技术领域
[0001] 本
发明涉及新苯聚
羧酸化合物，其是通过
水解木质素的
碱性
氧化作用来制备。本发明还涉及新苯
聚羧酸化合物作为复合物质的一部分的用途，其中所述复合物质是通过使新苯聚羧酸化合物与金属阳离子络合或用新苯聚羧酸化合物囊封金属阳离子来制备。本发明还涉及一种制备新苯聚羧酸化合物的方法和所述化合物在化妆、营养食品和医药组合物中的用途。
背景技术
[0002] 针对
癌症治疗最广泛研究的药物之一为铂药物
顺铂(Cisplatin)。顺铂为具有多种活性的药物并且有效治疗肉瘤、癌瘤和淋巴瘤(仅举几例)。同时，多种显著
缺陷与此药物相关。因此，由于快速代谢并伴随形成非活性蛋白结合的化合物，所述药物损害癌性细胞和正常细胞，由此展现高毒性，尤其为肾毒性。
[0003] 为解决所述问题，已大量致
力于借助研发基于低分子量有机配体的新金属有机络合物来研究降低顺铂毒性的方法(US 4,169,846；US 4,657,927)。就此而言，使用聚合化合物作为螯合剂或囊封剂自身呈现为此问题的可能有效解决方案。
[0004] US2010/0278925
专利申请案描述一种新型有机铂化合物调配物，其包含至少一种有机铂化合物和至少一种缔合的
水溶性聚合物，其中所述聚合物是通过(甲基)
丙烯酸单体、
氨基
甲酸乙酯单体和半
顺丁烯二酸酯单体与有机铂化合物的聚合作用而产生，所述有机铂化合物选自顺铂、卡铂(carboplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)的群组。特定而言，本发明使得可能获得呈糖浆或颗粒形式的药物口服调配物。
[0005] 本发明通过使用苯聚羧酸的聚合物化合物作为水溶性聚合物来产生优选用于不经肠、肠内和局部应用的有机
金属化合物而区别于上述发明。
[0006] 另一专利BY6420描述一种顺-二氨二氯化铂(II)的聚合物-药物调配物，其展现抗
肿瘤作用。本发明的目标在于将铂化合物固定(囊封)于6-羧基
纤维素表面上。所得药物调配物用于神经外科中的脑移植以防止恶性赘瘤复发。所述顺铂的
生物可降解聚合物-药物调配物展现适度的神经毒性和改良的细胞抑制作用。
[0007] 本发明与BY6420中揭示的发明的区别在于苯聚羧酸的水溶性聚合物展现其自身生物学作用并且基于所述聚合物的聚合物-药物调配物可用于不经肠、肠内和局部应用。
[0008] 在RU 2182482中揭示一种制备基于四氯铂酸
钾的抗癌剂的方法。所述专利揭示一种方法，其中使四氯铂酸钾与腐植化合物反应。在此方法中，以四氯铂酸钾溶液处理腐
植物2
质的水溶液。所述处理在以具有40W/cm功率
密度和22kHz
频率的
超声波照射下进行4至8分钟。本发明的产物通过选择铂(II)的平行四边形配位化合物作为铂剂而区别于RU 2182482中所述的产物。此外，本发明的产物是通过使用不同方法而产生，其中照射条件不同，并且根据照射产物的体积设定照射功率，并且进行照射直至未与聚合物反应的铂的量达到小于或等于初始量的25％，并且另外进行恒温化直至可水解铂的量达到小于或等于10％。由此获得不同产物。本发明所得络合物的特征在于键的高
稳定性和实质上降低的毒性。
[0009] 在EP1864673和RU2368379中描述另一抗癌剂，其还通过使铂(II)的配位化合物与腐植化合物反应而产生，所述腐植化合物最初经受通过暴露于具有0.5至5W/cm3功率密度和18至66kHz
超声波频率的超声波而引起的声穴现象。由此获得的抗癌剂的特征在于高分子量部分腐植化合物的含量小于或等于5％。本发明产物与EP1864673和RU2368379中所述产物的区别在于进行照射直至未与聚合物反应的铂的量达到小于或等于初始量的25％并且另外进行恒温化直至可水解铂的量达到小于或等于10％。由此获得不同产物。本发明所得络合物的特征在于键的高稳定性和实质上降低的毒性。
[0010] 在RU2183124中揭示一种由天然来源的材料制造用以保护生物体免受离子
辐射的构件(也就是具有
辐射防护特性的物质)的方法。根据此方法，腐植物质源自天然原材料并且以钼酸铵处理所述腐植物质的水溶液。在具有40W/cm2功率密度与22kHz频率的超声波照射下在40±5℃
温度下进行此钼酸铵处理并持续4至8分钟。此方法使用由氧化木质素获得的腐植物质。本发明产物与RU2183124中所述发明的区别在于钼盐选自多种化合物。此外，本发明的产物是通过使用不同方法产生，其中照射条件不同，并且根据照射产物的体积设定照射功率，并且进行照射直至未与聚合物反应的钼的量达到小于或等于初始量的25％，并且另外进行恒温化直至可水解钼的量达到小于或等于10％。由此获得不同产物。本发明所得络合物的特征在于键的高稳定性和实质上降低的毒性。
[0011] 在EP1864674和RU2350353中揭示另一种制造用以保护生物体免受离子辐射的药剂的方法。所述药剂是通过以波辐射处理含有腐植物质和钼酸铵的水溶液来制备。所选钼酸铵的含量在每1份腐植物质高达0.4重量份的范围内，进行处理直至腐植物质的高分子量部分达到小于或等于5％的水平。本发明产物与EP1864674和RU2350353中所述发明的区别在于钼盐选自多种化合物。此外，本发明的产物是通过使用不同方法产生，其中照射条件不同，并且进行照射直至未与聚合物反应的钼的量达到小于或等于初始量的25％，并且另外进行恒温化直至可水解钼的量达到小于或等于10％。由此获得不同产物。本发明所得络合物的特征在于键的高稳定性和实质上降低的毒性。
[0012] 除所述益处以外，RU2182482、EP1864673、RU2368379、RU2183124、EP1864674和RU2350353中所述的组合物具有多种由以下事实引起的缺陷：其所并有的有机配体的特征在于可变组成、安全性和生物活性，并且因此无法用于研发适合制备医药、营养或化妆组合物的稳定络合物或复合物质。
[0013] 本发明的发明者已惊讶地发现，苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物可用于研发稳定、安全并且有效的有机金属络合物，所述新颖化合物的特征在于低含量矿物质和低分子量杂质和自身生物活性。
[0014] 所述络合物中聚合物与金属阳离子之间键的改良稳定性是经由引入聚合、纯化和恒温化操作并且在根据体积设定功率并且持续处理直至形成具有大于75％的金属化合物的络合物时使用新超声波处理条件来达成。由此获得不同产物。
[0015] 本发明还揭示基于苯聚羧酸的新水溶性聚合物化合物的复合物质，其中所述聚合物化合物充当络合剂和/或囊封剂，形成具有高稳定性键的低毒性高效络合物。甚至在低浓度下，所述新复合物质仍展示高效率。所述复合物质(包含例如铂和钼络合物)展示有前景的特性。铂络合物充当有效抗癌剂并且实验结果表明其与
原型和例如顺铂和卡铂的已知抗癌剂相比杀死癌细胞的能力得以改良。钼络合物充当用于
预防和治疗由细胞周期破坏引起的
疾病的有效药剂，所述疾病例如源于辐射暴露、细胞老化或免疫病症。本发明的医药组合物还可用于减少/最小化由常规放射疗法或化学疗法产生的
副作用。
[0016] 苯聚羧酸的新水溶性聚合物化合物的化学特性使得可能获得多种高度稳定性络合物以及用于不经肠、经肠和局部投予人类和动物的医药、营养和化妆组合物。
发明内容
[0017] 在第一方面中，本发明涉及一种苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物，其特征在于具有以干重计62-67％C、3.8-4.2％H、29-34％O和小于0.2％N的元素组成并且其中其它元素的总和以干重计不大于1％。
[0018] 在第二方面中，本发明涉及一种制备苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物的方法，其中使含木质素的起始原材料经受碱性处理，继而经受酸密度梯度处理以获得苯聚羧酸的粗水溶性聚合物化合物，并且最后使粗化合物经受纯化。
[0019] 在第三方面中，本发明涉及用于预防、治疗和改善人类和动物疾病的新颖水溶性聚合物化合物，并且涉及包含用于预防、治疗和改善人类和动物疾病的新颖水溶性聚合物化合物的医药组合物。
[0020] 在第四方面中，本发明涉及一种包含新颖水溶性聚合物化合物的化妆组合物或营养组合物。
[0021] 在第五方面中，本发明涉及一种包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和金属阳离子并且任选包含抗癌剂的复合物质，和其在用于预防、治疗或改善人类或动物疾病的医药组合物中的用途。
[0022] 在第六方面中，本发明涉及一种制备包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和铂(II)平行四边形配位化合物的复合物质的方法。
[0023] 在第七方面中，本发明涉及包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和铂(II)平行四边形配位化合物的复合物质，其用作药物或用于制备医药组合物。
[0024] 在第八方面中，本发明涉及包含含有苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和铂(II)平行四边形配位化合物的复合物质的药物或医药组合物的用途，其用于预防、治疗或缓解性护理或用于改善
哺乳动物的疾病(例如癌症)。
[0025] 在第九方面中，本发明涉及一种包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质，其中所述苯聚羧酸的聚合物化合物囊封所述钼化合物或与所述钼化合物形成络合物。
[0026] 在第十方面中，本发明涉及一种制备包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的方法。
[0027] 在第十一方面中，本发明涉及包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质，其用作药物或用于制备医药组合物。
[0028] 在第十二方面中，本发明涉及包含含有苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的药物或医药组合物的用途，其用于预防、治疗或缓解性护理患病(例如细胞周期破坏疾病)哺乳动物或用于改善所述疾病。
[0029] 在第十三方面中，本发明涉及用于减少/最小化由常规放射疗法或化学疗法产生的副作用的医药组合物。
附图说明
[0030] 图1根据原型RU2182482的腐植酸的13C NMR
光谱。
[0031] 图2本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物的IR光谱。
[0032] 图3本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物的13C NMR光谱。
[0033] 图4本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物的二聚物同核和异核光谱。
[0034] 图5本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物的FTICR MS光谱。
[0035] 图6包含本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物和顺-二氨二氯化铂(II)的复合物质、无机顺-二氨二氯化铂(II)(图上表示为“顺铂”)和顺-二氨(环
丁烷-1,1-二羧酸酯-O,O')铂(II)(图上表示为“卡铂”)的扩展
X射线吸收精细结构(m)光谱。
[0036] 图7在未添加苯聚羧酸的聚合物化合物的培养基中(表示为“a-对照”)和在含有215μg/L培养基浓度的本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物的培养基中(表示为“b-聚合物化合物，215μg/L”)培育15天时的PBMC细胞图片。
[0037] 图8展示MCF-7人类乳癌细胞在经本发明化合物处理后的生存力数据。
[0038] 图9展示T47-D人类乳癌细胞在经本发明化合物处理后的生存力数据。
[0039] 图10展示PI45人类胰脏癌细胞在经本发明化合物处理后的生存力数据。
[0040] 图11展示T24P人类膀胱癌和SKOV-3人类卵巢癌细胞在经本发明化合物处理后的生存力数据。
[0041] 图12展示MCF-7人类乳癌细胞在经本发明化合物处理后的LDH活性。
[0042] 图13展示T47-D人类乳癌细胞在经本发明化合物处理后的LDH活性。
具体实施方式
[0043] 本发明涉及一种苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物，其特征在于以下元素组成：以干重计62-67％C、3.8-4.2％H和29-34％O、小于0.2％的N并且其它元素(无机杂质)的总和以干重计低于1％。所述新颖化合物具有其自身药理学活性、增强的纯度以及改良的形成稳定络合物或囊封各种药剂的能力。
[0044] 如本文所用的术语“苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物”意指主要包含水溶性多元芳香族
碳酸的聚合物。
[0045] 新颖水溶性聚合物可使用13C NMR、IR和FTICR-MS方法来进一步特性化。
[0046] 根据13C NMR，在0至48ppm范围内检测的CHn脂肪族基团的碳量占15％至22％；在108至145ppm范围内检测的芳香族碳CAR的量占30％至42％；在165至187ppm范围内检测的羧酸和酯COO基团的碳量占5％至13％并且在187至220ppm范围内检测的
酮基C＝O的碳量占
2％至8％。在168.5ppm(碳酸根阴离子)、171ppm(甲酸根阴离子)、173ppm(
草酸根阴离子)和
181至182ppm(乙酸根阴离子)处检测的低分子量杂质的总量低于1％。
[0047] 如本文所用的术语“低分子量杂质”意指具有低于300Da分子量的未经聚合的化合物。
[0048] 在聚合物的IR光谱上可见在1410cm-1处具有峰的
离子化非对称COO-基团的显著特异性伸缩振动。在1500至1700cm-1范围内可见对应于脂肪族和芳香族碳酸混合物的宽络合物吸收带。除羧酸以外，聚合物还含有大量经氢键彼此结合的酚系化合物。此由在以下区域内存在吸收带证实：3400至3600cm-1(OH)、1050cm-1(C-O)、1250-1300cm-1(OH)。2800至3000cm-1区域含有对应于CH3和CH2基团中的CH-基团的价态振动的在2928cm-1和2853cm-1处具有峰的吸收带。在1750cm-1处识别的或多或少有所表现的吸收峰对应于C＝O基团的振动。
[0049] 本发明新颖聚合物化合物的1500Da
片段可由以下布鲁托式(brutto formula)表示：(C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3，其中x1≤12、x2≤9、x3≤33。
[0050] 苯聚羧酸(芳香族组分，主要定义为苯聚羧酸的甲酯)为聚合物的主要单体。另外，苯聚羧酸的聚合物包含单体，例如饱和脂肪族羧酸、饱和脂肪族羟基羧酸、单不饱和脂肪族羧酸、单不饱和脂肪族羟基羧酸和多不饱和脂肪族羧酸。
[0051] 饱和脂肪族羧酸对应于通式-CnH2nO2，其中n为12至26。饱和脂肪族羟基羧酸对应于通式-CnH2nO3，其中n为16至26。单不饱和脂肪族羧酸和羟基羧酸对应于下式-CnH2n-2O2、CnH2n-2O3、CnH2n-2O4、CnH2n-2O5，其中n为14至28。上述化合物引起聚合物的表面活性特性。
[0052] 多不饱和脂肪族羧酸由以下各酸表示：13-顺-视黄酸、6Z,9Z,12Z,15Z-十八碳四烯酸、顺,顺,顺-6,9,12-十八碳三烯酸、(9R,13R)-2-氧代-5-戊基-3-环戊烯-1-辛酸、9S-氢过氧基-10E,12Z,15Z-十八碳三烯酸、C13(S)-羟基十八碳-9Z,11E-二烯酸、10S,11S-环氧基-9S-羟基-12Z-十八碳烯酸、9S,12S,13S-三羟基-10E,15Z-十八碳二烯酸、5,6-脱氢二十碳四烯酸和15(S)-羟基-(5Z,8Z,11Z,13E,17Z)-二十碳五烯酸。属于此最后系列的多种化合物(例如，13-顺-视黄酸(异维甲酸(Isotretinoin))、C13(S)-羟基十八碳-9Z,11E-二烯酸、5,6-脱氢二十碳四烯酸)的抗肿瘤和抗
氧化剂作用还保留于本发明的聚合物中。
[0053] 单体(芳香族组分)的主要群组包含以下单体：3-苄氧基-4,5-二羟基-
苯甲酸甲酯、5-(呋喃-2-羰氧基)-2-甲基-苯并呋喃-3-甲酸甲酯、2,6-二甲基-苯并(1,2-b,4,5-b')二呋喃-3,7-二甲酸二甲酯、5-(呋喃-2-羰氧基)-2-甲基-苯并呋喃-3-甲酸乙酯、鼠李素(rhamnetin)、((4-甲基-6-氧代-6h-苯并(c)色烯-3-基)氧基)乙酸甲酯水合物、双(2-(甲氧羰基)苯基)碳酸酯、硫赭曲菌素(sulochrin)、2,6-二乙酰基-7,9-二羟基-8,9b-二甲基二苯并呋喃-1,3(2H,9bH)-二酮、O-乙酰基柳酸酐、4-ho-3-((6-ho-苯并(1,3)二氧杂环戊烯-5-基)-(3-甲氧基-苯基)-甲基)-5h-呋喃-2-酮、2,3-双-苄酰氧基-丁二酸、5-羟基-7,8二甲氧基-1,3-二氧代-1,3,10,11-四氢苯并[5,6]环辛二烯并[1,2-c]呋喃-4-甲酸甲酯、(1-甲氧羰基甲氧基-6-氧代-6h-苯并(c)色烯-3-基氧基)-乙酸甲酯、黑茶渍素(atranorin)和经苯丙素取代的表
儿茶素(epicatechin)。属于此群组的多种化合物展现抗生素和抗肿瘤作用。
[0054] 本发明还涉及一种制备苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物的方法。本发明的新颖聚合物化合物可根据下文所述方法来制备。
[0055] 在此方法的第一步骤中，提供含木质素材料作为起始原材料。所述含木质素材料的实例包括氧化木质素、木材、泥
煤、植物残余、纸浆厂的剩余物。最佳含木质素的起始原材料由针叶树产生并且特征在于具有5.5至7的pH、50％至70％的水分含量并且包含不大于32％的多糖、不小于66％的木质素和不大于2％的水溶性化合物。
[0056] 在此方法的第二步骤中，使含木质素原材料的水悬浮液在13±0.5的pH和2.2±0.3MPa的压力下经受碱处理。可使用的碱的实例包括碱金属和/或碱土金属和/或氨的氢氧化物。然而，优选的碱为氢氧化钠。通过此碱处理，因水解和氧化作用而获得苯聚羧酸的钠盐溶液。
[0057] 在此方法的第三步骤中，使苯聚羧酸的钠盐溶液经受酸密度梯度处理。在此步骤中，以
无机酸处理苯聚羧酸的钠盐溶液并且使其经受
离心力处理。因此，产生密度梯度并且发生苯聚羧酸的缩合和聚合作用。可使用的无机酸的实例包括可溶性稳定酸，例如
硫酸、正
磷酸、
硝酸和
盐酸。然而，优选无机酸为盐酸。
[0058] 第四步骤为纯化步骤，其中以一或多种纯化方法(例如萃取、浮选、蒸馏、过滤、沉淀、离心、倾析和/或
透析)进行纯化以去除低分子量杂质。持续纯化直至由13C NMR或另一代表性方法(例如，气相色谱)检测的低分子量杂质的量降到聚合物干重的1％以下。
[0059]
实施例1中揭示制造聚合物的方法的最佳模式。实施例1中还描述本发明聚合物与根据RU2182482获得的腐植酸的比较结果。
[0060] 本发明还涉及包含苯聚羧酸的新颖水溶性聚合物化合物和金属阳离子并且任选包含抗癌剂的复合物质。在优选复合物质中，苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物充当络合剂和/或囊封剂。
[0061] 如本文所用的术语“水溶性聚合物”意指在中性或碱性pH下以5wt％的浓度溶于水中的聚合物。
[0062] 如本文所用的术语“络合剂”意指
电子-供体化合物，其能够与
金属离子形成可溶性络合物，其中所述络合物可为配位和/或螯合络合物。在所述络合物中，本发明聚合物的片段为中心金属离子的配体。金属离子可为2s-5s或3d-5d金属。所述2s-5s或3d-5d金属的实例为铂、钼、锂、
钙、钾、镁、锰、
铁、锌、
银、钯和
铜。
[0063] 如本文所用的术语“囊封剂”意指能够约束小分子并且保护其免受周围环境影响的大分子。与络合剂相比，囊封剂不与其所约束的小分子形成稳定化学键。因此，术语“囊封”意指“将小分子约束于较大分子内的过程”。
[0064] 另外，本发明的发明者已承担制备包含所述新颖水溶性聚合物并且任选包含一或多种其它赋形剂的医药、营养和化妆组合物的任务。
[0065] 化妆组合物由新颖水溶性聚合物化合物连同所述化妆组合物中典型地存在的其它成分一起构成。化妆组合物可另外包含具有例如杀细菌、
伤口愈合、抗氧化剂特性的其它化合物。因此，为获得杀细菌组合物，使用银阳离子作为展现杀细菌活性的金属。为获得伤口愈合组合物，使用铜作为展现伤口愈合活性的金属。为获得抗氧化剂组合物，使用锂作为金属，其有机-无机络合物展现抗氧化剂活性。所述化妆组合物可用于
皮肤修复或其治愈。
[0066] 营养组合物由新颖水溶性聚合物化合物连同所述营养组合物中典型地存在的其它成分一起构成。营养组合物可另外包含营养物质。作为营养物质(对于活生物体而言至关重要的膳食矿物质)，可使用巨量元素(例如，铁、钾、钙、镁和其它)和/或微量元素(例如，锂、银、锌、铜、锰、钯和其它)。营养组合物可用于恢复营养平衡。
[0067] 在一些具体实例中，医药组合物包含新颖水溶性聚合物化合物，而在其它具体实例中，医药组合物包含含有新颖水溶性聚合物化合物和金属阳离子的复合物质。医药组合物可另外包含抗癌剂，其可选自世界卫生组织(World Health Organization)的解剖学、治疗学、化学(Anatomical Therapeutic Chemical，ATC)分类系统的L群组。所述抗癌剂的良好实例为环磷酰胺(Cyclophosphamide)、顺铂、甲氨喋呤(Methotrexate)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、阿霉素(Doxorubicin)、戈舍瑞林(Goserelin)、他莫昔芬(Tamoxifen)、非格司亭(Filgrastim)、干扰素-α、白细胞间介素。所述医药组合物可用于治疗、预防或改善疾病。可用于根据本发明的医药组合物中的赋形剂的实例包括选自由以下各物组成的群组的化合物：抗粘附剂、
粘合剂、涂布剂、崩解剂、填充剂、
溶剂/共溶剂、
调味剂、
着色剂、
润滑剂、助滑剂、
防腐剂、
吸附剂、
甜味剂、载剂、用于改善API释放的聚合物、用于保护API的聚合物、缓冲剂、抗氧化剂、湿润剂、消泡剂、
增稠剂、
保湿剂或其混合物。
[0068] 根据本发明的医药组合物优选经调配以通过口服、粘膜或经舌途径投予。因此，本发明的医药组合物优选经调配为片剂、锭剂、口香糖、液体粘性膏、硬糖或棒棒糖形式或经调配为可咀嚼糖或胶凝滴剂形式。
[0069] 本发明的一些具体实例涉及一种复合物质，其包含新颖水溶性聚合物化合物和金属阳离子。在上文提及的复合物质类型中，含有聚合物与铂化合物的复合物质或含有聚合物与钼化合物的复合物质受到最强烈关注。
[0070] 已知二价铂络合物为最有效抗肿瘤化合物，所述络合物自身独特之处在于具有平行四边形结构，也就是说其中铂离子占据中心
位置并且配体位于同一平面中的四边形侧面的结构。在所述组合物中，铂配位离子的价
角与DNA的相邻
鸟嘌呤分子之间的距离密切匹配，此使其可经由形成链内加合物而抑制后者合成。在本发明的一优选具体实例中，使用顺-二氨二氯化铂(II)、四氯铂酸钾或其混合物作为用于合成复合物质的二价铂络合物。
[0071] 本发明还涉及一种制备根据本发明的复合物质的方法。根据本发明，包含本发明聚合物化合物和铂(II)平行四边形配位化合物的所述种复合物质可通过使所述物质暴露于波辐射并且更特定而言暴露于具有0.5至5W/cm3范围内的功率密度和18至66kHz范围内的频率的超声波处理并持续1至30分钟直至未结合铂(也就是，未与聚合物反应的铂)的含量降到其初始量的25％以下而获得。
[0072] 在下一步骤中，使复合物质在2℃至40℃下经历恒温(也就是说储存于特定温度条件下)并持续1至30天直至未结合铂的部分降到其初始量的10％以下并且在铂(II)平行四边形配位化合物与聚合物之间形成络合物。
[0073] 在最后步骤中，复合物质经历纯化以获得适用于医药学应用的产物。纯化可包含一或多种纯化方法，例如灭菌过滤、高压蒸气处理或照射。
[0074] 在复合物质中，铂经以下苯聚羧酸聚合物结构之一囊封或与其形成络合物：
[0075]
[0076] 其中结构a、b、c和d表示芳香族组分的部分并且结构e表示上文提及的脂肪族组分的部分。
[0077] 所述结构的存在由在3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至1300cm-1和1050cm-1处的特征性IR吸收带证实。然而，由于在聚合物与铂之间形成键，因此3400至3600cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1和1250至1300cm-1处的峰强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的峰强度。
[0078] 使用13C NMR(布鲁托式)和2D NMR方法确定含铂复合物质的经验式，根据此经验式，复合物质由以下聚合物个别重复片段构成：(C3H2O)、(C2H2O)、(CH2)。由于在溶液中，聚合物化合物仅以胶态微胞的形式存在，因此难以确定其真实分子
质量。尚未确定聚合物的确切分子式，并且因此无法在其布鲁托式中例示更特定的系数。根据本发明，由以下通式表示含铂复合物质的组成：
[0079] (C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3(Pt(NH3)2)x4。
[0080] 然而，遵循以下化学计量比x4＝1、x1≤12、x2≤9并且x3≤33。此布鲁托式描述复合物质的1500至2000Da片段。当获得较大或较小分子量的复合物质时，x1、x2、x3和x4系数呈比例变化。而且，其保持自然正整数或分数。
[0081] 实施例2中描述用于制备包含聚合物化合物与铂化合物的复合物质的最佳模式。
[0082] 本发明还涉及一种包含聚合物化合物与铂(II)化合物的药物。
[0083] 本发明还涉及一种包含聚合物化合物与铂(II)化合物药物的医药组合物。所述医药组合物可任选包含一或多种其它赋形剂。所述一或多种其它赋形剂优选选自由以下各物组成的群组：抗粘附剂、粘合剂、涂布剂、崩解剂、填充剂、溶剂/共溶剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助滑剂、防腐剂、吸附剂、甜味剂、载剂、用于改善API释放的聚合物、用于保护API的聚合物、缓冲剂、抗氧化剂、湿润剂、消泡剂、增稠剂、保湿剂和其混合物。
[0084] 药物和包含药物的医药组合物可用于治疗疾病，例如用于治疗各种类型的癌症，包括转移性乳癌。可由本发明医药组合物治疗的癌症的实例包括(但不限于)乳癌、胰脏癌、膀胱癌、
前列腺癌、结肠癌和头颈部癌。药物和医药组合物还可用于预防或缓解性护理罹患癌症的哺乳动物或用于改善所述癌症。如本文所用的术语“改善所述癌症”意指药物无法确保直接抗癌作用，但影响疾病进展和/或改变癌症患者
生活质量的情形。药物可通过任何常用投药途径来投予，但投药途径优选为不经肠、经肠或局部，并且在不经肠投药的情形下，优选为肌肉内注射。待治疗的哺乳动物在一具体实例中为非食品物种。所述非食品物种优选可选自人类、狗、猫和
马。
[0085] 当用于治疗癌症时，基于复合物质的医药组合物在人类的临床前试验和临床试验中确保显著抑制肿瘤生长(实施例3)。
[0086] 本发明的发明者还获得基于苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的多种复合物质。钼化合物优选选自钼酸盐，例如钼酸铵、钼酸铵四水合物、钼酸钾、钼酸钠、钼酸钠二水合物和其混合物。
[0087] 在复合物质中，钼经以下苯聚羧酸聚合物结构之一囊封或与其形成络合物：
[0088]
[0089] 其中结构a、b、c和d表示芳香族组分的部分并且结构e表示上文提及的脂肪族组分的部分。
[0090] 所述结构的存在由在3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至1300cm-1和1050cm-1处的特征性IR吸收带证实。然而，由于在聚合物与钼之间形成键，因此3400至3600cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1和1250至1300cm-1处的峰强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的峰强度。
[0091] 根据本发明，含钼复合物质的组成可由以下通式表示：
[0092] (C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3(MoO3)x4(H2O)x5(NH4)x6。
[0093] 而且，遵循以下化学计量比：x4＝1,5、x1≤12、x2≤9并且x3≤33、x5≤2并且x6≤2。此布鲁托式描述复合物质的1500至2000Da片段。当获得较大或较小分子量的复合物质时，x1、x2、x3、x4、x5和x6系数呈比例变化。而且，其保持自然正整数或分数。
[0094] 本发明还涉及一种制备根据本发明的复合物质的方法。根据本发明，包含本发明聚合物化合物和钼化合物的该种复合物质可通过使所述物质暴露于波辐射并且更特定而言暴露于具有0.5至5W/cm3范围内的功率密度和18至66kHz范围内的频率的超声波处理并持续1至30分钟直至未结合钼(也就是，未与聚合物反应的钼)的含量降到其初始量的25％以下而获得。
[0095] 在下一步骤中，使复合物质在2℃至40℃下经历恒温(也就是说储存于特定温度条件下)并持续1至30天直至未结合钼的部分降到其初始量的10％以下并且在钼化合物与聚合物之间形成络合物。
[0096] 在最后步骤中，复合物质经历纯化以获得适用于医药学应用的产物。纯化可包含一或多种纯化方法，例如灭菌过滤、高压蒸气处理或照射。
[0097] 实施例4中描述制备包含聚合物与钼化合物的复合物质的最佳模式。
[0098] 本发明还涉及一种包含聚合物化合物与钼化合物的药物。
[0099] 本发明还涉及一种包含聚合物化合物与钼化合物药物的医药组合物。所述医药组合物可任选包含一或多种其它赋形剂。所述一或多种其它赋形剂优选选自由以下各物组成的群组：抗粘附剂、粘合剂、涂布剂、崩解剂、填充剂、溶剂/共溶剂、调味剂、着色剂、润滑剂、助滑剂、防腐剂、吸附剂、甜味剂、载剂、用于改善API释放的聚合物、用于保护API的聚合物、缓冲剂、抗氧化剂、湿润剂、消泡剂、增稠剂和保湿剂。
[0100] 药物和包含所述药物的医药组合物可用于治疗罹患细胞周期破坏疾病的哺乳动物，所述疾病例如由辐射诱发或由细胞自然老化导致的致癌作用。药物和医药组合物还可用于缓解性护理罹患细胞周期破坏疾病的哺乳动物，所述疾病例如由辐射诱发或由细胞自然老化导致的致癌作用；或用于改善所述疾病。如本文所用的术语“改善所述癌症”意指药物无法确保直接治愈，但影响疾病进展和/或改变癌症患者生活质量的情形。药物可通过口服途径来投予。待治疗的哺乳动物在一具体实例中为非食品物种。所述非食品物种优选可选自人类、狗、猫和马。
[0101] 实施例5揭示包含聚合物化合物与钼化合物的医药组合物的研究结果，其中所述医药组合物用于诱发细胞反应。
[0102] 实施例
[0103] 参考以下实施例进一步说明本发明，所述实施例不欲以任何方式限制本发明的范畴。
[0104] 比较实施例1A：制造如RU2182482中揭示的腐植酸的方法和所述化合物的特性化[0105] 为达成比较目的，制备根据俄罗斯专利RU 2182482实施例1的已知腐植酸并且如下所述加以特性化。
[0106] 制备
[0107] 使用水解木质素-非特异性肠吸附剂(以商标名称“Polyphepanum”可得，Scientek Ltd)作为起始物质。
[0108] 将1kg起始物质、100g氢氧化钠和8.1kg水的溶液在装配有机械
搅拌机制的氧化反应器中，在160℃温度、2.5MPa压力和5l/min的量的氧供应下处理一小时。随后将反应混合物冷却到室温并且通过过滤去除固体残余物。使用硫酸将滤液(含有腐植物质的碱性溶液)的pH调节到2至3。使用过滤分离腐植酸残余物并且随后以蒸馏水和水-醇混合物冲洗直至获得6.0至6.5的pH。随后在105℃温度下干燥所得产物直至获得均质
块状物。
[0109] 特性化
[0110] 如下特性化如上所述制备的腐植酸。
[0111] 灰(矿物质杂质):13.5％
[0112] 元素组成：C 67.0％、H 4.0％、N 1.0％、O 0.28％
[0113] 低分子量杂质：由以下13C NMR峰识别：168.5ppm(碳酸根阴离子)、171(甲酸根阴离子)、173(草酸根阴离子)、181至182ppm(乙酸根阴离子)。经识别杂质的总量占干重的4.1％。
[0114] 使用13C NMR分析腐植酸的结构。结果呈现于下表1和图1中。
[0115] 表1：13C NMR分析结果
[0116]
[0117] 实施例1B：制造本发明苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物的方法和所述化合物的特性化
[0118] 制备
[0119] 使用水解木质素-非特异性肠吸附剂(以商标名称“Polyphepanum”可得，Scientek Ltd)作为起始物质。
[0120] 所述起始物质具有以下物理-化学特征：pH为6.5、水分含量为66.63％、多糖含量等于25％、木质素含量等于72.5％、水溶性化合物等于以干重计1.5％。
[0121] 步骤a：将0.998kg Polyphephanum置于15升容器中并且添加6kg蒸馏水。充分搅拌混合物。
[0122] 步骤b：向步骤a的混合物中间歇性添加约2升50％氢氧化钠溶液以获得pH 13。随后使悬浮液在10升氧化-水解破坏反应器中经受碱性处理。当温度和压力分别达到160℃和3
2.2MPa时，将空气供应降低到5dm /min并且再继续处理2小时以确保不溶性木质素完全水解和氧化。随后使用压滤器从固体残余物分离所得产物，即苯聚羧酸的钠盐溶液。
[0123] 步骤c：随后以盐酸处理步骤b中获得的苯聚羧酸钠盐溶液直至获得1至2的pH并且随后在2500rpm下经受离心力作用并持续15分钟以经由密度梯度诱发苯聚羧酸的聚合作用。由此获得苯聚羧酸的密化粗聚合物。
[0124] 步骤d：随后将苯聚羧酸的粗聚合物置于3.5kDa透析管中并且用蒸馏水透析直至由13C NMR或另一代表性方法(例如，气相色谱)检测的低分子量杂质的量达到聚合物干重的1％。获得最终经纯化的苯聚羧酸的聚合物化合物。
[0125] 随后干燥最终经纯化的苯聚羧酸的聚合物化合物以供进一步特性化。
[0126] 特性化
[0127] 如下特性化步骤d中获得的聚合物。
[0128] 描述：黑色晶体。
[0129] 特性：IR光谱吸收带位于3400至3600cm-1(OH)、1050cm-1(C-O)、1250至1300cm-1-1 -1(OH)处。2800至3000cm 区域含有在2928和2853cm 处具有峰的吸收带，对应于CH3和CH2中CH-基团的价态振动。在1750cm-1处识别或多或少有所表现的吸收峰，对应于C＝O基团的振动。图2呈现聚合物的IR光谱。
[0130] 固体残余物：93.25％
[0131] 灰(矿物质杂质)：0.67％
[0132] 氯化物：低于0.03％
[0133] 重金属：低于0.001％
[0134] 元素组成：C 62.5％、H 3.8％、N 0.18％、O 33.7％
[0135] 低分子量杂质：由13C NMR光谱的以下峰识别：168.5ppm(碳酸根阴离子)、171(甲酸根阴离子)、173(草酸根阴离子)、181至182ppm(乙酸根阴离子)。经识别杂质的总量以干重计占0.8％。
[0136] 使用13C NMR分析聚合物化合物的结构。结果呈现于下表2中和图3上。
[0137] 表2：13C NMR分析的结果
[0138]
[0139] 另外获得本发明聚合物的二聚物同核和异核光谱(图4)。峰指派结果呈现于下表3中。
[0140] 表3：本发明聚合物的二聚物同核和异核光谱。
[0141]
[0142]
[0143] 根据由NMR分析获得的数据，本发明的聚合物可特性化为实际上在所有位置经烷基、甲氧基、醇和羟基以及羧基取代的芳香族核。如由表3可见，脂肪族碳的4.5至6个
原子对应于芳香族碳的6个碳原子。而且，重复以下结构片段：(C3H2O)、(C2H2O)、(CH2)。
[0144] 使用凝胶-过滤方法分析所主张聚合物的分子量。由此确定的所主张聚合物的片段的分子量占1.5kDa。基于分子量、来自元素组成的数据和NMR分析来计算以下结构式：(C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3，其中x1≤12、x2≤9、x3≤33。
[0145] 还使用
傅立叶变换离子回旋共振质谱法(Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometry，FTICR-MS)研究本发明的聚合物单体(图5)(表4)。
[0146] 表4：在本发明聚合物中识别的高丰度单体
[0147]
[0148]
[0149]
[0150]
[0151]
[0152] 实验数据
[0153] 以蒸馏水进一步稀释本发明的苯聚羧酸的聚合物化合物以获得不同浓度并且对由通过Lymphoprep离心作用从健康供体血液分离的淋巴细胞(70-80％)和单核细胞(20-30％)组成的末梢血单核细胞(PBMC)进行测试。
[0154] 确定在将含有215μg/L本发明苯聚羧酸的聚合物化合物的细胞培养物培育15天之后，本发明苯聚羧酸的聚合物化合物对PBMC发挥作用，如图7所说明，由淋巴细胞活动力增加以及单核细胞持久性增加体现。
[0155] 实施例2A：制备根据RU2182482的抗癌剂的方法和所述抗癌剂的特性化
[0156] 制备
[0157] 以每1g腐植酸80ml的量以5％氨溶液处理根据RU2182482中揭示的方法在实施例1A中制备的腐植酸，在水浴上加热以去除过量氨、过滤并且与30体积％蒸馏水混合。此外，以每1g腐植酸盐0.27质量％的量以四氯铂酸钾处理呈腐植酸盐形式的所得溶液，并且暴露于40W/cm2和22kHz下的声穴现象并持续4分钟。使用水将溶液的体积调节到100ml。
[0158] 实验2A-1
[0159] 将由此获得的抗癌剂以62.5mg/kg b.w.的量经皮下投予接种有
艾利希氏肿瘤(Ehrlich tumor)的小鼠。以107个细胞的量经皮下接种肿瘤。在肿瘤接种48小时后开始处理。以每只小鼠0.3ml的量给予注射，一周三次，持续三周(总计9次注射)。根据相同
给药方案对对照组给予等张
氯化钠溶液。在实验中记录与未经处理对照组相比，60％存活率(10只动物中的6只)和50％的肿瘤生长抑制作用。
[0160] 由未与腐植酸结合的铂化合物的毒性引起动物的死亡率。
[0161] 实施例2B：制造本发明的包含铂(II)的复合物质的方法和所述复合物质的特性化[0162] 制备
[0163] 步骤a：在1升蒸馏水中稀释由实施例1B中所述的方法制造的4.529克干燥聚合物并且使用10％氨溶液将pH调节到9.2。向溶液中添加0.8373g顺-二氨二氯化铂(II)。使所得溶液经受3.5W/cm3和22kHz下的超声波处理直至未结合铂的含量降到初始量的25％以下。
[0164] 检测未结合铂的方法
[0165] 使用具有标准500至1000Da孔的
纤维素透析膜控制铂络合物的形成完整性。此孔尺寸使得铂化合物可能渗透穿过膜，同时阻止1500Da的所主张聚合物，并且因此同样阻止其与铂的络合物。
[0166] 为进行测试，以在超声波处理期间收集的8ml复合物质样品填充透析管并且浸渍于填充有蒸馏水的容器中并持续4小时以适应透析。
[0167] 将0.8373g顺-二氨二氯化铂(II)稀释于1升蒸馏水中以获得模型溶液(对照溶液)。将从模型溶液转移到
透析液中的铂的量视为100％。
[0168] 在模型溶液的透析液中量测的游离铂浓度占76mg/l(100％)，而本发明复合物质的透析液中的游离铂浓度占18mg/l(24％)。
[0169] 步骤b：另外，使包含苯聚羧酸的聚合物化合物和顺-二氨二氯化铂(II)的反应混合物在40℃下经受恒温化并持续24小时以适应所需络合物的形成完整性。持续恒温化直至未结合铂的浓度(由上述方法确定)降到步骤a中添加量的10％以下。
[0170] 步骤c：另外，使用10.0μm聚丙烯
过滤器从机械夹杂物纯化步骤b的粗复合物质，并且随后如实施例3中所述用于制备医药组合物。
[0171] 实验2B-1
[0172] 将由此获得的复合物质以62.5mg/kg b.w.的量经皮下投予接种有艾利希氏肿瘤7
的小鼠。以10 个细胞的量经皮下接种肿瘤。在肿瘤接种48小时后开始处理。以每只小鼠
0.3ml的量给予注射，一周三次，持续三周(总计9次注射)。根据相同给药方案对对照组给予等张氯化钠溶液。在实验中记录与未经处理对照组相比，100％存活率(10只动物中的10只)和65％的肿瘤生长抑制作用。
[0173] 与RU2182482的抗癌剂相比，复合物质的优选安全性和功效是铂化合物在所主张复合物质内的优选络合的结果。
[0174] 特性化
[0175] 使用扩展X射线吸收精细结构分析(EXAFS)进一步研究苯聚羧酸的聚合物化合物与顺-二氨二氯化铂(II)的新颖络合物的形成(参见图6)。在EXAFS光谱上可见包含本发明苯聚羧酸的聚合物化合物和顺-二氨二氯化铂(II)的所主张复合物质、无机顺-二氨二氯化铂(II)(光谱中表示为“顺铂”)和顺-二氨(环丁烷-1,1-二羧酸酯-O,O')铂(II)(图上表示为“卡铂”)之间的显著差异。
[0176] 本发明的复合物质由IR光谱的以下特征性吸收带来特性化：3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至1300cm-1和1050cm-1，其中复合物质的3400至3600cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1和1250至1300cm-1带处的强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的强度。
[0177] 基于由13C NMR和EXAFS方法推导的数据，计算复合物质的以下布鲁托式：(C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3(Pt(NH3)2)x4，其中x1、x2、x3和x4为表示任何自然正整数或分数的系数。
[0178] 实施例3：对支持使用基于包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和Pt化合物的复合物质的医药组合物的非临床和临床数据的描述和其特性化
[0179] 制备
[0180] 使用根据实施例2B制备的0.5％复合物质作为
基础以获得另外包含赋形剂的医药组合物，所述赋形剂例如呈等张氯化钠溶液形式的溶剂(以获得0.05％医药组合物)和呈盐酸形式的缓冲剂(以获得7至8的pH)。医药组合物是经由在恒定pH监控下机械搅拌复合物质与赋形剂而获得。使用灭菌过滤另外纯化医药组合物。
[0181] 由此获得的医药组合物可用于不经肠(皮下或肌肉内)投药。
[0182] 特性化
[0183] 通过欧洲药典(European Pharmacopoeia)第6版中所述的方法特性化医药学组合物，如下：
[0184] 描述：透明、深棕色液体
[0185] pH：7.27
[0186] 特性：特征性IR吸收带位于3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至1300cm-1和1050cm-1处，其中3400至3600cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1和
1250至1300cm-1处的峰强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的峰强度。
[0187] 铂含量：0.0049％
[0188] 无菌性：无菌
[0189] 毒性：在每只小鼠0.1mg下无毒
[0190] 热原性：在1.3mg/kg b.w.肌肉内剂量下无热原性(兔测试)
[0191] 非临床数据
[0192] 评估所主张医药组合物针对HER-2/neu雌性小鼠体内的原地自发性乳房肿瘤的抗肿瘤功效，所述小鼠的特征在于HER-2/neu致癌基因、表皮生长因子的表达量升高和自发性发展多发性乳房赘瘤的概率较高。
[0193] 根据所选设计，当乳房肿瘤的直径生长到至少5mm时，将动物随机分为对照组与实验组。以两种剂量(62.5mg/kg b.w.和3.0mg/kg b.w.)皮下注射所主张的医药组合物，一周3次直至动物死亡。
[0194] 在经62.5mg/kg b.w.或3mg/kg b.w.所主张医药组合物治疗的动物中，7至14天缓解的百分比分别占13％和12％(结果在统计学上是显著的)，相对而言对照组中为0％。此为对于所主张医药组合物在治疗可外推至人类和非食品动物物种的乳房肿瘤中的功效的良好指示。
[0195] 临床数据
[0196] 在患有转移性乳癌的8位患者中进行所主张药物的Ib期临床研究。对患者给予每天1次药物注射并持续32天。评估的累积剂量窗占0.96mg/kg b.w.至1.12mg/kg b.w.。
[0197] 使用所主张的医药组合物获得以下结果：1种完全反应(所有转移消失)、1种部分反应(大于25％的转移尺寸减小)、3种稳定疾病(转移尺寸变化在-25％与25％之间)和3种进行性疾病(大于25％的转移尺寸增加)。
[0198] 所述结果是对于所主张医药组合物在治疗转移性乳癌中的临床功效的良好指示。
[0199] 此研究总计记录78件不利事件。所记录的不利事件均非严重的。不利事件主要为轻微或适度的，并且78件不利事件中仅2％与所主张的医药组合物相关。
[0200] 此外，作为对所主张医药组合物的治疗剂量增加作出的反应，观测到副作用的数量减少。此数据是对于所主张医药组合物的杰出安全性和其缓解性治疗例如末期患者的潜能的良好指示。
[0201] 另外确定所主张的医药组合物有助于标准化血液参数。因此，截至追踪阶段结束时，与筛选时记录的水平相比，标准化以下血液参数：4位患者中2者的血红素、3位患者中2者的红血球、3位患者中1者的血小板、5位患者中3者的白血球、3位患者中3者的嗜中性细胞和1位患者的淋巴细胞。
[0202] 此数据是对于所主张医药组合物可有效用于改善主要疾病(例如癌症)的良好指示。
[0203] 实施例4：制造包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的方法和所述复合物质的特性化
[0204] 步骤a：在1升蒸馏水中稀释15克由实施例1B中所述的方法制造的干燥聚合物，使用约15ml 10％氨溶液将pH调节到9.2。此外，将溶液加热到60℃并且搅拌1.5小时以去除过量氨。添加5g钼酸铵四水合物并且使所得溶液经受3.5W/cm3和22kHz下的超声波处理直至未结合钼的含量降到初始量的25％以下。
[0205] 未结合钼的检测方法：
[0206] 使用具有标准500至1000Da孔的纤维素透析膜控制钼络合物的形成完整性。此孔尺寸使得钼化合物可穿过膜离开，同时阻止1500Da的所主张聚合物，并且因此同样阻止其与钼的络合物。
[0207] 为进行测试，以在超声波处理期间收集的8ml复合物质样品填充透析管并且浸渍于填充有蒸馏水的容器中并持续4小时以适应透析。
[0208] 将5g钼酸铵四水合物稀释于1升蒸馏水中以获得模型溶液(对照溶液)。将从模型溶液转移到透析液中的钼的量视为100％。
[0209] 模型溶液的透析液中游离/未结合钼的浓度占52mg/l(100％)，而其在本发明复合物质的透析液中的浓度占11mg/l(21％)。
[0210] 步骤b：另外，使步骤a的包含苯聚羧酸的聚合物化合物和钼酸铵四水合物的复合物质在40℃下经受恒温化并持续24小时以适应所需络合物的形成完整性。持续恒温化直至未结合钼的浓度(由上述方法确定)降到步骤a中添加量的10％以下。
[0211] 步骤c：使用10.0μm聚丙烯过滤器从机械夹杂物纯化步骤b的粗复合物质，并且如实施例5中所述用于制备医药组合物。
[0212] 特性化
[0213] 复合物质的特征在于IR光谱的以下特征性吸收带：3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至1300cm-1和1050cm-1，其中复合物质的3400至
3600cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1和1250至1300cm-1带的强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的强度。
[0214] 基于由13C NMR方法推导的数据，计算复合物质的以下布鲁托式：(C3H2O)x1(C2H2O)x2(CH2)x3(MoO3)x4(H2O)x5(NH4)x6，其中x1、x2、x3、x4、x5和x6为表示任何自然正整数或分数的系数。
[0215] 实施例5：对支持临床使用基于包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的医药组合物的实验数据的描述和其特性化
[0216] 制备
[0217] 使用根据实施例4制备的复合物质作为基础以获得另外包含蒸馏水作为溶剂的医药组合物。为此，将0.55％复合物质与蒸馏水以1:40比率混合并且机械搅拌。由此获得的医药组合物可用于口服投药。
[0218] 特性化
[0219] 通过欧洲药典第6版中所述的方法特性化医药组合物，如下：
[0220] 描述：非透明深棕色液体
[0221] pH：8.27
[0222] 特性：在3400至3600cm-1、2800至3000cm-1、1500至1700cm-1、1410cm-1、1250至-1 -1 -11300cm 和1050cm 区域中具有吸收带的IR，其中医药组合物的3400至3600cm 、1500至
1700cm-1、1410cm-1和1250至1300cm-1带的强度小于苯聚羧酸的聚合物化合物的强度。
[0223] 生物负荷：小于100cfu/g
[0224] 毒性：在每只小鼠0.1mg剂量下无毒性
[0225] 热原性：在1.3mg/kg b.w.肌肉内剂量下无热原性(兔测试)
[0226] 实验数据
[0227] 以蒸馏水进一步稀释基于包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的医药组合物以获得不同浓度并且对由通过Lymphoprep离心作用从健康供体血液分离的淋巴细胞(70-80％)和单核细胞(20-30％)组成的末梢血单核细胞(PBMC)进行测试。
[0228] 确定在将含有35和215μg/L医药组合物的细胞培养物培育11天之后，医药组合物对PBMC发挥作用，由淋巴细胞活动力增加以及单核细胞持久性增加体现。
[0229] 以相同系列的实验评估医药组合物对由末梢血单核细胞(PBMC)产生的细胞
激素组的作用。确定在将细胞培养物培育11天之后，INF-γ的产量由对照组中的0至75pg/ml增长到经医药组合物处理的组中的2000至3000pg/ml；TNF-α的产量由对照组中的0增长到经医药组合物处理的组中的400至650pg/ml。
[0230] 此数据是对于医药组合物可有效地用于预防和治疗与细胞周期破坏相关的疾病(例如，由辐射诱发或由细胞自然老化导致的致癌作用)的良好指示。
[0231] 实施例6：对支持临床使用基于包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质的医药组合物来降低/最小化与常规放射疗法或化学疗法相关的副作用的实验数据的描述
[0232] 患者特征：
[0233] 此研究的患者是一位具有长期肠胃问题病史的64岁老年妇女。在2012年5月经诊断患有结肠癌并局部转移到淋巴结，建议手术，并且在同年6月进行。由于不同情形，其不得不再进行两次手术。截至8月底对患者进行首次评估以开始化学疗法。
[0234] 结果和程序：
[0235] 与首次评估相关的实验室结果检测到实质上较低的血清
白蛋白以及低血红素、白血球、嗜中性粒细胞和淋巴细胞。另外，实验室分析检测到减少的嗜酸性细胞、ALAT、ASAT和碱性磷酸酶(表5)。负责的肿瘤学家避免开始化学疗法并且必须在两周内进行新评估。在此期间，每天对患者给予20ml包含新苯聚羧酸与钼的络合物的医药组合物。所述组合物口服投予。第二次评估获得的实验室结果表明白蛋白标准化；血红素、白血球、嗜中性粒细胞和淋巴细胞以及嗜酸性细胞含量实质上增加。另外，ALAT与ASAT含量均增加。立即开始化学疗法。
[0236] 化学疗法治疗：
[0237] 对患者给予两天12次注射，每次化学疗法治疗之间有两周休息阶段。每一次治疗后获取用于实验室分析的
血液样本。另外，患者在一些休息阶段的中间部分填写生活质量(Quality of Life，QoL)调查表C-30。
[0238] 在注射最初两天之前两周和之后一周对患者给予20ml口服投予的本发明组合物(也就是，包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质)。
[0239] 在第二注射阶段之前一周和之后一周，无可用的本发明组合物。在第二注射阶段之后一周重新开始以本发明组合物治疗并且在随后三个注射阶段之前和之后每天给予。在第六注射阶段之前一周，患者再次耗尽本发明组合物。恰在第七治疗阶段之前和在12个化学疗法治疗阶段的剩余部分以外再次开始此额外治疗。
[0240] 由患者在第一治疗阶段与第二治疗阶段之后填写QoL调查表C-30。另外，在第五、第六和第七治疗阶段之后填写调查表。
[0241] 结果
[0242] 实验室变数：发现血清白蛋白对于开始化学疗法治疗而言过低。最初发现其低至28(表5)，但在经本发明组合物治疗10天后增加到39。在以本发明组合物额外治疗的第一化学疗法治疗阶段期间还保持此值。白蛋白在未经本发明组合物额外治疗的第二和第六化学疗法治疗期间与患者还经本发明组合物治疗之前和之后的治疗相比略微减少。
[0243] 对于血红素、白血球、粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性细胞还检测到类似图案。所有所述变量在化学疗法开始之前均较低，但在经本发明组合物额外口服治疗10天内实质上增加。发现所述获得的含量在经本发明组合物额外治疗的第一化学疗法治疗阶段期间几乎不变。
[0244] 表5：一些实验室变量在七个第一化学疗法治疗阶段期间的发展。粗体字给出的行指示无本发明组合物额外治疗的情形。
[0245]
[0246]
[0247] *额外治疗指示本发明组合物是否与化学疗法一起投予；“是”指示此阶段中投予本发明的组合物；而“否”指示此阶段中未投予本发明的组合物。
[0248] 在不投予本发明组合物的情形下进行第二化学疗法治疗阶段，并且再次发现所有上述变量均降低。在额外投予本发明组合物的情形下进行随后的三个化学疗法阶段，并且血红素、白血球、粒细胞和淋巴细胞再次增加到先前含量。除第三治疗阶段以外，对于嗜酸性细胞还检测到几乎类似的图案。第六化学疗法治疗阶段如同第二阶段般还在不额外投予本发明组合物的情形下进行并且几乎再次发生相同情形。
[0249] 仅在开始之前和在两个第一化学疗法治疗阶段期间测量ALAT和ASAT。然而，指示与对于以上血液学变量所述相同的图案。
[0250] 生活质量调查表C-30：发现C-30的总和从额外投予本发明组合物的第一化学疗法治疗后的休息阶段到未额外投予本发明组合物的第二化学疗法治疗后的休息阶段降低53％。在第五、第六和第七化学疗法治疗后的休息阶段还检测到类似图案。从额外投予本发明组合物的第五化学疗法治疗到未额外投予本发明组合物的第六化学疗法治疗，C-30总和降低48％，并且从第六化学疗法治疗到额外投予本发明组合物的第七化学疗法治疗增加
58％。
[0251] 结论：尽管此研究仅为非结构式情形的报导，但其明确指示本发明组合物作为化学疗法治疗的可能补充治疗的有益作用。
[0252] 实施例7：研究癌细胞在经本发明化合物处理时的生存力
[0253] 此研究中所研究的细胞为：
[0254] ·MCF-7，人类乳癌细胞(良好分化)
[0255] ·T47-D人类乳癌细胞(不良分化)
[0256] ·PI45人类胰腺细胞(不良分化)
[0257] ·T24P人类膀胱癌(不良分化)
[0258] ·SKOV人类卵巢癌细胞(不良分化)
[0260] ·Fadu人类头颈部癌细胞。
[0261] 由以下各物以不同量(每孔10-200μg)处理细胞并持续72小时：
[0262] ·苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物(在图8至13中称作“化合物2”)、
[0263] ·包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和铂化合物的复合物质(在图8至13中称作“化合物1”)和
[0264] ·包含苯聚羧酸的水溶性聚合物化合物和钼化合物的复合物质(在图8至13中称作“化合物3”)。
[0265] 细胞生存力
[0266] 将细胞涂于96孔培养盘(5×104个细胞/ml)中，并且次日以含有不同浓度化合物/复合物质的培养基置换所述培养基。72和96小时之后，根据
试剂盒随附的方案使用XTT分析来测定细胞生存力。
[0267] 结果展示于图8至11中。
[0268] 结果表明所有三种化合物/复合物质均影响所有细胞系的生存力。生存力下降40％至90％，视所研究的细胞系而定。在人类结肠人类和人类头颈部癌细胞系中可见最有效杀死作用并且在卵巢癌和肝癌细胞系中由测试物质观测到最低杀死作用。参见下表6。
[0269] 表6.包含铂的复合物质的评估IC50值
[0270]
[0271] 通过测量乳酸脱氢酶(LDH)来确定细胞毒性活性
[0272] 通过测量释放到培养基中的LDH活性来确定质膜的完整性。在NADH氧化作用后随334nm处的吸
亮度降低来监控LDH活性。将所释放LDH的百分比定义为上清液中的LDH活性与所释放LDH量加上细胞溶解产物中测量的活性的总和的比率。
[0273] 结果展示于图12至13中。
[0274] 结果表明无细胞损害迹象。从对照细胞以及从经测试物质处理的细胞释放相同的LDH，也就是说所述物质是无毒的。细胞损害(例如
坏死)导致培养基中的LDH浓度上升。通过测量释放到培养基中的LDH活性来确定质膜在经处理后的完整性。使用分
光亮度方法(Moran和Schnellmann 1996)测量酶活性。
