聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶的调配物
阅读：160发布：2020-05-13
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1.一种冻干调配物，其包含聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶(ADI-PEG)，其中所述冻干调配
物为无菌的，实质上不含内毒素，且处于医药学上可接受的pH下。
2.如权利要求1的冻干调配物，其包含药学上可接受的缓冲剂，所述缓冲剂任选地选自
组氨酸、柠檬酸钠、甘氨酰-甘氨酸、磷酸钠、Tris和赖氨酸。
3.如权利要求2的冻干调配物，其中该缓冲剂的浓度为约0.10mM至约200mM，或约0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、
9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、
85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、
190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。
4.如权利要求3的冻干调配物，其中该缓冲剂的浓度为约1至约50mM、或约150mM或约
200mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM或约10mM。
5.如前述权利要求中任一项的冻干调配物，其包含选自以下中的一种或多种的医药学
上可接受的赋形剂：冷冻保护剂、冻干保护剂、稳定剂、增积剂、张力调节剂、表面活性剂、医药塑化剂、螯合剂和前述项的任何组合。
6.如权利要求5的冻干调配物，其中该冷冻保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海
藻糖、乙二醇、丙二醇、甘油和前述项的任何组合，且任选地以以下量存在：0.001％至约
20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。
7.如权利要求5或6的冻干调配物，其中该冻干保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、
海藻糖、甘露醇、山梨醇、甘油和前述项的任何组合，且任选地以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。
8.如权利要求5-7中任一项的冻干调配物，其中该稳定剂选自以下中的一种或多种：蔗
糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、明胶、白蛋白和前述项的任何组合，且任选地以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。
9.如权利要求5-8中任一项的冻干调配物，其中该增积剂选自以下中的一种或多种：甘
露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、白蛋白、葡聚糖40和前述项的任何组合，且任选地以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。
10.如权利要求5-9中任一项的冻干调配物，其中该张力调节剂选自以下中的一种或多
种：氯化钠、蔗糖、甘露醇和前述项的任何组合，且该张力调节剂任选地以以下量存在：约
0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。
11.如前述权利要求中任一项的冻干调配物，其包含选自以下中的一种的医药学上可
接受的赋形剂：蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇、脯氨酸、甘氨酸、表面活性剂、医药塑化剂、螯合剂和前述项的任何组合。
12.如权利要求11的冻干调配物，其包含的蔗糖为约0.001％至约20％(wt％)、或约
0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、
0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、
0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、
0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、
2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、
4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、
6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、
8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
13.如权利要求11或12的冻干调配物，其包含的海藻糖为约0.001％至约20％(wt％)、
或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、
0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、
0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、
0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、
2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、
4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、
6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、
8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
14.如权利要求11-13中任一项的冻干调配物，其包含的葡聚糖，任选地是葡聚糖40，为
约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、
0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、
0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、
0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、
1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、
3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、
6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、
8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
15.如权利要求11-14中任一项的冻干调配物，其包含的甘露醇为约0.001％至约20％
(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、
0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、
0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、
0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、
2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、
3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、
6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、
8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
16.如权利要求11-15中任一项的冻干调配物，其包含的脯氨酸为约0.10mM至约200mM、
或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、
8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、
70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM、或约0.001％至约20％、或约0.001、0.002、0.003、0.004、
0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、
0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、
0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、
0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、
2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、
5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、
7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、
9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
17.如权利要求11-16中任一项的冻干调配物，其包含的甘氨酸为约0.10mM至约200mM、
或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、
8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、
70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM、或约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、
0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、
0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、
5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、
7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、
9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
18.如权利要求11-17中任一项的冻干调配物，其包含的表面活性剂为约0.001％至约
20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、
0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、
0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、
1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、
3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、
6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、
8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
19.如权利要求18的冻干调配物，其中该表面活性剂为Tween-80、聚山梨醇酯20(P20)、
聚山梨醇酯80(P80)或泊洛沙姆188。
20.如权利要求11-19中任一项的冻干调配物，其包含的医药塑化剂为约0.001％至约
20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、
0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、
0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、
1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、
3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、
6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、
8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
21.如权利要求20的冻干调配物，其中该医药塑化剂为甘油。
22.如权利要求11-21中任一项的冻干调配物，其中该螯合剂，任选地是乙二胺四乙酸
(EDTA)，为约0.001％至约1％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、
0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、
0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、
0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或1.0％，包括其间所有整数及范围。
23.如前述权利要求中任一项的冻干调配物，其中该医药学上可接受的pH为约5.0至约
8.0(±0.01至±0.1)、或约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、
6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0(±
0.01至±0.1)，包括其间所有整数及范围。
24.如权利要求第1-23项中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约1至约50mM、或约
10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM的组氨酸。
25.如权利要求24的冻干调配物，其包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或
约5％。
26.如权利要求24的冻干调配物，其包含的甘露醇为约1％至约10％、或约4％至约6％、
或约5％。
27.如权利要求24的冻干调配物，其包含的葡聚糖，任选地是葡聚糖40，为约0.1％至约
5％、或约0.5％至约2％、或约1％。
28.如权利要求24的冻干调配物，其包含的葡聚糖，任选地是葡聚糖40，约0.1％至约
5％、或约0.5％至约2％、或约1％，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约
5％。
29.如权利要求24的冻干调配物，其包含的海藻糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、
或约5％。
30.如权利要求24的冻干调配物，其包含的甘露醇为约1％至约10％、或约3％至约5％、
或约4％，且包含的蔗糖为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％。
31.如权利要求24的冻干调配物，其包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或
约4.8％或5％，且包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％。
32.如权利要求24的冻干调配物，其包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或
约4.8％或5％，包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％，且包含的甘油为约0.01％至约1.0％、或约0.1％至约0.5％、或约0.25％。
33.如权利要求24-32中任一项的冻干调配物，其中该pH为约6.0至约6.5至约7.2(±
0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
34.如权利要求24的冻干调配物，其包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约
12％、或约10％或9.5％。
35.如权利要求24的冻干调配物，其包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约
12％、或约10％或9.5％，且包含的脯氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。
36.如权利要求24的冻干调配物，其包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约
12％、或约10％或9.5％，且包含的甘氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。
37.如权利要求24的冻干调配物，其包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、
或约10％或9.5％。
38.如权利要求24的冻干调配物，其包含的蔗糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约
5％或4.5％，且包含的海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％。
39.如权利要求24的冻干调配物，其包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约
12％、或约10％或9.5％，且包含的EDTA为约0.01％至约0.1％、或约0.02％至约0.08％、或约0.05％。
40.如权利要求34-39中任一项的冻干调配物，其中该pH为约6.0至约7.2(±0.1)、或约
6.4至约6.8(±0.1)、或约6.5(±0.1)。
41.如权利要求1-40中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约
20mM、或约10mM的组氨酸，其中该调配物包含的甘氨酸为约1％至约5％、或约2％或1.9％，包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％，且包含的表面活性剂，任选地是P20，为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.02％、或约0.01％。
42.如权利要求1-40中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约
20mM、或约10mM的组氨酸，其中该调配物包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或8.5％，且包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％。
43.如权利要求1-40中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约
20mM、或约10mM的组氨酸，且其中该调配物包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约
12％、或约10％或9％。
44.如权利要求1-40中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约1至约50mM、或约10至
约40mM、或约20、25、30或35mM的组氨酸，且其中该调配物包含的氯化钠为约100至约150mM、或约120、130或140mM。
45.如权利要求1-40中任一项的冻干调配物，其中该缓冲剂为约100至约200mM、或约
150mM的磷酸钠，其中该调配物包含的蔗糖和/或海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，包含的甘氨酸为约0.1至约1％、或约0.5％，包含的甘油为约0.1至约
1.0％、或约0.25％，包含的Tween80为约0.001至约0.1％、或约0.01％，且包含的EDTA为约
0.01至约0.1％、或约0.05％。
46.如权利要求41-45中任一项的冻干调配物，其中该pH为约6.0至约6.5至约7.2(±
0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
47.如权利要求1-46中任一项的冻干调配物，其中该ADI-PEG的干重为约50至约150mg/
g、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145或
150mg/g，包括其间所有整数及范围。
48.如权利要求1-47中任一项的冻干调配物，其中该ADI-PEG包含与表A1中序列至少
80、95、90、95、96、97、98、99或100％一致的氨基酸序列。
49.如权利要求1-48中任一项的冻干调配物，其中该ADI-PEG共价连接至约1至约21个
PEG分子。
50.如权利要求1-49中任一项的冻干调配物，其中该ADI-PEG包含共价附接至该ADI及
PEG的一个或多个水不稳定接头。
51.如权利要求1-50中任一项的冻干调配物，其中该ADI-PEG为ADI-PEG 20，其中该精
氨酸脱亚氨酶共价连接至质量平均数为约5±1.0个PEG分子或约2±1.0个PEG分子。
52.如权利要求1-51中任一项的冻干调配物，其中相对于非冻干液体对照组合物中的
相应ADI-PEG，该ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶(ADI)活性的至少50、55、60、65、70、75、80、
85、90或95％。
53.如权利要求1-52中任一项的冻干调配物，其中任选地相对于非冻干液体对照组合
物中的相应ADI-PEG，该ADI-PEG保留该(原始)PEG分子(每ADI单体或原体)的至少50、55、
60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
54.一种重构如权利要求1-53中任一项的冻干调配物的方法，该方法包含向该冻干调
配物中添加医药学上可接受的溶剂以形成经重构的液体组合物。
55.如权利要求54的方法，其中该冻干调配物在小于约五分钟的时间内重构成约5-
20mg/ml ADI-PEG的实质上不含聚集体的溶液。
56.如权利要求55的方法，其中该冻干调配物在小于约一或二分钟的时间内重构成约
5-20mg/ml ADI-PEG的实质上不含聚集体的溶液。
57.如权利要求53-56中任一项的方法，其中任选地相对于非冻干液体对照组合物中的
相应ADI-PEG，该经重构的液体组合物中的该ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶(ADI)活性的
至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％，或其中该经重构液体组合物中的该ADI-PEG保留该(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
58.如权利要求53-57中任一项的方法，其中在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3
或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、36、48、60或72个月后，任选地在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，该ADI-PEG在重构时保留其ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％，或其中该ADI-PEG在重构时保留该PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
59.如权利要求53-58中任一项的方法，其中该ADI-PEG的ADI酶比活性为约5.0至约
120IU/mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、
14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、
23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、
55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120IU/mg。
60.如权利要求53-59中任一项的方法，其中该ADI-PEG的重量摩尔渗透浓度
(osmolality)为约50mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、
100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、
200、205、210、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、
300、305、310、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、
400、405、410、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg。
61.如权利要求53-60中任一项的方法，其中该溶剂为水。
62.一种通过如权利要求53-61中任一项的方法制备的经重构的液体组合物。
63.一种经重构的液体组合物，其包含如权利要求1-53中任一项的冻干调配物和医药
学上可接受的溶剂。
64.如权利要求62或63的经重构的液体组合物，其中该ADI-PEG的浓度为约5-20mg/ml、
或约5、6、7、8、9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、15、16、17、18、19或20mg/ml，包括其间所有整数及范围。
65.如权利要求62-64中任一项的经重构的液体组合物，其中相对于非冻干液体对照组
合物中的相应ADI-PEG，该经重构的液体组合物中的该ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶活性
的至少75、80、85、90或95％。
66.如权利要求62-65中任一项的经重构液体组合物，其中任选地相对于非冻干液体对
照组合物中的相应ADI-PEG，该ADI-PEG保留该(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、
55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
67.如权利要求62-66中任一项的经重构的液体组合物，其中该ADI-PEG的酶比活性为
约5.0至约120IU/mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、
13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、
22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、
45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120IU/mg。
68.如权利要求62-67中任一项的经重构的液体组合物，其中该ADI-PEG的重量摩尔渗
透浓度为约50mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、
110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、
210、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、
310、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、
410、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约
500mOsm/kg。
69.如权利要求62-68中任一项的经重构的溶液，其中该溶剂为水。
70.如权利要求62-69中任一项的经重构的溶液，其适于注射至受试者中。
71.一种治疗有需要的受试者的癌症、改善该癌症的症状或抑制该癌症的进展的方法，
其包含向该受试者施用如权利要求62-70中任一项的经重构的液体调配物。
72.如权利要求71的方法，其中该癌症选自以下一种或多种：肝细胞癌(HCC)、黑色素
瘤、转移性黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、肝癌、肉瘤、白血病、急性骨髓性白血病、复发性急性骨髓性白血病、B细胞恶性肿瘤、乳癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤)、多形性神经胶质母细胞瘤(例如，巨细胞神经胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层肿瘤(神经管胚细胞瘤)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、子宫颈癌、睪丸癌及胃癌。
73.如权利要求71或72的方法，其中该癌症展现减少的精氨基琥珀酸合成酶-1表达。
74.一种患者护理试剂盒，其包含如权利要求1-53中任一项的冻干调配物和任选地医
药学上可接受的溶剂。
75.如权利要求74的患者护理试剂盒，其中该溶剂为水。
聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶的调配物
发明领域
[0001] 相关申請的交叉引用
[0002] 本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2016年11月2日提交的美国申请号62/416,607的优先权，该申请以全文引用方式并入。
[0004] 与本申请相关的序列表以txt格式替代纸质复本来提供，且据此以引用方式并入本说明书中。含有序列表的txt文档的名称为POLA_007_01TW_ST25.txt。该txt文档为约
198KB，于2017年11月1日创建，且经由FES-Web电子提交。
198KB，于2017年11月1日创建，且经由FES-Web电子提交。
[0005] 发明背景
[0006] 技术领域
[0008] 现有技术描述
[0009] 精氨酸耗尽疗法可为某些形式的癌症以及其他疾病的有效治疗。例如，聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶(ADI-PEG)可通过将精氨酸转化为瓜氨酸和氨而耗尽精氨酸的血流供
应。ADI-PEG 20为正在临床上经研究用于缺乏关键酶精氨基琥珀酸合成酶-1(ASS1)的肿瘤
的示例性ADI-PEG，该精氨基琥珀酸合成酶-1牵涉于将瓜氨酸转化为精氨酸。ADI-PEG 20已
经良好耐受且在临床研究中显示出希望(参见，例如，Qiu等人,Cancer Lett.2015Aug 1；
364(1):1-7；Phillips等人,Cancer Res Treat.2013Dec；45(4):251-62；Feun等人,Curr
Pharm Des.2008；14(11):1049-57；Feun及Savaraj,Expert Opin Investig
Drugs.2006Jul；15(7):815-22；Feun等人,Curr Opin Clin Nutr Metab Care.2015Jan；18
(1):78-82)。
应。ADI-PEG 20为正在临床上经研究用于缺乏关键酶精氨基琥珀酸合成酶-1(ASS1)的肿瘤
的示例性ADI-PEG，该精氨基琥珀酸合成酶-1牵涉于将瓜氨酸转化为精氨酸。ADI-PEG 20已
经良好耐受且在临床研究中显示出希望(参见，例如，Qiu等人,Cancer Lett.2015Aug 1；
364(1):1-7；Phillips等人,Cancer Res Treat.2013Dec；45(4):251-62；Feun等人,Curr
Pharm Des.2008；14(11):1049-57；Feun及Savaraj,Expert Opin Investig
Drugs.2006Jul；15(7):815-22；Feun等人,Curr Opin Clin Nutr Metab Care.2015Jan；18
(1):78-82)。
[0010] 冻干或冷冻干燥为一种自液体药剂中除去水以产生固体粉末或饼的过程。冻干固态或调配物的制备代表一种优化生物医药药剂的稳定性的方法。使用冻干调配物可减少降
解反应、运输过程中的搅动及储存过程中温度波动的影响以及其他益处。
解反应、运输过程中的搅动及储存过程中温度波动的影响以及其他益处。
[0011] 发明概述
[0012] 某些实施方案涉及冻干调配物，其包含聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶(ADI-PEG)，其中该冻干调配物为无菌的，实质上不含内毒素，且处于医药学上可接受的pH下。
[0013] 一些实施方案包含医药学上可接受的缓冲剂，例如选自以下中的一种或多种的缓冲剂：组氨酸、柠檬酸钠、甘氨酰-甘氨酸、磷酸钠、Tris及赖氨酸。在某些实施方案中，缓冲剂的浓度为约0.10mM至约200mM，或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、
5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、
30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、
145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在特定实施方案中，缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM或约
10mM。
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、
5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、
30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、
145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在特定实施方案中，缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM或约
10mM。
[0015] 在一些实施方案中，冷冻保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，冷冻保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海
藻糖、乙二醇、丙二醇、甘油和前述项的任何组合。
藻糖、乙二醇、丙二醇、甘油和前述项的任何组合。
[0016] 在一些实施方案中，冻干保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，冻干保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海
藻糖、甘露醇、山梨醇、甘油和前述项的任何组合。
藻糖、甘露醇、山梨醇、甘油和前述项的任何组合。
[0017] 在一些实施方案中，稳定剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，稳定剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、甘露醇、乳
糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、明胶、白蛋白和前述项的任何组合。
糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、明胶、白蛋白和前述项的任何组合。
[0018] 在某些实施方案中，增积剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，增积剂选自以下中的一种或多种：甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、白蛋白、葡聚糖40。
[0019] 在某些实施方案中，张力调节剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)，包括其间所有整数及范围。在特定实施方案中，张力调节剂选自以下中的一种或多种：氯化钠、
蔗糖、甘露醇和前述项的任何组合。
蔗糖、甘露醇和前述项的任何组合。
[0020] 特定冻干调配物包含选自以下中的一种或多种的医药学上可接受的赋形剂：蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇、脯氨酸、甘氨酸、表面活性剂、医药塑化剂、螯合剂和前述项的任何组合。
[0021] 某些冻干调配物包含的蔗糖为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0022] 一些冻干调配物包含的海藻糖为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0023] 某些冻干调配物包含的葡聚糖(任选地是葡聚糖40)为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、
0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、
0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、
0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、
2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、
3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、
6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、
8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、
0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、
0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、
2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、
3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、
6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、
8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0024] 特定冻干调配物包含的甘露醇为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、
0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、
0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、
2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、
5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、
7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、
9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0025] 一些冻干调配物包含的脯氨酸为约0.10mM至约200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、
100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或
200mM、或约0.001％至约20％、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、
0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、
0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、
0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、
1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、
3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、
6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、
8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、
9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、
100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或
200mM、或约0.001％至约20％、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、
0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、
0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、
0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、
1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、
3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、
6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、
8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、
9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0026] 某些冻干调配物包含的甘氨酸为约0.10mM至约200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、
100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或
200mM、或约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、
0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、
0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、
0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、
1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、
3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、
5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、
7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、
9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、
100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或
200mM、或约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、
0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、
0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、
0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、
1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、
3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、
5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、
7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、
9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。
[0027] 某些冻干调配物包含的表面活性剂为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、
0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、
0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、
2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、
5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、
7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、
9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，表面活性剂选自以下中的一种或多种：
Tween-80、聚山梨醇酯20(P20)、聚山梨醇酯80(P80)、泊洛沙姆188和前述项的任何组合。
0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、
0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、
2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、
5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、
7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、
9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，表面活性剂选自以下中的一种或多种：
Tween-80、聚山梨醇酯20(P20)、聚山梨醇酯80(P80)、泊洛沙姆188和前述项的任何组合。
[0028] 一些冻干调配物包含的医药塑化剂为约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、
0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、
0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、
2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、
5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、
7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、
9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，医药塑化剂为甘油。
0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、
0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、
2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、
5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、
7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、
9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，医药塑化剂为甘油。
[0029] 某些冻干调配物包含螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)。在一些实施方案中，螯合剂以以下量存在：约0.001％至约1％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或
1.0％，包括其间所有整数及范围。
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或
1.0％，包括其间所有整数及范围。
[0030] 在某些实施方案中，医药学上可接受的pH为约5.0至约8.0(±0.01至±0.1)、或约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、
6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0(±0.01至±0.1)，包括其间所有整数及范围。
6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0(±0.01至±0.1)，包括其间所有整数及范围。
[0031] 在具体实施方案中，缓冲剂为组氨酸，其浓度约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。
[0032] 这些和相关实施方案中的某些包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的甘露醇为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的葡聚糖例如葡聚糖40为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％。一些实
施方案包含的葡聚糖例如葡聚糖40为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％，且包
含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的海藻糖为约
1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的甘露醇为约1％至约10％、或约3％至约5％、或约4％，且包含的蔗糖为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约4.8％或5％，且包含的
Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约0.01％。一些实施方案包
含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约4.8％或5％，包含的Tween-80为约
0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约0.01％，且包含的甘油为约0.01％至约
1.0％、或约0.1％至约0.5％、或约0.25％。在这些和相关实施方案中的一些中，pH为约6.0
至约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
施方案包含的葡聚糖例如葡聚糖40为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％，且包
含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的海藻糖为约
1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。一些实施方案包含的甘露醇为约1％至约10％、或约3％至约5％、或约4％，且包含的蔗糖为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约4.8％或5％，且包含的
Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约0.01％。一些实施方案包
含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约4.8％或5％，包含的Tween-80为约
0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约0.01％，且包含的甘油为约0.01％至约
1.0％、或约0.1％至约0.5％、或约0.25％。在这些和相关实施方案中的一些中，pH为约6.0
至约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
[0033] 一些实施方案包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或9.5％。一些实施方案包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或
9.5％，且包含的脯氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。一些实施方案包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包含的甘氨酸为约
10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或9.5％。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约10％、约4％至约
6％、或约5％或4.5％，且包含的海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％。
一些实施方案包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包
含的EDTA为约0.01％至约0.1％、或约0.02％至约0.08％、或约0.05％。在这些和相关实施
方案中的一些中，pH为约6.0至约7.2(±0.1)、或约6.4至约6.8(±0.1)、或约6.5(±0.1)。
9.5％，且包含的脯氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。一些实施方案包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包含的甘氨酸为约
10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或9.5％。一些实施方案包含的蔗糖为约1％至约10％、约4％至约
6％、或约5％或4.5％，且包含的海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％。
一些实施方案包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包
含的EDTA为约0.01％至约0.1％、或约0.02％至约0.08％、或约0.05％。在这些和相关实施
方案中的一些中，pH为约6.0至约7.2(±0.1)、或约6.4至约6.8(±0.1)、或约6.5(±0.1)。
[0034] 在某些实施方案中，缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM的组氨酸，包含的甘氨酸为约1％至约5％、或约2％或1.9％，包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约
0.5％至约1.5％、或约1％，且包含的表面活性剂例如P20为约0.001％至约0.1％、或约
0.005％至约0.02％、或约0.01％。在某些实施方案中，缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约
20mM、或约10mM的组氨酸，包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或
8.5％，且包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％。在某些实施方
案中，缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM的组氨酸，包含的蔗糖为约1％至约
15％、或约5％至约12％、或约10％或9％。在某些实施方案中，缓冲剂为约1至约50mM、或约
10至约40mM、或约20、25、30或35mM的组氨酸，包含的氯化钠为约100至约150mM、或约120、
130或140mM。在一些实施方案中，缓冲剂为约100至约200mM、或约150mM的磷酸钠，包含的蔗糖和/或海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，包含的甘氨酸为约0.1
至约1％、或约0.5％，包含的甘油为约0.1至约1.0％、或约0.25％，包含的Tween 80为约
0.001至约0.1％、或约0.01％，且包含的EDTA为约0.01至约0.1％、或约0.05％。在某些实施方案中，pH为约6.0至约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
0.5％至约1.5％、或约1％，且包含的表面活性剂例如P20为约0.001％至约0.1％、或约
0.005％至约0.02％、或约0.01％。在某些实施方案中，缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约
20mM、或约10mM的组氨酸，包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或
8.5％，且包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％。在某些实施方
案中，缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM的组氨酸，包含的蔗糖为约1％至约
15％、或约5％至约12％、或约10％或9％。在某些实施方案中，缓冲剂为约1至约50mM、或约
10至约40mM、或约20、25、30或35mM的组氨酸，包含的氯化钠为约100至约150mM、或约120、
130或140mM。在一些实施方案中，缓冲剂为约100至约200mM、或约150mM的磷酸钠，包含的蔗糖和/或海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，包含的甘氨酸为约0.1
至约1％、或约0.5％，包含的甘油为约0.1至约1.0％、或约0.25％，包含的Tween 80为约
0.001至约0.1％、或约0.01％，且包含的EDTA为约0.01至约0.1％、或约0.05％。在某些实施方案中，pH为约6.0至约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约6.8(±0.1)。
[0035] 在一些实施方案中，ADI-PEG的干重为约50mg/g至约150mg/g。在一些实施方案中，ADI-PEG包含与表A1中序列至少80、95、90、95、96、97、98、99或100％一致的氨基酸序列。在一些实施方案中，ADI-PEG共价连接至约1至约21个PEG分子。在一些实施方案中，ADI-PEG包
含一或多个共价附接ADI和PEG的水不稳定接头。在一些实施方案中，ADI-PEG为ADI-PEG
20，其中精氨酸脱亚氨酶共价连接至约5±1.0的质量平均数的PEG分子。
含一或多个共价附接ADI和PEG的水不稳定接头。在一些实施方案中，ADI-PEG为ADI-PEG
20，其中精氨酸脱亚氨酶共价连接至约5±1.0的质量平均数的PEG分子。
[0036] 在一些实施方案中，相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶(ADI)活性的至少80、85、90或95％。在一些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，ADI-PEG保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的
至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
[0037] 还包括重构本文所述的冻干调配物的方法，该方法包括将医药学上可接受的溶剂添加至冻干调配物以形成经重构的液体组合物。
[0038] 在一些实施方案中，冻干调配物在小于约五分钟的时间内重构成约5-20mg/ml ADI-PEG的实质上不含聚集体的溶液。在一些实施方案中，冻干调配物在小于约一或二分钟
的时间内重构成约5-20mg/ml ADI-PEG的实质上不含聚集体的溶液。
的时间内重构成约5-20mg/ml ADI-PEG的实质上不含聚集体的溶液。
[0039] 在一些实施方案中，相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，经重构的液体组合物中的ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶活性的至少75、80、85、90或95％，和/或保留
PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，例如在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，ADI-PEG在重构时保留其精氨酸脱亚氨酶活性的至少75、80、85、90或95％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，例如在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，ADI-PEG保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、
85、90、95或100％。在一些实施方案中，ADI-PEG在重构后的酶比活性为约5.0至约120IU/
mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、
15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、
24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、
70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120IU/mg。
PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，例如在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，ADI-PEG在重构时保留其精氨酸脱亚氨酶活性的至少75、80、85、90或95％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，例如在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，ADI-PEG保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、
85、90、95或100％。在一些实施方案中，ADI-PEG在重构后的酶比活性为约5.0至约120IU/
mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、
15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、
24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、
70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120IU/mg。
[0040] 在一些实施方案中，ADI-PEG的重量摩尔渗透浓度(osmolality)为约50mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、
140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、
240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、
340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、
440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg。
140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、
240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、
340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、
440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg。
[0041] 在具体实施方案中，溶剂为水。
[0042] 某些实施方案涉及通过本文所述的任何方法制备的经重构的液体组合物。
[0043] 一些实施方案包括经重构的液体组合物，其包含本文所述的冻干调配物及医药学上可接受的溶剂。在一些实施方案中，ADI-PEG的浓度为约5-20mg/ml、或约5、6、7、8、9、10、
10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、15、16、17、18、19或20mg/ml，包括其间所有整数及范围。在一些实施该方案中，相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，经重构的液体
组合物中的ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶活性的至少75、80、85、90或95％。
10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、15、16、17、18、19或20mg/ml，包括其间所有整数及范围。在一些实施该方案中，相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，经重构的液体
组合物中的ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶活性的至少75、80、85、90或95％。
[0044] 在一些实施方案中，ADI-PEG的酶比活性为约5.0至约120IU/mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、
17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、
26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、
95、100、105、110、115或120IU/mg。
17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、
26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、
95、100、105、110、115或120IU/mg。
[0045] 在一些实施方案中，ADI-PEG的重量摩尔渗透浓度为约50mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、
155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、240、245、250、
255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、340、345、350、
355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、440、445、450、
455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg。
155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、240、245、250、
255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、340、345、350、
355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、440、445、450、
455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg。
[0046] 在一些实施方案中，溶剂为水。某些经重构的溶液适于注射至受试者中。
[0047] 还包括治疗有需要的受试者的癌症、改善该癌症的症状或抑制该癌症的进展的方法，其包含向该受试者施用本文所述的经重构的液体调配物。
[0048] 在某些实施方案中，该癌症选自以下一种或多种：肝细胞癌(HCC)、黑色素瘤、转移性黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、肝癌、肉瘤、白血病、急性骨髓性白血病、复发性急性骨髓性白血病、B细胞恶性肿瘤、乳癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤)、多形性神经胶质母细胞瘤(例如，巨细胞神经胶质母细胞瘤或
神经胶质肉瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层肿瘤(神经管胚细胞瘤)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、子宫颈癌、睪丸癌及胃癌。
神经胶质肉瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层肿瘤(神经管胚细胞瘤)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、子宫颈癌、睪丸癌及胃癌。
[0049] 在一些实施方案中，癌症展现减少的精氨基琥珀酸合成酶-1表达。
[0051] 图1A-1D图示了可以缀合至本文所述的ADI多肽的多种半胱氨酸反应性PEG分子。
[0052] 发明详述
[0053] 除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语皆具有与本公开所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。尽管与本文所述的那些类似或等同的任何方法、
材料、组合物、试剂、细胞可用于本公开主题的实践或测试，但描述的为优选方法和材料。本说明书中所引用的所有出版物及参考文献(包括但不限于专利及专利申请)以全文引用的
方式并入本文中，如同具体地及单独地指示各单独出版物或参考文献如所完全阐述以引用
的方式并入本文中一样。为本申请所主张优先权的任何专利申请亦以以上对于出版物和参
考文献所述的方式以全文引用的方式并入本文中。
材料、组合物、试剂、细胞可用于本公开主题的实践或测试，但描述的为优选方法和材料。本说明书中所引用的所有出版物及参考文献(包括但不限于专利及专利申请)以全文引用的
方式并入本文中，如同具体地及单独地指示各单独出版物或参考文献如所完全阐述以引用
的方式并入本文中一样。为本申请所主张优先权的任何专利申请亦以以上对于出版物和参
考文献所述的方式以全文引用的方式并入本文中。
[0054] 除非具体相反地指示，否则本公开的实践将采用病毒学、免疫学、微生物学、分子生物学的常规方法和本领域技术中的重组DNA技术，其中许多在以下出于说明的目的来描
述。此类技术在文献中得到充分说明。参见，例如，Current Protocols in Protein
Science,Current Protocols in Molecular Biology or Current Protocols in
Immunology,John Wiley&Sons,New York,N.Y.(2009)；Ausubel等人,Short Protocols in
Molecular Biology,第3版,Wiley&Sons,1995；Sambrook及Russell,Molecular Cloning:A
Laboratory Manual(第3版,2001)；Maniatis等人Molecular Cloning:A Laboratory
Manual(1982)；DNA Cloning:A Practical Approach,第I及II卷(D.Glover,编)；
Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,编,1984)；Nucleic Acid Hybridization(B.Hames
及S.Higgins,编,1985)；Transcription and Translation(B.Hames及S.Higgins,编,
1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,编,1986)；Perbal,A Practical Guide to
Molecular Cloning(1984)以及其他类似参考文献。
述。此类技术在文献中得到充分说明。参见，例如，Current Protocols in Protein
Science,Current Protocols in Molecular Biology or Current Protocols in
Immunology,John Wiley&Sons,New York,N.Y.(2009)；Ausubel等人,Short Protocols in
Molecular Biology,第3版,Wiley&Sons,1995；Sambrook及Russell,Molecular Cloning:A
Laboratory Manual(第3版,2001)；Maniatis等人Molecular Cloning:A Laboratory
Manual(1982)；DNA Cloning:A Practical Approach,第I及II卷(D.Glover,编)；
Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,编,1984)；Nucleic Acid Hybridization(B.Hames
及S.Higgins,编,1985)；Transcription and Translation(B.Hames及S.Higgins,编,
1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,编,1986)；Perbal,A Practical Guide to
Molecular Cloning(1984)以及其他类似参考文献。
[0055] 标准技术可用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养与转化(例如，电穿孔、脂转染)。可根据制造商说明书或如本领域中通常所达成或如本文所述来执行酶促反应及纯化
技术。这些技术及相关技术和程序可通常根据本领域中公知的和如本说明书整篇引用和论
述的各种一般及更具体参考文献中所述的常规方法来执行。除非提供具体定义，否则结合
本文所述的分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医疗和医药化学使用的命名法是本
领域公知和通常使用的。标准技术可用于重组技术、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、医药制备、调配和递送以及患者治疗。
技术。这些技术及相关技术和程序可通常根据本领域中公知的和如本说明书整篇引用和论
述的各种一般及更具体参考文献中所述的常规方法来执行。除非提供具体定义，否则结合
本文所述的分子生物学、分析化学、合成有机化学以及医疗和医药化学使用的命名法是本
领域公知和通常使用的。标准技术可用于重组技术、分子生物学、微生物学、化学合成、化学分析、医药制备、调配和递送以及患者治疗。
[0056] 出于本公开的目的，下列术语定义如下。
[0057] 冠词“一(个/种)”在本文中用于指代一个(种)或一个(种)以上(亦即，至少一个(种))的该冠词的语法客体。举例而言，“一要素”意指一个要素或多于一个要素。
[0058] “约”意指数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化多达参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度的30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。
[0059] 如本文所使用，术语“氨基酸”意欲指代天然产生的氨基酸和非天然产生的氨基酸以及氨基酸类似物及模拟物。天然产生的氨基酸包括在蛋白质生物合成期间利用的20种
(L)-氨基酸以及其他氨基酸，例如4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素、异锁链素、高半胱氨酸、瓜氨酸及鸟氨酸。非天然产生的氨基酸包括例如(D)-氨基酸、正亮氨酸、正缬氨酸、对氟苯基丙氨酸、乙硫氨酸及类似物，其为本领域技术人员所知晓。氨基酸类似物包括天然产生
的氨基酸及非天然产生的氨基酸的经修饰形式。此等修饰可包括例如氨基酸上化学基团及
部分的取代或置换，或氨基酸的衍生作用。氨基酸模拟物包括例如有机结构，这些有机结构
在功能上展现类似性质，诸如参考氨基酸的电荷及电荷间距特性。例如，模拟精氨酸(Arg或
R)的有机结构将具有正电荷部分，该正电荷部分位于类似分子空间中且具有与天然产生的
Arg氨基酸的侧链的e-氨基相同的迁移率程度。模拟物还包括限制结构以便维持氨基酸或
氨基酸官能基的最佳间距及电荷相互作用。本领域技术人员知晓或可判定何种结构构成功
能上等效的氨基酸类似物及氨基酸模拟物。
(L)-氨基酸以及其他氨基酸，例如4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素、异锁链素、高半胱氨酸、瓜氨酸及鸟氨酸。非天然产生的氨基酸包括例如(D)-氨基酸、正亮氨酸、正缬氨酸、对氟苯基丙氨酸、乙硫氨酸及类似物，其为本领域技术人员所知晓。氨基酸类似物包括天然产生
的氨基酸及非天然产生的氨基酸的经修饰形式。此等修饰可包括例如氨基酸上化学基团及
部分的取代或置换，或氨基酸的衍生作用。氨基酸模拟物包括例如有机结构，这些有机结构
在功能上展现类似性质，诸如参考氨基酸的电荷及电荷间距特性。例如，模拟精氨酸(Arg或
R)的有机结构将具有正电荷部分，该正电荷部分位于类似分子空间中且具有与天然产生的
Arg氨基酸的侧链的e-氨基相同的迁移率程度。模拟物还包括限制结构以便维持氨基酸或
氨基酸官能基的最佳间距及电荷相互作用。本领域技术人员知晓或可判定何种结构构成功
能上等效的氨基酸类似物及氨基酸模拟物。
[0060] “生物兼容性”指通常不会损害生物功能且不会导致任何程度的不可接受的毒性(包括过敏及疾病状态)的材料或化合物。
[0061] “编码序列”意指有助于编码基因的多肽产物的任何核酸序列。相比之下，术语“非编码序列”指并不直接有助于编码基因的多肽产物的任何核酸序列。
[0062] 在本公开整篇中，除非上下文另外需要，否则“包含”、“包括”等词将理解为暗示包括所述步骤或要素或步骤或要素的群组，而不排除任何其他步骤或要素或步骤或要素的群组。
[0063] “由...组成”意指包括且限于短语“由...组成”后接的内容。因此，短语“由...组成”指示所列要素为必需或必备的，且不可存在其他要素。“基本上由...组成”意指包括该词组之后所列的任何要素，且限于不干扰或贡献于本公开内容中对所列要素所规定的活性或作用的其他要素。因此，短语“基本上由...组成”指示：所列要素为必需或必备的，但其他要素为可选的且可存在或可不存在，此取决于这些其他要素是否实质上影响所列要素的活
性或作用。
性或作用。
[0064] 术语“不含内毒素”或“实质上不含内毒素”通常涉及含有至多痕量(例如，对受试者没有临床不良生理效应的量)内毒素且优选不可检测量的内毒素的组合物、溶剂和/或器
皿。内毒素为与某些微生物(诸如细菌，典型地为革兰氏阴性细菌)相关联的毒素，尽管内毒
素亦可见于革兰氏阳性细菌诸如单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)中。
最盛行的内毒素为脂多醣(LPS)或脂寡糖(LOS)，其见于各种革兰氏阴性细菌的外膜中，且
代表这些细菌引起疾病的能力的中心致病特征。人类中的少量内毒素可能产生发热、血压
降低及炎症与凝血的激活，以及其他不良生理效应。
皿。内毒素为与某些微生物(诸如细菌，典型地为革兰氏阴性细菌)相关联的毒素，尽管内毒
素亦可见于革兰氏阳性细菌诸如单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)中。
最盛行的内毒素为脂多醣(LPS)或脂寡糖(LOS)，其见于各种革兰氏阴性细菌的外膜中，且
代表这些细菌引起疾病的能力的中心致病特征。人类中的少量内毒素可能产生发热、血压
降低及炎症与凝血的激活，以及其他不良生理效应。
[0065] 因此，在医药生产中，通常期望自药物产品和/或药物容器中除去大部分或全部痕量的内毒素，因为即使少量亦可能在人类中引起不良影响。去热原烘箱可用于此目的，因为
典型地需要超过300℃的温度来分解大部分内毒素。例如，基于主要包装材料诸如注射器或
小瓶，250℃的玻璃温度和30分钟保持时间的组合通常足以达成内毒素水平的3log降低。涵
盖除去内毒素的其他方法，包括例如如本文所述和本领域已知的层析及过滤方法。
典型地需要超过300℃的温度来分解大部分内毒素。例如，基于主要包装材料诸如注射器或
小瓶，250℃的玻璃温度和30分钟保持时间的组合通常足以达成内毒素水平的3log降低。涵
盖除去内毒素的其他方法，包括例如如本文所述和本领域已知的层析及过滤方法。
[0066] 可使用本领域已知的常规技术来侦测内毒素。例如，利用来自鲎的血液的鲎变形细胞溶胞产物测定是用于检测内毒素存在的非常灵敏的测定。在此测试中，极低水平的LPS
可由于强大的酶促级联而引起可检测的鲎溶胞产物的凝结，该强大的酶促级联放大此反
应。内毒素亦可通过酶联免疫吸附测定(ELISA)来定量。为了实质上不含内毒素，内毒素水
平可小于约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.08、0.09、0.1、0.5、1.0、
1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9或10EU/mg的活性化合物。典型地，1ng脂多醣(LPS)对应于约1至
10EU。
可由于强大的酶促级联而引起可检测的鲎溶胞产物的凝结，该强大的酶促级联放大此反
应。内毒素亦可通过酶联免疫吸附测定(ELISA)来定量。为了实质上不含内毒素，内毒素水
平可小于约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.08、0.09、0.1、0.5、1.0、
1.5、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9或10EU/mg的活性化合物。典型地，1ng脂多醣(LPS)对应于约1至
10EU。
[0067] 多肽的“半衰期”可指代多肽相对于施用至生物体的血清或组织中时的活性或相对于任何其他定义的时间点而损失其一半药理学、生理学或其他活性所花费的时间。“半衰
期”也可指代多肽的量或浓度相对于施用至生物体的血清或组织中时的量或浓度或相对于
任何其他定义的时间点而减少了投与至生物体的血清或组织中的起始量的一半所花费的
时间。半衰期可在血清和/或任何一或多个所选组织中量测。
期”也可指代多肽的量或浓度相对于施用至生物体的血清或组织中时的量或浓度或相对于
任何其他定义的时间点而减少了投与至生物体的血清或组织中的起始量的一半所花费的
时间。半衰期可在血清和/或任何一或多个所选组织中量测。
[0068] 术语“调节”及“改变”包括典型地以相对于对照的统计学上显著或生理学上显著的量或程度“增加”、“增强”或“刺激”，以及“减少”或“降低”。“增加的”、“刺激的”或“增强的”量典型地为“统计学上显著”的量，且可包括作为并未由组合物(例如，在不存在药剂的情况下)或由对照组合物所产生的量的1.1、1.2、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30或更多倍(例如，500、1000倍)(包括其间所有整数及范围，例如1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。“减少的”量或“降低的”量典型地为“统计学上显著”的量，且可包括例如并未由组合物(例如，在不存在药剂的情况下)或由对照组合物所产生的量的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、
9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、
40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％减少(包括其间所有整数及范围)。本文描述比较和“统计学上显著”的量的实例。
9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、
40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％减少(包括其间所有整数及范围)。本文描述比较和“统计学上显著”的量的实例。
[0069] 术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”可互换使用，且意指不限于任何特定长度的氨基酸聚合物。术语“酶”包括多肽或蛋白质催化剂，且关于ADI，与蛋白质、多肽或肽可互换使用。这些术语包括诸如肉豆蔻酰化、硫酸化、糖基化、磷酸化和信号序列的添加或缺失的修饰。
术语“多肽”或“蛋白质”意指一个或多个氨基酸链，其中各链包含通过肽键共价连接的氨基酸，且其中该多肽或蛋白质可包含非共价和/或通过肽键共价连接在一起的复数个链，该复
数个链具有天然蛋白质(即由天然产生且具体而言非重组细胞或遗传工程化或重组细胞所
产生的蛋白质)的序列，并包含具有天然蛋白质的氨基酸序列的分子，或具有天然序列的一
或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的分子。术语“多肽”和“蛋白质”具体涵盖本文所述的ADI酶/蛋白质，或具有ADI蛋白质的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。在某
些实施方案中，多肽为由包含一个或多个重组DNA分子的重组细胞所产生的“重组”多肽，所述一个或多个重组DNA分子典型地由否则将不会见于细胞中的异源多核苷酸序列或多核苷
酸序列的组合制成。
术语“多肽”或“蛋白质”意指一个或多个氨基酸链，其中各链包含通过肽键共价连接的氨基酸，且其中该多肽或蛋白质可包含非共价和/或通过肽键共价连接在一起的复数个链，该复
数个链具有天然蛋白质(即由天然产生且具体而言非重组细胞或遗传工程化或重组细胞所
产生的蛋白质)的序列，并包含具有天然蛋白质的氨基酸序列的分子，或具有天然序列的一
或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的分子。术语“多肽”和“蛋白质”具体涵盖本文所述的ADI酶/蛋白质，或具有ADI蛋白质的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。在某
些实施方案中，多肽为由包含一个或多个重组DNA分子的重组细胞所产生的“重组”多肽，所述一个或多个重组DNA分子典型地由否则将不会见于细胞中的异源多核苷酸序列或多核苷
酸序列的组合制成。
[0070] 术语“分离的”多肽或蛋白质在本文中指受试蛋白(1)不含通常与其一起见于自然界中的至少一些其他蛋白质，(2)基本上不含来自相同来源，例如来自相同物种的其他蛋白
质，(3)由来自不同物种的细胞表达，(4)已经与至少约50％在自然界中与其缔合的多核苷
酸、脂质、碳水化合物或其他材料分离，(5)未与在自然界中与“分离的蛋白质”缔合的蛋白质的部分缔合(通过共价或非共价相互作用)，(6)与在自然界中未与其缔合的多肽可操作
地缔合(通过共价或非共价相互作用)，或(7)未存在于自然界中。该种分离的蛋白质可由可
能具有合成来源的基因组DNA、cDNA、mRNA或其他RNA或其任何组合编码。在某些实施方案
中，分离的蛋白质实质上不含存在于其天然环境中且将干扰其使用(治疗、诊断、预防、研究或其他方面)的蛋白质或多肽或其他污染物。
质，(3)由来自不同物种的细胞表达，(4)已经与至少约50％在自然界中与其缔合的多核苷
酸、脂质、碳水化合物或其他材料分离，(5)未与在自然界中与“分离的蛋白质”缔合的蛋白质的部分缔合(通过共价或非共价相互作用)，(6)与在自然界中未与其缔合的多肽可操作
地缔合(通过共价或非共价相互作用)，或(7)未存在于自然界中。该种分离的蛋白质可由可
能具有合成来源的基因组DNA、cDNA、mRNA或其他RNA或其任何组合编码。在某些实施方案
中，分离的蛋白质实质上不含存在于其天然环境中且将干扰其使用(治疗、诊断、预防、研究或其他方面)的蛋白质或多肽或其他污染物。
[0071] 在某些实施方案中，组合物中任何给定药剂(例如，ADI-PEG)的“纯度”可以具体定义。例如，某些组合物可包含至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或100％纯(例如，基于蛋白质)(包括其间所有小数及范围)的药剂，如例如通过高效液相层析(HPLC)所测定，该高效液相层析为常用于生物化学及分析
化学中以分离、鉴定及量化化合物的管柱层析法的公知形式。
95％、96％、97％、98％、99％或100％纯(例如，基于蛋白质)(包括其间所有小数及范围)的药剂，如例如通过高效液相层析(HPLC)所测定，该高效液相层析为常用于生物化学及分析
化学中以分离、鉴定及量化化合物的管柱层析法的公知形式。
[0072] 术语“参考序列”通常指另一序列正在与其比较的核酸编码序列或氨基酸序列。本文所述的所有多肽和多核苷酸序列作为参考序列而包括，包括由名称描述的那些序列以及
表中及序列表中描述的那些序列。
表中及序列表中描述的那些序列。
[0073] 如本文所使用的术语“序列一致性”或例如包含“与…50％一致的序列”指在比较窗上基于核苷酸对核苷酸或氨基酸对氨基酸而言序列一致的程度。因此，“序列一致性百分
比”可通过以下方式来计算：在比较窗口上比较两个最佳比对序列，判定两个序列中出现一
致核酸碱基(例如，A、T、C、G、I)或一致氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys及Met)所处位置的数目以得出匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中位置的总数(亦即，窗口大小)，且将结果乘
以100得出序列一致性的百分比。用于比对比较窗口的序列的最佳比对可通过算法的计算
机化实行方案(Wisconsin Genetics软件套件7.0发布版中的GAP、BESTFIT、FASTA及
TFASTA,Genetics Computer Group,575Science Drive Madison,Wis.,USA)或通过检查和
由所选各种方法中的任一种所产生的最佳比对(亦即，在比较窗口上产生更高百分比同源
性)来进行。亦可对如例如由Altschul等人,Nucl.Acids Res.25:3389,1997所公开的BLAST
家族程序进行参考。
比”可通过以下方式来计算：在比较窗口上比较两个最佳比对序列，判定两个序列中出现一
致核酸碱基(例如，A、T、C、G、I)或一致氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys及Met)所处位置的数目以得出匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中位置的总数(亦即，窗口大小)，且将结果乘
以100得出序列一致性的百分比。用于比对比较窗口的序列的最佳比对可通过算法的计算
机化实行方案(Wisconsin Genetics软件套件7.0发布版中的GAP、BESTFIT、FASTA及
TFASTA,Genetics Computer Group,575Science Drive Madison,Wis.,USA)或通过检查和
由所选各种方法中的任一种所产生的最佳比对(亦即，在比较窗口上产生更高百分比同源
性)来进行。亦可对如例如由Altschul等人,Nucl.Acids Res.25:3389,1997所公开的BLAST
家族程序进行参考。
[0074] 术语“溶解度”指本文所提供的药剂(例如，ADI-PEG)溶解在液体溶剂中且形成均质溶液的性质。溶解度通常表示为浓度，藉由每单位体积溶剂的溶质质量(每kg溶剂的溶质
g数、g/dL(100mL)、mg/ml等等)、摩尔浓度、摩尔浓度、摩尔分数或其他类似浓度描述来表
示。每单位溶剂量可溶解的溶质的最大平衡量为在规定条件下，该溶质在该溶剂中的溶解
度，所述规定条件包括温度、压力、pH和溶剂的性质。在某些实施方案中，溶解度于生理pH下或其他pH下量测，例如在pH 5.0、pH 6.0、pH 7.0、pH 7.4、pH 7.6、pH 7.8或pH 8.0(例如，约pH 5至pH 8)下测量。在某些实施方案中，溶解度于水或诸如PBS或NaCl(有或没有NaP)的
生理缓冲液中测量。在具体实施方案中，溶解度于相对较低pH(例如，pH 6.0)及相对较高盐
(例如，500mM NaCl和10mM NaP)下测量。在某些实施方案中，溶解度于诸如血液或血清的生
物流体(溶剂)中测量。在某些实施方案中，温度可为约室温(例如，约20、21、22、23、24、25℃)或约体温(约37℃)。在某些实施方案中，药剂在室温下或在37℃下具有至少约0.1、0.2、
0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、25、30、40、50、60、70、80、90或100mg/ml的溶解度。
g数、g/dL(100mL)、mg/ml等等)、摩尔浓度、摩尔浓度、摩尔分数或其他类似浓度描述来表
示。每单位溶剂量可溶解的溶质的最大平衡量为在规定条件下，该溶质在该溶剂中的溶解
度，所述规定条件包括温度、压力、pH和溶剂的性质。在某些实施方案中，溶解度于生理pH下或其他pH下量测，例如在pH 5.0、pH 6.0、pH 7.0、pH 7.4、pH 7.6、pH 7.8或pH 8.0(例如，约pH 5至pH 8)下测量。在某些实施方案中，溶解度于水或诸如PBS或NaCl(有或没有NaP)的
生理缓冲液中测量。在具体实施方案中，溶解度于相对较低pH(例如，pH 6.0)及相对较高盐
(例如，500mM NaCl和10mM NaP)下测量。在某些实施方案中，溶解度于诸如血液或血清的生
物流体(溶剂)中测量。在某些实施方案中，温度可为约室温(例如，约20、21、22、23、24、25℃)或约体温(约37℃)。在某些实施方案中，药剂在室温下或在37℃下具有至少约0.1、0.2、
0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、25、30、40、50、60、70、80、90或100mg/ml的溶解度。
[0076] “实质上”或“基本上”意指几乎全部地或完全地，例如，某一给定数量的95％、96％、97％、98％、99％或更大。
[0077] “统计学上显著”意指结果不可能偶然发生。统计显著性可通过本领域中已知的任何方法来判定。显著性的常用量度包括p值，其为在虚无假设为真的情况下，将发生所观察
事件的频率或机率。若所获得p值小于显著性水平，则拒绝虚无假设。在简单状况下，显著性水平定义在0.05或更小的p值。
事件的频率或机率。若所获得p值小于显著性水平，则拒绝虚无假设。在简单状况下，显著性水平定义在0.05或更小的p值。
[0078] “治疗反应”指基于施用一种或多种治疗剂的症状改善(无论是否持续)。
[0079] 如本文所使用，受试者(例如哺乳动物，诸如人类)或细胞的“治疗”为用于试图改变个体或细胞的自然过程的任何类型的干预。治疗包括但不限于医药组合物的施用，且可
预防性地抑或在病理事件起始或与病原因子接触之后执行。还包括“预防性”治疗，其可以
旨在降低所治疗疾病或病状的进展速率、延迟该疾病或病状的发作或降低其发作的严重
性。“治疗”或“预防”未必指示疾病或病状或其相关联症状的完全根除、治愈或预防。
预防性地抑或在病理事件起始或与病原因子接触之后执行。还包括“预防性”治疗，其可以
旨在降低所治疗疾病或病状的进展速率、延迟该疾病或病状的发作或降低其发作的严重
性。“治疗”或“预防”未必指示疾病或病状或其相关联症状的完全根除、治愈或预防。
[0080] 术语“野生型”指基因或基因产物(例如，多肽)，其在群体中最常观察到，且因此经任意设计而呈现基因的“正常”或“野生型”形式。
[0081] 除非另有明确说明，否则本说明书中的每个实施方案将在加以必要修正的情况下应用于每个其他实施方案。
[0082] 在本公开整篇中，可使用以下缩写：PEG，聚乙二醇；ADI，精氨酸脱亚氨酶；SS，琥珀酰亚胺基琥珀酸酯；SSA，琥珀酰亚胺基琥珀酰亚胺；SPA，琥珀酰亚胺基丙酸酯；NHS，N-羟基-琥珀酰亚胺；ASS-1，精氨基琥珀酸合成酶-1。
[0083] 冻干调配物
[0084] 某些实施方案涉及冻干调配物，其包含聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶(ADI-PEG)，其中该冻干调配物为无菌的，实质上不含内毒素，且处于医药学上可接受的pH下。在一些实施
方案中，调配物包含医药学上可接受的缓冲剂。在某些实施方案中，调配物包含一种或多种
医药学上可接受的赋形剂，包括例如一种或多种冷冻保护剂、冻干保护剂、稳定剂、增积剂、张力调节剂、表面活性剂、医药塑化剂或螯合剂，包括前述项的任何组合。
方案中，调配物包含医药学上可接受的缓冲剂。在某些实施方案中，调配物包含一种或多种
医药学上可接受的赋形剂，包括例如一种或多种冷冻保护剂、冻干保护剂、稳定剂、增积剂、张力调节剂、表面活性剂、医药塑化剂或螯合剂，包括前述项的任何组合。
[0085] 一些调配物包含一或多种医药学上可接受的缓冲剂。在某些实施方案中，缓冲剂的浓度为约0.10mM至约200mM，或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、
5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、
30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、
145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，缓冲剂的浓度为约1mM至约50mM、或约10mM至约30mM、或约15mM至约25mM、或约10mM至约20mM、或约20mM或约10mM。在特定实施方案中，缓冲剂选自以下中的一种或多
种：组氨酸、柠檬酸钠、甘氨酰-甘氨酸、磷酸钠、Tris、赖氨酸和前述项的任何组合。
0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、
5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、
30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、
145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在某些实施方案中，缓冲剂的浓度为约1mM至约50mM、或约10mM至约30mM、或约15mM至约25mM、或约10mM至约20mM、或约20mM或约10mM。在特定实施方案中，缓冲剂选自以下中的一种或多
种：组氨酸、柠檬酸钠、甘氨酰-甘氨酸、磷酸钠、Tris、赖氨酸和前述项的任何组合。
[0086] 在具体实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在一些实施方案中，调配物包含的柠檬酸钠为约1至约
50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在特定实施方案中，调配物包含的甘氨酰-甘氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在具体实
施方案中，调配物包含的磷酸钠缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在一些实施方案中，调配物包含的Tris缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在某些实施方案中，调配物包含的甘氨酸缓冲剂为约1至约
50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。
50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在特定实施方案中，调配物包含的甘氨酰-甘氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在具体实
施方案中，调配物包含的磷酸钠缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在一些实施方案中，调配物包含的Tris缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。在某些实施方案中，调配物包含的甘氨酸缓冲剂为约1至约
50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。
[0087] 一些调配物包含一种或多种冷冻保护剂。“冷冻保护剂”是指在冻干的一个(或多个)冷冻阶段保护一种(或多种)活性剂的医药学上可接受的物质或赋形剂。在一些实施方
案中，冷冻保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、
0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、
0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、
5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、
7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、
9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，冷冻保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海藻糖、乙二醇、丙二醇、甘油和前述项的任何组合。
案中，冷冻保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、
0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、
0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、
5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、
7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、
9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，冷冻保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海藻糖、乙二醇、丙二醇、甘油和前述项的任何组合。
[0088] 某些调配物包含一种或多种冻干保护剂。“冻干保护剂”是指在冻干的一个(或多个)干燥阶段保护一种(或多种)活性剂的医药学上可接受的物质或赋形剂。在一些实施方
案中，冻干保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、
0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、
0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、
5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、
7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、
9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，冻干保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、甘油和前述项的任何组合。
案中，冻干保护剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、
0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、
0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、
0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、
0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、
5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、
7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、
9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，冻干保护剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、甘油和前述项的任何组合。
[0089] 某些调配物包含一种或多种医药学可上接受的稳定剂。在一些实施方案中，稳定剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，稳定剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、明胶、白蛋白和前述项的任何组合。
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，稳定剂选自以下中的一种或多种：蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、明胶、白蛋白和前述项的任何组合。
[0090] 一些调配物包含一种或多种医药学上可接受的增积剂。在一些实施方案中，增积剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，增积剂选自以下中的一种或多种：甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、白蛋白、葡聚糖40和前述项的任何组合。
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，增积剂选自以下中的一种或多种：甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、白蛋白、葡聚糖40和前述项的任何组合。
[0091] 一些调配物包含一种或多种医药学上可接受的张力调节剂。在一些实施方案中，张力调节剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、
0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、
0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、
0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、
0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、
2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、
5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、
7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、
9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，或浓度为约0.10mM至约
200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、
65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在特定实施方案中，张力调节剂选自以下中的一种或多种：氯化钠、蔗糖、甘露醇和前述项的任何组合。
0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、
0.045、0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、
0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、
0.95、1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、
2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、
5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、
7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、
9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，或浓度为约0.10mM至约
200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、
65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。在特定实施方案中，张力调节剂选自以下中的一种或多种：氯化钠、蔗糖、甘露醇和前述项的任何组合。
[0092] 在某些实施方案中，调配物包含一种或多种表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％。示范性表面活性剂包括Tween-80、聚山梨醇酯20(P20)、聚山梨醇酯80(P80)、泊洛沙姆188及其组合。
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％。示范性表面活性剂包括Tween-80、聚山梨醇酯20(P20)、聚山梨醇酯80(P80)、泊洛沙姆188及其组合。
[0093] 某些调配物包含一种或多种医药塑化剂。在一些实施方案中，医药塑化剂以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、
0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、
0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、
0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、
1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、
3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、
6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、
8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、
9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，医药塑化剂为甘油。
0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、
0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、
0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.1、1.2、
1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、
3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、
6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、
8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、
9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，医药塑化剂为甘油。
[0094] 一些调配物包含一种或多种螯合剂。在一些实施方案中，螯合剂以以下量存在：约0.001％至约1％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、
0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、
0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、
0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或1.0％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。
0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、0.050、0.055、0.060、
0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、
0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95或1.0％，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。
[0095] 特定调配物包含选自以下中的一种或多种的医药学上可接受的赋形剂：蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露醇、脯氨酸、甘氨酸、表面活性剂、医药塑化剂、螯合剂和前述项的任何组合。例如，在一些实施方案中，蔗糖、海藻糖、葡聚糖(例如葡聚糖40)、甘露醇、脯氨酸和/或甘氨酸以以下量存在：约0.001％至约20％(wt％)、或约0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，或浓度为约0.10mM至约
200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、
65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。
0.006、0.007、0.008、0.009、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.035、0.040、0.045、
0.050、0.055、0.060、0.065、0.070、0.075、0.080、0.085、0.090、0.095、0.10、0.15、0.20、
0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、
1.0、1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、
3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、
5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、
9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％，或浓度为约0.10mM至约
200mM、或约0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55、0.60、0.65、0.70、
0.75、0.80、0.85、0.90、0.95、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、
65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、
175、180、185、190、195或200mM，包括其间所有整数及范围。
[0096] 在具体实施方案中，如上所述，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM。
[0097] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约
5％。
5％。
[0098] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的甘露醇为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。
[0099] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的葡聚糖例如葡聚糖40为约0.1％至约5％、或约
0.5％至约2％、或约1％。
0.5％至约2％、或约1％。
[0100] 在特定实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的葡聚糖例如葡聚糖40为约0.1％至约5％、或约
0.5％至约2％、或约1％，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。
0.5％至约2％、或约1％，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。
[0101] 在某些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的海藻糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约5％。
[0102] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的甘露醇为约1％至约10％、或约3％至约5％、或约4％，且包含的蔗糖为约0.1％至约5％、或约0.5％至约2％、或约1％。
[0103] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约
4.8％或5％，且包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％。
4.8％或5％，且包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％。
[0104] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的蔗糖为约1％至约10％、或约4％至约6％、或约
4.8％或5％，包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％，且包含的甘油为约0.01％至约1.0％、或约0.1％至约0.5％、或约0.25％。
4.8％或5％，包含的Tween-80为约0.001％至约0.1％、或约0.005％至约0.05％、或约
0.01％，且包含的甘油为约0.01％至约1.0％、或约0.1％至约0.5％、或约0.25％。
[0105] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或9.5％。
[0106] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的海藻糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或9.5％，且包含的脯氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。
[0107] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包含的甘氨酸为约10mM至约40mM、或约15至约30mM、或约20mM。
[0108] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约
10％或9.5％。
10％或9.5％。
[0109] 在一些实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的蔗糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，且包含的海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％。
[0110] 在特定实施方案中，调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约30mM、或约15至约25mM、或约20mM，且包含的海藻糖为约5％至约15％、或约8％至约12％、或约10％或9.5％，且包含的EDTA为约0.01％至约0.1％、或约0.02％至约0.08％、或约
0.05％。
0.05％。
[0111] 某些调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM，且包含的甘氨酸为约1％至约5％、或约2％或1.9％，包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约
0.5％至约1.5％、或约1％，且包含的表面活性剂例如P20为约0.001％至约0.1％、或约
0.005％至约0.02％、或约0.01％。一些调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约30mM、或约5
至约20mM、或约10mM，且包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或
8.5％，且包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％。特定调配物包
含的组氨酸缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM，且包含的蔗糖为约1％至约
15％、或约5％至约12％、或约10％或9％。一些调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约40mM、或约20、25、30或35mM，且包含的氯化钠为约100至约150mM、或约120、130或140mM。某些调配物包含的磷酸钠缓冲剂为约100至约200mM、或约150mM，且包含的蔗糖
和/或海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，且包含的甘氨酸为约0.1
至约1％、或约0.5％，且包含的甘油为约0.1至约1.0％、或约0.25％，且包含的Tween 80为
约0.001至约0.1％、或约0.01％，且包含的EDTA为约0.01至约0.1％、或约0.05％。
0.5％至约1.5％、或约1％，且包含的表面活性剂例如P20为约0.001％至约0.1％、或约
0.005％至约0.02％、或约0.01％。一些调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约30mM、或约5
至约20mM、或约10mM，且包含的蔗糖为约1％至约15％、或约5％至约12％、或约10％或
8.5％，且包含的海藻糖为约0.1％至约2％、或约0.5％至约1.5％、或约1％。特定调配物包
含的组氨酸缓冲剂为约1至约30mM、或约5至约20mM、或约10mM，且包含的蔗糖为约1％至约
15％、或约5％至约12％、或约10％或9％。一些调配物包含的组氨酸缓冲剂为约1至约50mM、或约10至约40mM、或约20、25、30或35mM，且包含的氯化钠为约100至约150mM、或约120、130或140mM。某些调配物包含的磷酸钠缓冲剂为约100至约200mM、或约150mM，且包含的蔗糖
和/或海藻糖为约1％至约10％、约4％至约6％、或约5％或4.5％，且包含的甘氨酸为约0.1
至约1％、或约0.5％，且包含的甘油为约0.1至约1.0％、或约0.25％，且包含的Tween 80为
约0.001至约0.1％、或约0.01％，且包含的EDTA为约0.01至约0.1％、或约0.05％。
[0112] 在一些实施方案中，调配物的医药学上可接受的pH为约5.0至约8.0(±0.01至±0.1或至±1.0)、或约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、
6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0(±0.01至±0.1)，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，包含ADI-PEG的调配物的pH为约6.8
(±1.0)。在特定实施方案中，pH为约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约
6.8(±0.1)。在一些实施方案中，pH为约6.0至约7.2(±0.1)、或约6.4至约6.8(±0.1)、或
约6.5(±0.1)。
6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0(±0.01至±0.1)，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，包含ADI-PEG的调配物的pH为约6.8
(±1.0)。在特定实施方案中，pH为约6.5至约7.2(±0.1)、或约6.6至约7.0(±0.1)、或约
6.8(±0.1)。在一些实施方案中，pH为约6.0至约7.2(±0.1)、或约6.4至约6.8(±0.1)、或
约6.5(±0.1)。
[0113] 如上所述，本文所述的调配物包含一个或多个聚乙二醇化精氨酸脱亚氨酶(ADI-PEG)分子，或通过共价附接至一个或多个聚乙二醇(PEG)分子而修饰的精氨酸脱亚氨酶
(ADI)多肽。当与未经修饰ADI相比时，ADI-PEG保持其大部分酶活性，免疫原性或抗原性较
低，具有极大延长的循环半衰期，且在肿瘤治疗中更为有效。
(ADI)多肽。当与未经修饰ADI相比时，ADI-PEG保持其大部分酶活性，免疫原性或抗原性较
低，具有极大延长的循环半衰期，且在肿瘤治疗中更为有效。
[0114] 在某些实施方案中，冻干调配物中ADI-PEG的干重为约50mg/g至约150mg/g、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、140、145或150mg/g，包括其间所有整数及范围。
[0115] 在某些实施方案中，ADI多肽或ADI-PEG分子具有“ADI活性”或将精氨酸转化或代谢成瓜氨酸和氨的能力。ADI活性可根据本领域中的常规技术来测量。例如，L-瓜氨酸的量
可通过比色终点测定来检测(参见，例如Knipp及Vasak,Analytical Biochem.286:257-
264,2000)，且与已知量的L-瓜氨酸的标准曲线进行比较，以便计算ADI的比活性，该比活性
可表示为IU/mg蛋白质。在一些实施方案中，将一个IU的ADI酶活性定义为在所测试pH和温
度下每分钟产生1μmol瓜氨酸的酶的量。
可通过比色终点测定来检测(参见，例如Knipp及Vasak,Analytical Biochem.286:257-
264,2000)，且与已知量的L-瓜氨酸的标准曲线进行比较，以便计算ADI的比活性，该比活性
可表示为IU/mg蛋白质。在一些实施方案中，将一个IU的ADI酶活性定义为在所测试pH和温
度下每分钟产生1μmol瓜氨酸的酶的量。
[0116] ADI-PEG分子的ADI部分可来源于多种来源。例如，在一些实施方案中，ADI多肽来自人型支原体(M.hominis)、精氨酸支原体(M.arginini)、关节炎支原体(M.arthritidis)、
海豹脑支原体(M.phocicerebrale)、猫支原体(M.gateae)、海豹支原体(M.phocidae)、鸽支
原体(M.columbinum)、衣阿华支原体(M.iowae)、鳄鱼支原体(M.crocodyli)、短吻鳄支原体
(M.alligatoris)、奥氏嗜热盐丝菌(H.orenii)或牛支原体(M.bovis)。在一些实施方案中，
ADI多肽来自唾液支原体(Mycoplasma salivarium)、泡沫支原体(Mycoplasma spumans)、
加拿大支原体(Mycoplasma canadense)、耳支原体(Mycoplasma auris)、猪滑液支原体
(Mycoplasma hyosynoviae)、泄殖腔支原体(Mycoplasma cloacale)、鹅支原体
(Mycoplasma anseris)、产碱支原体(Mycoplasma alkalescens)、口腔支原体(Mycoplasma
orale)、惰性支原体(Mycoplasma iners)、火鸡支原体(Mycoplasma meleagridis)、蜂房支
原体(Mycoplasma alvi)、渗透支原体(Mycoplasma penetrans)、家禽支原体(Mycoplasma
gallinarum)、梨支原体(Mycoplasma pirum)、灵长类支原体(Mycoplasma primatum)、发酵
支原体(Mycoplasma fermentans)、Mycoplasma lipofaciens、小猫支原体(Mycoplasma
felifaucium)、模仿支原体(Mycoplasma imitans)、乳白色支原体(Mycoplasma
opalescens)、毛氏支原体(Mycoplasma moatsii)、象支原体(Mycoplasma elephantis)、肺
炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、龟支原体(Mycoplasma testudinis)、支原体属CAG:
877(Mycoplasma sp.CAG:877)或支原体属CAG:472(Mycoplasma sp.CAG:472)。
海豹脑支原体(M.phocicerebrale)、猫支原体(M.gateae)、海豹支原体(M.phocidae)、鸽支
原体(M.columbinum)、衣阿华支原体(M.iowae)、鳄鱼支原体(M.crocodyli)、短吻鳄支原体
(M.alligatoris)、奥氏嗜热盐丝菌(H.orenii)或牛支原体(M.bovis)。在一些实施方案中，
ADI多肽来自唾液支原体(Mycoplasma salivarium)、泡沫支原体(Mycoplasma spumans)、
加拿大支原体(Mycoplasma canadense)、耳支原体(Mycoplasma auris)、猪滑液支原体
(Mycoplasma hyosynoviae)、泄殖腔支原体(Mycoplasma cloacale)、鹅支原体
(Mycoplasma anseris)、产碱支原体(Mycoplasma alkalescens)、口腔支原体(Mycoplasma
orale)、惰性支原体(Mycoplasma iners)、火鸡支原体(Mycoplasma meleagridis)、蜂房支
原体(Mycoplasma alvi)、渗透支原体(Mycoplasma penetrans)、家禽支原体(Mycoplasma
gallinarum)、梨支原体(Mycoplasma pirum)、灵长类支原体(Mycoplasma primatum)、发酵
支原体(Mycoplasma fermentans)、Mycoplasma lipofaciens、小猫支原体(Mycoplasma
felifaucium)、模仿支原体(Mycoplasma imitans)、乳白色支原体(Mycoplasma
opalescens)、毛氏支原体(Mycoplasma moatsii)、象支原体(Mycoplasma elephantis)、肺
炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、龟支原体(Mycoplasma testudinis)、支原体属CAG:
877(Mycoplasma sp.CAG:877)或支原体属CAG:472(Mycoplasma sp.CAG:472)。
[0117] 说明性ADI多肽提供于下表A1中。
[0118]
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124]
[0125]
[0126]
[0127]
[0128]
[0129]
[0130]
[0131]
[0132] 因此，在一些实施方案中，ADI-PEG中的ADI多肽包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：来自表A1(SEQ ID NO:1至56)的说明性序列或其具有ADI活性的变体或片段。
[0133] 某些实施方案包括本文所述的参考ADI多肽序列的变体，无论是由名称抑或通过参考表或序列标识符(例如，表A1，SEQ ID NO:1至56)来描述。“变体”序列指与参考序列相差一或多个取代、缺失(例如，截短)、添加和/或插入的多肽或多核苷酸序列。某些变体因此包括本文所述的参考序列的片段。多肽变体为生物活性的，也就是说，其持续拥有参考多肽
的酶活性或结合活性。这些变体可由例如遗传多态性和/或人类操纵而产生。
的酶活性或结合活性。这些变体可由例如遗传多态性和/或人类操纵而产生。
[0134] 在许多情况下，生物活性变体将含有一个或多个保守取代。“保守取代”为其中一个氨基酸由具有类似性质的另一氨基酸取代以使得肽化学领域的技术人员可预测多肽的
二级结构及亲水性质实质上不会改变的取代。如上所述，可在本公开的多核苷酸和多肽的
结构中进行修饰，且仍获得编码具有合乎需要特性的变体或衍生多肽的功能分子。当意欲
改变多肽的氨基酸序列以产生本文所述的多肽的等效或甚至改改善变体或部分时，本领域
技术人员通常将改变编码DNA序列的密码子中的一个或多个。
二级结构及亲水性质实质上不会改变的取代。如上所述，可在本公开的多核苷酸和多肽的
结构中进行修饰，且仍获得编码具有合乎需要特性的变体或衍生多肽的功能分子。当意欲
改变多肽的氨基酸序列以产生本文所述的多肽的等效或甚至改改善变体或部分时，本领域
技术人员通常将改变编码DNA序列的密码子中的一个或多个。
[0135] 例如，蛋白质结构中的某些氨基酸可由其他氨基酸取代，而没有与诸如抗体的抗原结合区或底物分子上的结合位点的结构的相互作用结合能力的可观损失。因为正是蛋白
质的相互作用能力及性质界定蛋白质的生物功能活性，所以可在蛋白质序列中且当然可在
其基础DNA编码序列中进行某些氨基酸序列取代，且虽然如此仍获得具有类似性质的蛋白
质。因此涵盖的是，可在所公开组合物的肽序列或编码该等肽的相应DNA序列中进行各种改
变，而没有其效用的可观损失。
质的相互作用能力及性质界定蛋白质的生物功能活性，所以可在蛋白质序列中且当然可在
其基础DNA编码序列中进行某些氨基酸序列取代，且虽然如此仍获得具有类似性质的蛋白
质。因此涵盖的是，可在所公开组合物的肽序列或编码该等肽的相应DNA序列中进行各种改
变，而没有其效用的可观损失。
[0136] 在进行此等改变时，可考虑氨基酸的亲水指数。本领域中通常理解亲水氨基酸指数在对蛋白质赋予相互作用生物功能中的重要性(Kyte&Doolittle,1982，以引用方式并入
本文)。所接受的是，氨基酸的相对亲水特性促成所得蛋白质的二级结构，其继而界定蛋白
质与其他分子的相互作用，所述其他分子为例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原及类似物。
已基于各氨基酸的疏水性及电荷特性来指定该等氨基酸的亲水指数(Kyte&Doolittle,
1982)。这些值为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；
色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-
3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰氨(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；及精氨酸(-4.5)。本领域中已知的是，某些氨基酸可由具有类似疏水指数或分数的其他氨基酸取代，且产生具有类似生物活
性的蛋白质，也就是说，仍获得生物学上功能等效的蛋白质。在进行此类改变时，亲水指数
在±2内的氨基酸的取代是优选的，亲水指数在±1内的氨基酸的取代尤其优选，且亲水指
数在±0.5内的氨基酸的取代甚至尤其更优选。
本文)。所接受的是，氨基酸的相对亲水特性促成所得蛋白质的二级结构，其继而界定蛋白
质与其他分子的相互作用，所述其他分子为例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原及类似物。
已基于各氨基酸的疏水性及电荷特性来指定该等氨基酸的亲水指数(Kyte&Doolittle,
1982)。这些值为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；
色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-
3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰氨(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；及精氨酸(-4.5)。本领域中已知的是，某些氨基酸可由具有类似疏水指数或分数的其他氨基酸取代，且产生具有类似生物活
性的蛋白质，也就是说，仍获得生物学上功能等效的蛋白质。在进行此类改变时，亲水指数
在±2内的氨基酸的取代是优选的，亲水指数在±1内的氨基酸的取代尤其优选，且亲水指
数在±0.5内的氨基酸的取代甚至尤其更优选。
[0137] 本领域中亦理解，可基于亲水性来有效地进行类似氨基酸的取代。美国专利4,554,101(特别地以全文引用方式并入本文中)阐述：如受蛋白质的相邻氨基酸的亲水性所
支配，蛋白质的最大局部平均亲水性与该蛋白质的生物性质有关。如美国专利4,554,101中
所详述，已对氨基酸残基指定以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰氨(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏
氨酸(-0.4)；脯氨酸(–0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；
色氨酸(-3.4)。应理解，氨基酸可由具有类似亲水性值的另一氨基酸取代，并且仍获得生物
上等效且尤其免疫上等效的蛋白质。在此类改变中，亲水性值在±2内的氨基酸的取代是优
选的，亲水性值在±1内的氨基酸的取代尤其优选，且亲水性值在±0.5内的氨基酸的取代
甚至尤其更优选。
支配，蛋白质的最大局部平均亲水性与该蛋白质的生物性质有关。如美国专利4,554,101中
所详述，已对氨基酸残基指定以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰氨(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏
氨酸(-0.4)；脯氨酸(–0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；
色氨酸(-3.4)。应理解，氨基酸可由具有类似亲水性值的另一氨基酸取代，并且仍获得生物
上等效且尤其免疫上等效的蛋白质。在此类改变中，亲水性值在±2内的氨基酸的取代是优
选的，亲水性值在±1内的氨基酸的取代尤其优选，且亲水性值在±0.5内的氨基酸的取代
甚至尤其更优选。
[0138] 如以上所概述，氨基酸取代因此通常基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如基于其疏水性、亲水性、电荷、大小及类似者。将各种前述特性考虑在内的示例性取代为本
领域技术人员所熟知，且包括：精氨酸及赖氨酸；谷氨酸及天冬氨酸；丝氨酸及苏氨酸；谷氨酰胺及天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸及异亮氨酸。
领域技术人员所熟知，且包括：精氨酸及赖氨酸；谷氨酸及天冬氨酸；丝氨酸及苏氨酸；谷氨酰胺及天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸及异亮氨酸。
[0139] 氨基酸取代可进一步基于残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性质的相似性来进行。例如，带负电的氨基酸包括天冬氨酸及谷氨酸；带正电的氨基酸包括赖
氨酸及精氨酸；且具有未带电极性头部基团的具有类似亲水性值的氨基酸包括亮氨酸、异
亮氨酸及缬氨酸；甘氨酸及丙氨酸；天冬酰胺及谷氨酰胺；以及丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及酪氨酸。可表示保守改变的其他氨基酸群组包括：(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；(2)cys、ser、tyr、thr；(3)val、ile、leu、met、ala、phe；(4)lys、arg、his；以及(5)phe、tyr、trp、his。
氨酸及精氨酸；且具有未带电极性头部基团的具有类似亲水性值的氨基酸包括亮氨酸、异
亮氨酸及缬氨酸；甘氨酸及丙氨酸；天冬酰胺及谷氨酰胺；以及丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及酪氨酸。可表示保守改变的其他氨基酸群组包括：(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；(2)cys、ser、tyr、thr；(3)val、ile、leu、met、ala、phe；(4)lys、arg、his；以及(5)phe、tyr、trp、his。
[0140] 变体亦可或替代地含有非保守改变。在优选的实施方案中，多肽变体与天然或参考序列相差少于约10、9、8、7、6、5、4、3、2个氨基酸或甚至1个氨基酸的取代、缺失或添加。变异体亦可(或替代地)通过例如对多肽的免疫原性、二级结构、酶促活性和/或疏亲性质具有
最小影响的氨基酸的缺失或添加来修饰。
最小影响的氨基酸的缺失或添加来修饰。
[0141] 在某些实施方案中，多肽序列的长度为约、至少约或多达约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、
120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、
310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、
500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、
690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、800、810、820、830、840、850、860、
870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个邻接氨基酸，包括其间所有整数，且该多肽序列可包含参考序列(参见例如序列表)的全部或一部分。
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、
120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、
310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、
500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、
690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、800、810、820、830、840、850、860、
870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个邻接氨基酸，包括其间所有整数，且该多肽序列可包含参考序列(参见例如序列表)的全部或一部分。
[0142] 在一些实施方案中，多肽序列由以下组成：约或不大于约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、
120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、
310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、
500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、
690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、800、810、820、830、840、850、860、
870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个邻接氨基酸，包括其间所有整数，且该多肽序列可包含参考序列(参见例如序列表)的全部或一部分。
38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、
120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、
310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、
500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、
690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、800、810、820、830、840、850、860、
870、880、890、900、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或更多个邻接氨基酸，包括其间所有整数，且该多肽序列可包含参考序列(参见例如序列表)的全部或一部分。
[0143] 在某些实施方案中，多肽序列为约10至1000个、10至900个、10至800个、10至700个、10至600个、10至500个、10至400个、10至300个、10至200个、10至100个、10至50个、10至
40个、10至30个、10至20个、20至1000个、20至900个、20至800个、20至700个、20至600个、20至500个、20至400个、20至300个、20至200个、20至100个、20至50个、20至40个、20至30个、50至1000个、50至900个、50至800个、50至700个、50至600个、50至500个、50至400个、50至300个、50至200个、50至100个、100至1000个、100至900个、100至800个、100至700个、100至600个、100至500个、100至400个、100至300个、100至200个、200至1000个、200至900个、200至
800个、200至700个、200至600个、200至500个、200至400个或200至300个邻接氨基酸，包括其间所有范围，且包含参考序列的全部或一部分。在某些实施方案中，任何参考多肽的C端
或N端区可截短了约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、
100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、
650、700、750或800或更多个氨基酸，或截短了约10至50个、20至50个、50至100个、100至150个、150至200个、200至250个、250至300个、300至350个、350至400个、400至450个、450至500个、500至550个、550至600个、600至650个、650至700个、700至750个、750至800个或更多个氨基酸，包括其间所有整数及范围(例如，101、102、103、104、105)，只要经截短的多肽保持参考多肽的结合性质和/或活性即可。典型地，生物活性片段具有不小于其所来源于的生物
活性参考多肽的活性的约1％、约5％、约10％、约25％或约50％。
40个、10至30个、10至20个、20至1000个、20至900个、20至800个、20至700个、20至600个、20至500个、20至400个、20至300个、20至200个、20至100个、20至50个、20至40个、20至30个、50至1000个、50至900个、50至800个、50至700个、50至600个、50至500个、50至400个、50至300个、50至200个、50至100个、100至1000个、100至900个、100至800个、100至700个、100至600个、100至500个、100至400个、100至300个、100至200个、200至1000个、200至900个、200至
800个、200至700个、200至600个、200至500个、200至400个或200至300个邻接氨基酸，包括其间所有范围，且包含参考序列的全部或一部分。在某些实施方案中，任何参考多肽的C端
或N端区可截短了约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、
100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、
650、700、750或800或更多个氨基酸，或截短了约10至50个、20至50个、50至100个、100至150个、150至200个、200至250个、250至300个、300至350个、350至400个、400至450个、450至500个、500至550个、550至600个、600至650个、650至700个、700至750个、750至800个或更多个氨基酸，包括其间所有整数及范围(例如，101、102、103、104、105)，只要经截短的多肽保持参考多肽的结合性质和/或活性即可。典型地，生物活性片段具有不小于其所来源于的生物
活性参考多肽的活性的约1％、约5％、约10％、约25％或约50％。
[0144] 一般而言，变体将与参考多肽序列显示至少约30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相似性或序列一致性或序列同源性。此外，涵盖与天然或亲本序列的区别在于约1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、
35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或
100个氨基酸(包括其间所有整数及范围)的添加(例如，C端添加、N端添加、两者兼有)、缺
失、截短、插入或取代(例如，保守取代)，但保持亲本或参考多肽序列的性质或活性的序列。
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、
35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或
100个氨基酸(包括其间所有整数及范围)的添加(例如，C端添加、N端添加、两者兼有)、缺
失、截短、插入或取代(例如，保守取代)，但保持亲本或参考多肽序列的性质或活性的序列。
[0145] 在一些实施方案中，多肽变异体与参考序列相差至少一个但小于50、40、30、20、15、10、8、6、5、4、3或2个氨基酸残基。在某些实施方案中，多肽变异体与参考序列相差至少
1％但小于20％、15％、10％或5％的残基。(若此比较需要比对，则序列应针对最大相似性来比对。因缺失或插入或错配而处于“环”外的序列被视为差异。
1％但小于20％、15％、10％或5％的残基。(若此比较需要比对，则序列应针对最大相似性来比对。因缺失或插入或错配而处于“环”外的序列被视为差异。
[0146] 序列之间的序列相似性或序列一致性(这些术语在本文中可互换使用)的计算如下执行。为判定两个氨基酸序列或两个核酸序列的一致性百分比，针对最佳比较目的来比
对序列(例如，可将空隙引入第一氨基酸或核酸序列及第二氨基酸或核酸序列之一或两者
中以达最佳比对，且出于比较目的可忽视非同源序列)。在某些实施方案中，出于比较目的
而比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％、较佳至少40％、更佳至少50％、60％
且甚至更佳至少70％、80％、90％、100％。随后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷
酸占据时，则分子在该位置处为一致的。
对序列(例如，可将空隙引入第一氨基酸或核酸序列及第二氨基酸或核酸序列之一或两者
中以达最佳比对，且出于比较目的可忽视非同源序列)。在某些实施方案中，出于比较目的
而比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％、较佳至少40％、更佳至少50％、60％
且甚至更佳至少70％、80％、90％、100％。随后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置由与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷
酸占据时，则分子在该位置处为一致的。
[0147] 两个序列之间的一致性百分比随序列共有的一致位置的数目而变化，考虑到了空隙的数目及各空隙的长度，需要引入该等空隙以达成两个序列的最佳比对。
[0148] 序列的比较及两个序列之间的一致性百分比的判定可使用数学算法来完成。在优选的实施方案中，使用已并入GCG软件套件的GAP程序中的Needleman及Wunsch
(J.Mol.Biol.48:444-453,1970)算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、
10、8、6或4的空隙加权值及1、2、3、4、5或6的长度加权值来测定两个氨基酸序列之间的一致性百分比。在又一优选的实施方案中，使用GCG软件套件中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP
矩阵以及40、50、60、70或80的空隙加权值及1、2、3、4、5或6的长度加权值来测定两个核苷酸序列之间的一致性百分比。一组尤其优选的参数(且为除非另有规定否则应使用的参数)包
括Blossum 62记分矩阵，其中空隙罚分为12、空隙延伸罚分为4且框架移位空隙罚分为5。
(J.Mol.Biol.48:444-453,1970)算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、
10、8、6或4的空隙加权值及1、2、3、4、5或6的长度加权值来测定两个氨基酸序列之间的一致性百分比。在又一优选的实施方案中，使用GCG软件套件中的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP
矩阵以及40、50、60、70或80的空隙加权值及1、2、3、4、5或6的长度加权值来测定两个核苷酸序列之间的一致性百分比。一组尤其优选的参数(且为除非另有规定否则应使用的参数)包
括Blossum 62记分矩阵，其中空隙罚分为12、空隙延伸罚分为4且框架移位空隙罚分为5。
[0149] 两个氨基酸或核苷酸序列之间的一致性百分比可使用E.Meyers及W.Miller(Cabios.4:11-17,1989)的算法来判定，该算法已经并入ALIGN程序(2.0版)中，使用PAM120
加权残基表，空隙长度罚分为12，空隙罚分为4。
加权残基表，空隙长度罚分为12，空隙罚分为4。
[0150] 本文所述的核酸及蛋白质序列可用作“查询序列”以执行针对公众数据库的搜索，以便例如鉴定其他家族成员或相关序列。此等搜索可使用Altschul等人,(1990,
J.Mol.Biol,215:403-10)的NBLAST及XBLAST程序(2.0版)执行。BLAST核苷酸搜索可利用
NBLAST程序、记分＝100、字长＝12来执行，以获得与本文所述的核酸分子同源的核苷酸序
列。BLAST蛋白质搜索可利用XBLAST程序、记分＝50、字长＝3来执行，以获得与本文所述的
蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空隙化比对，可利用如Altschul
等人,(Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997)中所述的空隙化BLAST。当利用BLAST及空
隙化BLAST程序时，可使用各个程序(例如，XBLAST及NBLAST)的预设参数。
J.Mol.Biol,215:403-10)的NBLAST及XBLAST程序(2.0版)执行。BLAST核苷酸搜索可利用
NBLAST程序、记分＝100、字长＝12来执行，以获得与本文所述的核酸分子同源的核苷酸序
列。BLAST蛋白质搜索可利用XBLAST程序、记分＝50、字长＝3来执行，以获得与本文所述的
蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空隙化比对，可利用如Altschul
等人,(Nucleic Acids Res.25:3389-3402,1997)中所述的空隙化BLAST。当利用BLAST及空
隙化BLAST程序时，可使用各个程序(例如，XBLAST及NBLAST)的预设参数。
[0151] 在一些实施方案中，如上所述，可使用BLAST比对工具评估多核苷酸和/或多肽。局部比对仅由一对序列区段组成，各序列区段来自每个受比较序列。Smith-Waterman或
Sellers算法的修改形式将找出其记分无法通过延伸或修整而改良的所有区段对，此称为
高记分区段对(HSP)。BLAST比对的结果包括统计学量度，以指示可有机会单独预期BLAST记
分的可能性。
Sellers算法的修改形式将找出其记分无法通过延伸或修整而改良的所有区段对，此称为
高记分区段对(HSP)。BLAST比对的结果包括统计学量度，以指示可有机会单独预期BLAST记
分的可能性。
[0152] 原始记分S是由与各比对序列相关联的空隙及取代的数目计算，其中较高相似性记分指示更显著比对。取代记分通过检查表(参见PAM,BLOSUM)给出。
[0153] 空隙记分是典型地计算为空隙开放罚分G及空隙延伸罚分L的总和。对于长度n的空隙而言，空隙耗值将为G+Ln。空隙耗值、G及L的选择为经验性的，但习惯对G选择高值(10-
15)，例如11，而对L选择低值(1-2)，例如1。
15)，例如11，而对L选择低值(1-2)，例如1。
[0154] 位记分S’衍生自原始比对记分S，其中已考虑到所使用记分系统的统计学性质。位记分相对于记分系统加以正规化，因此该位记分可用于比较来自不同搜索的比对记分。术
语“位记分”和“相似性记分”可互换使用。位记分给出对该比对良好程度如何的指示；分数愈高，比对愈好。
语“位记分”和“相似性记分”可互换使用。位记分给出对该比对良好程度如何的指示；分数愈高，比对愈好。
[0155] E-值或预期值描述具有类似分数的序列将偶然出现在数据库中的可能性。其为具有相当于或优于S的记分的不同比对数目的预测值，预期S有机会出现在数据库搜索中。E-
值越小，比对越显著。例如，具有e-117的E值的比对意指：具有类似记分的序列极不可能有机会简单地出现。另外，用于比对一对随机氨基酸的预期记分需要为负值，否则长比对将趋向
于具有高记分，此不依赖于所比对的区段是否相关。另外，BLAST算法使用适当取代矩阵、核苷酸或氨基酸，且针对空隙化比对而言，使用空隙创建及延伸罚分。例如，多肽序列的BLAST比对及比较典型地使用BLOSUM62矩阵、11的空隙存在罚分及1的空隙延伸罚分来进行。
值越小，比对越显著。例如，具有e-117的E值的比对意指：具有类似记分的序列极不可能有机会简单地出现。另外，用于比对一对随机氨基酸的预期记分需要为负值，否则长比对将趋向
于具有高记分，此不依赖于所比对的区段是否相关。另外，BLAST算法使用适当取代矩阵、核苷酸或氨基酸，且针对空隙化比对而言，使用空隙创建及延伸罚分。例如，多肽序列的BLAST比对及比较典型地使用BLOSUM62矩阵、11的空隙存在罚分及1的空隙延伸罚分来进行。
[0156] 在一些实施方案中，序列相似性记分由使用BLOSUM62矩阵、11的空隙存在罚分及1的空隙延伸罚分进行的BLAST分析来报导。
[0157] 在特定实施方案中，本文所提供的序列一致性/相似性记分指使用10版GAP(GCG,Accelrys,San Diego,Calif.)使用以下参数所获得的值：核苷酸序列的一致性％及相似
性％使用50的GAP加权值、及3的长度加权值及nwsgapdna.cmp记分矩阵；氨基酸序列的一致
性％及相似性％使用8的GAP加权值、及2的GAP长度加权值及BLOSUM62记分矩阵(Henikoff
及Henikoff,PNAS USA.89:10915-10919,1992)。GAP使用Needleman及Wunsch(J Mol
Biol.48:443-453,1970)的算法来找出最大化匹配数目并最小化空隙数目的两个完全序列
的比对。
性％使用50的GAP加权值、及3的长度加权值及nwsgapdna.cmp记分矩阵；氨基酸序列的一致
性％及相似性％使用8的GAP加权值、及2的GAP长度加权值及BLOSUM62记分矩阵(Henikoff
及Henikoff,PNAS USA.89:10915-10919,1992)。GAP使用Needleman及Wunsch(J Mol
Biol.48:443-453,1970)的算法来找出最大化匹配数目并最小化空隙数目的两个完全序列
的比对。
[0158] 在特定实施方案中，多肽变体包含可与参考多肽序列(参见例如序列表)最佳比对以产生以下BLAST位记分或序列相似性记分的氨基酸序列：至少约50、60、70、80、90、100、
100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、
290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、
480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、
670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、
860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或1000以上，包括其间所有整数及范围，其中BLAST比对使用BLOSUM62矩阵、11的空隙存在罚分及1的空隙延伸
罚分。
100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、
290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、
480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、
670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、
860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990、1000或1000以上，包括其间所有整数及范围，其中BLAST比对使用BLOSUM62矩阵、11的空隙存在罚分及1的空隙延伸
罚分。
[0159] 如上所述，参考多肽可以包括氨基酸取代、缺失、截短、添加及插入的各种方式改变。用于此类操纵的方法为本领域中通常已知的。例如，参考多肽的氨基酸序列变体可藉由
DNA中的突变来制备。本领域中熟知用于突变诱发及核苷酸序列改变的方法。参见，例如，
Kunkel(PNAS USA.82:488-492,1985)；Kunkel等人,(Methods in Enzymol.154:367-382,
1987)、美国专利第4,873,192号、Watson,J.D.等人,「( Molecular Biology of the Gene,」第4版,Benjamin/Cummings,Menlo Park,Calif.,1987)及其中所引用的参考文献。关于不
影响所关注蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可见于Dayhoff等人,(1978)Atlas
of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.)的模
型中。
DNA中的突变来制备。本领域中熟知用于突变诱发及核苷酸序列改变的方法。参见，例如，
Kunkel(PNAS USA.82:488-492,1985)；Kunkel等人,(Methods in Enzymol.154:367-382,
1987)、美国专利第4,873,192号、Watson,J.D.等人,「( Molecular Biology of the Gene,」第4版,Benjamin/Cummings,Menlo Park,Calif.,1987)及其中所引用的参考文献。关于不
影响所关注蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可见于Dayhoff等人,(1978)Atlas
of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.)的模
型中。
[0160] 用于筛选通过此类修饰制成的组合文库的基因产物以及用于筛选cDNA文库的具有所选性质的基因产物的方法在本领域中已知。此类方法亦适于快速筛选通过参考多肽的
组合突变诱发所产生的基因文库。作为一个实例，递归系集突变诱发(REM)可与筛选测定组
合使用来鉴定多肽变异体，该递归系集突变诱发为一种提高文库中功能突变体的出现频率
的技术(Arkin及Yourvan,PNAS USA 89:7811-7815,1992；Delgrave等人,Protein
Engineering.6:327-331,1993)。
组合突变诱发所产生的基因文库。作为一个实例，递归系集突变诱发(REM)可与筛选测定组
合使用来鉴定多肽变异体，该递归系集突变诱发为一种提高文库中功能突变体的出现频率
的技术(Arkin及Yourvan,PNAS USA 89:7811-7815,1992；Delgrave等人,Protein
Engineering.6:327-331,1993)。
[0161] “聚乙二醇”或“PEG”指环氧乙烷与水的缩合聚合物的混合物，呈支链或直链，由通式H(OCH2CH2)nOH表示，其中n为至少4。“聚乙二醇”或“PEG”与数字后缀组合使用以指示其近似重量平均分子量。例如，PEG5,000指总重量平均分子量为约5,000的PEG；PEG12,000是指总重量平均分子量为约12,000的PEG；PEG20,000是指总重量平均分子量为约20,000的PEG。
[0162] 在一些实施方案中，PEG的总重量平均分子量为约1,000至约50,000；约3,000至约40,000；约5,000至约30,000；约8,000至约30,000；约11,000至约30,000；约12,000至约28,
000；约16,000至约24,000；约18,000至约22,000；或约19,000至约21,000。在一些实施方案中，PEG的总重量平均分子量为约1,000至约50,000；约3,000至约30,000；约3,000至约20,
000；约4,000至约12,000；约4,000至约10,000；约4,000至约8,000；约4,000至约6,000；或约5,000。在具体实施方案中，PEG的总重量平均分子量为约20,000。通常，分子量为30,000
或更高的PEG难以溶解，且可能降低调配产物的产率。PEG可为支链或直链。通常，增加PEG的分子量会降低ADI的免疫原性。PEG可为支链或直链，且在某些实施方案中为直链。具有本文
所述的分子量的PEG可联合ADI和任选地生物兼容性接头一起使用。
000；约16,000至约24,000；约18,000至约22,000；或约19,000至约21,000。在一些实施方案中，PEG的总重量平均分子量为约1,000至约50,000；约3,000至约30,000；约3,000至约20,
000；约4,000至约12,000；约4,000至约10,000；约4,000至约8,000；约4,000至约6,000；或约5,000。在具体实施方案中，PEG的总重量平均分子量为约20,000。通常，分子量为30,000
或更高的PEG难以溶解，且可能降低调配产物的产率。PEG可为支链或直链。通常，增加PEG的分子量会降低ADI的免疫原性。PEG可为支链或直链，且在某些实施方案中为直链。具有本文
所述的分子量的PEG可联合ADI和任选地生物兼容性接头一起使用。
[0163] 某些实施方案采用硫醇、巯基或半胱氨酸反应性PEG。在一些实施方案中，硫醇、巯基或半胱氨酸反应性PEG附接至一个或多个天然产生的半胱氨酸残基、一个或多个引入的
半胱氨酸残基(例如，用一个(或多个)半胱氨酸残基取代一或多个野生型残基、插入一或多
个半胱氨酸残基)或其任何组合(参见，例如，Doherty等人,Bioconjug Chem.16:1291-98,
2005)。在某些实施方案中，某些野生型ADI半胱氨酸残基可首先经另一个氨基酸取代，以防
止PEG聚合物附接至野生型半胱氨酸，例如以防止一种(或多种)PEG在其他方面所需的生物
活性受到破坏。一些实施方案采用一或多种非天然半胱氨酸衍生物(例如同型半胱氨酸)代
替半胱氨酸。
半胱氨酸残基(例如，用一个(或多个)半胱氨酸残基取代一或多个野生型残基、插入一或多
个半胱氨酸残基)或其任何组合(参见，例如，Doherty等人,Bioconjug Chem.16:1291-98,
2005)。在某些实施方案中，某些野生型ADI半胱氨酸残基可首先经另一个氨基酸取代，以防
止PEG聚合物附接至野生型半胱氨酸，例如以防止一种(或多种)PEG在其他方面所需的生物
活性受到破坏。一些实施方案采用一或多种非天然半胱氨酸衍生物(例如同型半胱氨酸)代
替半胱氨酸。
[0164] 硫醇、巯基或半胱氨酸反应性PEG的非限制性实例包括甲氧基PEG顺丁烯二酰亚胺(M-PEG-MAL)(例如，MW 2000、MW 5000、MW 10000、MW20000、MW 30000、MW 40000)。M-PEG-MAL与蛋白质及肽中的半胱氨酸侧链上的硫醇基反应以产生稳定的3-硫代琥珀酰亚胺基醚
键联。此反应为高度选择性的，且可以在其他官能基存在下在约pH 5.0至pH 6.5的温和条
件下进行。市售的硫醇、巯基(sulfyhdryl)或半胱氨酸反应性PEG分子的具体实例示于图1A
至图1D中。因此，在某些实施方案中，ADI酶缀合至本文所述的硫醇、巯基或半胱氨酸反应性PEG分子中的任何一种或多种。
键联。此反应为高度选择性的，且可以在其他官能基存在下在约pH 5.0至pH 6.5的温和条
件下进行。市售的硫醇、巯基(sulfyhdryl)或半胱氨酸反应性PEG分子的具体实例示于图1A
至图1D中。因此，在某些实施方案中，ADI酶缀合至本文所述的硫醇、巯基或半胱氨酸反应性PEG分子中的任何一种或多种。
[0165] 尽管优选的实施方案利用接头，但ADI可用或不用接头来共价连接至修饰剂，诸如PEG。ADI可经由本领域已知的方法经由生物兼容性接头来共价连接至PEG，此类方法如由例
如以下所述：Park等人,Anticancer Res.,1:373-376(1981)；以及Zaplipsky及Lee,
Polyethylene Glycol Chemistry:Biotechnical and Biomedical Applications,
J.M.Harris,编,Plenum Press,NY,第21章(1992)，这些文献的公开特此以全文引用的方式
并入本文中。在一些情况下，ADI可例如经由氨基、巯基、羟基、羧基或其他基团直接(亦即，不用接头)偶联至修饰剂，诸如PEG。
如以下所述：Park等人,Anticancer Res.,1:373-376(1981)；以及Zaplipsky及Lee,
Polyethylene Glycol Chemistry:Biotechnical and Biomedical Applications,
J.M.Harris,编,Plenum Press,NY,第21章(1992)，这些文献的公开特此以全文引用的方式
并入本文中。在一些情况下，ADI可例如经由氨基、巯基、羟基、羧基或其他基团直接(亦即，不用接头)偶联至修饰剂，诸如PEG。
[0166] 用于将ADI共价附接至修饰剂(例如PEG)的接头可为任何生物兼容性接头。如上所述，“生物兼容性”指化合物或基团是无毒的且可在体外或体内利用，而不引起损伤、病患、疾病或死亡。修饰剂诸如PEG可例如经由醚键、硫醇键、酰胺键或其他键来连接至接头。
[0167] 在一些实施方案中，合适的接头的总链长为约1至100个原子、1至80个原子、1至60个原子、1至40个原子、1至30个原子、1至20个原子或例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19或20个原子，其中链中的原子包含C、S、N、P和/或O。在某些实施方案中，接头是可选的，例如PEG共轭的ADI酶不包含接头。在一些情况下，接头基团包括例如琥
珀酰基、酰胺基、酰亚胺基、氨基甲酸酯基、酯基、环氧基、羧基、羟基、碳水化合物、酪氨酸基、半胱氨酸基、组氨酸基、亚甲基及其任何组合。稳定接头的具体实例包括琥珀酰亚胺、丙酸、羧甲基化键、醚、氨基甲酸酯、酰胺、胺、胺甲酰胺、酰亚胺、脂族C-C键及硫醚。在某些实施方案中，生物兼容性接头为琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(SS)基。
13、14、15、16、17、18、19或20个原子，其中链中的原子包含C、S、N、P和/或O。在某些实施方案中，接头是可选的，例如PEG共轭的ADI酶不包含接头。在一些情况下，接头基团包括例如琥
珀酰基、酰胺基、酰亚胺基、氨基甲酸酯基、酯基、环氧基、羧基、羟基、碳水化合物、酪氨酸基、半胱氨酸基、组氨酸基、亚甲基及其任何组合。稳定接头的具体实例包括琥珀酰亚胺、丙酸、羧甲基化键、醚、氨基甲酸酯、酰胺、胺、胺甲酰胺、酰亚胺、脂族C-C键及硫醚。在某些实施方案中，生物兼容性接头为琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(SS)基。
[0168] 其他合适的接头包括氧羰基咪唑基(包括例如羰基咪唑(CDI))、硝基苯基(包括例如碳酸硝基苯酯(NCP)或碳酸三氯苯酯(TCP))、trysylate基、醛基、异氰酸酯基、乙烯基砜
基或一级胺。在某些实施方案中，接头来源于SS、SPA、SCM或NHS；在某些实施方案中，使用SS、SPA或NHS，且在一些实施方案中，使用SS或SPA。因此，在某些实施方案中，潜在接头可由以下形成：甲氧基PEG琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(SS)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基戊二酸酯(SG)、
甲氧基PEG琥珀酰亚胺基碳酸酯(SC)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基羧甲基酯(SCM)、甲氧基
PEG2N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基丁酸甲酯(SBA)、甲氧基PEG琥珀
酰亚胺基丙酸酯(SPA)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基戊二酰胺和/或甲氧基PEG琥珀酰亚胺基琥
珀酰亚胺。
基或一级胺。在某些实施方案中，接头来源于SS、SPA、SCM或NHS；在某些实施方案中，使用SS、SPA或NHS，且在一些实施方案中，使用SS或SPA。因此，在某些实施方案中，潜在接头可由以下形成：甲氧基PEG琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(SS)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基戊二酸酯(SG)、
甲氧基PEG琥珀酰亚胺基碳酸酯(SC)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基羧甲基酯(SCM)、甲氧基
PEG2N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基丁酸甲酯(SBA)、甲氧基PEG琥珀
酰亚胺基丙酸酯(SPA)、甲氧基PEG琥珀酰亚胺基戊二酰胺和/或甲氧基PEG琥珀酰亚胺基琥
珀酰亚胺。
[0169] 接头的另外实例包括但不限于以下中的一种或多种：—O—、—NH—、—S—、—C(O)—、C(O)—NH、NH—C(O)—NH、O—C(O)—NH、—C(S)—、—CH2—、—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—、—O—CH2—、—CH2—O—、—O—CH2—CH2—、—
CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—CH2—CH2—、—
CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—
CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—O—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—
CH2—CH2—CH2—O—、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—
CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—
NH—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—
NH—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—NH—C(O)—CH2—、—CH2—NH—C
(O)—CH2—、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—、—NH—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—NH—C
(O)—CH2—CH2、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—CH2、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—CH2—、—NH—CH2—、—NH—
CH2—CH2—、—CH2—NH—CH2—、—CH2—CH2—NH—CH2—、—C(O)—CH2—、—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—
CH2—、—CH2—CH2—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—、—CH2—
CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—
CH2—NH—C(O)—CH2—、二价环烷基、—N(R6)—，R6是H或选自由以下组成的群组的有机
基：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基及取代的芳基。另外，本文所述的任何接头部分可进一步包括包含1至20个环氧乙烷单体单元[亦即，-(CH2CH2O)1-20-]
的环氧乙烷寡聚物链。亦即，环氧乙烷寡聚物链可出现在接头之前或之后，且任选地出现在
包含二个或更多个原子的接头部分的任何两个原子之间。此外，若寡聚物相邻于聚合物链
段且仅代表聚合物链段的延伸，则寡聚物链将不被视为接头部分的一部分。
CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—CH2—CH2—、—
CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—、—O—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—O—
CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—O—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—O—CH2—、—CH2—
CH2—CH2—CH2—O—、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—
CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—C(O)—
NH—CH2—CH2—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—
NH—CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—CH2—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—、—NH—C(O)—CH2—、—CH2—NH—C
(O)—CH2—、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—、—NH—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—NH—C
(O)—CH2—CH2、—CH2—CH2—NH—C(O)—CH2—CH2、—C(O)—NH—CH2—、—C(O)—NH—
CH2—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—、—O—C(O)—NH—CH2—CH2—、—NH—CH2—、—NH—
CH2—CH2—、—CH2—NH—CH2—、—CH2—CH2—NH—CH2—、—C(O)—CH2—、—C(O)—CH2—CH2—、—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—、—CH2—CH2—C(O)—CH2—
CH2—、—CH2—CH2—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—、—CH2—
CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—CH2—NH—C(O)—、—CH2—CH2—CH2—C(O)—NH—CH2—
CH2—NH—C(O)—CH2—、二价环烷基、—N(R6)—，R6是H或选自由以下组成的群组的有机
基：烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基及取代的芳基。另外，本文所述的任何接头部分可进一步包括包含1至20个环氧乙烷单体单元[亦即，-(CH2CH2O)1-20-]
的环氧乙烷寡聚物链。亦即，环氧乙烷寡聚物链可出现在接头之前或之后，且任选地出现在
包含二个或更多个原子的接头部分的任何两个原子之间。此外，若寡聚物相邻于聚合物链
段且仅代表聚合物链段的延伸，则寡聚物链将不被视为接头部分的一部分。
[0170] 在某些实施方案中，ADI酶包含如本文所述的一个或多个PEG分子和/或接头。在某些实施方案中，接头为水不稳定接头。
[0171] PEG附接至ADI增加了ADI的循环半衰期。通常，PEG附接至ADI的一级胺上。如本领域技术人员所知，PEG或其他修饰剂在ADI上的附接位点的选择是通过蛋白质的活性域内的
每个位点的作用来判定。PEG可附接至ADI的一级胺，而不会实质上损失酶活性。例如，存在
于ADI中的赖氨酸残基皆为可能的点，在这些可能的点处，如本文所述的ADI可经由生物兼
容性接头诸如SS、SPA、SCM、SSA和/或NHS附接至PEG。鉴于本公开，本领域技术人员将显而易知，PEG亦可附接至ADI上的其他位点。
每个位点的作用来判定。PEG可附接至ADI的一级胺，而不会实质上损失酶活性。例如，存在
于ADI中的赖氨酸残基皆为可能的点，在这些可能的点处，如本文所述的ADI可经由生物兼
容性接头诸如SS、SPA、SCM、SSA和/或NHS附接至PEG。鉴于本公开，本领域技术人员将显而易知，PEG亦可附接至ADI上的其他位点。
[0172] 1至约30个PEG分子可共价连接至ADI。在某些实施方案中，ADI经修饰有(亦即包含)一个PEG分子。在一些实施方案中，ADI以一个以上的PEG分子来修饰。在特定实施方案
中，ADI以约1至约10个或约7至约15个PEG分子、或约2至约8个或约9至约12个PEG分子来修
饰。在一些实施方案中，ADI以约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个PEG分子来修饰。
在具体实施方案中，ADI以4.5至5.5个PEG分子/ADI来修饰。在一些实施方案中，ADI以5±
1.5个PEG分子来修饰。
中，ADI以约1至约10个或约7至约15个PEG分子、或约2至约8个或约9至约12个PEG分子来修
饰。在一些实施方案中，ADI以约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个PEG分子来修饰。
在具体实施方案中，ADI以4.5至5.5个PEG分子/ADI来修饰。在一些实施方案中，ADI以5±
1.5个PEG分子来修饰。
[0173] 在某些实施方案中，ADI中约15％至约70％的一级胺基以PEG来修饰，在一些实施方案中，约20％至约65％、约25％至约60％，或在某些实施方案中，约30％至约55％、或45％至约50％，或在一些实施方案中，在精氨酸脱亚氨酶中约50％的一级胺基以PEG来修饰。当
PEG共价连接至ADI的末端时，可能仅需要使用1个PEG分子。增加ADI上的PEG单元的数目延
长了酶的循环半衰期。然而，增加ADI上的PEG单元的数目降低了酶的比活性。因此，鉴于本
公开，本领域技术人员将显而易知，需要在两者之间达成平衡。
PEG共价连接至ADI的末端时，可能仅需要使用1个PEG分子。增加ADI上的PEG单元的数目延
长了酶的循环半衰期。然而，增加ADI上的PEG单元的数目降低了酶的比活性。因此，鉴于本
公开，本领域技术人员将显而易知，需要在两者之间达成平衡。
[0174] 在一些实施方案中，生物兼容性接头的共同特征在于它们经由琥珀酰亚胺基附接至精氨酸脱亚氨酶的一级胺。一旦与ADI偶联，SS-PEG便具有紧挨着PEG的酯键，由此可能使
得此位点对血清酯酶敏感，该血清酯酶可在体内将PEG自ADI中释放。SPA-PEG及PEG2-NHS不
具有酯键，因此它们对血清酯酶不敏感。
得此位点对血清酯酶敏感，该血清酯酶可在体内将PEG自ADI中释放。SPA-PEG及PEG2-NHS不
具有酯键，因此它们对血清酯酶不敏感。
[0175] 与SS-PEG、SPA-PEG及SC-PEG一样，附接至蛋白质的PEG可为直链，或者与PEG2-NHS一样，可使用PEG的支链。
[0176] 在一些实施方案中，例如，氨基酸取代采用非天然氨基酸以共轭至PEG或其他修饰剂(参见，例如，de Graaf等人,Bioconjug Chem.20:1281-95,2009)。因此，某些实施方案包括经由一个或多个非天然氨基酸共轭至一个或多个PEG的ADI酶。在一些实施方案中，非天
然氨基酸包含具有选自由以下组成的群组的官能基的侧链：烷基、芳基、芳基卤化物、乙烯
基卤化物、烷基卤化物、乙酰基、酮、吖丙啶、腈、硝基、卤化物、酰基、酮基、迭氮基、羟基、肼、氰基、卤基、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醚、环氧化合物、砜、硼酸、硼酸酯、硼烷、苯基硼酸、硫醇、硒基、磺酰基、硼酸盐、酉朋酸盐、二氧磷基、膦酰基、膦、杂环-、吡啶基、萘基、二苯甲酮、受限的环诸如环辛烯、硫酯、烯酮、亚胺、醛、酯、硫代酸、羟胺、氨基、羧酸、α-酮羧酸、α或β不饱和酸及酰胺、乙醛酰胺及有机硅烷基。在一些实施方案中，非天然氨基酸选自由以下组成
的群组：对乙酰基-L-苯丙氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨
酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、升半胱氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcβ-丝氨酸、β-O-GlcNAc-L-丝氨酸、三-O-乙酰基-GalNAc-α-苏氨酸、α-GalNAc-L-苏氨酸、L-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对迭氮基-L-苯丙氨酸、对酰基-L-苯丙氨酸、对苯甲酰基-
L-苯丙氨酸、L-二氧磷基丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对碘苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-L-苯丙氨酸和异丙基-L-苯丙氨酸。
然氨基酸包含具有选自由以下组成的群组的官能基的侧链：烷基、芳基、芳基卤化物、乙烯
基卤化物、烷基卤化物、乙酰基、酮、吖丙啶、腈、硝基、卤化物、酰基、酮基、迭氮基、羟基、肼、氰基、卤基、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醚、环氧化合物、砜、硼酸、硼酸酯、硼烷、苯基硼酸、硫醇、硒基、磺酰基、硼酸盐、酉朋酸盐、二氧磷基、膦酰基、膦、杂环-、吡啶基、萘基、二苯甲酮、受限的环诸如环辛烯、硫酯、烯酮、亚胺、醛、酯、硫代酸、羟胺、氨基、羧酸、α-酮羧酸、α或β不饱和酸及酰胺、乙醛酰胺及有机硅烷基。在一些实施方案中，非天然氨基酸选自由以下组成
的群组：对乙酰基-L-苯丙氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、L-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨
酸、O-4-烯丙基-L-酪氨酸、升半胱氨酸、4-丙基-L-酪氨酸、三-O-乙酰基-GlcNAcβ-丝氨酸、β-O-GlcNAc-L-丝氨酸、三-O-乙酰基-GalNAc-α-苏氨酸、α-GalNAc-L-苏氨酸、L-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-L-苯丙氨酸、对迭氮基-L-苯丙氨酸、对酰基-L-苯丙氨酸、对苯甲酰基-
L-苯丙氨酸、L-二氧磷基丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对碘苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-L-苯丙氨酸和异丙基-L-苯丙氨酸。
[0177] 虽然ADI-PEG为本文所述的说明性经修饰ADI，但本领域技术人员将认识到，ADI可用其他聚合物或适当的分子来修饰以达到所需效果，尤其是降低抗原性及增加血清半衰
期。
期。
[0178] 应当理解，一些实施方案基于以下认识，当经由重组技术产生时，精氨酸脱亚氨酶的某些结构特性可阻止或干扰适当及快速的复性。具体来说，这些结构特性阻碍或阻止酶
在重组生产期间呈现活性构形。在一些实施方案中，术语“活性构形”定义为允许未经修饰
或经修饰的精氨酸脱亚氨酶的酶活性的三维结构。具体而言，活性构形对于催化精氨酸转
化成瓜氨酸为必需的。术语“结构特性”可定义为由特定氨基酸或氨基酸组合产生的多肽链
的任何性状、品质或性质。例如，精氨酸脱亚氨酶可含有导致正常肽链弯曲或扭结的氨基
酸，且由此阻碍酶在酶复性期间呈现活性构形。特别地，来自人型支原体的精氨酸脱亚氨酶
在210位处具有脯氨酸，该脯氨酸可在肽链中导致弯曲或扭结，使得难以使酶在重组生产期
间复性。应当理解，来源于其他生物体的精氨酸脱亚氨酶亦可具有对应于来自人型支原体
的精氨酸脱亚氨酶的210位的位点。
在重组生产期间呈现活性构形。在一些实施方案中，术语“活性构形”定义为允许未经修饰
或经修饰的精氨酸脱亚氨酶的酶活性的三维结构。具体而言，活性构形对于催化精氨酸转
化成瓜氨酸为必需的。术语“结构特性”可定义为由特定氨基酸或氨基酸组合产生的多肽链
的任何性状、品质或性质。例如，精氨酸脱亚氨酶可含有导致正常肽链弯曲或扭结的氨基
酸，且由此阻碍酶在酶复性期间呈现活性构形。特别地，来自人型支原体的精氨酸脱亚氨酶
在210位处具有脯氨酸，该脯氨酸可在肽链中导致弯曲或扭结，使得难以使酶在重组生产期
间复性。应当理解，来源于其他生物体的精氨酸脱亚氨酶亦可具有对应于来自人型支原体
的精氨酸脱亚氨酶的210位的位点。
[0179] 一些实施方案提供野生型精氨酸脱亚氨酶的多肽链中的具体氨基酸取代。例如，在一些实施方案中，位置210处脯氨酸(或等效残基)被丝氨酸取代。其他取代的非限制性实
例包括Pro210至Thr210、Pro210至Arg210、Pro210至Asn210、Pro210至Gln210或Pro210至
Met210。
例包括Pro210至Thr210、Pro210至Arg210、Pro210至Asn210、Pro210至Gln210或Pro210至
Met210。
[0180] 在具体实施方案中，经修饰的ADI为ADI-PEG 20。ADI-PEG 20指例如以下中所述的ADI分子：美国专利第6,183,738号；美国专利第6,635,462号；Ascierto PA,等人(2005)
Pegylated arginine deiminase treatment of patients with metastatic melanoma:
results from phase I and II studies.J Clin Oncol 23(30):7660–7668；Izzo F,等人
(2004)Pegylated arginine deiminase treatment of patients with unresectable
hepatocellular carcinoma:results from phase I/II studies.J Clin Oncol 22(10):
1815–1822；Holtsberg FW,等人(2002),Poly(ethylene glycol)(PEG)conjugated
arginine deiminase:effects of PEG formulations on its pharmacological
properties.J Control Release 80(1–3):259–271；及Kelly等人,(2012)British
Journal of Cancer 106,324-332。本领域技术人员将认识到，ADI-PEG 20是来源于人型支
原体的聚乙二醇化ADI酶(约5.5±1.0的质量平均数的连接的PEG 20,000分子)，其相对于
野生型人型支原体ADI序列具有两个取代(K112E；P210S)。
Pegylated arginine deiminase treatment of patients with metastatic melanoma:
results from phase I and II studies.J Clin Oncol 23(30):7660–7668；Izzo F,等人
(2004)Pegylated arginine deiminase treatment of patients with unresectable
hepatocellular carcinoma:results from phase I/II studies.J Clin Oncol 22(10):
1815–1822；Holtsberg FW,等人(2002),Poly(ethylene glycol)(PEG)conjugated
arginine deiminase:effects of PEG formulations on its pharmacological
properties.J Control Release 80(1–3):259–271；及Kelly等人,(2012)British
Journal of Cancer 106,324-332。本领域技术人员将认识到，ADI-PEG 20是来源于人型支
原体的聚乙二醇化ADI酶(约5.5±1.0的质量平均数的连接的PEG 20,000分子)，其相对于
野生型人型支原体ADI序列具有两个取代(K112E；P210S)。
[0181] 在某些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，调配物中的ADI-PEG保留其ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，ADI-PEG保留其(原始)ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％。在一些实施方案中，ADI活性在约
2-8℃的温度下、或在约室温下、或在应力温度(例如，约或至少约50-60℃的温度)下储存后
保留。在某些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，ADI-PEG保
留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，ADI-PEG保留其(原始)ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％。在一些实施方案中，ADI活性在约
2-8℃的温度下、或在约室温下、或在应力温度(例如，约或至少约50-60℃的温度)下储存后
保留。在某些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，ADI-PEG保
留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
[0182] 本领域技术人员将理解，本文所述的ADI-PEG多肽可与本文所述的各种调配物组分中的任何一种或多种组合，且根据本文所述的方法和组合物中的任何一种或多种来使
用。
用。
[0183] 经重构液体组合物及相关方法
[0184] 某些实施方案包括经重构液体组合物、重构液体组合物的方法及使用该经重构液体组合物以进行精氨酸耗尽疗法(包括治疗各种癌症)的方法。
[0185] 例如，某些实施方案包括重构本文所述的冻干调配物的方法，该方法包括将医药学上可接受的溶剂或稀释剂添加至冻干调配物以形成经重构液体组合物。亦包括通过本文
所述的任何方法制备的经重构液体组合物。某些示例性实施方案涉及经重构液体组合物，
其包含本文所述的冻干调配物及医药学上可接受的稀释剂或溶剂，即其中将冻干调配物溶
解或以其他方式增溶于溶剂中以形成液体组合物。
所述的任何方法制备的经重构液体组合物。某些示例性实施方案涉及经重构液体组合物，
其包含本文所述的冻干调配物及医药学上可接受的稀释剂或溶剂，即其中将冻干调配物溶
解或以其他方式增溶于溶剂中以形成液体组合物。
[0186] 在特定实施方案中，溶剂或稀释剂为水或无菌水。在一些情况下，冻干调配物在约或小于约五、四、三、二或一分钟的时间内重构成约5-20mg/ml ADI-PEG(例如，约5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/ml ADI-PEG)的实质上不含聚集体的溶液。
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mg/ml ADI-PEG)的实质上不含聚集体的溶液。
[0187] 在一些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，经重构液体组合物中的ADI-PEG保留其精氨酸脱亚氨酶(ADI)活性的至少50、55、60、65、70、75、80、
85、90或95％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，经重构液体组合物中的ADI-PEG保留其ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、
80、85、90或95％。在一些实施方案中，ADI活性在约2-8℃的温度下、或在约室温下、或在应力温度(例如，约或至少约50-60℃的温度)下储存后保留。在一些实施方案中，经重构液体
调配物中的ADI-PEG的ADI酶比活性为约5.0至约120IU/mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、
9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、
18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、
28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、
110、115或120IU/mg，包括其间所有整数及范围。
85、90或95％。在一些实施方案中，在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、36、48、60或72个月后，经重构液体组合物中的ADI-PEG保留其ADI活性的至少50、55、60、65、70、75、
80、85、90或95％。在一些实施方案中，ADI活性在约2-8℃的温度下、或在约室温下、或在应力温度(例如，约或至少约50-60℃的温度)下储存后保留。在一些实施方案中，经重构液体
调配物中的ADI-PEG的ADI酶比活性为约5.0至约120IU/mg、或约5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、
9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、
18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、
28、28.5、29、29.5、30、30.5、35、40、45、50、55、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、
110、115或120IU/mg，包括其间所有整数及范围。
[0188] 在某些实施方案中，例如相对于非冻干液体对照组合物中的相应ADI-PEG，经重构液体组合物中的ADI-PEG在重构时保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、60、
65、70、75、80、85、90、95或100％。在一些实施方案中，例如在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、36、48、60或72个月后，视情况在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，经重构液体组合物中的ADI-PEG在重构时保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、
60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
65、70、75、80、85、90、95或100％。在一些实施方案中，例如在作为冻干调配物储存约或至少约1、2、3或4周、或约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、36、48、60或72个月后，视情况在约2-8℃的温度和/或约室温下储存后，经重构液体组合物中的ADI-PEG在重构时保留(原始)PEG分子(每ADI单体/原体)的至少50、55、
60、65、70、75、80、85、90、95或100％。
[0189] 在一些实施方案中，液体组合物中的ADI-PEG的重量摩尔渗透浓度为约50mOsm/kg至约500mOsm/kg、或约50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、120、125、130、135、
140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、
240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、
340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、
440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，经重构液体组合物适于注射至受试者(例如，人类受试者)
中。
140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、
240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、320、325、330、335、
340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、420、425、430、435、
440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或约500mOsm/kg，包括其间所有整数及范围。在一些实施方案中，经重构液体组合物适于注射至受试者(例如，人类受试者)
中。
[0190] 还包括使用经重构液体组合物以进行精氨酸耗尽疗法的方法。例如某些实施方案包括治疗、改善有需要的受试者的癌症的症状或抑制该癌症的进展的方法，其包含向该受
试者施用本文所述的经重构液体调配物。
试者施用本文所述的经重构液体调配物。
[0191] 本文所述的方法及组合物可用于治疗各种癌症。在一些实施方案中，该癌症选以下一种或多种：肝细胞癌(HCC)、黑色素瘤、转移性黑色素瘤、胰腺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、间皮瘤、淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴瘤、肝癌、肉瘤、白血病、急性骨髓性白血病、复发性急性骨髓性白血病、B细胞恶性肿瘤、乳癌、卵巢癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、室管膜瘤或脉络丛乳头状瘤)、多形性神经胶
质母细胞瘤(例如，巨细胞神经胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神
经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层肿瘤(神经管胚细胞瘤)、非小细胞肺癌
(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、子宫颈癌、睪丸癌及胃癌。
质母细胞瘤(例如，巨细胞神经胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神
经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层肿瘤(神经管胚细胞瘤)、非小细胞肺癌
(NSCLC)、肾癌、膀胱癌、子宫癌、食道癌、脑癌、头颈癌、子宫颈癌、睪丸癌及胃癌。
[0192] 在一些实施方案中，癌症展现减少的精氨基琥珀酸合成酶-1(ASS-1)表达和/或活性，或在其他方面为精氨基琥珀酸合成酶-1缺陷的。在一些情况下，相对于适当对照样品
(例如，正常细胞或组织)的表达和/或活性，减少的ASS-1表达或活性为约5％、10％、15％、
20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更多的表达和/或活性减少。在某些实施方案中，相对于对照样品的表达或活性，ASS或ASL表达或活性减少至少两
倍。ASS-1表达或活性减少可根据本领域中常规技术来测量，该常规技术包括例如定量PCR、
免疫组织化学、酶活性测定(例如，测量瓜氨酸至精氨基琥珀酸的转化或精氨基琥珀酸至精
氨酸及富马酸盐的转化ADI活性测定)及类似者。
(例如，正常细胞或组织)的表达和/或活性，减少的ASS-1表达或活性为约5％、10％、15％、
20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更多的表达和/或活性减少。在某些实施方案中，相对于对照样品的表达或活性，ASS或ASL表达或活性减少至少两
倍。ASS-1表达或活性减少可根据本领域中常规技术来测量，该常规技术包括例如定量PCR、
免疫组织化学、酶活性测定(例如，测量瓜氨酸至精氨基琥珀酸的转化或精氨基琥珀酸至精
氨酸及富马酸盐的转化ADI活性测定)及类似者。
[0193] 在一些实施方案中，本文所述的方法或组合物将患者的中值存活时间增加了4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、15周、20周、25周、30周、40周或更长时间。在某些实施方案中，本文所述的方法或组合物将患者的中值存活时间增加了1年、2年、3年或更长时间。在一些
实施方案中，本文所述的方法或组合物将无进展存活增加了2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周或更长时间。在某些实施方案中，本文所述的方法或组合物将无进展存活增加了1年、2年、3年或更长时间。
实施方案中，本文所述的方法或组合物将无进展存活增加了2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周或更长时间。在某些实施方案中，本文所述的方法或组合物将无进展存活增加了1年、2年、3年或更长时间。
[0194] 在某些实施方案中，如通过存活肿瘤量的统计学上显著减少(例如，肿瘤质量的至少10％、20％、30％、40％、50％或更大的减少)或通过改变的(例如，在统计学上显著减少)扫描尺寸所指示，所施用的组合物足以导致肿瘤消退。在某些实施方案中，所施用的组合物
足以导致疾病稳定。在某些实施方案中，所施用的组合物足以导致熟练临床医师已知的具
体疾病适应症症状的稳定或临床上相关的减少。
足以导致疾病稳定。在某些实施方案中，所施用的组合物足以导致熟练临床医师已知的具
体疾病适应症症状的稳定或临床上相关的减少。
[0195] 用于治疗癌症的方法或组合物可与其他治疗模式组合。例如，本文所述的组合物可在其他治疗干预(包括症状护理、放射疗法、手术、移植、激素疗法、光动力疗法、抗生素疗法或其任何组合)之前、期间或之后向受试者施用。症状护理包括施用皮质类固醇，以减轻
脑水肿、头痛、认知功能不全及呕吐，且施用抗痉挛剂，以减少癫痫型发作。放射疗法包括全脑照射、分级放射疗法及放射手术，诸如立体定向放射手术，该放射疗法可进一步与传统手
术组合。
脑水肿、头痛、认知功能不全及呕吐，且施用抗痉挛剂，以减少癫痫型发作。放射疗法包括全脑照射、分级放射疗法及放射手术，诸如立体定向放射手术，该放射疗法可进一步与传统手
术组合。
[0196] 用于鉴定患有本文所述的一种或多种疾病或病状的受试者的方法是本领域中已知的。
[0197] 施用可通过各种不同途径实现，包括口服、肠胃外、鼻内、静脉内、皮内、肌肉内、囊内、皮下、舌下、口腔、直肠、阴道及局部。优选的施用方式取决于待治疗或预防的病状的性质。特定实施方案包括通过IV输注进行的施用。
[0198] 精确剂量及持续时间随所治疗的疾病而变，且可使用已知测试方案或通过在本领域已知的模型系统中测试组合物且由此外推而凭经验判定。亦可执行对照临床试验。剂量
亦可随待缓解的病状的严重性而变化。医药组合物通常经调配及施用以发挥治疗上有用的
作用，同时使不期望有的副作用最小化。组合物可施用一次，或可分成许多较小剂量，以便
以一定时间间隔施用。对于任何具体受试者，特定剂量方案可随时间推移根据个体需要来
调整。
亦可随待缓解的病状的严重性而变化。医药组合物通常经调配及施用以发挥治疗上有用的
作用，同时使不期望有的副作用最小化。组合物可施用一次，或可分成许多较小剂量，以便
以一定时间间隔施用。对于任何具体受试者，特定剂量方案可随时间推移根据个体需要来
调整。
[0200] 在一些实施方案中，自约一天一次至约每二或三周一次施用剂量。例如，在某些实施方案中，约每1、2、3、4、5、6或7天一次、或约一周一次、或约一周两次、或约一周三次、或约每二或三周一次施用剂量。
[0201] 在一些实施方案中，剂量为约0.1mg/kg至约20mg/kg、或至约10mg/kg、或至约5mg/kg、或至约3mg/kg。在一些实施方案中，剂量为约0.10mg/kg、0.15mg/kg、0.20mg/kg、
0.25mg/kg、0.30mg/kg、0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.45mg/kg、0.50mg/kg、0.55mg/kg、0.60mg/kg、0.65mg/kg、0.70mg/kg、0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、
1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、
5.0mg/kg、5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、
9.0mg/kg、9.5mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、
17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，剂量作为2ml静脉内注射为每周一次约1mg/kg至每3天一次约20mg/kg。
0.25mg/kg、0.30mg/kg、0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.45mg/kg、0.50mg/kg、0.55mg/kg、0.60mg/kg、0.65mg/kg、0.70mg/kg、0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、
1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、
5.0mg/kg、5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、
9.0mg/kg、9.5mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、
17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg，包括其间所有整数及范围。在具体实施方案中，剂量作为2ml静脉内注射为每周一次约1mg/kg至每3天一次约20mg/kg。
[0202] 在一些实施方案中，剂量为约50IU/m2至约1000IU/m2。在特定实施方案中，剂量为约50IU/m2、60IU/m2、70IU/m2、80IU/m2、90IU/m2、100IU/m2、110IU/m2、120IU/m2、130IU/m2、
140IU/m2、150IU/m2、160IU/m2、170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、
310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、360IU/m2、370IU/m2、380IU/m2、
390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/
2 2 2 2 2 2 2 2 2
m 、600IU/m 、620IU/m 、630IU/m 、640IU/m 、650IU/m 、660IU/m 、670IU/m 、680IU/m 、
690IU/m2、700IU/m2、710IU/m2、720IU/m2、730IU/m2、740IU/m2、750IU/m2、760IU/m2、770IU/m2、780IU/m2、790IU/m2、800IU/m2、810IU/m2、820IU/m2、830IU/m2、840IU/m2、850IU/m2、
860IU/m2、870IU/m2、880IU/m2、890IU/m2、900IU/m2、910IU/m2、920IU/m2、930IU/m2、940IU/
2 2 2 2 2 2 2
m、950IU/m 、960IU/m、970IU/m、980IU/m 、990IU/m或约1000IU/m ，包括其间所有整数及范围。
140IU/m2、150IU/m2、160IU/m2、170IU/m2、180IU/m2、190IU/m2、200IU/m2、210IU/m2、220IU/m2、230IU/m2、240IU/m2、250IU/m2、260IU/m2、270IU/m2、280IU/m2、290IU/m2、300IU/m2、
310IU/m2、约320IU/m2、约330IU/m2、340IU/m2约350IU/m2、360IU/m2、370IU/m2、380IU/m2、
390IU/m2、400IU/m2、410IU/m2、420IU/m2、430IU/m2、440IU/m2、450IU/m2、500IU/m2、550IU/
2 2 2 2 2 2 2 2 2
m 、600IU/m 、620IU/m 、630IU/m 、640IU/m 、650IU/m 、660IU/m 、670IU/m 、680IU/m 、
690IU/m2、700IU/m2、710IU/m2、720IU/m2、730IU/m2、740IU/m2、750IU/m2、760IU/m2、770IU/m2、780IU/m2、790IU/m2、800IU/m2、810IU/m2、820IU/m2、830IU/m2、840IU/m2、850IU/m2、
860IU/m2、870IU/m2、880IU/m2、890IU/m2、900IU/m2、910IU/m2、920IU/m2、930IU/m2、940IU/
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m、950IU/m 、960IU/m、970IU/m、980IU/m 、990IU/m或约1000IU/m ，包括其间所有整数及范围。
[0203] 还包括患者护理组合物，其包含本文所述的一种或多种冻干调配物。某些试剂盒还包含一或多种医药学上可接受的稀释剂或溶剂，诸如水(例如，无菌水)。在一些实施方案
中，冻干调配物储存在小瓶、药筒、双室注射器和/或预填充混合系统中。
中，冻干调配物储存在小瓶、药筒、双室注射器和/或预填充混合系统中。
[0204] 本文中的试剂盒还可包括适合于或意欲用于所治疗适应症或所欲诊断应用的一或多种另外的治疗剂或其他组分。本文中的试剂盒还可包括一种或多种注射器或促进意欲
的递送方式所必需或所需的其他组分(例如，支架、可植入式贮库等等)。
的递送方式所必需或所需的其他组分(例如，支架、可植入式贮库等等)。
[0205] 本说明书中所引用的所有公开、专利申请及发布的专利均以引用的方式并入本文中，如同明确及单独地指示将各单独公开、专利申请或发布的专利以引用的方式并入一样。
[0206] 尽管已以说明及举例方式出于清晰理解的目的而在一定程度上详细地描述前述发明，但本领域的普通技术人员根据本发明的教导将显而易知，可在不偏离所附权利要求
的精神或范畴的情况下对本发明进行某些改变及修改。以下实例仅经由说明方式且不经由
限制方式来提供。本领域技术人员将容易地认识到可进行改变或修改以产生基本上类似结
果的多种非关键参数。
实施例
的精神或范畴的情况下对本发明进行某些改变及修改。以下实例仅经由说明方式且不经由
限制方式来提供。本领域技术人员将容易地认识到可进行改变或修改以产生基本上类似结
果的多种非关键参数。
实施例
[0207] 实施例1
[0208] 在本研究中，对各种赋形剂类型提供具有雅观饼外观的冻干ADI-PEG 20调配物的能力进行评估，且各种赋形剂类型在冻干过程及重构之后维持稳定。下表E1提供本研究中
测试的调配物的概述。
测试的调配物的概述。
[0209]
[0210]
[0211] 使用VirTis Genesis 25XL冻干器在小瓶中冻干表E1的调配物。将搁架预冷至5℃，之后加载小瓶。冻干循环如下：
[0212] ·将搁架在5℃下维持30分钟；
[0213] ·将搁架以1℃/min冷却至-40℃，且在-40℃下保持1小时；
[0214] ·在初级干燥在50mtorr下进行72小时的情况下，将搁架以1℃/分钟加热至-35℃；
[0215] ·在次级干燥在50mtorr下进行8小时的情況下，将搁架以0.1℃/分钟加热至20℃。
[0216] 在60℃的应力储存条件下一周之前及之后，通过视觉外观评估冻干调配物。所有冻干调配物在冻干后显示白色着色，且在应力储存条件下显示灰白色至黄色着色。
[0217] 相对于冻干前调配物(无阴影结果)以及在应力储存条件(阴影结果)之前及之后，还通过尺寸排阻层析评估冻干调配物的酶活性。结果示于下表E2和表E3中。
[0218]
[0219]
[0220]
[0221] 还评估了总PEG水平和游离PEG水平(mg/ml)(数据未显示)，且根据分配的+值的总数来对调配物进行分级及分组)。自最高(第1组)至最低(第5组)的分级示于下表E4中。
[0222]
[0223] 总而言之，本研究中制备的所有ADI-PEG 20调配物(F1至F10)产生雅观、均匀冻干饼，且全部似乎基于来自酶活性和尺寸排阻层析的评估保持稳定。来自应力储存条件(60
℃，一周)的结果指示，最佳冻干ADI-PEG 20调配物含有冷冻保护剂及冻干保护剂。添加增
积剂(诸如葡聚糖40或结晶甘露醇)或高玻璃转移温度赋形剂(诸如海藻糖)似乎减弱活性
损失且改善重构后PEG分子的形成。
℃，一周)的结果指示，最佳冻干ADI-PEG 20调配物含有冷冻保护剂及冻干保护剂。添加增
积剂(诸如葡聚糖40或结晶甘露醇)或高玻璃转移温度赋形剂(诸如海藻糖)似乎减弱活性
损失且改善重构后PEG分子的形成。
[0224] 实施例2
[0225] 在本研究中，调配物开发包括(a)缓冲剂评估(组氨酸、柠檬酸盐和甘氨酰-甘氨酸缓冲剂、pH 6-7)和(b)组合评估(增积剂，海藻糖和蔗糖；稳定剂，脯氨酸、甘氨酸；EDTA，以增强酶活性)。调配物的评估使用快速冻干循环(FAST LYO循环；冷冻，随后进行次级干燥)。
[0227]
[0228] 回收百分比的结果相对较高，且所有调配物在透析后保持透明，指示没有缓冲剂不兼容性问题。含柠檬酸盐的调配物的RALS值较高，这可能指示可溶性聚集体。
[0229] 随后在SPDurastop冻干器中使用Formatch’s FAST LYO循环进行透析后执行冻干。在没有初级干燥循环的情况下执行FAST LYO循环；代替地，仅使用次级干燥循环来干燥
样品。用于评估缓冲剂选择的冻干循环为：在-50℃下冷冻2小时(2℃/min)；在60mtorr下在
22℃下干燥4小时(所有缓变为2℃/min)。
样品。用于评估缓冲剂选择的冻干循环为：在-50℃下冷冻2小时(2℃/min)；在60mtorr下在
22℃下干燥4小时(所有缓变为2℃/min)。
[0230] 使用RALS及IF(内在荧光)评估来自表E5的所有冻干缓冲剂调配物。使用两种技术来评估不同调配物的热稳定性。将样品自20℃加热至90℃。此温度扫描显露Tm，即发生急剧
变化的温度，反映蛋白质的热诱导的变性或去折叠。若侦测到较高的Tm值，则认为蛋白质更
稳定。
变化的温度，反映蛋白质的热诱导的变性或去折叠。若侦测到较高的Tm值，则认为蛋白质更
稳定。
[0231] 在T(0)时，观察到所有液体对照调配物的RALS和IF的转变温度为约60℃。在冻干之前，将透析后的液体调配物分别透过0.2μm过滤器过滤。另外，缓冲剂调配物之间没有显
著差异。含有组氨酸pH 6.5及7.0的调配物显示略好，藉由RALS分析来执行，且含有pH值为
6.5的组氨酸缓冲剂的调配物显示总体最低的初始RALS读数，指示可溶性聚集体的量最少。
著差异。含有组氨酸pH 6.5及7.0的调配物显示略好，藉由RALS分析来执行，且含有pH值为
6.5的组氨酸缓冲剂的调配物显示总体最低的初始RALS读数，指示可溶性聚集体的量最少。
[0232] 为了组合评估，采用pH 6.5的20mM组氨酸的碱缓冲剂。将海藻糖、蔗糖及其组合作为增积剂评估，其评估它们向调配物提供等渗性的能力。将氨基酸脯氨酸及甘氨酸作为稳
定剂评估。另外，将EDTA作为螯合剂评估。下表E6提供经测试用于组合评估的调配物的概
述。
定剂评估。另外，将EDTA作为螯合剂评估。下表E6提供经测试用于组合评估的调配物的概
述。
[0233]
[0234] 在SPDurastop冻干器中使用Formatch’s FAST LYO循环进行透析后执行冻干。用于评估组合研究的冻干循环如下：在-50℃下冷冻2小时；在75mtorr下在22℃下干燥过夜
(所有缓变为1℃/min)。将ADI-PEG 20样品以11.1mg/mL冻干(1mL填充于10mL小瓶中)。
(所有缓变为1℃/min)。将ADI-PEG 20样品以11.1mg/mL冻干(1mL填充于10mL小瓶中)。
[0235] RALS温度缓变数据，RALS初始值及酶活性结果表明，含有蔗糖的调配物为ADI-PEG 20提供最佳的稳定化可冻干调配物。含有海藻糖或海藻糖及蔗糖二者的调配物也提供稳定
化调配物。另外的赋形剂(例如甘氨酸、脯氨酸、EDTA)未显著增强冻干调配物的活性。
化调配物。另外的赋形剂(例如甘氨酸、脯氨酸、EDTA)未显著增强冻干调配物的活性。
[0236] 含有9％蔗糖或9％海藻糖的调配物也通过调制微差扫描热量法(MDSC)来评估以判定玻璃转移。此分析的结果(约-16℃至-18℃的共熔点)表明-20℃或更低的初级干燥温
度应导致非坍塌的冻干饼。随后评估表E7中的冻干循环，且其显示可接受的饼外观。
度应导致非坍塌的冻干饼。随后评估表E7中的冻干循环，且其显示可接受的饼外观。
[0237]
[0238] 总而言之，缓冲剂评估(组氨酸、柠檬酸盐及甘氨酰-甘氨酸缓冲剂显示，所有缓冲剂为可接受的，但将组氨酸缓冲剂(pH 6.5)鉴定为最佳冻干缓冲剂。组合评估(增积剂，海
藻糖及蔗糖；稳定剂，脯氨酸、甘氨酸；EDTA，以增强酶活性)指示含有蔗糖的调配物显示最佳总体结果。然而，含有海藻糖及经组合蔗糖/海藻糖的调配物也表现良好。与相应液体对
照相比，所有缓冲剂的酶活性结果显示，冻干后的回收大于90％，且加速稳定性(50℃下培
育5天)后的回收大于80％。所有缓冲剂的重构时间小于1分钟，且所有饼通过尺寸排阻层析
显示100％纯度。
藻糖及蔗糖；稳定剂，脯氨酸、甘氨酸；EDTA，以增强酶活性)指示含有蔗糖的调配物显示最佳总体结果。然而，含有海藻糖及经组合蔗糖/海藻糖的调配物也表现良好。与相应液体对
照相比，所有缓冲剂的酶活性结果显示，冻干后的回收大于90％，且加速稳定性(50℃下培
育5天)后的回收大于80％。所有缓冲剂的重构时间小于1分钟，且所有饼通过尺寸排阻层析
显示100％纯度。
[0239] 实例3
[0240] 在本研究中，用填充体积为3.5mL/瓶的11mg/mL ADI-PEG 20的三种不同调配物中的各者评估两种不同的冻干循环。评估的冻干参数为干燥期间的搁架温度、室压力及冷冻
条件。下表E8提供本研究中测试的调配物的概述。
条件。下表E8提供本研究中测试的调配物的概述。
[0241]
[0242] 如上所述，测试两种不同的冻干循环：侵袭性循环(冻干循环1)及中间循环(冻干循环2)。
[0243] 冻干循环1的参数概述于下表E9中。
[0244]
[0245] 在完成循环1时，分析所得亲液物(lyophile)。在用3.5mL水复溶后，调配物ID 1明显混浊，而调配物ID 2及3透明且没有微粒。
[0246] 对来自循环1的冻干产物及经重构产物执行傅立叶变换红外光谱(FTIR)、微差扫描热量法(DSC)及SDS-PAGE分析。在干燥时在调配物ID 2及3中观察到β折叠(1630cm-1)的
一些结构变化，但是在重构之后，这两种调配物的ADI-PEG 20的结构返回至其原始状态。在
干燥时检测到调配物ID 1的主要结构变化。重构后，此调配物中的ADI-PEG 20的结构似乎
与冻干前样品相似，但不一致。SDS-PAGE分析显示在任何调配物中没有降解峰。
一些结构变化，但是在重构之后，这两种调配物的ADI-PEG 20的结构返回至其原始状态。在
干燥时检测到调配物ID 1的主要结构变化。重构后，此调配物中的ADI-PEG 20的结构似乎
与冻干前样品相似，但不一致。SDS-PAGE分析显示在任何调配物中没有降解峰。
[0247] 为了调节保守性及侵袭性循环之间的升华速率，设计0℃的搁架温度以在冻干循环2中进行初级干燥。中间冻干循环2的参数概述于下表E10中。
[0248]
[0249] 在完成循环2时，分析所得亲液物。在用3.5mL水复溶后，调配物ID 1明显浑浊，而调配物ID 2及3澄清且无色。
[0250] 对来自冻干循环2的冻干产物及经重构产物执行FTIR、DSC和SDS-PAGE分析。在干燥时在调配物ID 2及3中观察到β折叠(1630cm-1)的一些结构变化，但是在重构之后，这两
种调配物的ADI-PEG 20的结构返回至其原始状态。还在干燥时检测到调配物ID 1的显著结
构变化。复溶后，此调配物中的ADI-PEG 20的结构与冻干前的结构类似。SDS-PAGE分析显示
在任何调配物中没有降解峰。
种调配物的ADI-PEG 20的结构返回至其原始状态。还在干燥时检测到调配物ID 1的显著结
构变化。复溶后，此调配物中的ADI-PEG 20的结构与冻干前的结构类似。SDS-PAGE分析显示
在任何调配物中没有降解峰。
[0251] 再次执行冻干循环2以确认其作为经优化干燥循环的稳健性。在此后续冻干循环中仅干燥调配物2及3。通过SDS-PAGE检查调配物ID 2和3的经重构样品的物理降解。当将结
果与液体药物物质及冻干前样品比较时，未观察到经重构样品的降解产物。
果与液体药物物质及冻干前样品比较时，未观察到经重构样品的降解产物。
[0252] 总而言之，本研究用三种不同的ADI-PEG 20调配物评估侵袭性及中间冻干循环。在各循环之后，经由DSC分析样品的饼外观、水分含量、浊度、二级结构的变化及物理稳定
性。调配物ID 1(w/甘氨酸)在循环1及2后在重构时显示沉淀迹象，且自确认性冻干循环中
排除。相反，在各测试的冻干循环之后，含有蔗糖的调配物ID 2及3的完整性维持良好。干燥后结构的任何变化在重构时为可逆的。
性。调配物ID 1(w/甘氨酸)在循环1及2后在重构时显示沉淀迹象，且自确认性冻干循环中
排除。相反，在各测试的冻干循环之后，含有蔗糖的调配物ID 2及3的完整性维持良好。干燥后结构的任何变化在重构时为可逆的。
[0253] 实施例4
[0254] 在本研究中，在两种不同的储存温度下评估两种具有不同PEG数目的ADI-PEG 20制剂。评估的稳定性参数包括重构之前及之后的外观、酶活性及PEG数目。下表E11提供PEG
数目及本研究中测试的调配物的概述。
数目及本研究中测试的调配物的概述。
[0255]
[0256] 冻干过程如下。将样品冷冻以确保整个调配物呈固相。随后，使用Virtis Freeze Mobile 25EL在-78℃至-85℃及50-120mTorr下将各小瓶的样品冷冻干燥约24小时，以使尽
可能多的水升华。
可能多的水升华。
[0257] 如先前所提及，这些冻干产物中的各者的储存温度为2-8℃或室温。两种储存温度及储存持续时间列出于下表E12中。
[0258]
[0259] 在各个温度下冻干且储存后，分析亲液物。在冻干后，产物的外观为白色且蓬松的松散的饼。在用水重构后，调配物ID P204及C204皆透明且无微粒。P204及C204中的各者的
重构时间少于1分钟。
重构时间少于1分钟。
[0260] 对冻干产物及经重构产物执行酶活性、逆相(RP)层析及SDS-PAGE分析。如下表E13中所示，在2-8℃下储存亲液物相对于室温储存时的储存导致ADI酶活性的较大保留。例如，
P204在2-8℃下储存3个月后保留其ADI酶活性的约92％，且在室温下储存3个月后保留其活
性的约86％(相对于0个月时间点)。C204在2-8℃下储存3个月后保留其ADI酶活性的约
96％，且在室温下储存3个月后保留其酶活性的约74％(相对于0个月时间点)。
P204在2-8℃下储存3个月后保留其ADI酶活性的约92％，且在室温下储存3个月后保留其活
性的约86％(相对于0个月时间点)。C204在2-8℃下储存3个月后保留其ADI酶活性的约
96％，且在室温下储存3个月后保留其酶活性的约74％(相对于0个月时间点)。
[0261]
[0262] 使用RP层析来分析PEG数目。如下表E14中所示，冻干及重构之前及之后每原体一种(或多种)PEG的数目未显著改变。冻干过程及储存未导致PEG的任何解偶联。SDS-PAGE分
析也显示每ADI原体一种(或多种)PEG的数目未显著改变。
析也显示每ADI原体一种(或多种)PEG的数目未显著改变。
[0263]
[0264]
[0265] 在用溶剂重构后，P204及C204中的各者皆透明且无微粒，且在小于1分钟内发生重构。此外，对于P204及C204中的各者，在室温下储存后发生的ADI酶活性的损失大于在2-8℃
储存后所观察到的。此外，对于两种储存温度，每ADI原体PEG的数目保持不变。
储存后所观察到的。此外，对于两种储存温度，每ADI原体PEG的数目保持不变。
[0266] 实例5
[0267] 执行研究以评估由藉由水不稳定接头与PEG共价连接的ADI组成的ADI-PEG 20调配物的储存条件。储存条件为2-8℃多达28个月。评估的稳定性参数包括外观、PEG数目、游
离PEG及ADI酶活性。下表E12提供本研究中测试的调配物的概述。
离PEG及ADI酶活性。下表E12提供本研究中测试的调配物的概述。
[0268]
[0269] 在评估的条件下冻干且储存时，分析调配物ID HS。在2-8℃下冻干且储存28个月后，调配物的外观为均匀的致密的白色饼，而无肉眼可见的回熔。在储存28个月的冻干产物
用水重构后，调配物ID HS透明且无微粒。重构时间为约40秒。
用水重构后，调配物ID HS透明且无微粒。重构时间为约40秒。
[0270] 对在2-8℃储存的冻干产物进行酶活性评估，且与在-70℃下冷冻储存的产物的活性进行比较。在2-8℃储存亲液物28个月时，酶活性完全保留。结果显示于下表E13中。
[0271]
[0272] 分别使用RP层析及SEC层析分析PEG数目及游离PEG浓度(mg/mL)。下表E14中显示，冻干之前及之后以及在2-8℃下储存28个月后每原体一种(或多种)PEG的数目及游离PEG未
显著改变。显然，冻干过程及多达28个月的储存未导致PEG与酶解偶联。
显著改变。显然，冻干过程及多达28个月的储存未导致PEG与酶解偶联。
[0273]
[0274] 总之，在用溶剂重构后，调配物HS透明且无微粒，且在小于1分钟内发生重构。另外，本研究亦显示，共价附接的PEG的解偶联未在储存期间发生，且酶在重构时为完全活性
的。与水不稳定PEG共价键联的ADI在冻干及重构之前及之后在2-8℃的储存条件下稳定至
少28个月。
的。与水不稳定PEG共价键联的ADI在冻干及重构之前及之后在2-8℃的储存条件下稳定至
少28个月。
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