香菊提取物及其用途
阅读：207发布：2022-10-06
专利汇可以提供香菊提取物及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及来源于 植物 的提取物和/或其级分，包含来源于植物的提取物和/或其级分的组合物以及其在保护组织免受由外源性毒素引起的损伤方面的用途。具体地，本发明涉及来源于香菊(Asteriscus graveolens)的极性 溶剂 提取物和/或其级分，包含来源于香菊的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物，以及其在保护包含上皮细胞的组织免受外源性毒素(特别是来源于环境污染的毒素)的有害影响方面的用途。，下面是香菊提取物及其用途专利的具体信息内容。
1.一种用于保护包括上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的方法，包括：
向有需要的受试者施用来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物，从而保护所述组织免受所述至少一种污染物的影响。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者已经暴露于和/或正暴露于和/或预期将暴露于所述至少一种污染物。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述至少一种污染物来源于燃烧气体、工业污染物和烟雾中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述至少一种污染物来源于烟雾。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述烟雾是烟草烟雾。
6.根据权利要求4至5中任一项所述的方法，其中所述至少一种污染物选自表1所呈现的组。
7.根据权利要求1所述的方法，其中保护所述组织包括增加所述组织细胞对所述至少一种污染物的耐受性。
8.根据权利要求1或7所述的方法，其中保护所述包括上皮细胞的组织免受所述至少一种污染物的所述有害影响导致选自由以下各项组成的组中的至少一种结果：所述组织活力增加，所述组织的健康得到改善和所述组织的过早老化减少。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述包括上皮细胞的组织选自由以下各项组成的组：皮肤、鼻腔、口腔、咽、喉、气管、肺、以及它们的任何组合。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织是皮肤，所述方法包括向所述皮肤局部施用所述极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含所述极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。
11.根据权利要求9所述的方法，其中保护所述皮肤免受所述至少一种污染物的所述有害影响导致选自由以下各项组成的组中的至少一种结果：皮肤细胞活力增加，皮肤外观得到改善，过早皮肤老化减少，以及它们的任何组合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中皮肤外观得到改善和/或过早皮肤老化减少包括所述皮肤的皱纹、褐斑和红斑中至少一种的出现的减少。
13.根据权利要求11所述的方法，其中皮肤外观得到改善和/或过早皮肤老化减少包括与预定阈值相比维持和/或提高所述皮肤的含水量值。
14.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织是肺、气管或鼻腔组织，所述方法包括通过吸入施用所述极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含所述极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。
15.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织是所述鼻腔的组织，所述方法包括通过喷嘴喷雾将所述极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含所述极性溶剂提取物和/或其级分的组合物施用于所述鼻腔。
16.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织是所述口腔、咽或喉的组织，所述方法包括以口腔护理制剂的形式施用所述极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含所述极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述污染物以其分离形式与所述包括上皮细胞的组织接触。
18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述污染物存在于与所述包括上皮细胞的组织接触的介质中。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述污染物存在于选自由环境空气、水和土壤组成的组的介质中。
20.根据权利要求19所述的方法，其中存在于所述环境空气中的所述至少一种污染物来源于燃烧气体、工业污染物或火灾烟雾。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述环境空气包含与烟雾相关的污染物。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述环境空气包含烟草烟雾。
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述极性溶剂是水。
24.根据权利要求1所述的方法，其中所述极性溶剂包含水和至少一种附加的极性溶剂。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述至少一种附加的极性溶剂选自由以下各项组成的组：丙三醇、乙醇、丙二醇、丁二醇、甲醇和丙酮。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述极性溶剂包含水和丙三醇。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述极性溶剂提取物和/或其级分为包含40至
60％(w/w)丙三醇的溶液的形式。
28.根据权利要求1所述的方法，其中所述极性溶剂提取物或其级分基本上不含精油。
29.一种组合物，其包含有效保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的量的来源于香菊植物的极性溶剂提取物或其级分，还包含美容学和/或药学上可接受的和/或皮肤病学的稀释剂、赋形剂或载体。
30.根据权利要求29所述的组合物，其中所述极性溶剂提取物或其级分来源于所述香菊植物的任何地上部分。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述地上部分选自由以下各项组成的组：茎、叶、以及它们的任何组合。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述极性溶剂是水。
33.根据权利要求29至31中任一项所述的组合物，其中所述极性溶剂包含水和至少一种附加的极性溶剂。
34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述至少一种附加的极性溶剂选自由以下各项组成的组：丙三醇、乙醇、丙二醇、丁二醇、甲醇和丙酮。
35.根据权利要求29所述的组合物，其中所述极性溶剂提取物或所述级分包含至多1％w/w的精油。
36.根据权利要求35所述的组合物，其中所述极性溶剂提取物或所述其级分不含精油。
37.根据权利要求29至36中任一项所述的组合物，还包含至少一种附加的植物提取物。
38.根据权利要求29至37中任一项所述的组合物，还包含至少一种微藻提取物。
39.根据权利要求29至38中任一项所述的组合物，还包含附加的活性剂，所述附加的活性剂选自由以下各项组成的组：抗氧化剂、螯合剂、清洁剂、皮肤保护剂、防晒剂、美白剂、抗皱剂、抗炎剂、抗老化剂、以及它们的任意组合。
40.根据权利要求29至39中任一项所述的组合物，所述组合物是配制用于局部施用至所述皮肤的化妆品组合物。
41.根据权利要求29至39中任一项所述的组合物，所述组合物被配制成通过喷雾嘴进行施用。
42.根据权利要求29至39中任一项所述的组合物，所述组合物是口腔护理组合物，所述口腔护理组合物被配置为选自由以下各项组成的组的形式：洁齿剂、牙膏、凝胶、粉末、漱口水、口气清新剂、牙龈按摩膏、嚼漱片、锭剂和口香糖。
43.根据权利要求29至42中任一项所述的组合物，其用于保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响，其中所述组合物包含来源于香菊植物的极性溶剂提取物或其级分。
44.一种用于保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的组合物，其中所述组合物包含来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分。
45.来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分在制备用于保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的组合物中的用途。
46.根据权利要求45所述的用途，其中所述组合物是还包含美容学上可接受的或皮肤病学的稀释剂、赋形剂或载体的化妆品组合物。
47.根据权利要求45所述的用途，所述组合物是还包含治疗上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的吸入组合物。
48.根据权利要求45所述的用途，其中所述组合物是还包含适于口腔护理的稀释剂、赋形剂或载体的口腔护理组合物。
香菊提取物及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及来源于植物的提取物和/或其级分，包含来源于植物的提取物和/或其级分的组合物及其在保护组织免受由外源性毒素引起的损伤方面的用途，具体地涉及来源于香菊(Asteriscus graveolens)的极性溶剂提取物和/或其级分，以及包含来源于香菊的极性溶剂提取物和/或其级分、用于保护包含上皮细胞的组织免受外源性毒素(特别是来源于环境污染的毒素)的有害影响的组合物。
背景技术
[0002] 上皮是动物组织的四种基本类型之一，动物组织的另外三种基本类型包括结缔组织、肌肉组织和神经组织。上皮组织衬于全身的表面和腔体处。上皮形成哺乳动物身体的外表面(皮肤)和内腔与管腔的一部分。上皮细胞的功能包括保护、感知检测、选择性吸收、分泌和跨细胞运输。
[0003] 皮肤包括复层鳞状角质化上皮细胞和有活力的角质细胞，以及其他细胞类型。衬于口腔、食道和部分直肠内部的组织由非角质化复层鳞状上皮细胞组成。将体腔与外部环境分隔的其他表面由简单的鳞状、柱状或假复层上皮细胞垫充。其他上皮细胞衬于肺、胃肠道、生殖和泌尿道内部，并组成外分泌腺和内分泌腺。角膜的外表面覆盖有快速生长、容易再生的上皮细胞。
[0004] 在这些器官和组织中，上皮充当抵挡有害物理力、化学物质、污染物、病原体和其他不期望的试剂的保护屏障的一部分。所有这些外源性加剧物(aggravations)必须在进入体内前对上皮进行挑战。
[0005] 污染产生的毒素对细胞和组织以及包含细胞和组织的器官的健康具有不利影响。污染可能是由于大量的各种因素造成的，包括例如因香烟烟雾、清洁产品和粉尘导致的室内污染和包括发动机排烟、工业废物和一氧化碳在内的室外污染等。
[0006] 已知毒素积累会损害器官的正常生理功能。经常的、有时是每天暴露于环境毒素会导致所有暴露器官中的细胞的累积损伤。大多数污染物发挥其不利影响的常见细胞机制包括它们直接充当脂质和蛋白质的促氧化剂、形成DNA加合物、DNA断裂或突变、或者充当自由基发生剂、促进氧化应激和诱导炎症反应的能力。
[0007] 自由基(活性氧类和氮类)对细胞脂质、蛋白质和核DNA或线粒体DNA有害，抑制它们的正常功能。此外，它们可以干扰细胞内的信号传导通路。在包括人类在内的真核需氧生物体中，自由基在正常代谢期间并且响应于外源性环境暴露(例如辐射、香烟烟雾、金属和臭氧)而连续产生。当生物体防御机制被压制而导致自由基浓度增加时，会发生氧化应激状态。已经显示这种氧化应激与皮肤的不良外观和过早老化有关。氧化应激还已经牵涉于各种退行性疾病中，诸如动脉粥样硬化、心脏病发作、中风、慢性炎性疾病(类风湿性关节炎)、白内障、中枢神经系统障碍(帕金森病和阿尔茨海默病)、年龄相关的疾病和癌症。
[0008] 污染物主要通过皮肤接触、吸入和摄取受污染的产品而到达哺乳动物组织。空气和土壤污染在很大程度上促成食物和水的污染，因此摄取也是一种污染物摄入途径。沉积在胃肠道和呼吸道中的污染物可以被上皮细胞吸收，使得有毒物质出现在全身循环中并积累在不同的组织中。
[0009] 暴露于某些物质和上皮损伤之间的关联是被普遍认可的。例如，甲醛现在在世界范围内被认为既是致癌物也是皮肤致敏物。另一个示例是存在于在香烟烟雾中的污染性化学物质。香烟烟雾含有超过4700种化学化合物，其中约60种被指定为致癌物。经常吸烟的人易于遭受包括上皮细胞的组织的损伤，特别是肺、口腔和皮肤的损伤。吸烟者的皮肤老化过程也被加速。
[0010] 高浓度的各种类型的污染物都可以影响哺乳动物的呼吸道和胃肠道。然而，长期暴露于较低污染物浓度下也观察到类似的效应。在暴露于增大水平的二氧化硫、氮氧化物和某些重金属(如砷、镍或钒)之后，通常会经历诸如鼻子和咽喉刺激之类的症状，然后是支气管收缩和呼吸困难，特别是对于哮喘个体而言。空气污染物如氮氧化物会增加对呼吸道感染的易感性。持续暴露于臭氧和某些重金属会降低肺功能，而肺功能降低也是哮喘、肺气肿甚至肺癌的成因。在暴露于二氧化氮的小鼠中也观察到了肺气肿样病变。
[0011] 上皮具有有限的有效毒素防御，包括物理去除外源性毒素。示例性路径包括当皮肤有机更新(turn-over)时被污染细胞的自然排出，以及溶解来自细胞间隙的毒素并通过出汗将它们传输回到皮肤表面上。然而，抵御毒素的天然防御机制并没有提供全面的保护。
[0012] 未被物理去除的毒素可以在上皮细胞内被代谢。近年来，已经证明，人上皮细胞表达各种细胞色素P450(CYP)酶，包括特异性负责各种类型的上皮细胞内的外源毒素的代谢的酶。所得代谢物也可能会潜在地损伤上皮和身体。对皮肤毒素的防御取决于若干因素，包括行为惯例(即避免接触、饮食)以及传统医学、治疗和/或化妆产品的使用。
[0013] 传统医学长期以来一直认识到毒素沉积对健康和幸福的负面效应，并将身体解毒实践为许多疾病和失调的标准治疗法。具有一些变化的类似实践是非常常见地由公众自我实施的。这些解毒过程聚焦于减少对毒素的暴露和增加毒素从身体的排除。
[0014] 皮肤是身体最大且最暴露的器官，包括上皮组织。皮肤具有许多功能，主要功能是作为抵挡有害物理力、化学物质、污染物、病原体和其他不期望的试剂的保护屏障。皮肤由三个主要层组成：表皮，其为皮肤的最外层，提供防水屏障并产生肤色；真皮，其含有致密的结缔组织、毛囊和汗腺；以及较深层的皮下组织(下皮层)，其由脂肪和结缔组织构成。表皮进一步细分为以下若干层：角质层、颗粒层、棘层和基底层。
[0015] 菊(Asteriscus)属(旋覆花族(Tribe Inuleae)，菊科)由八个种和五个亚种组成，已经研究了其形态、系统发育和植物地理学。香菊(Asteriscus graveolens)(Forssk.)Less.具有同义词Bubonium graveolens、Odontospermum graveolens或Nauplius graveolens。该物种是一种地方性的草本药用芳香植物，从北非延伸到亚洲的沙漠地区分布。其已在撒哈拉的民间医学中被用作健胃药，用于治疗发烧、胃肠道疾病、头痛和支气管炎，以及用作抗炎药。Cristofari等人最近描述了香菊精油的化学组成。(Cristofari G等人，2012年，Chemistry and Biodiversity 9:727-738)。已经公开了包括菊科植物，尤其是A.pseudosciaenae在内的干燥植物材料的混合物的传统中药制剂(例如，中国申请No.CN104208618、No.CN104274770、No.CN10289555)。来源于菊科植物的三联噻吩和聚炔烃已经被提议作为用于治疗疱疹和唇疱疹的植物来源组合物中的组分(国际(PCT)申请公开No.WO2015/034665)。
[0016] 国际(PCT)申请公开No.W02014/006626公开了香菊提取物以及其他植物的提取物作为驱虫剂的用途。
[0017] 目前正在持续尝试开发用于治疗皮肤疾病和损伤的基于植物的组合物。例如，美国专利申请公布No.2007/0122492公开了植物提取物和包含一种或多种能够抑制细胞外蛋白酶的植物提取物的皮肤病学制剂。还公开了植物提取物作为适于治疗或预防各种皮肤病学病症(包括皮肤起皱或松垂、辐射诱导的皮肤和/或毛发受损、皮肤纹理线的加深、皮肤的弹性变化)的皮肤病药物，以及用于皮肤、毛发和/或指甲的日常护理的用途。
[0018] 美国专利No.8,771,758公开了一种通过局部施用包含能够抑制胶原酶活性的Tiliacora triandra Diels植物提取物的组合物来改善老化皮肤的美学外观的方法。
[0019] 非常需要并且有利的是具有有效保护一般包括上皮细胞的组织和皮肤，具体地免受由环境危害，特别是污染物，引起的有害影响的改善的组合物和方法。
发明内容
[0020] 本发明提供了香菊(Asteriscus graveolens)植物的提取物和包含该提取物、可用于保护哺乳动物组织免受污染的组合物。本发明的提取物和组合物在防止因暴露于各种污染物，特别是化学物质，包括在烟雾中存在的化学物质(例如发动机排烟、烟草烟雾和火灾烟雾)以及工业废料中存在的化学物质导致的对包含上皮细胞的组织的损伤是非常有用的。
[0021] 本发明部分地基于以下意想不到的发现：香菊提取物的可溶于极性溶剂中的级分可用于防御皮肤和与外源性污染物接触的其他包含上皮细胞的组织(例如肺组织)遇到的毒素挑战。该提取物级分从而改善皮肤外观和活力，并减少皮肤过早老化。本发明的提取物表现出对细胞活力的显著保护效应，增加暴露于经烟雾污染的培养基之后的细胞存活率。
[0022] 根据一个方面，本发明提供了一种用于保护包括上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的方法，其包括：向有需要的受试者施用来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含来源于香菊植物的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物，从而保护所述组织免受至少一种污染物的影响。
[0023] 根据某些实施方案，受试者已经暴露于和/或正暴露于和/或预期将暴露于该至少一种污染物。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0024] 根据某些实施方案，该至少一种污染物来源于燃烧气体、工业污染物和烟雾中的至少一种。根据某些实施方案，污染物是与烟雾相关的污染物。根据某些示例性实施方案，污染物来源于烟草烟雾。
[0025] 根据某些实施方案，受试者已经暴露于和/或正暴露于和/或预期将暴露于烟雾。根据一些实施方案，烟雾是烟草烟雾。根据其他实施方案，受试者是吸烟者或暴露于烟草烟雾(吸二手烟者或被动吸烟者)。
[0026] 根据某些实施方案，受试者偶尔暴露于至少一种污染物。根据其他实施方案，受试者每天暴露于至少一种污染物。
[0027] 根据一些实施方案，保护组织免受至少一种污染物的有害影响导致选自由以下各项组成的组中的至少一种结果：组织细胞活力增加，组织细胞的健康得到改善和组织细胞的过早老化减少。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据某些示例性实施方案，组织细胞是上皮细胞。根据某些实施方案，保护组织包括增加所述组织细胞对至少一种污染物的耐受性。根据某些示例性实施方案，保护组织包括增加组织上皮细胞对至少一种污染物的耐受性。
[0028] 不希望受任何特定理论或作用机制的束缚，本发明的提取物通过减少上皮细胞对所述污染物的反应或敏感性，有效地增加了包含上皮细胞的组织对污染物的耐受性。
[0029] 根据某些实施方案，本发明的方法用于保护选自由皮肤、鼻腔、口腔、咽、喉、气管和/或肺组织组成的组的组织。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0030] 根据某些示例性实施方案，上皮组织形成皮肤的一部分。根据这些实施方案，该方法通常包括向有需要的受试者的皮肤局部施用来源于香菊的极性溶剂提取物和/或其级分或者包含来源于香菊的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。根据另外的实施方案，保护皮肤免受至少一种污染物的有害影响导致选自由以下各项组成的组中的至少一种结果：皮肤细胞活力增加，皮肤外观得到改善和/或皮肤的过早老化减少。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据某些实施方案，改善皮肤外观和/或减少皮肤过早老化包括皮肤皱纹、皮肤褐斑和皮肤红斑中的至少一种外观的减少。根据一些实施方案，改善皮肤外观和/或减少皮肤过早老化包括与预定阈值相比维持和/或提高皮肤含水量值。
[0031] 根据某些实施方案，皮肤含水量预定阈值是从同一受试者的未暴露于至少一种污染物的皮肤区域获得的。根据其他实施方案，皮肤含水量预定阈值是从未暴露于至少一种污染物的受试者的皮肤区域获得。
[0032] 根据另外的示例性实施方案，上皮组织形成肺、气管和鼻腔中的至少一个的一部分。根据某些实施方案，该方法包括通过吸入施用极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。另外或替代地，该方法包括通过喷嘴喷雾施用极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。
[0033] 根据另外的实施方案，上皮组织形成咽部和喉部中的至少一个的一部分。根据这些实施方案，将极性溶剂提取物和/或其级分、或者包含极性溶剂提取物和/或其级分的组合物配制成用于口腔护理。
[0034] 待施用于受试者的香菊提取物和/或其级分的浓度和施用方案尤其取决于待治疗的组织类型、暴露的严重程度和由至少一种污染物导致的症状的严重性。根据某些实施方案，施用包含浓度为0.1％至10％(w/w)的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。根据其他实施方案，组合物包含0.2％至5.0％的极性溶剂提取物和/或其级分。根据某些示例性实施方案，施用包含1％的极性溶剂提取物和/或其级分的组合物。
[0035] 根据某些实施方案，提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物每天施用至少一次。根据某些示例性实施方案，提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物每天施用两次。根据一些实施方案，将提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物至少一周、至少两周、至少三周或至少4周施用一次。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据某些示例性实施方案，将提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物在四周期间施用。
[0036] 根据一些实施方案，污染物以其分离形式与包含上皮细胞的组织接触。根据其他实施方案，污染物存在于与受试者组织接触的介质中。
[0037] 根据某些实施方案，将污染物和/或包含其的介质与受试者的皮肤接触。根据其他实施方案，将污染物和/或包含其的介质与受试者的口腔接触。根据另外的实施方案，将污染物和/或包含其的介质与受试者的呼吸系统接触。
[0038] 根据某些实施方案，污染物存在于选自由环境空气、水和土壤组成的组的介质中。
[0039] 根据一些实施方案，受试者是人。根据某些示例性实施方案，人类受试者是吸烟者。
[0040] 根据某些实施方案，本发明的组合物和方法采用极性溶剂提取物的级分。根据其他实施方案，本发明的组合物和方法采用来源于香菊的完整极性溶剂提取物。
[0041] 根据一些实施方案，极性溶剂提取物和/或其级分来源于香菊植物的任何地上部分。根据另外的实施方案，地上部分选自由以下各项组成的组：茎、叶、种子、花、果实，以及它们的任何组合。根据某些实施方案，地上部分是茎和/或叶。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0042] 根据一些实施方案，极性溶剂是水。根据其他实施方案，极性溶剂包含水和至少一种附加的极性溶剂。根据某些实施方案，附加的极性溶剂选自1,2,3-丙三醇(也称为甘油或丙三醇)、乙醇、丙二醇、丁二醇、甲醇和丙酮。每个可能性代表本发明的单独实施方案。在一些实施方案中，极性溶剂包括水和甘油。在其他实施方案中，极性溶剂包括水和丁二醇。在其他实施方案中，极性溶剂包括丙二醇。根据某些示例性实施方案，提取物或其级分是包含水和甘油的溶液的形式，其中甘油浓度相对于溶液的总重量在40％至60％(w/w)的范围内。
[0043] 根据某些典型实施方案，该溶液包含50％的甘油(w/w)。
[0044] 根据某些实施方案，包含根据本发明的提取物和/或其级分和甘油的溶液是澄清的均质溶液的形式。根据一些示例性实施方案，溶液在40-50℃的温度下至少三个月是稳定的，不会形成可见的聚集体。
[0045] 根据某些实施方案，提取物或其级分基本上不含精油。根据一些实施方案，提取物或其级分包含高达1.0％、0.5％、0.1％、0.05％、0.03％、0.01％、0.005％或0.001％w/w的精油。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据另外的实施方案，提取物或其级分不含精油。
[0046] 根据某些实施方案，提取物或其级分基本上不含油。
[0047] 根据另外的方面，本发明提供了一种组合物，其包含有效保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的量的来源于香菊植物的极性溶剂提取物或其级分，还包含美容学和/或药学上可接受的和/或皮肤病学的稀释剂、赋形剂或载体。
[0048] 根据一些实施方案，提取物或其级分来源于香菊植物的任何地上部分。根据另外的实施方案，地上部分选自由以下各项组成的组：茎、叶、种子、花、果实，以及它们的任何组合。根据某些实施方案，地上部分是茎和/或叶。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0049] 根据某些实施方案，提取物或其级分基本上不含精油。根据一些实施方案，提取物级分包含至多1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.03％、0.01％、0.005％或0.001％w/w的精油。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据另外的实施方案，提取物或其级分不含精油。
[0050] 根据某些实施方案，提取物或其级分基本上不含油。
[0051] 根据某些实施方案，组合物包含相对于组合物的总重量浓度为0.1％至10％(w/w)的菊科(Asteriscus)提取物和/或其级分。根据其他实施方案，组合物包含浓度为0.2％至5％的提取物或其级分。根据某些示例性实施方案，组合物包含相对于组合物的总重量浓度为1％(w/w)的提取物和/或其级分。
[0052] 根据一些实施方案，组合物还包含至少一种附加的植物提取物。根据其他实施方案，组合物还包含至少一种微藻提取物。
[0053] 根据一些实施方案，组合物还包含附加的活性剂，其选自由以下各项组成的组：抗氧化剂、螯合剂、清洁剂、皮肤保护剂、防晒剂、美白剂、抗皱剂、抗炎剂、抗老化剂，以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0054] 根据一些实施方案，组合物被配制成选自由以下各项组成的组：水溶液、霜剂、洗剂、油包水乳液、水包油乳液、微乳液、纳米乳液、凝胶、精华素(serum)和乳状物的形式。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0055] 根据某些实施方案，组合物被配制用于局部施用。根据本发明的教导，可以使用本领域已知的任何局部制剂。
[0056] 根据某些实施方案，组合物是还包含美容上可接受的或皮肤病学的载体、稀释剂和/或赋形剂的化妆品组合物或皮肤病学组合物。
[0057] 根据一些实施方案，美容上可接受的或皮肤病学的载体选自由以下各项组成的组：脂质体、胶束结构、微胶囊，以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0058] 根据一些实施方案，化妆品组合物还包含美容上可接受的或皮肤病学的添加剂。根据某些实施方案，添加剂选自由以下各项组成的组：脂肪、乳化剂、助乳化剂、亲水胶凝剂、亲脂胶凝剂、防腐剂、溶剂、香料、填料、亲水性过滤剂、脂质过滤剂、着色剂、颜料、中和剂、pH缓冲剂、渗透增强剂、润肤剂、聚合物，以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0059] 根据其他实施方案，将组合物配制成通过喷雾嘴进行施用。
[0060] 根据一些实施方案，组合物是吸入组合物。根据某些实施方案，通过采用吸入装置将吸入组合物递送至呼吸道。根据某些实施方案，吸入装置选自由吸入器和喷雾器组成的组。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据某些实施方案，吸入组合物用加湿器施用。根据其他实施方案，通过空气过滤系统施用吸入组合物。
[0061] 根据一些实施方案，组合物是口腔护理组合物。根据某些实施方案，口腔护理组合物为选自由以下各项组成的组的形式：洁齿剂、牙膏、凝胶、粉末、漱口水、口气清新剂、牙龈按摩膏、嚼漱片、锭剂和口香糖。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据某些实施方案，口腔护理组合物包含选自由以下各项组成的组的附加试剂：白色着色剂、增白剂、酶、抗牙斑剂、抗牙齿变色剂、抗微生物剂、抗龋齿剂、增味剂、冷却剂和唾液分泌剂。根据一些实施方案，口腔护理组合物还包含选自由以下各项组成的组的试剂：研磨剂、表面活性剂、螯合剂、氟源、增稠剂、缓冲剂、溶剂、保湿剂、载体和填充剂。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0062] 根据另外的实施方案，本发明的组合物旨在用于保护包含上皮细胞的组织免受污染物的有害影响。根据某些实施方案，组织选自由以下各项组成的组：皮肤、鼻腔、口腔、咽、喉、气管和/或肺组织。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0063] 根据另外的方面，本发明提供了一种用于保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的组合物，其中该组合物包含来源于菊科植物的极性溶剂提取物或其级分。
[0064] 来源于菊科植物的提取物、其级分和包含来源于菊科植物的提取物、其级分的组合物如上所述。
[0066] 图1提供了香菊提取物对用香烟烟雾致毒(intoxicated)的角质细胞的活力的影响的图示。在0.001％(图1A)和0.002％(图1B)的浓度下测试提取物的影响。
[0067] 图2表明香菊提取物具有抗衰老效果。针对提取物(浅色条)或安慰剂(深色条)处理来测试皱纹计数(图2A)和皱纹体积(图2B)。如图所示，在14和28天之后测量变化百分比。显著变化标有星号(*)。
[0068] 图3示出了对用香菊提取物处理过的皱纹的临床评价。针对提取物(浅色条)和安慰剂(深色条)评估皱纹灰度等级(WGS)。如图所示，在14和28天之后测量变化的百分比。显著变化标有星号(*)。NS-不显著。
[0069] 图4示出了对用香菊提取物处理过的皮肤的临床评估。针对提取物(浅色条)和安慰剂(深色条)来评估皮肤粗糙度(图4A)和皮肤肌理(图4B)。如图所示，在14和28天之后测量变化百分比。显著变化标有星号(*)。NS-不显著。
[0070] 图5示出了香菊提取物对肤色的影响。肤色用个体类型角(ITA)单位评估，根据L*(较亮皮肤的增加)和b*(黄色皮肤的减少)计算。针对提取物(浅色条)和安慰剂(深色条)评估ITA。如图所示，在14和28天之后测量变化百分比。显著变化标有星号(*)。NS-不显著。
[0071] 图6示出了用香菊提取物处理过的皮肤的皮肤含水量变化。针对提取物(浅色条)和安慰剂(深色条)评估皮肤含水量。如图所示，在14和28天之后测量百分比变化。显著变化标有星号(*)。
[0072] 图7示出了用香菊提取物处理过的皮肤上可见斑点计数的变化。针对提取物(浅色条)和安慰剂(深色条)评估可见斑点计数。如图所示，在14和28天之后测量百分比变化。显著变化标有星号(*)。NS-不显著。
[0074] 图9证明了香菊提取物对肺泡基底上皮细胞的保护其免受因香烟烟雾凝结物(CSC)导致的DNA片段化的效应，如通过TUNEL测定所测量的。
[0075] 图10证明了香菊提取物对肺泡基底上皮细胞的保护其免受因香烟烟雾凝结物(CSC)导致的DNA片段化的效应，如通过8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)测定所测量的。
具体实施方式
[0076] 本发明提供来源于香菊的提取物和/或其级分，和/或包含来源于香菊的提取物和/或其级分、用于预防和/或治疗因污染物导致的对包含上皮细胞的组织的损伤的组合物。
[0077] 本发明部分基于以下意想不到的发现：香菊的极性溶剂提取物保护所培养的人上皮细胞(表皮和肺细胞)免受因香烟烟雾污染的介质诱发的死亡和DNA损伤。当施加至活有机体内的暴露于烟雾的皮肤(通过局部施用于重度吸烟受试者的皮肤)时，提取物对皮肤有积极效应，减少了皱纹计数和体积，并改善了肤色、皮肤肌理和含水量。
[0078] 不希望受任何特定理论或作用机制的约束，本发明的提取物和组合物在保护和/或增加上皮细胞对因污染物，特别是烟雾相关的污染物导致的损伤的耐受性方面的高效率可归因于其影响基因表达的能力，具体地是降低编码参与炎症、氧化和细胞死亡过程的蛋白质的基因的表达并增加编码参与毒素代谢的蛋白质的至少一个基因的表达。该提取物对细胞保护机制的积极贡献可归因于香菊植物中存在的可溶于极性溶剂中的特定组分和/或保留该植物组分的保护性质的提取方法。
[0079] 本发明的提取物和组合物在预防因各种污染物导致的对上皮组织的损伤方面是非常有用的。本发明的提取物和组合物还可用于防止空气污染损伤，诸如因火灾烟雾、发动机燃烧气体和工业污染导致的那些损伤。空气污染源的一个示例是烟草烟雾。许多研究已经显示了香烟烟雾中存在的毒素与对肺和皮肤的上皮细胞的损伤之间的关联。香烟烟雾含有超过4700种化学化合物，其中约60种被广泛认可为致癌物。因此，香烟烟雾可以充当空气污染的广义模型。
[0080] 定义
[0081] 术语“极性溶剂提取物”和“来源于菊科植物的极性溶剂提取物”和“来源于菊科植物的提取物，其中该提取物可溶于极性溶剂”可互换使用，并且是指通过用极性溶剂提取香菊的任何地上部分获得的提取物。术语“其级分”指提取物的至少一种级分。根据某些示例性实施方案，通过过滤源粗提取物获得级分。
[0082] 涉及至少一种污染物的术语“有害影响”或其复数形式“多种有害影响”是指所导致的对包含上皮细胞的组织，特别是对衬于哺乳动物体的外表面(皮肤)和内腔与管腔两者处的组织的任何伤害。有害影响可以包括但不限于活力丧失、代谢障碍、过早老化和/或细胞死亡。如本文所用的术语“对皮肤的有害影响”是指由如在本发明中所公开的污染物导致的对皮肤的任何伤害，包括但不限于皮肤过早老化、活力丧失、皮肤外观恶化，特别是皱纹的形成。
[0083] 如本文所用的术语“皮肤损伤”是指由于暴露于如在本发明中所描述的污染物而导致的对任何皮肤层的伤害。如本文所用的术语“污染物”是指引入环境中、具有不期望的影响的化合物，或对其已被引入其中的介质的特性和功能产生不利影响的化合物。如本文所用，术语“污染物”主要是指对哺乳动物有毒和/或有害的异种化学化合物。根据某些实施方案，污染物是烟雾相关物质，特别是损害上皮细胞的烟雾相关物质。根据某些示例性实施方案，烟雾是烟草烟雾。
[0084] 术语“吸烟者”在本文中以其最广泛的范围使用并且是指吸香烟、烟斗和任何其他常用吸烟材料的受试者。
[0085] 如本文所用，术语“吸二手烟者或被动吸烟者”是指暴露于由吸烟者产生的烟草烟雾的受试者。
[0086] 术语“上皮”、“上皮组织”和“上皮细胞”在本文中可互换使用并且意思是指由以非常少的细胞间物质分隔的一层或多层细胞组成并且形成身体及其器官的大多数内表面和外表面的覆盖物的膜组织。该术语明确包括有活力的角质细胞。术语“包括上皮细胞的组织”是指包括上皮细胞作为其结构的一部分的组织。根据本发明的上皮细胞尤其存在于皮肤、口腔和鼻腔、咽、喉、食道、气管和肺中。
[0087] 如本文所用，术语“精油”是指来源于香菊的叶、茎、花或枝的挥发性油。精油是来源于植物物质的疏水性油，基本上不含脂质或脂类油。
[0088] 术语“基本上不含油”和“基本上不含精油”在本文中结合本发明的提取物使用以定义包含低于通过本领域中常见的方法可检测到的水平的量的油或精油的提取物或其级分。根据某些实施方案，本发明的极性溶剂提取物或其级分包含小于1％的油或小于1％的精油。根据某些另外的实施方案，本发明的极性溶剂提取物或其级分包含小于0.1％的油或小于0.1％的精油。
[0089] 如本文所用，术语“和/或”包括一个或多个相关列出项目的的任意一者和所有组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0090] 根据一个方面，本发明提供了一种用于保护包括上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的方法，其包括：向有需要的受试者施用来源于香菊植物的极性溶剂提取物或其级分、或者包含来源于香菊植物的极性溶剂提取物或其级分的组合物，从而保护所述组织免受至少一种污染物的有害影响。
[0091] 根据某些实施方案，受试者是哺乳动物。根据某些示例性实施方案，受试者是人。
[0092] 香菊属于菊科，并且在炎热和干燥的环境中生长。已知植物精油在传统医学中被用作健胃药，用于治疗发烧、胃肠道疾病、头痛和支气管炎，以及用作抗炎药。该植物在其抗微生物和降血糖特性方面的用途也已被描述(Cristofari等人，2012，同前)。虽然菊科的这些用途是已知的，但是在本发明之前，香菊提取物尚未被指定国际化妆品成分命名法(INCI)名称，并且其未在个人护理产品委员会(US)和/或中国现有化妆品成分清单中注册。出乎意料的是，本发明现在公开，基本上不含精油的香菊的极性溶剂提取物可用于保护和/或治疗和/或预防污染相关的上皮损伤，诸如皮肤损伤。
[0093] 本发明的提取物可以从生长在其天然产地中的香菊植物或从在指定的农业条件下生长的植物获得。可以使用任何种类的植物。
[0094] 提取物可以从植物的任何部分获得。根据一些实施方案，提取物来源于香菊植物的任何地上部分。根据另外的实施方案，地上部分选自由以下各项组成的组：茎、叶、种子、果实、以及它们的任何组合。根据某些实施方案，地上部分是茎或叶。任何可能性代表本发明的单独实施方案。
[0095] 根据一些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少50体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少60体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少70体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少80体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少90体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少95体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少99体积％的精油。根据某些实施方案，来源于香菊的提取物或其级分与香菊的地上部分中的精油百分比相比包含少99.9体积％的精油。
[0096] 根据一些实施方案，来源于菊科的提取物或其级分不含6-氧代环橙花叔醇(6-oxocyclonerolidol)。根据某些实施方案，本发明的提取物包含小于0.7％、0.5％、0.2％、0.1％、0.05％或0.01％的6-氧代环橙花叔醇。每个可能性代表本发明的单独实施方案。根据一些实施方案，来源于菊科的提取物或其级分不含6-羟基环橙花叔醇(6-
hydroxycyclonerolidol)。根据其他实施方案，来源于菊科的提取物或其级分不含顺式-8-乙酰氧基菊烯乙酸酯(cis-8-acetoxychrysanthenyl acetate)。
hydroxycyclonerolidol)。根据其他实施方案，来源于菊科的提取物或其级分不含顺式-8-乙酰氧基菊烯乙酸酯(cis-8-acetoxychrysanthenyl acetate)。
[0097] 可以使用本领域中已知的各种极性溶剂来获得本发明的提取物。根据某些示例性实施方案，极性溶剂包含水和选自由以下各项组成的组的至少一种附加极性溶剂：1,2,3-丙三醇(也称为甘油或丙三醇)、乙醇、丙二醇、丁二醇、甲醇和丙酮。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0098] 根据某些示例性实施方案，使用水作为极性溶剂，从香菊植株各部分中提取污染物保护组分，在获得所需的提取物级分后，将甘油(1,2,3-丙三醇)加入到水性介质中。根据这些实施方案，本发明提供了一种提取物溶液，其包含香菊的水提取物的至少一种级分和甘油。根据一些实施方案，香菊的水提取物的至少一种级分与甘油的比率为1:3至3:1。根据某些当前示例性的实施方案，该比率为1:1。即使当保持在40-50℃的高温下，该提取物溶液也是澄清、半澄清，均质和高度稳定达至少三个月，而不会形成可见的聚集体。
[0099] 根据一些实施方案，污染物以其分离形式与包含上皮细胞的组织接触。根据其他实施方案，污染物存在于与受试者组织接触的介质中。
[0100] 如本文所用，术语“污染”是指包含至少一种污染物的介质。
[0101] 已知由工业、汽车尾气、烟草烟雾和其他来源造成的城市空气污染对人体皮肤有不利影响，并引起早衰和皱纹(Drakaki E等人，2014.Frontiers in Environmental Science 2:1-6)。污染和烟雾由被吸入和尤其通过皮肤吸收的分子和颗粒的高度复杂的混合物组成。污染的组成可以显著地变化，但通常包含若干种主要的化合物类别(Ghelfi E.2011.在：Advanced Topics in Environmental Health and Air Pollution Case Studies中，Anca Maria Moldoveanu Ed.InTech.，第121页至第156页)。
[0102] 烟草烟雾(最常见的类型是香烟烟雾)也被认为是空气污染的来源，并且包含已知对人体健康有害的多达4600种化合物和毒素。吸食香烟引起早衰，并且对皮肤具有可见和明显的影响(Ortiz A和Grando S A.，2012，Int J of Dermatol 51:250-262)。
[0103] 污染物可以分为选自以下各项的一个或多个组：挥发性有机化合物(VOC)、聚芳烃(PHA)、氧化物和重金属。
[0104] VOC从废气排放物和在油漆和各种工业设施中使用有机溶剂时排放到空气中。此类化合物的示例是脂族烃、乙酸乙酯、乙二醇醚和丙酮。香烟烟雾排放物包含VOC，包括苯和相关的单芳烃、醛和酮、呋喃、丙烯腈、1,3-丁二烯、氯乙烯和硝基甲烷，所有都是已知的空气污染物(Sampson M M等人，2014.Anal Chem.86(14):7088-7095)。皮肤暴露于VOC可能导致细胞因子增加，这继而导致炎症、过敏反应、特应性皮炎或湿疹。
[0105] PAH组成了一组多于100种不同的化学物质，这些化学物质是从燃烧的煤、油、汽油、垃圾、烟草、木材或其他有机物质如炭烤肉释放的。它们也被称为多核芳烃。这些环状分子已经牵涉于皮肤癌的发展中。当被活化时，它们形成可以穿透皮肤并结合细胞DNA的二醇和环氧化物，从而导致致癌作用。还已经注意到，对于一些化学物质(例如苯并[a]芘)，其影响随着暴露于UVA而增强。香烟烟雾也已知含有PAH，包括(除了其他物质外)1-甲基蒽(1-MA)，菲(PA)和苯并[a]芘(Lee LL等人，2002，Bone 30(6):917-923；Siddens L K等人，2012.Toxicol Appl Pharmacol 264(3):377-386；Tithof P K等人，2002.FASEB J.16(11):1463-4)。
[0106] 氧化物，如二氧化硫、二氧化氮和一氧化碳，形成了已知存在于空气污染和香烟烟雾两者中的另一组分子。NOx和CO与特应性湿疹和屈侧湿疹以及特应性皮炎相关联(Drakaki，2014年，同上)。
[0107] 活性氧类(ROS)和与ROS相关的自由基与氧化应激和脂质过氧化相关联。这些物质已经显示为导致经表皮的失水、皮肤中结缔组织的变性以及MMP(金属蛋白酶)——分解结缔皮肤组织的酶——的增加(Jorgensen L N K等人，1998，Surgery 123:450455)。香烟烟雾释放的自由基也已经显示会导致DNA损伤(Albino A P等人，2006，Int J Oncol 28:1491-1505)。发现活性氧类存在于香烟烟雾和空气污染两者中。作为其有害影响的一个示例，已经测量到纽约市的受试者在繁忙的道路附近运动30分钟后，血液碳氧血红蛋白从
1.7％急剧升高至5.1％(Nicholson J P.1983，Physician Sportsmed 11:135-138)。
1.7％急剧升高至5.1％(Nicholson J P.1983，Physician Sportsmed 11:135-138)。
[0108] 痕量的重金属也存在于空气污染和香烟烟雾两者中，包括镉、铅、镍和铬。暴露于痕量水平的重金属尚未显示会影响皮肤质量，但重金属随时间推移的积累已显示与较高癌症风险相关。
[0109] 另外的重要污染物类别是颗粒物(PM)。此类污染物不是按照其组成而是按照其粒度定义的；颗粒物通常分为三个主要组：粗粒级，其含有粒度在2.5至10μm(PM10-PM2.5)的范围内的较大颗粒；细粒级，其含有至多2.5μm(PM2.5)的较小粒度范围；以及细粒级中小于0.1μm并且被称为超细颗粒的颗粒。
[0110] 空气中颗粒物的总质量大部分通常由在0.1至2.5μm的范围内的细颗粒组成。超细颗粒通常仅占空气污染物总质量的百分之几，但是涵盖超过90％的颗粒数目。
[0111] 许多研究已经表明，香烟烟雾会排放类似于废气的PM2.5(Invernizzi G等人，2004，Tob Control 13：219-221)，并且这些颗粒对人体健康，特别是对皮肤健康有不利影响。已经发现暴露于PM污染与皮肤老化迹象之间的相关性，皮肤老化迹象包括色素斑、鼻唇沟纹以及皱纹( A等人，2010，J Investigative Dermatol 130:2719-2726)。
[0112] 在一些实施方案中，污染是空气污染。在一些实施方案中，空气污染是烟雾。在其他实施方案中，空气污染是烟草烟雾。
[0113] 香烟烟雾中存在的许多化合物也存在于空气污染的城市和工业区域中。因此，香烟烟雾的组成是空气污染组成的代表性示例。
[0114] 根据某些示例性实施方案，污染物选自由表1中所呈现的污染物组成的组。
[0115] 表1：香烟烟雾的主要毒性和致癌组分，包括气相和颗粒相组分
[0116]
[0117]
[0118]
[0119]
[0120] 本发明现在显示，香菊的极性溶剂提取物在保护上皮细胞免受因污染物，特别是烟雾相关的污染物导致的有害影响和/或损伤方面是非常有效的。因此，提取物和包含其的组合物可用于保护受试者，特别是倾向于暴露于污染(特别是烟雾相关的污染)的人类受试者。
[0121] 根据某些实施方案，人受试者暴露于烟草烟雾中。根据某些示例性实施方案，人类受试者是重度吸烟者。
[0122] 提取物或其级分的剂量和给药途径取决于要保护的靶组织、暴露于污染物的程度，并且取决于受试者的特性，包括性别、年龄和总体健康状况，如本领域的技术人员已知的。根据某些示例性实施方案，香菊提取物或其级分的有效剂量为相对于包含香菊提取物或其级分的组合物总重量的0.1％至10％，0.2％至5％或约1％(w/w)。
[0123] 根据某些示例性实施方案，将提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物局部施用至选自由以下各项组成的组的组织：皮肤组织、气管组织、肺组织以及口腔、咽和喉内的组织。
[0124] 根据某些实施方案，将提取物、其级分或包含提取物、其级分的组合物局部施用至皮肤。如本文所用，术语“局部施用至皮肤”包括施用至皮肤表面上以及施用至皮肤层内。根据某些实施方案，将施用执行至皮肤上和/或将施用以经皮和/或皮下方式进行。
[0125] 可以将香菊的极性溶剂提取物或其级分本身施用至有此需要的受试者，或以包含香菊的极性溶剂提取物或其级分的组合物的形式施用。
[0126] 根据另外的方面，本发明提供了一种组合物，其包含有效保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的量的来源于菊科植物的极性溶剂提取物或其级分，还包含美容学上、药学上或皮肤病学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。
[0127] 如上所述，本发明的提取物或其级分旨在用于保护皮肤、气管、肺、口腔、咽和喉中的至少一个中的上皮细胞。可以根据本发明的教导使用本领域已知的适于将活性成分施用至皮肤、气管、肺、口腔、咽和喉的任何组合物，只要保持本发明的提取物抵抗污染的有害影响的保护活性即可。
[0128] 根据一些实施方案，组合物选自由以下各项组成的组：化妆品组合物、口腔护理组合物和吸入组合物。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0129] 术语“化妆品组合物”是指适用于局部施用的组合物，特别是局部施用至哺乳动物的皮肤上。根据某些实施方案，如本文所述，组合物对皮肤具有美容上有益的效果。
[0130] 本文所用的术语“口腔护理组合物”是指适于施用至个体的口腔和/或咽和/或喉的组合物。该组合物可以用作漱口水、牙膏、口气清新剂等，如本领域已知的。
[0131] 本文所用的术语“吸入组合物”是指针对呼吸系统的组合物。吸入组合物被设计成达到呼吸系统中的上皮细胞。
[0132] 根据另一方面，本发明提供了一种用于保护包含上皮细胞的组织免受至少一种污染物的有害影响的组合物，其中该组合物包含来源于菊科植物的极性溶剂提取物或其级分。
[0133] 根据某些实施方案，组合物是化妆品组合物，其中
[0134] 根据其他实施方案，组合物是还包含治疗上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的吸入组合物。
[0135] 根据另外的实施方案，组合物是还包含适于口腔护理的稀释剂、赋形剂或载体的口腔护理组合物。
[0136] 根据某些实施方案，组合物将局部施用至包含上皮细胞的组织。根据一些实施方案，包含上皮细胞的组织选自由以下各项组成的组：皮肤、鼻腔、口腔、咽、喉、气管和/或肺组织。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0137] 化妆品组合物
[0138] 本发明的化妆品组合物可以包含本领域中已知的其他可接受的化妆品试剂。根据一些实施方案，该化妆品试剂选自由以下各项组成的组：植物提取物、肽、寡核苷酸、寡糖或多糖、配醣、生物碱、类黄酮、多酚、萜类化合物、聚酮化合物、类胡萝卜素、脂肪酸或其衍生物、类固醇、黄嘌呤、类视色素、α-羟基酸、β-羟基酸、α-2肾上腺素能抑制剂、β-肾上腺素能激动剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素、氢醌、抗坏血酸、曲酸、皮质类固醇、粘多糖、胶原、雌激素、异黄酮、肉桂酸、过氧化苯甲酰、环庚三烯酚酮、儿茶酚、巯基胺、烟酰胺、生育酚、阿魏酸、壬二酸、肉毒杆菌、尿素，其衍生物、盐、以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0139] 根据一些实施方案，化妆品组合物还包含美容上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。根据另外的实施方案，化妆品上可接受的载体选自由以下各项组成的组：脂质体、胶束结构、微胶囊、以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0140] 根据一些实施方案，化妆品组合物还包含可接受的添加剂。根据某些实施方案，添加剂选自由以下各项组成的组：脂肪、乳化剂、助乳化剂、亲水胶凝剂、亲脂胶凝剂、防腐剂、溶剂、香料、填料、亲水性过滤剂、亲脂性过滤剂、着色剂、中和剂、渗透增强剂、聚合物、以及它们的任意组合。每个可能性代表本发明的单独实施方案。
[0141] 各种添加剂的量是化妆品和皮肤病学制剂中常规使用的那些量，如本领域的技术人员已知的。
[0142] 合适的脂肪的非限制性示例包括矿物油、动物来源的油(羊毛脂)、合成油(肉豆蔻酸异丙酯、辛基十二烷基、异硬脂酸异硬脂醇酯、油酸癸酯或棕榈酸异丙酯)、硅油(环甲基硅酮(cyclomethicone)或聚二甲基硅氧烷)、以及氟化油。脂肪醇、脂肪酸、蜡和树胶，特别是硅胶和弹性体也可以用作脂肪。
[0143] 合适的乳化剂和助乳化剂的非限制性示例包括聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、PEG脂肪醇醚、甘油脂肪酸酯、烷基硫酸酯、烷基醚硫酸酯、烷基磷酸酯、烷基聚葡糖苷和聚二甲基硅氧烷共聚醇。
[0144] 合适的亲水胶凝剂的非限制性示例包括羧乙烯基聚合物(卡波姆)，丙烯酸共聚物如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物，聚丙烯酰胺，多糖如黄原胶、瓜尔胶，天然树胶如纤维素胶及其衍生物，粘土以及2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷酸共聚物。
[0148] 合适的渗透增强剂的非限制性示例包括醇和二醇类(乙醇和丙二醇)、乙氧基二甘醇、醇和脂肪酸(油酸)，脂肪酸酯和二甲基异山梨醇。
[0150] 合适溶剂的非限制性示例包括水、乙醇、甘油、丙二醇、丁二醇、磷酸盐缓冲液、盐水和山梨糖醇。
[0151] 根据一些实施方案，组合物包含起泡剂作为添加剂。起泡剂是当接触液体时发出二氧化碳气体的试剂，所述起泡剂接触液体的目的为例如破裂胶囊或促进胶囊内容物与胶囊外部的周围材料的紧密接触。
[0152] 根据一些实施方案，组合物包含其他添加剂，诸如公认安全级(GRAS)。GRAS是美国食品和药品管理局(FDA)的认证，指示添加到食物中的化学物质或物质被认为是安全的，因此免除通常的美国联邦食品、药品和化妆品法案(FFDCA)的食品添加剂限量要求。根据一些实施方案，食品增补剂可接受的赋形剂包含粉末和其它口腔散剂形式的赋形剂、局部用散剂形式的赋形剂、液体形式的赋形剂、膏剂形式的赋形剂、或它们的组合。
[0154] 液体形式的赋形剂的非限制性示例包括水、丙三醇、丙二醇、甜味糖浆、乙醇、脂肪油、乙二醇、聚乙二醇和山梨糖醇。
[0155] 膏剂形式的赋形剂的非限制性示例包括通过混合脂肪、脂肪油、羊毛脂、凡士林、甘油蜡、日本蜡、石蜡、石蜡硫酸酯、树脂、高级醇、塑胶、甘醇、水和表面活性剂制备的疏水或亲水碱(包括油溶性碱、水溶性碱和悬浮碱)。
[0156] 各种添加剂的量是食品增补剂中常规使用的那些量，如本领域的技术人员已知的。
[0157] 吸入组合物
[0158] 吸入组合物可以包含本领域已知的任何赋形剂。例如，美国专利申请No.2014/0377355公开了两种或更多种泊洛沙姆的组合作为任选赋形剂的用途。合适的泊洛沙姆可以包括泊洛沙姆188和泊洛沙姆407。根据一些实施方案，微粉化的泊洛沙姆组合物可以包括在约30μm和约70μm之间的粒度。
[0159] 吸入组合物可以以粉末形式获得并且可以用于填充胶囊，胶囊可以稍后用于吸入。根据一些实施方案，粉末形式的吸入组合物可以采用合适的溶剂如无菌氯化钠溶液和水溶解，以获得溶液形式的吸入组合物。溶液形式的本发明的吸入组合物可以使用合适的吸入装置如定量吸入器(MDI)、干粉吸入器、气溶胶、注射器、移液管、眼药水滴管、喷雾器或任何合适的吸入递送设备递送至呼吸道。
[0160] 口腔护理组合物
[0161] 本发明的另一个实施方案是指包含本发明的提取物或其级分的口腔组合物。口腔组合物旨在与口腔接触，例如以洁齿剂、牙科用凝胶、牙膏、漱口水、无糖吮食糖(sugar-free candies for sucking)、口腔喷雾剂、牙线或牙科护理用口香糖的形式。这就是为什么它们也被认为是牙科用组合物。该术语不涵盖专用于营养的食物产品。
[0162] 口腔组合物通常包含研磨体系(研磨剂或抛光剂)，例如二氧化硅、碳酸钙、磷酸钙、氧化铝和/或羟基磷灰石；表面活性物质，例如月桂基硫酸钠、月桂基肌氨酸钠和/或椰油酰胺丙基甜菜碱；保湿剂，例如甘油和/或山梨糖醇；增稠剂，例如羧甲基纤维素、聚乙二醇、角叉菜胶和/或可分散锂蒙脱石(Laponite.RTM.)；甜味剂，例如糖精；用于令人不愉快的味觉印象的风味矫正剂、用于其他通常不会令人不愉快的味觉印象的风味矫正剂；风味调节物质(例如肌醇磷酸酯，核苷酸如单磷酸鸟苷、单磷酸腺苷，或其他物质如谷氨酸钠或2-苯氧基丙酸)；冷却活性化合物，例如薄荷醇衍生物(例如乳酸L-薄荷酯、烷基碳酸L-薄荷酯、薄荷酮缩酮、薄荷烷羧酸酰胺)、2,2,2-三烷基乙酸酰胺(例如2,2-二异丙基丙酸甲基酰胺)，icilin和icilin衍生物；稳定剂和活性化合物，例如氟化钠、单氟磷酸钠，二氟化锡、氟代季铵盐、柠檬酸锌、硫酸锌、焦磷酸锡、二氯化锡、各种焦磷酸盐的混合物、三氯生、氯己定、氯化十六烷基吡啶、乳酸铝、柠檬酸钾、硝酸钾、氯化钾、氯化锶、过氧化氢、香料、碳酸氢钠和/或气味矫正剂。
[0163] 口香糖或特别是牙科护理口香糖形式的根据本发明的制剂或产品包括包含弹性体的口香糖基础剂，所述弹性体为例如聚乙酸乙烯酯(PVA)、聚乙烯、(低或中等分子量)聚异丁烯(PIB)、聚丁二烯、异丁烯-异戊二烯共聚物(丁基橡胶)、聚乙烯基乙醚(PVE)、聚乙烯基丁基醚、乙烯基酯和乙烯基醚的共聚物、苯乙烯/丁二烯共聚物(苯乙烯/丁二烯橡胶，SBR)或乙烯基弹性体(例如基于乙酸乙烯酯/月桂酸乙烯酯、乙酸乙烯酯/硬脂酸乙烯酯或乙烯/乙酸乙烯酯)，以及所提及的弹性体的混合物，例如在EP 0 242 325、美国专利No.4,518,615；No.5,093,136；No.5,266,336；No.5,601,858或No.6,986,709中所描述的。此外，口香糖基础剂还包括其他组分，例如糖、糖代用品或甜味物质(特别是在WO 2009/21558中描述的那些)、(矿物)填料、增塑剂、乳化剂、抗氧化剂、蜡、脂肪或脂肪油(例如硬化(氢化)植物或动物脂肪，以及甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯)。合适的(矿物)填料是例如碳酸钙、二氧化钛、二氧化硅、滑石、氧化铝、磷酸二钙、磷酸三钙、氢氧化镁以及它们的混合物。合适的增塑剂或用于防止粘着的试剂(防粘剂)是例如羊毛脂、硬脂酸、硬脂酸钠、乙酸乙酯、二乙酸甘油酯(甘油二乙酸酯)、三醋精(甘油三乙酸酯)和柠檬酸三乙酯。合适的蜡是例如石蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、微晶蜡和聚乙烯蜡。合适的乳化剂是例如磷脂，诸如卵磷脂，以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯，例如单硬脂酸甘油酯。
[0164] 根据本发明的制剂或产品(特别是口腔护理制剂或产品形式或制剂形式的那些)优选另外包含一种或多种芳香和/或调味物质，诸如精油和提取物、酊剂和香脂，例如茴香醚、罗勒油、香柠檬油、苦杏仁油、樟脑油、香茅油、柠檬油；柠檬桉油、桉叶油、茴香油、葡萄柚油、洋甘菊油、留兰香油、苋蒿子油、酸橙油、橘皮油、肉豆蔻油(具体地肉豆蔻花油＝肉豆蔻油、肉豆蔻衣油)、没药油、丁香油、丁香花油、橙皮油、牛至油、欧芹(籽)油、薄荷油、迷迭香油、鼠尾草油(快乐鼠尾草(clary sage)、达尔马堤亚鼠尾草或西班牙鼠尾草油)、八角茴香油、百里香油、香草精、杜松子油(具体地为刺柏油)、冬青油、肉桂叶油；肉桂皮油，及其级分，或从其分离的组分。
[0165] 所选组合物内的香菊浓度取决于组合物类型和预期用途。根据某些示例性实施方案，组合物包含浓度为0.1％至10％(w/w)的源自菊科植物的提取物或其级分。根据其他实施方案，组合物包含浓度为0.2％至5％的提取物或其级分。根据某些示例性实施方案，组合物包含相对于组合物的总重量浓度为1％(w/w)的提取物或其级分。
[0166] 提出以下实施例以更全面地说明本发明的一些实施方案。然而，它们绝对不应被解释为限制本发明的广泛范围。在不脱离本发明的范围的情况下，本领域的技术人员可以容易地对本文公开的原理进行许多变型和修改。
[0167] 实施例
[0168] 实施例1：制备香菊提取物
[0169] 将干燥的香菊植株各部分(含水量为10％(w/w)或更低)在室温下以10:1w/w至1:10w/w的比率(植株各部分:水)加入到水中。通常将植株各部分在具有空气循环、设定至20至60℃的温度的烘箱中干燥12至72小时。将混合物在20至100℃下加热0.5至6小时并留置冷却过夜。通过以4500rpm离心30分钟去除固体。接下来，收集上清液并通过1.2微米过滤器，然后通过0.45微米过滤器，最后通过0.22微米过滤器过滤。收集滤液。向滤液中加入50-
60％甘油以形成最终溶液。所形成的溶液是澄清和均质的，其pH在4.0至6.5的范围内。干重在20至60mg/g的范围内，通常在30至45mg/g的范围内。所得溶液作为100％香菊提取物级分。
60％甘油以形成最终溶液。所形成的溶液是澄清和均质的，其pH在4.0至6.5的范围内。干重在20至60mg/g的范围内，通常在30至45mg/g的范围内。所得溶液作为100％香菊提取物级分。
[0170] 实施例2：作为抵抗与烟雾相关的污染的保护剂的香菊提取物的鉴定
[0171] 香烟烟雾被选为污染模型，为对总体健康以及皮肤健康和外观具有经证实影响的相关环境污染物，其含有许多相关的有毒化合物，包括挥发性有机化合物(VOC)、聚芳烃(PHA)、氧化物和重金属。已知存在于香烟烟雾中并对上皮细胞具有有害影响的污染物的特定示例是甲醛和聚芳烃。
[0172] 研究设计：
[0173] 基本上如上文针对香菊所描述的制备许多植物候选物的提取物级分。通过MTT还原测定预先筛选提取物的细胞毒性。简言之，MTT((3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)为一种淡黄色底物，其被活细胞中存在的琥珀酸脱氢酶切割，从而产生深蓝色的水不溶性甲臜盐(formazan salt)。转化与酶活性成比例。在细胞解离和使用DMSO进行甲臜晶体溶解后，使用微板读数器(VERSAmax，Molecular Devices)记录540nm处提取物的局部密度(OD)，该OD与活细胞数目及其代谢活性成比例。
[0174] 使用MTT测试的结果来设定各种植物提取物的浓度，这些浓度适合用于能够保护上皮细胞免受烟雾细胞毒性的提取物筛选测定中。
[0175] 烟雾细胞毒性测定：
[0176] 将正常人表皮角质细胞(NHEK)在培养基中培养24小时。然后去除培养基，并用含有植物提取物级分(测试化合物)的测定培养基替代或仅将溶剂添加到测定培养基中作为对照(2％的H2O或0.008％的DMSO)。在预孵育24小时后，用包含测试化合物(测定培养基)的香烟烟雾致毒的培养基；H2O、H2O-DMSO或无添加作为对照来替代培养基。使用若干种浓度的香烟烟雾致毒测定培养基(在致毒培养基的5％至90％的范围中的8个浓度)进行实验。将细胞用烟雾致毒的培养基孵育24小时。
[0177] 通过光度测定法(如上所述的MTT还原)测量在暴露于烟雾污染的培养基之后的细胞活力。绘制不断增加浓度的烟雾污染的培养基(不断增加的毒性侵害)的细胞毒性，并确定烟雾污染的培养基的IC50(导致50％的细胞活力抑制的烟雾污染的培养基的百分比)。这是此测定中的关键量度：IC50的增大(表示具有显著毒性效应所必需的被污染培养基的剂量增加，即所述培养基的毒性降低)代表植物提取物级分的保护效应。
[0178] 实验一式三份地进行(非致毒对照除外，其中n＝6)。
[0179] 筛选出各种植物提取物，其中香菊提取物凸显为最有效的。实验表明，香菊的提取物级分表现出抵抗香烟烟雾中毒的显著保护作用。在33.1％烟雾致毒培养基(IC50＝33.1)观察到了50％的细胞死亡，而培养基中0.01％的香菊提取物保护细胞直至达47.5％的致毒培养基(IC50增加约43％)。
[0180] 该测定法确认了香菊的极性溶剂提取物最有效用于保护包含上皮细胞的组织免受常见和多成分的毒素混合物如香烟烟雾的影响。结果显示与未处理的细胞相比，用该提取物处理过的细胞的活力增加。
[0181] 实施例3：各种浓度的香菊提取物对遭受吸烟挑战的皮肤上皮细胞的影响[0182] 检查了如上文实施例1中所述产生的若干种浓度的香菊提取物的效应。如上文实施例2所述进行细胞活力测定，对照培养基为H2O。
[0183] 所有实验条件均以n＝5进行，除了非致毒对照以n＝10进行。如图1所示，以低至0.001％(图1A)和0.002％(图1B)的浓度测试的提取物具有抵抗香烟烟雾诱发的中毒的明显保护作用，IC50值从对照条件下的39.3％分别显著偏移至在0.001％和0.002％提取物条件下的48.5％和56.3％。
[0184] 实施例4：香菊提取物对角质细胞中基因表达的影响
[0185] 如实施例1所述的那样制备香菊提取物，并用于评估其对基因表达谱的影响。用0.01％的香菊提取物或H2O作为对照(两者均用测定培养基稀释)处理人正常表皮角质(NHEK)细胞24小时。然后从经处理的细胞中提取mRNA，翻译成双链cDNA并加载在Affymetrix U219阵列试剂盒上进行转录组学分型。在30,000个测试基因中，发现211个被显著调节，这表明表达水平高于或低于2倍变化的截止点。
[0186] 表2显示了其表达作为用菊科提取物级分处理的结果而改变的基因。还指示了受到所观察到的基因表达的降低或升高影响的生物学现象。
[0187]
[0188]
[0189] *调节倍数是用菊科处理过的细胞的基因表达信号和未处理的细胞的信号的比率。
[0190] 结果表明，香菊提取物通过调节基因表达来调节与污染和毒性相关的途径(如炎症、氧化应激、内质网(ER)应激和细胞死亡)，而增加了皮肤的固有防御能力。
[0191] 实施例5：各种浓度的香菊提取物对遭受吸烟挑战的肺上皮细胞的影响
[0192] 在不同时间点从两个已知香菊产地收获香菊。称为AS1-81-1的一种植株于2014年4月从死海收获，而第二个称为AS1-91-1的第二种植株于2015年6月从阿拉瓦沙漠收获。如实施例1中那样提取两种植株，并评估暴露于香烟烟雾凝结物后源自肺的上皮细胞的细胞活力。
[0193] 用各种浓度的香菊处理肺源上皮细胞，然后测定暴露于0.4mg/ml或0.24mg/ml香烟烟雾凝结物(CSC)后的细胞活力。CSC是在DMSO溶液(Murty Pharmaceuticals LTD)中的包含香烟烟雾成分的商售产品。
[0194] 用香菊提取物处理细胞24小时，然后在香菊存在下用CSC(0.4mg/ml、0.24mg/ml)处理细胞另外24小时。然后使用WST1方法(类似于MTT)评估细胞活力。简而言之，将WST-1直接加入生长细胞的培养基中。然后在糖酵解产物NAD(P)H介导的还原过程中将稳定的四唑鎓盐WST-1切割成可溶的甲臜，从而形成红色溶液。所获得的红色溶液的光密度与细胞的存活率成比例，并且是在450nm的波长下测量的。
[0195] 图8显示，两种提取物制剂均具有保护上皮肺组织免受烟雾污染物影响的保护效应。
[0196] 在此测定中，在0.038％至0.3％的AS1-81-1和0.038％至0.15％的AS1-91-1的提取物浓度下，保护效应为显著的。
[0197] 实施例6：香菊提取物对皮肤参数的影响的临床评估
[0198] 进行临床研究以证实活有机体内菊科提取物作为“解毒”药物的活性，预期将表现为因为皮肤对长期毒性侵害的抵抗力增强而导致的总体抗老化益处。
[0199] 研究设计：
[0200] ·双盲，含有1％香菊提取物(如上文实施例1中所述那样生产的)的凝霜底盘(cream-gel chassis)的测试化合物对照安慰剂(仅为凝霜底盘)。
[0201] ·年龄分布：46-60；小组规模＝25个人；全为女性。
[0202] ·受试者具有“大量吸烟习惯”(>10支/日)，并且在眼睛周围区域和嘴角处‘具有老化迹象’。
[0203] ·半脸实验(左/右)施加每天两次，持续4周，其中在D0、D14和D28处进行测量。
[0204] ·量度：
[0206] —使用Primos 3D进行的皱纹和粗糙度评估。
[0207] —使用皮肤水份测试仪测定的皮肤含水量。
[0208] —使用皮肤弹性测试仪测定的皮肤弹性。
[0210] —由训练有素的临床医师在标准化的“日光照射”下进行的临床评估——皱纹(基于图像的比例)、粗糙度、柔软性、肤色均匀度、肌理。
[0211] —通过问卷调查进行的主观自我评价。
[0212] 该研究在PhD实验室(葡萄牙)进行-PhD实验室研究编号2260115。
[0213] 结果：
[0214] 抗衰老(抗皱)：
[0215] 本发明的化合物表现出良好的抗老化功效，表现为皱纹计数的强烈和显著减少，以及皱纹体积的显著减小。如图2A所示，与对照组(安慰剂组)皱纹计数在第14天减少28％并在第28天减少33％相比，皱纹计数在第14天减少36.9％并在第28天减少42.1％。与用安慰剂处理过的皮肤区域皱纹体积在第14天增加1.2％并在第28天增加0.2％相比，皱纹体积在第14天减小了9.7％并在第28天减小了12％(图2B)。
[0216] 对皱纹的临床评估：
[0217] 通过确认上述仪器测量值，临床评估反映了显著的抗老化效应，表现为相对于基线和安慰剂组(安慰剂组在第28天表现为降低3.8％，图3)，皱纹评分显著降低(在第14天为4.7％并在第28天为20.3％)。
[0218] 临床评估、附加参数：
[0219] 使用包含香菊的测试化合物导致：
[0220] ·适度但显著改善的皮肤粗糙度等级(相对于基线和安慰剂组，图4A)。
[0221] ·适度但显著改善的皮肤肌理等级(相对于基线和安慰剂组，图4B)。
[0222] ·小但显著改善的皮肤均匀度等级(相对于基线和安慰剂组)。
[0223] 在所有这三种情况下，数据显示出明显的时间依赖性(在第28天显著，而在第14天不显著)。
[0224] 肤色(色度仪)：
[0225] 包含本发明的香菊提取物的测试化合物的使用导致小但显著的肤色提亮效应(相对于基线和安慰剂组)，表现为L*增大(即更亮的皮肤)和b*减小(即，减少的黄色皮肤)。根据L*和b*计算出的个体类型角(ITA)显示出相应的增加(更亮的肤色)。观察到的变化(2个单位L*，半个单位b*)表示肤色的明显变化(图5)。
[0226] 不希望受任何具体的理论或作用机制的约束，此效应可能是由于解毒机制：长期受到挑战的皮肤(如重度吸烟者的面部皮肤或在长期、低等级炎症条件下的皮肤)将产生升高的黑色素水平，从而导致皮肤色素沉着、斑点等增多或不均匀。本发明的组合物似乎减轻了这种效应。该活性仅在第28天可检测到，这与如下效应一致：该效应需要时间进行脱屑过程来处置现有的负载黑色素的角质细胞/角质层细胞，以用在香菊提取物的影响下变得成熟并且因此处于较低的长期毒性应力下的新细胞代替。
[0227] 皮肤含水量(皮肤水份测试仪)：
[0228] 本发明的香菊提取物表现出时间依赖性的皮肤含水量增加，相对于基线和安慰剂组具有统计意义上的显著性(安慰剂组没有显著活性)。在嘴角处测量皮肤含水量(图6)。
[0229] Visia：使用香菊提取物处理过的皮肤表现出统计意义上的显著肤色改善，如由紫外线和可见斑点的计数减少显示的(图7)。
[0230] 皮肤弹性测试仪：
[0231] 本发明的植物提取物也对皮肤的弹性具有积极效应。
[0232] 自我评估问卷：
[0233] 本发明的香菊植物提取物进一步改善了皮肤参数，诸如肤色、皮肤光泽、斑点发生、皮肤敏感性和皱纹，如由用本发明的提取物治疗过的受试者的自我评估所反映的。使用关于各个皮肤参数的一组16个问题来评估治疗效果。与安慰剂组相比，用本发明的化合物治疗的受试者在治疗28天后对改善的自我评估更高。
[0234] 对时间依赖性的总体评论：
[0235] 在所述情况中的许多情况下，观察到的效果在D14显示出或已经可见，但在D28变得更强或获得统计学显著性。不希望受任何特定理论或作用机制的束缚，这些结果支持由香菊诱导的修复机制，诱发细胞固有的、有活性的过程，从而导致缓解对皮肤的长期毒性应激效应中的一些，从而允许其逐渐恢复到更有利的体内平衡状态——转化为可见的美丽益处。
[0236] 实施例7：包含香菊提取物的化妆品配方
[0237] 下表3显示了一种代表性的组合物，其包含用于化妆品用途的香菊提取物。
[0238] 表3：包含香菊提取物的代表性化妆品组合物
[0239]
[0240]
[0241] 过程(实验室规模)：
[0242] 1.防腐剂/多元醇预混物：将以下物质在45℃下搅拌混合直到完全溶解：丁二醇；己二醇；双丙二醇；苯氧基乙醇；对羟基苯甲酸甲酯。
[0243] 2.有机相：将以下物质在45℃下搅拌混合直到完全混合：环甲基硅酮；氢化聚癸烯。
[0244] 3.主要混合物：
[0245] a.将卡波姆在45℃下慢慢分散至水中(84.35％的式量)，并剧烈搅拌。继续搅拌直至卡波姆完全分散。
[0246] b.将所得混合物均质化。
[0247] c.将以下物质按顺序添加：EDTA；吐温20；防腐剂/多元醇预混物；有机相。
[0248] d.加入三乙醇胺直至pH＝5.5至6.5。
[0249] e.继续搅拌10分钟。
[0250] 4.活性物质：
[0251] i在搅拌下将香菊提取物(如上述实施例1所述的那样制备的100％提取物)加入到基础混合物中。
[0252] ii将所得混合物均质化。
[0253] 实施例8：香菊提取物对DNA损伤的影响
[0254] 人肺泡基底上皮细胞被用作模型体系。将A549细胞在培养基中培养，然后去除培养基，并用含有0.05％、0.16％和0.5％的如上述实施例1所述那样制备的香菊植物提取物的培养基替代。将细胞在含提取物的培养基中孵育隔夜，然后去除培养基，并用以香烟烟雾凝结物(CSC)致毒的培养基替代，以作为城市空气污染的模型。将培养物进一步用致毒培养基孵育另外24小时或48小时。基于先前的校准测定，检查两种浓度的CSC，即100μg/ml和200μg/ml。
[0255] 在用CSC孵育后，去除培养基，并根据制造商方案使用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶dUTP切口末端标记)测定来分析细胞的DNA片段化。TUNEL测定是基于在核酸内切酶激活后于凋亡过程中发生的DNA片段化。DNA片段的3'末端的标记提供了经历细胞凋亡的细胞的容易量度。通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的活性在3'端处引入经修饰的核苷酸。使用辣根过氧化物酶检测系统和无毒的比色底物检测这些核苷酸。如图9所示，本发明的香菊植物提取物级分以剂量依赖性方式保护肺泡基底上皮细胞免受由CSC导致的DNA片段化。
[0256] 使用测量DNA的氧化损伤的8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)测定来进一步检查本发明的提取物对DNA的保护效应。
[0257] 8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG或8-氧代-dG)是脱氧鸟苷的氧化衍生物，并且是用细胞DNA中的羟基、单态氧和单电子氧化剂产生的。
[0258] 在暴露于200μg/ml的CSC(具有不同量的本发明的香菊植物提取物级分(实验如上所述地进行))之后，裂解细胞并收集总DNA。制备单链DNA并用于测定。该测定测量由于暴露于香烟烟雾凝结物而产生的8-氧代-dG碱基的量，并且记录值的减小暗示DNA损伤的减少。如图10所示，本发明的香菊植物提取物级分导致适度保护肺泡基底上皮细胞免受CSC引起的DNA片段化。
[0259] 实施例9：使用HET-CAM测定评估香菊提取物的眼刺激潜能
[0260] 基于INVITTOX协议编号47(1990)，ISSN#0960-2194进行鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM)测定。
[0261] 测试系统的正当性理由：
[0262] HET-CAM已被证明是评估化学品潜在刺激性的定性方法。CAM是包含动脉、静脉和毛细血管的完整组织，并且在技术上容易研究。其响应于具有会在兔眼的结膜组织中观察到的类似的炎症过程的损伤。其发育良好的血管形成为眼部刺激研究提供了理想的模型。
[0263] 能育的10日龄、白色来亨鸡鸡胚(Leghorn egg)在HET-CAM中被用作Draize兔眼试验的替代方案，并配置为容纳6个测试组——其中3个为测试制品浓度，2个为阳性对照以及1个为载体对照组。
[0264] 发育：将鸡胚放在商用孵化器中。在发育的第10天，将卵从孵化器中取出并对着光检查(candled)以确定胚胎的活力。在气室上从外壳直接开矩形窗，并用2至3ml的0.9％盐水仔细润湿卵膜，然后放回孵化器中。
[0265] 然后将测试项目施用至鸡胚，留置限定的(20秒)暴露期，并用盐水溶液冲洗。连续观察鸡胚5分钟内裂解、溢血和/或凝血的出现。
[0266] 针对1分钟和5分钟时的严重程度来对鸡胚进行评分。记录1分钟和5分钟后各反应的严重程度。
[0267] 在该模型中，将如以上述实施例1所述的那样制备的香菊提取物级分(含有50％甘油)以5％稀释度测试，其被认为是略微刺激性的(总刺激评分为2.0)。
[0268] 具体实施方案的前述描述将如此完全揭露本发明的一般性质，其他人可以通过应用当前知识，容易地修改和/或调适此类具体实施方案以用于各种应用，而无需过度实验和不脱离总体构思，因此此类调适和修改应当并且旨在被理解为在所公开的实施方案的等同物的含义和范围内。应当理解，本文采用的措辞或术语是为了描述而不是限制的目的。在不脱离本发明的情况下，用于执行各种公开功能的手段、材料和步骤可以采取各种替代形式。
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