【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は，血液凝固時間を測定するための乾燥試薬及び乾燥材料に関する。

【０００２】

【従来の技術】活性化部分トロンボプラスチン時間（以下、ＡＰＴＴと略す。）は，内因系の血液凝固能の異常・正常を調べる検査、或は患者に投与したヘパリン等の抗凝固剤のモニタリング検査として測定されているものである。 即ち、ＡＰＴＴは、血友病患者のスクリーニング検査及び緊急検査として広く測定されている検査項目である。

【０００３】従来のＡＰＴＴ測定法としては、溶液状のＡＰＴＴ試薬を用いる方法と乾燥した形のＡＰＴＴ試薬を用いる方法との２種の方法に大別される。

【０００４】溶液状のＡＰＴＴ試薬を用いる方法とは、
予備加温しておいたＡＰＴＴ試薬溶液と血漿とを等量混合し、該混合液を加温した後、等量の予備加温しておいた塩化カルシウム溶液を加えて凝固時間を測るものである。 該測定方法に用いられているＡＰＴＴ試薬溶液は、
部分トロンボプラスチン及び活性化剤とが、任意の緩衝液中に含有されている形となっている。 尚、該測定方法の終点は、透過光の減衰を検知する光学的測定或は粘度上昇を検知する物理学的測定で見いだす方法がとられている。 該測定方法でのＡＰＴＴとは、塩化カルシウム溶液を添加してから前出の終点までの時間を指す。 この測定方法及び測定方法に用いられるＡＰＴＴ試薬は、広く世の中に受け入れられている。 しかし、溶液状のＡＰＴ
Ｔ試薬を用いるＡＰＴＴ測定方法は、試薬準備に時間がかかること、ＡＰＴＴ試薬に血漿を添加・混合して予備加温しなければならないこと等から、世の中で望まれている緊急検査に対応できない欠点があった。 さらに、該ＡＰＴＴ試薬溶液中に含有されている活性化剤が不溶性で経時的に沈澱するため、長時間連続的にＡＰＴＴ測定する場合、一定時間ごとにＡＰＴＴ試薬を攪拌し活性化剤を分散しなければならない欠点があった。

【０００５】一方、乾燥した形のＡＰＴＴ試薬を用いる方法は、近年になって開発されたもので、特表平３−５
０４０７６号公報等で示されている方法が挙げられる。
該測定方法に用いられる乾燥した形のＡＰＴＴ試薬（以下、ＡＰＴＴ乾燥試薬と略す。）は、任意のＡＰＴＴ試薬溶液と塩化カルシウム水溶液とを混合し、さらに該混合液に磁性粒子と凍結乾燥保護剤としての牛血清アルブミンを添加した溶液を反応スライドに一定量分注し、その後、凍結乾燥したものである。 尚，特表平３−５０４
０７６号公報においては、ＡＰＴＴ乾燥試薬中に含有させる活性化剤として使用されている物質は、シリカ粒子のみである。 該乾燥試薬を用いた測定方法は、ＡＰＴＴ
乾燥試薬を任意の反応保持手段上に置き，次にＡＰＴＴ
乾燥試薬に一定量の血漿を加え、その直後に振動磁場と静止永久磁場の組合せをかけ、該ＡＰＴＴ乾燥試薬中に含有される磁性粒子を運動させるところに特徴がある。
尚、該測定方法の終点は、ＡＰＴＴ乾燥試薬内の粘度上昇で磁性粒子の動きが鈍ることを利用し、その磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニタ−する方法で見いだされている。 従って、該測定方法のＡＰＴＴとは、ＡＰＴ
Ｔ乾燥試薬に血漿を添加してから前出の終点までの時間を指す。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】上記に示したＡＰＴＴ
乾燥試薬を用いるＡＰＴＴ測定法は、溶液状のＡＰＴＴ
試薬を用いた測定方法の欠点は克服されたものの、血液凝固第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子に対する感受性が低いため内因系血液凝固能（血友病）の正常・異常の区別がつきにくいことや、ＡＰＴＴ乾燥試薬内の粘度上昇に対応する磁性粒子の運動シグナルの減衰強度が強くないため該乾燥試薬の製造条件のわずかな変化により終点を見いだせない場合が生じるという欠点があった。

【０００７】そこで、上記従来技術の欠点を補う新しい技術、即ち、血液凝固第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子に対する感受性が高く、且つ磁性粒子の運動シグナルの減衰強度が強いＡＰＴＴ乾燥試薬の開発が望まれていた。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記技術課題を解決すべく鋭意研究を行ってきたところ、磁性粒子の運動シグナルの減衰強度がＡＰＴＴ乾燥試薬中の活性化剤の種類に依存していることを見いだし、本発明を完成し、ここに提案するに至った。

【０００９】即ち、本発明は、部分トロンボプラスチン，エラジン酸，塩化カルシウム及び磁性粒子を含有してなることを特徴とする血液凝固時間測定乾燥試薬（以下ＡＰＴＴ測定乾燥試薬という）である。 他の発明は、
部分トロンボプラスチン，エラジン酸，塩化カルシウムを含有してなることを特徴とする血液凝固時間測定乾燥材料（以下ＡＰＴＴ測定乾燥材料という）である。

【００１０】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の調製方法は、特に限定されないが、通常、部分トロンボプラスチンとエラジン酸を任意の緩衝液に懸濁させ、次に塩化カルシウム水溶液を添加・混合し、さらに該混合液に磁性粒子と必要に応じて凍結乾燥保護剤とを添加した最終溶液を任意の反応スライドに一定量分注し、凍結後、凍結乾燥する方法、あるいは最終溶液を任意の反応スライドに一定量分注し、風乾させる方法が一般的に採用される。

【００１１】上記の調製方法において使用する反応スライドは、ＡＰＴＴ測定時、ＡＰＴＴ測定乾燥試薬内の粘度上昇を磁性粒子の運動シグナルの減衰として光学的にモニターできる反応スライドであれば、特に限られるものではない。 例示すると、図７及び図８に示したような反応スライドが挙げられる。 図７は、反応スライドを上方から見た図である。 図７の点線で囲んだ部分が、ＡＰ
ＴＴ測定乾燥試薬を調製するための最終溶液の分注口と血漿添加口とからなる主要部である。 主要部の構造を詳しく示したのが、図８である。 白色のポリエステル板Ｃ
にまず、透明色のポリエステル板Ｂを貼合わせ、次に、
貼合わせた透明色のポリエステル板Ｂの上にさらに透明色のポリエステル板Ａを貼合わせて主要部を構成する。
ＡＰＴＴ測定乾燥試薬用最終溶液は、図７に示す分注口から注入され、Ｄの部分に該最終溶液が充填される。 この種の反応スライドを使用した場合、通常上記のＡＰＴ
Ｔ測定乾燥試薬用最終溶液を２０〜３０μｌ分注する。

【００１２】以下に述べるＡＰＴＴ測定乾燥試薬中の各構成成分の含量は、特に断わりがない限り、図７及び図８に示した反応スライドを使用して２０μｌ分注し、次いで乾燥した場合のスライド１枚当りの重量を示す。

【００１３】本発明に用いる部分トロンボプラスチンは、ホスファチジルエタノールアミン，ホスファチジルコリン等数種のリン脂質の混合物であり、セファリンと呼ばれるものである。 この物質はウサギ脳，牛脳，ダイズ等からの抽出物であるが、本発明においては、その由来は限定されない。 ＡＰＴＴ測定乾燥試薬に含有される部分トロンボプラスチン含量は、特に限定されず、通常２×１０ ^ー10 ｇ〜２×１０ ^ー4 ｇの範囲で選べばよいが、
２×１０ ^ー8 ｇ〜２×１０ ^ー6 ｇの範囲が好適である。

【００１４】ＡＰＴＴ測定乾燥試薬に含有されるエラジン酸の含量は、２×１０ ^ー11 ｇ〜２×１０ ^ー2 ｇの範囲で選べばよいが、１×１０ ^ー8 ｇ／〜１×１０ ^ー5 ｇの範囲が好適である。 ところで、上記部分トロンボプラスチン及びエラジン酸は、両者を緩衝液中に含有したＡＰＴＴ試薬水溶液として一般に販売され容易に入手できるので、
これらを用いるのが簡便である。

【００１５】ＡＰＴＴ測定乾燥試薬に含有させる塩化カルシウムの含量は、１．７×１０ ^ー5 ｇ〜６．６×１０ ^ー5
ｇの範囲で選べば良いが、２．２×１０ ^ー5 ｇ〜４．４×
１０ ^ー5 ｇ範囲が好適である。

【００１６】本発明に用いる磁性粒子は、公知のものが何等制限なく使用できる。 例えば、四三酸化鉄粒子、三二酸化鉄粒子、鉄粒子、コバルト粒子、ニッケル粒子、
酸化クロム粒子等が挙げられるが、得られる磁性粒子の運動シグナルの強度の点で四三酸化鉄の微粒子が好適に使用される。

【００１７】磁性粒子の粒子径は特に限定されず、通常平均粒子径０．０１〜１０μｍのものから選べば良いが、０．１〜３μｍの平均粒子径のものが推奨できる。
ＡＰＴＴ測定乾燥試薬に含有される磁性粒子の量は、特に限定されず、通常２×１０ ^ー6 ｇ〜２×１０ ^ー4 ｇの範囲で選べば良いが、２×１０ ^ー5 ｇ〜１．２×１０ ^ー4 ｇの範囲が好適である。

【００１８】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬には，必要に応じて凍結乾燥保護剤を添加，使用しても良い。 代表的なものを例示すると、牛血清アルブミン；Ｔｗｅｅｎ
８０、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００等のノニオン系の界面活性剤；ｇｌｙｃｉｎｅ、ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｕｔａｍａ
ｔｅ等のアミノ酸；ｇｌｕｃｏｓｅ、ｌａｃｔｏｓｅ等の糖などが挙げられる。

【００１９】又、ＡＰＴＴ測定乾燥試薬用最終溶液の調製に使用される緩衝液は、ｐＨ６．０〜ｐＨ８．０の間で緩衝作用があるものであれば特に限定されない。 例示すれば、２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．３５）又は２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）等が好適なものとして挙げられる。

【００２０】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の凍結方法は特に限定されない。 例示すると、ＡＰＴＴ測定乾燥試薬用最終溶液を図７に示した分注口から反応スライドに分注した後、該反応スライドをドライアイスや液体窒素で瞬間凍結する等の一般的な凍結方法が使用できる。

【００２１】又、該ＡＰＴＴ測定乾燥試薬の凍結乾燥方法も特に限定されないが、前出の凍結した反応スライドを真空状態で−３０℃から室温まで７時間から１２時間かけて直線的に温度上昇させる方法が好ましい。

【００２２】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬は、任意の反応保持手段上に置き、次いで該試薬に一定量の血漿を加え、その直後に振動磁場と静止永久磁場の組合せをかけ、試薬中に含有される磁性粒子を運動させ、そして、
その磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニターして終点を見いだす方法でＡＰＴＴを測定できる。

【００２３】上記のＡＰＴＴ測定方法に使用できる装置を例示すると、商品名ＣＧ−０１［（株）Ａ＆Ｔ販売］，商品名ＣＯＡＧ−１［和光純薬工業（株）販売］
等が挙げられる。

【００２４】他の発明である、部分トロンボプラスチン，エラジン酸，塩化カルシウムを含有してなることを特徴とするＡＰＴＴ測定乾燥材料の調製方法も特に限定されない。

【００２５】通常、部分トロンボプラスチンとエラジン酸を任意の緩衝液に懸濁させ、次に塩化カルシウム水溶液を添加・混合し、さらに該混合液に必要に応じて凍結乾燥保護剤を添加、混合した最終溶液を任意の反応カップに一定量分注し、凍結後、凍結乾燥する方法、あるいは該最終溶液を任意の反応カップに一定量分注し、風乾させる方法が一般的である。

【００２６】該ＡＰＴＴ測定乾燥材料は、前述のごとく、予め溶液状態で磁性粒子を含ませた後に乾燥することによりＡＰＴＴ測定乾燥試薬となり得るが、この測定乾燥材料自体とスチールボールを組み合わすことによっても以下に示すごとくＡＰＴＴの測定が可能となる。

【００２７】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥材料を使用しての測定方法を例示する。 ＫＣ−４Ａ（アメルング社製）
の反応カップ中に前述の必須成分からなるＡＰＴＴ測定乾燥材料を調製する。 次いで該乾燥材料上にスチールボール（バクスター社製）を入れた後、血漿を添加する。
血漿を添加してからスチールボールが動き出すまでの時間をＡＰＴＴとして測定する。

【００２８】上記ＡＰＴＴ測定乾燥材料に含有される部分トロンボプラスチン含量は、特に限定されず、通常１
×１０ ^ー9 ｇ〜２×１０ ^ー3 ｇの範囲で選べばよいが、１×
１０ ^ー7 ｇ〜２×１０ ^ー5 ｇの範囲が好適である。

【００２９】同じく上記ＡＰＴＴ測定乾燥材料に含有されるエラジン酸の含量は、１×１０ ^ー10 ｇ〜２×１０ ^ー1
ｇの範囲で選べばよいが、５×１０ ^ー8 ｇ〜１×１０ ^ー4 ｇ
の範囲がに好適である。

【００３０】また、上記ＡＰＴＴ測定乾燥材料に含有される塩化カルシウムの含量は、８×１０ ^ー5 ｇ〜６．６×
１０ ^ー4 ｇの範囲で選べばよいが、１．１×１０ ^ー4 ｇ〜
４．４×１０ ^ー4 ｇの範囲が好適である。

【００３１】その他の製造条件等は、前出のＡＰＴＴ測定乾燥試薬と同じ条件が適用できる。

【００３２】このＡＰＴＴ測定乾燥材料を用いることにより、従来の溶液法ＡＰＴＴ測定装置をそのまま使用して、しかしながら予備加温などの面倒な操作をすることなしにＡＰＴＴを測定することが可能となった。

【００３３】

【発明の効果】本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬を用いた場合、現行のＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合より血液凝固第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子に対する感受性が高い結果が得られ、これによって内因系血液凝固能（血友病）の正常・異常の区別が明確になった。

【００３４】又、溶液状のＡＰＴＴ試薬を用いてＡＰＴ
Ｔを測定した結果と本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬を用いてＡＰＴＴを測定した結果との相関が、従来のＡＰＴ
Ｔ乾燥試薬の場合よりよくなり、より信頼性のある測定を可能ならしめたさらに、本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬は、ＡＰＴＴ測定時の試薬内の粘度上昇に対応する磁性粒子の運動シグナルの減衰強度が現行のＡＰＴＴ乾燥試薬よりもかなり強いため終点の検知が明確となった。
従って、現行のＡＰＴＴ乾燥試薬のようにわずかな製造条件の変化によって終点が検知できなくなるような事態を防止できる。

【００３５】又、本発明のＡＰＴＴ測定乾燥材料を、例えば溶液法ＡＰＴＴ測定装置（商品名ＫＣ−４Ａ、アメルング社製）の試薬として用いた場合でも、通常の溶液状のＡＰＴＴ試薬を用いてＡＰＴＴを測定した結果と該ＡＰＴＴ測定乾燥材料を用いてＡＰＴＴを測定した結果に相関が認められた。 これによって、このＡＰＴＴ測定乾燥材料を用いれば、溶液法ＡＰＴＴ測定装置をそのまま使用して予備加温等の面倒な試薬の準備操作をすることなしにＡＰＴＴ測定が可能となった。

【００３６】

【実施例】本発明を一般的に説明してきたが、以下の具体的な実施例を参照することによりさらに理解できる。
ここに示す実施例は説明の目的だけのものであり、特記しない限り限定の意図は有しない。

【００３７】実施例１ 磁性粒子の運動シグナルの減衰強度の比較 乾燥試薬を使用してＡＰＴＴを測定する装置としてＣＧ
−０１［（株）Ａ＆Ｔ販売］を用い、乾燥試薬としては、従来のシリカ粒子を活性化剤としたＡＰＴＴ乾燥試薬（以下、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬と略す）と、活性化剤をセライトとしたＡＰＴＴ乾燥試薬（以下、セライトＡ
ＰＴＴ乾燥試薬と略す）と、本発明の活性化剤をエラジン酸としたＡＰＴＴ測定乾燥試薬の３種類として、各乾燥試薬の磁性粒子の運動シグナルの減衰強度を比較した。

【００３８】上記本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の調製は、以下のように行った。 活性化剤としてエラジン酸を使用したＡＰＴＴ試薬溶液［Ａｃｔｉｎ試薬（デイド社製）］と３０ｍＭＣａＣｌ2 水溶液とを１：１に混合し、該混合液に最終濃度０．０３５％になるようにＴｗ
ｅｅｎ８０（和光純薬製）を添加混合した。 さらに該混合液に最終濃度５ｍｇ／ｍｌになるように磁性粒子（レアメタリック社製）を添加懸濁して、ＡＰＴＴ乾燥試薬用最終溶液とした。 該最終溶液２５μｌを図７に示す反応スライドに分注した。 該反応スライドを液体窒素で瞬間凍結し、凍結後、凍結乾燥することでＡＰＴＴ測定乾燥試薬を調製した。 凍結乾燥の条件は、真空状態で、−
３０℃から１５℃まで７時間かけて直線的に上昇させる方法で行った。

【００３９】又、活性化剤をセライトとしたセライトＡ
ＰＴＴ乾燥試薬は、以下の様に調製した。 活性化剤としてセライトを使用したＡＰＴＴ試薬溶液［プラテリンプラスアクチベータ試薬（ワナー・ランバート社製）］と２５ｍＭＣａＣｌ2 溶液とを１：１に混合し、該混合液に最終濃度３ｍｇ／ｍｌになるように牛血清アルブミン（シグマ社製）を添加混合し、さらに該混合液に最終濃度５ｍｇ／ｍｌになるように磁性粒子（レアメタリック社製）を添加懸濁して、ＡＰＴＴ乾燥試薬用最終溶液とした。 該最終溶液２５μｌを上と同じ反応スライドに分注した。 該反応スライドの凍結・凍結乾燥条件は、前出のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の方法と同様な方法で行った。

【００４０】次に、活性化剤をシリカ粒子とした現行Ａ
ＰＴＴ乾燥試薬は、以下のように調製した。 活性化剤としてシリカ粒子を使用したＡＰＴＴ試薬溶液（パシフィック・ヘモスタシス社製）と２５ｍＭＣａＣｌ2 溶液とを１：１に混合し、該混合液に最終濃度３ｍｇ／ｍｌになるように牛血清アルブミン（シグマ社製）を添加混合した。 さらに該混合液に最終濃度５ｍｇ／ｍｌになるように磁性粒子（レアメタリック社製）を添加懸濁して、
ＡＰＴＴ乾燥試薬用最終溶液とした。 該ＡＰＴＴ乾燥試薬用最終溶液２５μｌを同じく反応スライドに分注した。 該反応スライドの凍結・凍結乾燥条件も、前出のＡ
ＰＴＴ測定乾燥試薬の方法と同様に行った。

【００４１】比較方法は、ＡＰＴＴ測定装置ＣＧ−０１
に現行ＡＰＴＴ乾燥試薬、セライトＡＰＴＴ乾燥試薬、
又は本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬をセットし、２５μ
ｌのヒト血漿を添加した後、各試薬から得られる磁性粒子の運動シグナルを光学的にモニターすることで行った。

【００４２】ヒト血漿を添加後の磁性粒子の運動シグナルの経時的変化を見たのが、図１である。 Ｅのグラフは、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合のグラフであり、Ｆのグラフは、セライトＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合のグラフであり、Ｇのグラフは、本発明のＡＰＴＴ
測定乾燥試薬を用いた場合のグラフである。

【００４３】図１から容易に判るように、セライトＡＰ
ＴＴ乾燥試薬を用いた場合は、磁性粒子の運動シグナルの経時的変化が試薬中の粘度上昇に対応していない。 残りの２種の乾燥試薬は、磁性粒子の運動シグナルの経時的変化が試薬中の粘度上昇に対応している。 そして、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合より本発明のＡＰＴＴ
測定乾燥試薬を用いた場合の方が、血液凝固に伴う磁性粒子の運動シグナルの減衰強度が非常に強いことが明確に読み取れる。 減衰強度が強いということは、終点が明瞭になることを意味し、正確なＡＰＴＴの測定を可能とする。

【００４４】実施例２ 第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子に対する感受性の比較 図１に示した磁性粒子の運動シグナルの強さの経時変化グラフに対して、一次微分処理をし、該一次微分グラフのピークを終点とする方法で、ＡＰＴＴを算出した。

【００４５】それを示したのが、図２である。 図２で、
血漿を添加してからＨ点までの時間をその血漿のＡＰＴ
Ｔとした。

【００４６】上記の解析方法を使用して、現行ＡＰＴＴ
乾燥試薬と本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の血液凝固第ＶＩＩＩ因子と第ＩＸ因子に対する感受性を比較した。

【００４７】比較方法は、以下のように行った。 まず、
正常血漿と第ＶＩＩＩ因子欠乏血漿（いずれもベーリング社製）を各々表１に示す量混合し、第一欄に示す各種第ＶＩＩＩ因子含有率の血漿を１００μｌずつ人工的に作成した後、該血漿を使用して、前出の測定方法及び解析方法でＡＰＴＴを算出した。 そして、Ｘ軸を第ＶＩＩ
Ｉ因子含有率、Ｙ軸を算出したＡＰＴＴとしてグラフを書き、そのグラフを比較することで行った。 第ＩＸ因子に対する感受性も同様な方法で比較した。

【００４８】

【表１】

【００４９】図３に第ＶＩＩＩ因子に対する感受性の比較を示した。 図３のＩが、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合のグラフで、Ｊが、ＡＰＴＴ測定乾燥試薬を用いた場合のグラフである。 又、図４に第ＩＸ因子に対する感受性の比較を示した。 図４のＫが、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合のグラフで、Ｌが、ＡＰＴＴ測定乾燥試薬を用いた場合のグラフである。

【００５０】図３及び図４を見てわかるように、現行Ａ
ＰＴＴ乾燥試薬は、因子含有率２０％以下でないと、有意なＡＰＴＴの延長は見られないが、本発明のＡＰＴＴ
測定乾燥試薬は、５０％以下で有意なＡＰＴＴの延長が見られる。 従って、本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬は現行ＡＰＴＴ乾燥試薬より第ＶＩＩＩ因子及び第ＩＸ因子に対する感受性が増し、それに伴い、内因系の血液凝固能（血友病）の正常・異常の区別がより明確になった。

【００５１】実施例３ 溶液状のＡＰＴＴ試薬と、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬または本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬との相関の比較 ヒト血漿２２検体を用い、溶液状のＡＰＴＴ試薬を使用してＡＰＴＴを測定した結果と上記二種の乾燥試薬を使用してＡＰＴＴを測定した結果との相関を比較した。

【００５２】溶液状のＡＰＴＴ試薬を使用してのＡＰＴ
Ｔの測定は、試薬・測定機器（ＡＣＬ３００）ともインスツルメンテーション・ラボラトリー社製のもので、能書に示された通りの方法で測定した。

【００５３】比較方法は、Ｘ軸にＡＣＬ３００でのＡＰ
ＴＴ測定値、Ｙ軸に乾燥試薬を用いて測定したＡＰＴＴ
測定値をとって、相関図を書き、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬の相関図とＡＰＴＴ測定乾燥試薬の相関図とを比較することで行った。

【００５４】尚、乾燥試薬を用いた場合のＡＰＴＴ測定方法及び解析方法は、実施例２と同様に行った。

【００５５】図５に、ＡＣＬ３００でのＡＰＴＴ測定値（溶液法）と現行ＡＰＴＴ乾燥試薬の測定値の相関図を示した。

【００５６】又、図６に、ＡＣＬ３００でのＡＰＴＴ測定値（溶液法）とＡＰＴＴ測定乾燥試薬の測定値の相関図を示した。

【００５７】図５と図６を比較すると、現行ＡＰＴＴ乾燥試薬より本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬の方が、感度が高く、且つＡＣＬ３００による溶液法との相関性も高いことが明確である。

【００５８】実施例４ 溶液状のＡＰＴＴ試薬と、本発明のＡＰＴＴ測定乾燥材料またはシリカ粒子系ＡＰＴＴ
乾燥材料との相関 ＫＣ−４Ａ（アメルング社製）に適用するＡＰＴＴ測定乾燥材料は以下のように調製した。

【００５９】活性化剤としてエラジン酸を使用したＡＰ
ＴＴ試薬溶液［Ａｃｔｉｎ試薬（デイド社製）］と３０
ｍＭ ＣａＣｌ2水溶液とを１：１に混合し、該混合液に最終濃度０．０３５％になるようにＴｗｅｅｎ８０（和光純薬製）を添加・混合し、ＡＰＴＴ乾燥試薬用最終溶液とした。 該最終溶液２００μｌを、反応カップ（バクスター社製）に分注した。 該反応カップを液体窒素で瞬間凍結し、凍結後、凍結乾燥することでＡＰＴＴ測定乾燥材料を調製した。 凍結乾燥の条件は、真空状態で、−
３０℃から１５℃まで７時間かけて直線的に上昇させる方法で行った。 測定方法は、該ＡＰＴＴ測定乾燥材料をＫＣ−４Ａにセット後、スチールボール（バクスター社製）を入れ、次いで血漿２００μｌを添加してからスチールボールが動き出す時間をＡＰＴＴとする方法を採用した。

【００６０】溶液状のＡＰＴＴ試薬を使用したＡＰＴＴ
の測定は、上述のＡｃｔｉｎ試薬及びＡＰＴＴ測定装置としてＫＣ−４Ａ（アメルング社製）を使用して通常の方法で行った。 又、比較例として活性化剤をシリカ粒子としたＡＰＴＴ乾燥材料も作成した。 即ち、活性化剤としてシリカ粒子を使用したＡＰＴＴ試薬溶液（パシフィックヘモスタシス社製）と２５ｍＭＣａＣｌ2 溶液とを１：１に混合し、該混合液に最終濃度３ｍｇ／ｍｌになるように牛血清アルブミン（シグマ社製）を添加・混合し、ＡＰＴＴ乾燥材料用最終溶液とした。

【００６１】該最終溶液を用いての凍結乾燥方法及び得られたＡＰＴＴ乾燥材料を用いての測定方法は、前出の方法と同様な方法を用いて行った。

【００６２】ヒト血漿５検体を用い、得られるＡＰＴＴ
測定値の相関を見たのが表２である。

【００６３】表２から活性化剤をシリカ粒子としたＡＰ
ＴＴ乾燥材料を使用するＡＰＴＴ測定方法と溶液法によるＡＰＴＴ測定方法との相関性は低いが、本発明の活性化剤をエラジン酸としたＡＰＴＴ測定乾燥材料を使用するＡＰＴＴ測定方法と溶液法によるＡＰＴＴ測定方法との相関性は高いことが明白である。

【００６４】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】 血漿を添加してからの磁性粒子の運動シグナルの強さの経時変化を示した図である。

【図２】 ＡＰＴＴ測定乾燥試薬を使用してＡＰＴＴを測定する場合の終点解析方法を示す図である。

【図３】 図２の終点解析方法を使用しての各種乾燥試薬の第ＶＩＩＩ因子感受性を比較した図である。

【図４】 図２の終点解析方法を使用しての各種乾燥試薬の第ＩＸ因子感受性を比較した図である。

【図５】 溶液法ＡＰＴＴ測定値と現行ＡＰＴＴ乾燥試薬を用いた場合のＡＰＴＴ測定値の相関図である。

【図６】 溶液法ＡＰＴＴ測定値と本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬を用いた場合のＡＰＴＴ測定値の相関図である。

【図７】 本発明のＡＰＴＴ測定乾燥試薬によるＡＰＴ
Ｔ測定に使用する代表的な反応スライドの例である。

【図８】 図７の反応スライドの部分分解図である。

【符号の説明】

Ａ 透明樹脂板 Ｂ 透明樹脂板 Ｃ 白色樹脂板 Ｄ 試薬充填部