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基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法

阅读:1020发布:2020-08-09

专利汇可以提供基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种基于大功率LED 亮度 自适应照明的显微成像装置和测量方法,该装置包括:计算机、LED控 制模 块 、LED阵列、载物台、显微物镜、镜筒透镜、光学探测器。所述LED阵列上的LED单元依次对载物台上的待测样品进行照明,照明光穿过样品形成衍射光经过显微物镜和镜筒透镜收集后照射在光学探测器的成像平面上,并记录该低 分辨率 光强图像。利用 迭代 重建 算法 就可以实现样品高分辨率复振幅的快速恢复,通过提高LED功率以及对LED 光源 进行多模态分解可以有效提高显微成像 质量 和成像 精度 ,适用于材料科学和 生物 医学领域多种样品的光学显微成像,具有广阔的应用前景。,下面是基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法专利的具体信息内容。

1.一种基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,包括:计算机(1)、LED控制模(2)、LED阵列(3)、载物台(4)、显微物镜(5)、镜筒透镜(6)、光学探测器(7);
所述计算机(1)的输入端与光学探测器(7)的输出端相连,所述计算机(1)的输出端通过串行通信接口与LED控制模块(2)的输入端相连接,LED控制模块(2)的输出端与所述LED阵列(3)的输入端相连,所述LED阵列(3)的中心处于显微镜的光轴上;所述显微物镜(5)的后焦面与镜筒透镜(6)的前焦面相重叠,所述光学探测器(7)的成像平面与镜筒透镜(6)的后焦面相重叠,成像时将待测样品放置于载物台(4)上,并调整位置使样品处于显微物镜(5)的前焦平面处,构成光学相干成像系统。
2.根据权利要求1所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,其特征在于,所述LED控制模块(2)包括单片机开发板(8)、开关电源电路(9)、LED驱动芯片(14)、译码继电器(15)和负载电阻(16);
所述单片机开发板(8)的输入端通过USB接口与计算机(1)的输出端相连接并接受供电;所述单片机开发板(8)通过模拟信号I/O接口与LED驱动芯片(14)的信号输入端相连;所述单片机开发板(8)的Vin端与LED驱动芯片(14)的信号使能端EN相连;所述单片机开发板(8)的GND地端与LED驱动芯片(14)的GND地端相连;所述单片机开发板(8)通过数字信号I/O接口与译码继电器(15)的信号输入端相连;所述开关电源电路(9)的开关控制端与LED驱动芯片(14)相连;所述开关电源电路(9)的电流输出端与译码继电器(15)的电流输入端相连;
所述LED阵列(3)的电流输入端通过多路导线与译码继电器(15)的输出端相连;所述LED阵列(3)的电流输出端通过负载电阻(16)与LED驱动芯片(14)相连。
3.根据权利要求1或2所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,其特征在于,所述LED阵列(3)包含若干LED单元(17)和两个插针连接器(18),所有相邻LED单元(17)的间距均相等,构成M x N的LED矩阵;所述LED阵列(3)中第i行第j列的LED单元(17)被点亮后,发出照明光照射在位于载物台(4)上的待测样品上,透过待测样品的衍射光被显微物镜(5)和镜筒透镜(6)进行收集和汇聚,最终照射在光学探测器(7)的成像平面上,形成待测样品的原始显微成像,由计算机(1)保存并通过迭代算法重建样品的高分辨率复振幅。
4.根据权利要求1或2所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,其特征在于,所述开关电源电路(9)包括开关电感(10)、场效应MOS管(11)、肖特基二极管(12)、输出电容(13);
所述开关电感(10)的输出端与场效应MOS管(11)的漏极d相连;所述开关电感(10)的输出端与肖特基二极管(12)的正极相连;所述场效应MOS管(11)的源极s与GND地端相连;所述场效应MOS管(11)的栅极g与所述LED驱动芯片(14)相连;所述肖特基二极管(12)的负极与输出电容(13)的输入端相连;所述肖特基二极管(12)的负极与所述译码继电器(15)的电流输入端相连;所述输出电容(13)的输出端与GND地端相连。
5.根据权利要求1或2所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,其特征在于,所述负载电阻(16)的电阻值Ri由开关电源电路(9)的输出电压VOUT、LED工作电压VLED(i,j)及LED工作电流Ii所决定,其计算公式为 其中i和j分别为LED单元(17)的行列位置编号。
6.一种利用权利要求1-5任一所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,配置LED阵列(3)照明参数,并启动LED控制模块(2);
步骤2,显微成像原始图像采集:以LED阵列(3)作为显微成像系统的光源进行照明,依次点亮LED阵列(3)上的LED单元(17),第i行第j列的LED单元(17)发出照明光照射在位于载物台(4)上的待测样品上,照明光穿过样品后经显微物镜(5)和镜筒透镜(6)进行收集和汇聚,最终由光学探测器(7)进行采集,并由计算机(1)进行记录保存;
步骤3,通过在计算机(1)中进行迭代计算实现样品高分辨率复振幅的重建。
7.根据权利要求6所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤1中,具体包括以下步骤:
1.1)定义LED阵列(3)光源形状:根据成像需要选择LED光源形状为环状、圆状或矩形,并将光源形状参数输入计算机(1)的图形化操作界面;
1.2)根据输入的LED光源形状参数计算需要点亮的LED单元(17)参数,包括需要点亮的LED单元(17)的位置、顺序、频率及亮度分布等信息,并保存至计算机(1)程序内存,然后将该信息以数值数组的形式按照既定频率依次写入计算机(1)串行通信接口并保存,等待下位机读取;
1.3)单片机开发板(8)从串行通信接口持续读取数组数据,并对数组数据进行拆分解码,识别得到LED单元(17)坐标、亮度和照明频率信息后,并写入单片机开发板(8)的I/O端口,等待下位机读取;
1.4)译码继电器(15)从单片机开发板(8)的数字I/O口读取列坐标信号;LED驱动芯片(14)从单片机开发板(8)的模拟I/O口读取行坐标信号和亮度值;
1.5)开关电源电路(9)导通,LED驱动电路启动,电流从开关电源电路(9)的输入端流入,经过开关电源进行稳流,再经过译码继电器(15)进行列选通,流经LED阵列(3)到达LED驱动芯片(14)的反馈端进行行选通,并根据PWM信号调整单通道的电流值以调节LED单元(17)亮度。
8.根据权利要求6所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3中,具体包括以下计算过程:
3.1)在频域中生成待测样品的高分辨率初始猜测O0(u,v)和显微物镜(5)光瞳函数的初始猜测P(u,v),采用照明光垂直入射时光学探测器(7)记录的低分辨率图像作为待测样品的高分辨率初始光强,将相位初始化为零;
3.2)对LED单元(17)进行多模态分解,将每个LED单元(17)分解为若干个位置不同且互不相干的子模态,并用分解后的若干个子模态替代原始的LED照明光同时进行照明和光场传播;
3.3)计算各模态的低分辨率像面复振幅,对应每个子模态的入射,利用显微物镜(5)的光瞳函数截取样品初始高分辨率频谱中某子孔径内的频谱信息,并通过逆傅里叶变换传播到像面,生成各模态所对应的低分辨率像面复振幅;
3.4)更新各模态对应的像面复振幅,计算各模态同时照明时成像平面的光强总值,基于各模态对应的像面强度值和光强总值的比例,利用光学探测器(7)记录到的低分辨率光强图像对各模态的低分辨率像面复振幅进行更新;
3.5)更新样品的高分辨率频谱和显微物镜(5)的光瞳孔径函数,计算像面复振幅更新前后各模态所对应的低分辨率频谱差值,并基于频谱差值对各模态对应的样品高分辨率频谱中的频谱子孔径进行更新,同时对显微物镜(5)的光瞳孔径函数进行更新;
3.6)重复计算步骤3.1)至步骤3.5),直到完成所有照明角度所对应的物体高分辨率频谱中子孔径频谱的更新。然后重复迭代以上过程,直到物体的高分辨率频谱收敛,对重建得到的高分辨率频谱作逆傅里叶变换,得到物体的高分辨率复振幅。
9.根据权利要求7所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤1.1)中:
当选择LED光源形状为矩形时,需要在计算机(1)中输入矩形的长度m、宽度n以及中心坐标(a,b)。输入值m和n的取值范围为:0<m,n<length,其中length为LED阵列(3)的边长值;输入值a和b的取值范围为:m/2<a<length-m/2,n/2<b<length-n/2;
当选择LED光源形状为圆形时,需要在计算机(1)中输入圆形的半径r和圆心坐标(a,b),输入值r的取值范围为:0<r<length/2,输入值a和b的取值范围为:r<a,b<length-r;
当选择LED光源形状为环形时,需要在计算机(1)中输入环形内径r1、环形外径r2和圆心坐标(a,b),输入值r1和r2的取值范围为:0<r1<r2≤length/2;输入值a和b的取值范围为:r2<a,b<length-r2。
10.根据权利要求7所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤1.2)中,
计算需要点亮的LED单元(17)位置编号,具体过程如下:
假设LED阵列(3)的边长为length,第一个LED单元(17)的坐标为(x0,y0),相邻两个LED单元(17)之间的间距为d;需要点亮的LED单元(17)位置坐标为(x,y),位置编号为(i,j),其中i为行编号,j为列编号;
当选择LED光源形状为矩形时,需要点亮的LED单元(17)坐标范围为:a-m/2≤x≤a+m/2,b-n/
2≤y≤b+n/2。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元(17)行列编号:
为向下取整符号;
当选择LED光源形状为圆形时,需要点亮的LED单元(17)坐标范围为:(x-a)2+(y-b)2≤
2
r。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元(17)行列编号: 其中 i′和j′
分别是圆域中心LED单元(17)的行编号与列编号;
当选择LED光源形状为环形时,需要点亮的LED单元(17)坐标范围为:r12≤(x-a)2+(y-b)2≤r22。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元(17)行列编号: 其中
i′和j′分别是环域中心LED单元(17)的行编号与列编号;
计算需要点亮的LED单元(17)亮度值,具体过程如下:
假设LED单元(17)亮度值为lightness,设置中心LED单元(17)亮度为127,边缘LED单元(17)亮度为255;其余LED单元(17)亮度以距中心LED单元(17)的距离为标准,在[127,255]整数范围内进行线性取值;
当选择LED光源形状为矩形时,位置坐标为(x,y)的LED单元(17)亮度值为:
其中max{...}为取括号中的最大值, 为向下取
整符号;
当选择LED光源形状为圆形时,位置坐标为(x,y)的LED单元(17)亮度值为:
当选择LED光源形状为环形时,位置坐标为(x,y)的LED单元(17)亮度值为:
当LED单元(17)参数信息计算完毕后,生成一个四位的一维数组comdata[4],其数据格式为整型int,并对该数组进行赋值处理,令
comdata[0]=lightness,表示LED单元(17)的亮度值;
comdata[1]=delay,表示LED单元(17)照明间隔;
comdata[2]=i,表示LED单元(17)行编号;
comdata[3]=j,表示LED单元(17)列编号;
其中delay为人为设置的LED单元(17)照明时间间隔;
赋值完毕后将该数值数组comdata[4]按照既定的串口通信频率依次写入计算机(1)的串行通信接口并保存,等待下位机读取。
11.根据权利要求7所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤1.3)中:
首先在单片机中生成行端口数组RowPin[M]和列端口数组ColPin[N],其中M为LED阵列(13)中LED单元(17)的行个数,N为译码继电器(15)信号输入端的端口数。然后给行端口数组与列端口数组进行赋值,以建立行列信号与单片机开发板(8)I/O端口之间的一一映射,令RowPin[M]={...},RowPin[0]至RowPin[M]依次为单片机开发板(8)模拟输出端口程序编号;令ColPin[N]={...},ColPin[0]至ColPin[N]依次为单片机开发板(8)数字输出端口程序编号;
当单片机接收到来自计算机(1)的串口通信状态为真值true时,读取串口传输的数组comdata[4],并对该数组进行拆分读取,识别得到LED单元(17)的亮度lightness、照明频率f和行列编号(i,j)。同时,在单片机中生成行信号数组row[M]和列信号数组column[N],在一个LED单元(17)的点亮周期内,对两个信号数组进行赋值输入;
行信号赋值:将程序编号为RowPin[i]的模拟输出端口赋值为lightness,即令row[RowPin[i]]=lightness,行信号数组row[M]的其他元素赋值为0;
列信号赋值:通过进制转换将十进制列编号j转换为N位二进制数字,并赋值给列数组column[N],即令column[N]=j(2),其中j(2)为十进制数j的N位二进制表示。然后依次将程序编号为ColPin[N]的数字输出端口赋值为column[N];
设置赋值等待时间为delay,令 在等待时间内,下位机通过接入单片机开发板(8)的I/O端口进行数据读取操作,等待时间过后,结束本阶段的赋值操作,进入下一个LED单元(17)的点亮周期。
12.根据权利要求7所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤1.4)中,列选通与行选通的具体实现过程如下:
列选通:译码继电器(15)计算得到列选通信号j后,通过继电器控制被选中的第j列电路导通,其余通道关断,只有第j列LED单元(17)有电流输入,即实现了列选通;
行选通:LED驱动芯片(14)的PWM输入端接收到来自单片机开发板(8)的行选通信号后,根据各路PWM输入参数,调节负载反馈端各通道的电流大小,未被选中的通道电路被关断,被选通的第i行电流值则调整为 其中VLED为LED单元(17)的导通压降,
Vout为开关电源输出电压,Ri为第i行的负载电阻(16)阻值。
13.根据权利要求8所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3.1)中,显微物镜(5)光瞳函数P(u,v)的初始猜测为:
其中u和v为光场频域坐标;f0为显微物镜(5)的截止频率。
14.根据权利要求8所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3.2)中,LED单元(17)中各个子模态对应的样品频谱孔径中心坐标 的计算公式如下:
其中x和y分别为第i行第j列LED单元(17)的平面横坐标与平面纵坐标;Δxs和Δys分别为第s个子模态与该LED单元(17)中心的横向距离与纵向距离;h表示LED阵列(3)与样品间的垂直距离;λ表示LED照明光波长
15.根据权利要求8所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3.3)中,第s个子模态对应的样品低分辨率频谱为计算公式为:
其中上标k表示第k次迭代;(i,j)表示该LED单元(17)的行列坐标;s表示第s个子模态;
表示样品的高分辨率频谱子孔径;
然后对低分辨率频谱作逆傅里叶变换,得到各个子模态对应的低分辨率像面复振幅即 表示逆傅里叶变换。
16.根据权利要求8所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3.4)中,各个子模态对应的像面复振幅更新公式如下:
首先计算各模态同时照明时成像平面的光强总值 计算公式为:
式中|...|表示求二维复数矩阵的模;
然后基于各模态对应的像面强度值和光强总值的比例,利用光学探测器(7)记录到的低分辨率光强图像对各模态的低分辨率像面复振幅进行更新,计算公式为:
其中 为各模态更新后的低分辨率像面复振幅, 为第i行第j列LED单
元(17)照明样品时光学探测器(7)记录到的光强图像。
17.根据权利要求8所述的基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置进行的显微成像测量方法,其特征在于步骤3.5)中,像面复振幅更新前后各模态所对应的的低分辨率频谱差值 的计算公式为:
式中 表示作傅里叶变换;
基于该频谱差值对各模态对应的高分辨率频谱中的频谱子孔径进行更新的计算公式为:
式中 表示更新后的样品高分辨率频谱子孔径;上标*表示求该函数
的共轭函数;|...|max表示求二维复数矩阵的模的最大值, 表示样品更新前的高分辨率频谱子孔径;
显微物镜(5)光瞳函数的更新公式为:
式中P′k(u,v)表示更新后的显微物镜(5)光瞳函数。

说明书全文

基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法

技术领域

[0001] 本发明涉及定量相位测量及光学显微成像领域,特别是一种基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法。

背景技术

[0002] 传统的光学显微成像技术主要基于透镜成像原理,通过透镜组实现待测样品的局部显微成像,由于物镜数值孔径的限制,提高物镜的成像分辨率的同时会降低成像视场大小,二者相互制约、难以平衡。为解决这一矛盾,常规显微镜系统主要采用精密电动平台进行大范围空域扫描,并采用软件将连续视野区域的图像进行图像拼接融合。然而该方法依赖于高精度的机械扫描部件,增加系统成本的同时不可避免的引入了机械误差,影响显微成像质量。此外,光学探测器仅能记录得到光束的强度信息,而由样品三维形貌和折射率系数所决定的相位信息却在传播和记录的过程中丢失,因此如何获得精准的定量相位成像也成为了显微成像领域的重要命题。随着ptychography iterative engine(PIE)相位恢复迭代算法的提出以及其在频域中的应用,光学显微镜已经能够利用LED阵列照明及相位恢复算法得到兼具高分辨和大视场的定量相位成像。但是传统的频域PIE显微成像技术仍然存在部分问题,适用于显微成像照明的LED阵列所采用的LED单元功率普遍较小,亮度较低,大度照明时经过物镜光瞳函数约束后的高频信号太弱,导致暗场信息丢失,通过频域PIE方法恢复得到的图像分辨率下降;其次LED单元亮度不能独立调节,既不能校正不同LED单元亮度之间的随机偏差,又容易造成中心区域LED照明时采集的图像过曝;此外采用LED阵列照明的核心问题是,LED光源空间相干性较差,发出的照明光属于部分相干光,而频域PIE相位恢复算法是基于相干成像系统进行测量,因此会在相位恢复的过程中引入成像误差,降低显微成像系统的分辨率和成像质量。
[0003] 综上,提高LED阵列照明功率,实现LED单元亮度自适应调节,并通过算法校正LED光源的弱相干性引入的重建误差,成为显微成像领域实现定量相位测量所面临的新挑战,需要采用新的LED照明装置和相位恢复算法来推动光学显微技术的变革。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法,通过采用大功率LED驱动照明以及LED光源亮度分布的任意调节,增强了显微成像光场传播过程中的高频信号,提高了光学探测器采集的暗场图像质量,并通过多模态分解对LED照明光进行算法校正,消除了由于LED空间相干性较差而引入的成像误差,适用于材料科学和生物医学等领域多种样品的定量显微成像。
[0005] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
[0006] 一种基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置,包括:计算机、LED控制模、LED阵列、载物台、显微物镜、镜筒透镜、光学探测器,所述LED控制模块包括单片机开发板、开关电源电路、LED驱动芯片、译码继电器、负载电阻;所述计算机的输出端通过串行通信接口与LED控制模块输入端相连接;所述单片机开发板通过模拟信号I/O接口与LED驱动芯片的输入端相连,所述单片机开发板通过数字信号I/O接口与译码继电器的输入端相连;所述开关电源电路的电流输出端与译码继电器相连;所述LED阵列的电流输入端通过多路导线与译码继电器的输出端相连,所述LED阵列的电流输出端通过负载电阻与LED驱动芯片相连;所述光学探测器的输出端与计算机的输入端相连;所述LED阵列的中心处于显微镜的光轴上;所述显微物镜的后焦面与镜筒透镜的前焦面相重叠,所述光学探测器的成像平面与镜筒透镜的后焦面相重叠,成像时,将待测样品放置于载物台上,并调整位置使样品处于显微物镜的前焦平面处,构成光学相干成像系统。
[0007] 所述LED阵列上第i行j列的LED单元发出的光照射在位于载物台上的待测样品上,照明光透过待测样品形成衍射光被显微物镜收集,然后经过镜筒透镜汇聚重新变为平行光,照射在光学探测器的成像平面上,得到的光强分布经由光学探测器记录并保存至计算机。
[0008] 一种基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像测量方法,其步骤如下:
[0009] i.配置LED阵列照明参数并启动LED控制模块,步骤如下:
[0010] a)定义LED阵列光源形状,根据成像需要选择LED光源形状为环状、圆状或矩形,并将具体的形状参数输入计算机的图形化操作界面。
[0011] b)根据输入的LED光源形状参数计算需要点亮的LED单元参数,包括需要点亮的LED单元的位置、顺序、频率及亮度分布等信息,并保存至计算机程序内存,然后将该信息以数值数组的形式按照既定频率依次写入计算机串行通信接口并保存,等待下位机读取。
[0012] c)单片机开发板从串行通信接口持续读取数组数据,并对数组数据进行拆分解码,识别得到LED单元坐标、亮度和照明频率等信息后,将其写入单片机开发板的I/O端口,等待下位机读取。
[0013] d)译码继电器从单片机开发板的数字I/O口读取列坐标信号;LED驱动芯片从单片机开发板的模拟I/O口读取行坐标信号和亮度值。
[0014] e)开关电源电路导通,LED驱动电路启动,电流从开关电源电路的输入端流入,经过开关电源进行稳流,再经过译码继电器进行列选通,流经LED阵列到达LED驱动芯片的反馈端进行行选通,并根据PWM信号调整单通道的电流值以调节LED单元亮度。
[0015] ii.显微成像原始图像采集,以LED阵列作为显微成像系统的光源进行照明,依次点亮LED阵列上的LED单元,第i行第j列的LED单元发出照明光照射在位于载物台上的待测样品上,照明光穿过样品后经显微物镜和镜筒透镜进行收集和汇聚,最终由光学探测器进行采集,并由计算机进行记录保存;
[0016] iii.通过计算机迭代运算实现波前再现的具体步骤
[0017] a)首先在频域中生成待测样品的高分辨率初始猜测O0(u,v)和物镜光瞳函数的初始猜测P(u,v),通常采用照明光垂直入射时光学探测器记录的低分辨率图像作为待测样品的高分辨率初始光强,将相位初始化为零。
[0018] b)对LED单元进行多模态分解,将每个LED单元分解为若干个位置不同且互不相干的子模态,并用分解后的若干个子模态替代原始的LED照明光同时进行照明和光场传播。
[0019] c)计算各模态的低分辨率像面复振幅,对应每个子模态的入射角,利用显微物镜的光瞳函数截取样品初始高分辨率频谱中某子孔径内的频谱信息,并通过逆傅里叶变换传播到像面,生成各模态所对应的低分辨率像面复振幅。
[0020] d)更新各模态对应的像面复振幅,计算各模态同时照明时成像平面的光强总值,基于各模态对应的像面强度值和光强总值的比例,利用光学探测器记录到的低分辨率光强图像对各模态的低分辨率像面复振幅进行更新。
[0021] e)更新样品的高分辨率频谱和显微物镜的光瞳孔径函数,计算像面复振幅更新前后各模态所对应的低分辨率频谱差值,并基于频谱差值对各模态对应的样品高分辨率频谱中的频谱子孔径进行更新,同时对显微物镜的光瞳孔径函数进行更新。
[0022] f)重复计算步骤a至步骤e,直到完成所有照明角度所对应的物体高分辨率频谱中子孔径频谱的更新。然后重复迭代以上过程,直到物体的高分辨率频谱收敛,对重建得到的高分辨率频谱作逆傅里叶变换,得到物体的高分辨率复振幅。
[0023] 本发明的技术效果:
[0024] 1)本装置结构简单,环境要求低,不依赖于精密的机械平移台,降低了装置成本并且避免了机械误差;发明中提出的相位恢复算法能够突破显微物镜数值孔径的限制,在扩大视场的同时提高显微成像分辨率,实现精确的定量相位测量。
[0025] 2)本发明相比其他采用相位恢复算法的光学显微成像装置,大幅提高了LED单元的照明光功率,并能够根据成像需要任意调节单个LED单元亮度,显著增加了LED单元大角度照明时得到的高频信息,提高了光学探测器采集图像的精准度和频域PIE显微成像方法的成像质量。
[0026] 3)本发明通过对单个LED单元进行多模态分解,计算拟合更接近真实的LED照明光分布,有效降低了LED光源弱相干性的影响,显著提高了成像精度,恢复得到的高分辨率复振幅图像更加接近真实样品。
[0027] 下面结合附图对本发明作进一步详细描述。

附图说明

[0028] 图1是基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置示意图。
[0029] 图2是LED控制模块组件结构示意图。
[0030] 图3是LED阵列电路结构示意图。
[0031] 图4是本发明基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像测量方法流程示意图。
[0032] 图5是大功率LED阵列驱动控制的流程示意图。
[0033] 图6是LED单元平面坐标图。
[0034] 图7是LED单元多模态分解原理图。
[0035] 1、计算机,2、LED控制模块,3、LED阵列,4、载物台,5、显微物镜,6、镜筒透镜,7、光学探测器,8、单片机开发板,9、开关电源电路,10、开关电感,11、场效应MOS管,12、肖特基二极管,13、输出电容,14、LED驱动芯片,15、译码继电器,16、负载电阻,17、LED单元,18、插针连接器。

具体实施方式

[0036] 参见图1,本发明基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法是基于以LED阵列为照明光源的显微镜搭建的,包括计算机1,该计算机1将照明控制指令传输给LED控制模块2,该LED控制模块2驱动控制LED阵列3进行照明,沿着照明光的方向依次是LED阵列3、载物台4、显微物镜5、镜筒透镜6、光学探测器7。所述LED阵列3的中心处于显微镜的光轴上;所述显微物镜5的后焦面与镜筒透镜6的前焦面相重叠,所述光学探测器7的成像平面与镜筒透镜6的后焦面相重叠,成像时将待测样品放置于载物台4上,并调整位置使样品处于显微物镜5的前焦平面处,构成光学相干成像系统。
[0037] 所述计算机1的输出端通过串行通信接口与LED控制模块2输入端相连接。
[0038] 参见图2,所述LED控制模块2包括单片机开发板8、开关电源电路9、LED驱动芯片14、译码继电器15、负载电阻16;所述计算机1的输出端通过串行通信接口与单片机开发板8的输入端相连接,串行通信接口的通信波特率设置为9600。本实施例中所述单片机开发板8采用基于ATmega328的Arduino uno R3开发板,该开发板含有14个I/O端口,包含8个数字端口和6个PWM模拟端口。
[0039] 所述单片机开发板8通过USB接口与计算机1连接并接受供电,输入电压值为5V。该Arduino开发板的存储空间由其主控芯片集成的内部存储空间构成,包括Flash、SRAM和EEPROM。所述Flash容量为32KB,其中0.5KB作为BOOT区用于储存引导程序,实现通过串口下载主控程序的功能;另外31.5KB用于储存串口信息识别程序和LED驱动控制程序。所述SRAM容量为2KB,作为MCU内存,当MCU进行运算工作时临时占用其中的存储空间。所述EEPROM容量为1KB,是可编程只读存储器,在Arduino断电或复位时,其中的数据不会丢失。
[0040] 所述开关电源电路9包括开关电感10、场效应MOS管11、肖特基二极管12、输出电容13。所述开关电源电路9的输出电流IouT等于各通道工作电流之和,即IOUT=∑iIi,其中Ii是从IFB1到IFBM各通道工作电流。所述开关电源电路9的输出电压VOUT由输入电压VIN和场效应MOS管11的导通比D决定,计算公式为
[0041] 所述开关电感10的工作电流IL由输入电压VIN、输出电压VOUT及输出电流IOUT所决定,其计算公式为 其中η为电路能量转换效率。
[0042] 所述场效应MOS管11的工作电流IQ由输出电流IOUT和开关导通比D决定,其计算公式为 场效应MOS管11的工作电压VQ与输出电压VOUT相等。
[0043] 所述输出电容13的电容值COUT处于22μF~220μF之间,具体由输出电流IOUT、开关导通比D、纹波电压VRIPPLE及升压开关频率fSW所决定,其计算公式为:
[0044]
[0045] 本实施例中,所述LED驱动芯片14采用TPS61196-Q1芯片,该芯片在本实施例中选用的各项电路参数如下表所示:
[0046]
[0047]
[0048] 所述LED驱动芯片14基于开关电源电路9进行驱动,包含六路灌电流通路,均可进行独立的PWM电流调节,每一路均可在50mA至500mA内进行调节,而PWM信号输入端则可以在0至5V的范围内进行驱动控制,最多可承担300W的电路总负载,足以支持本发明基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法所需的照明功率。所述LED驱动芯片14的六路PWM信号输入端与单片机开发板8的六路PWM模拟I/O端口相连,LED驱动芯片14的信号使能端EN与单片机开发板8的Vin端相连,LED驱动芯片14的地端GND与单片机开发板8的GND相连;所述LED驱动芯片14的电流反馈端与开关电源电路9中场效应MOS管11的栅极g相连。
[0049] 所述译码继电器15包含译码电路和继电器电路,本实施例中译码电路采用3线-8线译码器,继电器电路采用光耦隔离,所述译码继电器15的具体参数如下表所示:
[0050]
[0051]
[0052] 所述译码继电器15的三个信号输入端与单片机开发板8的数字I/O端口相连,译码继电器15的电流输入端与开关电源电路9中肖特基二极管12的负极相连。
[0053] 所述负载电阻16的电阻值Ri由开关电源电路9的输出电压VOUT、LED工作电压VLED(i,j)及LED工作电流Ii所决定,其计算公式为 其中i和j分别为LED单元的行列坐标号。在本实施例中,所有负载电阻16的电阻值均为150Ω,额定功率均为25W。
[0054] 参见图3,所述LED阵列3包含若干LED单元17和两个插针连接器18,所有LED单元17均等距排列构成M x N的LED矩阵。本实施例中,所述LED阵列3共包含6行6列共计36个LED单元17,每两个相邻LED单元17的行列间距均为11.14mm;所有LED单元17均采用红光LED,其典型波长为625nm,额定功率为1W~3W;所有LED单元17采用网状电路排列,选通第j列为通路,选通第i行为高电平,即可点亮第i行第j列的LED单元17,该LED单元17的亮度取决于第i行通路的电流值。所述插针连接器18采用6排插拔式连接器,插针间距为2.54mm。本实施例中所采用的LED阵列3的具体参数如下表所示:
[0055]
[0056]
[0057] 所述LED阵列3的六路电流输入端与译码继电器15的电流输出端相连,LED阵列3的六路电流输出端通过负载电阻16与LED驱动芯片14的反馈输入端相连。
[0058] 所述LED阵列3中第i行第j列的LED单元17被点亮后,发出红色照明光照射在位于载物台4上的待测样品上,透过待测样品的衍射光被显微物镜5和镜筒透镜6进行收集和汇聚,最终照射在光学探测器7的成像平面上,形成待测样品的原始显微成像,由计算机1保存并进行下一步的相位恢复算法处理。
[0059] 本实施例中,所述显微物镜5采用10倍放大、数值孔径为0.25的显微物镜。所述光学探测器7的输出端通过标准C口与计算机1的输入端相连;所述光学探测器7采用单色CCD相机,其分辨率为1600 x 1200,像元尺寸为5.5μm,速为25fps,可以记录单色LED照明下的待测样品黑白图像,并传输至计算机1进行实时成像。
[0060] 参见图4,本发明基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像测量方法,其步骤如下:
[0061] i.参见图5,配置LED阵列照明参数并启动LED控制模块2,步骤如下:
[0062] a)定义LED阵列光源形状,根据成像需要选择LED光源形状为矩形、圆形或环形,并将具体的形状参数输入计算机的图形化操作界面。首先在计算机中建立参数计算的坐标系,参见图6,以LED阵列的左下角顶点为坐标原点,以下边界为x轴,向右为x轴正方向,以左边界为y轴,向上为y轴正方向,建立平面直角坐标系。该直角坐标系的单位长度为1mm,x轴与y轴的满刻度值均为length,length为LED阵列的边长值。假设第一个LED单元的中心坐标为(x0,y0),相邻两个LED单元之间的间距为d。
[0063] 当选择LED光源形状为矩形时,需要在计算机中输入矩形的长度m、宽度n以及中心坐标(a,b)。输入值m和n的取值范围为:0<m,n<length,其中length为LED阵列的边长值;输入值a和b的取值范围为:m/2<a<length-m/2,n/2<b<length-n/2。
[0064] 当选择LED光源形状为圆形时,需要在计算机中输入圆形的半径r和圆心坐标(a,b),输入值r的取值范围为:0<r<length/2,其中length为LED阵列的边长值;输入值a和b的取值范围为:r<a,b
[0065] b)根据输入的LED光源形状参数计算需要点亮的LED单元参数,首先计算需要点亮的LED单元位置编号,假设需要点亮的LED单元位置坐标为(x,y),位置编号为(i,j),其中i为行编号,j为列编号。
[0066] 当选择LED光源形状为矩形时,需要点亮的LED单元坐标范围为:a-m/2≤x≤a+m/2,b-n/2≤y≤b+n/2,其中x和y分别为LED单元横坐标与纵坐标。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元行列编号:
为向下取整符号,为了保
证矩形域边界的近似度,式中对LED单元行列编号做了四舍五入取整处理。
[0067] 当选择LED光源形状为圆形时,需要点亮的LED单元坐标范围为:(x-a)2+(y-b)2≤r2,其中x和y分别为LED单元横坐标与纵坐标。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元行列编号: 其中i′和j′分别是圆域中心LED单元的行编号与列编号,为
了保证圆域边界的近似度,式中对LED单元行列编号做了四舍五入取整处理。
[0068] 当选择LED光源形状为环形时,需要点亮的LED单元坐标范围为:r12≤(x-a)2+(y-b)2≤r22,其中x和y分别为LED单元横坐标与纵坐标。对求得的坐标范围做取整处理,并根据取整后的坐标范围计算需要点亮的LED单元行列编号:其中 i′和j′分别是环域中心LED单元的行编号与列
编号,为了保证环域边界的近似度,式中对LED单元行列编号做了四舍五入取整处理。
[0069] 其次计算需要点亮的LED单元亮度值,为保证高频信息不丢失,由LED光源形状中心至边界,将LED单元亮度设置为自低向高的线性增长模式。本实施例中,根据所采用Arduino开发板的I/O数字端口8位输出,假设LED单元亮度值为lightness,设置中心LED单元亮度为127,边缘LED单元亮度为255;其余LED单元亮度以距中心LED单元的距离为标准,在[127,255]整数范围内进行线性取值。
[0070] 当选择LED光源形状为矩形时,位置坐标为(x,y)的LED单元亮度值为:其中max{...}为取括号中的最大值, 为向下取
整符号。
[0071] 当选择LED光源形状为圆形时,位置坐标为(x,y)的LED单元亮度值为:
[0072] 当选择LED光源形状为环形时,位置坐标为(x,y)的LED单元亮度值为:
[0073] 最后输入LED单元点亮频率f,单位为Hz,即每两个LED单元照明时间间隔为delay,单位为ms。
[0074] LED单元参数信息计算完毕后,生成一个四位的一维数组comdata[4],其数据格式为整型int,并对该数组进行赋值处理,令
[0075] comdata[0]=lightness,表示LED单元的亮度值
[0076] comdata[1]=delay,表示LED单元照明间隔
[0077] comdata[2]=i,表示LED单元行编号
[0078] comdata[3]=j,表示LED单元列编号
[0079] 赋值完毕后将该数值数组comdata[4]按照既定的串口通信频率依次写入计算机1的串行通信接口并保存,等待下位机读取。
[0080] c)单片机开发板8从串行通信接口持续读取数组数据,本实施例中,首先设置串行通信接口的通信波特率为9600,并设置串行通信接口更新数组数据的频率为f。在单片机中生成行端口数组RowPin[M]和列端口数组ColPin[N],其中M为LED阵列3中LED单元17的行个数,N为译码继电器15信号输入端的端口数。然后给行端口数组与列端口数组进行赋值,以建立行列信号与单片机开发板I/O端口之间的一一映射,令RowPin[M]={...},RowPin[0]至RowPin[M]依次为单片机开发板8模拟输出端口程序编号;令ColPin[N]={...},ColPin[0]至ColPin[N]依次为单片机开发板8数字输出端口程序编号。
[0081] 当单片机接收到来自计算机1的串口通信状态为真值true时,读取串口传输的数组comdata[4],并对该数组进行拆分读取,识别得到LED单元的亮度lightness、照明频率f和行列编号(i,j)。同时,在单片机中生成行信号数组row[M]和列信号数组column[N],在一个LED单元的点亮周期内,对两个信号数组进行赋值输入。
[0082] 行信号赋值:将程序编号为RowPin[i]的模拟输出端口赋值为lightness,即令row[RowPin[i]]=lightness,行信号数组row[M]的其他元素赋值为0。
[0083] 列信号赋值:通过进制转换将十进制列编号j转换为N位二进制数字,并赋值给列数组column[N],即令column[N]=j(2),其中j(2)为十进制数j的N位二进制表示。然后依次将程序编号为ColPin[N]的数字输出端口赋值为column[N]。
[0084] 设置赋值等待时间为delay,令 在等待时间内,下位机通过接入单片机的I/O端口进行数据读取操作,等待时间过后,结束本阶段的赋值操作,进入下一个LED单元的点亮周期。
[0085] d)在一个LED单元的点亮周期内,译码继电器15从单片机开发板8的数字I/O口读取列坐标信号,所述单片机开发板8通过数字输出端口将N位列信号数组column[N]中的数据传输到译码继电器15的输入端,然后译码继电器15通过进制转换将二进制数组column[N]译码为十进制数据j,j即LED阵列的列选通信号。
[0086] 同时,LED驱动芯片14从单片机开发板8的模拟I/O口读取行坐标信号和亮度值,所述单片机开发板8通过模拟输出端口将M位行信号数组row[M]中的数据传输到LED驱动芯片14的PWM输入端,该数组数据同时包含行选通信号及该LED单元的亮度值。
[0087] e)将开关电源电路9连通直流稳压电源,LED驱动电路启动,所述LED控制模块2正式开始工作,该直流稳压电源的输出电压值为30V,最大电流值为5A。开关电源电路9工作分为充电过程与放电过程。
[0088] 充电过程:当场效应MOS管11栅-源极间施加适当阈值的正向电压时,场效应MOS管11的漏极d与源极s导通,电流从直流稳压电源流出后流经开关电感10、场效应MOS管11,到达直流稳压电源负极。在这个过程中电感上的电流线性增加并储存能量,而肖特基二极管
12此时处于反偏截止状态,输出电容13依靠前一次放电过程储存的电能向输出端进行放电,维持负载工作。
[0089] 放电过程:当场效应MOS管11栅-源极间正向电压取消时,场效应MOS管11的漏极d与源极s间关断,电流从直流稳压电源流出后流经开关电感10、肖特基二极管12与输出电容13,到达直流稳压电源负极。在这个过程中,直流稳压电源和开关电感10共同为输出电容13充能,并向输出端进行放电,维持负载工作。
[0090] 充电与放电过程交替进行,并达到稳态,即在一个完整周期中,开关电感10在充电过程储存的电能应等于放电过程释放的电能。
[0091] 所述开关电源电路9的输出电压由输入电压和场效应MOS管11的导通比所决定:
[0092]
[0093] 式中VOUT是升压输出电压,VIN是升压输入电压,T是开关管工作全周期,TON是开关管导通时间,D是开关管导通比。
[0094] 所述开关电源电路9通过译码继电器15与LED驱动芯片14为LED阵列3进行供电,并经过列选通与行选通实现LED控制照明。
[0095] 列选通:译码继电器计算得到列选通信号j后,通过继电器控制被选中的第j列电路导通,其余通道关断,只有第j列LED单元有电流输入,即实现了列选通。
[0096] 行选通:LED驱动芯片14的PWM输入端接收到来自单片机开发板8的行选通信号后,根据各路PWM输入参数,调节负载反馈端各通道的电流大小,未被选中的通道电路被关断,被选通的第i行电流值则调整为 其中VLED为LED单元的导通压降,VOut为开关电源输出电压,Ri为第i行的负载电阻。
[0097] 开关电源电路9输出稳态电流后,经过译码继电器15的列选通作用向LED阵列3供电,并流经LED阵列3上的LED单元17,通过负载电阻16与LED驱动芯片14的负载反馈端相连,利用LED驱动芯片14的PWM控制实现行选通,构成完整的闭合LED驱动控制电路,能够实现大功率LED单元的单点控制与亮度自调节,满足本发明基于大功率LED亮度自适应照明的显微成像装置及测量方法的需要。
[0098] ii.显微成像原始图像采集,以成功驱动的LED阵列3作为显微成像系统的光源进行照明,按照既定顺序依次点亮LED阵列3上的LED单元17,LED单元17发出的照明光照射待测样品后经显微物镜5和镜筒透镜6进行放大成像,最终由光学探测器7进行采集,计算机1记录保存所有LED照明下的待测样品低分辨率原始图像
[0099] iii.通过计算机迭代运算实现波前再现的具体步骤
[0100] a)首先在频域中生成待测样品的高分辨率初始猜测O0(u,v)和物镜光瞳函数的初始猜测P(u,v),通常采用照明光垂直入射时光学探测器7记录的低分辨率图像的线性插值作为待测样品的高分辨率初始光强,将相位初始化为零。显微物镜光瞳函数P(u,v)的初始猜测为:
[0101]
[0102] 其中u和v为光场频域坐标,f0为显微物镜5的截止频率。
[0103] b)对LED单元进行多模态分解,将每个LED单元分解为若干个位置不同且互不相干的子模态,每个子模态相对样品的照明角度不同,因此各自对应的样品频谱孔径中心坐标也不同。假设第i行第j列LED单元的平面坐标为(x,y),其第s个子模态与该LED单元中心的距离为(Δxs,Δys),则该子模态对应的样品频谱孔径中心坐标为 计算公式如下:
[0104]
[0105] 其中h表示LED阵列与样品间的垂直距离,λ表示LED照明光波长。用分解后的若干个子模态替代原始的LED照明光同时对样品进行照明和光场传播,样品后的透射光场按照若干个子模态的叠加进行计算。c)计算各模态的低分辨率像面复振幅,对应每个子模态的入射角,利用显微物镜5的光瞳函数截取样品初始高分辨率频谱中某子孔径内的频谱信息,第s个子模态对应的截取后的样品低分辨率频谱为 其计算公式为:
[0106]
[0107] 其中上标k表示第k次迭代,(i,j)表示该LED单元的行列坐标,s表示第s个子模态。表示样品的高分辨率频谱子孔径。然后对低分辨率频谱作逆傅里叶变
换,得到各个子模态对应的低分辨率像面复振幅 即
表示逆傅里叶变换。
[0108] d)更新各模态对应的像面复振幅,计算各模态同时照明时成像平面的光强总值计算公式为:
[0109]
[0110] 式中|...|表示求二维复数矩阵的模;
[0111] 然后基于各模态对应的像面强度值和光强总值的比例,利用光学探测器7记录到的低分辨率光强图像对各模态的低分辨率像面复振幅进行更新,更新公式如下:
[0112]
[0113] 其中 为各模态更新后的低分辨率像面复振幅, 为第i行第j列LED照明时光学探测器7记录到的光强图像。
[0114] e)更新样品的高分辨率频谱和显微物镜5的光瞳函数,首先计算像面复振幅更新前后各模态所对应的的低分辨率频谱差值 其计算公式如下:
[0115]
[0116] 式中 表示作傅里叶变换。
[0117] 然后基于该频谱差值对各模态对应的高分辨率频谱中的频谱子孔径进行更新,更新公式为:
[0118]
[0119] 式中 表示更新后的样品高分辨率频谱子孔径;上标*表示求该函数的共轭函数;|...|max表示求二维复数矩阵的模的最大值;同时对物镜光瞳函数进行更新,更新公式为:
[0120]
[0121] P′k(u,v)表示更新后的显微物镜光瞳函数。
[0122] f)重复计算步骤a至步骤e,直到完成所有照明角度所对应的物体高分辨率频谱中子孔径频谱的更新。然后重复迭代以上过程,直到物体的高分辨率频谱O′k(u,v)收敛,对重建得到的高分辨率频谱作逆傅里叶变换,最终得到物体的高分辨率复振幅o′k(x,y),即
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