一株可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌
阅读：1028发布：2020-06-15
专利汇可以提供一株可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一株高产聚γ‑谷 氨 酸的地衣芽胞杆菌工程菌，其保藏号为CCTCC No:M2016439，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis(WX‑02)/pHY‑zwf，并进一步提供了地衣芽胞杆菌WX‑02/pHY‑zwf的构建方法及高产聚γ‑谷氨酸的方法。通过基因工程改造增加胞内NADPH的合成 水 平，提高γ‑PGA的产量。通过构建6‑ 磷酸 葡萄糖 脱氢酶过表达载体pHY‑zwf，并转化至实验室之前保存的产γ‑PGA地衣芽胞杆菌WX‑02中,重新构建了地衣芽胞杆菌产γ‑PGA工程菌WX‑02/pHY‑zwf。该菌株在优化培养基和培养条件下可以显著提高γ‑PGA的合成。其聚γ‑谷氨酸产量高达51.13g/L；与原始菌株相比聚γ‑谷氨酸产量显著提高49％。，下面是一株可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌专利的具体信息内容。
1.一种地衣芽胞杆菌，其特征在于：所述地衣芽胞杆菌的保藏编号为CCTCC No:
M2016439，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis(WX-02)/pHY-zwf。
2.权利要求1所述地衣芽胞杆菌在产聚γ-谷氨酸中的应用。
3.一种如权利要求1所述的地衣芽胞杆菌的构建方法，其步骤包括：在过表达质粒pHY300PLK基础上，构建过表达质粒pHY-zwf，重组质粒转化地衣芽胞杆菌WX-02后得到地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf；所述地衣芽胞杆菌WX-02，该菌保藏编号为CCTCC No:M208065，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformisWX-02。
4.如权利要求3所述的地衣芽胞杆菌的构建方法，其特征在于：所述过表达质粒pHY-zwf，其启动子为枯草芽胞杆菌168中P43启动子，zwf为地衣芽胞杆菌WX-02中6-磷酸-葡萄糖脱氢酶基因，终止子为地衣芽胞杆菌WX-02中amyL终止子。
5.权利要求1所述地衣芽胞杆菌发酵产聚γ-谷氨酸的方法，其步骤包括：
(1)种子培养：将地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf接至LB培养基中进行种子培养得到发酵菌种；
(2)发酵培养：将发酵菌种接至发酵培养基中进行发酵培养，所述发酵培养基配方为：
30-100g/L葡萄糖；5-15g/L NH4Cl；5-15g/L柠檬酸钠；10-50g/L谷氨酸钠；0.1-1.5g/LK2HPO4·3H2O；0.1-1.5g/LMgSO4·7H2O；0.1-1.5g/LZnSO4·7H2O；0.1-1.5g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 6.0-8.0；所述发酵培养条件为：发酵温度为30-40℃，装液量为容器体积的
10-30％，摇床转速200-260r/min，发酵周期30-38h。
6.如权利要求5所述地衣芽胞杆菌发酵产聚γ-谷氨酸的方法，其特征在于：所述种子培养的条件为：培养温度为30-39℃，装液量为容器体积的15-25％，摇床转速160-200r/min，培养时间为8-12h。
一株可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌
技术领域
背景技术
[0002] 聚γ-谷氨酸是一种具有广泛用途的阴离子型高分子聚合物，其具有诸多特点：易溶于水；良好的保水能力；吸附金属离子；缓释性和可生物降解。因为聚γ-谷氨酸特殊的生物学性质，其在农业，医药，食品，化妆品等领域具有广泛用途。
[0003] 相关文献报道，聚γ-谷氨酸的产生菌主要由枯草芽胞杆菌，解淀粉芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌等。一般来说，聚γ-谷氨酸的合成主要由内源和外源两种途径。外源途径主要是在培养基中添加谷氨酸，谷氨酸经转运至胞内从而形成聚γ-谷氨酸；而内源途径则主要是葡萄糖经糖酵解途径，TCA循环，由α-酮戊二酸形成谷氨酸。目前为止，人们主要是通过以下策略构建重组菌株来提高聚γ-谷氨酸产量有：1、强化谷氨酸合成途径；2、副产物合成途径的中断；3、强化聚γ-谷氨酸合成酶表达和ATP供应等。通过这些方面的基因工程改造，都能实现聚γ-谷氨酸产量的提高。
[0004] NADPH的供给水平在目标产物的合成过程中具有重要作用。而NADPH再生途径主要有磷酸戊糖途径，TCA循环和转氢酶途径等三个途径，其中磷酸戊糖在NADPH再生过程中起着主要作用。6-磷酸葡萄糖脱氢酶是6-磷酸葡萄糖进入磷酸戊糖途径的第一个酶，也是其整个磷酸戊糖途径的限速酶，因而Zwf在NADPH再生中具有重要作用。在之前的研究中，Wang et al(2012)在枯草芽孢杆菌中通过过表达Zwf将核黄素的产量提高了31％。然而，Zwf表达水平与聚γ-谷氨酸发酵产量之间的关系并没有人研究。
发明内容
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌。
[0006] 本发明第一方面提供了一种地衣芽胞杆菌，所述地衣芽胞杆菌于年月日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2016439，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis(WX-02)/pHY-zwf，保藏日期：2016年8月30日。
[0007] 本发明第二方面提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的构建方法，其步骤包括：在过表达质粒pHY300PLK基础上，构建过表达质粒pHY-zwf，重组质粒转化地衣芽胞杆菌WX-02后得到地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf；所述地衣芽胞杆菌WX-02，该菌保藏编号为CCTCC No:M208065，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformisWX-02，保藏日期：2008年4月28日。
[0008] 本发明第三方面提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf产聚γ-谷氨酸的方法，其步骤包括：
[0010] (2)发酵培养：将发酵菌种接至发酵培养基中进行发酵培养，所述发酵培养基配方为：30-100g/L葡萄糖；5-12g/L NH4Cl；5-15g/L柠檬酸钠；10-50g/L谷氨酸钠；0.1-1.5g/LK2HPO4·3H2O；0.1-1.5g/LMgSO4·7H2O；0.1-1.5g/LZnSO4·7H2O；0.1-1.5g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 6.0-8.0；所述发酵培养条件为：发酵温度为30-40℃，装液量为容器体积的10-30％，摇床转速200-260r/min，发酵周期34-38h。
[0011] 本发明的有益效果是：本发明通过基因工程改造增加胞内NADPH的合成水平，α-酮戊二酸形成谷氨酸过程中会消耗大量NADPH，以此提高γ-PGA的产量。通过构建6-磷酸葡萄糖脱氢酶过表达载体pHY-zwf，并转化至实验室之前保存的产γ-PGA地衣芽胞杆菌WX-02中,重新构建了地衣芽胞杆菌产γ-PGA工程菌WX-02/pHY-zwf。本发明的地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在液体发酵过程中可以高产聚γ-谷氨酸，其聚γ-谷氨酸产量高达51.13g/L，为以后的科学研究和工业化生产奠定了基础，具有非常广阔的应用前景。
附图说明
附图说明
[0012] 图1为zwf过表达载体中表达元件琼脂糖凝胶图；
[0013] 图2为zwf基因过表达载体质粒图谱；
[0014] 图3为重组载体转化地衣芽胞杆菌WX-02菌落PCR验证图；
[0015] 图4为地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在优化培养基中发酵终点测定聚γ-谷氨酸产量示意图。
具体实施方式
[0016] 本发明第一方面提供了一种地衣芽胞杆菌，所述地衣芽胞杆菌于年月日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2016439，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis(WX-02)/pHY-zwf。
[0017] 进一步的，本发明提供了上述地衣芽胞杆菌在产聚γ-谷氨酸中的应用。本发[0018] 明第二方面提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的构建方法，其步骤包括：在过表达质粒pHY300PLK基础上，构建过表达质粒pHY-zwf，重组质粒转化地衣芽胞杆菌WX-02后得到地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf；所述地衣芽胞杆菌WX-02，该菌保藏编号为CCTCC No:M208065，命名为地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformisWX-02。
[0019] 优选的，所述过表达质粒pHY-zwf，其启动子为枯草芽胞杆菌168中P43启动子，zwf为地衣芽胞杆菌WX-02中6-磷酸-葡萄糖脱氢酶基因，终止子为地衣芽胞杆菌WX-02中amyL终止子。
[0020] 本发明第三方面提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf产聚γ-谷氨酸的方法，其步骤包括：
[0021] (1)种子培养：将地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf接至LB培养基中进行种子培养得到发酵菌种；
[0022] (2)发酵培养：将发酵菌种接至发酵培养基中进行发酵培养，所述发酵培养基配方为：30-100g/L葡萄糖；5-12g/L NH4Cl；5-15g/L柠檬酸钠；10-50g/L谷氨酸钠；0.1-1.5g/LK2HPO4·3H2O；0.1-1.5g/LMgSO4·7H2O；0.1-1.5g/LZnSO4·7H2O；0.1-1.5g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 6.0-8.0；所述发酵培养条件为：发酵温度为30-40℃，装液量为容器体积的10-30％，摇床转速200-260r/min，发酵周期34-38h。
[0023] 优选的，所述种子培养的条件为：培养温度为30-39℃，装液量为容器体积的15-25％，摇床转速160-200r/min，培养时间为8-12h。
[0024] 下面将结合具体实施例对本发明提供的一株可以高产聚γ-谷氨酸的地衣芽胞杆菌工程菌予以进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0025] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。
[0026] 实施例1
[0027] 本实施例提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf及其构建方法。
[0028] 1重组载体中表达元件的克隆
[0029] 以枯草芽胞杆菌168的总DNA为模板，根据NCBI公布的枯草芽胞杆菌168的基因组序列，采用PCR的方法扩增出启动子P43的序列SEQ ID NO:1，引物分别为P43-F SEQ ID NO:2、P43-R SEQ ID NO:3；以地衣芽胞杆菌WX-02的总DNA为模板，根据NCBI上公布的地衣芽胞杆菌WX-02基因组序列，采用PCR的方法扩增出6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf序列SEQ ID NO:4，引物为zwf-F SEQ ID NO:5、zwf-R SEQ ID NO:6；以地衣芽胞杆菌WX-02的总DNA为模板，根据NCBI上公布的地衣芽胞杆菌WX-02基因组序列，采用PCR的方法扩增出淀粉酶基因amyL终止子的序列SEQ ID NO:7，引物为TamyL-F SEQ ID NO:8、TamyL-R SEQ ID NO:9。
[0030] 对zwf过表达载体中表达元件进行了琼脂糖凝胶电泳检测，其琼脂糖凝胶图如附图1所示，其中，泳道1为5K DNA marker(从上到下依次为：5000bp，3000bp，2000bp，1500bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp)，泳道2为来源于枯草芽胞杆菌168中启动子P43的条带(305bp)；泳道3为来源地衣芽胞杆菌WX-02中6-磷酸-葡萄糖脱氢酶基因zwf的条带(1479bp)；泳道4为来源于地衣芽胞杆菌WX-02中淀粉酶基因amyL终止子条带(501bp)。
[0031] 2以P43为启动子强化表达zwf基因的过表达载体的构建
[0032] 以实验室保存的表达载体pHY300PLK为初始载体构建zwf基因过表达载体，所述表达载体pHY300PLK可市场购买得到。先将P43启动子、6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf及淀粉酶基因amyL的终止子片段通过SOE-PCR的方法连到一起。通过EcoRI/XbaI双酶切，纯化回收后与同样经过EcoRI/XbaI双酶切的pHY300PLK空质粒酶连，酶连温度为16℃，时间为8h，酶连产物随后转化E.coli DH5α，挑转化子进行菌落PCR验证，将PCR验证正确的转化子挑菌接至含有5mL LB培养基的PA瓶中(50ug/mL氨苄抗生素)，抽质粒并测序。
[0033] 所述zwf基因过表达载体质粒图谱如附图2所示，以表达质粒pHY300PLK为原始质粒，在其基础上加入来源于枯草芽胞杆菌168的启动子P43，来源于地衣芽胞杆菌WX-02中6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因zwf及来源于地衣芽胞杆菌WX-02中淀粉酶基因amyL的终止子，构建了重组质粒pHY-zwf。
[0034] 3地衣芽胞杆菌高产聚γ-谷氨酸工程菌株WX-02/pHY-zwf的构建将构建[0035] 好的过表达载体pHY-zwf转化地衣芽胞杆菌WX-02。首先做地衣芽胞杆菌WX-02感受态，在平板上活化菌种，然后挑菌至含有5mL LB的PA瓶中，37℃过夜培养，随后以5％的接种量转接至生长培养基中，37℃，200rpm培养至OD600到0.85左右，5500rpm离心6min收集菌体，用洗涤培养基重悬菌体，5500rpm离心6min，重复三次后加入1mL洗涤培养基重悬菌体，分装至灭过菌的1.5mLEP管中，-80℃保存。
[0036] 将吹干后的电转杯在冰上预冷15min，然后将100ul的地衣芽胞杆菌WX-02感受态细胞与10ul重组载体混匀后加入电转杯中，冰上预冷3-5min后，2.4kV条件下电击，电击时间4.8-5.2ms，随后立即加入800ul恢复培养基并转移至1.5mLEP管中。37℃，100rpm培养3h后涂LB平板(20ug/mL四环抗生素)。待长出转化子后挑菌进行菌落PCR验证和抽质粒验证，验证正确后保存菌种，即得地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf。
[0037] 重组载体转化地衣芽胞杆菌WX-02菌落PCR验证图如附图3所示，其中，泳道1为采用菌落PCR验证条带(2585bp)，通道2为5K marker(从上到下依次为：5000bp，3000bp，2000bp，1500bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp)。
[0038] 实施例2
[0039] 本实施例提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf产聚γ-谷氨酸的方法，通过地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在不同发酵条件下进行发酵实验，得到高产聚γ-谷氨酸的方法。
[0040] 所述发酵实验得到的聚γ-谷氨酸均采用如下测定方法和定量方法：
[0041] 在2.0mL发酵液中加入2倍体积的无水乙醇，震荡混合，在8000r/min离心10min。丢弃上清，其离心沉淀用2.0mL去离子水溶解，震荡均匀。取1.0mL溶液于比色管中，加入1mL浓盐酸，密封后于100℃下水解24h。水解结束后，用1mol/L NaOH定容10mL，再经0.22μm微孔滤膜过滤。HPLC测定采用Lichrospher C18色谱柱(25cm×4.6mm)。检测波长210nm。流动相为含5.0％甲醇的100mmol/L KH2PO4(用磷酸调pH值至2.5)。流速1.0mL/min。进样量为1.0μL。以聚γ-谷氨酸标准品作为对照，对发酵液产物进行定量分析。
[0042] 一、地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在ME发酵培养基的发酵实验
[0043] 挑取WX-02和WX-02/pHY-zwf菌落分别接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以2％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的ME发酵培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0045] 所述ME发酵培养基：20g/L葡萄糖；20g/L谷氨酸钠；12g/L柠檬酸钠；7g/L NH4Cl；0.5g/LK2HPO4·3H2O；0.5g/LMgSO4·7H2O；0.5g/LZnSO4·7H2O；0.15g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 7.2。
[0046] 在ME培养基中，原始菌株WX-02和重组菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量分别达到22.2g/L和28.8g/L，工程菌比原始菌株提高了27.1％。二、
[0047] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在不同葡萄糖浓度下聚γ-谷氨酸的发酵[0048] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的葡萄糖浓度为20-100g/L的优化培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0049] 所述优化培养基：20-100g/L葡萄糖；20g/L谷氨酸钠；12g/L柠檬酸钠；7g/L NH4Cl；0.5g/LK2HPO4·3H2O；0.5g/LMgSO4·7H2O；0.5g/LZnSO4·7H2O；0.15g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 7.2。
[0050] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量达到38.6g/L，工程菌比原始菌株提高了39.2％。
[0051] 三、地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在不同NH4Cl浓度下聚γ-谷氨酸的发酵[0052] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的NH4Cl浓度为5-15g/L的优化培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0053] 所述优化培养基：20g/L葡萄糖；20g/L谷氨酸钠；12g/L柠檬酸钠；5-15g/L NH4Cl；0.5g/LK2HPO4·3H2O；0.5g/LMgSO4·7H2O；0.5g/LZnSO4·7H2O；0.15g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 7.2。
[0054] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量达到36.2g/L，工程菌比原始菌株提高了38.6％。
[0055] 四、地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在不同柠檬酸钠浓度下聚γ-谷氨酸的发酵[0056] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的柠檬酸钠浓度5-15g/L的优化培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0057] 所述优化培养基：20g/L葡萄糖；20g/L谷氨酸钠；5-15g/L柠檬酸钠；7g/L NH4Cl；0.5g/LK2HPO4·3H2O；0.5g/LMgSO4·7H2O；0.5g/LZnSO4·7H2O；0.15g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 7.2。
[0058] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量达到34.5g/L，工程菌比原始菌株提高了36.4％。
[0059] 五、地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在不同谷氨酸钠浓度下聚γ-谷氨酸的发酵[0060] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的谷氨酸钠浓度10-50g/L的优化培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0061] 所述优化培养基：20g/L葡萄糖；10-50g/L谷氨酸钠；12g/L柠檬酸钠；7g/L NH4Cl；0.5g/LK2HPO4·3H2O；0.5g/LMgSO4·7H2O；0.5g/LZnSO4·7H2O；0.15g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 7.2。
[0062] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量达到44.8g/L，工程菌比原始菌株提高了43.6％。
[0063] 六、地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在优化培养基中聚γ-谷氨酸的发酵挑取[0064] 菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的优化培养基中，37℃，240r/min，发酵时间36h。
[0065] 所述优化培养基：30-100g/L葡萄糖；5-12g/L NH4Cl；5-15g/L柠檬酸钠；10-50g/L谷氨酸钠；0.1-1.5g/LK2HPO4·3H2O；0.1-1.5g/LMgSO4·7H2O；0.1-1.5g/LZnSO4·7H2O；0.1-1.5g/LCaCl2；0.10g/LMnSO4·H2O；pH 6.0-8.0.
[0066] 地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf的聚γ-谷氨酸最高产量达到51.13g/L，见附图4，工程菌比原始菌株提高了49％。
[0067] 实施例3
[0068] 本实施例提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在优化培养基中产聚γ-谷氨酸的方法，具体步骤包括：
[0069] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的优化培养基中，40℃，240r/min，发酵时间36h。
[0070] 所述优化培养基：100g/L葡萄糖；12g/L NH4Cl；5g/L柠檬酸钠；10g/L谷氨酸钠；1.5g/LK2HPO4·3H2O；1.5g/LMgSO4·7H2O；1.5g/LZnSO4·7H2O；1.5g/LCaCl2；0.15g/LMnSO4·H2O；pH 8.0。
[0071] 所得发酵结果与实施例2基本一致，聚γ-谷氨酸产量相比于原始菌株有明显提高。
[0072] 实施例4
[0073] 本实施例提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在优化培养基中产聚γ-谷氨酸的方法，具体步骤包括：
[0074] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的优化培养基中，30℃，240r/min，发酵时间36h。
[0075] 所述优化培养基：50g/L葡萄糖；8g/L NH4Cl；10g/L柠檬酸钠；10g/L谷氨酸钠；0.8g/LK2HPO4·3H2O；0.8g/LMgSO4·7H2O；0.8g/LZnSO4·7H2O；0.8g/LCaCl2；0.15g/LMnSO4·H2O；pH 7.0.
[0076] 所得发酵结果与实施例2基本一致，聚γ-谷氨酸产量相比于原始菌株有明显提高。
[0077] 实施例5
[0078] 本实施例提供了地衣芽胞杆菌WX-02/pHY-zwf在优化培养基中产聚γ-谷氨酸的方法，具体步骤包括：
[0079] 挑取菌落WX-02/pHY-zwf接种于5mL LB培养基中，37℃，240r/min振荡培养过夜。再以1％的接种量转接到50mL新鲜的LB培养基中，直到OD600为1.0时，以1％的接种量接种到预先准备好的优化培养基中，34℃，240r/min，发酵时间36h。
[0080] 所述优化培养基：30g/L葡萄糖；10g/L NH4Cl；5g/L柠檬酸钠；50g/L谷氨酸钠；0.8g/LK2HPO4·3H2O；0.8g/LMgSO4·7H2O；0.8g/LZnSO4·7H2O；0.8g/LCaCl2；0.15g/LMnSO4·H2O；pH 6.0.
[0081] 所得发酵结果与实施例2基本一致，聚γ-谷氨酸产量相比于原始菌株有明显提高。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种果皮营养茶的制备方法 | 2020-05-08 | 1 |
| 一种用于降解连作土壤中酚酸物质的方法 | 2020-05-08 | 663 |
| 用于啤酒厂中进行高效冷却的设备和方法 | 2020-05-08 | 703 |
| 一种用于豆粕发酵的发酵酶解剂及其应用 | 2020-05-11 | 222 |
| 一种丁酸梭菌饲料添加剂的生产方法 | 2020-05-08 | 210 |
| 一种免烧砖及其制备方法 | 2020-05-08 | 337 |
| 一种大蒜精油制作配方及工艺 | 2020-05-08 | 165 |
| 一种热风炉 | 2020-05-08 | 1018 |
| 一种高通量检测小样微生物发酵乙醇浓度装置 | 2020-05-11 | 191 |
| 一种沼气液取样器 | 2020-05-11 | 218 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
发酵容器热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈