一种水青树的组培繁育方法
专利汇可以提供一种水青树的组培繁育方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 水 青树的组培繁育方法，属于 植物 组织培养领域，包括以下步骤：（1）外植体的选择及消毒；（2）水青树提取液的制备；（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上培养，直至所述茎段长出新芽；（4）继代增殖培养：将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，直至形成丛生芽；（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取 叶片 展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根；（6）试管苗的驯化和移栽。该种水青树繁育方法不受季节影响，培育时间短，繁殖速率快，解决了目前水青树扦插成活率低、繁殖周期长、品质退化等问题，实现了水青树良种大规模繁育。，下面是一种水青树的组培繁育方法专利的具体信息内容。
1.一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25～35min，无菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～
5min，无菌水清洗2～4次，消毒后备用；
（2）水青树提取液的制备：取适量新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-
5，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液；
（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12～20d的培养，直至所述茎段长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+营养液2.0～6.0g/L；
（4）继代增殖培养：待所述新芽在初代诱导中培养20d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10～20d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂2.0～6.0g/L；
（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养15～25d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～
0.03g/L+蔗糖10～20g/L+琼脂2.0～4.0g/L；
（6）试管苗的驯化和移栽：将水青树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置6～10d后，去瓶盖炼苗4～6d，然后从瓶内取出水青树幼苗，用水轻轻洗净培养基，将待栽的水青树幼苗根部用0.1％多菌灵处理1～2min后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿4～
6d，其间上午及下午各通风透气一次，每次20～30min，遮荫65-75%，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m2的用量进行喷施，此后进行正常的栽培管理，即可。
2.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.8g/L+6-BA 0.06g/L+NAA 0.04g/L+蔗糖20g/L+营养液4.0g/L。
3.根据权利要求2所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述营养液包括以下组份及其对应的浓度：
硫酸铵0.2～0.4g/L、二水氯化钙0.1～0.3g/L、七水硫酸镁0.1～0.3g/L、无水磷酸二氢钾0.4～0.6g/L、硫酸锌0.1～0.3g/L、碘化钾0.2～0.4mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液1.0g/L+6-BA 0.07g/L+NAA 0.05g/L+蔗糖25g/L+琼脂4.0g/L。
5.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.5g/L+IBA 0.03g/L+NAA 0.02g/L+蔗糖15g/L+琼脂3.0g/L。
6.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述初代诱导培养、继代增殖培养以及组培苗生根的培养条件：环境温度25±2℃，光照时间12～16h/d，光照强度为1600～2000lx。
7.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的栽培基质包括以下按重量份计的原料：泥炭30-40份、改性硅藻土20-30份、蛭石15-25份、松木屑8-12份、岩棉5-15份；
所述改性硅藻土由下列重量份的原料制成：硅藻土30份、木质素3份、膨胀珍珠岩10份、三氯化铁6份、正丁醛-苯胺缩合物3份、氧化镨3份、蜜蜡6份；其制备方法是将硅藻土置于
5%-10%的盐酸溶液中浸泡40-60分钟，抽滤后将所得物料烘干，再与膨胀珍珠岩混合，在
720-780℃下进行高温煅烧1-2小时，取出冷却到室温后再与蜜蜡混合，通过研磨机研磨成
120-160目的细粉，最后与剩余材料混合，通过球磨使所有原料粉末充分分散混合均匀即可。
8.根据权利要求1所述的一种水青树的组培繁育方法，其特征在于，所述的栽培基质包括以下按重量份计的原料：泥炭35份、改性硅藻土25份、蛭石20份、松木屑10份、岩棉10份。
一种水青树的组培繁育方法
技术领域
背景技术
发明内容
（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25～35min，无菌水清洗2～4次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～
5min，无菌水清洗2～4次，消毒后备用；
（2）水青树提取液的制备：取适量新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-5，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水加热到煮沸状态煎煮2-3h，且叶片与水的料液体积比为1:3-
5，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液；
（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12～20d的培养，直至所述茎段长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6～1.0g/L+6-BA 0.04～0.08g/L+NAA 0.02～0.06g/L+蔗糖15～25g/L+营养液2.0～6.0g/L；
（4）继代增殖培养：待所述新芽在初代诱导中培养20d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养10～20d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为1/2MS+水青树提取液0.8～1.2g/L+6-BA 0.06～0.08g/L+NAA 0.04～0.06g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂2.0～6.0g/L；
（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到2.0～3.6cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养15～25d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.3～0.7g/L+IBA 0.02～0.04g/L+NAA 0.01～
0.03g/L+蔗糖10～20g/L+琼脂2.0～4.0g/L；
（6）试管苗的驯化和移栽：将水青树生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置6～10d后，去瓶盖炼苗4～6d，然后从瓶内取出水青树幼苗，用水轻轻洗净培养基，将待栽的水青树幼苗根部用0.1％多菌灵处理1～2min后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿4～
6d，其间上午及下午各通风透气一次，每次20～30min，遮荫65-75%，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m2的用量进行喷施，此后进行正常的栽培管理，即可。
其中，所述改性硅藻土由下列重量份的原料制成：硅藻土30份、木质素3份、膨胀珍珠岩
10份、三氯化铁6份、正丁醛-苯胺缩合物3份、氧化镨3份、蜜蜡6份；其制备方法是将硅藻土置于5%-10%的盐酸溶液中浸泡40-60分钟，抽滤后将所得物料烘干，再与膨胀珍珠岩混合，在720-780℃下进行高温煅烧1-2小时，取出冷却到室温后再与蜜蜡混合，通过研磨机研磨成120-160目的细粉，最后与剩余材料混合，通过球磨使所有原料粉末充分分散混合均匀即可。
（2）本发明的水青树的组培繁育方法具有种苗繁殖快，种苗繁殖不受季节的影响，一年四季都可培育苗木，同时解决了科学研究选育的良种应用的问题，以往良种生产单纯依赖建设种子园的方法，采用该方法节约了土地、经费以及解决了种子园投产周期长的问题，推广应用前景好；
（3）采用本发明的水青树的组培繁育方法，良种大规模通过组培扩繁，并推广造林，其木材的经济收入相应也大幅度提高，同时发挥更好的生态和社会效益。
具体实施方式
（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒25min，无菌水清洗2次，再用0.1%升汞，2滴吐温80，处理3min，无菌水清洗2次，消毒后备用；
（2）水青树提取液的制备：取500g新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入
1500g水加热到煮沸状态煎煮2h，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入
1500g水加热到煮沸状态煎煮2h，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液128g；
（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过12d的培养长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.6g/L+6-BA 0.04g/L+NAA
0.02g/L+蔗糖15g/L+营养液2.0g/L；
上述营养液包括以下组份及其对应的浓度：硫酸铵0.2g/L、二水氯化钙0.1g/L、七水硫酸镁0.1g/L、无水磷酸二氢钾0.4g/L、硫酸锌0.1g/L、碘化钾0.2mg/L。
2.0g/L；
上述中初代诱导培养、继代增殖培养以及组培苗生根的培养条件：环境温度23℃，光照时间12h/d，光照强度为1600lx。
其中，所述的改性硅藻土由下列重量份的原料制成：硅藻土30kg、木质素3kg、膨胀珍珠岩10kg、三氯化铁6kg、正丁醛-苯胺缩合物3kg、氧化镨3kg、蜜蜡6kg；其制备方法是将硅藻土置于5%的盐酸溶液中浸泡40分钟，抽滤后将所得物料烘干，再与膨胀珍珠岩混合，在720℃下进行高温煅烧1小时，取出冷却到室温后再与蜜蜡混合，通过研磨机研磨成120目的细粉，最后与剩余材料混合，通过球磨使所有原料粉末充分分散混合均匀即可。
（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒30min，无菌水清洗3次，再用0.1%升汞，3滴吐温80，处理4min，无菌水清洗3次，消毒后备用；
（2）水青树提取液的制备：取600g新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入水2400g加热到煮沸状态煎煮2.5h，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入水
2400g加热到煮沸状态煎煮2.5h，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液141g；
（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过15d的培养长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液0.8g/L+6-BA 0.06g/L+NAA
0.04g/L+蔗糖20g/L+营养液4.0g/L；
上述营养液包括以下组份及其对应的浓度：硫酸铵0.3g/L、二水氯化钙0.2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、无水磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸锌0.2g/L、碘化钾0.3mg/L。
（5）组培苗生根：待步骤（4）的丛生芽的单芽长到3.0cm长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养18d后茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/4MS+水青树提取液0.5g/L+IBA 0.03g/L+NAA 0.02g/L+蔗糖15g/L+琼脂
3.0g/L；
上述中初代诱导培养、继代增殖培养以及组培苗生根的培养条件：环境温度25℃，光照时间14h/d，光照强度为1800lx。
其中，所述的改性硅藻土由下列重量份的原料制成：硅藻土30kg、木质素3kg、膨胀珍珠岩10kg、三氯化铁6kg、正丁醛-苯胺缩合物3kg、氧化镨3kg、蜜蜡6kg；其制备方法是将硅藻土置于8%的盐酸溶液中浸泡50分钟，抽滤后将所得物料烘干，再与膨胀珍珠岩混合，在760℃下进行高温煅烧1.5小时，取出冷却到室温后再与蜜蜡混合，通过研磨机研磨成140目的细粉，最后与剩余材料混合，通过球磨使所有原料粉末充分分散混合均匀即可。
（1）外植体的选择及消毒：从健壮的水青树植株上获取水青树茎段外植体，将茎段先用灭菌净600倍液消毒35min，无菌水清洗4次，再用0.1%升汞，5滴吐温80，处理5min，无菌水清洗4次，消毒后备用；
（2）水青树提取液的制备：取800g新鲜嫩绿的水青树叶片加入到开放的提取罐中，加入
4000g水加热到煮沸状态煎煮3h，之后倒出提取液至液体存储罐中；再向提取罐中加入
4000g水加热到煮沸状态煎煮3h，倒出提取液至同一液体存储罐中，最后浓缩液体存储罐中的提取液，使其比重为1.12，得水青树提取液187g；
（3）初代诱导培养：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到初代诱导培养基上，经过20d的培养长出新芽，其中初代诱导培养基为1/2MS+水青树提取液1.0g/L+6-BA 0.08g/L+NAA
0.06g/L+蔗糖25g/L+营养液6.0g/L；
上述营养液包括以下组份及其对应的浓度：硫酸铵0.4g/L、二水氯化钙0.3g/L、七水硫酸镁0.3g/L、无水磷酸二氢钾0.6g/L、硫酸锌0.3g/L、碘化钾0.4mg/L。
4.0g/L；
上述中初代诱导培养、继代增殖培养以及组培苗生根的培养条件：环境温度27℃，光照时间16h/d，光照强度为2000lx。
1000倍液的甲基托布津，且按照10g/m的用量进行喷施，此后进行正常的栽培管理，即可。
其中，所述的改性硅藻土由下列重量份的原料制成：硅藻土30kg、木质素3kg、膨胀珍珠岩10kg、三氯化铁6kg、正丁醛-苯胺缩合物3kg、氧化镨3kg、蜜蜡6kg；其制备方法是将硅藻土置于10%的盐酸溶液中浸泡60分钟，抽滤后将所得物料烘干，再与膨胀珍珠岩混合，在780℃下进行高温煅烧2小时，取出冷却到室温后再与蜜蜡混合，通过研磨机研磨成160目的细粉，最后与剩余材料混合，通过球磨使所有原料粉末充分分散混合均匀即可。
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