3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物的晶型
阅读：831发布：2024-01-31
专利汇可以提供3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物的晶型专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种(S)-4-((2S，3S)-7- 氨 甲酰基-1，1-二乙基-3-甲 氧 基-1，2，3，4-四氢 萘 -2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶固体形式。本发明还提供一种包含所述结晶固体形式的医药组合物，使用所述结晶固体形式 治疗 与μ阿片受体活性相关的 疾病 的方法，和适用于制备所述结晶固体形式的方法。，下面是3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物的晶型专利的具体信息内容。
1.一种(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶固体形式，其中所述结晶固体形式的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图1中所示的图的峰位置实质上一致。
2.根据权利要求1所述的结晶固体形式，其中所述结晶固体形式的特征在于以10℃/分钟的加热速率记录的差示扫描量热迹线显示吸热热流中的最高点在162℃与170℃之间的温度下。
3.根据权利要求1所述的结晶固体形式，其中所述结晶固体形式的特征在于差示扫描量热迹线与图2中所示的迹线实质上一致。
4.一种(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶固体形式，其中所述结晶固体形式的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图4中所示的图的峰位置实质上一致。
5.一种(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的盐酸盐的结晶固体形式，其中所述结晶固体形式的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图6中所示的图的峰位置实质上一致。
6.一种医药组合物，其包含医药学上可接受的载剂和根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式。
7.一种制备结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)的方法，所述方法包含在包含10％与
20％之间的水的极性稀释剂存在下进行催化氢解反应，从而脱除(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯的保护基，形成结晶化合物1，其中所述结晶化合物1的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图1中所示的图的峰位置实质上一致。
8.一种制备结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)的方法，其中所述结晶化合物1的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图1中所示的图的峰位置实质上一致，所述方法包含：
(a)使(S)-2-环己基甲基-4-氧代-丁酸苄酯(4)
与(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢萘-2-甲酰胺(3)反应，得到(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯(2)，
(b)在包含10％与20％之间的水的极性稀释剂存在下进行催化氢解反应，从而脱除所述式2化合物的保护基，得到结晶化合物1。
9.一种制备结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)的方法，其中所述结晶化合物1的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图1中所示的图的峰位置实质上一致，所述方法包含：
(a)将(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸分散于包含3％与20％之间的水的极性稀释剂中，形成混合物；
(b)保持所述混合物至少12小时；和
(c)从所述混合物中分离所述结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸。
10.一种式2化合物，
以化学名称(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯表示，或其盐酸盐。
11.一种(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯的结晶盐酸盐，其中所述结晶盐酸盐的特征在于x射线粉末衍射图的峰位置与图8所示的图中的峰位置实质上一致。
12.一种制备(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的方法，所述方法包含：
(a)使(S)-2-环己基甲基-4-氧代-丁酸苄酯(4)与(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺(3)反应，得到(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯(2)；
和
(b)通过催化氢解反应脱除化合物2的保护基，得到(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，
1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸。
13.一种根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗哺乳动物中可通过用μ阿片受体拮抗剂治疗加以改善的疾病或医学病况。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述疾病或病况为阿片诱导的肠功能紊乱或术后肠梗阻。
15.根据权利要求13所述的用途，其中所述疾病或病况为胃肠道蠕动减弱的病症。
16.一种根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式在制备药剂中的用途，所述药剂用于降低或预防哺乳动物中与使用阿片剂相关的副作用。
17.一种医药组合物的用途，所述医药组合物包含医药学上可接受的载剂和根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式，其用于制备供治疗患有可通过用μ阿片受体拮抗剂治疗加以改善的医学病况的哺乳动物的药剂。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述医学病况为阿片诱导的肠功能紊乱或术后肠梗阻。
19.一种根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式的用途，其用于制备供降低或预防哺乳动物中与使用阿片剂相关的副作用的药剂，其中所述药剂包括所述阿片剂。
20.一种医药组合物的用途，所述医药组合物包含医药学上可接受的载剂和根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式，其用于制备供增强哺乳动物的胃肠道蠕动的药剂。
21.一种医药组合物的用途，所述医药组合物包含医药学上可接受的载剂和根据权利要求1至5中任一权利要求所述的结晶固体形式，其用于制备供拮抗哺乳动物中的μ阿片受体的药剂。
3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物的晶型
技术领域
[0001] 本发明涉及一种3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物的晶型，其适用作μ阿片受体拮抗剂。本发明还涉及包含这些结晶化合物的医药组合物，使用这些化合物治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况的方法，和适用于制备这些化合物的方法。
背景技术
[0002] 预期μ阿片受体拮抗剂适用于治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况。具体说来，预期周围选择性μ阿片受体拮抗剂适用于治疗诸如阿片诱导的肠功能紊乱和术后肠梗阻等病况。共同转让的2007年12月11日申请的美国临时申请案第61/007,220号和2008年4月30日申请的美国临时申请案第61/049,219号以及2008年12月10日申请的美国申请案第12/331,659号揭示3-羧基丙基-氨基四氢化萘化合物。具体说来，这些申请案中特别揭示化合物(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，
3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)：
3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)：
[0003]
[0004] 其显示μ阿片受体拮抗剂活性。
[0005] 为了有效使用这一化合物作为治疗剂，将需要其具有可容易地制造且具有可接受的化学和物理稳定性的固态形式。举例来说，将尤其需要其具有例如在超过约160℃或约180℃的温度下热稳定且不易潮解的实体形式，从而有利于物质的加工和储存。就增强制品的纯度和稳定性来说，结晶固体一般优于非晶形。
[0006] 先前尚未报导化合物1的晶型。因此，需要化合物1的不易潮解且展现有利热稳定性的稳定晶型。
发明内容
[0007] 本发明提供(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)的两种不同的结晶固体形式和化合物1的结晶盐酸盐。
[0008] 令人惊讶的是，已发现一种形式的结晶化合物1在约162℃的温度以下未展现明显的热事件，且当在室温下暴露于约2％与约90％之间范围内的相对湿度时，展现小于约2.5％的重量变化。此外，当在室温下暴露于高达约90％的相对湿度时，结晶化合物1与化合物1的结晶盐酸盐都不易潮解。
[0009] 尤其，预期本发明的结晶固体形式适用于制备供治疗或改善由μ阿片受体活性介导的医学病况的医药组合物。因此，在另一组合物方面，本发明提供一种医药组合物，其包含医药学上可接受的载剂和结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸或本发明的结晶盐酸盐。
[0010] 本发明还提供一种治疗或改善可通过用μ阿片受体拮抗剂治疗加以改善的疾病或病况的方法，所述疾病或病况为例如胃肠道蠕动减弱的病症，所述方法包含向哺乳动物投予治疗有效量的结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)或化合物1的结晶盐酸盐。
[0011] 本发明另外提供一种治疗阿片诱导的肠功能紊乱或术后肠梗阻的方法，所述方法包含向哺乳动物投予治疗有效量的结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)或化合物1的结晶盐酸盐。
[0012] 在另一方法方面，本发明提供一种制备I型结晶化合物1的方法，所述方法包含将(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)分散于包含约3％与约20％之间的水的极性稀释剂中，形成结晶化方法混合物；保持所述方法混合物至少约12小时；和从方法混合物中分离所得晶体。
[0013] 在又一方法方面，本发明提供一种制备I型结晶化合物1的方法，所述方法包含在包含约10％与约20％之间的水的极性稀释剂存在下进行催化氢解反应，从而脱除经保护中间物(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯的保护基，形成结晶化合物1。
[0014] 在相关组合物方面，本发明提供(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯和亚硫酸氢盐加合物：(S)-3-苄氧基羰基-4-环己基-1-羟基-丁烷-1-磺酸钠，其适用于制备化合物1的上述经保护前体。
[0016] 参考随附图式说明本发明各方面。
[0017] 图1显示本发明的I晶型(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的x射线粉末衍射(XRPD)图。
[0018] 图2显示本发明的I晶型(S)4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的差示扫描量热(DSC)迹线(右侧纵轴)和热解重量分析(TGA)迹线(左侧纵轴)。
[0019] 图3显示本发明的I晶型(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的动态吸湿(DMS)迹线。
[0020] 图4显示本发明的II晶型(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的x射线粉末衍射(XRPD)图。
[0021] 图5显示本发明的II晶型(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的差示扫描量热(DSC)迹线。
[0022] 图6显示本发明的(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶盐酸盐的x射线粉末衍射(XRPD)图。
[0023] 图7显示本发明的(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶盐酸盐的差示扫描量热(DSC)迹线(右侧纵轴)和热解重量分析(TGA)迹线(左侧纵轴)。
[0024] 图8显示本发明的(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯的结晶盐酸盐的x射线粉末衍射(XRPD)图。
[0025] 图9显示本发明的(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯的结晶盐酸盐的差示扫描量热(DSC)迹线。
具体实施方式
[0026] 本发明提供(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)的结晶固体形式。
[0027] 定义
[0028] 当描述本发明的化合物、组合物和方法时，除非另外指出，否则以下术语具有以下含义。
[0029] 术语“治疗有效量”意指当投予需要治疗的患者时，足以实现治疗的量。
[0030] 如本文所用的术语“治疗”意指治疗诸如哺乳动物(尤其人类)等患者的疾病、病症或医学病况，其包括一种或一种以上的以下活性：
[0031] (a)预防疾病、病症或医学病况出现，即，对患者的预防性治疗；
[0032] (b)改善疾病、病症或医学病况，即，消除患者的疾病、病症或医学病况或引起所述疾病、病症或医学病况消退，包括抵消其它治疗剂的作用；
[0033] (c)抑制疾病、病症或医学病况，即，减缓或阻止患者的疾病、病症或医学病况的发展；或
[0034] (d)减轻患者的疾病、病症或医学病况的症状。
[0036] 命名约定
[0037] 根据如AutoNom软件(MDL信息系统有限公司(MDL Information Systems，GmbH)，德国法兰克福(Frankfurt，Germany))中所贯彻的IUPAC约定，将化合物1命名为(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸。所述双环1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基或者俗称为“氨基四氢化萘”。
[0038] 本发明的晶型
[0039] 一方面，本发明提供呈两种不同形式的结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(1)。
[0040] 一方面，I型结晶化合物1的特征在于x射线粉末衍射(XRPD)图的衍射峰的2θ值为6.92±0.20和15.34±0.20，且两个或两个以上衍射峰(包括三个或三个以
上和四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自10.24±0.20、11.48±0.20、12.32±0.20、
13.46±0.20、14.04±0.20、17.30±0.20、18.06±0.20、20.30±0.20、21.42±0.20、
23.48±0.20、25.54±0.20、26.96±0.20、29.30±0.20和30.72±0.20。具体说来，在这方面，I型的特征在于x射线粉末衍射图的三个或三个以上衍射峰(包括四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自6.92±0.20、10.24±0.20、13.46±0.20、15.34±0.20、18.06±0.20和21.42±0.20。I晶型的特征进一步在于x射线粉末衍射图的衍射峰的2θ值为
6.92±0.20、10.24±0.20、13.46±0.20、1534±0.20、18.06±0.20和21.42±0.20。
上和四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自10.24±0.20、11.48±0.20、12.32±0.20、
13.46±0.20、14.04±0.20、17.30±0.20、18.06±0.20、20.30±0.20、21.42±0.20、
23.48±0.20、25.54±0.20、26.96±0.20、29.30±0.20和30.72±0.20。具体说来，在这方面，I型的特征在于x射线粉末衍射图的三个或三个以上衍射峰(包括四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自6.92±0.20、10.24±0.20、13.46±0.20、15.34±0.20、18.06±0.20和21.42±0.20。I晶型的特征进一步在于x射线粉末衍射图的衍射峰的2θ值为
6.92±0.20、10.24±0.20、13.46±0.20、1534±0.20、18.06±0.20和21.42±0.20。
[0041] 如粉末x射线衍射领域所熟知，与相对峰高相比，XRPD光谱的峰位置对诸如样品制备和仪器几何形状的细节等实验细节的敏感性相对较低。因此，一方面，结晶化合物1的I型的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图1中所示的峰位置实质上一致。
[0042] I晶型结构的特征进一步在于单晶x-射线衍射分析，提供以下晶格参数：单位晶胞为尺寸为 且晶胞体积(V)为 的斜方晶；计3
算密度为1.151g/cm ；空间群为P212121。所得分子结构证实不对称单位晶胞不含水或其它溶剂分子，且与上述立体化学一致。羧基的C-0键距以及胺氮周围的键长和键角与I晶型化合物1一致，I晶型化合物1为质子已从羧酸转移至胺氮的两性离子分子，如下文示意性所示：
算密度为1.151g/cm ；空间群为P212121。所得分子结构证实不对称单位晶胞不含水或其它溶剂分子，且与上述立体化学一致。羧基的C-0键距以及胺氮周围的键长和键角与I晶型化合物1一致，I晶型化合物1为质子已从羧酸转移至胺氮的两性离子分子，如下文示意性所示：
[0043]
[0045] 另一方面，I晶型的特征在于其暴露于高温时的行为。如图2中所示，差示扫描量热(DSC)迹线展现在约162℃至约170℃(包括约164℃与约168℃之间)的范围内被识别为熔融转变的在吸热热流中的峰。热解重量分析(TGA)迹线显示在熔点以下的温度下无显著重量损失，且显示符合在熔点周围的温度下每摩尔化合物1损失1摩尔水的阶梯分布。水的释放可归于化学降解反应。
[0046] 已显示I晶型具有可逆的吸附/脱附分布和较小的吸湿倾向。如图3中所示，I型显示在室温下在2％至90％相对湿度的湿度范围内，重量增益小于约2.5％。具体说来，I型显示在40％至75％相对湿度的范围内(即通常制造口服调配物所处的湿度范围)，重量增益小于约1％。
[0047] 另一方面，本发明提供II晶型化合物1。II晶型由图4的XRPD图和图5的DSC分布识别。一方面，II晶型的特征在于x射线粉末衍射(XRPD)图的衍射峰的2θ值为9.05±0.20和16.52±0.20，且两个或两个以上衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自9.80±0.20、12.44±0.20、12.92±0.20、14.21±0.20、
15.62±0.20、17.27±0.20、19.04±0.20、19.85±0.20、21.29±0.20、22.43±0.20、
23.48±0.20、23.99±0.20和26.09±0.20。具体说来，在这方面，II型的特征在于x射线粉末衍射图的两个或两个以上衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的 2θ值 选 自9.05±0.20、9.80±0.20、12.44±0.20、12.92±0.20、16.52±0.20、
23.99±0.20和26.09±0.20。II型的特征进一步在于x射线粉末衍射图的衍射峰
在 9.05±0.20、9.80±0.20、12.44±0.20、12.92±0.20、16.52±0.20、23.99±0.20 和
26.09±0.20处。另一方面，II晶型的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图4中所示的峰位置实质上一致。
15.62±0.20、17.27±0.20、19.04±0.20、19.85±0.20、21.29±0.20、22.43±0.20、
23.48±0.20、23.99±0.20和26.09±0.20。具体说来，在这方面，II型的特征在于x射线粉末衍射图的两个或两个以上衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的 2θ值 选 自9.05±0.20、9.80±0.20、12.44±0.20、12.92±0.20、16.52±0.20、
23.99±0.20和26.09±0.20。II型的特征进一步在于x射线粉末衍射图的衍射峰
在 9.05±0.20、9.80±0.20、12.44±0.20、12.92±0.20、16.52±0.20、23.99±0.20 和
26.09±0.20处。另一方面，II晶型的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图4中所示的峰位置实质上一致。
[0048] 根据图5中展现的热行为将II晶型识别为亚稳形式，其在约114℃至115℃的温度下经历转化，且熔点温度为约157℃，此时伴有化学降解。
[0049] 另一方面，本发明提供化合物1的结晶盐酸盐。
[0050] 一方面，本发明的结晶盐酸盐的特征在于x射线粉末衍射(XRPD)图的两个或两个以上衍射峰(包括三个或三个以上和四个或四个以上衍射峰)的2θ值选自6.80±0.20、9.80±0.20、12.71±0.20、13.31±0.20、15.14±0.20、19.97±0.20、21.44±0.20、
22.64±0.20、23.27±0.20、24.44±0.20和25.37±0.20。另一方面，化合物1的结晶盐酸盐的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图6中所示的峰位置实质上一致。
22.64±0.20、23.27±0.20、24.44±0.20和25.37±0.20。另一方面，化合物1的结晶盐酸盐的特征在于x射线粉末衍射图中的峰位置与图6中所示的峰位置实质上一致。
[0051] 结晶盐酸盐的特征还在于其差示扫描量热(DSC)迹线展现在约185℃至约193℃的范围内被识别为熔融转变的在吸热热流中的第一峰，和在约220℃至约140℃的范围内的第二峰(应了解与降解事件相符)，如图7中所说明。实例8、9和10中制备的结晶盐酸盐的样品当在室温下暴露于约2％相对湿度至约90％相对湿度的范围内的相对湿度时保留其外观和流动性。
[0052] 本发明的晶型的这些性质进一步说明于以下实例中。
[0053] 合成程序和中间物
[0054] 化合物1，即(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸可由容易获得的呈固体非晶形的起始物质，使用以下实例中所述的程序或使用本申请案的背景技术章节中所列的共同转让的美国申请案中所述的程序制备。
[0055] 在一种制备方法中，通过将非晶形化合物1溶解于极性稀释剂中以形成结晶化方法混合物，且保持所述方法混合物达约12小时与约4天之间来制备本发明的I晶型。通常在约周围温度下进行所述结晶化方法。适合的稀释剂包括甲醇、异丙醇、1-丙醇和乙腈，以及一种或一种以上上述物质与水的混合物。示范性稀释剂系统包括乙腈、甲醇和水的混合物，例如约69％乙腈、约21％甲醇和约10％水；1-丙醇、乙腈和水的混合物，尤其约95％至约97％(2∶1的1-丙醇∶乙腈)和约5％至约3％水；甲醇和水的混合物，例如约90％甲醇和约10％水；和乙腈和水的混合物，例如约84％乙腈和约16％水。化合物1通常以约150mg/mL与约700mg/mL之间的浓度存在于所述方法混合物中。
[0056] 当稀释剂系统中不存在水时，在所述范围的高端的时段(参见以下实例4，其中允许结晶化进行4天)内保持方法混合物为有用的。因此，制备I晶型的适用方法包含将化合物1溶解于包含极性稀释剂和约3％与约20％之间的水的稀释剂中以形成方法混合物；保持所述方法混合物至少约12小时；和回收所得晶体。
[0057] 反应完成后，通过任何常规方式(诸如过滤、浓缩、离心等)从方法混合物中分离I晶型。
[0058] 在另一制备方法中，宜根据以下过程直接从化合物1的经保护前体2制备I晶型：
[0059] 方案A
[0060]
[0062] 在典型方法中，通过用等数值当量的氢氧化钠处理亚硫酸氢盐加合物5产生约1当量与约1.5当量之间的醛4于惰性稀释剂中的溶液。随后使醛4与氨基四氢化萘3和约1当量与约3当量之间的还原剂(诸如三乙酰氧基硼氢化钠)接触。可能提供作为酸性盐(通常为盐酸盐)的氨基四氢化萘3。通常在约0℃与约30℃之间的温度下反应达约2小时与约24小时之间或直至反应实质上完成。宜分离作为结晶盐酸盐的呈固体形式的经保护的中间物2。
[0063] 最后，通常使用过渡金属催化剂(例如钯或铂)通过催化氢解反应使中间物2脱除苄基，得到I晶型。当提供呈盐形式的中间物2时，首先通过用碱处理而现场产生中间物的中性形式。在所选与氢解反应相容且有助于结晶化的稀释剂中进行反应。包含水和另一极性稀释剂(诸如甲醇、异丙醇、1-丙醇、乙腈和/或二甲基甲酰胺)的混合物适合用于这一反应。在脱除苄基反应中宜使用包含约10％与约20％之间的水的混合物，例如乙腈和约10％与约20％之间的水的混合物。可用诸如过滤等常规方式分离反应产物，即I晶型。
[0064] 因此，在一方法方面，本发明尤其提供制备化合物1的I晶型的方法，所述方法包含：在包含约10％与约20％之间的水的极性稀释剂存在下进行催化氢解反应，从而脱除经苄基保护的中间物2的保护基，形成I晶型。
[0065] 在另一方法方面，本发明提供制备化合物1的I晶型的方法，所述方法包含：(a)使经保护的醛4与氨基四氢化萘3反应，得到经保护的中间物2，和(b)在包含约10％与约20％之间的水的极性稀释剂存在下进行催化氢解反应，从而脱除经苄基保护的中间物2的保护基，形成I晶型。
[0066] 在与氢解反应相容但不促进结晶化的稀释剂(诸如乙酸乙酯、四氢呋喃或甲基-四氢呋喃)中脱除中间物2的保护基会引起制备化合物1，但其未必呈晶型。在又一方法方面，本发明提供制备化合物1的方法，所述方法包含(a)使经保护的醛4与氨基四氢化萘3反应，得到经保护的中间物2，和(b)通过催化氢解反应脱除经苄基保护的中间物2的保护基，得到化合物1。
[0067] 另外，在组合物方面，本发明提供适用于制备化合物1的经苄基保护的醛4，即(S)-2-环己基甲基-4-氧代-丁酸苄酯；和亚硫酸氢盐加合物5，即(S)-3-苄氧基羰基-4-环己基-1-羟基-丁烷-1-磺酸钠。如制备8中所述，可由相应甲酯亚硫酸氢盐，即(S)-4-环己基-1-羟基-3-甲氧基羰基-丁烷-1-磺酸钠(其合成如制备7中所述)制备经苄基保护的亚硫酸氢盐加合物5。或者，可利用类似于制备7的方法通过类似的经苄基保护的羧酸(5a)和醇(5b)中间物制备亚硫酸氢盐加合物5：
[0068]
[0069] 在又一组合物方面，本发明提供经苄基保护的前体2，即(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯和其盐酸盐。化合物2的结晶盐酸盐的特征在于图8的XRPD图和图9的DSC分布，所述DSC分布展现与熔点相符的在约205℃与约210℃之间的温度下的在吸热热流中的峰。归因于由结晶化引起的典型纯化且归因于与非结晶物质相比预期较高的储存稳定性，均需要呈晶型的医药中间物。
[0070] 如以下实例中所述，通过将非晶形化合物1以约150mg/mL与约700mg/mL之间的浓度溶解于包含醇(例如异丙醇)或异丙醇和乙腈的极性稀释剂中以形成结晶化方法混合物，且保持所述方法混合物不足约1天来制备II晶型。任选可在所述保持时段之前向方法混合物中添加反溶剂，例如1∶1乙腈∶乙酸乙酯，以促进从溶液中结晶化。
[0071] 宜由化合物1的非晶形盐酸盐制备本发明的结晶盐酸盐。将化合物1的非晶形盐以约20mg/mL与约350mg/mL之间的浓度分散于适度极性的溶剂(诸如乙酸乙酯或二乙二醇二甲醚)中，任选加热，接着缓慢冷却，且随后保持约3天与约12天之间的时段。所得晶体可按常规方式分离。
[0072] 医药组合物
[0073] 本发明的结晶固体形式通常以医药组合物或调配物形式投予患者。所述医药组合物可利用任何可接受的投药途径投予患者，所述投药途径包括(但不限于)经口、经直肠、经阴道、经鼻、吸入、局部(包括透皮)和不经肠投药模式。
[0074] 因此，在一个组合物方面，本发明涉及一种医药组合物，其包含医药学上可接受的载剂或赋形剂和治疗有效量的化合物1的结晶固体形式或化合物1的结晶盐酸盐。必要时，所述医药组合物可任选含有其它治疗剂和/或调配剂。当论述组合物时，应了解术语“本发明的固体形式”包括化合物1的I晶型和II晶型以及化合物1的结晶盐酸盐。
[0075] 本发明的医药组合物通常含有治疗有效量的活性剂。然而，所属领域技术人员应认识到，医药组合物可含有大于治疗有效量(即总组合物)或小于治疗有效量(即，经设计用于多次投药来达成治疗有效量的个别单位剂量)。
[0076] 所述医药组合物通常应含有约0.1重量％至约95重量％的活性剂；优选应含有约5重量％至约70重量％；且更优选应含有约10重量％至约60重量％的活性剂。
[0077] 本发明的医药组合物中可使用任何常规载剂或赋形剂。特定载剂或赋形剂的选择，或载剂或赋形剂的组合应视用于治疗特定患者或特定类型的医学病况或疾病状态的投药模式而定。就此而论，适用于特定投药模式的医药组合物的制备完全在医药领域技术人员的范畴内。另外，本发明的医药组合物中所使用的载剂或赋形剂可购得。另外举例说明，常规调配技术描述于雷明顿：药学技术与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，第20版，利平科特威廉姆斯和怀特公司(Lippincott Williams & White)，马里兰州巴尔的摩(Baltimore，Maryland)(2000)；和安赛尔(H.C.Ansel)等人，药物剂型和给药系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)，第7版，利平科特威廉姆斯和怀特公司(Lippincott Williams & White)，马里兰州巴尔的摩(Baltimore，Maryland)(1999)中。
[0078] 可充当医药学上可接受的载剂的物质的代表性实例包括(但不限于)以下各物：糖类，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，诸如微晶纤维素和其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油类，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯类，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；
无热原质水；等张生理盐水；林格氏溶液(Ringer′s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；
和医药组合物中所采用的其它无毒相容性物质。
无热原质水；等张生理盐水；林格氏溶液(Ringer′s solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；
和医药组合物中所采用的其它无毒相容性物质。
[0079] 通常，通过充分且密切混合或掺合活性剂与医药学上可接受的载剂和一种或一种以上可选成分来制备医药组合物。随后可使用常规程序和设备，将所得均匀掺合的混合物成型或装载形成片剂、胶囊、丸剂等。
[0080] 本发明的医药组合物优选以单位剂型包装。术语“单位剂型”是指适于给予患者的物理个别单元，即每一单元含有经计算单独或与一种或一种以上其它单元组合时会产生所要治疗效应的预定量的活性剂。举例来说，所述单位剂型可为胶囊、片剂、丸剂等，或适于不经肠投药的单位包装。
[0081] 在一实施例中，本发明的医药组合物适于经口投药。适于经口投药的医药组合物可呈以下形式：胶囊、片剂、丸剂、口含锭、扁囊、糖衣丸、散剂、颗粒剂；或于水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或水包油型液体乳液或油包水型液体乳液；或酏剂或糖浆等，各含有预定量的本发明化合物作为活性成分。
[0082] 当打算以固体剂型(即胶囊、片剂、丸剂等)经口投药时，本发明的医药组合物通常应包含活性剂和一种或一种以上医药学上可接受的载剂，诸如柠檬酸钠或磷酸二钙。所述固体剂型还可任选或替代性地包含：填充剂或增量剂，诸如淀粉、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合剂，诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶(acacia)；保湿剂，诸如甘油；崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和/或碳酸钠；溶解延迟剂，诸如石蜡；吸收促进剂，诸如季铵化合物；润湿剂，诸如鲸蜡醇和/或甘油单硬脂酸酯；吸收剂，诸如高岭土和/或膨润土；润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和/或其混合物；着色剂；和缓冲剂。
[0083] 本发明的医药组合物中还可存在释放剂、润湿剂、包覆剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。医药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏亚硫酸钠(sodium metabisulfate)、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。用于片剂、胶囊、丸剂等的包覆剂，包括用于肠溶包衣的包覆剂，诸如邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纤维素、羧甲基乙基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素等。
[0084] 还可使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素、或其它聚合物基质、脂质体和/或微球体调配本发明的医药组合物以提供活性剂的缓慢释放或控制释放。此外，本发明的医药组合物可任选含有乳浊剂，且可经调配以便任选以延迟方式仅在或优先在胃肠道的某些部分释放活性成分。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性剂也可呈适当时具有一种或一种以上上述赋形剂的微囊封形式。
[0085] 适于经口投药的液体剂型包括例如医药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型通常包含活性剂和惰性稀释剂，诸如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油类(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇、和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，和其混合物。除活性成分外，悬浮液也可含有悬浮剂，诸如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶，和其混合物。
[0086] 本发明的固体形式还可不经肠(例如经静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内注射)投予。对于不经肠投药，通常将活性剂与适于不经肠投药的媒剂混合，所述媒剂包括例如无菌水溶液、生理盐水、低分子量醇类(诸如丙二醇)、聚乙二醇、植物油、明胶、脂肪酸酯(诸如油酸乙酯)等。不经肠调配物还可含有一种或一种以上抗氧化剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂或分散剂。可通过使用无菌可注射介质、杀菌剂、过滤、辐射或加热使这些调配物变得无菌。
[0087] 或者，本发明的医药组合物经调配用于吸入投药。适于吸入投药的医药组合物通常应呈气溶胶或散剂形式。一般使用熟知的传递装置(诸如定剂量吸入器、干粉吸入器、喷雾器或类似传递装置)投予这些组合物。
[0088] 当使用加压容器吸入投药时，本发明的医药组合物通常应包含活性成分和适合推进剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合气体。另外，医药组合物可呈包含本发明化合物的胶囊或药筒(由例如明胶制成)和适用于粉末吸入器的散剂的形式。适合的散剂基质包括例如乳糖或淀粉。
[0089] 本发明的固体形式还可使用已知的透皮传递系统和赋形剂透皮投予。举例来说，可将活性剂与渗透增强剂(诸如丙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、氮杂环烷-2-酮等)混合，且并入贴片或类似传递系统中。必要时，在这些透皮组合物中可使用其它赋形剂，包括胶凝剂、乳化剂和缓冲剂。
[0090] 必要时，本发明的固体形式可与一种或一种以上其它治疗剂组合投予。在这一实施例中，本发明的固体形式与其它治疗剂物理混合，形成含有这两种药剂的组合物；或各药剂存在于可同时或依序投予患者的分开且不同的组合物中。
[0091] 举例来说，可使用常规程序和设备使本发明的固体形式与第二治疗剂组合以形成包含化合物1和第二治疗剂的组合物。另外，可使治疗剂与医药学上可接受的载剂组合以形成包含本发明的盐、第二治疗剂和医药学上可接受的载剂的医药组合物。在这一实施例中，通常混合或掺合组合物的各组分以产生物理混合物。随后使用本文所述的任何途径以治疗有效量投予所述物理混合物。或者，治疗剂在投予患者之前可保持分开且不同。在这一实施例中，所述药剂在投药之前未以物理方式混合在一起，而是作为分开的组合物同时投予或在分开的时间投予。这些组合物可分开包装或可包装在一起作为试剂盒。试剂盒中的两种治疗剂可利用相同投药途径或利用不同投药途径投予。
[0092] 可使用与本发明活性剂相容的任何治疗剂作为第二治疗剂。具体说来，可与本发明化合物组合使用经由除μ阿片受体拮抗作用以外的机制起作用的促蠕动剂。举例来说，可使用5-HT4受体促效剂作为第二治疗剂，例如替加色罗(tegaserod)、伦扎必利(renzapride)、莫沙必利(mosapride)、普卡比利(prucalopride)、1-异丙基-1H-吲唑-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[2-(4-乙酰基哌嗪-1-基)乙基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}酰胺、1-异丙基-2-氧代-1，2-二氢喹啉-3-甲酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羟基-3-(甲烷磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基}酰胺或
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲
酸甲酯。
4-(4-{[(2-异丙基-1H-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲
酸甲酯。
[0093] 其它适用的促蠕动剂包括(但不限于)5-HT3受体促效剂(例如普马司他(pumosetrag))、5-HT1A受体拮抗剂(例如AGI 001)、α-2-δ配体(例如PD-217014)、氯离子通道开放剂(例如鲁比前列素(lubiprostone))、多巴胺拮抗剂(例如伊托必利(itopride)、甲氧氯普胺(metaclopramide)、多潘立酮(domperidone))、GABA-B促效剂(例如氯苯氨丁酸(baclofen)、AGI 006)、κ阿片促效剂(例如阿西马朵林(asimadoline))、毒蕈碱M1和M2拮抗剂(例如阿可替胺(acotiamide))、胃肠动素促效剂(例如米坦西诺(mitemcinal))、鸟苷酸环化酶活化剂(例如MD-1100)和胃内激素促效剂(例如Tzp 101、RC 1139)。
[0094] 另外，本发明的固体形式可与阿片治疗剂组合。这些阿片剂包括(但不限于)吗啡(morphine)、哌替啶(pethidine)、可待因(codeine)、双氢可待因(dihydrocodeine)、羟 氢 可 待 因 (oxycontin)、羟 考 酮(oxycodone)、氢 可 酮(hydrocodone)、舒 芬太 尼(sufentanil)、芬 太 尼(fentanyl)、瑞 芬 太 尼(remifentanil)、丁 丙 诺 啡(buprenorphine)、美沙酮(methadone)和海洛因(heroin)。
[0095] 此项技术中已知所述治疗剂的许多其它实例，且任何所述已知治疗剂均可与本发明化合物组合使用。当包括第二药剂时，所述第二药剂以治疗有效量存在，即当与本发明化合物共投予时产生治疗有益效应的任何量。与本发明化合物组合投予的其它治疗剂的适合剂量通常在每天约0.05μg至每天约100mg的范围内。
[0096] 因此，本发明的医药组合物任选包括如上所述的第二治疗剂。
[0097] 以下实例说明本发明的代表性医药组合物：
[0098] 调配物实例A：用于经口投药的硬明胶胶囊
[0099] 充分掺合本发明的固体形式(50g)、喷雾干燥乳糖(200g)和硬脂酸镁(10g)。将所得组合物装载于硬明胶胶囊中(每个胶囊260mg组合物)。
[0100] 调配物实例B：用于经口投药的硬明胶胶囊
[0101] 充分掺合本发明的固体形式(20mg)、淀粉(89mg)、微晶纤维素(89mg)和硬脂酸镁(2mg)，且随后使之穿过45目美国筛。将所得组合物装载于硬明胶胶囊中(每个胶囊200mg组合物)。
[0102] 调配物实例C：用于经口投药的明胶胶囊
[0103] 充分掺合本发明的固体形式(10mg)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(50mg)和淀粉粉末(250mg)，且随后装载于明胶胶囊中(每个胶囊310mg组合物)。
[0104] 调配物实例D：用于经口投药的片剂
[0105] 使本发明的固体形式(5mg)、淀粉(50mg)和微晶纤维素(35mg)穿过45目美国筛且充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液(10wt％于水中，4mg)与所得粉末混合，且随后使所述混合物穿过14目美国筛。在50-60℃下干燥所产生的颗粒且使之穿过18目美国筛。随后向所述颗粒中添加先前已穿过60目美国筛的羧甲基淀粉钠(4.5mg)、硬脂酸镁(0.5mg)和滑石(1mg)。混合后，在压片机上压制所述混合物，得到重100mg的片剂。
[0106] 调配物实例E：用于经口投药的片剂
[0107] 充分掺合本发明的固体形式(25mg)、微晶纤维素(400mg)、气相二氧化硅(10mg)和硬脂酸(5mg)，且随后压制形成片剂(每个片剂440mg组合物)。
[0108] 调配物实例F：用于经口投药的单刻痕片剂
[0109] 充分掺合本发明的固体形式(15mg)、玉米淀粉(50mg)、交联羧甲基纤维素钠(25mg)、乳糖(120mg)和硬脂酸镁(5mg)，且随后压制形成单刻痕片剂(每个片剂215mg组合物)。
[0110] 调配物实例G：用于经口投药的悬浮液
[0111] 充分混合以下成分以形成用于经口投药的悬浮液，每10mL悬浮液含有100mg活性成分：
[0112]
[0113] 调配物实例H：干粉组合物
[0114] 将本发明的微粉化固体形式(1mg)与乳糖(25mg)掺合，且随后装载于明胶吸入药筒中。药筒的内含物是使用粉末吸入器投予。
[0115] 调配物实例J：可注射调配物
[0116] 将本发明的固体形式(0.1g)与0.1M柠檬酸钠缓冲溶液(15mL)掺合。使用1N盐酸水溶液或1N氢氧化钠水溶液调节所得溶液的pH值至pH 6。随后添加含无菌生理盐水的柠檬酸盐缓冲液，得到20mL的总体积。
[0117] 应了解，在以上所论述的医药组合物中可使用适于特定投药模式的任何本发明的固体形式(即I晶型或II晶型或结晶盐酸盐)。
[0118] 效用
[0119] 本发明活性剂(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸为针对μ阿片受体的拮抗剂，且因此，预期本发明的结晶固体形式适用于治疗由μ阿片受体介导的医学病况或与μ阿片受体活性相关的医学病况，即，可通过用μ阿片受体拮抗剂治疗加以改善的医学病况。具体说来，预期本发明的固体形式适用于治疗与使用阿片止痛剂相关的副作用，即，诸如便秘、胃排空降低、腹痛、胃气胀、恶心和胃食道逆流等症状，统称为阿片诱导的肠功能紊乱。还预期本发明固体形式适用于治疗术后肠梗阻，一种在腹部或其它手术后出现的胃肠道蠕动减弱的病症。另外，已表明诸如化合物1等μ阿片受体拮抗剂化合物可用于逆转阿片诱导的恶心和呕吐。
[0120] 因为已显示化合物1在动物模型中增加胃肠(GI)道的蠕动，所以预期本发明的固体形式适用于治疗哺乳动物(包括人类)中由蠕动减弱所引起的胃肠道病症。所述胃肠蠕动病症包括例如慢性便秘、便秘型肠易激综合症(C-IBS)、糖尿病性和特发性胃轻瘫以及功能性消化不良。
[0121] 因此，一方面，本发明提供增加哺乳动物的胃肠道蠕动的方法，所述方法包含向哺乳动物投予治疗有效量的包含医药学上可接受的载剂和本发明的固体形式的医药组合物。
[0122] 当用于治疗胃肠道蠕动减弱的病症或由μ阿片受体介导的其它病况时，通常应以单次日剂量或每天多次剂量经口投予本发明的固体形式，但也可使用其它投药形式。举例来说，尤其当用于治疗术后肠梗阻时，可不经肠投予本发明的固体形式。每剂所投予的活性剂的量或每天所投予的总量通常应由医生根据相关情形确定，所述情形包括待治疗的病况、所选投药途径、所投予的实际化合物和其相对活性、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性等。
[0123] 适于治疗胃肠道蠕动减弱的病症或由μ阿片受体介导的其它病症的剂量应在每天每千克约0.0007mg至约20mg活性剂的范围内，包括每天每千克约0.0007mg至约1.4mg。对于平均70千克的人，这一剂量应达到每天约0.05mg至约100mg活性剂。
[0124] 在本发明的一方面，使用本发明的固体形式来治疗阿片诱导的肠功能紊乱。当用于治疗阿片诱导的肠功能紊乱时，本发明的固体形式通常应以单次日剂量或每天多次剂量经口投予。治疗阿片诱导的肠功能紊乱的剂量优选应在每天约0.05mg至约100mg的范围内。
[0125] 在本发明的另一方面，使用本发明的固体形式来治疗术后肠梗阻。当用于治疗术后肠梗阻时，本发明的固体形式通常应以单次日剂量或每天多次剂量经口或静脉内投予。治疗术后肠梗阻的剂量优选应在每天约0.05mg至约100mg的范围内。
[0126] 本发明还提供治疗患有与μ阿片受体活性相关的疾病或病况的哺乳动物的方法，所述方法包含向哺乳动物投予治疗有效量的本发明的固体形式或包含本发明的固体形式的医药组合物。
[0127] 本发明活性剂任选与另一种或一种以上治疗剂组合投予，具体说来与经由非μ阿片机制起作用的促蠕动剂组合投予。因此，另一方面，本发明的方法和组合物进一步包含治疗有效量的另一促蠕动剂。
[0128] 如上所述，本发明的固体形式为μ阿片受体拮抗剂。因此，本发明进一步提供拮抗哺乳动物中的μ阿片受体的方法，所述方法包含向哺乳动物投予本发明的固体形式。
[0129] 尤其，发现本发明活性剂展现与μ阿片受体的有效结合且在μ受体功能检验中几乎无促效作用。因此，本发明的固体形式为有效的μ阿片受体拮抗剂。另外，与中枢神经系统活性相比，活性剂在动物模型中主要显示周围活性。因此，可预期本发明的固体形式在不干扰有益的中枢止痛效应的情况下逆转阿片诱导的胃肠蠕动减弱。可使用所属领域技术人员熟知的各种活体外和活体内检验证明这些性质，以及本发明化合物的效用。以下实例中更详细地描述代表性检验。
[0130] 实例
[0131] 提供以下合成和生物实例以说明本发明，且无论如何不应理解为所述实例限制本发明的范畴。在以下实例中，除非另外指出，否则以下缩写具有以下含义。以下未定义的缩写具有其公认的含义。
[0132] DCM＝二氯甲烷
[0133] DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
[0134] MeOH＝甲醇
[0135] MeTHF＝2-甲基四氢呋喃
[0136] MTBE＝叔丁基甲基醚
[0137] psi＝磅/平方英寸
[0138] RT＝室温
[0139] 试剂和溶剂从供应商(奥德里奇(Aldrich)、佛鲁卡(Fluka)、西格玛(Sigma)等)处购得且不经进一步纯化即使用。除非另外说明，否则反应在氮气氛围下进行。通过薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)和质谱分析监测反应混合物的进展。如各反应中所特别描述，处理反应混合物；通常通过萃取和其它纯化方法(诸如温度依赖性沉淀和溶剂依赖1
性沉淀)纯化所述混合物。通过质谱分析和 H-NMR波谱分析按常规进行反应产物的表征。
对于NMR测量，将样品溶解于氘化溶剂(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，且用Varian Gemini
1
2000仪器(400MHz)在标准观察条件下获得 H-NMR谱。用美国应用生物系统公司(Applied Biosystems)(加利福尼亚州福斯特城(Foster City，CA))API 150EX型仪器或安捷伦科技有限公司(Agilent)(加利福尼亚州帕洛阿尔托(Palo Alto，CA))1200LC/MSD型仪器通过电喷雾电离法(ESMS)进行化合物的质谱识别。使用布曼(Brinkmann)(纽约州韦斯特伯里(Westbury，NY))万通(Metrohm)的卡尔费休(Karl Fischer)813型电量计，通过卡尔-费休滴定(Karl-Fischer titration)测定含水量。通过HPLC使用以下条件测定纯度：
性沉淀)纯化所述混合物。通过质谱分析和 H-NMR波谱分析按常规进行反应产物的表征。
对于NMR测量，将样品溶解于氘化溶剂(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，且用Varian Gemini
1
2000仪器(400MHz)在标准观察条件下获得 H-NMR谱。用美国应用生物系统公司(Applied Biosystems)(加利福尼亚州福斯特城(Foster City，CA))API 150EX型仪器或安捷伦科技有限公司(Agilent)(加利福尼亚州帕洛阿尔托(Palo Alto，CA))1200LC/MSD型仪器通过电喷雾电离法(ESMS)进行化合物的质谱识别。使用布曼(Brinkmann)(纽约州韦斯特伯里(Westbury，NY))万通(Metrohm)的卡尔费休(Karl Fischer)813型电量计，通过卡尔-费休滴定(Karl-Fischer titration)测定含水量。通过HPLC使用以下条件测定纯度：
[0140] 柱：Zorbax SB-Aq，5μm，4.6×250mm
[0141] 柱温：40℃
[0142] 流速：1.0mL/min
[0143] 移动相：A＝水/ACN(98∶2)+0.1％TFA
[0144] B＝水/ACN(10∶90)+0.1％TFA
[0145] 注射体积：10μL
[0146] 检测器波长：214nm
[0147] 将化合物以约1mg/mL溶解于水/ACN(50∶50)中，且在20分钟内使用以下梯度(时间(min)/B％)加以分析：0/10、2.5/20、9/75、15/90、17/90、18/10、20/10。
[0148] 制备1：7，7-二乙基-5-羟基-1a，2，7，7a-四氢-1-氮杂-环丙基[b]萘-1-甲酸叔丁酯
[0149] a.7-氨基-6-溴-8，8-二乙基-5，6，7，8-四氢萘-2-醇氢溴酸盐
[0150] 向烧瓶中添加7，7-二乙基-5-甲氧基-1a，2，7，7a-四氢-1H-1-氮杂-环丙基[b]萘(268g，1.16mol)和溴化氢(1.97L，17.38mol)，接着添加溴化四-N-丁基铵(38g，0.12mol)。在搅拌下在100℃下加热反应混合物过夜，冷却至室温，且随后倾入搅拌的乙酸乙酯(2.5L)中。通过过滤分离产物，用乙酸乙酯(2×200mL)洗涤滤饼且干燥，得到呈微紫色固体状的粗产物(370g)。将粗产物悬浮于乙醇(1.50L)中，随后在80℃下加热30分钟。
经1小时冷却所得浆料至室温，且过滤。相继用乙醇(2×100mL)和乙酸乙酯(100mL)洗涤烧瓶和滤饼，且干燥过夜，得到标题化合物(275g，纯度约96％)。
经1小时冷却所得浆料至室温，且过滤。相继用乙醇(2×100mL)和乙酸乙酯(100mL)洗涤烧瓶和滤饼，且干燥过夜，得到标题化合物(275g，纯度约96％)。
[0151] b.7，7-二乙基-5-羟基-1a，2，7，7a-四氢-1-氮杂-环丙基[b]萘-1-甲酸叔丁酯
[0152] 向7-氨基-6-溴-8，8-二乙基-5，6，7，8-四氢萘-2-醇氢溴酸盐(20.0g，52.8mmol)和乙酸乙酯(200mL)的浆料中添加1.0M氢氧化钠水溶液(106mL)。在25℃下搅拌反应混合物2小时，添加二碳酸二叔丁酯(15g，68mmol)的乙酸乙酯(5mL)溶液，且在室温下搅拌反应混合物2小时。移除2/3的乙酸乙酯(135mL)后，添加庚烷(135mL)且经30分钟在室温下搅拌所得浆料，且随后在5℃下搅拌过夜。过滤浆料，且用水(100mL)清洗滤饼，用庚烷(50mL)清洗，且在真空下干燥，得到标题化合物(14.3g)。
[0153] 制备2：反-(7-氰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基*甲酸叔丁酯
[0154] a.反-(1，1-二乙基-7-羟基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯
[0155] 向7，7-二乙基-5-羟基-1a，2，7，7a-四氢-1-氮杂-环丙基[b]萘-1-甲酸叔丁酯(170.0g，535.6mmol)和甲醇(1700mL)的浆料中添加对甲苯磺酸吡啶(13.4g，53.6mmol)，且在40℃下搅拌反应混合物4小时。通过旋转蒸发使体积减至约300mL，从而产生白色稠浆料。通过过滤分离产物；用冷甲醇(50mL)洗涤滤饼且在空气中干燥3小时，得到标题化合物(150g)。使滤液减至约50mL且在0℃下搅拌2小时，过滤且干燥，再得到产物(25g)。
[0156] b.反-三氟-甲烷磺酸7-叔丁氧基羰基氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢萘-2-基酯
[0157] 将反-(1，1-二乙基-7-羟基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(195.0g，0.558mol)、三乙胺(160mL，1.1mol)和乙酸乙酯(2000mL)的混合物在室温下搅拌15分钟且冷却至0℃，接着缓慢添加三氟甲烷磺酰氯(150g，0.89mol)，同时保持内部温度低于4℃。在0℃下搅拌所得浆料1小时。依序再缓慢添加三乙胺(16mL)和三氟甲烷磺酰氯(15.0g)，同时维持温度低于5℃。在室温下再搅拌反应混合物1小时。添加稀盐水(1.0L)，且在室温下搅拌反应混合物10分钟。分离各层；用稀NaHCO3(1.0L)洗涤有机层，且随后通过旋转蒸发在28℃下浓缩至约350mL且在室温下搅拌30分钟。添加庚烷(700mL)，且在室温下搅拌所得浆料30分钟，冷却至4℃且搅拌1小时。过滤固体，用庚烷洗涤，且随后在真空下干燥，得到标题化合物(193.0g，纯度＞97％)。浓缩滤液，经30分钟在乙酸异丙酯与庚烷混合物(1∶3，60mL)中形成浆料，过滤且干燥，再得到产物(45.0g，纯度＞97％)。
[0158] c.反-(7-氰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯
[0159] 在室温下将三氟-甲烷磺酸7-叔丁氧基羰基氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-基酯(236.6g，0.49mol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(851mL，10.99mol)和水(23.8mL，1.32mol)中。用氮气冲洗溶液5分钟，且随后与室内真空连接5分钟。重复氮气冲洗和暴露于真空中两次。在搅拌下向反应混合物中添加氰化锌(34.2g，0.29mol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(4.4g，4.8mmol)和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(5.4g，
9.7mmol)。用氮气冲洗反应混合物5分钟，在氮气下在110℃下加热1小时，冷却至室温，且随后经硅藻土过滤。将经过滤的反应混合物缓慢添加至水(3L)中，在搅拌下冷却至0℃，在
0℃下搅拌30分钟，且随后过滤。用水(500mL)洗涤滤饼且在空气中干燥2小时，在搅拌下经1小时于乙醇(1L)中形成浆料，且随后过滤，得到标题化合物(165.0g，纯度＞96％)。
干燥滤液(21.6g)且在搅拌下经1小时溶解于乙醇(110mL)中，且过滤所得浆料并在真空下干燥，再得到产物(10.2g，纯度＞98％)。
9.7mmol)。用氮气冲洗反应混合物5分钟，在氮气下在110℃下加热1小时，冷却至室温，且随后经硅藻土过滤。将经过滤的反应混合物缓慢添加至水(3L)中，在搅拌下冷却至0℃，在
0℃下搅拌30分钟，且随后过滤。用水(500mL)洗涤滤饼且在空气中干燥2小时，在搅拌下经1小时于乙醇(1L)中形成浆料，且随后过滤，得到标题化合物(165.0g，纯度＞96％)。
干燥滤液(21.6g)且在搅拌下经1小时溶解于乙醇(110mL)中，且过滤所得浆料并在真空下干燥，再得到产物(10.2g，纯度＞98％)。
[0160] *在这一实例和以下实例中，前缀反是指(2S)，(2S)非对映异构体和(2R)，(2R)非对映异构体的混合物。
[0161] 制备3：反-(7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯
[0162] 在55℃下加热制备2的产物(160.0g，446.3mmol)和甲醇(3.3L)的浆料15分钟，添加单水合过硼酸钠(280g，2800mmol)和水(330mL)，且在55℃下加热反应混合物过夜。再添加单水合过硼酸钠(90g)，且在55℃下加热反应混合物过夜，随后冷却至室温，且滤出无机固体。将滤液转移至5L烧瓶中，且通过旋转蒸发移除大部分溶剂。向所得浆料中添加水(1.1L)和乙酸乙酯(450mL)，且在室温下搅拌反应混合物20分钟。过滤反应混合物，且依序用水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)洗涤滤饼且干燥，得到标题化合物(123g，纯度约95％)。浓缩滤液至干燥且在真空下干燥，再得到产物(18g，纯度65％)。
[0163] 制备4：反-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺[0164] 在-5℃下经2小时将乙酰氯(278.8mL，3920mmol)逐滴添加至乙醇(382mL，6530mmol)中，同时保持内部温度低于20℃。经15分钟将所得溶液逐份添加至已冷却至
10℃的反-(7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(123.0g，327mmol)和乙醇(500mL)的浆料中，同时保持内部温度低于30℃。在室温下搅拌反应混合物2小时，且通过旋转蒸发浓缩至约200mL。添加乙酸乙酯(200mL)，且在0℃下搅拌所得浆料30分钟，过滤且干燥，得到呈白色固体状的标题化合物的盐酸盐(102g，纯度＞98％)。
10℃的反-(7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基)-氨基甲酸叔丁酯(123.0g，327mmol)和乙醇(500mL)的浆料中，同时保持内部温度低于30℃。在室温下搅拌反应混合物2小时，且通过旋转蒸发浓缩至约200mL。添加乙酸乙酯(200mL)，且在0℃下搅拌所得浆料30分钟，过滤且干燥，得到呈白色固体状的标题化合物的盐酸盐(102g，纯度＞98％)。
[0165] 制备5：碳酸4-硝基-苯酯(R)-1-苯基-乙酯
[0166] 将(R)-1-苯基-乙醇(60.6g，0.496mol)、吡啶(42.5mL，0.526mol)和2-甲基-四氢呋喃(600mL)的混合物冷却至0℃，且经15分钟添加氯甲酸对硝基苯酯(100g，0.496mol)，同时保持内部温度低于5℃。使反应混合物升温至室温且搅拌2小时。向反应混合物中添加1.0M HCl水溶液(300mL)。分离各层。用1N HCl(300mL)和盐水(300mL)洗涤有机层，过滤，通过旋转蒸发浓缩至干燥且在真空下干燥，得到呈透明黄色油状的标题化合物(140g)。
[0167] 制备6：(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺
[0168] a.((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基)-氨基甲酸(R)-1-苯基-乙酯
[0169] 将碳酸4-硝基-苯酯(R)-1-苯基-乙酯(102g，357mmol)、N，N-二甲基甲酰胺(200mL)和三乙胺(32.7mL，235mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物中添加反-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺盐酸盐(100g，320mmol)、N，N-二甲基甲酰胺(320mL)和三乙胺(98.0mL，703mmol)。在85℃下加热反应混合物5小时，且随后在室温下搅拌过夜。通过在70℃下蒸馏移除约90％的DMF，且冷却所得稠油状物至室温，且随后分配于乙酸乙酯(1.5L)与稀盐水(500mL)之间。用1M NaOH(3×500mL)洗涤有机层，且经Na2SO4干燥。通过旋转蒸发移除大部分溶剂，添加3体积乙酸乙酯，且在室温下搅拌所得浆料30分钟，过滤且干燥，得到标题化合物(48g，化学和光学纯度＞99％)。
[0170] 依序用1M NaOH(200mL)和稀盐水(2×200mL)洗涤滤液。通过旋转蒸发移除大部分溶剂，得到稠油状物，向其中添加乙酸乙酯(100mL)。添加一撮标题化合物的晶种，且搅拌约30分钟，随后将反应混合物冷藏在0℃下。搅拌所得稀浆料5分钟且过滤；用乙酸乙酯(2×15mL)洗涤烧瓶和滤饼，再得到标题化合物(4.1g，化学纯度97％且光学纯度＞99％，合并产率38％)。
[0171] b.(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢萘-2-甲酰胺[0172] 在-5℃下经40分钟将乙酰氯(193mL，2710mmol)逐滴添加至乙醇(260mL，4500mmol)中，同时保持内部温度低于30℃。在10℃下经5分钟将所得溶液添加至((2S，
3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基)-氨基甲酸(R)-1-苯基-乙酯(49.0g，115mmol)和乙醇(200mL)的混合物中。在室温下搅拌反应混合物过夜，且通过旋转蒸发浓缩至约100mL。添加乙酸乙酯(100mL)，且在0℃下搅拌所得浆料30分钟且过滤。用乙酸乙酯洗涤滤饼且干燥，得到标题化合物的盐酸盐(30g，纯度＞99％)。滤液的体积几乎减至干燥。添加异丙醇(20mL)，且搅拌所得稠浆料30分钟且过滤。用乙酸乙酯(2×20mL)洗涤滤饼，且在真空下干燥过夜，再得到标题化合物(5.5g，纯度＞97％)。
1
H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.49(t，3H)，0.63(t，3H)，1.62(q，2H)，1.89(m，1H)，2.09(m，1H)，
2.60(dd，1H)，3.22(m，1H)，3.41(s，3H)，3.50(dd，1H)，3.82(q，1H)，7.19(d，1H)，7.31(br，
1H)，7.70(d，1H)，7.71(s，1H)，7.98(br，1H)，8.15(br，3H)。
3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基)-氨基甲酸(R)-1-苯基-乙酯(49.0g，115mmol)和乙醇(200mL)的混合物中。在室温下搅拌反应混合物过夜，且通过旋转蒸发浓缩至约100mL。添加乙酸乙酯(100mL)，且在0℃下搅拌所得浆料30分钟且过滤。用乙酸乙酯洗涤滤饼且干燥，得到标题化合物的盐酸盐(30g，纯度＞99％)。滤液的体积几乎减至干燥。添加异丙醇(20mL)，且搅拌所得稠浆料30分钟且过滤。用乙酸乙酯(2×20mL)洗涤滤饼，且在真空下干燥过夜，再得到标题化合物(5.5g，纯度＞97％)。
1
H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.49(t，3H)，0.63(t，3H)，1.62(q，2H)，1.89(m，1H)，2.09(m，1H)，
2.60(dd，1H)，3.22(m，1H)，3.41(s，3H)，3.50(dd，1H)，3.82(q，1H)，7.19(d，1H)，7.31(br，
1H)，7.70(d，1H)，7.71(s，1H)，7.98(br，1H)，8.15(br，3H)。
[0173] 制备7：(S)-4-环己基-1-羟基-3-甲氧基羰基-丁烷-1-磺酸钠
[0174] a.(S)-2-环己基甲基-4-羟基-丁酸甲酯
[0175] 在室温下搅拌(S)-2-环己基甲基-琥珀酸1-甲酯(60.0g，263mmol)和四氢呋喃(600mL)的混合物，且随后经30分钟冷却至-5℃。经45分钟向反应混合物中逐滴添加1.0M硼烷的四氢呋喃溶液(520mL)，同时保持内部温度低于0℃。向反应混合物中逐滴添加MeOH(100mL)以淬灭反应。通过旋转蒸发浓缩反应混合物至约100mL。添加(三氟甲基)苯(200mL)，且通过旋转蒸发使体积减至25mL。将(三氟甲基)苯(100mL)添加至所得稠油状物中，且使体积减至约25mL，得到粗标题产物(56.3g)。
[0176] b.(S)-4-环己基-1-羟基-3-甲氧基羰基-丁烷-1-磺酸钠
[0177] 在搅拌下冷却(S)-2-环己基甲基-4-羟基-丁酸甲酯(44.8g，209mmol)和DCM(310mL)的混合物至5℃。依序向反应混合物中添加溴化钾(2.5g，21mmol)和碳酸氢钠(2.4g，29mmol)于蒸馏水(130mL)中的溶液和2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO)(0.33g，2.1mmol)，接着以130mL/h的速率添加次氯酸钠(140mL，210mmol)，同时保持内部温度在6-8℃的范围内。搅拌反应混合物15分钟，且添加DCM(200mL)。分离各层，且用饱和盐水(200mL)洗涤有机层，且经Na2SO4干燥。
[0178] 向有机层中添加EtOAc(40mL)，接着添加亚硫酸氢钠(21.8g，209mmol)。通过旋转蒸发浓缩反应溶液以移除一半DCM(约175mL)。向反应溶液中添加水(2mL)，在室温下搅拌反应溶液过夜。过滤所得浆料；在真空下干燥滤饼过夜，得到标题化合物(61.9g)。1
H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.78(m，2H)，0.95-1.20(m，4H)，1.33(m，1H)，1.40-1.95(m，5H)，
2.45-2.65(m，1H)，3.21(m，2H)，3.45(s，3H)，3.6-3.8(m，1H)，5.18(d，1H)。
H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.78(m，2H)，0.95-1.20(m，4H)，1.33(m，1H)，1.40-1.95(m，5H)，
2.45-2.65(m，1H)，3.21(m，2H)，3.45(s，3H)，3.6-3.8(m，1H)，5.18(d，1H)。
[0179] 制备8：(S)-3-苄氧基羰基-4-环己基-1-羟基-丁烷-1-磺酸钠
[0180] a.(S)-2-环己基甲基-4，4-二甲氧基-丁酸甲酯
[0181] 向(S)-4-环己基-1-羟基-3-甲氧基羰基-丁烷-1-磺酸钠(400.0g，1.26mol)和甲醇(2L)的浆料中添加4.0M HCl的1，4-二噁烷溶液(400mL)，且搅拌反应混合物15分钟。添加三甲氧基甲烷(340mL，3.11mol)，且在50℃下加热反应混合物过夜，随后冷却至室温。滤出白色固体且弃去。通过旋转蒸发从滤液中移除大部分溶剂。添加乙酸乙酯(800mL)，从而引起更多沉淀。通过过滤移除白色沉淀。通过旋转蒸发从滤液中移除溶剂，1
且随后在高真空下在室温下过夜，得到呈稠油状的标题化合物(211g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)4.25(t，1H)，3.57(s，3H)，3.18(s，6H)，2.43(m，1H)，1.55-1.81(m，2H)，
1.50-1.72(m，5H)，1.20-1.48(m，2H)，1.05-1.21(m，4H)，0.71-0.92(m，2H)。
且随后在高真空下在室温下过夜，得到呈稠油状的标题化合物(211g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)4.25(t，1H)，3.57(s，3H)，3.18(s，6H)，2.43(m，1H)，1.55-1.81(m，2H)，
1.50-1.72(m，5H)，1.20-1.48(m，2H)，1.05-1.21(m，4H)，0.71-0.92(m，2H)。
[0182] b.(S)-2-环己基甲基-4，4-二甲氧基-丁酸钾
[0183] 一次性向前一步骤的产物(200.0g，0.77mol)于甲醇(700mL)中的溶液中添加氢氧化钾(289.6g，2322mmol)，且在室温下搅拌反应混合物20小时。缓慢添加氯化氢(130mL，1.5mol)直至反应混合物的pH值为约8(颜色从浅绿色变为橙色)，从而引起微细固体沉淀。通过过滤移除固体。从滤液中移除溶剂。向粗产物中添加乙腈(1L)，且在室温下搅拌所得浆料过夜。过滤稠浆料，用乙腈(50mL)洗涤滤饼且干燥，得到第一批呈灰白色固体状的标题化合物(133g)。从滤液中移除溶剂，随后在真空下干燥，得到约100g糊状固体。添加MTBE(500mL)，且在室温下搅拌固体过夜，产生稠浆料，过滤所述浆料且在高真空下干燥，得
1
到第二批标题化合物(82g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)4.28(dd，1H)，3.12(s，3H)，
3.15(s，3H)，1.95(m，1H)，1.75(m，1H)，1.51-1.65(m，6H)，1.22-1.39(m，2H)，1.05-1.20(m，
4H)，0.85-0.93(m，1H)，0.65-0.81(m，2H)。
1
到第二批标题化合物(82g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)4.28(dd，1H)，3.12(s，3H)，
3.15(s，3H)，1.95(m，1H)，1.75(m，1H)，1.51-1.65(m，6H)，1.22-1.39(m，2H)，1.05-1.20(m，
4H)，0.85-0.93(m，1H)，0.65-0.81(m，2H)。
[0184] c.(S)-2-环己基甲基-4，4-二甲氧基-丁酸苄酯
[0185] 一次性向前一步骤的产物(150.0g，531.1mmol)于乙腈(2.0L)中的浆料中添加溴化苄(50.54mL，424.9mmol)，且在室温下搅拌非均质反应混合物过夜。再添加溴化苄(5.05mL，42.49mmol)，且在室温下搅拌反应混合物18小时。通过过滤移除固体。通过旋1
转蒸发干燥滤液，且随后在高真空下干燥过夜，得到标题化合物(162g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.22-7.40(m，5H)，5.0-5.15(q，2H)，4.23(t，1H)，3.15(s，3H)，3.17(s，
3H)，2.52(m，1H)，1.78(m，1H)，1.69(m，1H)，1.45-1.61(m，6H)，1.20-1.43(m，2H)，
1.0-1.15(m，4H)，0.70-0.83(m，2H)。
转蒸发干燥滤液，且随后在高真空下干燥过夜，得到标题化合物(162g)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.22-7.40(m，5H)，5.0-5.15(q，2H)，4.23(t，1H)，3.15(s，3H)，3.17(s，
3H)，2.52(m，1H)，1.78(m，1H)，1.69(m，1H)，1.45-1.61(m，6H)，1.20-1.43(m，2H)，
1.0-1.15(m，4H)，0.70-0.83(m，2H)。
[0186] d.(S)-3-苄氧基羰基-4-环己基-1-羟基-丁烷-1-磺酸钠
[0187] 向前一步骤的产物(160.0g，478.4mmol)和乙腈(1.0L)的混合物中添加1.0M HCl水溶液(1.2L)，且在35-40℃下加热反应混合物2小时。添加乙酸乙酯(1.2L)，分离各相，且用盐水(1L)洗涤有机层。向含水有机层(wet organic layer)中添加亚硫酸氢钠(74.7g，718mmol)，且在室温下搅拌反应混合物过夜。通过旋转蒸发移除大部分溶剂，添加乙腈(1L)，且在室温下搅拌所得浆料过夜。过滤所得稠白色浆料，用乙腈(2×100mL)洗涤滤饼
1
且在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题化合物(200g，纯度＞98％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.23-7.41(m，5H)，5.30(d，1H)，4.98-5.18(q，2H)，3.75-3.88(m，1H)，
3.60-3.79(m，1H)，2.05(m，0.5H)，1.45-1.82(m，2.5H)，1.45-1.60(m，5H)，1.20-1.42(m，
2H)，1.0-1.17(m，4H)，0.69-0.82(m，2H)。
1
且在真空下干燥，得到呈白色固体状的标题化合物(200g，纯度＞98％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.23-7.41(m，5H)，5.30(d，1H)，4.98-5.18(q，2H)，3.75-3.88(m，1H)，
3.60-3.79(m，1H)，2.05(m，0.5H)，1.45-1.82(m，2.5H)，1.45-1.60(m，5H)，1.20-1.42(m，
2H)，1.0-1.17(m，4H)，0.69-0.82(m，2H)。
[0188] 实例1：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸
[0189] a.(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸甲酯
[0190] 向(S)-4-环己基-1-羟基-3-甲氧基羰基-丁烷-1-磺酸钠(25.8g，81.5mmol)和2-甲基-四氢-呋喃(300mL)的浆料中添加1.0M NaOH水溶液(76.1mL)，且在室温下搅拌反应混合物20分钟。向反应混合物中添加(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺盐酸盐(17.0g，54.3mmol)；在室温下搅拌反应混合物40分钟，分四份添加三乙酰氧基硼氢化钠(46.1g，217mmol)。添加前面两份后，在室温下搅拌反应混合物过夜。添加水(200mL)和MeTHF(100mL)；分离各相，且用1M NaOH(2×200mL)、稀盐水(200mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥且移除溶剂，得到呈玻璃状黄色固体的粗标题中间物(22g)。
[0191] 使用Microsorb 100-10BDS 4英寸柱通过逆相色谱纯化粗产物。将粗产物溶解于1∶1的乙腈∶1M HCl水溶液(150mL)溶剂混合物中，且用水(0.1％HCl)/乙腈移动相(10-40％梯度)洗脱。合并纯洗脱份(＞98％)，通过旋转蒸发移除大部分乙腈，用固体Na2CO3调节pH至pH值为约12，且用MeTHF(3×1L)萃取纯化的产物。经Na2SO4干燥合并的有机层，且移除溶剂，得到标题化合物(16.5g)。
[0192] b.(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸
[0193] 向(S)-4-((2S，3S)-7-氨 甲 酰 基-1，1- 二 乙 基-3-甲 氧 基-1，2，3，4- 四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸甲酯(12.0g，25.4mmol)于甲醇中的溶液中添加5.0M NaOH(25mL)，且在30℃下加热反应混合物8小时，接着在25℃下加热过夜。通过旋转蒸发在25℃下移除大部分甲醇溶剂，添加水(100mL)和乙酸异丙酯(100mL)，且搅拌所得混合物15分钟。用乙酸异丙酯(100mL)萃取三个层中的下面两层。冷却所述下层至-5℃，且添加MeTHF(200mL)，且随后分数份添加浓盐酸(约15mL)直至pH值为约2。分离各相，用MeTHF(100mL)洗涤水层，且经Na2SO4干燥合并的有机层。通过旋转蒸发移除大部分有机溶剂，添加乙酸乙酯(200mL)且使体积减至50mL。添加乙酸乙酯(200mL)，且在室温下搅拌/湿磨所得浆料3小时。在氮气下过滤产物，且在真空下干燥48小时，得到呈白色固
1
体状的标题化合物的盐酸盐(11g，纯度98.2％)。H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.54(t，3H)，
0.63(t，3H)，0.82(m，2H)，1.05-1.3(m，6H)，1.45(m，1H)，1.55-2.0(m，10H)，2.40(m，1H)，
2.67(dd，1H)，3.06(m，1H)，3.22(m，1H)，3.30(dd，1H)，3.41(s，3H)，3.45(dd，1H)，4.05(m，
1H)，7.19(d，1H)，7.50(br，1H)，7.69(d，1h)，7.70(s，1H)，7.95(br，2H)，9.26(br，1H)。
1
体状的标题化合物的盐酸盐(11g，纯度98.2％)。H NMR(DMSO-d6)：δ(ppm)0.54(t，3H)，
0.63(t，3H)，0.82(m，2H)，1.05-1.3(m，6H)，1.45(m，1H)，1.55-2.0(m，10H)，2.40(m，1H)，
2.67(dd，1H)，3.06(m，1H)，3.22(m，1H)，3.30(dd，1H)，3.41(s，3H)，3.45(dd，1H)，4.05(m，
1H)，7.19(d，1H)，7.50(br，1H)，7.69(d，1h)，7.70(s，1H)，7.95(br，2H)，9.26(br，1H)。
[0194] 实例2：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸
[0195] 将(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸盐酸盐(2.18g，4.40mmol)溶解于甲醇(30mL)和水(30mL)中，且添加1.0M NaOH(4.65mL)。通过旋转蒸发移除甲醇，从而引起沉淀，且添加1.0M HCl(0.045mL)，再引起沉淀。用DCM∶异丙醇(4∶1，3×40mL)萃取固体，且经硫酸钠干燥。添加水(30mL)，且通过旋转蒸发移除有机物，得到于水中的胶质沉淀。添加乙腈(25mL)，且冻干反应混合物，得到呈非晶形固体状的标题化合物(1.99g)。
[0196] 实例3：结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸
[0197] a.(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯盐酸盐
[0198] 向(S)-3-苄氧基羰基-4-环己基-1-羟基-丁烷-1-磺酸钠(160g，400mmol)(制备8的产物)于MeTHF(2.0L)和水(600mL)中的悬浮液中添加1.0M NaOH水溶液(400mL)，且在室温下搅拌反应混合物90分钟。分离各相，且浓缩溶液至体积为约300mL。
[0199] 将所得浓溶液添加至(6S，7S)-7-氨基-8，8-二乙基-6-甲氧基-5，6，7，8-四氢-萘-2-甲酰胺盐酸盐(100.0g，319.7mmol)于DMF(1L)中的浆料中。在室温下搅拌所得浆料2小时，冷却反应混合物至0℃，接着经15分钟逐份添加三乙酰氧基硼氢化钠(169g，799mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜，冷却至10℃，且随后添加1.0M NaOH水溶液(3L)和乙酸乙酯(5L)。搅拌反应混合物10分钟，分离各相，且用稀盐水(1∶1，2L)洗涤有机层。向有机层中添加1.0M HCl水溶液(520mL，520mmol)，且通过旋转蒸发移除大部分乙酸乙酯。添加水(500mL)和乙醇(1L)，且通过旋转蒸发使体积缓慢减至约1L。在室温下搅拌所得灰白色自由流动的浆料过夜。通过过滤分离产物，用水(2×200mL)洗涤烧瓶和滤饼，随后干燥，得到呈白色固体状的标题化合物(175g)(纯度约99％，以氨基四氢化萘试剂
1
计产率为90％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)9.33(br，1H)，8.09(br，1H)，7.98(s，
1H)，7.70(s，1H)，7.68(d，1H)，7.28-7.36(m，2H)，7.19(d，1H)，5.10(q，2H)，4.04(m，1H)，
3.45(dd，1H)，3.38(s，3H)，3.25(m，2H)，3.05(m，1H)，2.62(m，2H)，1.95-2.15(m，2H)，
1.61-1.82(m，3H)，1.50-1.61(m，4H)，1.42-1.50(m，1H)，1.24-1.32(m，1H)，0.98-1.18(m，
4H)，0.71-0.89(m，2H)，0.63(t，3H)，0.52(t，3H)
1
计产率为90％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)9.33(br，1H)，8.09(br，1H)，7.98(s，
1H)，7.70(s，1H)，7.68(d，1H)，7.28-7.36(m，2H)，7.19(d，1H)，5.10(q，2H)，4.04(m，1H)，
3.45(dd，1H)，3.38(s，3H)，3.25(m，2H)，3.05(m，1H)，2.62(m，2H)，1.95-2.15(m，2H)，
1.61-1.82(m，3H)，1.50-1.61(m，4H)，1.42-1.50(m，1H)，1.24-1.32(m，1H)，0.98-1.18(m，
4H)，0.71-0.89(m，2H)，0.63(t，3H)，0.52(t，3H)
[0200] b.结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸
[0201] 将前一步骤的产物(175.0g，299mmol)分配在乙酸乙酯(2.5L)、水(1L)与1.0M NaOH水溶液(300mL，299mmol)之间。分离各相，用稀盐水(1∶1，250mL)洗涤有机层，且经硫酸钠干燥。通过旋转蒸发移除溶剂，且在高真空下干燥所得产物过夜，得到呈粘性固体状的游离碱中间物(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯(约160g)。
[0202] 将游离碱中间物溶解于乙腈(1.6L)与水(300mL)的混合物中。向一半溶液(1L)中添加10％钯(10g，9mmol)/碳(湿式)。依序用氮气和氢气冲洗反应混合物2分钟，且随后在室温下暴露于10-15psi H2下3小时。经硅藻土过滤反应混合物，且用乙腈(50mL)洗涤烧瓶和滤饼。将微黄色滤液与经硫醇改质的二氧化硅(10g)一起在室温下搅拌2小时，且随后经硅藻土过滤。通过旋转蒸发在25℃下移除大部分溶剂。添加乙腈(500mL)，且通过旋转蒸发移除大部分溶剂。再添加乙腈(500mL)，从而引起粘性固体的快速沉淀。在室温下剧烈搅拌反应混合物过夜，从而产生自由流动的灰白色浆料。通过过滤分离产物；用乙腈(2×50mL)洗涤滤饼且随后在真空下干燥，得到结晶标题化合物(56g，纯度98.8％)。含水1
量为0.49％(w/w)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.89(br，1H)，7.65(s，1H)，7.60(d，
1H)，7.22(br，1H)，7.11(d，1H)，3.55(m，1H)，3.38(s，3H)，3.25(dd，1H)，2.95(m，1H)，
2.59(d，1H)，2.49(m，2H)，1.81(m，2H)，1.49-1.63(m，5H)，1.41-1.50(m，2H)，1.05-1.25(m，
4H)，0.72-0.90(m，2H)，0.45(t，3H)，0.57(t，3H)。
量为0.49％(w/w)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ(ppm)7.89(br，1H)，7.65(s，1H)，7.60(d，
1H)，7.22(br，1H)，7.11(d，1H)，3.55(m，1H)，3.38(s，3H)，3.25(dd，1H)，2.95(m，1H)，
2.59(d，1H)，2.49(m，2H)，1.81(m，2H)，1.49-1.63(m，5H)，1.41-1.50(m，2H)，1.05-1.25(m，
4H)，0.72-0.90(m，2H)，0.45(t，3H)，0.57(t，3H)。
[0203] 注意：在以下实例的文本中，(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸作为化合物1提及。
[0204] 实例4：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶化(I型)
[0205] 将非晶形化合物1(100mg，0.22mmol)溶解于异丙醇(0.83mL)中。4天后，在溶液中观察到晶体。倾析母液，且添加1∶1乙腈∶乙酸乙酯(添加0.2mL，且随后再添加0.3mL)，得到标题化合物的浆料。
[0206] 实例5：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶化(I型)
[0207] 将非晶形化合物1(33mg，0.072mmol)溶解于乙腈(0.04mL)、1-丙醇(0.0605mL)和水(0.0035mL)的预混合溶液中，且在室温下搅拌所述方法混合物过夜。在不足约1小时内，开始形成沉淀。通过过滤收集固体，用3∶2乙腈∶异丙醇(2mL)洗涤且在真空下干燥，得到标题化合物。
[0208] 实例6：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶化(I型)
[0209] 将非晶形化合物1(84.2mg，0.18mmol)溶解于水(0.003mL)与甲醇(0.027mL)的混合物中，且随后添加水(0.013mL)与乙腈(0.090mL)的混合物。在2分钟内观察到晶体。在不搅拌下，在室温下保持方法混合物3天。倾析母液，且通过真空过滤分离固体，且用乙腈洗涤，得到标题化合物(54mg，产率64％)。
[0210] 实例7：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸的结晶化(II型)
[0211] 将非晶形化合物1(70mg，0.15mmol)溶解于乙腈(0.136mL)与异丙醇(0.090mL)的预混合溶液中，且在室温下搅拌所述方法混合物过夜。在不足约1小时内，开始形成沉淀。通过过滤收集固体，用3∶2乙腈∶异丙醇(2mL)洗涤且在真空下干燥，得到标题化合物(64mg)。
[0212] 实例8：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸盐酸盐的结晶化
[0213] 将化合物1的非晶形盐酸盐(56.7mg，0.12mmol)分散于二乙二醇二甲醚(DEGDME)(0.50mL)中，加热至50℃并保持20分钟且缓慢冷却过夜。将方法混合物搁置在周围温度下11天。分离所得晶体，且用DEGDME(约0.1mL)洗涤，得到标题化合物。
[0214] 实例9：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸盐酸盐的结晶化
[0215] 将化合物1的非晶形盐酸盐(72.2mg，0.15mmol)分散于乙酸乙酯(1.0mL)中，音波处理不足1分钟，加热至50℃且缓慢冷却。将方法混合物搁置在周围温度下3天。分离所得晶体，得到标题化合物。
[0216] 实例10：(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸盐酸盐的结晶化
[0217] 将化合物1的非晶形盐酸盐(50mg，0.11mmol)分散于乙酸乙酯(0.5mL)中，且在室温下搅拌4天。分离所得晶体，得到标题化合物(30mg)。
[0218] 实例11-15：本发明的固体形式的性质
[0219] 通过x射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热(DSC)和热解重量分析(TGA)分析实例3和7中制备的结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸(化合物1)的样品和实例9中制备的化合物1的结晶盐酸盐的样品以及如实例3a中制备的结晶(S)-4-((2S，3S)-7-氨甲酰基-1，1-二乙基-3-甲氧基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基氨基)-2-环己基甲基-丁酸苄酯盐酸盐(化合物2的盐酸盐)的样品。
[0220] 实例11：X射线粉末衍射
[0221] 用Rigaku衍射计使用Cu Kα(30.0kV，15.0mA)辐射获得图1、4和6的X射线粉末衍射图。用在2至40°范围内以每分钟2°(图1)或每分钟3°(图4、6和8)且步长为0.03°的连续扫描模式操作的测角仪进行分析。在石英试样固持器上准备呈粉状物质薄层的样品。用硅标准物校正仪器。用在2至40°范围内以每分钟1.22°且步长为0.03°扫描的Thermo XTRA ARL型衍射计获得图8。
[0222] 实例12：热分析
[0223] 使用TA仪器公司(TA Instruments)的Q-100型模块进行差示扫描量热(DSC)。TM
收集资料且使用TA仪器公司(TA Instruments)的Thermal Advantage for Q Series 软件加以分析。精确称量约1-10mg样品并放置于带盖子的铝盘中。使用10℃/分钟的线性加热匀变(linear heating ramp)从5℃至通常265℃评估样品。在使用期间，用干燥氮气冲洗DSC样品池。I晶型和II型的样品、化合物1的结晶盐酸盐的样品以及化合物2的结晶盐酸盐的样品的代表性DSC迹线分别显示于图2、5、7和9中。
收集资料且使用TA仪器公司(TA Instruments)的Thermal Advantage for Q Series 软件加以分析。精确称量约1-10mg样品并放置于带盖子的铝盘中。使用10℃/分钟的线性加热匀变(linear heating ramp)从5℃至通常265℃评估样品。在使用期间，用干燥氮气冲洗DSC样品池。I晶型和II型的样品、化合物1的结晶盐酸盐的样品以及化合物2的结晶盐酸盐的样品的代表性DSC迹线分别显示于图2、5、7和9中。
[0224] 使用TA仪器公司(TA Instruments)的Q-500型模块进行热解重量分析(TGA)。收TM集资料且使用TA仪器公司(TA Instruments)的Thermal Advantage for Q Series 软件加以分析。将重约1-5mg的样品放置于铂托架上的铝盘中，且从周围温度至300℃以10℃/分钟的线性加热速率扫描。在使用期间，用氮气冲洗天平和炉腔。I晶型的样品和化合物1的结晶盐酸盐的样品的代表性TGA迹线也分别显示于图2和7中。
[0225] 实例13：动态吸湿评估
[0226] 在25℃下使用VTI大气微量天平SGA-100系统(VTI公司(VTI Corp.)，海厄利亚(Hialeah)，FL 33016)进行动态吸湿(DMS)评估。使用约5-10mg的样品量，且在分析开始时，设定湿度为周围值。典型DMS分析由三或四个扫描组成：周围至2％相对湿度(RH)、2％RH至90％RH、90％RH至5％RH，扫描速率为5％RH/步，且在一些情况下，2％RH至90％RH的二次吸附。每两分钟测量质量，且当样品质量在5个连续点处稳定在0.02％内时，将RH改变为下一值(±5％RH)。实例3中制备的I晶型样品的代表性DMS迹线显示于图3中。
[0227] 实例14：X射线衍射晶体结构分析
[0228] 分析实例6中制备的I晶型的针状晶体，其尺寸为0.20×0.10×0.06mm。使用游标κ(Nonius Kappa)-CCD衍射计使用Mo Kα辐射获得X射线衍射晶体结构资料。在120°K的温度下收集全范围(Full sphere)的资料直至θ＝27.5°，且使用SHELX-97软件加以分析。得到以下晶格参数：单位晶胞为尺寸为 且晶胞3
体积(V)为 的斜方晶；计算密度为1.151g/cm ；空间群为P212121。由目测检查判断，由所得原子位置预测的x射线粉末衍射峰与实验上确定的峰位置完全一致。
体积(V)为 的斜方晶；计算密度为1.151g/cm ；空间群为P212121。由目测检查判断，由所得原子位置预测的x射线粉末衍射峰与实验上确定的峰位置完全一致。
[0229] 检验1：对人类μ、人类δ和天竺鼠κ阿片受体的放射性配体结合检验
[0230] a.膜制备
[0231] 使经人类μ阿片或天竺鼠κ受体cDNA稳定转染的CHO-K1(中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary))细胞在由补充有10％FBS、100单位/毫升青霉素-100微克/毫升链霉素和800微克/毫升遗传霉素的Ham′s-F12培养基组成的培养基中在5％C02、加湿培育箱中在37℃下生长。在膜放射性配体结合检验中，使用[3H]-二丙诺啡(比活性为约50-55Ci/mmol)测定受体表达含量(Bmax分别为每毫克蛋白质约2.0pmol和每毫克蛋白质约0.414pmol)。
[0232] 使细胞生长至汇合度为80-95％(继代培养代数＜25)。为使细胞系传代，在室温下培育细胞单层5分钟，且在10mL补充有5mM EDTA的PBS中通过机械搅拌加以收集。再悬浮后，将细胞转移至40mL新鲜生长培养基中以在1000rpm下离心5分钟，且按适当分流比再悬浮于新鲜生长培养基中。
[0233] 为进行膜制备，用在PBS中的5mM EDTA通过平缓机械搅拌，接着离心(2500g，5分钟)来收集细胞。将离心块再悬浮于检验缓冲液(50mM 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸；N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-乙烷磺酸)(HEPES))(pH 7.4)中，且在冰上用polytron破碎机均质化。离心所得均质物(1200g，5分钟)，弃去离心块，且离心上清液(40,000g，20分钟)。通过再悬浮于检验缓冲液中洗涤离心块一次，接着再离心(40,000g，20分钟)。
将最终离心块再悬浮于检验缓冲液(相当于1个T-225烧瓶/1mL检验缓冲液)中。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度，且膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。
将最终离心块再悬浮于检验缓冲液(相当于1个T-225烧瓶/1mL检验缓冲液)中。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度，且膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。
[0234] 从铂金埃尔默公司(Perkin Elmer)购得人类δ阿片受体(hDOP)膜。由[3H]-纳3
曲吲哚([H]-Natrindole)放射性配体结合检验中的饱和分析所测定，这些膜的报导Kd和Bmax分别为0.14nM(pKd＝9.85)和2.2pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度。膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。
曲吲哚([H]-Natrindole)放射性配体结合检验中的饱和分析所测定，这些膜的报导Kd和Bmax分别为0.14nM(pKd＝9.85)和2.2pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度。膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。
[0235] b.放射性配体结合检验
[0236] 在爱思进(Axygen)96孔1.1mL深孔聚丙烯检验板中以200μL含有适量膜蛋白(对μ、δ和κ来说分别为约3μg、约2μg和约20μg)的总检验体积在补充有0.025％3
牛血清白蛋白(BSA)的检验缓冲液中进行放射性配体结合检验。使用[H]-二丙诺啡在
0.001nM-5nM范围内的8-12种不同浓度下进行用于测定放射性配体的Kd值的饱和结合研
3
究。分别对于μ、δ和κ利用0.5nM、1.2nM和0.7nM的[H]-二丙诺啡和10pM-100μM范围内的11种浓度的化合物进行用于测定化合物的pKi值的置换检验。
牛血清白蛋白(BSA)的检验缓冲液中进行放射性配体结合检验。使用[H]-二丙诺啡在
0.001nM-5nM范围内的8-12种不同浓度下进行用于测定放射性配体的Kd值的饱和结合研
3
究。分别对于μ、δ和κ利用0.5nM、1.2nM和0.7nM的[H]-二丙诺啡和10pM-100μM范围内的11种浓度的化合物进行用于测定化合物的pKi值的置换检验。
[0237] 通过用GraphPad Prism套装软件(GraphPad软件公司(GraphPad Software，Inc.)，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))使用用于单位点竞争(one-site competition)的3参数模型进行非线性回归分析来分析结合资料。如在10μM纳洛酮(naloxone)存在下所测定，将曲线最低点固定为非特异性结合的值。在Prism中从最佳拟合IC50值和放射性配体的Kd值使用郑-普索夫(Cheng-Prusoff)等式(Ki＝IC50/(1+([L]/3
Kd))，其中[L]＝[H]-二丙诺啡的浓度)计算测试化合物的Ki值。结果以Ki值的以10为底的负对数表示，即pKi。
Kd))，其中[L]＝[H]-二丙诺啡的浓度)计算测试化合物的Ki值。结果以Ki值的以10为底的负对数表示，即pKi。
[0238] 在这些检验中pKi值较高的测试化合物对μ、δ或κ阿片受体具有较高结合亲和力。化合物1在人类μ阿片受体处展现为9.4的pKi值。
[0239] 检验2：在由表达人类μ-阿片受体的CHO-K1细胞制备的膜中由促效剂介导的μ-阿片受体的活化
[0240] 在这一检验中，通过测量在由表达人类μ阿片受体的CHO-K1细胞制备的膜中受体活化后所存在的结合GTP-Eu的量，确定测试化合物的效能和固有活性值。
[0241] a.μ阿片受体膜制备：
[0242] 如上所述制备或从铂金埃尔默公司(Perkin Elmer)购得人类μ阿片受体(hMOP)3
膜。由[H]-二丙诺啡放射性配体结合检验中的饱和分析所测定，所购得的膜的报导pKd和Bmax分别为10.06和2.4pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度。膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。用重蒸馏水将冻干GTP-Eu和GDP分别稀释至10μM和2mM，随后混合且在室温下静置30分钟，之后转移至个别等分样品中以储存在-20℃下。
膜。由[H]-二丙诺啡放射性配体结合检验中的饱和分析所测定，所购得的膜的报导pKd和Bmax分别为10.06和2.4pmol/mg蛋白质。使用Bio-Rad Bradford蛋白质检验试剂盒测定蛋白质浓度。膜以冷冻等分试样储存在-80℃下直至需要时。用重蒸馏水将冻干GTP-Eu和GDP分别稀释至10μM和2mM，随后混合且在室温下静置30分钟，之后转移至个别等分样品中以储存在-20℃下。
[0243] b.人类μGTP-Eu核苷酸交换检验
[0244] 使用DELPHIA GTP结合试剂盒(铂金埃尔默公司(Perkin/Elmer))在AcroWell96孔过滤板中根据制造商的说明书进行GTP-Eu核苷酸交换检验。如上所述制备膜，且在开始检验之前，以检验缓冲液(50mM HEPES，pH 7.4，25℃)稀释等分试样至浓度为200μg/mL，随后使用Polytron均质机均质化10秒。所接收到的测试化合物为10mM于DMSO中的储备溶液，将其于含有0.1％BSA的检验缓冲液中稀释至400μM，且随后进行连续(1∶5)稀释以产生40pM-80μM范围内的10种浓度的化合物，以检验缓冲液将GDP和GTP-Eu分别稀释至4μM和40nM。进行检验的总体积为100μL，其中含有5μg膜蛋白、10pM-20μM范围内的测试化合物、于10mM MgCl2、50mM NaCl和0.0125％BSA中稀释的1μM GDP和10nM GTP-Eu(最终检验浓度)。每个板上包括DAMGO(Tyr-D-Ala-Gly-(甲基)Phe-Gly-醇)浓度-反应曲线(在12.8pM-1μM范围内)。
[0245] 在即将检验之前准备检验板，之后添加25μL检验缓冲液、25μL测试化合物和25μLGDP和GTP-Eu。通过添加25μL膜蛋白开始检验，且培育30分钟。随后用连接于调节为10-12英寸汞柱的低真空(house vacuum)的Waters真空歧管过滤检验板，且用室温GTP洗涤溶液(2×300mL)洗涤。吸干板的底部以移除过量液体。随后立即通过在Packard Fusion Plate ReaderVehicle上测量时间分辨荧光(Time Resolved Fluorescence，TRF)来读取板，从而确定结合GTP-Eu的量：DMSO不超过1％的最终检验浓度。
[0246] 结合GTP-Eu的量与μ阿片受体经测试化合物活化的程度成比例。以百分比表示的固有活性(IA)经测定为关于经测试化合物活化所观察到的结合GTP-Eu的量与关于经假定为完全促效剂(full agonist)的DAMGO(IA＝100)活化所观察到的量的比率。在这一检验中，化合物1显示固有活性为-8。因此，本发明活性剂显示为拮抗剂。
[0247] 检验3：活体内功效的大鼠模型
[0248] 在这一检验中，在评估周围活性的胃肠传输(gastrointestinal transit)模型中评估测试化合物的功效。这项研究已获实验动物管理与使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)批准由施万制药公司(Theravance，Inc.)进行，且符合美国国家科学院(National Academy of Sciences)出版的实验动物管理与使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)( 1996)。
[0249] a.大鼠胃排空检验
[0250] 在大鼠胃排空检验中评估测试化合物以确定其逆转洛哌丁胺诱导的延迟性胃排空的能力。使大鼠禁食过夜，之后经由静脉内、皮下、肌肉内或经口投药途径投予剂量在0.001至约30毫克/千克(mg/kg)范围内的测试化合物或媒剂。投予测试化合物后，皮下投予剂量为1mg/kg的洛哌丁胺或媒剂。投予洛哌丁胺或媒剂后5分钟，经由经口灌胃投予无营养且不可吸收的木炭粗粉，且在60分钟的实验持续时间内，允许动物自由取用水。随后经由二氧化碳窒息使动物安乐死，接着进行胸廓切开术，且小心地切除胃。在下食管括约肌和幽门括约肌处结扎胃以在组织移除期间防止其它排空。随后在移除结扎线后，测定胃重量。
[0251] b.资料分析和结果
[0252] 使用GraphPad Prism套装软件(GraphPad软件公司(GraphPad Software，Inc.)，加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego，CA))分析资料。利用非线性回归分析使用S形剂量反应(可变斜率)模型构建百分比反向曲线，且计算最佳拟合ID50值。将曲线最低点和最高点分别固定为洛哌丁胺对照值(指示0％逆转)和媒剂对照值(指示100％逆转)。结果以ID50表示，即逆转洛哌丁胺效应的50％所需的剂量，以每千克的毫克数计。经口投予的化合物1展现在胃排空模型中的ID50值为0.09mg/kg。
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