方法，其中所述感染由选自以下的肠道细菌引 起：大肠杆菌(Esc/2m,c/2/a co/〖)、肠道沙门氏菌(/Sa/mo"e〃a e"fm'ca)、 志贺氏菌（幼&6//0)、痢疾志贺氏菌（幼/^//<3办化Wen'ae)、霍乱弧菌 (K/6〃'o c/zo/erae)、创伤弧菌(rAWo vw/my?cw力、葛'J溶血弧菌(Fz77n'o para/wewoiyZcus)、 创伤弧菌(KzWo vw/my?cws) 、 2肠弯曲菌 (Cawpy/o6a"ery^/w"0、克雷4白氏菌(A7e^s/e〃a)、肠4干菌(5"fen9Z?acfer)、 沙雷氏菌属(5ferra"a)、变形杆菌(尸rateus)、普罗威登斯菌(户rav/cfe"cz'a) 和摩才艮氏菌(Mbrga""/a)。
79. 权利要求54的方法，其中所述感染由选自以下的细菌引起： 炭疽杆菌C6acz7/iw a"/Zzrac^s)、蜡状芽孢杆菌(5ac/〃ws cerew力、破伤风 才复菌(C7asfr7W/ww/eta"z')、 肉毒冲炎菌(C7c^?rz.wm 6ofw//mw7)、产气荚膜冲炎 菌(C7osWc/z'ww /?ei/n'"gera)、 ？艮难才炎菌(C7cwm'(i/wm c/zj^?cz7e)、结核分斗支 4干菌(Afyco6acfen.wm rt^ercw/cw&) 、 口耆肺军团菌(丄eg/owe〃a ;?"ew附o;?/z"/a)、 霍舌L歹瓜菌(F仏n,o c/zo/ena)、 金黄色葡萄J求菌 (S鄉/z少/ococcus awre—、 表皮葡萄球菌(iS鄉/^/ococcus —(ie/7m.Gfc)、 腐生葡萄^求菌(Stop/^/ococcws sopra/?/^"cw力、化脓链J求菌 (浙，ococcws _p_yoge"as)、 无乳链球菌(5Vr取ococcws aga/ac"ae)、 粪肠 球菌(E"teracoccws々ecafc)、牛链球菌(》epfococcws Z)oWs)、肺炎链球 菌(5^e;?fococcus /3"ewwow/ae)、 草纟录色链J求菌(
81. 权利要求54的方法，其中所述感染由抗一种或多种抗细菌剂 的细菌引起。
82. 权利要求54的方法，其中所述患者为真核生物。其中所述患者为植物。 其中所述患者为动物。 其中所述患者为鸟类。 其中所述鸟类为家禽。 其中所述患者为鱼类。 其中所述患者为哺乳动物。 其中所述哺乳动物为家畜或宠物。 其中所述家畜选自牛、猪和绵羊。 其中所述宠物选自狗、猫和马。 其中所述哺乳动物为人。 其中所述人为免疫功能受损的人。
83. 权利要求54的方法，
84. 权利要求54的方法，
85. 权利要求54的方法，
86. 权利要求85的方法，
87. 权利要求54的方法，
88. 权利要求54的方法，
89. 权利要求54的方法，
90. 权利要求89的方法，
91. 权利要求89的方法，
92. 权利要求88的方法，
93. 权利要求92的方法，
94. 权利要求93的方法，其中所述免疫功能受损的人选自HIV感染患者、化疗患者、血癌患者、移植接受者、接受免疫抑制药物的患者、接受阿片类药物的患者和灼伤者。
95. 权利要求92的方法，其中所述人对机会性肺感染易感染。
96. 权利要求95的方法，其中所述人选自：患有哮喘的人、患有嚢性纤维化的人、患有肉样瘤病的人。
97. 权利要求92的方法，其中所述人已经接触空气传播的传染原。
98. 权利要求97的方法，其中所i^A选自患有肺结核的人和患有炭疽感染的人。
99. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂不抑制患者的腺苷酰环化酶。
100. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂相对于患者的腺苷酰环化酶是选择性的。
101. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂相对于患者的腺苷酰环化酶的选择性足以实现对感染细菌的治疗作用，而不会对患者的腺苷酰环化酶产生毒性调节。
102. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂选自小分子、适体和干扰RNA。
103. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂选自：KH7.102，KH7.簡
104. 权利要求54的方法，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂选自儿茶酚雌激素及其衍生物。
105. 权利要求54的方法，所述方法进一步包括给予一种或多种其它治疗剂。
106. 权利要求105的方法，其中所述其它治疗剂为抗细菌剂。
107. —种包含治疗有效量的细菌腺苷酰环化酶调节剂的药物组合物。
108. 权利要求107的药物组合物，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量有效地显著阻止细菌由非致病状态变为致病状态，或者其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量使细菌由致病状态基本上回复为非致病状态。
109. 权利要求107的药物组合物，其中所述调节剂在药学上可接受的赋形剂中传递。
110. 权利要求107的药物組合物，其中所述組合物为口服剂型。
111. 权利要求107的药物组合物，其中所述组合物为胃肠外剂型。
112. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻止感染细菌改变形状。
113. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻止感染细菌产生毒素。
114. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺香酰环化酶调节剂显著阻止感染细菌发芽。
115. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂显著阻止感染细菌形成生物膜。
116. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂显著阻止感染细菌提高或降低生长速率。
117. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂抑制细菌腺苷酰环化酶。
118. 权利要求105的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂活化细菌腺苷酰环化酶。
119. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂对感染细菌具有显著的杀细菌作用。
120. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苦酰环化酶调节剂对感染细菌具有显著的细菌抑制作用。
121. 权利要求107的药物组合物，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量不抑制或阻止细菌的生长。
122. 权利要求107的药物组合物，其中所给予的细菌腺苷酰环化酶调节剂的量不杀死细菌。
123. 权利要求105的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂影响 一种感染细菌的多于 一种的细菌腺苷酰环化酶。
124. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂影响多于一种的感染细菌的多于一种的细菌腺苷酰环化酶。
125. 权利要求107的药物组合物，其中所给予的细菌腺苷酰环化 酶调节剂的量不影响细菌是否进入致病状态。
126. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶为C02/HC(VpH敏感型。
127. 权利要求126的药物组合物，其中所述调节剂影响感染细菌腺苦酰环化酶对C02的反应。
128. 权利要求126的药物组合物，其中所述调节剂影响感染细菌腺苷酰环化酶对HC03的反应。
129. 权利要求126的方法，其中所述调节剂影响感染细菌腺苷酰环化酶对pH的反应。
130. 权利要求124的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶选自I类、III类和IV类腺苦酰环化酶。
131. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌感染由螺旋菌引起。
132. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌感染由肠道细菌引起。
133. 权利要求107的药物组合物，其中所述感染由选自以下的细菌引起：革兰氏阴性细菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性细菌、革兰氏阳性球菌和革兰氏阳性杆菌。
134. 权利要求133的方法，其中所述感染由选自以下的肠道细菌引起：大肠才干菌(Esc/zer/c/2/a co//)、肠道沙门氏菌(5"a/w?。"e〃a e"fen'ca)、志贺氏菌（S/n'ge〃a)、痢疾志贺氏菌（幼&6//<3办化"ten'ae)、霍乱弧菌(Kz7?n'o c/zo/erae)、创伤？瓜菌(K/Z?n'o vw/my?cw力、副、溶血《瓜菌(m"'o/?ara/zaewo/少"cw力、创伤弧菌(Fz'n'o vw/w)?cw力、S肠弯曲菌(C画p少/。6a"er勿'廳')、克雷伯氏菌(尺/血/e//。)、肠杆菌(五她raZ?a"er)、沙雷氏菌属(&rra"a)、变形杆菌、普罗威登斯菌(尸raW^"cz'a)和摩根氏菌(Morga"e〃a)。
135. 权利要求107的药物组合物，其中所述感染由选自以下的细菌引起：炭症才干菌CSa"7/ws awf/^ac/s)、错^犬芽孑包軒菌(5acz7/iw cerews)、石皮伤风才炎菌(C7os?nV/z'Mm fetom')、 肉毒才炎菌(C7osWwm Z?ofw/z'"wm)、产气芙膜才炎菌(C7c^W(i/w附/?e/^/h'wgera)、 7艮难冲炎菌(C7osWd/ww 6^j^?cz7e)、 结4亥分斗支才干菌(Afyco6a"en'wm fw6ercw/ow,力、嗜肺军团菌(丄egiowe〃a/?wewwop/n7/a)、 霍乱弧菌(^n'o c/zo/era)、 金黄色葡萄球菌(jS鄉/z少/ococcws awre—、 表皮葡萄球菌(iS鄉/2—cocci^ e/?/cfer?mV&)、腐生葡萄球菌(iSto;?/i_y/ococcws sapr0p/2y"CKs)、 化脓链球菌(»SVre/?tococcz^_p_yogewas)、 无乳链球菌(iSVre/?tococciw aga/ac"'ae)、 粪肠球菌(五"^ococcw々eca嗣、牛链球菌(5Vreptococc船Z?ov&)、肺炎链球菌(iSV/-e_ptococcws pwe画o" /ae)、 草绿色链球菌(5W/?tococcws v^油/w)、#]纟录々支单月包菌(尸seM(iowo"as oerwgz'"osa)、 白"f矣才奉^|犬斥干菌(Co^y"e6ac化n'ww
136. 权利要求107的药物组合物，其中所述感染由铜绿假单胞菌f?化wfifomo"os agrag7'wo^引起。
137. 权利要求107的药物组合物，其中所述感染由抗一种或多种抗细菌剂的细菌引起。
138. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为真核生物。
139. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为植物。
140. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为动物。
141. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为鸟类。
142. 权利要求 141 的药物组合物， 其中所述鸟类为家禽。
143. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为鱼类。
144. 权利要求 107 的药物组合物， 其中所述患者为哺乳动物。
145. 权利要求 144 的药物组4、物， 其中所述哺乳动物为家畜或宠
146. 权利要求 145 的药物组合物， 其中所述家畜选自牛、猪和绵
147. 权利要求 145 的药物组合物， 其中所述宠物选自狗、猫和马。
148. 权利要求 144 的药物组合物， 其中所述哺乳动物为人。
149. 权利要求 148 的药物组合物， 其中所述人为免疫功能受损的
150. 权利要求 149 的药物组合物， 其中所述免疫功能受损的人选自HIV感染患者、化疗患者、血癌患者、移植接受者、接受免疫抑制药物的患者、接受阿片类药物的患者和灼伤者。
151. 权利要求148的药物组合物，其中所述人患有机会性肺感染。
152. 权利要求151的药物组合物，其中所述人选自：患有哞喘的 人、患有嚢性纤维化的人、患有肉样瘤病的人。
153. 权利要求148的药物组合物，其中所述人已经接触空气传播 的传染原。
154. 权利要求153的药物组合物，其中所述人选自肺结核患者和 炭疽感染患者。
155. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂不抑制患者的腺苷酰环化酶。
156. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂相对于患者的腺苷酰环化酶是选择性的。
157. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调 节剂相对于患者的腺苷酰环化酶的选择性足以实现对感染细菌的治 疗作用，而不会对患者的腺苷酰环化酶产生毒性调节。
158. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调 节剂选自小分子、适体和干扰RNA。
159. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苷酰环化酶调 节剂选自：
160. 权利要求107的药物组合物，其中所述细菌腺苦酰环化酶调 节剂选自儿茶酚雌激素及其衍生物。
161. 权利要求107的药物组合物，所述药物组合物进一步包括给 予一种或多种其它治疗剂。
162. 权利要求161的药物组合物，其中所述其它治疗剂为抗细菌剂。
163. 治疗患者由患者中的细菌腺苦酰环化酶介导的细菌感染的 方法，所述方法包括调节细菌的腺苷酰环化酶。
164. 抑制细菌的腺香酰环化酶的方法，所述方法包括：使抑制细 菌腺苦酰环化酶的化合物接触真核细胞。
165. —种鉴定细菌腺苦酰环化酶的选择性调节剂的方法，所述方 法包括：针对一种或多种人腺苷酰环化酶测试所述调节剂，针对一种 或多种细菌腺香酰环化酶测试所述调节剂，并确定所述调节剂对所述 腺苷酰环化酶的相对选择性。
166. —种体外控制细菌生长的方法，所述方法包括使细菌与细菌 腺苷酰环化酶调节剂接触。
167. 权利要求166的方法，其中所述调节剂为体外刺激细菌增殖 的活化剂。
168. 权利要求166的方法，其中所述调节剂为细菌腺苷酰环化酶 的活化剂，所述活化剂体外诱导与细菌致病机制相关的致病状态或基 因表达语。
169. 权利要求168的方法，其中所述致病状态的细菌被失活，并 在免疫方案中用于诱导对细菌感染的抗性。
170. 权利要求168的方法，其中所述细菌用于产生用于接种的保 护性抗原。
171. 权利要求166的方法，其中所述细菌用于发酵。
172. 权利要求166的方法，其中所述细菌用于生产重组蛋白。
173. 权利要求166的方法，其中所述调节剂体外降低细菌增殖。
174. 权利要求166的方法，其中所述调节剂具有显著的杀细菌作用。
175. 权利要求166的方法，其中所述调节剂具有显著的细菌抑制 作用。
176. 权利要求166的方法，其中所述调节剂显著阻止细菌进入致 病状态。
177. 权利要求166的方法，其中所述调节剂用于充分消毒食品加 工i殳备或医疗器才成。
178. 权利要求166的方法，其中所述调节剂作为防腐剂加入日用 消费品，日用消费品包括食品、饮料、牙膏、洗液和油膏。
179. 权利要求166的方法，其中所述调节剂加至织物中，所述织 物包括丝绸。
180. 权利要求166的方法，其中所述细菌腺苷酰环化酶调节剂作 为抗细菌剂加至商品中，所述商品包括肥皂、洗发精、漱口水、洗手 液、洗液、油膏、消毒剂、家居清洁剂、油漆、染色剂和金属加工液。
181. 权利要求166的方法，其中所述调节剂影响仅一种细菌的细 菌腺普酰环化酶。
182. 权利要求166的方法，其中所述调节剂影响多于一种的细菌 的细菌腺苷酰环化酶。
作为抗菌干预的新型靶的腺苷酰环化酶 相关申请的交叉参考
发明背景
在临床环境如医院中是特别难的问题。因此，在预防和治疗细菌感染 的现行努力中，急需治疗和预防细菌感染的新方法。
发明概述
—de77m'cfo)、 腐生葡萄球菌(tS啤/2卢coccws sa;?ro;7/z,'cw力、化腺链球 菌(浙取ococcws ^yoge"ay)、 无乳链球菌(5Wptococcws aga/ac"'ae)、 粪 肠J求菌(五"feracoccwsyi^cafo)、牛链5求菌(/Streptococcic feov&)、月巿炎链 球菌(iSVr，ococcws p"ewmo"/"g)、 草绿色链球菌(5Vre/7tococcws vzWdcvM) 、 4同纟录#支单月包菌(尸MW(io附o"as aen^/"oj")、 白喉才奉卄犬4干菌 (C。o^e6acfen'wm Aj^f/zen'ae)、 单核纟田胞增生性李氏菌(丄^ten'a 歸"oc,ge"as)、 布氏杆菌C6wrce〃a) 、 土拉弗朗西斯菌(尸ra腦W/a ^/arera&)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(yeraz'w-" ewferaco/淑ca)、 4叚结核耶 尔森氏菌(T"eraz'"〖"/wei^/Ww6en^/os/s)、 鼠疫耶尔森氏菌(7"e^s/m'a p&?to)、 多杀巴斯德杆菌(尸os&wre〃a ww/toc/c/a)、 结核分斗支杆菌 (Afyco6of"eW画励e7xw/as7X)、牛分枝杆菌(柳co6acten'謂6oWs)、鸟分 才支才干菌(Afyco6a"en'wm 、麻风分才支斥干菌(聊co6acfen,ww /eprae)、
衣氏放线菌(^c"wowyc&s /srae/")、 星形诺卡菌(iVocaWa a他razWas)、 肺炎支原体(A^co/?/osma /?"ewmo"z.ae)、 苍白密虫累S走体(7Ve尸owema p"〃/(iww)、 伯氏$充虫累体(5o^re//a 6rwgc/or/en,)、 问号钩端虫累^走体 (丄eptosp/ra /"&〃ogara)、鹦武乌热衣原体(C7z/aw;Y/z'(3;7S故a"')、沙目艮衣原 体(672/<37^>^//0; frac/zomari力、月申炎衣^^体(C7z/cwy^/z'a/?wewwo"z'ae)、立氏 立克次体(i?. n'cfeto")、贝氏4可克^_体(0?;(^//" 6wwe&)、普氏立克次 体(i?. /Vovrazeh'O 、 阴道力口德、纟内菌(Ganiwere〃(3 vag7'"afc)、 乳酸才干菌 (Za"o6ac〃/w力、 消化5求菌(尸e/7tococcw力、 消化链J求菌 (尸e/?tos?re/?tococciw)、 丙酸4干菌(iVo/?/o"/6acfeWww) 、 7>op/z^>W(3、 类 鼻疽伯克霍尔德、氏菌(5w狄o/cfen'a p"Mcfowa〃e/)和鼻疽伯克霍尔德、氏 菌(万w狄oWen'a wa/Ze!')。在又一个实施方案中，所述感染细菌抗一种 或多种抗细菌剂。[0017] 本发明还提供通过给予患者有效量的细菌腺苷酰环化 酶调节剂治疗患有细菌感染引起的疾病的患者的方法，其中所述患者 为真核生物。在进一步的实施方案中，所述患者为植物、动物、鸟、 鱼或哺乳动物。所述患者还可以为家畜，如牛、猪、绵羊、家禽和马， 或者可以为宠物，如狗和猫。
[0041 ] 本发明还提供预防患者由患者中的细菌腺苷酰环化酶 介导的细菌感染的方法，所述方法包括调节细菌的腺苷酰环化酶。
pe/^/"ge"s)、 艰难梭菌（C/ayf"Wwm c^?"7e)、 结核分枝杆菌 (鄉co6a"en.w附^/6ercw/oj&)、 嗜肺军团菌(Zeg7'owe〃a /7"ewmo_p/^〃a)、 霍乱弧菌(r/6"'o c/zo/era)、金黄色葡萄J求菌OSto/?/zy/ococcws awreus)、表 皮葡萄球菌(5"top/^/ococc船e/7〖cfer附ftfe)、腐生葡萄球菌(Stop/2少/ococcws sop，一/cw力、化脓链球菌(5V，tococcus ;^oge"as)、 无乳链球菌 (/S^r印tococcws aga/ac",ae)、粪肠球菌(五"teracoccws^eca&)、牛链球菌 ((S/re/?tococcws v&)、月申炎链5求菌(5Vre/?tococcwj 、草纟录色
链3求菌(5^eptococcus v/r/dam1) 、 4同纟录叶叚单月包菌(尸sewfifomowas (3erag/wcwa)、白喉才奉状斥干菌(Co?7"e6acfen'ww ^p/zAerz'ae)、单核细月包增 生性李氏菌(Zj'"en'a wowoc^ogew&s)、布氏杆菌(5wce//a) 、 土拉弗朗西 斯菌(Fra"c&e〃a fw/orera/"、 小肠结肠炎耶尔森氏菌(Fera/m'a e"teraco/Z"ca)、，支结斗亥耶尔森氏菌(7"era/m'a /wewcfofw&ercw/ow's)、 鼠疫 耶尔森氏菌(y^w'"/a 、多杀巴斯德杆菌CPa^ewre〃a ww/tocWa)、
结冲亥分才支4干菌(綺co&(3cfen'ww fw6ercw/ow's)、 牛分4支才干菌
38(聊co6acfer/wm 6ov/s)、 鸟分4支才干菌(鄉co6acfen'wm av/wm)、麻风分才支 杆菌(鄉co6ac&n'wm /eprae)、 衣氏放幾菌(/4c/z'"cw7;kc&s /srae///)、 星形 诺卡菌(iVocaW" astero/das)、肺炎支原体(A^cc;p/as附fl /?"ewmo"/ae)、 苍白密虫累S走体(7>e;?o"ema ;?a〃Z(iwm)、 伯氏i?危螺S走体(Bo/re//a 6rwgdo《er0 、 问号钩端螺S走体(丄ejt?tos;?,ra 、璎鸟鵪热衣原体
(C7z/amj^7a、沙目艮衣原体(C7z/am;;(i/a的c/zom加's)、肺炎衣原体 (C7z/aw_y
(C7oWn'w附6ofw/z'"ww)、产气荚膜4炎菌(C7asfnWMw/?e?^h'"ge"s)、 ？艮难才炎 菌(C7o血W騰c/骄"7e)、 结核分枝杆菌(鄉coZ)acfm'謂励ercw/os&)、 嗜月申军团菌(丄eg7.owe〃a pwewwop/«7/a)、霍《U瓜菌(F/6Wo c/zo/era)、金黄 色葡萄球菌(5"啤/^/ococcz^ awre—、 表皮葡萄球菌(5"鄉/7—coccus ep/fife/7m'cfc)、 腐生葡萄球菌(iS鄉/2卢cocc7^ sa/?r0p/2Wcw力、化腺链球 菌(5W/?fococctw p少oge"e力、无乳链球菌(5W/?tococci^ aga/actoe)、 粪 肠球菌(E"feracoccusT^eca/z's)、牛链球菌(5V，tococciw 6ov&)、肺炎链 球菌(5W;^ococcws戸e訓ow'ae)、 草绿色链球菌(5W/^ococcw WnWara) 、 #]纟录*支单月包菌wctomowos1 aen^7-"0sa)、 白W矣才奉^犬4干菌 (Coo^e6acten'wm ^p/^/zen'ae)、 单核细胞增生性李氏菌 ,"oc卢ge"as)、 布氏杆菌(5wrce〃a) 、 土拉弗朗西斯菌(Fra"c&e〃a fw/arera&)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(r"era/"/a e"feraco/衍ca)、々支结核耶 尔森氏菌(7"era/"/a j^sew(iofe6ercw/as7》、鼠疫耶尔森氏菌(F"era〖m'a p&sto)、 多杀巴斯德杆菌(尸aWewre〃a mw/toc/c?a)、 结核分枝杆菌 (岭co6ac自'wm励ercw/os/力、牛分枝杆菌(聊co6ac^7', Z)ov&)、鸟分 斗支才干菌(鄉co6acfen'ww avz'ww)、麻风分才支才干菌(鄉co6a"en'ww /e/?rae)、 衣氏放线菌(Jc""om少cas ^rae"/)、 星形诺卡菌(M?caW(3 osteraz'(ias)、 月申炎支原体(A^co/?/oyma /?"ewmom'ae)、 苍白密虫累S走体(7Vejpo"ewa /?fl〃Wwm)、 伯氏發u虫累S走体(S。/re//(3 Z?rwgc/o;/en')、 问号钩端螺S走体 CL印tos^'ra z'"f^rogam)、鸚鶴热衣原体(C/z/am;^'a戸故ac/)、沙目艮衣原 体(C7z/am;;c^3 frac/2omaf/s)、肺炎衣/^体(C7z/am;^^'a/wewmo"/ae)、立氏 立克次体(i?. n'cfeto")、贝氏柯克斯体(Co:de〃a 6w"幼7)、普氏立克次 体(兄/Vovvazeh7)、 阴道力口德纳菌(（7ani"ere〃a vag/"a/h)、乳酸杆菌 (丄acto&c/〃w"、 消化球菌CP印tococcMS)、 消化链J求菌 (Pe;?/asfre/7tococcws)、 丙酸4干菌(7Vo/?fom'6aCen'wm) 、 7>o/?/2e^ym(3 、 类
42鼻疽伯克霍尔德、氏菌CSw狄o/cfen'a ;wewc/oma〃e/)和鼻疽伯克霍尔德氏
图1.渐增浓度的KH7.148化合物引起铜绿假单胞菌 (尸"j^omowas aen/gz'"ora) CyaB腺苷酰环化酶活性的降低。CyaB作为 聚组氨酸标记的融合蛋白在大肠杆菌(五.co/0中异源表达，并使用镍柱 纯化。通过使用Assay Designs的Correlate-EIA直接环AMP测定试剂 盒按照生产商的说明书检测环AMP水平测定腺苷酰环化酶活性。
图2.渐增浓度的KH7.120化合物引起铜绿假单胞菌 (i^ewcfowo"os aeragz'"oM) CyaB腺苷酰环化酶活性的增加。CyaB作为 聚组氨酸标记的融合蛋白在大肠杆菌(五.co/z')中异源表达，并使用镍柱 纯化。通过使用Assay Designs的Correlate-EIA直接环AMP测定试剂 盒按照生产商的说明书检测环AMP水平测定腺苷酰环化酶活性。
发明详述
的毒素，诸如来自炭疽芽孢杆菌(^zc/〃m fl"Arad力的水肿因子(EF)(其 引起炭疽热）、来自百日咳博德特氏菌080^^&//"peWz^s&)的CyaA (百 日咳的起因）和来自铜绿假单胞菌CPse"(iomo"as aen^/"o犯)的ExoY (多种院内感染的起因）。III类是已知的最大组别，由在细菌、古生菌 和真核生物中存在的环化酶组成。IV类酶存在于古细菌生物中，也存 在于某些细菌中，包括产生瘟疫的鼠疫耶尔森氏菌(l^^m'a;?eW力。V 类包括严格厌氧细菌栖瘤胃普雷沃氏菌(iVevofe〃a rawz'm'co/a)的 一种 腺苷酰环化酶。VI类存在于固氮细菌埃特里根瘤菌(7?;^oWww "//)中。 细菌中存在全部6类酶，但在真核生物中^f义描述了属于III类的酶。
即时的平衡，所述碳酸酐酶催化二氧化碳和水向碳酸快速互变，并按
照下式解离为质子和碳酸氬根离子：
C02 + H20 ^±1 H2C03 HC03- +H+
该反应在水溶液中自发发生，但进行得很緩慢。酶一碳酸酐酶大大地
提高了该反应的速率。
遇到急剧的环境转变，就使用该转变作为信号，来改变其生长和毒力。
感染性细菌使用的一种这样的环境信号是C02、 HC(V和/或pH浓度
的改变。人(或动物)体中的（:02浓度(5%(:02)相比于大气(0.03%(:02)有150倍的差异。因为C02水平与碳酸氢盐浓度和pH水平相平衡， 所以这些感染细菌在感染宿主中时，可以感受到所检测的C02浓度、 HC03浓度或pH水平的差异。
(尺/e^/e〃a)、肠杆菌(五"&rakzcfer)、沙雷氏菌属OSerra"a)、变形杆菌 (尸rafews)、普罗威登斯菌CPraW6fe"c/a)和摩根氏菌(Morga"e〃a)。疾病 可由包括以下的其它细菌感染引起：炭疽杆菌CBacz'〃iw a"Ara"'"、蜡 状芽孢杆菌CSacz7/ws cerew"、破伤风梭菌（C7c^W&ww fetom')、肉毒梭 菌(C7ostWww 6o,w//"ww)、产气荚膜斗炎菌(C7ayfr7.d/wn/7e?^7'"gera)、 ？艮难 梭菌(C7o血W應d骄"7e)、结核分枝杆菌(聊coZ?ac/m'画励ercw/osfs)、 p耆月申军团菌(丄egz.owe〃ap"ewwo/?/n7/a)、霍舌U瓜菌(K/6n.0 c/zo/era)、金黄
45色葡萄J求菌(Sto/?/^/ococcws ai/Mw力、表皮葡萄J求菌(Stop/^/ococcus 印z'cfemWs)、 腐生葡萄球菌OS鄉/z少/ococcws sapro/?/2,'cw力、化脈链球 菌(S^/?tococcwj/?少oge"as)、 无享L链球菌(;SWptococcws aga/ac"ae)、 粪 肠3求菌(五wteracoccws々eca/〖51)、牛链J求菌(5^e/?tococcws 6ov/s)、肺炎链 球菌(5Vre/^。coccws p"e麵。w,ae)、 草绿色链球菌(浙取ococcws 、 铜纟录j艮单月包菌(尸化W(iowo"as "erwgi"osa)、 白p侯才奉讶犬才干菌 (C。o^e6a"en'wm c^fe/zen'ae)、 单核细胞增生性李氏菌(ZiWen'a 膨"oc,ge"&s)、 布氏杆菌(Bwrce〃a) 、 土拉弗朗西斯菌(Fra"c&e//。 fw/arera&)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(7era/m'a ewfe厂oco/z'"ca)、々支结核耶 尔森氏菌(Fera/m'a p化M(iofw6en:w/as&)、 鼠疫耶尔森氏菌(Fersfm'a 、 多杀巴斯德杆菌(尸osfewre〃a附w/toc/cfa)、 结核分斗支杆菌 (Afyco6ac^7',加6ercw/0^)、牛分枝軒菌(A^co6"cten', Z?ovz》、鸟分 冲支^f菌(Afyco6ac&n'i/附otWww)、麻风分才支4干菌(Afyco6a"en'w附/eprae)、 衣氏放线菌(^criwow;ycas &rae/z'0、 星形诺卡菌(A^c"Wc? a他raz'ofes)、 月市炎支原体(聊cop/osma p"ewmow'ae)、 苍白密虫累旋体(7>epo"ema ;?a〃zWwm)、伯氏疏螺S走体(Bo^re//a Z?rag«ior/en')、 问号钩端螺-走体 /"^rog
肺炎的更常见病因。嗜肺军团菌(丄.；?"ewmo;7/zz7a)通常通过雾化污染的 新鲜水源如空调系统中的冷却塔获得。目前对嗜肺军团菌(丄. 戶ewmo/?M")的有效治疗包括许多可得到的微生物药剂，例如大环内 酯、会诺酮和四环素。尽管目前可得到的抗微生物武器库对该病原体 有效，但抗生素抗性的威胁仍然存在(Jonas, 2003)。
类固醇等。小分子调节剂优选地具有低于约1500道尔顿的分子量、 更优选低于约500道尔顿的分子量。所述化合物可被修饰，以增强效 力、稳定性、药物相容性等。可以由合成的或天然的化合物文库筛选 候选的调节剂化合物。合成化合物文库可由众多公司商购，包括 Maybridge Chemical Co. (Trevillet， Cornwall, UK)、 Comgenex (Princeton, N丄)、Brandon Associates (Merrimack, N.H.)和 Microsource (New Milford, Conn.)。组合文库是可获得的，或者可以按照已知的合成技术 制备。或者，细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物文库 可《寻自仿J3口 Pan Laboratories (Bothell， Wash.)或MycoSearch (NC)，或 者易于通过本领域众所周知的方法生产。另外，可以通过常规的化学 和生物化学技术进一步修饰天然和合成产生的文库和化合物。
这可如下实现：制备适宜的预混伺料，其含有有效量的细菌腺苷酰环化酶调节剂，并将预混饲料掺入完全日粮(completeration)中。或者，可以将含有活性成分的中间体浓缩物或饲料添加物混合入饲料中。可以制备和给予这样的预混祠料和完全日粮的方式描述于以下参考文献(例如"Applied Animal Nutrition", W.H. Freedman and CO., SanFrancisco, U.S.A., 1969或"Livestock Feeds and Feeding" O and B books，Corvallis, Ore., U.S.A.， 1977)。
施方案中，减毒的细菌抹为肠道细菌，例如大肠杆菌(Esc/zen'c/n'aco/0、肠道沙门氏菌(5Wmo"e〃a e"fen'ca)、志贺氏菌(57n'ge/to)、痢疾志贺氏菌(57n'ge/to办se"fen'ae)、霍乱弧菌(F/6n'o c/zo/erae)、创伤弧菌(F/6n'ovw/wy?ciw)、葛'J溶血弧菌(P^6"'o /?ara/zaemo/;^z'cus)、 创伤弧菌(FzWovtz/my^ci^y空肠弯曲菌(Cawpy/oZ?ac&r_;力'""0、克雷4白氏菌(A7efe/e〃a)、肠杆菌C&7ferak?"er)、沙雷氏菌属(S^r加'a)、变形杆菌(尸rafews)、普罗威登斯菌(尸rav/^"c^)和摩根氏菌(Morga"e〃a)。在其它实施方案中，减毒的细菌菌林包括但不限于炭疽杆菌(i5acz7/^ a"决rac&)、蜡状芽孢杆菌(5ad〃ws cerew"、石皮伤风梭菌(C7oWnWwm tetom〕、 肉毒梭菌(C7o^n'ww 6o似/Z/wm)、产气荚膜才炎菌(C7astW(i/wm/7e/^h'Mgera)、 7艮难冲炎菌(C7o血W謹d骄"7e)、 结核分枝杆菌(脚co6a"en'wm rt/6ercw/o^)、嗜月申军团菌(丄eg7'o"e〃a/?wewmo;3/z/〃a)、霍乱子瓜菌(W6n'o c/zo/era)、金黄色葡萄球菌(iSto/?/2y/ococcus 、 表皮葡萄球菌(Sto/?/^/ococcws
印/6fenw.cfe)、腐生葡萄球菌(iSVa;?/^/ococciw sa/^c;p/^"cw力、化脓链球菌(5^ptococcws尸少oge"es)、 无乳链球菌(5Vre;?tococcws aga/ac""e)、 粪肠球菌(jE"feracocci^j&ecafo)、牛链球菌(5V，tococcws 6ovz\s)、月申炎链球菌(iS/，/ococcz^ /7"e，ow/a力、草绿色链球菌(5W/?^?coccmWn'(ia"力、^同乡录邗I单月包菌(尸sew(iomoway aerag7'"。j")、 白W矣才奉4大才干菌(Cb^y恥Z?"c^7'ww 、 单核细月包增生性李氏菌wo"oc_y、 布氏4干菌(5wrce//a) 、 土 4立弗朗西斯菌CFra"c/se〃a/w/wera^)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(;F^w'm'a ewferaco/zY/ca)、 ，I结核耶尔森氏菌(7"era/"/a /wewdofwZ)ercw/as7》、鼠疫耶尔森氏菌(F^w'm'ape幼》、多杀巴斯德杆菌CPas&wre〃a mw/todc/a)、结核分枝杆菌(Afyco6acfer/ww ft^ercw/os^h牛分枝軒菌(Afyco6ac^7'ww? 6ov&)、鸟分4支4干菌(Afyco6a"en.wm av〖wm)、麻风分4支才干菌(Afyco6acfen'ww /e/?nae)、衣氏放线菌(v4c""o呼c&y /srae/〃)、 星形诺卡菌(A^ocaWfl ostero/c/es)、肺炎支原体(Afyco/?/oyma /?"ewwow.ae)、 苍白密虫累-走体(rre/?o"ewo;?a〃z'dwm) 、 4白氏gt螺J走体CSo/re//" 6n^6fo?/en〕、 问号4勾端虫累》走体(丄eptoyp/ra /w&rragara)、嬰乌鵡热衣原体(CWam;^/z-a;M故acO、沙目艮衣原体(C7z/am-,a加cAo,納、肺炎衣原体(C7z/aw;^fez/?weMmom'(3e)、立氏立克次体(i?. Wcfeto")、贝氏柯克^j"体(CoxzW/a 6wmeW)、普氏立克次体(兄/VowazeA:z7)、 阴道力口德、纟内菌(Gani"ere〃a vag/"a/&)、吝丄酸才干菌(丄""o6ad〃M力、消化球菌(尸印tococcw"、 消化链球菌(尸eptosfre/?tococcus)、 丙酸杆菌(尸ra/?/om'Z?acten'wm) 、 ！Trop/ze7^ma 、 类鼻疽伯克霍尔德氏菌(BwA:/2o/cfen'a戸e"(iow(3〃e0和鼻疽伯克霍尔德氏
包括4全测cAMP的形成，以及检测ATP向cAMP的转变。这些技术 在本领域是众所周知的，含有详细方案的市售可得的试剂盒也是一个 选捧。例如，市售试剂盒包括得自Applied Biosystems的cAMP化学 发光免疫测定试剂盒cAMP-Screen Direct™、得自PerkinElmer的 cAMP Radiometric FlashPlate® (1251)测定试剂盒、得自Sigma-AWrich 的cAMP酶免疫测定试剂盒、得自Molecular Devices的CatchPoint cAMP测定试剂盒和得自Calbiochem的cAMP比色测定试剂盒，在此 仅举几例。许多市售可得的试剂盒预计或适于高通量筛选腺苷酰环化 酶活性。
实施例1. KH7化合物对人腺苷酰环化酶的作用
化合物基于它们的化学结构选自Chem Div文库。测定这些化合 物，以确定它们对人可溶性跨膜腺苷酰环化酶的作用。
体外分析
纯化的人sAC蛋白用于体外腺苷酰环化酶测定。该蛋白的纯化详 述于Litvin等，2003. (J. Biol. Chem. 278:15922-15926.)。该论文还描 述了用于sAC环化酶测定的一般性条件。用于体外测定的具体条件如 下。
对于基础性sAC活性，制备对所有反应都具有足量体积的测定主 混合物，其含有：50 mM Tris (pH 7.5)
20 mM肌磷酸
100 U/ml肌^寿酸激酶(CPK)
1 mMDTT
10mMMgCl2
将等份的主混合物加至纯化的人sAC。测定混合物还包括所示浓 度的KH化合物，或包含等体积的溶々某(即DMSO)作为对照。通过加 入5 mM ATP (总测定体积=100 pL)开始反应。将反应混合物于30°C 温育30分钟，然后加入100^10.2NHC1终止。刺激测定条件包括将 40 mM石友酸氢盐和5 mM CaCl2加至以上的主混合物。
在每个样品中寸吏用Assay Designs的Correlate-EIA直接环AMP 测定试剂盒按照生产商的说明书检测环AMP水平。
体内cAMP累积测定
使用DMEM (10% FBS、 1% L-谷氨酰胺、1%青霉素/链霉素)在 75 cn^组织培养并瓦中培养293T细胞或4-4细胞(hsACt稳定转染入 293T中），直至接近汇合。用3ml胰蛋白酶由烧瓶释放细胞，接着加 入7mlDMEM，以中和胰蛋白酶。用10 ml—次性移液管通过吸打混 合细胞。向3 ml等份的细胞混合物中加入6 ml DMEM (预温至37°C)， 之后如下彻底混合：使用往复式移液器吸出全部9ml混合物，然后靠 着容器壁緩慢滴出。该混合重复10次，以确保混合物均一。然后将 100 细胞加至每个预硅化的1.7 ml Eppindorf管(Costar #3207)中， 之后于37。C和50/。 C02中温育60分钟。该温育在20管的圆形活槽轨 (VWR#60986-100)中进行，其能够将样品快速转移至水浴，并能够同 时混合几个样品。在温育后，加入1 ^L化合物的DMSO溶液(或仅仅 加入DMSO作为对照）。在加入化合物之前和之后通过短暂(且轻微) 的涡旋混合细胞。加入化合物，同时使细胞处于37°C水浴中，之后 于37。C和5。/。 C02中温育10分钟。在此温育后，用往复式移液器加入】pL IBMX或1 pL IBMX +佛司可林。4-4细胞接受IBMX至终浓 度500 IBMX。 293T细胞接受IBMX和佛司可4木至终浓度分别为 500 pM IBMX和10 nM。 IBMX混合物(对于4-4细胞)和IBMX/FSK 混合物(对于293T细胞)均为100X,并溶解于DMSO中。混合细胞， 并于37°C和5% C02中温育15分钟。通过将细胞置于水浴中终止测 定。通过于4。C以2000 x G离心7分钟沉淀细胞。吸出上清液，向每 个细胞沉淀加入250 0.1 N HCl，之后涡旋1分钟。在于室温温育 IO分钟后，向70 iaLO.l NHC1加入30 pL的每种样品，并使用用于 Direct Cyclic AMP试剂盒(Assay Designs, Inc. # 901-066)的方案检测 cAMP水平。该30 加70 0.1 N HCl组成了在Assay Designs方 案的步骤5中描述的样品。该样品应处于测定的线性范围中。表l.
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