用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化试剂盒及其应用
阅读：552发布：2024-01-23
专利汇可以提供用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化试剂盒及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 申请 公开了一种用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化 试剂 盒 及其应用。本申请的核酸纯化的缓冲液包括Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇；Tris-HCl的终浓度为100mmol/L-1mol/L，NaCl的终浓度为1mol/L-5mol/L，NaN3的终浓度为0.02％w/v-1.00％w/v，聚乙二醇的终浓度为1％v/v-30％v/v。本申请的核酸纯化的缓冲液，通过对几种试剂进行组分和配比优化，使得缓冲液可以很好的运用于 磁珠 纯化核酸，提高了磁珠纯化核酸的 质量 。基于本申请的缓冲液的试剂盒，完全可以替代昂贵的进口试剂盒，在保障核酸纯化质量的同时，大大的减小了核酸纯化的研究成本。，下面是用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化试剂盒及其应用专利的具体信息内容。
1.一种用于核酸纯化的缓冲液，其特征在于：包括Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇；所述Tris-HCl的终浓度为100mmol/L-1mol/L，所述NaCl的终浓度为1mol/L-5mol/L，所述NaN3的终浓度为0.02％w/v-1.00％w/v，所述聚乙二醇的终浓度为1％v/v-30％v/v。
2.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于：所述Tris-HCl的终浓度为260mmol/L，所述NaCl的终浓度为1.21mol/L，所述NaN3的终浓度为0.1％w/v，所述聚乙二醇的终浓度为
26.2％v/v。
3.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于：还包括氯化镁、吐温20和十六烷基三甲基溴化铵。
4.根据权利要求3所述的缓冲液，其特征在于：所述氯化镁的终浓度为10mmol/L-
0.5mol/L，所述吐温20的终浓度为质量体积百分比0.1％-5％w/v，所述十六烷基三甲基溴化铵的终浓度为质量体积百分比1％-8％w/v。
5.根据权利要求3所述的缓冲液，其特征在于：所述氯化镁的终浓度为25mmol/L，所述吐温20的终浓度为质量体积百分比1.5％w/v，所述十六烷基三甲基溴化铵的终浓度为质量体积百分比2％w/v。
6.根据权利要求1-5任一项所述的缓冲液，其特征在于：还包含磁珠，利用磁珠对核酸进行纯化。
7.根据权利要求6所述的缓冲液，其特征在于：所述磁珠在缓冲液中的浓度为30×至
100×。
8.根据权利要求6所述的缓冲液，其特征在于：所述磁珠在缓冲液中的浓度为60×。
9.根据权利要求1-8任一项所述的缓冲液在磁珠纯化核酸中的应用。
10.一种含有权利要求1-8任一项所述的缓冲液的核酸纯化试剂盒。
用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化试剂盒及其应用
技术领域
[0001] 本申请涉及核酸纯化试剂领域，特别是涉及一种用于核酸纯化的缓冲液、核酸纯化试剂盒及其应用。
背景技术
[0002] 高纯度、高浓度的核酸样品一直都是分子生物学实验过程中获得良好实验结果的重要条件之一。虽然目前已经有很多种制备单链DNA、双链DNA和RNA的方法；但是适用于所有类型的核酸，并且快速、低成本且高通量的方法并不多，而磁珠纯化方法就是其中之一。
[0003] 磁珠纯化核酸是近年来开发出的一种新型核酸纯化方法，对比以往传统纯化技术，磁珠纯化无需离心或过滤，既可以手工操作，也可以使用自动化工作平台的形式完成。磁珠纯化的效果由磁珠和缓冲液两部分决定。磁珠是一种四氧化三铁微小颗粒载体，制备大小范围通常可以达到100nm-1um之间。磁珠表面可以修饰不同的官能基团从而具有不同的应用功能，例如经过搭载羟基官能团的磁珠可以用于核酸提取，搭载羧基官能团的磁珠可以用于核酸纯化。磁珠缓冲液是整个磁珠纯化的另一关键组成部分，主要作用是使混合液中核酸最大程度与磁珠相结合并且防止磁珠变质过期。
[0004] 随着二代测序技术的迅速普及以及基因测序市场的快速成长，国内的基因测序公司现在基本会选择使用国外进口磁珠纯化试剂盒纯化核酸，磁珠纯化试剂盒最大优势在于可以实现高通量，可以利用自动化平台操作从而摆脱手工纯化，提高效率；而进口磁珠纯化试剂盒的其中一个优势在于，其特殊配方的缓冲液，可以有效的保障核酸纯化的质量。
[0005] 目前国内公司使用的进口核酸纯化试剂盒厂家主要有两家：Axygen和Beckman，这两个厂家基本垄断了整个磁珠纯化试剂盒市场，两家加起来市场占有率高达90％以上。其中Beckman最为著名，旗下的Ampure XP磁珠试剂盒成为业内明星产品，但是其高昂的价格对整个测序行业的生产成本造成很大影响，一定程度上制约了我国基因测序的技术的推广和广泛应用。
[0006] 因此，亟需研究一种新的适用于核酸磁珠纯化的缓冲液，以替换价格高昂的进口产品，打破技术垄断，降低测序成本，进而推动基因测序的研究和应用。发明内容
[0007] 本申请的目的是提供一种新的适用于核酸纯化的缓冲液及其应用，以及基于该缓冲液的核酸纯化试剂盒。
[0008] 为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
[0009] 本申请公开了一种用于核酸纯化的缓冲液，包括Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇；Tris-HCl的终浓度为100mmol/L-1mol/L，NaCl的终浓度为1mol/L-5mol/L，NaN3的终浓度为0.02％w/v-1.00％w/v，聚乙二醇的终浓度为1％v/v-30％v/v。
[0010] 需要说明的是，本申请的缓冲液主要针对磁珠纯化核酸而研制，现有的Ampure XP磁珠试剂盒是运用比较广泛的磁珠纯化核酸试剂盒，但是，其价格昂贵，拔高了生产和研究成本；为此，本申请经过大量的研究和实践发现，通过对磁珠纯化核酸的缓冲液进行优化，可以提高核酸纯化质量，特别是Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇按照本申请所限定的用量比例，可以达到与Ampure XP磁珠试剂盒相当，甚至更好的效果。
[0011] 优选的，Tris-HCl的终浓度为260mmol/L，NaCl的终浓度为1.21mol/L，NaN3的终浓度为0.1％w/v，聚乙二醇的终浓度为26.2％v/v。
[0012] 优选的，本申请的缓冲液还包括氯化镁、吐温20和十六烷基三甲基溴化铵(缩写为CTAB)。
[0013] 优选的，氯化镁的终浓度为10mmol/L-0.5mol/L，吐温20的终浓度为质量体积百分比0.1％-5％w/v，十六烷基三甲基溴化铵的终浓度为质量体积百分比1％-8％w/v。
[0014] 优选的，氯化镁的终浓度为25mmol/L，吐温20的终浓度为质量体积百分比1.5％w/v，十六烷基三甲基溴化铵的终浓度为质量体积百分比2％w/v。
[0015] 需要说明的是，本申请的关键在于将Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇组合成磁珠纯化核酸的缓冲液，而氯化镁、吐温20和CTAB的加入是对缓冲液的进一步优化。其中，氯化镁的镁离子对整个缓冲液体系起到一定的稳定作用，吐温20可以帮助磁珠更好的分散在缓冲液中，而CTAB可以提高核酸回收率。可以理解，在要求相对较低的情况下，也可以不添加氯化镁、吐温20和CTAB，但相应的效果会受到影响。
[0016] 优选的，本申请的缓冲液中还包含磁珠，利用磁珠对核酸进行纯化。
[0017] 需要说明的是，本申请的缓冲液本身是针对磁珠纯化核酸而研究的，而将磁珠直接加入到缓冲液中，可以直接使用，不必另外添加磁珠，特别是在作成试剂盒或者产品出售时，可以方便使用。
[0018] 优选的，磁珠在缓冲液中的浓度为30×至100×。
[0019] 更优选的，磁珠在缓冲液中的浓度为60×。
[0020] 需要说明的是，其中30×、60×和100×表示，磁珠体积与缓冲液总体积之比，即磁珠体积:缓冲液总体积＝1/30、1/60、1/100。
[0021] 本申请的另一面公开了本申请的缓冲液在磁珠纯化核酸中的应用。
[0022] 本申请的再一面公开了一种含有本申请的缓冲液的核酸纯化试剂盒。
[0023] 可以理解，本申请的缓冲液是针对磁珠纯化核酸而设计的，所以其可以用于核酸纯化中，或者用于核酸纯化的试剂盒；至于试剂盒的溶剂形态，例如高浓度溶液或者其它形式，可以根据具体的生产或使用需求而定，在此不做具体限定。
[0024] 由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
[0025] 本申请的核酸纯化的缓冲液，通过对几种试剂进行组分和配比优化，使得缓冲液可以很好的运用于磁珠纯化核酸，提高了磁珠纯化核酸的质量。基于本申请的缓冲液的试剂盒，完全可以替代昂贵的进口试剂盒，在保障核酸纯化质量的同时，大大的减小了核酸纯化的研究成本。附图说明
[0026] 图1是本申请实施例中磁珠纯化核酸的原理展示图；
[0027] 图2是本申请实施例中安捷伦2100生物分析仪对核酸纯化产物的分析结果图，其中左图为Ampure XP核酸纯化产物的分析结果图，右图为本例的缓冲液A的核酸纯化产物的分析结果图；
[0028] 图3-图6是本申请实施例中不同聚乙二醇浓度的缓冲液的核酸纯化产物的2100生物分析仪分析结果图，其中，图3是聚乙二醇终浓度为25％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图4是聚乙二醇终浓度为26％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图5是聚乙二醇终浓度为27％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图6是聚乙二醇终浓度为28％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图。
具体实施方式
[0029] 本申请的核酸纯化的缓冲液，主要是针对现有的进口磁珠纯化试剂盒太昂贵，为了突破这样一种技术壁垒限制而研究的。本申请在进行磁珠纯化核酸之前，具有丰富的核酸纯化经验，例如酚氯仿抽提法、盐析法、玻璃珠法、硅胶柱法等；在这些基础知识背景下，结合磁珠纯化核酸的理化特点，经过长期的试验研究，提出Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇组合制备的缓冲液，能够很好的满足磁珠纯化核酸的使用需求，进一步的，对各组分的用量进行研究，最终得到本申请的特定组分和配比的缓冲液，将其用于磁珠纯化核酸试剂盒，能够达到进口试剂盒相当的效果。
[0030] 需要说明的是，本申请的缓冲液，其关键在于Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇四个组分按照特定的配比组合。可以理解，就各个试剂分开独立来看，并没有什么特殊的，但是，按照本申请特定的配比组合即可达到进口试剂盒相当的效果。
[0031] 本申请的一种实现方式中，将本申请的缓冲液制成BGIMagpure核酸纯化试剂盒，即磁珠纯化核酸试剂盒。该试剂盒能够获得高质量的DNA纯化产物；纯化后的核酸纯度高、无盐离子残留，无需离心或过滤，可以手工操作，也可以使用自动化工作平台以96孔或384孔板的形式完成。试验结果显示，基于本申请的缓冲液的试剂盒，(1)200bp以上的核酸回收率达90％以上，核酸长度最小要求为100bp；(2)有效去除dNTP、引物、引物二聚体、盐离子和其它杂质；(3)纯化后的产物在4摄氏度保存下7天内不会降解；(4)单链或者双链DNA都能得到纯化；(5)长达18个月的有效期；(6)手工操作或者自动化工作站皆可以完成。
[0032] 需要说明的是，本申请的磁珠纯化试剂盒纯化核酸大致原理，如图1所示，是在含有不同片段大小核酸的混合液中加入适量磁珠使磁珠与核酸相结合，再通过磁铁吸附磁珠，去除剩余混合液从而剔除杂质。再通过乙醇进一步清洗磁珠去除剩余杂质后加入洗脱液重新把磁珠上的核酸洗脱回收，最终获得高纯净核酸。其中，使磁珠与核酸相结合需要在一个缓冲液环境下进行，该缓冲液即本申请的研究对象。
[0033] 本申请的磁珠纯化核酸的缓冲液，以及基于该缓冲液的核酸纯化试剂盒，可以应用于PCR体系纯化、酶切和连接反应体系纯化。适合的下游应用包括：PCR、Genotyping(SNP detection)、Sequencing(Sanger and Next generation sequencing)、Cloning、Primer walking等。
[0034] 下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
[0035] 实施例
[0036] 一、材料和设备
[0037] 1.材料
[0038] 本例所使用的原材料均为可通过市购获得的常规产品，如PEG、5M的NaCl、Tris-HCl、Molecular Grade Water、NaN3、MgCl2和CTAB。
[0039] 2.设备
[0040] 工业搅拌器、称量天平、漩涡震荡器、离心机、移液器、量筒、荧光检测仪、酶标仪、生物分析仪、小型离心机、振荡器等。另外还包括一些耗材，如称量纸、试剂勺、搅拌桶、保存管以及广口瓶、枪头、光学EP管、1.5ml EP管、96孔光学板等。这些设备和耗材采用实验室常规使用的设备和耗材即可。
[0041] 二、缓冲液及磁珠纯化液
[0042] 本例的核酸纯化的缓冲液，由Tris-HCl、NaCl、NaN3和聚乙二醇组成，本例具体配置了四个缓冲液用以试验。缓冲液即磁珠纯化液的具体配置方法如下：
[0043] 配制1L缓冲液A：取磁珠110μL，用1mL分子级水洗2次，加入242mL 5M的分子生物级NaCl、130mL 2M的pH 6.5的Tris-HCl、45mL 2％的NaN3，以及83mL分子级水，加入500mL 50％的聚乙二醇(缩写PEG)溶液。缓冲液A的成份及各成份的终浓度为：1.21M NaCl、260mM Tris-HCl、0.09％w/v NaN3、25％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
[0044] 配制1L缓冲液B：取磁珠110μL，用1mL分子级水洗2次，加入242mL 5M的分子生物级NaCl、130mL 2M的pH 6.5的Tris-HCl、45mL 2％的NaN3，以及63mL分子级水，加入520mL 50％的PEG溶液。缓冲液B的成份及各成份的终浓度为：1.21M NaCl、260mM Tris-HCl、
0.09％w/v NaN3、26％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
0.09％w/v NaN3、26％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
[0045] 配制1L缓冲液C：取磁珠110μL，用1mL分子级水洗2次，加入242mL 5M的分子生物级NaCl、130mL 2M的pH 6.5的Tris-HCl、45mL 2％的NaN3，以及43mL分子级水，加入540mL 50％的PEG溶液。缓冲液C的成份及各成份的终浓度为：1.21M NaCl、260mM Tris-HCl、
0.09％w/v NaN3、27％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
0.09％w/v NaN3、27％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
[0046] 配制1L缓冲液D：取磁珠110μL，用1mL分子级水洗2次，加入242mL 5M的分子生物级NaCl、130mL 2M的pH 6.5的Tris-HCl、45mL 2％的NaN3，以及23mL分子级水，加入560mL 50％的PEG溶液。缓冲液D的成份及各成份的终浓度为：1.21M NaCl、130mM Tris-HCl、
0.09％w/v NaN3、28％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
0.09％w/v NaN3、28％v/v PEG、磁珠，此处磁珠定义为60X。
[0047] 另外，本例还配置了多种在本例的缓冲液基础上添加其它组份的缓冲液，即分别在缓冲液A、B、C或D的基础上添加不同用量的MgCl2、吐温20或CTAB等，具体如下：
[0048] 缓冲液E：在缓冲液A的基础上，添加了20ml 1mol/L的MgCl2，分子级水添加量减少20ml，MgCl2添加量终浓度为20mmol/L。
[0049] 缓冲液F：在缓冲液A的基础上，添加了25ml 1mol/L的MgCl2，分子级水添加量减少25ml，MgCl2添加量终浓度为25mmol/L。
[0050] 缓冲液G：在缓冲液A的基础上，添加了终浓度1％w/v的吐温20。
[0051] 缓冲液H：在缓冲液A的基础上，添加了终浓度2％w/v的吐温20。
[0052] 缓冲液I：在缓冲液A的基础上，添加了终浓度1％w/v的CTAB。
[0053] 缓冲液J：在缓冲液A的基础上，添加了终浓度2％w/v的CTAB。
[0054] 缓冲液K：在缓冲液A的基础上，添加了终浓度2％w/v的CTAB，2％w/v的吐温20以及25mmol/L的MgCl2。
[0055] 缓冲液L：在缓冲液B的基础上，添加了终浓度2％w/v的CTAB，2％w/v的吐温20以及25mmol/L的MgCl2。
[0056] 缓冲液M：在缓冲液C的基础上，添加了终浓度2％w/v的CTAB，2％w/v的吐温20以及25mmol/L的MgCl2。
[0057] 缓冲液N：在缓冲液D的基础上，添加了终浓度2％w/v的CTAB，2％w/v的吐温20以及25mmol/L的MgCl2。
[0059] 另外，本例还采用购买的Ampure XP磁珠试剂盒作为对比试验。
[0060] 三、磁珠纯化核酸试验
[0061] 本例采用λDNA打断产物作为底物进行纯化试验。λDNA打断产物的具体制备方法为：在96孔板中每孔加入2根打断棒，打断仪器采用美国的COVARISE220型号，利用超声波进行打断，打断参数为Duty Factor 21％；循环数(cycle)14。
[0062] 取1000ng的λDNA打断产物，约80μL至1.5mL EP管中，本例共设置了十组试验，即四组本例的缓冲液A、缓冲液B、缓冲液C、缓冲液D、缓冲液K、缓冲液L、缓冲液M和缓冲液N以及两组Ampure XP磁珠；分别向十个加了80μL的λDNA打断产物的1.5mL EP管中加入十组磁珠纯化液，各96μL磁珠纯化液，吹打混匀30次，室温静置10-12min，上磁力架5min；取出上清液，在其中加入40μL磁珠，吹打混匀30次，室温静置10-12min，上磁力架5min，弃上清，将磁珠用180μL 75％的乙醇清洗两次，放置至酒精挥发，加入25μL TE进行洗脱，吹打混匀20-30次，静置10-12min，磁力架放置5min，吸取溶液至新的管中，即获得纯化产物，纯化产物进行2100检测。
[0063] 四、聚乙二醇用量分析
[0064] 经过大量的试验发现，聚乙二醇对缓冲液的纯化核酸的片段具有影响，为此以缓冲液A为基础，调节聚乙二醇的终浓度分别为25％v/v、26％v/v、27％v/v和28％v/v，其余与缓冲液A相同，采用不同聚乙二醇浓度的缓冲液对相同的核酸片段进行纯化，并通过安捷伦2100生物分析仪验证聚乙二醇在不同添加量下会对核酸片段筛选范围产生的影响。
[0065] 五、文库构建和测序分析
[0066] 本次测试方法是通过提取血浆中的游离核酸进行文库制备并利用华大基因Proton测序仪(代号：BGISEQ-100)进行测序并分析评价结果，其中文库制备部分将会使用磁珠纯化试剂盒进行核酸纯化。本次测试目的在于评价核酸纯化缓冲液的性能，在测试中我们使用的磁珠来自于商品Ampure XP磁珠纯化试剂盒(厂家名称：Beckman货号：MAG-PCR-CL-250)中的磁珠，与自主研发的核酸纯化缓冲液N制成测试品，对照纯化试剂为商品化Ampure XP磁珠纯化试剂盒。
[0067] 提取血浆中的游离核酸采用Magen商品化提取试剂盒,核酸提取的具体操作步骤如下：单个血浆500ul样品中加入300ulMLE裂解液，10ul蛋白酶K与10μL磁珠充分混匀后静置10分钟，置于磁力架上后去除上清液。然后加入500ulMW1液体清洗，去除MW1上清液后加入500ulMW2液体清洗，然后去除MW2上清液。重复一次MW2清洗过程，随后静置10分钟待磁珠干燥无残留液体后拿下磁力架加入40μL洗脱液洗脱，静置5分钟待洗脱液将磁珠表面核酸充分洗脱下来后重新置于磁力架，将洗脱上清液取出得到纯净游离核酸。
[0068] 提取的游离核酸将作为磁珠测试的实验样品。BGISEQ-100Proton测序仪的DNA文库构建方法分为三步：末端修复，接头连接以及PCR(聚合酶链式扩增反应)；在最后的PCR扩增环节后需要使用磁珠进行核酸纯化，去除整个文库构建中产生的干扰杂质，将纯化后得到的纯净核酸进行上机测序。文库制备中使用的试剂盒采用华大基因生产的半导体测序法建库试剂盒(国食药监械(准)字2014第3401128号#胎儿染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒(半导体测序法)品牌@BGI_MFG/A/规格&20人份/盒)，具体文库制备方法如表1所示：
[0069] 表1文库制备步骤
[0070]
[0071] 实验方案：
[0072] 1、测试平台：BGISEQ-100Proton测序平台
[0073] 2、实验步骤：血浆游离核酸提取后进行文库制备+上机测序
[0074] 3、实验采用的样品：
[0075] 血浆中游离核酸样品：总数12个，6个对照品，6个测试品，样品名称及文库编号见表格2。对照品建库过程中采用的是商业化的Ampure XP试剂盒进行纯化，文库制备过程中的测试品采用的是本发明中的磁珠纯化缓冲液搭配AmpureXP试剂盒中的磁珠组成试剂盒进行纯化。
[0076] 表2测试样品和对照样品
[0077]样品名称 文库号 对照品/测试品
16B0007303-1 16L0007303-1 对照品
16B0007304-2 16L0007304-2 测试品
16B0007305-3 16L0007305-3 对照品
16B0007306-4 16L0007306-4 测试品
16B0007307-5 16L0007307-5 对照品
16B0007308-6 16L0007308-6 测试品
16B0007309-7 16L0007309-7 对照品
16B0007310-8 16L0007310-8 测试品
16B0007311-9 16L0007311-9 对照品
16B0007312-10 16L0007312-10 测试品
16B0007313-11 16L0007313-11 对照品
16B0007314-12 16L0007314-12 测试品
16B0007303-1 16L0007303-1 对照品
16B0007304-2 16L0007304-2 测试品
16B0007305-3 16L0007305-3 对照品
16B0007306-4 16L0007306-4 测试品
16B0007307-5 16L0007307-5 对照品
16B0007308-6 16L0007308-6 测试品
16B0007309-7 16L0007309-7 对照品
16B0007310-8 16L0007310-8 测试品
16B0007311-9 16L0007311-9 对照品
16B0007312-10 16L0007312-10 测试品
16B0007313-11 16L0007313-11 对照品
16B0007314-12 16L0007314-12 测试品
[0078] 12个样品建库过程中采用不同的标签序列，文库测序时，6个测试样品和6个对照样品分别混合进行测序，混合后的样品文库名称分别为“BGISeq100-6SZpooling测试组”和“BGISeq100-6SZpooling对照组”。
[0079] 六、结果及分析
[0080] 1.λDNA打断产物核酸纯化结果
[0081] 本例的缓冲液A、缓冲液B、缓冲液C和缓冲液D，以及两组Ampure XP磁珠对λDNA打断产物的核酸纯化产物，采用2100生物分析仪检测其片段分布大小，结果显示，本例的缓冲液与Ampure XP，两者核酸纯化产物，在平均片段大小分布上相差甚微，几乎一致，部分结果如图2所示。图2中左图为AmpureXP品牌核酸纯化试剂盒安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小，平均片段大小为265bp；右图为本例的缓冲液A的核酸纯化产物的分析结果图，利用安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小为254bp；对比结果十分接，可见，两者基本一致。
[0082] 2.不同聚乙二醇浓度对缓冲液的影响
[0083] 本例分别采用了聚乙二醇终浓度为25％v/v、26％v/v、27％v/v和28％v/v的缓冲液对λDNA打断产物进行核酸纯化，并采用安捷伦2100生物分析仪对纯化产物的片段大小进行分析，结果如图3-图6所示。图3是聚乙二醇终浓度为25％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图4是聚乙二醇终浓度为26％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图5是聚乙二醇终浓度为27％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图，图6是聚乙二醇终浓度为28％v/v的缓冲液核酸纯化产物的分析图。结果显示，聚乙二醇添加量越多，平均片段大小分布越靠左边，也就是越小。
[0084] 3.测序结果及分析
[0085] 本例对血浆中游离核酸进行文库制备并利用BGISEQ-100Proton测序仪进行测序，其中文库制备部分，分别采用本例的缓冲液N与商品化试剂盒中的磁珠和Ampure XP商品化试剂盒进行核酸纯化。测序结果如表3所示。
[0086] 表3BGISEQ-100Proton测序分析结果
[0087]BGISEQ-100(Proton) BGISeq100-6SZpooling对照组 BGISeq100-6SZpooling测试组 对比值唯一比对率 5.17 5.42 0.25
GC含量平均值 41.14 40.85 -0.29
原始数据积累平均值 6.88 7.33 0.45
GC含量平均值 41.14 40.85 -0.29
原始数据积累平均值 6.88 7.33 0.45
[0088] 注：BGISeq100-6SZpooling对照组，即对照组六个样品文库混合测序；
[0089] BGISeq100-6SZpooling测试组，即测试组六个样品文库混合测序。
[0090] 根据以上测序结果来看，表3中的唯一比对率与原始数据积累平均值越高越好，GC含量平均值对照组与测试组均符合标准。经测试结果分析，本例自主研发的，采用了本例的核酸纯化缓冲液的核酸纯化试剂盒，对比进口商品化试剂盒性能相差无异，基于市面上现有的最佳原料羧基磁珠并搭载本例自主研发的核酸纯化的缓冲液，在核酸纯化效率上基本达到最大化，能够有效的替代进口的磁珠纯化试剂盒。
[0091] 以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。
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