一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法
专利汇可以提供一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法，所述封闭液包含如下按重量份计组分：1000mL的1×TBS（Tris 盐酸 缓冲液）、20-60g的 牛 血清 白蛋白 （BSA）和14000U/mL-28000U/mL的糖苷酶（PNGase F），本发明涉及临床医学病理检测技术领域。该应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法，相比较一般免疫组织化学的封闭液，本发明通过向封闭液加入了糖苷酶（PNGase F），从而使该封闭液能将 蛋白质 的N-连接糖基被切去，暴露 抗原 决定簇，进而增强最终的显色 信号 ，针对含有N-连接糖基化修饰位点的抗原，本发明的封闭液的效果更好，大大增强了此类抗原在免疫组织化学检测中的显色信号，封闭液配制简单，成本低，且不会额外增加免疫组织化学的检测步骤。，下面是一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法专利的具体信息内容。
1.一种应用于免疫组织化学的封闭液，其特征在于：所述封闭液包含如下按重量份计组分：1000mL的1×TBS（Tris盐酸缓冲液）、20-60g的牛血清白蛋白（BSA）和14000U/mL-
28000U/mL糖苷酶（PNGase F）。
2.根据权利要求1所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液，其特征在于：所述1×TBS（Tris盐酸缓冲液）的pH为8.0。
3.根据权利要求1所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液，其特征在于：其制备方法具体包括如下步骤：
S1、首先量量取100mL，pH为8.0的1×TBS（Tris-base 缓冲液）于烧杯中；
S2、然后称取配方量的牛血清白蛋白（BSA）加入至上述溶液中，搅拌使其完全溶解；
S3、之后加入配方量的糖苷酶（PNGase F）至步骤S2得到的溶液中，搅拌使其完全溶解，从而制得该应用于免疫组织化学的封闭液。
4.一种应用于免疫组织化学的封闭液的使用方法，其特征在于：包括石蜡组织切片的脱蜡处理、抗原修复和免疫组化染色，所述石蜡组织切片脱蜡处理方法具体包括以下步骤：
T1、将组织切片插入切片架，在二甲苯(Ⅰ)和二甲苯(Ⅱ)中各浸泡20min；
T2、然后分别在无水乙醇(Ⅰ)、无水乙醇(Ⅱ)、95%乙醇、80%乙醇和60%乙醇中各浸泡
5min；
T3、之后在去离子水中浸泡洗涤三次，每次1min，最后转入pH为8.0的TBS缓冲液中待用；
所述抗原修复的方法具体步骤为：取约500ml的Tris-EDTA修复液于修复容器中，此时要保证修复液能没过组织切片，再用微波炉预加热修复液至沸腾，然后将切片放入其中，持续加热修复液15min，温度维持在90-100℃，持续加热结束后，自然冷却30-40min至室温；
所述免疫组化染色的方法具体包括以下步骤：
E1、用缓冲液浸泡洗涤冷却后的组织切片三次，每次1min，然后转入pH为8.0的TBS缓冲液中待用；
E2、将步骤E1中的组织切片取出，用吸水纸擦净多余液体，在组织切片上滴加适量3%的H2O2水溶液，室温下，于孵育湿盒中孵育灭活 10min；
E3、使用pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，然后用吸水纸擦净多余液体，滴加适量本发明所述封闭液，37℃下于孵育湿盒中孵育30min；
E4、用吸水纸擦净多余液体，滴加适量一抗试剂，室温下于湿盒中孵育1.5h；
E5、pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，用吸水纸擦净多余液体，滴加适量HRP标记的羊抗鼠二抗试剂，室温下于湿盒孵育30min；
E6、pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，用吸水纸擦净多余液体，滴加适量配制好的DAB显色液，反应1-5min后及时用去离子水冲洗干净多余DAB显色液，将组织切片至于8.0的TBS缓冲液待用；
E7、吸水纸擦净多余液体，滴加适量苏木素染色液，染色2min，pH8.0的TBS缓冲液冲洗干净，转入切片架至于pH8.0的TBS缓冲液浸泡反蓝5min；
E8、去离子水液浸泡洗涤三次，依次放入60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇(Ⅲ)、无水乙醇(Ⅳ)、二甲苯(Ⅲ)和二甲苯(Ⅳ)中各浸泡5min，最后取出至于通风橱风干5min；
E9、中性树胶封片，显微镜下观察染色结果。
5.根据权利要求4所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液的使用方法，其特征在于：
其使用方法为使用本发明所述封闭液替换常规封闭液使用。
6.根据权利要求4所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液的使用方法，其特征在于：
所述封闭液现配现用时效果最佳，亦可在4℃冷藏条件下保存至少两周。
7.根据权利要求4所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液的使用方法，其特征在于：
所述封闭液在使用时，封闭时间为15min-24h，封闭温度为4-40℃。
8.根据权利要求4所述的一种应用于免疫组织化学的封闭液的使用方法，其特征在于：
所述封闭液在使用时，最佳封闭条件为：37℃封闭30min。
一种应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法
技术领域
背景技术
发明内容
S2、然后称取配方量的牛血清白蛋白（BSA）加入至上述溶液中，搅拌使其完全溶解；
S3、之后加入配方量的糖苷酶（PNGase F）至步骤S2得到的溶液中，搅拌使其完全溶解，从而制得该应用于免疫组织化学的封闭液。
T2、然后分别在无水乙醇(Ⅰ)、无水乙醇(Ⅱ)、95%乙醇、80%乙醇和60%乙醇中各浸泡
5min；
T3、之后在去离子水中浸泡洗涤三次，每次1min，最后转入pH为8.0的TBS缓冲液中待用；
所述抗原修复的方法具体步骤为：取约500ml的Tris-EDTA修复液于修复容器中，此时要保证修复液能没过组织切片，再用微波炉预加热修复液至沸腾，然后将切片放入其中，持续加热修复液15min，温度维持在90-100℃，持续加热结束后，自然冷却30-40min至室温；
所述免疫组化染色的方法具体包括以下步骤：
E1、用缓冲液浸泡洗涤冷却后的组织切片三次，每次1min，然后转入pH为8.0的TBS缓冲液中待用；
E2、将步骤E1中的组织切片取出，用吸水纸擦净多余液体，在组织切片上滴加适量3%的H2O2水溶液，室温下，于孵育湿盒中孵育灭活 10min；
E3、使用pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，然后用吸水纸擦净多余液体，滴加适量本发明所述封闭液，37℃下于孵育湿盒中孵育30min；
E4、用吸水纸擦净多余液体，滴加适量一抗试剂，室温下于湿盒中孵育1.5h；
E5、pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，用吸水纸擦净多余液体，滴加适量HRP标记的羊抗鼠二抗试剂，室温下于湿盒孵育30min；
E6、pH8.0的TBS缓冲液浸泡洗涤组织切片三次，每次1min，用吸水纸擦净多余液体，滴加适量配制好的DAB显色液，反应1-5min后及时用去离子水冲洗干净多余DAB显色液，将组织切片至于pH8.0的TBS缓冲液待用；
E7、吸水纸擦净多余液体，滴加适量苏木素染色液，染色2min，pH8.0的TBS缓冲液冲洗干净，转入切片架至于pH8.0的TBS缓冲液浸泡反蓝5min；
E8、去离子水液浸泡洗涤三次，依次放入60%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇(Ⅲ)、无水乙醇(Ⅳ)、二甲苯(Ⅲ)和二甲苯(Ⅳ)中各浸泡5min，最后取出至于通风橱风干5min；
E9、中性树胶封片，显微镜下观察染色结果。
（1）、该应用于免疫组织化学的封闭液及其使用方法，相比较一般免疫组织化学的封闭液，本发明通过向封闭液加入了糖苷酶（PNGase F），从而使该封闭液能将蛋白质的N-连接糖基被切去，暴露抗原决定簇，进而增强最终的显色信号。
图3为本发明效果实施例2染色结果中胎盘实验组染色图；
图4为本发明效果实施例2染色结果中胎盘对照组染色图；
图5为本发明效果实施例2染色结果中乳腺癌实验组染色图；
图6为本发明效果实施例2染色结果中乳腺癌对照组染色图。
具体实施方式
氯化钠（NaCl），分析纯，货号10019318，国药集团化学试剂有限公司。
量取100mL， pH为8.0的1×TBS（Tris-base 缓冲液）于烧杯中；称取3g牛血清白蛋白（BSA）加入至上述溶液中，搅拌使其完全溶解；加入1.95mL糖苷酶（PNGase F）至上述溶液中，搅拌使其完全溶解。4℃暂存待用。
按照实施例1配制封闭液完成后，按照本发明标准实验流程分别对两张来源相同的慢性扁桃体炎组织切片进行免疫组织化学PD-L1染色，一张为实验组，使用本发明的封闭液进行封闭；一张为对照组，对照组所使用的封闭液不含糖苷酶（PNGase F），其他组分与实验组完全一致。
T1、将组织切片插入切片架，在二甲苯(Ⅰ)和二甲苯(Ⅱ)中各浸泡20min。
8.0的TBS缓冲液中待用。
T1、将组织切片插入切片架，在二甲苯(Ⅰ)和二甲苯(Ⅱ)中各浸泡20min。
8.0的TBS缓冲液中待用。
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