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一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法

阅读：151发布：2020-05-08

专利汇可以提供一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及免疫分析技术领域，特别涉及一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法。该冻干辅助制剂由非还原性二糖、甘氨酸、血清白蛋白、聚乙二醇和缓冲液组成；各组分含量为：非还原性二糖2wt％～20wt％；甘氨酸5～30mmol/L；血清白蛋白2wt％～10wt％；聚乙二醇0.5wt％～2wt％；缓冲液余量。本发明提供的促甲状腺激素受体冻干辅助制剂能有效辅助促甲状腺激素受体冻干，使促甲状腺激素受体冻干后形态稳定，冻干复溶效果好，不产生沉淀，生物活性不受影响。，下面是一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂，其特征在于，所述冻干辅助制剂由非还原性二糖、甘氨酸、血清白蛋白、聚乙二醇和缓冲液组成；各组分含量为：
2.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述冻干辅助制剂中各组分含量为：
3.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述冻干辅助制剂中各组分含量为：
4.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述还原性二糖为蔗糖和/或海藻糖。
5.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白和/或人血清白蛋白。
6.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000中的一种或几种的组合。
7.根据权利要求1所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述缓冲液为Bis-Tris propane缓冲液、Bis-Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的冻干辅助制剂，其特征在于，所述缓冲液的pH值为6.5～8.0。
9.一种促甲状腺激素受体的冻干方法，其特征在于，将促甲状腺激素受体与权利要求1至8中任一项所述冻干辅助制剂混合后进行冷冻干燥。
10.根据权利要求9所述的冻干方法，其特征在于，所述促甲状腺激素受体与所述冻干辅助制剂的体积比为1：(20～30)。

说明书全文

一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法

技术领域

[0001] 本发明涉及免疫分析技术领域，特别涉及一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法。

背景技术

[0002] 自身免疫性甲状腺病(Autoimmune thyroid disease,AITD)是一种典型的器官特异性自身免疫性疾病。促甲状腺激素受体(thyrotropin receptor)是一种蛋白偶联的大分子糖蛋白，表达在甲状腺滤泡细胞表面，是诱导AITD的主要抗原。借助纯化的促甲状腺激素受体抗原继而建立起的抗原-抗体反应模型和检测方法，对AITD疾病的鉴别诊断具有重要意义。

[0003] 在临床免疫分析中，通常通过较为复杂的工艺如细胞培养、表达、纯化等方法来获得该抗原。由于该方法获得的抗原在液态中极其不稳定，因此目前促甲状腺激素受体多采用冻干进行保藏和运输。但是，冷冻干燥过程是一个复杂的相变过程，其中产生的低温应力、冻结应力、干燥应力会导致促甲状腺激素受体结构改变，溶解度降低，复溶性差，生物活性下降等。

[0004] 综上所述，一种能够解决促甲状腺激素受体冻干后结构改变，溶解度低，复溶性差，生物活性下降等问题的冻干辅助制剂是本领域人员亟待解决的技术问题。目前还未见针对促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂的研究。其它生物活性物质的冻干辅助制剂并不适用于促甲状腺激素受体的冻干，仍然会导致促甲状腺激素受体的溶解度降低、复溶性差、生物活性下降等问题的发生。

发明内容

[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法。该冻干辅助制剂能有效辅助促甲状腺激素受体冻干，使得促甲状腺激素受体冻干后形态稳定，冻干复溶效果好，不产生沉淀。

[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

[0007] 本发明提供了一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂，该冻干辅助制剂由非还原性二糖、甘氨酸、血清白蛋白、聚乙二醇和缓冲液组成。

[0008] 作为优选，该冻干辅助制剂中各组分含量为：

[0009]

[0010] 优选地，该冻干辅助制剂中各组分含量为：

[0011]

[0012] 更优选地，该冻干辅助制剂中各组分含量为：

[0013]

[0014] 作为优选，还原性二糖为蔗糖和/或海藻糖。

[0015] 作为优选，血清白蛋白为牛血清白蛋白和/或人血清白蛋白。

[0016] 作为优选，聚乙二醇为聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、聚乙二醇20000中的一种或几种的组合。

[0017] 作为优选，缓冲液为Bis-Tris propane缓冲液、Bis-Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种。

[0018] 作为优选，缓冲液的pH值为6.5～8.0。

[0019] 本发明还提供了一种促甲状腺激素受体的冻干方法，将促甲状腺激素受体与上述冻干辅助制剂混合后进行冷冻干燥。

[0020] 作为优选，促甲状腺激素受体与冻干辅助制剂的体积比为1：(20～30)。

[0021] 本发明提供了一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法。该冻干辅助制剂由非还原性二糖、甘氨酸、血清白蛋白、聚乙二醇和缓冲液组成；各组分含量为：非还原性二糖2wt％～20wt％；甘氨酸5～30mmol/L；血清白蛋白2wt％～10wt％；聚乙二醇0.5wt％～2wt％；缓冲液余量。本发明具有的技术效果为：

[0022] 本发明提供的促甲状腺激素受体冻干辅助制剂能有效辅助促甲状腺激素受体冻干，使促甲状腺激素受体冻干后形态稳定，冻干复溶效果好，不产生沉淀，生物活性不受影响。

具体实施方式

[0023] 本发明公开了一种促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0024] 本发明提供了一种促甲状腺激素受体冻干辅助制剂，包括pH范围为6.5-8.0的缓冲液介质、体积占比约为5％-10％的促甲状腺激素受体、按重量计约2％-20％的量的非还原性二糖、按重量计约为2％-10％的牛血清白蛋白、按重量计约为0.5％-2％的聚乙二醇、浓度约为5-30mmol/L的甘氨酸。

[0025] 冷冻干燥过程是一个多步骤过程，会产生低温、冻结和脱水等多种效应；即使成功完成冷冻干燥过程后，在长期保存过程中也很难保证冻干品中活性组分的稳定性。为了防止冻干品中活性成分在冷冻干燥和贮藏过程中发生变性，需要添加具有保护作用的辅助制剂。利用本发明提供的促甲状腺激素受体冻干辅助制剂得到的促甲状腺激素受体冻干品，其制剂饼型较好，颜色为纯白色，且复溶效果好，无不容性颗粒或片状沉淀出现，稳定性好。该冻干辅助制剂极大地提高了促甲状腺激素受体储藏稳定性，使其在免疫分析领域中的应用更为广泛。

[0026] 本发明提供的促甲状腺激素受体的冻干辅助制剂及冻干方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。

[0027] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：

[0028] 实施例1～15

[0029] 按照表1中所述比例将促甲状腺激素受体蛋白以体积比为1:24与缓冲液、非还原性二糖、牛血清白蛋白、聚乙二醇和甘氨酸进行不同比例组合，然后用相同的程序(冷冻干燥曲线均采用：-80℃预冷2h，一期升华﹣40℃～﹣15℃，12h，二期干燥﹣15℃～25℃，8h。)进行冷冻干燥。冻干品的评价指标包括：成型、复溶情况(去离子水进行等体积复溶)、澄明度、冻干前后效价评估。其中所述干前后效价评估用冻干前后信号值回收率进行表示。

[0030] 试剂盒构建：固相为磁珠包被刺激性促甲状腺激素受体的抗体；标记物为标记物标记的仅与促甲状腺激素受体抗体结合的受体；待测物质为刺激性促甲状腺激素受体抗体；利用上述方法分别构建刺激性促甲状腺激素受体抗体检测试剂盒。平行复孔检测含有一系列用校准品稀释液稀释得到的刺激性促甲状腺激素受体抗体浓度0IU/L、2IU/L、5IU/L、10IU/L、20IU/L、30IU/L的校准品，在安图生物全自动化学发光仪A2000 PLUS系统上进行测定，得到各实施例的发光值，同时计算各个校准品浓度信号值回收率均值。详细结果见下表2。

[0031] 表1冻干辅助制剂配方

[0032]

[0033]

[0034]

[0035] 表2

[0036]

[0037]

[0038] 注：冻干前后各点信号值回收率均值＝冻干后信号值/冻干前信号值；加速7d稳定性以首日为标准发光值为基准，计算各点信号值回收率均值。

[0039] 结果表明各实施例中的冻干品成型均较好，复溶时间均小于10min；冻干前后信号值回收率均在90％以上；加速稳定性考核，信号值回收率在90％以上。

[0040] 选择实施例1中的冻干品，进一步实时稳定性考核和加速稳定性考核，结果见于表3。

[0041] 表3

[0042]

[0043]

[0044] 促甲状腺激素受体属于膜蛋白，不稳定，难于保护。从表格数据看，在该冻干辅助制剂下，校准品发光值12个月后发光计数仍持续保持90％左右且趋于平稳状态，变化不大；加速稳定性结果表明经过37℃破坏性烘烤，信号值回收率仍然在90％左右。上述结果表明本发明冻干辅助制剂的保护效果好。

[0045] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

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