一种动态实时测量细胞膜电位的方法
专利汇可以提供一种动态实时测量细胞膜电位的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种动态实时测量细胞膜电位的方法，包括如下步骤：1）将从已获得的人体脐带静脉血中分离出来的细胞在体外进行培养；2）将培养后的细胞注入到微流室中继续进行培养；3）利用微注射 泵 在微流室中进行精确的流量控制；4）利用微流室内的氮化镓（GaN）高 电子 迁移率晶体管（HEMT）器件测量 流体 表面的粘滞度，进而计算出细胞膜电位。在使用本发明测量细胞膜电位的过程中，将作为 生物 传感器 的HEMT器件和微流室、微 注射泵 、储液瓶相连，在微注射泵提供动态流体环境的前提下，通过HEMT器件实时监测流体环境下的活体多细胞膜电位。，下面是一种动态实时测量细胞膜电位的方法专利的具体信息内容。
1.一种动态实时测量细胞膜电位的方法，所述方法包括如下步骤：
1）将从已获得的人体脐带静脉血中分离出来的细胞在体外进行培养；
2）将所述培养后的细胞注入到微流室中继续进行培养；
3）利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制；
4）利用所述微流室内的氮化镓（GaN）高电子迁移率晶体管（HEMT）器件测量流体表面的粘滞度，进而计算出细胞膜电位。
2.根据权利要求1所述的方法，需要将所述微流室、微注射泵和储液瓶依次连接，构成一个封闭的循环系统；所述微流室作为液体流动和细胞注入之用，所述微流室内的液体通过所述微注射泵传输给所述储液瓶，所述作为生物传感器的HEMT器件与所述微流室耦合，用于检测所述微流室内细胞在动态条件下的实时细胞膜电位。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的从已获得的人体脐带静脉血中分离细胞的方法为：
1）在无菌条件下，将已获得的新鲜的人体脐带静脉血加入1g/L胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶(1:1)(V/V)的混合液15mL，置于37℃水浴箱中孵育8min；
2）将步骤1）得到的液体收集入离心管，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗脐静脉2次，将冲洗后的液体一同收集入离心管，1000r/min离心10min，取上清液，加入完全培养液重悬细胞；
3）取0.1mL细胞悬液用4g/L台盼蓝染色后作活细胞计数；
4）将2×104/L细胞接种到24孔板中，每孔加入完全培养液1mL，置于37℃、950mL/L O2、50mL/L CO2培养箱内静置培养，并采用台盼蓝排斥法，将0.1mL混匀的内皮细胞悬液与
4g/L台盼蓝0.9mL混匀后，取1滴在显微镜下计数100个细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的将已分离活体细胞注入到微流室内继续培养的方法为：用酒精对HEMT器件消毒后，使用纤连蛋白溶液（fibronectin）进行处理
2
30min，并使用PBS冲洗，然后接种细胞，使细胞密度达到5000～12000cells/mm，并保证细胞全程置于含5%CO2的37℃恒温箱中。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述的利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制的方法为：采用微注射泵与细胞膜电位检测装置连接形成血液动力系统，该系统架设在37℃恒温箱中维持温度稳定，实验中使用PBS作为流体，并且实验全程通入含5%CO2的空气以保持流体环境的酸碱度。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述的用微流室内的HEMT器件测量流体表面的粘滞度，进而计算出细胞膜电位的方法为：
1）器件裸栅上培养的细胞受到的剪切力由以下公式推导：
其中τ为细胞受到的剪切力，单位为dyne/cm2;η为流体即培养液的粘滞度（viscosity），单位为g/(cm·s)；Q为流体每秒的流量，单位为cm3/s；w为器件的栅宽，h为微流室内壁高度；
2）采用半导体测试分析仪器，来测试HEMT器件的源漏电流，并通过如下公式，转化成对应的细胞膜电位：
为细胞膜电位， 为所8加漏源电压VDS下，且栅电压VGS
在-70mV～0V处对应的HEMT器件跨导。由于栅电压的变化较小，可认为 为一个常数，由预先测量得到。
7.根据权利要求6所述的测量细胞膜电位的方法，所述预先测量为：对在同一晶圆上、且采用相同版图的常规三端HEMT器件，加相同漏源电压VDS，测试其转移曲线（VG-ID），得到栅电压在-70mV～0V处对应的器件跨导值。
一种动态实时测量细胞膜电位的方法
技术领域
背景技术
发明内容
胞密度达到5000～12000cells/mm，并保证细胞全程置于含5%CO2的37℃恒温箱中。
（viscosity），单位为g/(cm·s)；Q为流体每秒的流量，单位为cm/s；w为器件的栅宽，h为微流室内壁高度。通过调节泵的每秒流量，即可得所需的剪切力。
附图说明
具体实施方式
（viscosity），单位为g/(cm·s)；Q为流体每秒的流量，单位为cm/s；w为器件的栅宽，h为微流室高度。通过调节泵的每秒流量，即可得所需的剪切力。
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