一种高热值微藻生物柴油的制备方法
专利汇可以提供一种高热值微藻生物柴油的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 工程 和清洁 能源 制备技术领域，具体涉及一种高热值微藻 生物柴油 的制备方法。本发明以球藻为原料，自备得到球藻油脂，将球藻油脂酯化、离心分层，得到下层生物柴油粗品，继续蒸馏得到高热值微藻生物柴油，本发明采用较温和的光照和光质、高浓缩的 土壤 提取液作为培养液、适宜的 温度 等条件促进微藻快速生长，从而提高了产油效率，球藻是一种单细胞蛋白核小球藻，蛋白核小球藻对环境具有稳定的适应能 力 ，能够吸收沼液中丰富的氮磷元素和无机元素，对球藻细胞油脂的积累起着促进作用，从而使生物柴油生产的效率提高，获取最大的油脂含量，提高油脂的含 碳 率，达到提高生物柴油的热值的目的。，下面是一种高热值微藻生物柴油的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）取0.5～0.7kg河底淤泥置于烧杯中，向烧杯中加入800～1000mL蒸馏水，将烧杯口用透气塞封住，移入水浴锅中加热升温，蒸煮自然冷却至室温，静置分层，过滤去除下层泥沙，得到上清液，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积为900～1000mL，得到土壤提取液；
（2）将土壤提取液装入锥形瓶中，将球藻接种至土壤提取液中，培养；
（3）向上述锥形瓶中添加70～80mL沼液、50～60g贝壳粉、20～30g尼罗红，并在充气泵与锥形瓶之间放置一个装有高锰酸钾溶液的烧杯，用玻璃管将充气泵、烧杯、锥形瓶连通，用充气泵向锥形瓶中通入空气，在锥形瓶中开启磁力搅拌器搅拌，开始培养；
（4）培养期间，每日光照结束后，用紫外光对锥形瓶内培养液进行检查，发现锥形瓶培养液被红色充满后，结束培养，将锥形瓶中培养产物取出，放入高速离心机中离心处理，去除上层液，得到下层球藻细胞，将球藻细胞放入烘箱中，加热升温，干燥，得到干燥球藻细胞；
（5）将干燥球藻细胞用超声波破碎仪中破壁处理，得到球藻干粉，配置氯仿、甲醇、水的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液混合，放入分液漏斗中，静置，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温，蒸馏，得球藻油脂；
（6）将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛混合放入反应釜中，水浴加热升温，保温反应，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中离心，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
2.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的加热升温后温度为90～100℃，蒸煮时间为2～3h，静置分层10～15min。
3.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的球藻接种密度为400万个细胞/mL，控制培养液温度为26～28℃，可见光照射强度为
2000～2200Lx，培养时间为4～5天。
4.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的高锰酸钾溶液的质量分数为65%，充气泵充气速率为3～4L/min，磁力搅拌器转速为
300～400r/min，控制每日光照时间为10～12h。
5.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的高速离心机转速为4000～4300r/min，离心处理时间为12～15min，对烘箱加热升温后温度为80～90℃，干燥时间为10～12h。
6.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的控制超声波功率为180～200W，超声处理时间为20～25min，有机萃取液中氯仿、甲醇、水的体积混合比为2︰1︰2，球藻干粉与有机萃取液混合的质量比为1︰10，静置时间为20～30min，加热升温后温度为90～100℃，蒸馏时间为4～5h。
7.根据权利要求1所述的一种高热值微藻生物柴油的制备方法，其特征在于：步骤（6）所述的球藻油脂、甲醇、沸石分子筛混合的质量比为1︰5︰0.5，对反应釜水浴加热升温后温度为60～70℃，保温反应时间为2～3h，高速离心机转速为2000～2200r/min，离心时间为15～20min，蒸馏时加热升温后温度为70～80℃。
一种高热值微藻生物柴油的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
（1）取0.5～0.7kg河底淤泥置于烧杯中，向烧杯中加入800～1000mL蒸馏水，将烧杯口用透气塞封住，移入水浴锅中加热升温，蒸煮自然冷却至室温，静置分层，过滤去除下层泥沙，得到上清液，将灭菌蒸馏水加入上清液至总体积为900～1000mL，得到土壤提取液；
（2）将土壤提取液装入锥形瓶中，将球藻接种至土壤提取液中，培养；
（3）向上述锥形瓶中添加70～80mL沼液、50～60g贝壳粉、20～30g尼罗红，并在充气泵与锥形瓶之间放置一个装有高锰酸钾溶液的烧杯，用玻璃管将充气泵、烧杯、锥形瓶连通，用充气泵向锥形瓶中通入空气，在锥形瓶中开启磁力搅拌器搅拌，开始培养；
（4）培养期间，每日光照结束后，用紫外光对锥形瓶内培养液进行检查，发现锥形瓶培养液被红色充满后，结束培养，将锥形瓶中培养产物取出，放入高速离心机中离心处理，去除上层液，得到下层球藻细胞，将球藻细胞放入烘箱中，加热升温，干燥，得到干燥球藻细胞；
（5）将干燥球藻细胞用超声波破碎仪中破壁处理，得到球藻干粉，配置氯仿、甲醇、水的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液混合，放入分液漏斗中，静置，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温，蒸馏，得球藻油脂；
（6）将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛混合放入反应釜中，水浴加热升温，保温反应，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中离心，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
（2）本发明球藻是一种单细胞蛋白核小球藻，细胞为球形，细胞壁较薄，色素体呈杯状，几乎充满整个细胞，蛋白核小球藻藻株具有一个很明显的蛋白核，直径3～5μm，蛋白核小球藻对环境具有稳定的适应能力，竞争夺取养分能力非常强，球藻培养至对数期后，小球藻的生长速率最快，向其中加入沼液、贝壳粉等原料后，能够吸收沼液中丰富的氮磷元素，并且其他微生物会被小球藻吸收，帮助小球藻吸收无机元素，对球藻细胞油脂的积累起着促进作用，油脂品质得到提高，培养液中加入的尼罗红是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料，与脂类物质包括腊酯和三酰甘油以及各种脂肪酸结合后，紫外光照射下，显示强烈桔红色荧光，这对球藻中油脂的累积检测起到关键作用，能够精确确定小球藻油脂累积含量最高的生长点，确认培养结束时间，从而使生物柴油生产的效率提高，获取最大的油脂含量，提高油脂的含碳率，达到提高生物柴油的热值的目的。
具体实施方式
90℃，干燥10～12h，得到干燥球藻细胞；将干燥球藻细胞用超声波破碎仪中破壁处理，控制超声波功率为180～200W，超声处理时间为20～25min，得到球藻干粉，配置氯仿、甲醇、水体积混合比为2︰1︰2的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液按质量比为1︰10混合，放入分液漏斗中，静置20～30min，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温至90～100℃，蒸馏4～5h，得球藻油脂；将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛按质量比为1︰5︰0.5混合放入反应釜中，水浴加热升温至60～70℃，保温反应2～3h，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中以2000～2200r/min的转速离心15～20min，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温至70～80℃，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
80℃，干燥10h，得到干燥球藻细胞；将干燥球藻细胞用超声波破碎仪中破壁处理，控制超声波功率为180W，超声处理时间为20min，得到球藻干粉，配置氯仿、甲醇、水体积混合比为2︰
1︰2的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液按质量比为1︰10混合，放入分液漏斗中，静置
20min，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温至90℃，蒸馏4h，得球藻油脂；将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛按质量比为1︰5︰0.5混合放入反应釜中，水浴加热升温至60℃，保温反应2h，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中以2000r/min的转速离心15min，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温至70℃，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
干燥11h，得到干燥球藻细胞；将干燥球藻细胞用超声波破碎仪中破壁处理，控制超声波功率为190W，超声处理时间为23min，得到球藻干粉，配置氯仿、甲醇、水体积混合比为2︰
1︰2的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液按质量比为1︰10混合，放入分液漏斗中，静置
25min，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温至95℃，蒸馏4.5h，得球藻油脂；将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛按质量比为1︰5︰0.5混合放入反应釜中，水浴加热升温至65℃，保温反应2.5h，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中以2100r/min的转速离心
17min，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温至75℃，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
2︰1︰2的有机萃取液，将球藻干粉与有机萃取液按质量比为1︰10混合，放入分液漏斗中，静置30min，去除下层液，取上层液放入蒸馏装置中，加热升温至100℃，蒸馏5h，得球藻油脂；
将球藻油脂、甲醇、沸石分子筛按质量比为1︰5︰0.5混合放入反应釜中，水浴加热升温至70℃，保温反应3h，得到酯化产物，将酯化产物放入高速离心机中以2200r/min的转速离心
20min，静置分层，去除上层液体，得到下层生物柴油粗品，将生物柴油粗品置于蒸馏装置中，加热升温至80℃，蒸馏至不再有液体蒸出，得到高热值微藻生物柴油。
酸值试验方法参照GB/T264。
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