一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法
阅读：648发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，包括以下步骤：将迷迭香干叶用 乙醇 溶液回流提取，提取液浓缩收醇后得到固体物质A；对固体物质A用乙醇溶液洗涤后得到固体物质B；对固体物质B用石油醚或正己烷萃取 脱脂 后得到固体物质C；将固体物质C加入至乙醇溶液中，调pH至10-12，再加入 活性炭 搅拌脱色后得到滤液；对滤液调pH至2-4后得到固体物质D；将固体物质D加入至甲醇中溶解后，通过改性反相 硅 胶柱层析进行分离，再采用酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液洗脱分离，经浓缩干燥后再分别采用高浓度醇溶液溶解、静置析晶、分离、干燥制备得到单一纯度均超过95％的桦木酸、 齐墩果酸 和 熊果酸 三种产品。，下面是一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法专利的具体信息内容。
1.一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将迷迭香干叶用乙醇浓度为60％-85％的溶液回流提取，提取液浓缩收醇后固液分离得到固体物质A；
(2)对固体物质A用60％-85％的乙醇溶液洗涤后固液分离得到固体物质B；
(3)对固体物质B用石油醚或正己烷萃取脱脂后固液分离得到固体物质C；
(4)将固体物质C加入至75％-85％的乙醇溶液中，调pH至10-12，再加入活性炭搅拌脱色后固液分离得到滤液；
(5)对滤液调pH至2-4后固液分离得到固体物质D；
(6)将固体物质D加入至甲醇中溶解后，通过改性反相硅胶柱层析进行分离，再采用酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液洗脱分离分别得到含桦木酸的洗脱液I、含齐墩果酸的洗脱液II和含熊果酸的洗脱液III，经浓缩干燥后再分别采用高浓度醇溶液溶解、静置析晶、分离、干燥制备得到单一高纯度桦木酸、齐墩果酸和熊果酸三种产品。
2.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(1)中，回流提取次数为2次，第1次乙醇溶液用量为10mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，第2次乙醇溶液用量为8mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，每次提取时间为2h。
3.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(2)中，洗涤方式为将固体物质A加入至60％-85％的乙醇溶液中搅拌溶解，次数为2次，每次1-2h。
4.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(3)中，萃取的液固比为25-30mL/g，萃取次数为2-3次。
5.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(4)中，75％-85％的乙醇溶液的用量为25-30mL乙醇溶液/1g固体物质C，温度为60-75℃，加入迷迭香干叶重量的0.1％的活性炭，搅拌脱色时间为2-3h。
6.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(5)中，调pH至2-4后，室温条件下静置至少5h。
7.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(6)中，改性反相硅胶柱层析中，改性硅胶树脂为十八烷基键合硅胶的改性C18反相硅胶树脂。
8.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(6)中，酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液的梯度设置依次为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇，流速为6-10mL/min，所述酸为盐酸、磷酸或者乙酸；采用高效液相色谱分析，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III。
9.根据权利要求1所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：
步骤(6)中，高浓度醇为不低于95％的乙醇或者甲醇，溶解温度为70-80℃。
10.根据权利要求1-9任一项所述的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，其特征在于：步骤(6)中，桦木酸、齐墩果酸和熊果酸三种产品的纯度均不低于95％。
一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法
技术领域
[0001] 本发明属于天然产物提取技术领域，涉及一种从迷迭香中同时制备三种不同高纯度三萜酸的方法。
背景技术
[0002] 迷迭香原产于欧洲、北非及地中海沿岸，系唇形科鼠尾草属植物，常绿小灌木，由于其含有的有效成分具备较强的抗氧化作用，近年来在我国湖南、广西、云南等省区均有种植。迷迭香提取物中主要含有桦木酸、齐墩果酸、熊果酸、鼠尾草酚、迷迭香二醛、表迷迭香酚、表迷迭香酚甲醚、鼠尾草酸、鼠尾草酸甲酯、迷迭香酚等萜类物质，芹菜素、橙皮素、高车前苷、芫花素等黄酮类物质，香草酸、咖啡酸、迷迭香酸、阿魏酸等酚酸类物质。
[0003] 三萜酸是一类具有生物活性化合物的总称。迷迭香提取物中含有多种三萜酸、三萜酸酚和三萜酸酯。研究发现，三萜酸类物质具有抗癌、抗突变作用，因此三萜酸的天然制备方法受到广泛关注。
[0004] 桦木酸具有抗肿瘤细胞生长的作用，而对正常细胞没有伤害；其对肿瘤细胞如对成神经细胞瘤、神经胶质瘤、恶性脑瘤、卵巢癌、肺癌等恶性肿瘤具有广谱性的细胞毒性，对HIV-1型感染具有抑制作用；这使得桦木酸成为很有开发前景的药物。
[0005] 桦木酸目前主要有三种来源途径：一、从天然植物中提取分离得到；二、以白桦脂醇为前体，通过有机合成得到白桦脂酸；三、以白桦脂醇为前体，通过微生物转化生成桦木酸。后两种都以白桦皮为原料提取，由于白桦皮原料有限，产量受限。
[0006] CN109180772A公开了一种高纯度白桦脂酸的制备方法，该方法通过提取物处理得到白桦脂酸钠盐、钠盐纯化处理、再酸化、重结晶制备得到高纯度白桦脂酸产品。CN109666058A公开了一种白桦脂酸提取分离的方法，该方法通过法以禾本目莎草科荸荠属荸荠为原料，经过粉碎、亚临界水提取结合碱溶酸沉法和重结晶的方法实现了荸荠皮中白桦脂酸的分离。
[0007] 熊果酸具有保肝、抗肝炎、抗肿瘤、增强免疫功能、抗炎抑菌、抗HIV、降血脂等作用。近年来发现它具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，熊果酸具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。
[0008] CN107325150A公开了一种超临界二氧化碳萃取女贞子熊果酸的方法，该方法通过采用超临界设备萃取，获得熊果酸产品。CN106117303A公开了一种从枇杷叶中提取熊果酸的方法该方法通过以枇杷叶为原料，采用以水为溶剂在亚临界条件下从枇杷叶中提取分离熊果酸的技术和工艺。
[0009] 齐墩果酸作为三贴酸类物质，CN109010346A公开了一种齐墩果酸的新应用，表明齐墩果酸具有抑制皮肤炎症的作用，证明齐墩果酸能够有效抑制炎症因子的释放，从而达到消炎的目的，齐墩果酸可用于制备皮肤炎症抑制剂。CN109223805A公开了齐墩果酸在制备治疗自免疫疾病的药物中的应用，表明齐墩果酸制备治疗自免疫疾病的药物中的应用，齐墩果酸具有明显的Th17细胞活性抑制功能，为自免疫疾病治疗的新药研发提供先导结构。
[0010] CN106336440A公开了从油橄榄叶中提取分离齐墩果酸的方法，该方法通过体积浓度为70-90％的乙醇溶液提取，体积浓度为50-65％乙醇溶液对粗提取物溶解，溶液上AB-8大孔吸附树脂柱，碳酸氢钠溶液进行洗脱，调节pH至，过滤，滤饼干燥得制备得到高含量齐墩果酸产品。
[0011] CN109498686A公开了一种枣料中三萜酸的制备方法，该方法通过制备液相色谱分离手段，制备总三萜酸，含量超过90％，主要成分为桦木酸、熊果酸和齐墩果酸的混合产品。CN107468761A公开了一种女贞子总三萜酸的制备方法及用途，该方法主要采用溶剂萃取，制备得到三萜酸是以齐墩果酸和熊果酸的混合物，且含量只达到70％以上。
[0012] 综上所述，要么由原料通过设备制备得到单一高含量产品，要么由于原料中均含有多种不同的三萜酸类物质，制备得到的三萜酸均为其混合产品，基于医药、化妆品等领域对不同的单一高纯三萜酸类物质的需求，因此有必要开发一种同时制备不同高纯度三萜酸的方法。
发明内容
[0013] 为了解决现有三萜酸制备工艺要么是单一产品、要么得到的均为混合产品的问题，本发明的目的在于提供一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，以迷迭香为原料，经提取、洗涤、脱脂、脱色、改性反相硅胶分离、醇溶液精制等工艺步骤的协同作用，能够同时制备三种含量均超过95％的桦木酸、齐墩果酸和熊果酸产品。
[0014] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
[0015] 一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，包括以下步骤：
[0016] (1)将迷迭香干叶用乙醇浓度为60％-85％的溶液回流提取，提取液浓缩收醇后固液分离得到固体物质A；
[0017] (2)对固体物质A用60％-85％的乙醇溶液洗涤后固液分离得到固体物质B；
[0018] (3)对固体物质B用石油醚或正己烷萃取脱脂后固液分离得到固体物质C；
[0019] (4)将固体物质C加入至75％-85％的乙醇溶液中，调pH至10-12，再加入活性炭搅拌脱色后固液分离得到滤液；
[0020] (5)对滤液调pH至2-4后固液分离得到固体物质D；
[0021] (6)将固体物质D加入至甲醇中溶解后，通过改性反相硅胶柱层析进行分离，再采用酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液洗脱分离分别得到含桦木酸的洗脱液I、含齐墩果酸的洗脱液II和含熊果酸的洗脱液III，经浓缩干燥后再分别采用高浓度醇溶液溶解、静置析晶、分离、干燥制备得到单一高纯度桦木酸、齐墩果酸和熊果酸三种产品。
[0022] 本发明中所述的迷迭香干叶为外购干叶或者新鲜迷迭香蒸馏后脱落分离得到的迷迭香叶子，经干燥后得到的干叶。
[0023] 进一步的，步骤(1)中，回流提取次数为2次，第1次乙醇溶液用量为10mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，第2次乙醇溶液用量为8mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，每次提取时间为2h。
[0024] 进一步的，步骤(2)中，洗涤方式为将固体物质A加入至60％-85％的乙醇溶液中搅拌溶解，次数为2次，每次1-2h。
[0025] 进一步的，步骤(3)中，萃取的液固比为25-30mL/g，萃取次数为2-3次。
[0026] 进一步的，步骤(4)中，75％-85％的乙醇溶液的用量为25-30mL乙醇溶液/1g固体物质C，温度为60-75℃，加入迷迭香干叶重量的0.1％的活性炭，搅拌脱色时间为2-3h。
[0027] 进一步的，步骤(5)中，调pH至2-4后，室温条件下静置至少5h。
[0028] 进一步的，步骤(6)中，改性反相硅胶柱层析中，改性硅胶树脂为十八烷基键合硅胶的改性C18反相硅胶树脂。本发明中的改性硅胶树脂为市售产品，是一种十八烷基键合硅胶的改性C18反相硅胶树脂，可通过硅胶树脂进行酸化处理，再利用十八烷基三氯硅烷进行烷基化反应，最后用三甲基氯硅烷封端处理得到。
[0029] 进一步的，步骤(6)中，酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液的梯度设置依次为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇，流速为6-10mL/min，所述酸为盐酸、磷酸或者乙酸；采用高效液相色谱分析，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用
100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III。
100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III。
[0030] 进一步的，步骤(6)中，高浓度醇为不低于95％的乙醇或者甲醇，溶解温度为70-80℃。
[0031] 进一步的，步骤(6)中，桦木酸、齐墩果酸和熊果酸三种产品的纯度均不低于95％。
[0032] 本发明以迷迭香为原料，经提取、洗涤、脱脂、脱色、改性反相硅胶柱层析分离、醇溶液精制等工艺步骤的协同作用，能够同时制备三种含量均超过95％的桦木酸、齐墩果酸和熊果酸产品。发明人发现改变部分工艺参数(例如采用为未改性的C18反相硅胶树脂、采用不含酸的甲醇水溶液洗脱等)或减少部分步骤(例如脱脂工序等)，均会影响最终产品的得率和纯度，而严格按照本发明的工艺进行处理，在各条件和工艺步骤的协同作用下，能够同时制备三种含量均超过95％的桦木酸、齐墩果酸和熊果酸产品。。
[0033] 本发明一种优选的从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法，具体包括以下步骤：
[0034] (1)将迷迭香干叶用乙醇浓度为60％-85％的溶液回流提取2次，其中，第1次乙醇溶液用量为10mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，第2次乙醇溶液用量为8mL乙醇溶液/1g迷迭香干叶，每次提取时间为2h，提取液浓缩收醇至无醇味后，冷却静置4-6h，固液分离得到固体物质A；
[0035] (2)将固体物质A加入至60％-85％的乙醇溶液中搅拌溶解，次数为2次，每次1-2h，固液分离得到固体物质B；
[0036] (3)按液固比25-30mL/g，对固体物质B用石油醚或正己烷萃取2-3次脱脂后固液分离得到固体物质C；
[0037] (4)按液固比25-30mL/g，将固体物质C加入至75％-85％的乙醇溶液中，调pH至10-12，60-75℃下再加入干叶重量的0.1％的活性炭，搅拌2-3h脱色后固液分离得到滤液；
[0038] (5)对滤液调pH至2-4后室温条件下静置至少5h，固液分离得到固体物质D；
[0039] (6)将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，再采用酸含量为0.05％的梯度酸性甲醇溶液洗脱分离，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇，流速为6-10mL/min，采用高效液相色谱分析，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III，经浓缩干燥后再分别采用95％以上的乙醇或者甲醇溶液溶解、静置析晶、分离、干燥制备得到单一纯度均不低于95％的桦木酸、齐墩果酸和熊果酸三种产品。
[0040] 与现有技术对比，本发明取得的技术效果是：
[0041] 区别于现有三萜酸制备工艺得到要么制备得到的是单一产品、要么均为混合产品，本发明以迷迭香为原料，经提取、洗涤、脱脂、脱色、改性反相硅胶柱层析分离、醇溶液精制等工艺步骤的协同作用，能够同时制备三种含量均超过95％的桦木酸、齐墩果酸和熊果酸产品。附图说明
[0042] 图1为本发明的一种从迷迭香中同时制备不同高纯度三萜酸的方法的工艺流程示意图。
[0043] 图2为本发明实施例1制得的三种产品检测色谱图。
[0044] 图3为本发明对比例1制得的三种产品检测色谱图。
[0045] 具体实施方法
[0046] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，所述的不是对本发明的限定，而是对本发明的解释，如未特别说明，本发明中的百分比均为体积百分比。
[0047] 实施例1
[0048] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 60％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 60％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1500ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共60.6g；
[0049] 将固体物质A加入至900ml 60％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 60％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共15.4g；
[0050] 对固体物质B用正己烷萃取三次，每次用量为450ml，分离，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质C共14.2g；
[0051] 将固体物质C加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至12，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色3h，趁热过滤得到滤液；
[0052] 对滤液调pH至3，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共10.8g；
[0053] 对改性C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用0.05％的酸性甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0054] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用95％的甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0055] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.4g，纯度为97.3％；齐墩果酸0.5g，纯度为96.5％；熊果酸3.5g，纯度为96.8％。
[0056] 实施例2
[0057] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 70％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 70％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1400ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共59.5g；
[0058] 将固体物质A加入至900ml 65％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 65％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共15.0g；
[0059] 对固体物质B用正己烷萃取三次，每次用量为450ml，分离，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质C共13.6g；
[0060] 将固体物质C加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至11.5，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色2.5h，趁热过滤得到滤液；
[0061] 对滤液调pH至2，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共10.2g；
[0062] 对改性C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用0.1％的酸性甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0063] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用95％的甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0064] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.3g，纯度为96.8％；齐墩果酸0.4g，纯度为96.6％；熊果酸3.4g，纯度为97.2％。
[0065] 实施例3
[0066] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 80％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 80％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1450ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共58.9g；
[0067] 将固体物质A加入至900ml 70％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 70％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共14.6g；
[0068] 对固体物质B用正己烷萃取三次，每次用量为450ml，分离，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质C共13.2g；
[0069] 将固体物质C加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至11，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色2h，趁热过滤得到滤液；
[0070] 对滤液调pH至4，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共9.6g；
[0071] 对改性C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用0.75％的酸性甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0072] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0073] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.5g，纯度为97.0％；齐墩果酸0.4g，纯度为96.5％；熊果酸3.3g，纯度为96.2％。
[0074] 对比例1
[0075] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 60％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 60％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1500ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共60.2g；
[0076] 将固体物质A加入至900ml 60％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 60％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共15.2g；
[0077] 将固体物质B加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至12，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色3h，趁热过滤得到滤液；
[0078] 对滤液调pH至3，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共11.9g；
[0079] 对改性C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用0.05％的酸性甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0080] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用95％的甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0081] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.7g，纯度为87.3％；齐墩果酸0.6g，纯度为85.5％；熊果酸3.8g，纯度为84.8％。
[0082] 本对比例中固体物质B未经过脱脂处理，在同样的条件下，影响产品的分离，得到桦木酸、齐墩果酸、熊果酸三种产品纯度均低于95％。
[0083] 对比例2
[0084] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 70％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 70％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1400ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共59.4g；
[0085] 将固体物质A加入至900ml 65％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 65％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共14.9g；
[0086] 对固体物质B用正己烷萃取三次，每次用量为450ml，分离，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质C共13.5g；
[0087] 将固体物质C加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至11.5，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色2.5h，趁热过滤得到滤液；
[0088] 对滤液调pH至2，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共10.1g；
[0089] 未改性的C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过未改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用0.1％的酸性甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0090] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用95％的甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0091] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.4g，纯度为87.8％；齐墩果酸0.5g，纯度为85.6％；熊果酸3.2g，纯度为86.2％。
[0092] 本对比例中采用未改性的C18反相硅胶树脂分离产品，再同样的条件下，影响产品的分离，桦木酸、齐墩果酸、熊果酸三种产品纯度均低于95％。
[0093] 对比例3
[0094] 称取迷迭香干叶500g，第一次用5000ml 80％乙醇溶液回流提取2h，过滤，滤渣继续用4000ml 80％乙醇溶液回流提取2h，过滤，合并两次提取液；对提取液真空浓缩收醇至无醇味，浓缩温度70℃，此时浓缩液体积约1450ml，冷却静置5h，抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质A共58.7g；
[0095] 将固体物质A加入至900ml 70％的乙醇溶液中，常温下搅拌1h后，抽滤得到滤饼，继续将滤饼加入至900ml 70％的乙醇溶液，常温下搅拌1h后；抽滤得到滤饼，60℃鼓风干燥得到固体物质B共14.5g；
[0096] 对固体物质B用正己烷萃取三次，每次用量为450ml，分离，60℃鼓风干燥4h，得到固体物质C共13.3g；
[0097] 将固体物质C加入至350ml85％乙醇溶液中，调pH至11，75℃条件下进行搅拌溶解，再加入0.5g活性炭搅拌脱色2h，趁热过滤得到滤液；
[0098] 对滤液调pH至4，室温条件下静置6h后过滤得到滤饼，对滤饼干燥得到固体物质D共9.7g；
[0099] 对改性C18反相硅胶树脂用甲醇浸泡处理，脱气后装柱，采用60％甲醇水溶液洗涤两个柱体积。将固体物质D按1:1加甲醇溶解后，通过改性的反相硅胶柱层析进行分离，采用梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱溶剂采用甲醇水溶液，梯度设置为60％甲醇水溶液、75％甲醇水溶液、90％甲醇水溶液、100％甲醇；控制流速为6-10mL/min，洗脱剂用量为3个柱体积，对洗脱液采用高效液相色谱分析，得到分离的目标洗脱液，其中采用75％甲醇水溶液洗脱得到的为含桦木酸的洗脱液I，采用90％甲醇水溶液洗脱得到的为含齐墩果酸的洗脱液II，采用100％甲醇洗脱得到的为含熊果酸的洗脱液III；
[0100] 对洗脱液I、洗脱液II、洗脱液III分别浓缩、干燥；干燥物质用甲醇溶液加热溶解，冷却后置于冷藏室静置12h析晶；
[0101] 对结晶溶液分别过滤分离，得到晶体，干燥后分别得到桦木酸1.4g，纯度为86.0％；齐墩果酸0.5g，纯度为87.5％；熊果酸3.2g，纯度为87.2％。
[0102] 本对比例中洗脱溶剂采用不加酸的甲醇水溶液，再同样的条件下，对产品的分离效果不好，桦木酸、齐墩果酸、熊果酸三种产品纯度均低于95％。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种预防结肠癌的地榆提取物及其制备方法与应用 | 2020-05-11 | 234 |
| 一种治疗白色念珠菌性阴道炎的无患子温控型凝胶制剂及制备方法 | 2020-05-11 | 360 |
| 一种竹节参皂苷IVa丁酯的制备方法 | 2020-05-12 | 477 |
| 一种女贞子药材的梯度全信息薄层鉴别方法 | 2020-05-08 | 290 |
| 一种基于褐藻多糖硫酸酯的头部护理用制剂 | 2020-05-08 | 615 |
| 一种酒的质量控制方法 | 2020-05-14 | 841 |
| 一种防参止痒颗粒的指纹图谱测定方法 | 2020-05-08 | 879 |
| 一种基于HPLC和SPSS分析技术的木瓜药材质量评价方法 | 2020-05-13 | 322 |
| 护肤组合物及其制备方法 | 2020-05-15 | 55 |
| 催化香树脂醇C-28位氧化的CYP450基因及其编码产物与应用 | 2020-05-12 | 706 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈