技术领域：

本发明涉及医药技术领域，确切地说是涉及一类含D-半乳糖和甾醇或 脂肪醇的肝靶向辅料及其制剂。

背景技术：

肝细胞癌(HCC)是最普通的恶性原发性肝脏肿瘤，HCC在美国和欧 洲的大部分人口中，并不普遍。但在许多亚洲和非洲国家中，是三大致命 癌症之一。我国是病毒性肝炎的高发区，平均年发病率为120-140/10万， 每年有约28万人死于与肝炎有关的疾病。我国乙肝病毒携带者达1.3亿， 乙型肝炎病毒(HBV)感染率高达57.63％，即全国至少有6亿人感染过 HBV。HBsAg阳性率9.75％，约有1.2亿人，占全球的1/3；其中约1/4将 发展为慢性肝病，部分患者可发展为肝硬化，甚至演变为肝癌。乙型肝炎 不仅严重危害我国人民的健康，而且还为国家带来严重的社会经济负担。 慢性乙肝的治疗时间长，医疗费用较高，再加不恰当的滥用药物，更加重 了额外的经济负担。我国每年用于治疗慢性肝炎、肝硬化、肝癌的直接医 疗耗费约300亿元人民币。因此，加强病毒性肝炎的预防；探求慢性肝炎 的有效治疗方法，是当前亟待解决的重大课题。

肝脏参与体内消化、排泄、解毒和免疫调节等许多过程，肝细胞主要 分为肝实质细胞(parenchymal cell，P)和肝非实质细胞(non-parenchymal cell，NP)。肝实质细胞是肝细胞中最主要的细胞，同时也是受病毒等侵扰 的主要细胞，如肝炎及肝癌主要发生在肝实质细胞。去唾液酸糖蛋白受体 (Asialoglycoprotei recepters，ASGPR)是肝实质细胞膜上所特有的一种高 效内吞受体，能够专一性识别分子末端带有半乳糖残基的糖蛋白并与之结 合，复合物发生微观簇集，内陷化后被吞入溶酶体，释出药物。去唾液酸 糖蛋白受体并不被降解，重新被转运到细胞膜上，参与下一轮循环。可利 用此作用以半乳糖残基的糖蛋白(Gal-HSA)为载体，研制肝靶向药物。

目前尚无一种能迅速、直接清除乙肝病毒的药物。目前最好的抗病毒 药物的疗效也仅能达到50％左右。介入治疗疗效虽好，但需在X线、CT 和超声设备的导向下，利用特定的器械进行治疗的技术。而通过能与去唾 液酸糖蛋白受体特异结合的含半乳糖基肝靶向辅料给药载体，则可能清除 肝内全部的病毒和大大提高基因转移效率，并降低药物毒副作用、避免手 术痛苦。

乳糖酸含D-半乳糖端基，还含有反应活泼基团-COOH，易与其它化 合物反应生成肝靶向辅料。国内外有许多学者以半乳糖或乳糖为起始物， 将半乳糖残基与治疗药物(包括蛋白或多肽类)或载体材料相偶联，制备肝 靶向载体。Takenaga等以乳糖内酯与α-干扰素在0.1％十二烷基硫酸钠缓冲 液中反应，制得产物应用于人体羊膜/sindbis病毒系统，使药物浓度维持 55.1％-82.4％，并在小鼠实验中显示出很强的肝靶向定位性。(Takenaga M， Sakurai K，Igarashi R，et al.Can PatAppl，CA，130，230；CA，123：144661)。杨今 祥等合成了含氧乙基的半乳糖衍生物Galβ1-(CH2-CH2-O)3-C14H29，用其修 饰斑蝥素脂质体。通过药理实验表明半乳糖修饰的斑蝥素脂质体对活性肝 脏的靶向功能明显优于斑蝥素普通脂质体，两者在肝内蓄留量最大可相差 2.6倍，且滞留时间显著延长。而且乙氧基可以增强肝半乳糖受体与一些 半乳糖衍生物修饰的脂质体的结合能力。(Hisachi Yoshioka.J Pham Sci， 1993，82：273)。Mitsuru Hashida等将IME-半乳糖甙与胆固醇反应，合成 胆甾烯-5-氧基-N-[4-[[1-亚胺基-2-β-D-硫代半乳糖乙基]氨基]丁基]甲酰胺 (Gal-C4-Chol)；并用此材料制备肝靶向脂质体，结果发现含Gal-C4-Chol 的肝靶向脂质体在肝实质细胞和非实质细胞中分布比是15.1，而普通脂质 体在肝实质细胞和非实质细胞中分布比是1.1。(Kawakami S，Munakata C， Fumoto S，et al.Novel galactosylated liposomes for hepatocyte-selective targeting of lipophilic drugs.J Pharm Sci，2001，90(2)：105-113.)。王绍宁等用 乳糖酸、琥珀酸酐和胆固醇为原料，合成了(5-胆甾烯-3β-氧基)4-氧代-4-[2- 乳糖酰胺基乙氨基]丁酸酯，并将此新型肝靶向辅料制备肝靶向阿霉素脂质 体，发现10％的半乳糖化脂质体的阿霉素肝靶向效率(Te)是普通脂质体 的3.25倍，且在肝实质细胞和非实质细胞中分布比是普通脂质体分布比的 6.77倍(Shaoning Wang，Yingkun Qiu，Hui Xu，et al.Chi Chem Letter，2006， 17(2)：173～176.)。Fujita T将超氧化物岐化酶(SOD)用半乳糖修饰后 (Gal-SOD)，可靶向于肝实质细胞，并且显示出优于普通SOD的抗肝缺 血再灌注损伤的能力(Nishikawa M，Tamakic，et al.J Pharmcol Exp Ther， 1992，263(3)：971-978.)。

以半乳糖或乳糖作反应原料，需先活化羟基以提高反应程度，且对非 反应的羟基需进行保护，故反应比较复杂，产率低。乳糖酸含半乳糖端基， 同时含有反应活泼基团-羧基，易与其它化合物发生酰化反应。

发明内容：

本发明的目的是提供一种含D-半乳糖和甾醇或脂肪醇的肝靶向辅料， 并应用于给药载体中，以实现肝靶向的需要。本发明的目的是通过以下方 案实现的，它以乳糖酸、二元胺和甾醇或脂肪醇的氯甲酯为原料制成，其 特征在于，结构通式如下：

式中：

R1为胆固醇、谷甾醇等甾醇或脂肪醇类化合物。

R2为2-10个碳原子的直链或支链烷基、取代烷基、芳香基或取代 芳香基；聚乙二醇-CH2(CH2OCH2)nCH2-，n＝1-200)；氨基酸烷 基酯(芳基酯)。

为了得到目标化合物采取了以下措施：

1、合成(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯(以乙二胺和胆固醇氯甲酯 为例)，

再与乳糖酸内酯反应得到目标化合物

胆固醇氯甲酯用二氯甲烷溶解，置加料漏斗中，滴加到过量1-10倍 的乙二胺CH2Cl2溶液中，冰水浴下搅拌反应10hr。减压蒸除CH2Cl2，加 水20mL(洗去未反应完的乙二胺及其盐酸盐)，混匀，再用CH2Cl2 (15ml×2)萃取，去离子水洗(15ml×2)，再用适量无水Na2SO4干燥过夜。 减压蒸去溶剂，得腊状白色固体，即(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯。

取乳糖酸加入甲醇溶解，50℃减压蒸发，除去甲醇，在加入2～10 倍体积的乙醇，超声分散后再减压蒸发除去乙醇，重复3～10次后，将其 固体置于70～80℃烘箱中放置12～48hr，即得乳糖酸内酯。

乳糖酸内酯加入极性溶剂中溶解，(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯用 非极性溶剂溶解，0～100℃搅拌反应1～36h。取反应混合物于30～80℃ 减压蒸发除去部分溶剂，过滤除去沉淀，滤液加蒸馏水稀释2～10倍，再 将稀释液置于透析袋内透析12～72h，浓缩透析液，冻干，得产物。

2、合成(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯，再与N-(乳糖酰氧基) 二酰亚胺反应得到目标化合物

(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯的合成同上。

合成乳糖酸活性酯。将乳糖酸溶于DMF中，冷却至-5℃～-30℃， 加入N，N＇-二环己基碳二亚胺，于-10℃～-20℃搅拌反应10～120min，升 至-5℃反应5～60min，然后加入N-羟基琥珀酰亚胺，于-5℃搅拌反应 0.5～2h，在室温继续搅拌6～36h。将反应混合物滤去二环己基脲，所得 滤液蒸干，加入无水乙醇，超声分散后滴加乙醚，析出白色絮状物，再 经抽滤，乙醚洗涤，真空干燥，得白色无定形产物。

取乳糖酸活性酯加入极性溶剂中溶解，(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇 酯用非极性溶剂溶解，0～100℃搅拌反应1～36h。取反应混合物于30～ 80℃减压蒸发除去部分溶剂，过滤除去沉淀，滤液加蒸馏水稀释2～10 倍，再将稀释液置于透析袋内透析12～72h，浓缩透析液，50～90℃减压 蒸干，得产物。

其中极性溶剂包括：甲醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、N-甲基甲酰胺、 二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。非极性溶剂包括：二氯甲烷、三氯 甲烷、乙酸乙酯、石油醚、四氢呋喃、丙酮、甲苯、二氧六环、乙醚等。

3、先制备脂肪醇氯甲酯，再合成(2-氨基乙胺基)甲酸二十二烷醇 酯(以乙二胺和二十二烷醇为例)，再与乳糖酸内酯反应得到目标化合物

二十二烷醇加入三氯乙烯溶解，另取三光气溶于2～50倍三氯乙烯 和0.1～5倍DMF，在回流下0.5～5h滴加完毕，继续反应2～12h，过滤 除去不溶物，减压蒸除过量溶剂，残留物用环己烷萃取回流5～60min，蒸 除部分环己烷，趁热过滤除去不溶物，冰水冷却滤液，析出产物粗品，经 重结晶得二十二烷醇氯甲酯白色固体。

二十二烷醇氯甲酯用二氯甲烷溶解，置加料漏斗中，滴加到过量1-10 倍的乙二胺CH2Cl2溶液中，冰水浴下搅拌反应10hr。减压蒸除CH2Cl2， 加水20mL(洗去未反应完的乙二胺及其盐酸盐)，混匀，再用CH2Cl2 (15ml×2)萃取，去离子水洗(15ml×2)，再用适量无水Na2SO4干燥过夜。 减压蒸去溶剂，得白色固体，即(2-氨基乙胺基)甲酸二十二烷醇酯。

乳糖酸内酯的制备同上。乳糖酸内酯加入极性溶剂中溶解，(2-氨基 乙胺基)甲酸二十二烷醇酯加非极性溶剂溶解，0～100℃搅拌反应1～ 36h。取反应混合物于30～80℃减压蒸发除去部分溶剂，过滤除去沉淀， 滤液加蒸馏水稀释2～10倍，再将稀释液置于透析袋内透析12～72h，浓 缩透析液，冻干，得产物。

其中极性溶剂包括：甲醇、乙醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、三 氯乙烯、N-甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。非极性溶 剂包括：二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、四氢呋喃、丙酮、 甲苯、二氧六环、乙醚等。

利用乳糖酸既有靶向基团—半乳糖基和反应活性基团-羧基的特点，与 指肪醇或甾醇经过系列酯化和酰化反应得到一种肝靶向两亲性辅料，脂质 端基可用于脂质体、乳剂、纳米粒、微球、纳米囊、胶束等给药载体的靶 向。此反应历程短，且避免了某些剧毒试剂如：红磷、溴、氢化钠等的应 用；反应得到的辅料含酯键和酰胺键，体内易降解。

本肝靶向辅料可用来修饰脂质体、乳剂、纳米粒、微球、纳米囊和胶 束等给药载体，含量可达到脂质成分的0.1-100％(mol％)，用于抗肝癌、 肝炎药物的靶向治疗。

附图说明：

图1[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)的合成路线

图2阿霉素水溶液(Dox solution)、普通脂质体(Dox-CL)和靶向脂质 体(Gal-DOX-L)在小鼠血浆和肝内分布

图3齐多夫定水溶液(AZT solution)、齐多夫定棕榈酸酯普通纳米乳剂 (AZTP-NE)和齐多夫定棕榈酸酯靶向纳米乳剂(Gal-AZTP-NE)在 小鼠血浆和肝内分布

图4齐多夫定水溶液(AZT solution)、齐多夫定棕榈酸酯普通脂质体 (AZTP-CL)和齐多夫定棕榈酸酯靶向脂质体(Gal-AZTPL)在小 鼠血浆和肝内分布

具体实施方式：

下面结合实例对本发明做进一步详细的描述

实施例1：[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)的合成

通过合成(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯，再与乳糖酸内酯反应得到 目标化合物[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)。见附图1。

1.乳糖酸内酯的合成

取乳糖酸加入甲醇溶解，50℃减压蒸发，除去甲醇，重复3～4次后， 将其固体置于70～80℃烘箱中放置48hr，即得乳糖酸内酯。

2.(2-氨基乙胺基)甲酸胆固醇酯(I)

取0.45g胆固醇氯甲酯(1mmol)，用60mL CH2Cl2溶解，置滴液漏斗 中，缓缓加入到含5.84g乙二胺(100mmol)CH2Cl2溶液中，冰水浴下搅 拌反应10hr。减压蒸除CH2Cl2，加水20mL(洗去未反应完的乙二胺及其 盐酸盐)，混匀，再用CH2Cl2(15ml×2)萃取，去离子水洗(15ml×2)，再 用适量无水Na2SO4干燥过夜。减压蒸去溶剂，得腊状白色固体(I)0.48g， (产率为91.1％)，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)：Rf＝0.2。FTIR(cm-1)： 3339.2，1551.2(NH)，2939.3(环烯CH)，1716.7，1696.8，1276.9，1136.8(NHCOOR) ESI-MS(m/z)：474.1(M+H)+，495.3(M+Na)+。

3.(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(II)

取乳糖酸内酯0.52g(1.53mmol)，加入二甲基亚砜8mL，40℃水浴下搅 拌溶解，逐滴加入二氯甲烷溶解的化合物I溶液(0.48g，1mmol)，再滴加3～ 5滴三乙胺，然后升温至50℃回流反应36hr。减压除去二氯甲烷，抽滤虑， 除去沉淀物，滤液加入2倍体积的蒸馏水，置于透析袋中透析48hr，除去 二甲基亚砜和未反应的乳糖酸，将透析液蒸干。再加入二氯甲烷/无水乙醇 混合溶剂20mL，超声溶解固体，抽虑除去不溶物，滤液蒸干后，得终产 物CH-ED-LA(0.44g，产率53.7％)。TLC(乙酸乙酯/乙醇/水＝6∶4∶1，苯胺/ 二苯胺/85％磷酸显色剂)，Rf＝0.4。FTIR(cm-1)：3327.3，1626.1，1576.8(NH)， 2939.3(环烯CH)，1696，1245，891.4(NHCOOR)。HPLC-DAD：面积归一化法计 算，产物的纯度大于90％。ESI-MS(m/z)：835.5(M+Na)+，1H NMR(C5D5N， ppm)：8.13(brt，1H，J＝6.8，-NH)，7.99(brt，2H，J＝6.8，-NH)，5.37(t 1H，H-6)， 5.20(d，1H，J＝6.7，H-1″)，5.18(d，1H，J＝4.26，H-2＇)，4.84(m，1H，H-3)，4.78 (m，1H，H-4′)，4.70(m，1H，H-5′)，13C NMR(C5D5N，δppm)：174.79(C-1′)， 157.35(C-1)，140.45(C-5)，122.57(C-6)，106.54(C-1″)。

实施例2：(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)的合成

通过合成N-(乳糖酰氧基)二酰亚胺，再与(2-氨基乙胺基)甲酸胆 固醇酯反应得到[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(CH-ED-LA)。

1.合成乳糖酸活性酯

将1.80g乳糖酸(5mmol)溶于30mLDMF中，冷却至-15℃～-20℃， 加入3.10gN，N＇-二环己基碳二亚胺(15mmol)，于-15℃搅拌反应20min后， 升至-5℃反应15min，然后加入1.15gN-羟基琥珀酰亚胺(10mmol)，于-5℃ 搅拌反应1h，在室温下搅拌25h。将反应混合物滤去二环己基脲，所得滤 液蒸干至约5mL，加入20mL无水乙醇，超声分散后滴加乙醚，析出白色 絮状物，再经抽滤，2mL乙醚洗涤，真空干燥后，得白色粉末2.05g(产率 90％)，TLC(二氯甲烷/乙醇＝1∶1，苯胺/二苯胺/85％磷酸显色剂)，Rf＝0.61。 FTIR(cm-1)：3326.6，2929.3(br，OH)，1627.5(imide，C＝O)，1574.7，1271.4 (RCOON)，1088.2(C-O-C)。

2.合成[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯(II)

取乳糖酸活性酯0.46g(1mmol)，加入二甲基亚砜3mL，40℃水浴搅拌溶 解后，逐滴加入化合物I的二氯甲烷溶液(0.28g，0.6mmol)10mL，再滴加2～ 4滴三乙胺，升温至50℃回流反应12hr。然后减压除去二氯甲烷，抽滤得 浅黄色DMSO溶液，向滤液中加入2倍体积的蒸馏水，超声1min后置于 透析袋内透析48hr，除去DMSO和剩余的乳糖活性酯。最后将透析液蒸干， 再加入二氯甲烷/无水乙醇混合溶剂20mL，超声溶解固体，抽滤除去不溶 物，滤液蒸干后，得终产物II(0.41g，产率50％)。

实施例3：[(2-乳糖酰胺基)己胺基]甲酸胆固醇酯(CH-HD-LA)的合成

通过合成(2-氨基己胺基)甲酸胆固醇酯，再与乳糖酸内酯反应得到 [(2-乳糖酰胺基)己胺基]甲酸胆固醇酯(CH-HD-LA)。

取0.45g胆固醇氯甲酯(1mmol)，用60mL CH2Cl2溶解，置滴液漏斗 中，缓缓加入到含11.6g己二胺(100mmol)CH2Cl2溶液中，冰水浴下搅 拌反应10hr。减压蒸除CH2Cl2，加水20mL(洗去未反应完的己二胺及其 盐酸盐)，混匀，再用CH2Cl2(15ml×2)萃取，去离子水洗(15ml×2)，再 用适量无水Na2SO4干燥过夜。减压蒸去溶剂，得灰色固体0.43g，(产率为 82.1％)，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9∶1)；Rf＝0.3。FTIR(cm-1)：3341.2，1561.4 (NH)，2938.6(环烯CH)，1715.7，1676.4(C＝O)，1277.1(C-N)。ESI-MS(m/z)： 528.5(M+H)+，551.7(M+Na)+。

取乳糖酸内酯0.52g(1.53mmol)，加入二甲基亚砜8mL，40℃水浴下搅 拌溶解，逐滴加入二氯甲烷溶解的(2-氨基己胺基)甲酸胆固醇酯溶液 (0.53g，1mmol)，再滴加3～5滴三乙胺，然后升温至50℃回流反应36hr。 减压除去二氯甲烷，抽滤，除去沉淀物，滤液加入2倍体积的蒸馏水， 置于透析袋中透析48hr，除去二甲基亚砜和未反应的乳糖酸，将透析液蒸 干。再加入二氯甲烷/无水乙醇混合溶剂20mL，超声溶解固体，抽滤除 去不溶物，滤液蒸干后，得终产物CH-HD-LA(0.44g，产率53.7％)。TLC(乙 酸乙酯/乙醇/水＝6∶4∶1，苯胺/二苯胺/85％磷酸显色剂)，Rf＝0.46。 FTIR(cm-1)：3327.7，627.5，1561.2(NH)，12940.6(环烯CH)，1694.5(NHCOOR)。 ESI-MS(m/z)：868.6(M+Na)+。13C NMR(C5D5N，δppm)：174.7(COON)， 157.6(NCOOR)。

实施例4：[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸二十二烷醇酯(DS-ED-LA)的合成

1.合成二十二烷醇氯甲酯

二十二烷醇加入三氯乙烯溶解，另取三光气溶于2～50倍三氯乙烯和 0.1～5倍DMF中，在回流下0.5～5h滴加完毕，继续反应2～12h，过滤 除去不溶物，减压蒸除过量溶剂，残留物用环己烷萃取回流5～60min，蒸 除部分环己烷，趁热过滤除去不溶物，冰水冷却滤液，析出产物粗品，经 重结晶得二十二烷醇氯甲酯白色固体。

2.合成(2-氨基乙胺基)甲酸二十二烷醇酯

二十二烷醇氯甲酯用二氯甲烷溶解，置加料漏斗中，滴加到过量1～ 10倍的乙二胺二氯甲烷溶液中，冰水浴下搅拌反应10hr。减压蒸除CH2Cl2， 加水20mL(洗去未反应完的乙二胺及其盐酸盐)，混匀，再用二氯甲烷 (15ml×2)萃取，去离子水洗(15ml×2)，再用适量无水Na2SO4干燥过夜。 减压蒸去溶剂，得白色固体，即(2-氨基乙胺基)甲酸二十二烷醇酯。TLC (二氯甲烷/甲醇＝2∶1)：Rf＝0.45。FTIR(cm-1)：2958.4，2931.2，2878.3 (br，CH)，1776.7(C＝O)，1728.1(COOR)。ESI-MS(m/z)：388.6(M+H)+。

3.合成[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸二十二烷醇酯(DS-ED-LA)

乳糖酸内酯的制备同上。乳糖酸内酯加入极性溶剂中溶解，(2-氨基乙 胺基)甲酸二十二烷醇酯加非极性溶剂溶解，0～100℃搅拌反应1～36h。 取反应混合物于30～80℃减压蒸发除去部分溶剂，过滤除去沉淀，滤液 加蒸馏水稀释2～10倍，再将稀释液置于透析袋内透析12～72h，浓缩透 析液，冻干，得产物。TLC(二氯甲烷/甲醇＝2∶1)：Rf＝0.4。FTIR(cm-1)： 3274.7，2875.3(br，NH，CH)，15671.2(NH)，1687.2(NHCOOR)。ESI-MS(m/z)： 776.1(M+Na)+。13C NMR(C5D5N，δppm)：175.4(COON)，169.5(NCOOR)。

实施例5：阿霉素肝靶向脂质体的制备及体内分布

阿霉素(doxorubicin)是治疗肝癌的一个一线药物，是临床常用的抗 肿瘤药物，抗瘤谱广、疗效好。然而该药在杀伤肿瘤细胞的同时，也会 产生全身性的严重不良反应，如心脏毒性、骨髓抑制等，治疗指数低， 临床应用受到限制。采用本发明的材料制备的肝靶向脂质体，可提高药 物在肝内的浓度，以提高抗肝癌效果。

脂质体的制备：

处方组成：

阿霉素                  0.10g

HSPC                    5.0g

胆固醇(CH)              1.7g

CH-ED-LA                0.30g

硫酸胺                  3.3g

水                      加至100mL

将处方量的HSPC、CH、CH-ED-LA加入配置容器中，60℃条件下用 适量乙醇溶解，并挥尽乙醇成膜，同温度下加入300mM的硫酸铵缓冲液 水化，制备空白脂质体。空白脂质体经微射流仪处理，通过0.22μm微孔 滤膜整粒。整粒后的脂质体置入透析袋中，用生理盐水透析，除去外水相 的硫酸铵，得到梯度脂质体。取阿霉素溶液与梯度脂质体按一定比例混合， 于60℃孵化30min，即得到阿霉素肝靶向脂质体(1mg/mL)。粒度为： 50～350nm。平均粒度89nm。

体内分布：

取昆明种小鼠，体重18～22g，分3组：阿霉素水溶液、普通脂质体组 和靶向脂质体组，按10mg/kg的剂量尾静脉给药，于不同时间点经眼眶静 脉取血，断头处死动物，结果表明靶向脂质体组阿霉素在血浆中的浓度显 著降低，而在肝中的浓度显著提高(见附图2)，在肝中的AUC0-4是普通脂 质体的3倍。

实施例6齐多夫定棕榈酸酯肝靶向纳米乳剂的制备及体内分布

人体感染HIV后，肝脏是极易受到损害的器官，在感染后期，肝脏更 成为HIV的深层贮库之一，传统制剂很难清除残留于肝脏中的HIV病毒。 齐多夫定(Zidovudine，AZT)作为抗HIV首选药之一，其疗效确切，能减 少机会性感染，延缓艾滋病相关综合症(ARC)向AIDS的发展。AZTP 为AZT的棕榈酸酯衍生物，利用此棕榈酸脂肪链插入纳米乳剂中。在实现 被动靶向给药的基础上，在原有的处方中，加入本发明的肝靶向辅料，制 备具有主动肝靶向作用的半乳糖化纳米乳剂，可使药物浓集于肝脏，有利 于清除残留于肝脏中的HIV病毒。

纳米乳剂的制备

处方组成：

AZTP                            0.30g

中链油                          5g

卵磷脂                         2g

TPGS                           0.50g

甘油                           2g

CH-ED-LA                       0.30g

水                             加至100mL

称取处方量的中链油、卵磷脂与TPGS置于小烧杯中，70℃水浴中 高速分散机14000l/min下搅拌使其分散溶解，然后加入处方量的AZTP继 续搅拌使其溶解；另将处方量的甘油与6.0mL水置于同温度的水浴中磁力 搅拌下溶解，作为水相；在分散机14000l/min搅拌下，分次将水相缓慢加 入到油相中，然后在10000l/min下分散15min，冷却至室温后，加水定容 至30mL，即得初乳。将初乳用微射流仪以70psi压力均质8次，灌装，充 氮气，加塞，加铝盖密封，流通蒸汽灭菌30min，即得。

药物动力学及体内分布

取昆明种小白鼠72只，随机分为2组，按30mg·kg-1剂量分别尾静脉 注射AZT溶液剂、AZTP普通纳米乳剂和Gal-AZTP纳米乳剂，于1、5、 10、15、20、30、40和60min(每点3只小鼠)经眼眶静脉取血，脱臼处 死后取出肝，用生理盐水洗净，滤纸吸干，称重，取0.1g经匀浆，沉淀蛋 白后，进行HPLC分析，测定齐多夫定的浓度。血和肝中的药物浓度-时 间曲线见附图3。

实施例7齐多夫定棕榈酸酯肝靶向脂质体的制备及体内分布

脂质体是一种非常有前景的药物传递载体，其双分子层结构类似细胞 膜，具有良好的细胞亲和性和组织相容性。胆固醇是构成脂质体膜的基础 物质，本发明的新型肝靶向辅料含胆固醇或脂质端基，可以很容易插入脂 质体磷脂双分子层膜中，D-半乳糖端基在脂质体表面伸出，将制备的含药 脂质体导向肝脏实质细胞，使药物浓集于肝，有利于清除残留于肝脏中的 HIV病毒，提高治疗效果。

AZTP脂质体的制备

处方组成：

AZTP/mg                        60

Epikuron 170/mg                1000

胆固醇/mg                      125

肝靶向辅料/mg                  适量

5mmol·L-1PBS(pH7.0)           加至20mL

乙醇注入法将处方量的磷脂、胆固醇、肝靶向辅料与AZTP(药脂比为 1∶16.7)溶于适量无水乙醇中，以注射器缓慢滴加乙醇溶液于50℃恒温 磁力搅拌的PBS(5m mol·L-1，pH7.0，按中国药典2000版二部附录XV D 配制)中，搅拌5min，之后将温度下调至40℃继续搅拌，孵化10min。 将制得的脂质体以上述PBS定容。冷却至室温后，于细胞破碎仪的探头下 超声分散，功率为600w×8min(工作10s，间歇10s)。最后经0.8、0.45 和0.22μm微孔滤膜依次整粒，得AZTP脂质体，备用。

药物动力学及体内分布

取昆明种小白鼠72只，随机分为2组，按30mg·kg-1剂量分别尾静脉 注射AZT溶液剂、AZTP普通脂质体和Gal-AZTP脂质体，于1、3、5、7、 10、15、20和30min(每点3只小鼠)经眼眶静脉取血，脱臼处死后取出 肝，用生理盐水洗净，滤纸吸干，称重，取0.1g经匀浆，沉淀蛋白后，进 行HPLC分析，测定齐多夫定的浓度。血和肝中的药物浓度-时间曲线见 附图4。