一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法
阅读：569发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种含有间充质干细胞培养上清液的抗 糖化 面膜制备方法，包括如下步骤：制取间充质干细胞培养上清液，制备基底液，待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌，含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其面膜液包括：由按 质量 比计的0.1-5％间充质干细胞培养上清液和95-99.9％的基底液组成。本发明，将间充质干细胞培养上清液与抗糖化功效成分相结合，取得比仅使用间充质干细胞培养上清液或 白藜芦醇 、肌肽、硫辛酸等抗糖化功效成分更佳的 皮肤 改善效果，增加皮肤弹性、提亮肤色和光泽度、改善皮肤屏障功能、 锁 水 保湿、并改善皱纹及皮肤纹理等，从内部细胞层面解决皮肤问题。，下面是一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
(2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、
0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分经高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-
1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、
0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
(3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。
2.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。
3.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓。
4.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养4-7天后，更换新的完全培养基再培养2-3天，达到80-90％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
5.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-7.2。
6.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，
4 2
其特征在于：所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于1.8×10/cm。
7.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。
8.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。
9.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按质量比计的0.1-5％间充质干细胞培养上清液和95-99.9％的基底液组成。
10.根据权利要求7所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于：所述基底液包括A组分、B组分、C组分：
所述A组分包括按质量百分比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-
5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、
0.1-0.3％黄原胶和余量水；
所述B组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水；
所述C组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-
1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水。
一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备
方法
技术领域
背景技术
[0002] 随着社会发展和人们生活水平的提高，人们对自身的保养护肤更加重视，尤其是女性，而目前市场上的化妆品品种繁多，功效差异较大，消费者难以分辨。一些精细化工护肤品为追求美白效果，添加铅汞等对对人体肌肤有害的物质，造成皮肤炎症及感染问题。另一方面，目前化妆品产品中含有生物活性物质较少，不能从根本上改善表皮细胞的生长状态及新陈代谢，对皮肤的修复作用有限。
[0003] 随着人的年纪增长，细胞活性减弱，使体内代谢机能变差，从而导致老化、糖化等种种现象。糖化主要是由于人体所摄食的多余糖分，会与体内的蛋白质结构结合，产生老化物质——糖化终产物(AGEs)，其会介入人体代谢，使蛋白结构交联，使肌肤难以修复，造成肌肤肤色发黄暗沉、松弛、皱纹增多，产生衰老的迹象。糖化还会导致泌油量大，毛孔粗大，产生痤疮、皮肤变得粗糙不光滑。抗糖化化妆品，主要使用白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等具有抗氧化、美白功效的成分，达到改善肌肤糖化问题的效果。
[0004] 间充质干细胞是存在于机体的多种组织器官中，是一群具有多向分化潜能的多能干细胞，包括骨髓、脐带、脂肪等来源的间充质干细胞，具有取材方便、易扩增、低免疫源性等特点。现有研究表明间充质干细胞具有组织修复、免疫修复、调节免疫功能等作用，间充质干细胞可分泌多种生长因子，包括表皮生长因子EGF，碱性成纤维生长因子bFGF等。间充质干细胞培养上清液中含有上述生长因子，可显著促进真皮成纤维细胞的增殖，胶原蛋白和弹性蛋白的产生，在化妆品领域具有抗老化潜力。目前培养间充质干细胞，获取间充质干细胞培养上清的方法仍需改进，以满足大量稳定生产的需要。
[0005] 发明人发现现有技术提供的抗糖化产品，尚未有高效的含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜。基于此，本发明提供了一种优于现有抗糖化成分的抗糖化面膜，该抗糖化面膜具有良好的保湿效果，增加皮肤弹性，提高皮肤肤色和光泽度，能明显减少细纹，使皮肤细腻光滑，改善皮肤炎症等，其效果优于单纯添加脂肪间充质干细胞培养上清液或白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等抗糖化成分的面膜，从而完成了本发明。
发明内容
[0006] 本发明的目的在于提供一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
[0007] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：
[0008] (1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
[0009] (2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-
1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
[0010] (3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。
[0011] 优选的，所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。
[0012] 优选的，所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓。
[0013] 优选的，所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养4-7天后，更换新的完全培养基再培养2-3天，达到80-90％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
[0014] 优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-7.2。
[0015] 优选的，所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于1.8×104/cm2。
[0016] 优选的，所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。
[0017] 优选的，所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。
[0018] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按质量比计的0.1-5％间充质干细胞培养上清液和95-99.9％的基底液组成。
[0019] 优选的，所述基底液包括A组分、B组分、C组分：
[0020] 所述A组分包括按质量百分比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水；
[0021] 所述B组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水；
[0022] 所述C组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水。
[0023] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0024] 1.本发明提供的面膜中，含有由间充质干细胞培养上清液和促进保持生物活性的基底液组成。通过合理的制备工艺与配方，面膜液中各组分相互作用、协调增效，实现良好的保湿效果，提高皮肤肤色，能明显减少细纹，使皮肤细腻光滑，改善皮肤炎症等。利用间充质干细胞培养上清液，产生出具有多种生长因子的活性物质，并通过特有的配方提供一种增加皮肤弹性、保湿锁水、抗炎亮肤效果，且安全无任何毒副作用的面膜及制备方法。
[0025] 2.本发明将间充质干细胞培养上清液与抗糖化功效成分相结合，取得比仅使用间充质干细胞培养上清液或白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等抗糖化功效成分更佳的皮肤改善效果，提亮肤色、改善皮肤屏障功能、锁水保湿、并改善皱纹及皮肤纹理等，从内部细胞层面解决皮肤问题。
[0026] 3.本发明改进了现有干细胞培养液培养、收集方法，将原有利用干细胞完全细胞生长液培养至细胞80％-90％融合时，弃掉培养液，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养72小时后，收集无血清培养液的方法改进为将细胞驯化为无血清培养基下正常生长的细胞，按一定数量铺板的条件下，传代培养第二天换液后，可连续收集干细胞培养上清液，且均对成人真皮成纤维细胞有良好的增殖效果，不影响其活性。培养间充质干细胞过程使用经粘连蛋白预处理的培养瓶进行培养，可实现1:7-1:10倍细胞扩增，可满足大量稳定生产的需求。附图说明
[0027] 图1为本发明中连续收取人脂肪间充质干细胞培养上清液对人真皮成纤维细胞(HDF-a)的增殖效果图；
[0028] 图2为本发明中皮肤水分结果图；
[0029] 图3为本发明中经表皮水分流失率结果图；
[0030] 图4为本发明中皮肤皱纹结果图；
[0031] 图5为本发明中皮肤肤色结果图；
[0032] 图6为工艺流程图。
具体实施方式
[0033] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0034] 实施例1
[0035] 请参阅图1-6，本发明提供一种技术方案：一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：
[0036] (1)制取间充质干细胞培养上清液：制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，细胞培养容器可以采用细胞培养皿、细胞培养瓶等容器，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
[0037] (2)制备基底液：将包括按质量比计的8％甘油、2％丁二醇、1％1,2-戊二醇、0.2％双丙甘醇、0.5％双甘油、1％蔗糖、0.2％PCA钠、0.2％PEG-60氢化蓖麻油、0.2％黄原胶和余量水的A组分高速混合器加热到80℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到35℃时投入包括按质量比计的0.2％柠檬酸、0.2％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.5％苯氧乙醇、0.3％甜菜碱、0.15％羟乙基纤维素、0.025％肌肽、0.03％硫辛酸、0.0005％白藜芦醇、0.2％葡萄籽提取物、0.15％野大豆提取物、0.01％积雪草提取物、0.25％水解蚕丝、0.01％寡肽-5、0.015％水解酵母提取物、0.14％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
[0038] (3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅。
[0039] 具体的，所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。
[0040] 具体的，所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脂肪。
[0041] 具体的，所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养4天后，更换新的完全培养基再培养2天，达到80％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
[0042] 具体的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0。
[0043] 具体的，所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于1.9×104/cm2。
[0044] 具体的，所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。
[0045] 具体的，所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。
[0046] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其面膜液包括：由按质量比计的0.1％间充质干细胞培养上清液和99.9％的基底液组成。
[0047] 具体的，所述基底液包括A组分、B组分、C组分：
[0048] 所述A组分包括按质量百分比计的8％甘油、2％丁二醇、1％1,2-戊二醇、0.2％双丙甘醇、0.5％双甘油、1％蔗糖、0.2％PCA钠、0.2％PEG-60氢化蓖麻油、0.2％黄原胶和余量水；
[0049] 所述B组分包括按质量百分比计的0.2％柠檬酸、0.2％柠檬酸钠和余量水；
[0050] 所述C组分包括按质量百分比计的0.5％苯氧乙醇、0.3％甜菜碱、0.15％羟乙基纤维素、0.025％肌肽、0.03％硫辛酸、0.0005％白藜芦醇、0.2％葡萄籽提取物、0.15％野大豆提取物、0.01％积雪草提取物、0.25％水解蚕丝、0.01％寡肽-5、0.015％水解酵母提取物、0.14％日用香精和余量水。
[0051] 实施例2
[0052] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：
[0053] (1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P15代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
[0054] (2)制备基底液：将包括按质量比计的10％甘油、2％丁二醇、1％1,2-戊二醇、0.2％双丙甘醇、0.5％双甘油、1％蔗糖、0.5％PCA钠、0.2％PEG-60氢化蓖麻油、0.2％黄原胶和余量水的A组分高速混合器加热到80℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到35℃时投入包括按质量比计的0.1％柠檬酸、0.1％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.5％苯氧乙醇、0.3％甜菜碱、0.15％羟乙基纤维素、0.05％肌肽、
0.03％硫辛酸、0.0005％白藜芦醇、0.25％葡萄籽提取物、0.15％野大豆提取物、0.01％积雪草提取物、0.25％水解蚕丝、0.01％寡肽-5、0.015％水解酵母提取物、0.14％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
0.03％硫辛酸、0.0005％白藜芦醇、0.25％葡萄籽提取物、0.15％野大豆提取物、0.01％积雪草提取物、0.25％水解蚕丝、0.01％寡肽-5、0.015％水解酵母提取物、0.14％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
[0055] (3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅。
[0056] 具体的，所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。
[0057] 具体的，所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带。
[0058] 具体的，所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪3
碎成大约1mm的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养5天后，更换新的完全培养基再培养3天，达到85％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
碎成大约1mm的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养5天后，更换新的完全培养基再培养3天，达到85％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
[0059] 具体的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.1。
[0060] 具体的，所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度为3.6×104/cm2。
[0061] 具体的，所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。
[0062] 具体的，所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。
[0063] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其面膜液包括：由按质量比计的0.25％间充质干细胞培养上清液和99.75％的基底液组成。
[0064] 具体的，所述基底液包括A组分、B组分、C组分：
[0065] 所述A组分包括按质量比计的10％甘油、2％丁二醇、1％1,2-戊二醇、0.2％双丙甘醇、0.5％双甘油、1％蔗糖、2％PCA钠、0.2％PEG-60氢化蓖麻油、0.2％黄原胶和余量水；
[0066] 所述B组分包括按质量百分比计的0.1％柠檬酸、0.1％柠檬酸钠和余量水；
[0067] 所述C组分包括按质量百分比计的包括0.5％苯氧乙醇、0.3％甜菜碱、0.15％羟乙基纤维素、0.05％肌肽、0.03％硫辛酸、0.0005％白藜芦醇、0.25％葡萄籽提取物、0.15％野大豆提取物、0.01％积雪草提取物、0.25％水解蚕丝、0.01％寡肽-5、0.015％水解酵母提取物、0.14％日用香精和余量水。
[0068] 实施例3
[0069] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：
[0070] (1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
[0071] (2)制备基底液：将包括按质量比计的5％甘油、4％丁二醇、5％1,2-戊二醇、5％双丙甘醇、5％双甘油、4％蔗糖、3％PCA钠、1％PEG-60氢化蓖麻油、0.3％黄原胶和余量水的A组分高速混合器加热到80℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到35℃时投入包括按质量比计的0.5％柠檬酸、0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.25％苯氧乙醇、1％甜菜碱、1％羟乙基纤维素、1％肌肽、0.1％硫辛酸、1％白藜芦醇、1％葡萄籽提取物、1％野大豆提取物、1％积雪草提取物、1％水解蚕丝、1％寡肽-5、1％水解酵母提取物、0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
[0072] (3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅。
[0073] 具体的，所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。
[0074] 具体的，所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的胎盘。
[0075] 具体的，所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养7天后，更换新的完全培养基再培养3天，达到90％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。
[0076] 具体的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
[0077] 具体的，所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于2.1×104/cm2。
[0078] 具体的，所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。
[0079] 一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按质量比计的5％间充质干细胞培养上清液和95％的基底液组成。
[0080] 具体的，所述基底液包括A组分、B组分、C组分：
[0081] 所述A组分包括按质量比计的5％甘油、4％丁二醇、5％1,2-戊二醇、5％双丙甘醇、5％双甘油、4％蔗糖、3％PCA钠、1％PEG-60氢化蓖麻油、0.3％黄原胶和余量水；
[0082] 所述B组分包括按质量百分比计的0.5％柠檬酸、0.5％柠檬酸钠和余量水；
[0083] 所述C组分包括按质量百分比计的0.25％苯氧乙醇、1％甜菜碱、1％羟乙基纤维素、1％肌肽、0.1％硫辛酸、1％白藜芦醇、1％葡萄籽提取物、1％野大豆提取物、1％积雪草提取物、1％水解蚕丝、1％寡肽-5、1％水解酵母提取物、0.3％日用香精和余量水。
[0084] 效果测试：
[0085] 1.补水与保湿锁水功效评价。
[0086] 1.1测试人群：性别和年龄随机，共24名，随机分为3组每组8人，每组分别测试一种面膜。
[0087] 1.2测试周期：28天。
[0088] 1.3测试样品：实施例1，对比例1(为未添加间充质干细胞培养上清液的仅含实施例一的基底液构成的面膜)，对比例2(为实施例一不添加白藜芦醇、肌肽、硫辛酸抗糖化成分的面膜)，所有样品均4-8℃低温保存。
[0090] 1.5测试仪器：皮肤测试仪MP 580(德国CK公司)及皮肤水分测试探头Corneometer CM 825(德国CK公司)，皮肤经表皮水分流失率测试探头Tewameter TM300(德国CK公司)。
[0091] 1.6测试方法：受试者在测试期间以及测试前一个月内，脸部未使用功能类似护肤品以及化妆品，测试者在测试期间每晚使用测试面膜，面膜需在家用冰箱冷藏保存(4-8℃)。每次测试前受试者使用洗面奶及卸妆水对脸部进行清洁，在测试房间内静坐30分钟，待皮肤与环境达到一致。使用Corneometer CM 825对受试者皮肤表面水分含量进行测试，测试区域为额头及左右脸颊，每个测试区域各测试3次取平均值。使用Tewameter TM 300对受试者皮肤表面进行经表皮水分流失率测试，测试区域为额头和左右脸颊，测试3次取平均值。测试周期为面膜使用前、使用后第一周、第二周、第四周。将皮肤水分与经表皮水分流失率(transepidermal water loss,TEWL)结果对比，皮肤水分数值增加代表皮肤补水效果好，经表皮水分流失率TEWL值，其值越小，水分散失越少，皮肤屏障功能越好，锁水能力越强；反之，皮肤屏障功能受损，锁水能力越弱。
[0092] 1.7测试结果：测试结果如图2和图3所示。由检测结果可知，受试者在使用了实施例1产品后皮肤水分都有明显提升，使用28天后，受试者皮肤的经表皮水分流失率有明显降低，代表本发明的面膜具有良好的补水与保湿锁水功效，具有修复皮肤屏障功能，防止皮肤表皮水的散失作用。相对于对比例1和对比例2的结果可知添加间充质干细胞培养上清液成分和白藜芦醇、肌肽和硫辛酸三种抗糖化成分的面膜有更好补水及皮肤屏障修复功效。
[0093] 2.抗皱功效评价
[0094] 2.1测试人群：性别和年龄随机，共24名，随机分为3组每组8人，每组分别测试一种面膜。
[0095] 2.2测试周期：28天
[0096] 2.3测试样品：实施例1，对比例1(为未添加间充质干细胞培养上清液的仅含实施例一的基底液构成的面膜)，对比例2(为实施例一不添加白藜芦醇、肌肽、硫辛酸抗糖化成分的面膜)，所有样品均4-8℃低温保存。
[0097] 2.4测试条件：测试环境为恒温恒湿测试间，室内保持温度处于20-22℃，湿度处于40-60％。
[0098] 2.5测试仪器：VISIA第七代皮肤检测仪(美国Canfield公司)。
[0099] 2.6测试方法：受试者在测试期间以及测试前一个月内，脸部未使用功能类似护肤品以及化妆品，测试者在测试期间每晚使用测试面膜，面膜需在家用冰箱冷藏保存(4-8℃)。每次测试前受试者使用洗面奶及卸妆水对脸部进行清洁，在测试房间内静坐30分钟，待皮肤与环境达到一致。使用VISIA对受试者面部前面、左面、右面进行拍照，通过VISIA进行分析得到皱纹检测数据，将3次数据取平均值。结果对比，皮肤皱纹绝对数值越低，代表皮肤皱纹数量越少。
[0100] 2.7测试结果：测试结果如图4所示。由检测结果可知，受试者在使用了实施例1的产品后皮肤皱纹都有明显改善，使用28天后，受试者眼角的皱纹有明显减少，代表本发明的抗糖化面膜具有抗皱和修复功效。相对于对比例1和对比例2的结果可知间充质干细胞培养上清液成分配合白藜芦醇、肌肽、硫辛酸抗糖化成分，具有更好的抗皱和修复功效。
[0101] 3.皮肤肤色功效评价：
[0102] 3.1测试人群：性别和年龄随机，共24名，随机分为3组每组8人，每组分别测试一种面膜。
[0103] 3.2测试周期：28天
[0104] 3.3测试样品：实施例1，对比例1(为未添加间充质干细胞培养上清液的仅含实施例一的基底液构成的面膜)，对比例2(为实施例一不添加白藜芦醇、肌肽、硫辛酸抗糖化成分的面膜)，所有样品均4-8℃低温保存。
[0105] 3.4测试条件：测试环境为恒温恒湿测试间，室内保持温度处于20-22℃，湿度处于40-60％。
[0106] 3.5测试仪器：皮肤测试仪MP 580(德国CK公司)及皮肤颜色测试探头Colorimeter CL400(德国CK公司)。
[0107] 3.6测试方法：受试者在测试期间以及测试前一个月内，脸部未使用功能类似护肤品以及化妆品，测试者在测试期间每晚使用测试面膜，面膜需在家用冰箱冷藏保存(4-8℃)。每次测试前受试者使用洗面奶及卸妆水对脸部进行清洁，在测试房间内静坐30分钟，待皮肤与环境达到一致。使用Colorimeter CL400对受试者皮肤肤色进行测试，测试区域为额头及左右脸颊，每个测试区域各测试3次取平均值。测试周期为面膜使用前、使用后第一周、第二周、第四周。将皮肤肤色结果与面膜使用前进行对比，肤色数值提高表示皮肤变白。
[0108] 3.7测试结果：测试结果如图5所示。由检测结果可知，受试者在使用了实施例1的产品后皮肤肤色都有明显改善，使用28天后，受试者肤色明显提升，代表本发明的抗糖化面膜具有改善肤色的功效。相对于对比例1和对比例2的结果可知间充质干细胞培养上清液成分配合白藜芦醇、肌肽、硫辛酸抗糖化成分具有更好的肤色改善效果。
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