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一种微 生物 发酵 饲料原料的制备方法

阅读：112发布：2020-06-02

专利汇可以提供一种微生物发酵饲料原料的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种微生物发酵饲料原料的制备方法，该方法包括将复合菌种接种到发酵原料中进行发酵，其中，所述发酵原料含有玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮中的一种或多种；且所述发酵原料以干基计粗蛋白含量为20重量％以上；所述复合菌种包含乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。该方法利用工业副产物作为发酵原料，制作高能量饲料或高蛋白质饲料原料，对副产品进行有机整合、变废为宝，使产品经济效益最大化；采用复合菌种进行微生物发酵，提高饲料原料中的营养成分和吸收率，能极大提高副产品的营养价值；另外，该制备方法生产工艺简单、成本低廉、制作周期短，便于大规模生产。，下面是一种微生物发酵饲料原料的制备方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种微生物发酵饲料原料的制备方法，该方法包括将复合菌种接种到发酵原料中进行发酵，其特征在于，
所述发酵原料含有玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、干酒糟及其可溶物和喷浆玉米皮中的一种或多种；且所述发酵原料以干基计粗蛋白含量为20重量％以上；
所述复合菌种包含乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述发酵原料中的水分含量为35重量％以下；所述发酵原料以干基计粗纤维为10重量％以下，以干基计粗脂肪为2重量％以上，以干基计粗灰分为10重量％以下。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和发酵乳杆菌中的一种或多种，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或多种，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌和/或酿酒酵母。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，所述复合菌种由芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液混合而成；
优选地，所述芽孢杆菌种子液中芽孢杆菌的含量为5×108～1×109cfu/mL，乳杆菌种子液中乳杆菌的含量为5×109～1×1010cfu/mL，酵母菌种子液中酵母菌的含量为2.5×109～
5×109cfu/mL；
更优选地，所述芽孢杆菌种子液与所述乳杆菌种子液和所述酵母菌种子液的混合体积比为1：1-1.5：0.5-1。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的制备方法，其中，所述发酵的条件包括：发酵温度为25-35℃，发酵时间为48-168小时，发酵pH值为5-7；
优选地，相对于1g所述发酵原料，所述芽孢杆菌的接种量为2×105～4×106cfu，所述乳杆菌的接种量为2×107～4×108cfu，所述酵母菌的接种量为2×107～4×108cfu。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的制备方法，其中，所述发酵过程在不透气的包装袋中进行，所述包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外。
7.一种由权利要求1-6中任意一项所述的制备方法制得的微生物发酵饲料原料。
8.根据权利要求7所述的微生物发酵饲料原料，其中，所述微生物发酵饲料原料的pH值为3-5，以乳酸计总酸为2.5重量％以上，以干基计粗蛋白为16重量％以上；
优选地，所述微生物发酵饲料原料的pH值为3.5-4.5，以乳酸计总酸为3重量％以上，以干基计粗蛋白为18重量％以上；
更优选地，所述微生物发酵饲料原料的pH值为3.8-4.2，以乳酸计总酸为4重量％以上，以干基计粗蛋白为22重量％以上。
9.根据权利要求7或8所述的微生物发酵饲料原料，其中，所述微生物发酵饲料原料中的所述乳杆菌≥2×107cfu/g，所述芽孢杆菌≥2×105cfu/g，所述酵母菌≥2×107cfu/g；
优选地，所述乳杆菌≥1×108cfu/g，所述芽孢杆菌≥1×106cfu/g，所述酵母菌≥1×
108cfu/g；
8 6
更优选地，所述乳杆菌≥4×10cfu/g，所述芽孢杆菌≥4×10 cfu/g，所述酵母菌≥4×
108cfu/g。
10.根据权利要求9所述的微生物发酵饲料原料，其中，所述微生物发酵饲料原料中的水分含量为30-50重量％，优选为32-34重量％。
11.一种饲料，其特征在于，该饲料含有权利要求7-10中任意一项所述的微生物发酵饲料原料。

说明书全文

一种微 生物 发酵 饲料原料的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及饲料原料的制备方法，具体地，涉及一种微生物发酵饲料原料的制备方法。

背景技术

[0002] 在饲料工业中应用生物技术被越来越重视，原因在于其能够变废为宝，充分的利用工业废弃物，这样既提供了丰富的饲料资源，又减轻了环境污染。生物饲料凭借其优质、高含量的蛋白和丰富的生物活性物质的优势，对缓解饲料原料紧张的局面，推动饲料工业和畜牧业的发展必将起到巨大的推动作用。酵母细胞含丰富的蛋白质，氨基酸以及多种维生素，尤其是B族维生素以及含量更为丰富各种消化酶类。能将无机氮源转化为有机氮，提高饲料的蛋白质含量。芽孢杆菌可在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体的新陈代谢，为动物机体提供营养物质。乳杆菌发酵产生有机酸、特殊酶系、酸菌素等物质具有特殊生理功能，可刺激组织发育，对机体的营养状态、生理功能、免疫反应和应激反应等产生作用。

[0003] 在以玉米、木薯渣为原料，生产柠檬酸、赖氨酸、酒精等产品的过程中，会产生很多类副产品，如柠檬酸糟、玉米淀粉渣、玉米浆、玉米皮等等。副产品直接进行处理或销售时，其市场价值没有得到最好的体现。

发明内容

[0004] 本发明的目的是提供一种微生物发酵饲料原料的制备方法，由该制备方法制得的微生物发酵饲料原料，本发明的方法能够利用工业副产物作为发酵原料，制作高能量饲料或高蛋白质饲料原料，使产品经济效益最大化。

[0005] 根据本发明的第一方面，本发明提供了一种微生物发酵饲料原料的制备方法，该方法包括将复合菌种接种到发酵原料中进行发酵，其特征在于，所述发酵原料含有玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、干酒糟及其可溶物(以下也称为DDGS)和喷浆玉米皮中的一种或多种；且所述发酵原料以干基计粗蛋白含量为20重量％以上；所述复合菌种包含乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。

[0006] 根据本发明的第二方面，本发明提供了一种微生物发酵饲料原料，其中，该微生物发酵饲料原料由上述制备方法制得。

[0007] 根据本发明的第三方面，本发明还提供了一种饲料，其中，该饲料含有上述制备方法制备的微生物发酵饲料原料。

[0008] 通过上述技术方案，本申请提供的微生物发酵饲料原料制备方法利用工业副产物作为发酵原料，制作高能量饲料或高蛋白质饲料原料，对副产品进行有机整合、变废为宝，使产品经济效益最大化；采用复合菌种进行微生物发酵，提高饲料原料中的营养成分和吸收率，能极大提高副产品的营养价值；另外，该制备方法生产工艺简单、成本低廉、制作周期短，便于大规模生产。

[0009] 本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

[0010] 以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

[0011] 本发明提供的微生物发酵饲料原料的制备方法，该方法包括将复合菌种接种到发酵原料中进行发酵，所述发酵原料含有玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、干酒糟及其可溶物和喷浆玉米皮中的一种或多种；且所述发酵原料以干基计粗蛋白含量为20重量％以上；所述复合菌种包含乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。

[0012] 在本发明中，所述发酵原料以干基计粗蛋白是指用《GB/T 6432饲料中粗蛋白测定方法》所得的数据。

[0013] 根据本发明，通过使所述发酵原料含有玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮中的一种或多种，来制备微生物发酵饲料原料。

[0014] 作为上述玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮可以为本领域公知的柠檬酸、赖氨酸、酒精等产品的副产物。例如，上述玉米淀粉渣优选为玉米经粉碎、液化、过滤而得到的玉米淀粉渣；上述甜菜糖蜜优选为通过甜菜液化、糖化和浓缩而得到的甜菜糖蜜；上述玉米酒精糟可溶物优选为玉米经粉碎、液化、糖化、发酵、蒸馏、过滤而得到的玉米酒精糟可溶物；上述柠檬酸糟优选为以玉米经液化、糖化、发酵、过滤而得到的柠檬酸糟；上述玉米粉优选为玉米经粉碎得到的玉米粉；上述DDGS优选为玉米经粉碎、液化、糖化、发酵、过滤后得到液体与固渣、浓缩与烘干而得到的DDGS；上述喷浆玉米皮优选为将玉米浸泡液喷到玉米皮上并经干燥而得到的喷浆玉米皮。上述玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮的制备方法和条件为本领域所公知，在此不再累述。

[0015] 根据本发明的一种优选的实施方式，所述玉米淀粉渣中以干基计粗蛋白为25-30重量％，以干基计粗灰分为2.7-3.3重量％，以干基计粗纤维为9.2-11.2重量％，以干基计粗脂肪为10.8-13.2重量％，水分含量为9-11重量％；

[0016] 所述玉米酒精糟可溶物以干基计粗蛋白为14-17重量％，以干基计粗灰分为11.7-14重量％，以干基计粗纤维为0.4-0.6重量％，以干基计粗脂肪为0.12-0.14重量％，水分含量为60-75重量％；

[0017] 所述柠檬酸糟以干基计粗蛋白为10-13重量％，以干基计粗灰分为2.7-3.4重量％，以干基计粗纤维为20.5-25重量％，以干基计粗脂肪为2.3-2.8重量％，水分含量为60-75重量％；

[0018] 所述玉米粉以干基计粗蛋白为7.7-9.4重量％，以干基计粗灰分为1.2-1.5重量％，以干基计粗纤维为2.7-3.4重量％，以干基计粗脂肪为3-3.7重量％，水分含量为12-15重量％；

[0019] 所述DDGS以干基计粗蛋白为23-29重量％，以干基计粗灰分为4.5-5.5重量％，以干基计粗纤维为10-12重量％，以干基计粗脂肪为6.6-8.0重量％，水分含量为5.5-12.0重量％；

[0020] 所述喷浆玉米皮以干基计粗蛋白为17-21重量％，以干基计粗灰分为5-6重量％，以干基计粗纤维为7.4-9重量％，以干基计粗脂肪为1.9-2.3重量％，水分含量为7.8-12.0重量％。

[0021] 优选地，所述发酵原料含有玉米粉、玉米淀粉渣、柠檬酸糟、玉米酒精糟可溶物、DDGS和喷浆玉米皮中的一种或多种。

[0022] 更优选地，所述发酵原料为玉米淀粉渣、甜菜糖蜜、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮。

[0023] 此外，所述发酵原料以干基计粗蛋白含量只要在20重量％以上即可，在从原料色泽与颗粒度、营养成分的方面来考虑，更优选为22-24重量％。

[0024] 根据本发明，出于营养成分、原料色泽与颗粒度的考虑，所述发酵原料以干基计粗蛋白含量在满足上述条件的基础上，优选所述发酵原料中的水分含量为35重量％以下(更优选为33-34.5重量％)；更优选地，所述发酵原料以干基计粗纤维为10重量％以下(更优选为6-8重量％)，以干基计粗脂肪为2重量％以上(更优选为3-4重量％)，以干基计粗灰分为10重量％以下(更优选为6-8重量％)。在此，以干基计粗纤维是指用《GB/T 6434饲料中粗纤维测定方法》测定所得的数据，同理，以干基计粗脂肪是指用《GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定》测定所得的数据。以干基计粗灰分是指用《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分的测定》测定所得的数据。

[0025] 根据本发明，所述复合菌种包含乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌。

[0026] 优选地，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌(如编号为CGMCC 1.1854的菌种)、植物乳杆菌(如编号为CGMCC 1.2158的菌种)和发酵乳杆菌(如编号为CGMCC 1.3223的菌种)中的一种或多种，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(如编号为安徽农业大学生命科学学院951NA4的菌种)、地衣芽孢杆菌(如编号为CGMCC 1.265的菌种)和凝结芽孢杆菌(如编号为CGMCC 1.3220的菌种)中的一种或多种，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌(如编号为CGMCC 2.1180的菌种)和/或酿酒酵母(如编号为CGMCC 2.3853的菌种)。

[0027] 更优选地，所述复合菌种包含嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌。

[0028] 在本发明的一个优选的实施方式中，所述复合菌种由芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液混合而成。所述芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液分别由芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌经过摇瓶种子培养、一级种子培养两步培养过程完成。培养方法和条件均为本领域常规方式，满足本申请所需的菌种含量即可。

[0029] 作为上述摇瓶种子培养的方法例如可以为：将菌悬液接入经灭菌的摇瓶培养基中，根据菌种性质，在静置(厌氧)/摇瓶机(好氧)条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值。

[0030] 作为上述一级种子培养的方法例如可以为：将摇瓶培养液接入一级种子培养培养基，在扩培罐中，适当条件下培养；培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值。

[0031] 优选地，所述芽孢杆菌种子液芽孢杆菌的含量为5×108～1×109cfu/mL，乳杆菌种子液中乳杆菌的含量为5×109～1×1010cfu/mL，酵母菌种子液中酵母菌的含量为2.5×109～5×109cfu/mL；

[0032] 更优选地，所述芽孢杆菌种子液与所述乳杆菌种子液和所述酵母菌种子液的体积比为1：1-1.5：0.5-1。

[0033] 根据本发明，所述发酵的条件包括：发酵温度为25-35℃(优选为28-32℃)，发酵时间为48-168小时(优选为72-144小时)，发酵pH值为5-7(优选为5.5-6.5)。本发明的发明人经过深入的研究发现，在上述条件下，特别是在上述pH值范围内进行发酵，能够使乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌均能够获得极好的发酵效果，最终得到具有较高菌种含量的微生物发酵饲料原料。作为调节pH值的物质，没有特别的限定，可以使用本领域常规使用的各种用于调节pH值的试剂。例如可以用氢氧化钙进行调整。

[0034] 优选地，相对于1g所述发酵原料，所述芽孢杆菌的接种量为2×105～4×106cfu(优选为4×105～4×106cfu)，所述乳杆菌的接种量为2×107～4×108cfu(优选为4×107～4×8 7 8 7 8
10cfu)，所述酵母菌的接种量为2×10～4×10cfu(优选为4×10～4×10cfu)。

[0035] 根据本发明，所述发酵过程包括有氧发酵和无氧发酵两个阶段，有氧发酵消耗环境中的氧气，氧气消耗完毕后进行无氧发酵过程，根据菌种的特性利用一次发酵过程同时完成三类菌种的发酵。优选地，所述发酵过程在不透气的包装袋中进行，所述包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外。为了能够使乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌均能够获得较好的发酵效果，优选地，袋中的发酵原料与密封在袋中的空气的体积比为10：0.5-1，排出多余气体密封即可。

[0036] 本发明还提供一种通过上述制备方法得到的微生物发酵饲料原料。

[0037] 通过本发明的制备方法得到的微生物发酵饲料原料的pH值为3.0-5.0，优选为3.5-4.5，更优选为3.8-4.2。通过pH值在上述范围内，可以有效地抑制因含水量较高导致的霉菌和致病菌等的污染。

[0038] 微生物发酵饲料原料中的总酸体现其中的有机酸含量，通过本发明的制备方法得到的微生物发酵饲料原料，以乳酸计总酸为2.5-4.5重量％，优选为3.0-4.5重量％，更优选为4.0-4.5重量％。通过总酸在上述范围内，具有降低动物胃肠道pH、改善动物胃肠道微生物区系、提高动物采食量的优良效果。

[0039] 根据本发明，通过本发明的制备方法得到的微生物发酵饲料原料以干基计粗蛋白为16-24重量％；优选为18-24重量％；更优选为22-24重量％。

[0040] 根据本发明，通过本发明的制备方法得到的微生物发酵饲料原料中所述芽孢杆菌含量为2×105～8×106cfu/g，所述乳杆菌含量为2×107～8×108cfu/g，所述酵母菌含量为2×107～8×108cfu/g；

[0041] 优选地，所述芽孢杆菌含量为1×106～8×106cfu/g，所述乳杆菌含量为1×108～8×108cfu/g，所述酵母菌含量为1×108～8×108cfu/g；

[0042] 更优选地，所述芽孢杆菌含量为4×106～8×106cfu/g，所述乳杆菌含量为4×108～8×108cfu/g，所述酵母菌含量为4×108～8×108cfu/g。

[0043] 根据本发明，通过本发明的制备方法得到的微生物发酵饲料原料中水分含量优选为30-50重量％，更优选为32-34重量％。

[0044] 根据本发明，所述微生物发酵饲料原料制备的原料处理、混合、接种、装袋和发酵过程由本领域常规方法进行。具体地，根据各种固体原料的配比，使用铲车向各个料斗内投料，采用皮带称实现固体原料的称重，投入斗式提升机；斗式提升机将固体原料输送至湿物料打散机，经打散后，原块状固体湿物料打散成均匀的小颗粒，湿物料打散机可连续生产；经打散机后的固体原料，进入混合机。开启液体原料及菌种进料阀门，液体原料按配比量进行添加，与固体物料混合，菌种与发酵原料混合，完成接种过程。混合5-10分钟后，将混合机内的物料卸下湿料仓内，通过螺旋输送机从湿料仓内采出，输送至包装袋内，称重密封。通过叉车移至发酵间在发酵条件下完成发酵过程。

[0045] 进一步地，本发明还提供了一种饲料，该饲料含有上述微生物发酵饲料原料。所述微生物发酵饲料原料用于替代玉米、豆粕等材料作为饲料的主要成分。所述微生物发酵饲料原料在饲料的含量为4-12重量％。

[0046] 作为本发明的一种优选的实施方式，上述微生物发酵饲料原料的含量为8.36重量％，其它的成分的种类和含量分别为：玉米为48.75重量％，豆粕为35.37重量％，大豆油为4.84重量％，石粉为1.38重量％，磷酸氢钙为1.30重量％。

[0047] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，总酸通过化学滴定法测得，水分通过《GB/T 6435饲料水分和其它挥发性物质含量的测定方法》测得，以干基计粗蛋白通过《GB/T 6432饲料中粗蛋白测定方法》测得，以干基计粗灰分通过《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分的测定》测定，以干基计粗纤维通过《GB/T 6434饲料中粗纤维测定方法》测定，以干基计粗脂肪通过《GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定》测定。

[0048] 以下实施例中，菌体密度通过平板计数法测定测得，乳杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别使用的平板培养基配制方法如下：

[0049] 乳杆菌平板培养基：称取MRS肉汤培养基55.2g/L，琼脂10.14g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为6.2，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。

[0050] 酵母菌平板培养基：称取酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂14g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为6.0，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。

[0051] 芽孢杆菌平板培养基：称取酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠10g/L，琼脂20g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为7.20，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。

[0052] 菌体密度采用平板计数法测定，称取5.0g物料到45g无菌水中，放置摇床培养(温度32℃，转速120rpm/min，时间40min-50min)，然后取0.1ml培养液至0.9ml无菌水摇匀，稀释至一定的梯度、涂布至相应菌种的平板培养基，放置恒温箱30℃培养48h。计数方法：一个稀释度的菌落数为30-300个菌落数，则以该稀释度菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1ml)，乘以稀释倍数作为该样品的菌体总数。

[0053] 下述实施例中，玉米淀粉渣为生产柠檬酸等玉米深加工产品过程中，玉米经粉碎、液化、过滤获得的滤渣，再经干燥获得的产品；

[0054] 甜菜糖蜜购自广西亚糖太古贸易有限公司；

[0055] 玉米酒精糟可溶物为玉米、浸润、粉碎、液化、糖化，再经酵母发酵、蒸馏除去乙醇后，对剩余的釜溜物过滤获得的清液(干物3％)进行浓缩(浓缩后干物35％)后的产品；

[0056] 柠檬酸糟为以玉米为原料发酵生产柠檬酸产品过程中，发酵液经过滤剩余的滤渣产品，其水分含量为70％；

[0057] 玉米粉为玉米经粉碎得到的粉末；

[0058] DDGS(Distillers Dried Grains with Solubles，干酒糟及其可溶物)为玉米经浸润、脱胚芽、粉碎、液化、糖化、发酵、蒸馏的过程得到的滤液和清液混合而成；

[0059] 喷浆玉米皮为将玉米浸泡液喷到玉米皮上并经干燥获得的产品。

[0060] 下述实施例中，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus，CGMCC编号1.1854)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，CGMCC编号1.2158)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum，CGMCC编号1.3223)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis，CGMCC编号1.265)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans，CGMCC编号1.3220)、产朊假丝酵母菌(Candida utilis，CGMCC编号2.1180)、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae，CGMCC编号2.3853)均来自于中国普通微生物菌种保藏管理中心，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)购自安徽农业大学生命科学学院，编号为951NA4。

[0061] 实施例1

[0062] 选取产朊假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌三种菌作为复合菌种。

[0063] (1)摇瓶种子培养

[0064] 摇瓶种子培养过程为配制下述培养基，121℃，20min高温灭菌，冷却后取菌悬液接入培养基中，在对应控制参数条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值，达到终止参数时，摇瓶种子培养完成。

[0065] 嗜酸乳杆菌：

[0066] 培养基：MRS肉汤培养液48克于1000ml水中，调节pH值6.2±0.1。

[0067] 控制参数：30℃，静置条件下进行厌氧培养。

[0068] 终止参数：OD≥0.250

[0069] 枯草芽孢杆菌：

[0070] 培养基：酵母粉5g、蛋白胨10g、葡萄糖5g、氯化钠10g、水1000ml，用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。

[0071] 控制参数：35℃、160r/min。

[0072] 终止参数：OD≥0.120

[0073] 产朊假丝酵母菌：

[0074] 培养基：蛋白胨19g，葡萄糖19g，酵母浸膏9.5g，用水定容1000ml。

[0075] 控制参数：30℃、200r/min。

[0076] 终止参数：OD≥0.320

[0077] (2)一级种子培养

[0078] 一级种子培养过程为配制如表1所示原辅料种类和添加比例的一级种子培养基于扩培罐中，121℃，20min高温灭菌，冷却后，取摇瓶培养后的培养基100mL接入一级种子培养基500L中，在如表1所示控制参数条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)、pH值，培养至表1所示终止参数时，一级种子培养完成。

[0079] 表1

[0080]

[0081] 其中，所述玉米浆为玉米用亚硫酸溶液浸泡、稀玉米浆浓缩后得到的玉米浆，其中干物为35重量％。

[0082] 玉米浆购自中粮生物化学(安徽)股份有限公司、甜菜糖蜜购自广西亚糖太古贸易有限公司，牛肉膏、吐温80购自安徽滁州华宇试剂材料有限公司。

[0083] 经测量，培养得到的芽孢杆菌种子液芽孢杆菌的含量为5×108cfu/mL，乳杆菌种子液中乳杆菌的含量为5×109cfu/mL，酵母菌种子液中酵母菌的含量为2.5×109cfu/mL。

[0084] (3)微生物发酵饲料原料的制备

[0085] 将上述芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液以重量比2：2：1混合得到菌种混合液。

[0086] 将5重量份玉米淀粉渣、2重量份甜菜糖蜜、26重量份玉米酒精糟可溶物、11重量份玉米粉、4份柠檬酸糟、6重量份DDGS和44重量份喷浆玉米皮分别经打散后与2重量份菌种混合液混合(乳杆菌的接种量为1×108cfu/g，芽孢杆菌的接种量为1×106cfu/g，酵母菌的接种量为1×108cfu/g)，装入不透气的包装袋，该包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外。包装袋中的发酵原料与密封在袋中的空气的体积比为10：1。

[0087] 发酵条件为：发酵温度为30℃，发酵时间为120小时，发酵pH值为5.5。

[0088] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的水分含量为33.50重量％，pH值为4.2，以乳酸计总酸为4.0重量％，嗜酸乳杆菌含量为4.1×108cfu/g，枯草芽孢杆菌含量为
4.3×106cfu/g，产朊假丝酵母菌含量为4.0×108cfu/g；以干基计粗蛋白为22.56重量％，以干基计粗脂肪为3.45重量％，以干基计粗灰分为7.65重量％，以干基计粗纤维为7.86重量％。

[0089] 实施例2

[0090] 按照实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，该发酵原料及其质量比为玉米淀粉渣：甜菜糖蜜：玉米酒精糟可溶物：玉米粉：喷浆玉米皮：柠檬酸糟＝11：2：26：4：8
44：11。发酵选用的菌种及其接种量为：乳杆菌为植物乳杆菌，其接种量为4×10cfu/g，芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌，其接种量为4×106cfu/g，酵母菌为酿酒酵母菌，其接种量为4×
108cfu/g。

[0091] 发酵条件为：发酵温度为28℃，发酵时间为72小时，发酵pH值为6.0小时。

[0092] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的水分含量为34.00重量％，pH值为3.9，以乳酸计总酸为4.4重量％，乳杆菌含量为7.1×108cfu/g，芽孢杆菌含量为6.9×
106cfu/g，酵母菌含量为7.9×108cfu/g；以干基计粗蛋白为23.03重量％，以干基计粗脂肪为3.66重量％，以干基计粗灰分为7.80重量％，以干基计粗纤维为7.53重量％。

[0093] 实施例3

[0094] 按照实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，该发酵原料及其质量比为玉米淀粉渣：甜菜糖蜜：玉米酒精糟可溶物：玉米粉：DDGS:喷浆玉米皮：柠檬酸糟＝3：2：20：4：8：44：17。

[0095] 发酵选用的菌种及其接种量为：乳杆菌为发酵乳杆菌，其接种量为2×108cfu/g，芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌，其接种量为2×106cfu/g，酵母菌为产朊假丝酵母菌，其接种量为2×108cfu/g。

[0096] 发酵条件为：发酵温度为32℃，发酵时间为144小时，发酵pH值为6.5。

[0097] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的水分含量为33.80重量％，pH值为8
4.1，以乳酸计总酸为4.1重量％，乳杆菌含量为5.6×10 cfu/g，芽孢杆菌含量为4.8×
106cfu/g，酵母菌含量为6.9×108cfu/g；以干基计粗蛋白为23.76重量％，以干基计粗脂肪为3.78重量％，以干基计粗灰分为7.86重量％，以干基计粗纤维为7.29重量％。

[0098] 实施例4

[0099] 按照实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，该发酵原料及其质量比为玉米淀粉渣：甜菜糖蜜：玉米酒精糟可溶物：DDGS：喷浆玉米皮：柠檬酸糟＝3：2：20：6：50：17。

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一种微生物发酵饲料原料的制备方法

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