1.一种阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于，使用液相色谱法，并且包含如下步骤：
将阿奇霉素溶于稀释液中，形成供试品溶液，用液相色谱法分离检测阿奇霉素及其杂质；
其中，稀释液是溶液A、甲醇和乙腈体积比为7:7:6的混合溶液，其中，溶液A为pH值为
10.0士0.05的0.001～0.01mol/L的磷酸二氢铵水溶液；
液相色谱条件：
色谱柱：C18柱；流动相A：缓冲溶液；流动相B：甲醇-乙腈(250:750)；采用梯度洗脱；柱温：60℃；检测波长：UV210nm；进样量：50μl；流速：1.0ml/min；运行时间：93min。
2.如权利要求1所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述用液相色谱法分离检测阿奇霉素及其杂质过程中，
空白溶液：稀释液；
峰鉴别对照溶液：取阿奇霉素峰鉴别对照品8mg，加稀释液1ml，溶解后作为峰鉴别对照溶液；
系统适用性对照溶液：取系统适用性对照品1瓶加稀释液1ml，溶解后作为系统适用性对照溶液；
供试品溶液：取阿奇霉素0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制两份；
自身对照溶液：精密量取1.0ml供试品溶液，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。
3.如权利要求2所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述阿奇霉素峰鉴别对照品是EP对照品，含杂质A、B、C、E、F、G、I、J、L、M、N、O和P；所述系统适用性对照品含杂质F、J和H。
4.如权利要求3所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述杂质A、B、C、E、F、G、I、J、L、M、N、O、P和H具体名称及化学结构如下：
杂质A名称：氮红霉素A(Azaerthromycm A)]，9-去氧-9a-氮杂-高红霉素A；
杂质A结构式：
杂质B名称：阿奇霉素B(Azithromycin B)，(2R,3S,4S,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-
13-[(2,6-双脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-吡喃己糖基)氧]-2-乙基-4,10-二羟基-
3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质B结构式：
杂质C名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-(((2R,4R,5S,6S)-4,5-二羟基-4,6-二甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧)-11-(((2S,3S,4S,6R)-4-(二甲氨基)-3-羟基-
6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧)-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质C结构式：
杂质E名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-氨基-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧基]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质E结构式：
杂质F名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木-己吡喃糖基]氧基]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-
15-酮；
杂质F结构式：
杂质G名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-[N-(4-甲基苯磺酰基)-N-甲基氨基]-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-
1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质G结构式：
杂质I名称：阿奇霉素I(3′-N-去甲基阿奇霉素，N-Demethylazithromycin),(2R,3S,
4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-吡喃己糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质I结构式：
杂质J名称：阿奇霉素J(3-O-去克拉定糖基阿奇霉素，Desosaminylazithromycin),2R,
3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-乙基-3,4,10,13-四羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质J结构式：
杂质L名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲基连氮基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质L结构式：
杂质M名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-甲酰胺基-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-
15-酮；
杂质M结构式：
杂质N名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-3-二甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-氧杂-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质N结构式：
杂质O名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-
3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧基]-2-丙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
杂质O结构式：
杂质P名称：红霉素A 6,9-亚胺醚(Erythromycin A 6,9-iminoether),9-去氧-6-去氧-6,9-环氧-9,9α-双脱氢-9α-氮杂-高红霉素A；
杂质P结构式：
杂质H名称：3′-N-[[4-(乙酰氨基)苯基]磺酸基]-3′-N-去甲基阿奇霉素；杂质H结构式：
5.如权利要求2所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液需要临用现配或使用低温8℃进样器。
6.如权利要求1所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述采用梯度洗脱具体为按照下述体积比进行线性梯度洗脱：0min：50％A+50％B→25min：45％A+55％B→30min：40％A+60％B→80min：25％A+75％B→81min：50％A+50％B→93min：50％A+50％B。
7.如权利要求1所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述C18柱填料为十八烷基键合硅胶。
8.如权利要求1所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述缓冲溶液为用体积比为10％的磷酸溶液或质量体积比为10％的氢氧化钾溶液调节pH值至8.9的磷酸氢二钾水溶液。
9.如权利要求8所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述磷酸氢二钾水溶液浓度为0.001～0.01mol/L。
10.如权利要求8所述的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，其特征在于：所述磷酸氢二钾水溶液浓度为0.003mol/L。
技术领域
[0001] 本
发明属于分析化学领域，具体涉及一种优化的阿奇霉素相关杂质的检测方法。
背景技术
[0002] 阿奇霉素(Azithromycin)化学名称为(2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R)-13-[(2，6-二脱
氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基)氧]-2-乙基-3，4，10-三羟基-
3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脱氧-3-(二甲
氨基)-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-
1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-
酮，是一种大环内酯类抗菌药，与红霉素比较，其对酸稳定，口服不受胃酸破坏，
半衰期长，感染部位组织及细胞内浓度高，对格兰氏阴性菌作用扩大，尤其
对流感杆菌作用加强，抗菌谱更广，抗菌作用更强。
[0003] 阿奇霉素(Azithromycin)是大环内酯抗生素的第1个品种，临床上常用于
治疗上、下
呼吸道、泌尿生殖系统、
皮肤和软组织、外科感染等。欧洲药典(EP9.0)收载的阿奇霉素相关杂质检测方法采用梯度运行，测试过程中有机相比例逐步升高，与缓冲盐浓度混合时柱压
波动逐步较大，导致连续运行色谱图出峰时间易产生漂移，由于阿奇霉素杂质较多，出峰时间漂移会使杂质判断出现差错。因此亟需一种能够解决分析测试运行过程中柱压波动逐步变大的问题的检测方法，能够避免出峰时间漂移导致杂质判断出现差错的情况。
发明内容
[0004] 基于以上
现有技术的不足，本发明所解决的技术问题在于提供一种能够在阿奇霉素峰
鉴别对照品溶液中各杂质有效分离的前提下，解决运行过程中有机相与缓冲盐混合时柱压波动引起出峰时间漂移的情况，避免了杂质判断出现差错的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，该阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法能有效的让柱压波动较小，从而进一步可以提高色谱柱使用寿命。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法，使用液相色谱法，并且包含如下步骤：
[0006] 将阿奇霉素溶于稀释液中，形成供试品溶液，用液相色谱法分离检测阿奇霉素及其杂质；
[0007] 其中，稀释液是溶液A、甲醇和乙腈体积比为7:7:6的混合溶液，其中，溶液A为pH值为10.0士0.05的0.001～0.01mol/L的
磷酸二氢铵
水溶液；
[0008] 液相色谱条件：
[0009] 色谱柱：C18柱；流动相A：缓冲溶液；流动相B：甲醇-乙腈(250:750)；采用梯度洗脱；柱温：60℃；检测
波长：UV210nm；进样量：50μl；流速：1.0ml/min；运行时间：93min。
[0010] 作为上述技术方案的优选，本发明提供的阿奇霉素胶囊相关杂质的检测方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：
[0011] 作为上述技术方案的改进，所述用液相色谱法分离检测阿奇霉素及其杂质过程中，
[0012] 空白溶液：稀释液；
[0013] 峰鉴别对照溶液：取阿奇霉素峰鉴别对照品8mg，加稀释液1ml，溶解后作为峰鉴别对照溶液；
[0014] 系统适用性对照溶液：取系统适用性对照品1瓶加稀释液1ml，溶解后作为系统适用性对照溶液；
[0015] 供试品溶液：取阿奇霉素0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制两份；
[0016] 自身对照溶液：精密量取1.0ml供试品溶液，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。
[0017] 作为上述技术方案的改进，所述阿奇霉素峰鉴别对照品是EP对照品，含杂质A、B、C、E、F、G、I、J、L、M、N、O和P；所述系统适用性对照品含杂质F、J和H。
[0018] 作为上述技术方案的改进，所述杂质A、B、C、E、F、G、I、J、L、M、N、O、P和H具体名称及化学结构如下：
[0019] 杂质A名称：氮红霉素A(Azaerthromycm A)]，9-去氧-9a-氮杂-高红霉素A；
[0020] 杂质A结构式：
[0021]
[0022] 杂质B名称：阿奇霉素B(Azithromycin B)，
[0023] (2R,3S,4S,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-双脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-吡喃己糖基)氧]-2-乙基-4,10-二羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0024] 杂质B结构式：
[0025]
[0026] 杂质C名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-(((2R,4R,5S,6S)-4,5-二羟基-4,6-二甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧)-11-(((2S,3S,4S,6R)-4-(二甲氨基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧)-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-
1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0027] 杂质C结构式：
[0028]
[0029] 杂质E名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-氨基-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧基]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0030] 杂质E结构式：
[0031]
[0032] 杂质F名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木-己吡喃糖基]氧基]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0033] 杂质F结构式：
[0034]
[0035] 杂质G名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氨基]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-[N-(4-甲基苯磺酰基)-N-甲基氨基]-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0036] 杂质G结构式：
[0037]
[0038] 杂质I名称：阿奇霉素I(3′-N-去甲基阿奇霉素，N-Demethylazithromycin),(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-吡喃己糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0039] 杂质I结构式：
[0040]
[0041] 杂 质 J 名 称 ：阿 奇 霉 素 J ( 3 - O - 去 克 拉 定 糖 基 阿 奇 霉 素 ，Desosaminylazithromycin),2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-2-乙基-3,4,10,13-四羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-甲氨基-β-D-木糖-吡喃己糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0042] 杂质J结构式：
[0043]
[0044] 杂质L名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲基连氮基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0045] 杂质L结构式：
[0046]
[0047] 杂质M名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3-甲酰胺基-3,4,6-三脱氧-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0048] 杂质M结构式：
[0049]
[0050] 杂质N名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-3-二甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧]-2-乙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-氧杂-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0051] 杂质N结构式：
[0052]
[0053] 杂质O名称：(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核糖-己吡喃糖基)氧基]-2-丙基-3,4,10-三羟基-3,5,6,8,10,12,14-七甲基-11-[[3,4,6-三脱氧-3-(二甲氨基)-β-D-木-己吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮；
[0054] 杂质O结构式：
[0055]
[0056] 杂质P名称：红霉素A 6,9-亚胺醚(ErythromycinA 6,9-iminoether),9-去氧-6-去氧-6,9-环氧-9,9α-双脱氢-9α-氮杂-高红霉素A；
[0057] 杂质P结构式：
[0058]
[0059] 杂质H名称：3′-N-[[4-(乙酰氨基)苯基]磺酸基]-3′-N-去甲基阿奇霉素；杂质H结构式：
[0060]
[0061] 作为上述技术方案的改进，所述供试品溶液需要临用现配或使用低温8℃进样器。
[0062] 作为上述技术方案的改进，所述采用梯度洗脱具体为按照下述体积比进行线性梯度洗脱：0min：50％A+50％B→25min：45％A+55％B→30min：40％A+60％B→80min：25％A+75％B→81min：50％A+50％B→93min：50％A+50％B。
[0063] 作为上述技术方案的改进，所述C18柱填料为十八烷基键合
硅胶。
[0064] 作为上述技术方案的改进，所述缓冲溶液为用体积比为10％的磷
酸溶液或
质量体积比为10％的氢氧化
钾溶液调节pH值至8.9的
磷酸氢二钾水溶液。
[0065] 作为上述技术方案的改进，所述磷酸氢二钾水溶液浓度为0.001～0.01mol/L。
[0066] 优选的，所述磷酸氢二钾水溶液浓度为0.003mol/L。
[0067] 与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
[0068] 本发明克服了现有检测方法的不足，提供了一种阿奇霉素相关杂质检测方法，该方法能够在阿奇霉素峰鉴别对照品溶液中各杂质有效分离的前提下，解决检测过程中有机相与缓冲盐混合时产生过大的柱压波动而引起阿奇霉素相关杂质出峰时间漂移的情况，避免了杂质判断出现差错，同时由于本
专利方法检测过程中柱压波动较小，从而进一步提高了色谱柱的使用寿命。
[0069] 上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照
说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下结合优选
实施例，详细说明如下。
附图说明
[0070] 为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例的附图作简单地介绍。
[0071] 图1是本发明对比实施例1用0.013mol/L磷酸氢二钠缓冲盐运行的峰鉴别对照品溶液图谱；
[0072] 图2是本发明对比实施例1用0.013mol/L磷酸氢二钠缓冲盐(EP9.0方法)作为流动相运行的序列首针压
力图谱；
[0073] 图3是本发明对比实施例1用0.013mol/L磷酸氢二钠缓冲盐(EP9.0方法)作为流动相运行的序列末针压力图谱；
[0074] 图4是本发明实施例2用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的峰鉴别对照品溶液图谱；
[0075] 图5是本发明实施例2用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐作为流动相运行的序列首针压力图谱；
[0076] 图6是本发明实施例2用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐作为流动相运行的序列末针压力图谱；
[0077] 图7是本发明实施例3用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精
密度溶液
叠加图；
[0078] 图8是本发明实施例3用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列首针压力图谱；
[0079] 图9是本发明实施例3用0.01mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列末针压力图谱；
[0080] 图10是本发明实施例4用0.005mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液叠加图；
[0081] 图11是本发明实施例4用0.005mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列首针压力图谱；
[0082] 图12是本发明实施例4用0.005mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列末针压力图谱；
[0083] 图13是本发明实施例5用0.003mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液叠加图。
[0084] 表5是图13检测结果列表；
[0085] 图14是本发明实施例5用0.003mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列首针压力图谱；
[0086] 图15是本发明实施例5用0.003mol/L磷酸氢二钾缓冲盐运行的仪器精密度溶液运行的序列末针压力图谱。
具体实施方式
[0087] 下面详细说明本发明的具体实施方式，其作为本说明书的一部分，通过实施例来说明本发明的原理，本发明的其他方面、特征及其优点通过该详细说明将会变得一目了然。
[0088] 对比实施例1
[0089] 欧洲药典(EP)9.0采用的仪器及色谱条件如下：
[0090] 高效液相色谱仪：Waters 2695+2998；
[0091] 色谱柱：Waters XTerra MS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；
[0092] 流动相A：甲醇-乙腈(1:3)；
[0093] 流动相B：1.80g/L(0.013mol/L)无水磷酸氢二钠溶液(用磷酸或氢氧化钠溶液调节pH至8.9)；
[0094] 流动相按表1所示进行梯度洗脱；
[0095] 表1对比实施例1梯度洗脱表
[0096]
[0097] 检测波长：210nm；
[0098] 柱温：60℃；
[0099] 流速：1.0ml/min；
[0100] 进样体积：50μL；
[0101] 稀释液：磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05)-甲醇-乙腈(7:7:6)；
[0102] 以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：
[0103] 阿奇霉素峰鉴别对照品：EP，批号Y0000637-3.1；
[0104] 阿奇霉素峰鉴别对照品溶液的配制：精密称取阿奇霉素峰鉴别对照品8mg
[0105] 于进样小瓶中，加稀释液1ml后，超声溶解。
[0106] 取稀释液作为空白溶液运行2针、峰鉴别对照品溶液运行1针、空白溶液运行3针，记录峰鉴别对照品溶液运行的色谱图如图1，表2是图1检测结果列表，记录第1针空白溶液运行的压力图如图2，记录最后1针空白溶液运行的压力图如图3。
[0107] 表2对比实施例1检测结果表
[0108] 检出物质名称 保留时间(min) 相对保留时间 USP分离度阿奇霉素杂质L 11.485 0.27 /
阿奇霉素杂质M 14.998 0.35 8.84
阿奇霉素杂质E 17.150 0.40 4.69
阿奇霉素杂质F 20.705 0.48 5.37
阿奇霉素杂质J 22.663 0.53 2.68
阿奇霉素杂质I 23.805 0.55 1.82
阿奇霉素杂质C 31.562 0.73 13.16
阿奇霉素杂质N 32.612 0.76 1.80
阿奇霉素杂质A 35.665 0.83 4.85
阿奇霉素杂质P 39.298 0.91 5.22
阿奇霉素 43.154 1.00 2.71
阿奇霉素杂质O 53.258 1.23 7.08
阿奇霉素杂质G 54.855 1.27 2.19
阿奇霉素杂质B 57.739 1.34 3.96
[0109] 由表2可以看出，阿奇霉素峰鉴别对照品中各杂质峰均能有效分离。
[0110] 对比图2和图3可以看出，连续运行6针后，最后1针柱压波动增加明显。
[0111] 实施例2
[0112] 采用的仪器及色谱条件如下：
[0113] 高效液相色谱仪：Waters 2695+2998；
[0114] 色谱柱：Waters XTerra MS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；
[0115] 流动相A：甲醇-乙腈(1:3)；
[0116] 流动相B：1.74g/L(0.01mol/L)无水磷酸氢二钾溶液(用体积比为10％的磷酸，或质量体积比为10％的氢氧化钾溶液，调节pH至8.9)；
[0117] 按照流动相表3所示进行梯度洗脱；
[0118] 表3实施例2梯度洗脱表
[0119]
[0120] 检测波长：210nm；
[0121] 柱温：60℃；
[0122] 流速：1.0ml/min；
[0123] 进样体积：50μL；
[0124] 稀释液：磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05)-甲醇-乙腈(7:7:6)；
[0125] 以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：
[0126] 阿奇霉素峰鉴别对照品：EP，批号Y0000637-3.1；
[0127] 阿奇霉素峰鉴别对照品溶液的配制：精密称取阿奇霉素峰鉴别对照品8mg于进样小瓶中，加稀释液1ml后，超声溶解。
[0128] 取稀释液作为空白溶液运行2针、峰鉴别对照品溶液运行1针、空白溶液运行3针，记录峰鉴别对照品溶液运行的色谱图如图4，表4是实施例2检测结果表，记录第1针空白溶液运行的压力图如图5，记录最后1针空白溶液运行的压力图如图6。
[0129] 表4、实施例2检测结果表
[0130]检出物质名称 保留时间(min) 相对保留时间 USP分离度
阿奇霉素杂质L 10.783 0.26 /
阿奇霉素杂质M 14.248 0.34 9.05
阿奇霉素杂质E 16.084 0.39 4.18
阿奇霉素杂质F 19.583 0.47 5.65
阿奇霉素杂质J 21.564 0.52 2.90
阿奇霉素杂质I 22.263 0.53 1.21
阿奇霉素杂质C 30.291 0.73 14.33
阿奇霉素杂质N 31.457 0.76 1.99
阿奇霉素杂质A 34.375 0.83 4.83
阿奇霉素杂质P 37.749 0.91 6.54
阿奇霉素 41.637 1.00 2.86
阿奇霉素杂质O 51.743 1.24 6.72
阿奇霉素杂质G 53.284 1.28 2.20
阿奇霉素杂质B 56.160 1.35 4.02
[0131] 由表4可以看出，阿奇霉素峰鉴别对照品中各杂质峰均能有效分离。
[0132] 对比图5和图6可以看出，连续运行6针，最后1针柱压波动较小，流动相中缓冲盐由无水磷酸氢二钠调整为无水磷酸氢二钾可以有效解决运行过程中的柱压波动。
[0133] 实施例3
[0134] 采用的仪器及色谱条件如下：
[0135] 高效液相色谱仪：岛津LC-16PDA；
[0136] 色谱柱：Waters XTerra MS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)
[0137] 流动相A：甲醇-乙腈(1:3)；
[0138] 流动相B：1.74g/L(0.01mol/L)无水磷酸氢二钾溶液(用体积比为10％的磷酸，或质量体积比为10％的氢氧化钾溶液，调节pH至8.9)；
[0139] 流动相按表5所示进行梯度洗脱；
[0140] 表5实施例3梯度洗脱表
[0141]
[0142] 检测波长：210nm；
[0143] 柱温：60℃；
[0144] 流速：1.0ml/min；
[0145] 进样体积：50μL；
[0146] 稀释液：磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05)-甲醇-乙腈(7:7:6)；
[0147] 以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：
[0148] 阿奇霉素：浙江国邦药业有限公司，批号I03-170507-12；
[0149] 阿奇霉素仪器精密度溶液配制：精密称取阿奇霉素0.5g置50ml量瓶中，加稀释液超声10分钟使溶解，用稀释液稀释制至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5.0ml，置10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为仪器精密度溶液。
[0150] 取稀释液作为空白溶液运行2针、仪器精密度溶液连续运行5针，记录仪器精密度溶液运行的色谱图叠加图谱如图7，表6是实施例3检测结果表，记录第1针空白溶液运行的压力图如图8，记录最后1针运行的压力图如图9。
[0151] 表6实施例3检测结果表
[0152]
[0153] 由表6可以看出，连续运行的5针仪器精密度溶液主峰保留时间的RSD值为2.16％，出峰时间存在漂移。
[0154] 对比图8和图9可以看出，连续运行7针后，最后1针柱压波动增加明显。
[0155] 实施例4
[0156] 采用的仪器及色谱条件如下：
[0157] 高效液相色谱仪：岛津LC-16PDA；
[0158] 色谱柱：Waters XTerra MS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；
[0159] 流动相A：甲醇-乙腈(1:3)；
[0160] 流动相B：0.005mol/L无水磷酸氢二钾溶液(用体积比为10％的磷酸，或质量体积比为10％的氢氧化钾溶液，调节pH至8.9)；
[0161] 流动相按表7所示进行梯度洗脱；
[0162] 表7实施例4梯度洗脱表
[0163]
[0164]
[0165] 检测波长：210nm；
[0166] 柱温：60℃；
[0167] 流速：1.0ml/min；
[0168] 进样体积：50μL；
[0169] 稀释液：磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05)-甲醇-乙腈(7:7:6)；
[0170] 以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：
[0171] 阿奇霉素：浙江国邦药业有限公司，批号I03-170507-12；
[0172] 阿奇霉素仪器精密度溶液配制：精密称取阿奇霉素0.5g置50ml量瓶中，加稀释液超声10分钟使溶解，用稀释液稀释制至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5.0ml，置10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为仪器精密度溶液。
[0173] 取稀释液作为空白溶液运行2针、仪器精密度溶液连续运行5针，记录仪器精密度溶液运行的色谱图叠加图谱如图10，表8是实施例4检测结果表，记录第1针空白溶液运行的压力图如图11，记录最后1针运行的压力图如图12。
[0174] 表8实施例4检测结果表
[0175]
[0176]
[0177] 由表8可以看出，连续运行的5针仪器精密度溶液主峰保留时间的RSD值为0.14％，出峰时间基本上不存在漂移。
[0178] 对比图11和图12可以看出，连续运行7针后，最后1针柱压波动很小。
[0179] 实施例5
[0180] 采用的仪器及色谱条件如下：
[0181] 高效液相色谱仪：岛津LC-16PDA；
[0182] 色谱柱：Waters XTerra MS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；
[0183] 流动相A：甲醇-乙腈(1:3)；
[0184] 流动相B：0.003mol/L无水磷酸氢二钾溶液(用10％磷酸或10％氢氧化钾溶液调节pH至8.9)；
[0185] 流动相按表9所示进行梯度洗脱；
[0186] 表9实施例5梯度洗脱表
[0187]
[0188] 检测波长：210nm；
[0189] 柱温：60℃；
[0190] 流速：1.0ml/min；
[0191] 进样体积：50μL；
[0192] 稀释液：磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05)-甲醇-乙腈(7:7:6)；
[0193] 以下为实施例中所涉及的样品，对照品来源：
[0194] 阿奇霉素：浙江国邦药业有限公司，批号I03-170507-12；
[0195] 阿奇霉素仪器精密度溶液配制：精密称取阿奇霉素0.5g置50ml量瓶中，加稀释液超声10分钟使溶解，用稀释液稀释制至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5.0ml，置10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为仪器精密度溶液。
[0196] 取稀释液作为空白溶液运行2针、仪器精密度溶液连续运行5针，记录仪器精密度溶液运行的色谱图叠加图谱如图13，表10是实施例5检测结果表，记录第1针空白溶液运行的压力图如图14，记录最后1针运行的压力图如图15。
[0197] 表10实施例5检测结果表
[0198]
[0199] 由表10可以看出，连续运行的5针仪器精密度溶液主峰保留时间的RSD值为0.06％，出峰时间不存在漂移。
[0200] 对比图14和图15可以看出，连续运行7针后，最后1针柱压波动很小。
[0201] 本发明所列举的各
试剂，以及本发明方法设定参数的上下限、区间取值(比如
温度、流动相比例、梯度设定时间等)都能实现本发明，在此不一一列举实施例。
[0202] 以上所述是本发明的优选实施方式而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和变动，这些改进和变动也视为本发明的保护范围。
