专利汇可以提供检测骨桥蛋白的电化学传感器及其构建方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 利用一种检测骨桥蛋白的电化学 传感器 及其构建方法。该传感器为三 电极 体系,铂丝电极作为 对电极 、饱和甘汞电极作为参比电极、修饰后金电极作为 工作电极 ,葡聚糖胺作为一种常见的三维材料连接剂具有如下两大优势:(1)减少 蛋白质 变性和非特异性结合,(2)葡聚糖胺的 氨 基与 抗体 定向多肽相连形成的复合三维传感界面具有较好的抗体绑定能 力 和较多的固 定位 点。本发明结合电化学技术和复合三维材料的优势,制备出一种新型的电化学 生物 传感器 ,实现了对骨桥蛋白高特异性定量检测。,下面是检测骨桥蛋白的电化学传感器及其构建方法专利的具体信息内容。
1.一种检测骨桥蛋白的电化学传感器,三电极体系,铂丝电极作为对电极、饱和甘汞电极作为参比电极、修饰后金电极作为工作电极,其特征在于所述的修饰后金电极具有三维结构,先通过金巯键在金电极表面修饰ω-巯基十一酸(MUA)与6-巯基己醇(MCH),再利用氨基与羧基的交联反应连接三维材料葡聚糖胺,短肽的羧基与葡聚糖胺的氨基相连,骨桥蛋白抗体通过Fc末端与短肽相连,即得到修饰后金电极;所述的短肽的序列为:
Acetylated-HWRGWVA。
2.一种构建根据权利要求1所述的检测骨桥蛋白的电化学传感器的方法,其特征在于传感器的构建方法为:
a. 三维构型基底的形成:
a-1. 将处理好的金电极浸泡在ω-巯基十一酸(MUA)与6-巯基己醇(MCH)的混合溶液中过夜;然后分别用无水乙醇和超纯水冲洗干净并吹干待用
a-2. 将步骤a-1所得金电极在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐 (EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 的混合液中浸泡20分钟,再将该金电极放在浓度为
0.1mg/mL的葡聚糖胺溶液中孵育30分钟;最后用乙醇胺进行封板;
a-3. 向步骤a-2所得的金电极浸没在0.5mg/mL短肽的溶液中,反应12-15小时;即形成传感器的三维构型基底;
b. 将步骤a所得金电极浸没在 10 µg/mL的骨桥蛋白抗体溶液中共同孵育2 h,以固定Anti-OPN,最终得到修饰后金电极;
c. 将步骤b所得修饰后金电极与铂丝电极和饱和甘汞电极一起构成三电极传感器,即为检测骨桥蛋白的电化学传感器。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于所述的步骤a-1的金电极的处理方法具体为:用超纯水将金电极充分冲洗至洁净状态,并吹干;然后,分别用3000、5000目的砂纸打磨,并依次在含有不同粒度l μm, 0.3 μm, 0.05 μm 的氧化铝砂浆中抛光电极,直至电极表面呈镜面无痕状,用超纯水和乙醇冲洗干净后,然后,向电极表面滴加20 µL piranha,即98% H2SO4: 30% H2O2=3: 1 溶液;5分钟后用超纯水清洗干净;最后,将电极放入0.5 M H2SO4中,用循环伏安法扫描 (0 V - +1.6V) 至信号稳定),用超纯水冲洗干净、氮气吹干后待用。
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