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一种同型半胱酸检测试剂

阅读:467发布:2020-05-18

专利汇可以提供一种同型半胱酸检测试剂专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及体外诊断技术领域,尤其是一种同型半胱 氨 酸检测 试剂 盒 ,包括试剂R1、试剂R2,试剂R1组分为丝氨酸0.5-20mmol/L、HCY还原剂0.5-10mmol/L、NADH 0.5-1.8g/L、LDH 10-200KU/L、缓冲液20-100mmol/L;试剂R2组分为胱硫醚β-合成酶0.5-10KU/L、胱硫醚β-分解酶10-50KU/L、缓冲液20-100mmol/L。本试剂盒用于体外定量检测人血清中同型半胱氨酸(Hcy)的含量,Hcy与心 血管 疾病 密切相关,是心 血管疾病 发病的一个重要危险因子,用于心血管疾病危险因素的辅助诊断,并指导临床 治疗 。具有 稳定性 好、使用方便、制备简单的优点。,下面是一种同型半胱酸检测试剂专利的具体信息内容。

1.一种同型半胱酸检测试剂盒,包括试剂R1、试剂R2,其特征在于:试剂R1组分丝氨酸0.5-20mmol/L、HCY还原剂0.5-10mmol/L、NADH 0.5-1.8g/L、LDH 10-200KU/L、缓冲液20-
100mmol/L;试剂R2组分为胱硫醚β-合成酶0.5-10KU/L、胱硫醚β-分解酶10-50KU/L、缓冲液
20-100mmol/L。
2.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,其使用方法:首先把结合或聚合状态的Hcy,包括复杂的二硫键的聚合状态的Hcy以及蛋白结合的Hcy还原成游离型的Hcy,然后游离型的Hcy与丝氨酸在胱硫醚合成酶(CBS)的作用下形成胱硫醚,形成的胱硫醚在胱硫醚裂解酶(CBL)的作用下形成Hcy、丙酸和氨,丙酮酸与NADH(辅酶)在乳酸脱氢酶(LDH)的作用下反应,NADH转化为NAD+在340nm下每分钟转化的速率直接与Hcy的浓度正相关。
3.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:缓冲液为Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种按任意比组成的混合物,缓冲液的PH值为7.1-7.5。
4.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:试剂R1和R2中还加入有电解质,电解质氯化钠、氯化或氯化,电解质的质量百分比为0.2-2%。
5.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:试剂R1和R2中还加入有表面活性剂,表面活性剂选择Tween系列或聚乙烯苯基醚,表面活性剂的质量百分比为0.1-1.0%。
6.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:试剂R1和R2中还加入有防腐剂,防腐剂为为叠氮钠、proclin300、MIT、硫酸庆大霉素、硫柳汞中的一种或多种,防腐剂的浓度为0.1-0.5%(w/v)。
7.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:试剂R1和R2中还加入有稳定剂,稳定剂为BSA、蔗糖、山梨糖或海藻糖,稳定剂的浓度为2-5%(w/v)。
8.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于:试剂R1和R2中还加入有促凝剂,促凝剂是聚乙二醇6000,促凝剂浓度为0.1-1%(w/v)。
9.根据权利要求1所述的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,HCY还原剂可以是三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)、二硫苏糖醇(DTT)或β-巯基乙醇(β-ME)。

说明书全文

一种同型半胱酸检测试剂

技术领域

[0001] 本发明涉及半胱氨酸检测技术领域,尤其涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒。

背景技术

[0002] 同型半胱氨酸(又称高半胱氨酸,homocysteine,Hcy)是蛋氨酸代谢过程中的中间 产物。同型半胱氨酸在体内的分解代谢,受两方面因素影响最大。一是与先天遗传有关的某 些生物酶的缺乏,另一个就是体内叶酸、维生素B6、维生素B12等营养元素的缺乏。这两种缺 乏都会影响同型半胱氨酸转化为其他物质,导致高同型半胱氨酸血症。Hcy的测定,对心血 管疾病、尿毒症、动脉粥样硬化、糖尿病、老年痴呆症等疾病的判定中,有重要的临床意义。
[0003] 通常认为成人空腹血浆总Hcy平正常值为4~12μmol/L,理想值为<10μmol/L,高 于15μmol/L则被认为是高同型半胱氨酸败血症;老年人(≥60岁)空腹血浆总Hcy水平正常 值为15~20μmol/L,高于20μmol/L被认为是高同型半胱氨酸败血症。
[0004] 目前,实验室常用的Hcy测定方法有色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法及酶循环法。色谱法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,现在公认其为测定血浆Hcy浓度的首选方法, 但因色谱法(HPLC及GC-MS)需要的设备复杂且昂贵,难以适应常规临床化学实验室应用;酶联免疫测定法自动化水平低,大部分需要手工操作,耗时较长,且容易造成误差;荧光偏振免疫检测 (FPIA) 方法灵敏度高,检测速度快,但价格昂贵,检测成本高,不适用常规生化检测;酶循环法是一种无需预处理样本,适用于全自动生化分析仪,具有快速、准确、灵敏的特点,因此受到临床广泛推广。但是普通的同型半胱氨酸检测试剂中由于存在多种酶,会使该试剂 的稳定性受到影响,不利于试剂的长期保存,从而造成浪费的不良后果。

发明内容

[0005] 本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒。
[0006] 为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:设计一种同型半胱氨酸检测试剂盒,包括试剂R1、试剂R2,试剂R1组分丝氨酸0.5-
20mmol/L、HCY还原剂0.5-10mmol/L、NADH 0.5-1.8g/L、LDH 10-200KU/L、缓冲液20-
100mmol/L;试剂R2组分为胱硫醚β-合成酶0.5-10KU/L、胱硫醚β-分解酶10-50KU/L、缓冲液
20-100mmol/L。
[0007] 其使用方法:首先把结合或聚合状态的Hcy,包括复杂的二硫键的聚合状态的Hcy以及蛋白结合的Hcy还原成游离型的Hcy,然后游离型的Hcy与丝氨酸在胱硫醚合成酶(CBS)的作用下形成胱硫醚,形成的胱硫醚在胱硫醚裂解酶(CBL)的作用下形成Hcy、丙酸和氨,丙酮酸与NADH(辅酶)在乳酸脱氢酶(LDH)的作用下反应,NADH转化为NAD+在340nm下每分钟转化的速率直接与Hcy的浓度正相关。
[0008] 优选的,缓冲液为Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、PBS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种按任意比组成的混合物,缓冲液的PH值为7.1-7.5。
[0009] 优选的,试剂R1和R2中还加入有电解质,电解质氯化钠、氯化或氯化,电解质的质量百分比为0.2-2%。
[0010] 优选的,试剂R1和R2中还加入有表面活性剂,表面活性剂选择Tween系列或聚乙烯苯基醚,表面活性剂的质量百分比为0.1-1.0%。
[0011] 优选的,试剂R1和R2中还加入有防腐剂,防腐剂为为叠氮钠、proclin300、MIT、硫酸庆大霉素、硫柳汞中的一种或多种,防腐剂的浓度为0.1-0.5%(w/v)。
[0012] 优选的,试剂R1和R2中还加入有稳定剂,稳定剂为BSA、蔗糖、山梨糖或海藻糖,稳定剂的浓度为2-5%(w/v)。
[0013] 优选的,试剂R1和R2中还加入有促凝剂,促凝剂是聚乙二醇6000,促凝剂浓度为0.1-1%(w/v)。
[0014] 优选的,HCY还原剂是三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP),二硫苏糖醇(DTT)或β-巯基乙醇(β-ME),浓度为0.5-10mmol/L。
[0015] 本发明提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,测定条件为:主波长 340nm 副波长 405nm
反应温度 37℃ 反应类型 速率法
反应方向 下降 校准类型 Linear
测定步骤为:
结果计算:Hcy(μmol/L)= CS× (μmol/L)
本发明提出的一种同型半胱氨酸检测试剂盒,有益效果在于:本试剂盒用于体外定量检测人血清中同型半胱氨酸 (Hcy)的含量,Hcy 与心血管疾病密切相关,是心血管疾病发病的一个重要危险因子,用于心血管疾病危险因素的辅助诊断,并指导临床治疗。具有稳定性好、使用方便、制备简单的优点。

具体实施方式

[0016] 下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
[0017] 实施例1一种同型半胱氨酸检测试剂盒,包括试剂R1:
Tris-HCl缓冲液             80 mmol/L
丝氨酸                     0.5mmol/L
TCEP                       1mmol/L
NADH                       0.5g/L
LDH                        50KU/L
proclin300                 1g/L
BSA                        20g/L
PEG6000                    10 g/L
NaCl                       2g/L
Tween20                    1 g/L
其余为纯化水    PH=7.2
试剂R2:
Tris-HCl缓冲液              60 mmol/L
胱硫醚β-合成酶              1KU/L
胱硫醚β-分解酶              10KU/L
BSA                         25g/L
proclin300                  1g/L
PEG6000                     5g/L
NaCl                        2g/L
Tween20                     2g/L
其余为纯化水   PH=7.5
实施例2
一种同型半胱氨酸检测试剂盒,包括试剂R1:
HEPES缓冲液                100 mmol/L
丝氨酸                     1mmol/L
DTT                        2mmol/L
NADH                       0.8g/L
LDH                        80KU/L
NaN3                       1g/L
海藻糖                     30g/L
PEG6000                    20 g/L
NaCl                       2g/L
Tween20                    1 g/L
其余为纯化水    PH=7.2
试剂R2:
HEPES缓冲液                100 mmol/L
胱硫醚β-合成酶             5KU/L
胱硫醚β-分解酶             25KU/L
BSA                        20g/L
蔗糖                       10 g/L
NaN3                       1g/L
PEG6000                    10g/L
NaCl                       2g/L
Tween20                    2g/L
其余为纯化水   PH=7.2
实施例3
一种同型半胱氨酸检测试剂盒,包括试剂R1:
MOPS缓冲液                 50 mmol/L
丝氨酸                     10mmol/L
TCEP                       5mmol/L
NADH                       1g/L
LDH                        100KU/L
NaN3                       2g/L
海藻糖                     30g/L
PEG6000                    30 g/L
KCl                        5g/L
聚氧乙烯苯基醚             5g/L
其余为纯化水     PH=7.5
试剂R2:
MOPS缓冲液                  100 mmol/L
胱硫醚β-合成酶              10KU/L
胱硫醚β-分解酶              50KU/L
BSA                         25g/L
山梨糖                      10g/L
NaN3                        2g/L
PEG6000                     20g/L
KCl                         2g/L
聚氧乙烯苯基醚              2g/L
其余为纯化水   PH=7.5
实施例4
一种同型半胱氨酸检测试剂盒,包括试剂R1:
PBS缓冲液                  100mmol/L
丝氨酸                     10mmol/L
TCEP                       2mmol/L
β-ME                       1 mmol/L
NADH                       1g/L
LDH                        60KU/L
NaN3                       2g/L
山梨糖                     20g/L
PEG6000                    15 g/L
KCl                        3g/L
聚氧乙烯苯基醚             3g/L
其余为纯化水    PH=7.2
试剂R2:
PBS缓冲液                   50mmol/L
胱硫醚β-合成酶              2KU/L
胱硫醚β-分解酶              20KU/L
BSA                         25g/L
NaN3                        2g/L
PEG6000                     20g/L
KCl                         2g/L
聚氧乙烯苯基醚              2g/L
其余为纯化水   PH=7.4
同型半胱氨酸检测试剂盒性能分析:
表1精密度实验
表2 准确度试验
表3 线性范围分析实验
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
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