本发明的目的在于针对上述问题,以北方设施蔬菜生产现状为背景,在 进一步探明连作障碍的现状、构成和成因的
基础上,提出了通过对
根际微生 态和根系的综合调控,实现高效稳定防治的研究思路,采用独创的分离筛选 技术,提供一种具有防病、促生和解毒等多种功能的根际
益生菌菌株-酒 红土褐链霉菌,并给出其应用方向。
本发明提供的菌种是:链霉菌属酒红土褐链霉菌(Streptomyces vinaceusdrappus),暂定名为S506,已于2008年9月11日提交中国普通微 生物保藏中心保藏,保藏编号为CGMCC No.2664。该菌种是从河北省栾城县 番茄根际土壤分离获得的。
所述的酒红土褐链霉菌DNA序列测定结果为:
GGCGTGCTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGATTAGTGGCGAACGGGT GAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGA TACTGATCCTCGCAGGCATCTGCGAGGTTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTA TCAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCG GCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAAT GGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCA GCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCG CGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGT CACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTC GGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGG CGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAG ATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTTGTCCGTG CCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATT GACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAA GGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCAT GGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCG TGTTGCCAGCAGGCCTTGTGGTGCTGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGTCACTCGGAGGAAGGTGG GGACGACGTCAAGTCATCATGCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAAT GAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCA ACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCC CGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACC CCTTGTGGGAGGGGAGCTGTCG。
所述的酒红土褐链霉菌的分离筛选方法包括如下步骤:
(1)拮抗菌株的分离筛选
(1)拮抗菌株的分离筛选
选用河北省栾城县境内栽培的番茄植株,去掉植株根部土壤,随机剪取 新生主根和毛细根,置于含玻璃珠的无菌水中,充分摇动,将根取出,得土 壤悬浮液;取出的根系先用无菌水冲洗,然后作表面消毒处理,用无菌水冲 净残余
乙醇,于无菌研钵中研成糊状,制作根系悬液;将上述悬液摇匀后, 进行稀释,取0.05-0.15ml涂布于高氏一号培养基上,24-26℃培养71-73 小时,分离长势良好的链霉菌菌株,纯化后,进行平板纯培养;
制取链霉菌菌块,分别以立枯丝核菌(Rhizoctonia sp.)、镰刀菌 (Fusar ium sp.)或腐霉菌(Pyth ium sp.)病原菌为靶标,在PDA平板上进 行对峙培养,病原菌与目的菌相距3cm,每处理3次重复,同时于PDA平板上 单独接种病原菌作对照;一周后检查对峙培养结果,根据病原菌在对峙方向 的菌落半径、对照菌落半径计算抑菌率;抑菌率%=(对照菌落半径~对峙 菌落半径)/对照菌落半径×100%,选择抑菌率高且对多种病原同时具有防 效的菌株参与下步筛选试验;
(2)防病促生菌株的筛选
采用育苗钵异步生测法,分别对步骤(1)获得的菌株进行防病和促生功 能比较试验,栽培基质按大田壤土∶农家肥∶蛭石=6-8∶1-3∶0.5-1.5比例配 制,参试目的菌株和病原菌都制成固体培养物,按1%比例与上述培养基质混 合;病原菌和生防菌混合接种的栽培基质用于抗病性检测,目的菌单独接种 的用于促生效果检测,目的菌和病原菌均按栽培基质1%的
质量比接种,基质 混合均匀后,填装于育苗钵中;
挑选两叶一心长势均匀一致的番茄
幼苗移栽于上述培养钵中,每处理50 棵,各分2组,随机排列,置于日光
温室中培养;
侵染率调查:30天后将根挖出,调查病情指数;
促生结果调查:待番茄长到4~5片真叶时,将番茄苗整株挖出,检测整 株鲜重、地上部干重、叶面积、主根长、根干重指标;
综合比较抗病和促生效果,确定优势菌株;
(3)防根结
线虫菌株的筛选
二龄幼虫的培养:在黄瓜生长后期,挖取根结线虫发病重、根结多的黄 瓜根,用清水洗去根部泥土,剪成长1cm的根段,放入500mL三
角瓶中,倒 入200mL 0.5% NaClO溶液,用
力摇3分钟,混合溶液过100目筛,用无菌水 冲洗筛上碎片5次,溶液再过500目筛,用无菌水冲洗
筛上物,液体收集到 容器中,获得卵悬浮液,将收集到的卵块或卵粒置于中性
滤纸上,置于200 目网筛上,网筛置于盛有清水的盆中,水位高度为不低于浸湿滤纸,然后置 于28℃恒温箱中孵化,每24小时将盆中水过500网筛,将孵化的二龄幼虫收 集于三角瓶中,置4℃
冰箱中备用;
防根结线虫功能菌株筛选:吸取3mL线虫液于培养皿中,然后加入步骤 (2)获得的目的菌株的培养液各1mL,对照加无菌水,每处理三次重复,混合 液放入28℃恒温箱中培养,培养1~3小时后,每皿中加2滴0.05%亚甲基蓝 水溶液,5~10分钟镜检线虫死亡率,比较不同菌株培养液对二龄幼虫的致死 效果;
防根结线虫功能菌株盆栽复筛:分别取连茬4年、8年和11年线虫危害 较重的黄瓜大棚土壤,装入高14cm,直径16cm的花盆中。设置功能菌、阿维 菌素和空白对照三组处理,每处理20盆,添加物用量为功能菌麸皮培养物5g/ 盆,0.2%阿维菌素
乳油稀释1000倍,于定植后浇灌200mL/盆,用黄瓜做试 验
植物,将两片真叶的津绿3号黄瓜幼苗按每盆一棵移入,定植后,除阿维 菌素处理外,每盆浇清水200mL,之后用称重法浇水,三个月后调查病情指数, 分级并记录结果,分析严重度;采用的分级标准为:0级,无根结;1级,有 少数根结,占全根系的1%~25%;2级,根系根结数量中等,占全根系的26%~ 50%;3级,根系根结数量很多,占全根系的51%~75%;4级,根系根结数量 很多,占全根系的76%~100%,
病情指数(%)=∑(级数×同级株数)/(总株数×4)×100,
严重度是指有根瘤根的长度之和占总根系长度的百分比;
比较上述结果,确定更优菌株;
(4)降解根系自毒物质菌株筛选
取大田壤土,
风干后
粉碎,过筛,215℃干热灭菌8小时。以苯
甲酸或/ 和香豆素为酚酸类自毒物质试验材料,按酚酸自毒物质的最终浓度50、100、 150、200、250ug/kg移取已配置好的浓度为1000mg/L的
苯甲酸或香豆素的母 液于灭菌土中,加入步骤(3)所确定菌株的麸皮培养物,混合均匀,分装入 花盆中,每盆装土1.5kg。
将育好的有两片复叶的番茄苗按3棵/盆移栽到上述花盆中,定植后, 浇水至饱和,之后按称重法浇水;设空白对照,每处理五次重复;
观察幼苗缓苗、长势情况,30天后检测成活率、株高、复叶长度、根系 干重生理指标;检测
叶片丙二
醛和PAL酶活性;
比较上述结果,确定本步骤选出的优势菌株;
(5)田间小区试验,最终确定优势菌株
将经过上述四步确定的优势菌株分别制成固体培养物,选择连茬五年以 上,根部病害以及根结线虫发生较为严重的
温室大棚进行应用比较试验;
采用定苗期穴施方法,将菌剂与细田土混合,定量施入定苗穴中,之后的 定苗、浇水等管理采用同常规措施,每处理30m2,三次随机重复;在生长中 期和后期检测植株长势、防病、防线虫效果,以及对产量和品质的影响, 综合比较以上指标,确定最优菌株。
所述的酒红土褐链霉菌的筛选方法,所述的步骤(1)中采用75%乙醇对 无菌水冲洗后的植株根系做表面消毒处理。
所述的酒红土褐链霉菌的筛选方法,所述的步骤(4)降解根系自毒物质 菌株筛选中选择苯甲酸、香豆素混合处理,两种药剂按1∶1混合,每种药剂 的用量比单一处理减倍。
上述酒红土褐链霉菌的应用,其特征在于:其活菌培养物用于制备防治栽 培连作障碍、防病促生和解毒功能的土壤
生物修复剂或调理剂的有效成分。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于:以北方设施蔬菜生 产现状为背景,在进一步探明连作障碍的现状、构成和成因的基础上,提出 了通过对根际微生态和根系的综合调控,实现高效稳定防治的研究思路,采 用独创的分离筛选技术,获得了具有防病、促生和解毒等多种功能的根际益 生菌菌株酒红土褐链霉菌S506,酒红土褐链霉菌S506是从蔬菜根际分离获得 一株多功能根际优势菌株,将该菌的活菌体施入蔬菜根际,可有效防治枯萎 病、根腐病、根结线虫病等多种蔬菜根部病害,并具有显著的促进根系发育 和降解根系自毒物质功能,在有效防治蔬菜、果树、药材等普遍发生的连作 障碍难题具有广阔应用前景。
附图说明
图1是本发明中菌种的菌落形态图片。
图2是本发明中的菌丝形态图片。
图3是本发明中的分生孢子图片。
本发明提供的菌种是:链霉菌属酒红土褐链霉菌(Streptomyces vinaceusdrappus),暂定名为S506,已于2008年9月11日提交中国普通微 生物保藏中心保藏,保藏编号为CGMCC No.2664。该菌种是从河北省栾城县 番茄根际土壤分离获得的。
(1)拮抗菌株的分离筛选
选用河北省栾城县境内栽培的番茄植株,去掉植株根部土壤,随机剪取 新生主根和毛细根,置于含玻璃珠的无菌水中,充分摇动,将根取出,获得 土壤悬浮液;取出的根系先用无菌水冲洗,然后作表面消毒处理,优选采用 75%乙醇。用无菌水冲净残余乙醇,于无菌研钵中研成糊状,制作根系悬液; 将上述悬液摇匀后,进行稀释,取0.05-0.15ml涂布于高氏一号培养基上, 24-26℃培养71-73小时,分离长势良好的链霉菌菌株;纯化后,进行平板纯 培养;
制取链霉菌菌块,分别以立枯丝核菌(Rhizoctonia sp.)、镰刀菌 (Fusar ium sp.)或腐霉菌(Pythium sp.)病原菌为靶标,在PDA平板上进 行对峙培养,病原菌与目的菌相距3cm,每处理3次重复,同时于PDA平板上 单独接种病原菌作对照;一周后检查对峙培养结果,根据病原菌在对峙方向 的菌落半径、对照菌落半径计算抑菌率;抑菌率%=(对照菌落半径~对峙 菌落半径)/对照菌落半径×100%,选择抑菌率高且对多种病原同时具有防 效的菌株参与下步筛选试验;
(2)防病促生菌株的筛选
采用育苗钵异步生测法,分别对步骤(1)获得的菌株进行防病和促生功 能比较试验,栽培基质按大田壤土∶农家肥∶蛭石=6-8∶1-3∶0.5-1.5比例配 制,参试目的菌株和病原菌都制成固体培养物,按1%比例与上述培养基质混 合;病原菌和生防菌混合接种的栽培基质用于抗病性检测,目的菌单独接种 的用于促生效果检测,目的菌和病原菌均按栽培基质1%的质量比接种,基质 混合均匀后,填装于育苗钵中;
挑选两叶一心长势均匀一致的番茄幼苗移栽于上述培养钵中,每处理50 棵,各分2组,随机排列,置于日光温室中培养;
侵染率调查:30天后将根挖出,调查病情指数;
促生结果调查:待番茄长到4~5片真叶时,将番茄苗整株挖出,检测整 株鲜重、地上部干重、叶面积、主根长、根干重指标。
综合比较抗病和促生效果,确定优势菌株;
(3)防根结线虫菌株的筛选
二龄幼虫的培养:在黄瓜生长后期,挖取根结线虫发病重、根结多的黄 瓜根,用清水洗去根部泥土,剪成长1cm的根段,放入500mL三角瓶中,倒 入200mL 0.5%NaClO溶液,用力摇3分钟,混合溶液过100目筛,用无菌水 冲洗筛上碎片5次,溶液再过500目筛,用无菌水冲洗筛上物,液体收集到 容器中,获得卵悬浮液。将收集到的卵块或卵粒置于中性滤纸上,置于200 目网筛上,网筛置于盛有清水的盆中,水位高度为浸湿滤纸,然后置于28℃ 恒温箱中孵化,每24小时将盆中水过500网筛,将孵化的二龄幼虫收集于三 角瓶中;置4℃冰箱中备用;
防根结线虫功能菌株筛选:吸取3mL线虫液于培养皿中,然后加入步骤 (2)获得的目的菌株的培养液各1mL,对照加无菌水,每处理三次重复,混合 液放入28℃恒温箱中培养,培养1~3小时后,每皿中加2滴0.05%亚甲基蓝 水溶液,5~10分钟镜检线虫死亡率,比较不同菌株培养液对二龄幼虫的致死 效果;
防根结线虫功能菌株盆栽复筛:分别取连茬4年、8年和11年线虫危害 较重的黄瓜大棚土壤,装入高14cm,直径16cm的花盆中。设置功能菌、阿维 菌素和空白对照三组处理,每处理20盆,添加物用量为功能菌麸皮培养物5g/ 盆,0.2%阿维菌素乳油稀释1000倍,于定植后浇灌200mL/盆,用黄瓜做试 验植物,将两片真叶的津绿3号黄瓜幼苗按每盆一棵移入,定植后,除阿维 菌素处理外,每盆浇清水200mL,之后用称重法浇水,三个月后调查病情指数, 分级并记录结果,分析严重度;采用的分级标准为:0级,无根结;1级,有 少数根结,占全根系的1%~25%;2级,根系根结数量中等,占全根系的26%~ 50%;3级,根系根结数量很多,占全根系的51%~75%;4级,根系根结数量 很多,占全根系的76%~100%,
病情指数(%)=∑(级数×同级株数)/(总株数×4)×100,
严重度是指有根瘤根的长度之和占总根系长度的百分比;
比较上述结果,确定更优菌株;
(4)降解根系自毒物质菌株筛选
取大田壤土,风干后粉碎,过筛,215℃干热灭菌8小时。以苯甲酸、香 豆素为酚酸类自毒物质试验材料,按酚酸自毒物质的最终浓度50、100、150、 200、250ug/kg移取已配置好的浓度为1000mg/L的苯甲酸或香豆素的母液于 灭菌土中,加入步骤(3)所确定菌株的麸皮培养物,混合均匀,分装入花盆 中,每盆装土1.5kg。苯甲酸、香豆素的混合处理中,两种药剂按1∶1混合, 每种药剂的用量比单一处理减倍。
将育好的有两片复叶的番茄苗按3棵/盆移栽到上述花盆中,定植后, 浇水至饱和,之后按称重法浇水;设空白对照,每处理五次重复;
观察幼苗缓苗、长势情况,30天后检测成活率、株高、复叶长度、根系 干重生理指标;检测叶片丙二醛和PAL酶活性;
比较上述结果,确定本步骤选出的优势菌株;
(5)田间小区试验,最终确定优势菌株
将经过上述四步确定的优势菌株分别制成固体培养物,选择连茬五年以 上,根部病害以及根结线虫发生较为严重的温室大棚进行应用比较试验;
采用定苗期穴施方法,将菌剂与细田土混合,定量施入定苗穴中,之后的 定苗、浇水等管理采用同常规措施,每处理30M2,三次随机重复;在生长中 期和后期检测植株长势、防病、防线虫效果,以及对产量和品质的影响,
综合比较以上指标,确定具有如下形态特征和培养特征的最优菌株。
1、形态特征
酒红土褐链霉菌S506在大多数培养基上生长良好,革兰氏
染色阳性;在 高氏合成1号琼脂和GYM琼脂等培养基上生长14天后,菌落呈圆形,基内菌 丝发育良好,无横隔,不断裂;气生菌丝丰茂,多分枝;孢子丝螺旋形,孢 子卵圆形,表面光滑。
2、培养特征
在不同培养基上进行了菌体培养试验,观察了气生菌丝、基内菌丝
颜色和 产色无情况,结果见表1。
培养基 气生菌丝颜色 基内菌丝颜色 可溶色素 高氏合成1号琼脂 GYM琼脂 燕麦琼脂 甘油天
门冬素琼脂 Bennett’琼脂 JCM42#培养基 粉白 浅灰褐 灰橙 浅灰褐 灰橙 黄粉 灰白 灰黄 微黄 灰黄 灰黄或灰白 灰橙 无 无 无 无 无 无
3、细胞型化学组分分析
菌株S506的全细胞
水解液含有L,L-DAP(L,L-二
氨基庚二酸 Diaminopimelic acid),无特征性糖;细胞壁属于I型,糖型C。
4生理生化特征
菌株S605的生理生化特征试验结果见表2。
表2菌株S506的生理生化特征
特征 结果
碳源利用 结果 明胶
液化 淀粉水解
牛奶
凝固 牛奶胨化
硝酸盐还原
纤维素上生长 类黑色素产生 利用
甲酸盐 利用乙酸盐 利用
柠檬酸盐 pH 5~g生长 - + - W + W - + + - + D-
葡萄糖 L-阿拉伯糖 D-木糖 D-果糖 半乳糖
蔗糖 鼠李糖
棉子糖 甘露醇 山梨醇 肌醇 + + + + - + + + + - +
表2中+代表阳性;-代表阴性:W代表弱阳性。
菌株S506的16S rDNA序列与GenBank中相关序列Blast比对的结果表 明,该菌株属于链霉菌属,与酒红土褐链霉菌Streptomyces vinaceusdrappus 同源性很高,为99.8%。
根据形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,将该菌种S506定 为酒红土褐链霉菌(Streptomyces vinaceusdrappus)。
本发明所述的酒红土褐链霉菌(Streptomyces vinaceusdrappus)S506 的应用,主要是利用其活菌培养物作为有效成分,生产具有防病促生和解毒 功能的土壤生物修复剂或调理剂,用于连作障碍的防治。
活菌培养物的制备即可液体深层
发酵也可固体发酵,对培养基物料无特 殊要求,满足菌株生长的碳源、氮源、磷源和无机盐即可,麸皮、米糠、淀 粉、各类渣
油饼粕以及
磷酸盐、食盐等均可用作培养物料,对pH值无特殊要 求,培养过程适当通气或搅拌。
实施例1酒红土褐链霉菌S506液体发酵菌剂
A、菌种活化:将酒红土褐链霉菌接种至高氏合成培养基平板上,28-35℃ 培养,反复转接2-3次,培养1周,使菌种活化;取出观察菌体的生长状态, 以
电子显微镜扫描,菌丝和分生孢子照片如图1所示。由图1可见,本发明的酒 红土褐链霉菌S506的菌落呈圆形,基内菌丝无横隔,不断裂;气生菌丝丰茂,多 分枝;孢子丝螺旋形,孢子卵圆形,表面光滑。
B、酒红土褐链霉菌的液体
种子制备
种子培养物料由质量比为8%的麸皮或米糠粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、2%甘油、 0.1%硝酸钠、0.4%
氯化钠、0.3%碳酸
钙、0.3%磷酸氢二
钾、0.05%
硫酸镁、0.05% 硫酸亚
铁和其余的水组成,自然pH,分装于三角瓶121-130℃高压灭菌30-60分 钟,冷却至25-35℃,接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种,在25-30℃下,摇 瓶培养48-72小时;
C、酒红土褐链霉菌的液体深层发酵
以步骤B的培养物为种子,以3-10%的比例接种于液体
发酵罐的液体培养物 料中,液体培养物料和培养条件与步骤B相同,通气搅拌培养72小时,加入两倍 体积的草炭粉
吸附制得链霉菌菌剂。
实施例2酒红土褐链霉菌S506液体发酵菌剂
A、步骤A同实施例1;
B、C、酒红土褐链霉菌S506的种子培养物料由质量比为2%的麸皮粉、2%玉米 粉、1%豆饼粉、0.5%甘油、0.1%硝酸钠、0.4%氯化钠、0.3%碳酸钙、0.3%磷酸氢 二钾、0.05%
硫酸镁、0.05%硫酸亚铁和其余的水组成,发酵及制剂条件同实施例1。
实施例3酒红土褐链霉菌S506的液体发酵菌剂
A、步骤A同实施例1;
B、C、酒红土褐链霉菌的液体种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米 粉、2%豆饼粉、0.5%甘油、0.1%硝酸钾、0.4%氯化钠、0.3%碳酸钙、0.3%磷酸氢 二钾、0.05%硫酸镁、0.05%硫酸亚铁和其余的水组成。
种子培养物料由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、0.5%甘油、 0.1%硝酸钾、0.4%氯化钠、0.3%碳酸钙、0.3%
磷酸氢二钾、0.05%硫酸镁、 0.05%硫酸亚铁和其余的水组成,发酵及制剂条件同实施例1。
实施例4酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂
A、步骤A同实施例1;
B、酒红土褐链霉菌的液体种子制备
种子培养物料由质量比为8%的麸皮或米糠粉、2%玉米粉、0.5%豆饼粉、0.5% 甘油、0.1%硝酸钠、0.4%氯化钠、0.3%碳酸钙、0.3%磷酸氢二钾、0.05%硫酸镁、 0.05%硫酸亚铁和其余的水组成,自然pH,分装于三角瓶121-130℃高压灭菌30-60 分钟,冷却至25-35℃,接种步骤A得到的酒红土褐链霉菌菌种,在25-30℃下, 摇瓶培养48-72小时;
C、酒红土褐链霉菌的固体发酵
固体发酵物料由质量比为45%的麸皮或米糠,8%的麦饭石粉,1.5%的豆饼粉, 0.05%的硝酸钾、0.15%的磷酸氢二钾、0.15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和其余的水 组成,121-130℃高压灭菌,冷却至25-35℃,按3-10%的比例接入步骤B的液体 菌种,搅拌均匀,分装于无菌曲盘,在30±5℃条件下,间断通气培养72小时, 35-50℃低温风干至物料
含水量在12%以下,制得链霉菌菌剂:活菌含量2×109 cfu.g-1。
实施例5酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂
A、步骤A同实施例4;
B、液体种子培养基由质量比为4%的麸皮粉、4%玉米粉、2%豆饼粉、0.5%甘油、 0.1%硝酸钠、0.4%氯化钠、0.3%碳酸钙、0.3%磷酸氢二钾、0.05%硫酸镁、0.05% 硫酸亚铁和其余的水组成,发酵条件同实施例4;
C、酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为35%的麸皮、10%的
页岩粉、1% 的豆饼粉,0.1%的硝酸钾、0.15%的磷酸氢二钾、0.15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙和 其余的水组成,发酵及制剂条件同实施例4。
实施例6酒红土褐链霉菌S506的固体发酵菌剂
A、B、同实施例4;
C、酒红土褐链霉菌的固体发酵物料由质量比为50%的麸皮、5%的沸石粉、1% 的豆饼粉,0.1%的硝酸钾、0.15%的磷酸氢二钾、0.15%的氯化钠、0.4%的碳酸钙 和其余的水组成,发酵及制剂条件同实施例4。
酒红土褐链霉菌菌剂应用示例1(在育苗期应用)
在蔬菜育苗基质中,按1%质量比加入酒红土褐链霉菌菌剂,混合均匀后,撒 籽育苗。
酒红土褐链霉菌菌剂应用示例2(在定植期应用)
在蔬菜定植时,将酒红土褐链霉菌菌剂与5倍的细田土或充分腐熟的
有机肥 混合,搅拌均匀,然后将混合物均匀施入定植穴中。之后的定苗,培土,浇水同 常规操作。
以上应用以及对根际微生物区系、对根系自毒物质的解除和田间应用等效果 试验结果表明,酒红土褐链霉菌S506具有如下综合功能:
(1)显著促进根系发育,提高植株对旱、盐
碱、土传病等的抗逆性能,促进 了植株对土壤养分的有效利用,为生长中后期的优质高产奠定了基础;
(2)显著提高根际活菌总量,并改善根际微生物区系结构,使细菌、放线菌 数量提高,丝状
真菌、病原菌数量下降;
(3)有效控制镰刀菌、丝核菌、根结线虫等病原物对根系的侵染,防效与常 用的化学
杀菌剂五氯硝基本相当,对线虫的防治超过了阿维菌素;
(4)降解酚酸类根系自毒物质,显著缓解根系分泌和上茬根系腐烂释放毒素 对根系的伤害。
在连茬多年的蔬菜老区应用,可以显著提高育成苗的质量,病害少,根系发 达,缩短移植后的缓苗时间,提高后期抗病能力。在生长中后期,可有效控制根 部病害和地上部病害的发生,减少用药40~50%,综合产量增加25%以上。近几 年,在河北、山东、河南、福建、上海等地的多种蔬菜和果树上进行了应用,均 表现出了同样的抗病、增产和品质改善效果,均超过了国内外的同类技术和产品。 详细试验数据见“应用试验报告”(附件)。
上述关于酒红土褐链霉菌、筛选方法及应用的描述仅作为本发明几种技术方 案提出,不作为对其单一限制条件。