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从序批式吡啶废 水活性 污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法

阅读：1029发布：2020-05-08

专利汇可以提供从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供了本发明提供了一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，包括以下步骤：(一)菌种分离：配制接种液，再将接种液接种到乙酸钠限制性固体培养基上培养后，挑选单菌落分别划线纯化培养；(二)菌种富集：将纯化培养得到的菌株分别放入MOPS-乙酸钠液体培养基振荡培养，得到富集菌液；(三)高效脱氮菌筛选：富集菌液和自配水混匀，并加入不具有脱氮活性污泥混合液，振荡培养后NH4Cl，然后曝气，检测氨氮含量，选出脱氮效果最为明显的脱氮菌株。本发明实现对序批式吡啶废水活性污泥中高效脱氮菌的分离，本方法操作简单，效果明显，为将来微生物改造，污水水处理，尤其是污水脱氮奠定了物质基础。，下面是从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(一)菌种分离：将含有驯化菌种的活性污泥混合液、NaCl溶液、Na5P3O10溶液、Tween80溶液混合均与得到接种液，再将接种液倍比稀释接种到乙酸钠限制性固体培养基上，在28±
0.5℃条件下培养6～10天后挑选单菌落分别划线纯化培养；
(二)菌种富集：将纯化培养得到的菌株分别放入MOPS-乙酸钠液体培养基，在28±0.5℃、180r/min的环境中振荡培养3～5天，得到富集菌液；
(三)高效脱氮菌筛选：在无菌条件下将富集菌液和自配水按5∶3的体积比混匀，并加入占富集菌液和自配水总体积0.2～1.2％不具有脱氮活性污泥混合液，在10～50r/min的厌氧环境中振荡培养2.5～3.5h后转入另一容器内加入占富集菌液和自配水总质量1.5～2％的NH4Cl，然后曝气使溶解氧浓度为0.5～5mg/L，检测氨氮含量，选出脱氮效果最为明显的脱氮菌株。
2.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述接种液按体积比由20％含有驯化菌种的活性污泥混合液、78.8％NaCl溶液、1％Na5P3O10溶液和0.2％Tween80组成。
3.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述NaCl溶液中NaCl质量分数为0.9％，所述Na5P3O10溶液中Na5P3O10的质量分数为0.104％，所述Tween80溶液中Tween80的体积分数为4％。
4.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述乙酸钠限制性固体培养基pH值为7.0，1000mL乙酸钠限制性固体培养基由
3.68g的CH3COONa，17.2mg的CaC12·2H2O、28.73mg的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、57.27mg的NH4Cl、15g的琼脂、131.82mg的MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和26.74mg的K2SO4组成。
5.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述MOPS-乙酸钠液体培养基pH值为7.0，1000mLMOPS-乙酸钠液体培养基由
3.68g的CH3COONa，17.2mg的CaC12·2H2O、28.73mg的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、57.27mg的NH4Cl、131.82mg的MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和26.74mg的K2SO4组成。
6.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，1000mL所述自配水中含有10mgMgCl2、0.1mgCuSO4、5mgCaCl2、0.1mgMnSO4和
0.1mgZnCl2。
7.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述自配水COD值为500mg/L，自配水氨氮值为50mg/L，自配水pH值为7.5。
8.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述自配水中氨∶氮∶磷的质量比为100∶10∶1。
9.根据权利要求1所述的从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，其特征在于，所述步骤(一)中菌种分离过程中平板划线纯化培养6～10次。

说明书全文

从序批式吡啶废 水活性 污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及微生物分离和筛选技术领域，具体涉及一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法。

背景技术

[0002] 脱氮是为防止水体富营养化而对废水进行除氮的过程。一般分为物理化学法和生物法脱氮两种。物理化学法有气体脱氮法、离子交换法、氯处理法等，通常很少采用。实践中多采用硝化-反硝化作用的生物脱氮法对废水进行处理。目前已对活性污泥法、生物膜法处理过程中的嫌气反应与好气反应经过各种形式组合设计出多种处理程序。

[0003] SBR是序批式活性污泥法的简称，是一种按间歇曝气方式来运行的活性污泥污水处理技术。它的主要特征是在运行上的有序和间歇操作，SBR系统的核心是SBR反应池，该池集均化、初沉、生物降解、二沉等功能于一池，无污泥回流系统。近年来序批式活性污泥法(SBR) 处理养猪场废水越来越受到关注，该工艺相对比于其他工艺简单、剩余污泥处置麻烦少、节约投资投资省、占地少、运行费用低、耐有机负荷和毒物负荷冲击，运行方式灵活，由于是静止沉淀，因此出水效果好、厌(缺)氧和好氧过程交替发生、泥龄短、活性高，有很好的脱氮除磷效果。且有通过氧化还原电位实时控制SBR反应进程的报道，进一步提高了对氮磷的去除效果、节约了能源和投资。

[0004] SBR系统优越脱氮性能主要来源于SBR系统中高效脱氮菌，具有高效脱氮性能的脱氮菌可以进一步增加了SBR系统的污水处理能力，提高处理效率，实现废水高效而经济的脱氮。目前序批式吡啶废水活性污泥中脱氮菌脱氮性能参差不齐，导致SBR系统的污水处理不理想，因此，亟需一种分从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌，以提高序批式性污泥法处理废水的能力。

发明内容

[0005] 本发明目的是为了弥补已有技术缺陷，提供一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，实现对序批式吡啶废水活性污泥中高效脱氮菌的分离。

[0006] 为实现上述目的，本发明通过以下方案予以实现：

[0007] 本发明提供了一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，包括以下步骤：

[0008] (一)菌种分离：将含有驯化菌种的活性污泥混合液、NaCl溶液、 Na5P3O10溶液、Tween80溶液混合均与得到接种液，再将接种液倍比稀释接种到乙酸钠限制性固体培养基上，在28±0.5℃条件下培养6～10 天后挑选单菌落分别划线纯化培养；

[0009] (二)菌种富集：将纯化培养得到的菌株分别放入MOPS-乙酸钠液体培养基，在28±0.5℃、180r/min的环境中振荡培养3～5天，得到富集菌液；

[0010] (三)高效脱氮菌筛选：在无菌条件下将富集菌液和自配水按5∶ 3的体积比混匀，并加入占富集菌液和自配水总体积0.2～1.2％不具有脱氮活性污泥混合液，在10～50r/min的厌氧环境中振荡培养2.5～3.5h 后转入另一容器内加入占富集菌液和自配水总质量1.5～2％的NH4Cl，然后曝气使溶解氧浓度为0.5～5mg/L，检测氨氮含量，选出脱氮效果最为明显的脱氮菌株。

[0011] 优选地，接种液按体积比由20％含有驯化菌种的活性污泥混合液、 78.8％NaCl溶液、1％Na5P3O10溶液和0.2％Tween80组成。

[0012] 优选地，NaCl溶液中NaCl质量分数为0.9％，所述Na5P3O10溶液中Na5P3O10的质量分数为0.104％，所述Tween80溶液中Tween80的体积分数为4％。

[0013] 优选地，乙酸钠限制性固体培养基pH值为7.0，1000mL乙酸钠限制性固体培养基由3.68g的CH3COONa，17.2mg的CaC12·2H2O、 28.73mg的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、57.27mg的NH4Cl、15g 的琼脂、131.82mg的MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和26.74mg的K2SO4组成。

[0014] 优选地，MOPS-乙酸钠液体培养基pH值为7.0，1000mL MOPS- 乙酸钠液体培养基由3.68g的CH3COONa，17.2mg的CaC12·2H2O、 28.73mg的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、57.27mg的NH4Cl、131.82mg 的MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和26.74mg的K2SO4组成。

[0015] 优选地，1000mL自配水中含有10mgMgCl2、0.1mgCuSO4、 5mgCaCl2、0.1mgMnSO4和0.1mgZnCl2。

[0016] 优选地，自配水COD值为500mg/L，自配水氨氮值为50mg/L，自配水pH值为7.5。

[0017] 优选地，自配水中氨∶氮∶磷的质量比为100∶10∶1。

[0018] 优选地，步骤(一)中菌种分离过程中平板划线纯化培养6～10 次。

[0019] 本发明的有益效果是：

[0020] 本发明将含有驯化菌种的活性污泥混合液与NaCl溶液、Na5P3O10溶液、Tween80溶液混合均与得到接种液，再将接种液接种到乙酸钠限制性固体培养基上培养后挑选单菌落分别划线纯化培养，有效地将活性污泥混合液中的菌种分离。本发明将富集培养后的菌种富集液与自配水混合并加入不具有脱氮活性污泥混合液及NH4Cl，曝气处理后通过检测氨氮含量，实现对序批式吡啶废水活性污泥中高效脱氮菌的分离，为从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌提供了新方法，本方法操作简单，效果明显，为将来微生物改造，污水水处理，尤其是污水脱氮奠定了物质基础。附图说明

[0021] 图1为本发明实施例中脱氮菌Z1的脱氮曲线图；

[0022] 图2为本发明实施例中脱氮菌Z2的脱氮曲线图；

[0023] 图3为本发明实施例中脱氮菌Z3的脱氮曲线图；

[0024] 图4为本发明实施例中脱氮菌Z4的脱氮曲线图。

具体实施方式

[0025] 下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

[0026] 一种从序批式吡啶废水活性污泥中分离、筛选高效脱氮菌的方法，包括以下步骤：

[0027] (一)菌种分离：接种液按体积比由20％含有驯化菌种的活性污泥混合液、78.8％质量分数为0.9％的NaCl溶液、1％质量分数为0.104％的Na5P3O10溶液和0.2％体积浓度比为4％的Tween 80溶液组成，混匀接种液后倍比稀释接种到乙酸钠限制性固体培养基上，在28±0.5℃条件下培养10天后挑选单菌落分别划线纯化培养，在28℃条件下培养 10天后划线纯化培养10次，其中乙酸钠限制性固体培养基pH值为7.0， 1000mL乙酸钠限制性固体培养基由3.68g的CH3COONa，17.2mg的 CaC12·2H2O、28.73mg的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、
57.27mg 的NH4Cl、15g的琼脂、131.82mg的MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和26.74mg的K2SO4组成；

[0028] (二)菌种富集：将纯化培养得到的菌株Z1、Z2、Z3、Z4分别放入MOPS-乙酸钠液体培养基，在30℃、200r/min的环境中振荡培养 4天；其中乙酸钠限制性液体培养基pH值为7.0，1000mL MOPS-乙酸钠液体培养基由3.68g的CH3COONa，17.2mg的CaC12·2H2O、28.73mg 的Na2HPO4·2H2O、12g的HEPES、57.27mg的NH4Cl、131.82mg的 MgSO4·7H2O、1000ml蒸馏水和
26.74mg的K2SO4组成；

[0029] (三)高效脱氮菌筛选：在无菌条件下将富集菌液和自配水按5∶ 3的体积比混匀，其中自配水COD值为500mg/L，自配水氨氮值为50mg/L，自配水pH值为7.5，自配水中氨∶氮∶磷的质量比为100∶ 10∶1，并加入占富集菌液和自配水总体积1％不具有脱氮能力的活性污泥混合液，在25r/min的厌氧环境中振荡培养3h后转入另一容器内加入占富集菌液和自配水总质量1.5％的NH4Cl，然后曝气使溶解氧浓度为4mg/L，检测氨氮含量，得到Z1、Z2、Z3、Z4的脱氮曲线图如图 1～4所示，选出脱氮最为明显的脱氮菌菌株Z1。

[0030] 将脱氮菌Z1送往南京金斯瑞生物技术有限公司进行测序，测得 DNA序列在GenBank中对比，脱氮菌Z1与Pseudomonas stutzeri(施氏假单胞菌)的相似性达到99％，证明该脱氮菌属于假单胞菌属。

[0031] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

[0032] 以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

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