本发明涉及有效的源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与 它们的衍生物和植物提取物以及包含它们的组合物，其有益于衣原体 感染的治疗和预防，本发明也涉及源于植物的酚类化合物、相应的合 成化合物与它们的衍生物和植物提取物以及包含它们的组合物在衣原 体感染的治疗和预防中的用途。源于植物的酚类化合物、相应的合成 化合物与它们的衍生物和植物提取物可以用于药物制剂、食物添加组 合物和有益健康的功能性食品的制备。

衣原体是小的革兰氏阴性细菌。由于它们独特的细胞内繁殖周期， 将它们归类为一个单独的衣原体目(Chlamydiales)，包括衣原体属 (Chlamydia)。衣原体属最初已经分成两个种，砂眼衣原体(C. trachomatis)和鹦鹉热衣原体(C.psittaci)。这一分类基于生化特性：

                       砂眼衣原体     鹦鹉热衣原体 糖原在衣原体包涵体中的积累

                            +                 -

(碘染色+) 对磺胺类(sulpha)药物的敏感性    +                 - 刚开始时，“砂眼衣原体”被认为是同质的种群，而“鹦鹉热衣原体” 是非常异质的种群。当发现某种不通过鸟类接触而能引起呼吸系统感 染的衣原体菌株(后来知道是肺炎衣原体(C.pneumoniae))时，其 无可置疑地被认为属于“鹦鹉热衣原体”种群，因为其满足上述基于 生物化学的条件。砂眼衣原体和肺炎衣原体在它们的表面结构方面是 不同的。砂眼衣原体表面结构的主要成分是主要外膜蛋白(MOMP)， 其在4个不同的位点变化，由此提供了目前将砂眼衣原体分类成差不 多20种不同免疫型的依据。在肺炎衣原体中，MOMP是非常保守的， 发现其只有一种免疫型。另外，组织中的靶细胞是不同的：在砂眼衣 原体的情况中是生殖器和结膜的上皮细胞，在肺炎衣原体的情况中是 呼吸道的上皮细胞。前者，除罕见的性病淋巴颗粒瘤菌株(LGV)外， 不能在吞噬细胞和巨噬细胞中繁殖，而吞噬细胞和巨噬细胞特别地构 成了后者的靶细胞。当渗入细胞时，肺炎衣原体利用肝素受体，而该 受体却不被除LGV外的生殖器衣原体所利用。此外，传播路线和结果 导致的临床症状是不同的：肺炎衣原体通过呼吸道传播，并可以在单 核细胞内散布入循环系统中，然而砂眼衣原体主要通过性接触传播。 另外，治疗方法不同：对于砂眼衣原体通常用单次剂量治疗，然而对 于肺炎衣原体，甚至推荐进行3个星期的抗生素疗程。

由这些衣原体物种引起的或与其相关联的疾病的名单列于下面： 砂眼衣原体： -结膜炎 -子宫颈炎 -尿道炎 -盆腔炎症性疾病(PID) -新生儿感染如婴儿肺炎 -腹膜炎 -肝周炎 -反应性关节炎 肺炎衣原体： -上呼吸道感染 -支气管炎 -肺炎 -慢性阻塞性肺病(COPD) -哮喘 -血管炎 -动脉粥样硬化及其并发症 -大脑炎 -某些类型的多发性硬化 -部分的阿尔茨海默氏病的晚期发病

早在1989年就已如此清晰地表明不通过鸟类接触而能引起呼吸 系统感染的衣原体菌株在遗传上不同于砂眼衣原体和所描述的鹦鹉热 衣原体物种，以至将该菌株分类为它自己的一个物种——肺炎衣原体。 它与砂眼衣原体的核酸同源性低于10％。砂眼衣原体含有基因组外质 粒，而在人类肺炎衣原体菌株中却没有发现。两者物种的基因组已被 测序，肺炎衣原体的基因数目比砂眼衣原体高得多(大约200)。在新 近的衣原体的重新分类中，其已经转移到一个完全不同的属—— Chlamydophila中。这样，就有良好的理由相信从砂眼衣原体所获知的 一切不能应用于肺炎衣原体。

最常见的人类中的衣原体物种是肺炎衣原体和砂眼衣原体，它们 引起常见的重大疾病。鹦鹉热衣原体在动物界中分布相当广泛，但是 其只是偶而也能引起人体中的感染。另外知道猫心衣原体(C. pecorum)引起反刍动物中的感染。衣原体目中新的属和种的分类正在 进行中。

肺炎衣原体是最常见的人类的衣原体，差不多每个人在一生中要 受到其2至3次感染。肺炎衣原体能够容易地侵袭肺组织和在巨噬细 胞与血管内皮中繁殖。由肺炎衣原体所引起的呼吸系统感染的临床症 状从通常的儿童轻度上呼吸道感染到成人的严重性肺炎大范围地变 化。所有肺炎的5-10％是由肺炎衣原体引起的。肺炎衣原体作为气道 传染从人传播到人。明显地，某些个体是有效的传播介质，因为只有 在学龄期传染变得更普遍。在北欧国家，由肺炎衣原体引起的感染作 为带有大约6年间隔期的2至3年长的流行病发生。

衣原体感染具有隐匿和潜伏的特性，它们的慢性晚期并发症显然 是所有之中最重要的。流行病学研究指出慢性肺炎衣原体感染和动脉 粥样硬化之间具有重要的关联；许多研究也揭示出衣原体感染和急性 心肌梗塞(AMI)发病率之间的联系。此外，慢性肺炎衣原体感染显 然在哮喘及慢性阻塞性肺病的发作中起了作用。

动脉硬化(arteriosclerosis)是一种慢性炎症状态，能够在超过一半 的动脉粥样斑中的泡沫细胞和平滑肌细胞中证明含有肺炎衣原体颗 粒。在AMI的病人中通常会发生对于衣原体脂多糖(LPS)的免疫反 应，这表明感染的加剧。也有可能在受损的心脏瓣膜中检测出衣原体， 它们在腹部主动脉瘤中尤其丰富。另外，发现肺炎衣原体在脑梗塞和 短暂的大脑局部缺血发作中起着作用。到目前为止，最终并不清楚于 受损部位找到的衣原体在损害本身的发展中所起的作用，但是在这些 疾病的缓慢进展中的一个因素无论如何似乎是慢性衣原体感染。可是 在动物模型中，表明肺炎衣原体可发动和加速动脉粥样硬化的发展。 流行病学和临床研究表明在慢性肺炎衣原体感染和动脉粥样硬化与 AMI之间有着清楚的关系。在最近的研究中，断定肺炎衣原体感染是 心脏病事件的危险因素。肺炎衣原体感染通常与吸烟相联系，吸烟明 显地易于得慢性衣原体感染。

发现抗生素治疗可减少心脏发病的危险，使用抗生素治疗还有可 能影响常见的炎症标记物CRP和血清纤维蛋白原的水平。在大多数工 业化国家中，当抗衣原体非常有效的抗生素的使用在治疗其他的感染 之中变得普遍时，心脏疾病的发病率开始下降。

砂眼衣原体是妇女生殖器感染最重要的原因。另外，一部分的育 龄妇女细菌培养阴性尿道感染是由砂眼衣原体引起的。砂眼衣原体是 慢性子宫内膜异位的常见原因，PID是妇女中砂眼衣原体感染最常见 的并发症。砂眼衣原体感染可以几乎是无症状的，甚至宫外孕和不育 被认为是由隐匿的沉默性感染引起的梗阻性疤痕形成的并发症。大约 一半出生时为衣原体携带者的儿童会在出生时受到感染，大约一半的 受感染的新生儿会发展成为带有砂眼衣原体肺炎作为并发症的包涵体 性结膜炎。砂眼衣原体也可引起男子的生殖器感染。

衣原体对于四环素和红霉素是敏感的；利福平和某些新的 fluorokinolones也是有效的。与例如肺炎衣原体相反，砂眼衣原体对 于磺胺类药物也是敏感的。尽管对于治疗有反应，衣原体感染还是常 常复发，且有变成慢性的危险。由于衣原体只在细胞中繁殖，因此高 效集中进入细胞的新的大环内酯抗生素和氮杂内酯类现在成为四环素 和红霉素的替代物从而作为首选药物。在复杂的衣原体感染中，治疗 可能不得不持续较长时间，例如在由衣原体引起的莱特病中推荐进行 三个星期的治疗。

迄今，还没有预防衣原体感染的疫苗。免疫反应的特性还未得到 充分的了解，而且一种向超敏反应的趋向与之有关系。

在专利EP 0 377 722中，描述了评价心脏梗塞危险性的方法、诊 断心脏与血管疾病的方法和抗衣原体有效的药物的应用。在该出版物 中，将四环素、红霉素、利福平和fluorokinolones描述为对于治疗或 预防衣原体引起的慢性心脏疾病合适的药物。

WO 98/50074描述了一种抗衣原体试剂的组合，其中的活性成分 各自在衣原体生活周期的某个阶段起作用，该组合特别用于肺炎衣原 体引起的感染的治疗。

在专利US 5 830 874中，描述了诊断肺炎衣原体引起的动脉衣原 体肉芽肿的方法和用于治疗动脉衣原体肉芽肿病的治疗用组合物。作 为合适的具有治疗效用的化合物，提到了抗衣原体有效的四环素、红 霉素、克拉霉素、氮红霉素(azitromycin)和kinolones等等。

专利JP 10 139 686描述了2-(3，4-dimetoxycinnamoyl)-氨基苯甲酸 作为以100-1000mg的日剂量而具有治疗活性的化合物在治疗由肺炎 衣原体引起的动脉粥样硬化中的应用。

根据上述资料，就有对于能够用于治疗和预防衣原体感染的新的 化合物和组合物的明显需要。

从莽草酸经过生物合成途径形成的shikimates或化合物、经过乙 酸-丙二酸生物合成途径形成的化合物和经过两个途径联合形成的化 合物属于源于植物的酚类化合物。简单的aromates、酚、香豆素、木 聚素、木素与类黄酮和它们的衍生物属于所述化合物。简单的aromates 主要包括丙苯衍生物和甲苯衍生物。在自然界中，结构上为酚类化合 物的类黄酮形成了分布广泛的植物色素类。类黄酮出现于植物界的各 处、苔藓植物、景天(stonecrop)科和别的低等植物中。特别从高等植 物和维管植物中发现了它们，它们出现于所有的水果和蔬菜中，还出 现在茶叶和酒尤其是红酒中。类黄酮在自然界中主要以糖苷的形式存 在，但是它们也能够以所谓的苷元的形式成为游离的酚和硫酸盐，或 者与多糖和蛋白质结合。在大多数情况下，类黄酮是具有它们的化学 结构的多酚类化合物。从植物中已经鉴定出超过8000种类黄酮，它们 具有无数的功能。由于它们的苦味，其可以保护植物抗有害昆虫；由 于它们的抗生素特性，其可以保护植物抗病毒和细菌。根据目前的看 法，类黄酮不是营养上的重要化合物，但它们似乎具有对健康有益的 效用。这种效用显然地不依赖于植物中所含的维生素和矿物质。几乎 没有人能够避免摄取类黄酮，但是它们起效用的可能性总之取决于吸 收特性和生物利用率，另外还取决于同时获得的类黄酮之间的相互作 用。

天然酚类化合物的抗氧化剂效用已经知道了相当长一段时间，抗 氧化剂效用和对自由基的捕获已在几个研究项目中进行了研究。根据 目前的研究资料，认为类黄酮防止LDL胆固醇氧化的能力是它们最重 要的特性之一。血管内皮下膜中LDL胆固醇的氧化是动脉粥样化形成 的最初因素。许多研究显示出从营养物中类黄酮摄取量的不足将成为 由心脏和血管疾病引起的发病的一个重要因素。在关于类黄酮的人类 研究中，只观测到少许最重要的类黄酮，其中的栎精显示出防止LDL 胆固醇氧化的能力，因此可降低冠状动脉疾病的危险性，因为氧化的 LDL胆固醇明显地与动脉粥样硬化阶段有关。

例如根据一项荷兰的研究，从营养物中类黄酮的日摄取量在 0-30mg间变化。在芬兰人中进行的研究之中，注意到类黄酮显示出不 大的抗心脏和血管疾病的发病的保护效能，但是另一方面类黄酮摄取 量的差异相当小，总的数量大约为每天2-6mg。在一项于荷兰进行的 研究中，注意到从营养中可得的黄酮醇与黄烷醇和心脏与血管疾病引 起的死亡案例呈反比关系。还注意到黄酮醇与黄酮的摄取量和心脏梗 塞的危险性呈反比关系。更进一步知道类黄酮对于炎症和免疫反应以 及许多其他细胞功能具有效用。某些类黄酮和许多别的酚天然化合物 能够防止或提高细胞对钙的摄取，这一点在稍后出现的表1中也得到 了证明。

钙离子通道阻断药物在心脏与血管疾病如心脏缺氧引起的胸痛的 治疗，和心肌梗死、动脉粥样硬化与高血压的治疗中起着重要的作用。 这些药物通过防止钙离子向细胞的流入而作用于钙离子通道，从而扩 大了冠状动脉和降低了血管的外周阻力，这样心脏的负担就减少了。 为了找到从自然界中分离出的化合物的钙离子通道阻断效应，钙离子 通道阻断剂的大规模使用例如导致了筛选程序的发展。作为研究中的 筛选介质，如来源于大鼠(GH4C1)脑下垂体后叶的肿瘤的连续细胞 系得到了应用，还使用了膜片钳技术，在该技术中可以每次检查一个 细胞中单独的钙离子通道。作为研究的结果，已经发现了具有钙离子 通道阻断或激活效用的天然存在的化合物和提取物。这些化合物是在 源于植物的简单酚、香豆素、类黄酮和富含所述化合物的提取物中发 现的。这些化合物中的一些具有可与维拉帕米相比的阻断效用，而一 些化合物具有提高钙离子向细胞的流入的趋向。

本发明涉及有效的源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与 它们的衍生物和植物提取物以及包含它们的组合物，其有益于衣原体 感染的治疗和预防，本发明也涉及源于植物的酚类化合物、相应的合 成化合物与它们的衍生物和植物提取物以及包含它们的组合物在衣原 体感染的治疗和预防中的用途。

根据本发明的源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与它们 的衍生物和植物提取物的特征，和根据本发明的包含它们的组合物的 特征，以及它们在衣原体感染的治疗和预防中的用途出现于专利权利 要求中；它们在药剂或有益于健康的食品的生产中的用途也出现于其 中，这些药剂和食品有益于衣原体感染的治疗和预防。

令人惊讶的是发现有些源于植物的酚类化合物、相应的合成化合 物与它们的衍生物和含有该源于植物的化合物的植物提取物、组分与 部分组分具有类抗生素的强的抗衣原体效用。根据本发明，源于植物 的酚类化合物是从莽草酸经过生物合成途径形成的酚类化合物、经过 乙酸-丙二酸途径形成的酚类化合物和作为两个途径联合的结果而形 成的酚类化合物。这些化合物(如简单的aromates、酚、香豆素、木 聚素、木素和类黄酮)是从植物界产品，例如水果和蔬菜，尤其是柑 橘类水果、蔬菜、浆果、洋葱、茶叶、红酒等等之中获得的。

源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与它们的衍生物和含 有它们的提取物、组分与部分组分可以就这样使用，或者将它们混和 使用，可选地与大蒜中所含的硫化合物如alliicine或alliicine的衍生 物联合使用。

优选的源于植物的天然酚类化合物为类黄酮，以及甲苯与丙苯衍 生物、酚酸、三萜、香豆素与儿茶素(cathecin)和含有它们的提取物与 部分组分，以及含有简单酚、类黄酮、它们的衍生物、多酚、二萜酚 与二萜醌的组分，以及除去了鞣酸与二萜组分的组分。优选的化合物 还为相应的合成化合物及其衍生物和药物上可用的盐、酯与上面提到 的化合物的衍生物。

优选的化合物及其提取物为具有大于等于30％的抗衣原体效用 (抑制包涵体的形成)的物质，特别优选的化合物为具有大于等于90％ 的抗衣原体效用的物质，这些在实施例中有详细说明。下面列有几组 优选的化合物和提取物： -黄酮类，例如芹黄素、藤黄菌素、黄酮 -黄酮醇类，例如栎精、鼠李黄素、桑色素 -黄烷酮类(Flavonones)，例如柚皮苷 -异黄酮类，例如染料木黄酮 -甲苯衍生的化合物，例如甲基棓酸、丙基棓酸、辛基棓酸、十二烷  基棓酸、异丙基棓酸 -丙苯衍生的化合物，例如：

-像繖形酮、莨菪亭、甲氧基补骨脂素、花椒毒素和香豆素的

 香豆素类

-像(-)-表棓儿茶素(epigallocatechin)、(-)-表儿茶素、(+)-儿茶 素和(-)-表儿茶素棓酸的黄烷-3-醇类 -合成化合物，例如类黄酮和像香豆素106、2′-甲氧基-α-萘并   (naphto)-黄酮、6，2′-二甲氧基黄酮，6-甲基香豆素、α-萘并黄酮、   鱼藤酮(rotanone)、7-二乙基-氨基-3-噻吩甲酰基香豆素的香豆素   类 -天然植物提取物，例如欧薄荷(Mentha longifolia)、龙脑薄荷

(Mentha arvensis)、大花鼬瓣花(Galeopsis speciosa)、撒尔维亚

(Salvia officinalis)、麝香草(Thymus vulgaris)、小酸模(Rumex

acetocella)、玫瑰(Rosa rugosa)、兔儿尾苗(Veronica longifolia)、

多刺紫草(Symphytum asperum)、北艾(Artemisia vularis)、铃

兰(Convallaria majalis)、夏栎(Quercus robur)、野胡萝卜(Daucus

carota)、草莓(Fragaria iinumae)、甘蓝(Brassica oleracea)、

欧洲油菜(Brassica napus)、紫苜蓿(Medicago sativa)、甜橙(Citrus

sinensis)、Phloem flour、黑果越桔(Vaccihum myrtillus)的提取

物

源于植物的酚类化合物和含有它们的提取物与部分组分可以方便 地通过使用任何用于提取和分离物质的传统技术从天然植物或它们的 局部获得。茎(braces)、根或叶经过合适的水蒸馏和浸渍或只经过水蒸 馏以获得所需的提取物，其可以进一步用任何本领域中熟练的技术人 员所熟知的传统纯化技术来进行纯化。相应的合成化合物或它们的衍 生物通常为商业上可获得的物质，或者它们可以通过用任何所知的合 成方法进行制备。

在下面的表1中，提供了某些优选的根据本发明的源于植物的酚 类化合物、化合物对于钙离子向细胞内流入的影响、抗氧化剂效用和 化学结构。

在下面的图解A、B、C、D和E中给出了出现于表1中的化合物 的化学结构。图解A给出的是黄酮类、黄酮醇类，图解B给出的是黄 烷酮类，图解C给出的是异黄酮类，图解D给出的是甲苯衍生物，图 解E给出的是丙苯衍生物。取代基R1-7参见表1中给出的各自的官能 基团。 表1 化合物(20μg/ml)            R1     R2     R3     R4     R5    R6    R7   对Ca2+摄取     S.E.M    Mw    IC50[moles L-1]

                                                                              的影响[％]                        抗DPPH 黄酮(结构A) 芹黄素a                    OH      H       OH      H        H      OH      H       -29.3         4.0     270.2     ＞3.70×10-3 藤黄菌素a                  OH      H       OH      OH       H      OH      H       -51.4         7.7     286.2       1.20×10-5 金合欢素a                  OCH3   H       OH      H        H      OH      H       -1.39         1.9     284.3     ＞3.52×10-3 黄酮a                      H       H       H       H        H      H       H       -63.5         3.0     222.2     ＞4.50×10-3 牡荆碱a                    OH      H       OH      H        Glu    OH      H       -2.12         5.1     432.4       n.d. 牡荆碱-2″-O-鼠李糖苷a     OH      H       OH      H        GluRha OH      H       -14.6         0.3     587.5       n.d. 藤黄菌素-7-葡萄糖苷a       OH      H       OGlu    OH       H      OH      H       -16.3         1.3     448.4       1.07×10-5 藤黄菌素-3′，7-葡萄糖苷a  OH      H       OGlu    Oglu     H      OH      H       -14.6         3.3     610.5       nd 黄酮醇(结构A) 栎精a                      OH      OH      OH      OH       H      OH      H       +54.1         6.9     302.2       1.07×10-5 鼠李黄素a                  OH      OH      OCH3   OH       H      OH      H       +6.63         0.8     316.3       1.21×10-5 异鼠李黄素a                OH      OH      OH      OCH3    H      OH      H       +52.4         2.3     316.3       1.81×10-5 桑色素a OH                 OH      OH      H       H        OH     OH              +48.0         5.9     302.2       2.39×10-5 栎苷a                      OH      ORha    OH      OH       H      OH      H       +20.1         0.6     448.4       1.29×10-5 芸香苷a                    OH      ORut    OH      OH       H      OH      H       -3.88         6.0     610.5       1.02×10-5 黄烷酮(结构B) 柚皮素a                    OH      OH      H       H        OH     -       -       -56.3         5.6     272.3     ＞3.67×10-3 柚皮苷a                    OH      ORhaGlu H       H        OH     -       -       +6.5          7.5     580.5       7.30×10-3 异黄酮(结构C) 大豆黄素a                  H       OH      OH      H        -      -       -       -26.2         1.2     254.2     ＞3.93×10-3 染料木黄酮a                H       OH      OH      OH       -      -       -       -54.6         1.7     270.2     ＞3.70×10-3 大豆苷a H                  OGlu    OH      H       -        -      -       -       +7.6          5.9     416.4       n.d. 染料木苷a                  H       OGlu    OH      OH       -      -       -       -3.39         5.9     432.4       n.d. 表1(续) 化合物(20μg/ml)         R1            R2     R3    R4   R5  R6  R7 对Ca2+摄取  S.E.M   Mw     IC50[moles L-1] 甲苯                                                                          的影响(％)                   抗DPPH (结构D) 苯甲酸d                 OH              H       H     H      -    -    -     -9.82       1.9    122.1  ＞8.19×10-3 五倍子酸d               OH              OH      OH    OH     -    -    -     -5.33       1.3    170.1    2.15×10-5 丁香酸a                 OH              OCH3   OH    OCH3 -    -    -     -10.9       4.0    198.2    3.26×10-5 甲基棓酸b               OCH3           OH      OH    OH     -    -    -     -21.2       6.4    184.1    5.09×10-6 丙基棓酸c               O(CH2)2CH3  OH      OH    OH     -    -    -     -37.9       4.1    212.2    1.33×10-5 辛基棓酸c               O(CH2)7CH3  OH      OH    OH     -    -    -     -92.2       7.8    282.3    1.70×10-5 十二烷基棓酸c           O(CH2)11CH3 OH      OH    OH     -    -    -     -40.4       6.8    338.4    1.54×10-5 丙苯 (结构E) 咖啡酸a                 OH              -      -     -      -    -    -      +9.71       2.4    180.2    2.14×10-5 阿魏酸b                 OCH3           -      -     -      -    -    -      +9.23       2.1    194.2    4.43×10-5 化合物提供者：           aRoth，Germany；bSigma，MO，USA；cFluka，Switzerland；dE.Merck，Germany Mw：                     化合物的分子量(g/moles) 糖部分的缩写：           Glu＝葡萄糖，OGlu＝葡萄糖苷，ORha＝鼠李糖苷，ORut＝芸香糖苷，

                     OGluRha＝葡萄糖鼠李糖苷，ORhaGlu＝鼠李糖葡萄糖苷 n.d.：                   不确定的

在实施例1-4中研究了源于植物的酚类化合物栎精、桑色素、鼠 李黄素和辛基棓酸对于肺炎衣原体和砂眼衣原体的抗衣原体效用。所 有的这些化合物于0.5-50μg的浓度时抑制了肺炎衣原体的生长，当使 用预处理的宿主细胞时栎精、桑色素和鼠李黄素尤其显示出对砂眼衣 原体的效用。因而用于治疗和预防肺炎衣原体感染的优选的化合物为 例如从天然物质中分离得到的酚类化合物栎精、桑色素、鼠李黄素和 辛基棓酸，用于治疗和预防砂眼衣原体感染的优选的化合物依次为栎 精、桑色素和鼠李黄素以及含有它们的提取物与部分组分。

在实施例5中，同样也研究了其他源于植物的酚类化合物、某些 合成的类黄酮与香豆素以及源于植物的酚类化合物与大蒜的混和物在 使用50μg的浓度时的抗衣原体效用，其显示出不平常的抑制效能。相 应地，也研究了大蒜中含有的alliicine对肺炎衣原体的抗衣原体效用， 并得到了相似的结果。

在实施例6中，研究了天然植物提取物和食用植物提取物的抗衣 原体效用，其显示出极好的抑制效能。

优选的化合物及提取物与组分为具有大于等于30％的抗衣原体 效用(抑制包涵体的形成)的物质，特别优选的化合物为具有大于等 于90％的抗衣原体效用的物质，这些在实施例中有详细说明。

根据本发明的化合物通常具有抗衣原体效用，另外也是抗氧化剂， 并有着影响Ca2+摄取入细胞的作用。

辛基棓酸也是一种通常用作食物添加剂的化合物。

作为活性成分，源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与它 们的衍生物和植物提取物与组分以及它们的混和物可以定量以使其按 苷元计算的日用量为25μg至3000mg。根据本发明，源于植物的酚类 化合物、相应的合成化合物与它们的衍生物和植物提取物与组分以及 它们的混和物可以以胶囊、片剂、软膏、液体制剂或别的相应的本领 域熟练的技术人员所知的形式制备成药物制剂。该制剂含有的活性成 分按苷元计算的日用量为25μg至3000mg，优选地按单位药剂计算为 25μg至500mg。

源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与它们的衍生物和植 物提取物与组分以及它们的混和物也可以就这样加入食品中，或者它 们能够制成适用于食品的组合物，例如草药制剂、调味品、粒剂或相 似物质，该组合物可以就这样使用，加入到与该产品相关的日常食物 或也被称作促健康(pro-health)产品的有益健康的功能性食品，如速制 食物、粥、色拉调料、饮料、奶制品、食用脂肪、冷冻产品、冻干食 品、特制食品、马铃薯片(potato ship)、浸渍沙司等等中。源于植物的 酚类化合物和相应的合成化合物与它们的衍生物可以以苷元的形式或 糖苷的形式存在于根据本发明的组合物中。

根据本发明的源于植物的酚类化合物、相应的合成化合物与它们 的衍生物和植物提取物与组分以及它们的混和物作为化合物是安全 的。根据本发明的组合物和制剂都可以用于急性衣原体感染的疗程， 或者持续而有规律地与日常食物一起服用该组合物或制剂以便预防衣 原体感染。因为慢性冠状动脉心脏病在相当程度上造成人员休养及在 另一方面造成对国民经济的高额花费，所以使用根据本发明的源于植 物的酚类化合物、相应的合成化合物与它们的衍生物和植物提取物与 组分及它们的混和物以及使用包含它们的新组合物就可能在相当程度 上预防和减缓心脏与血管疾病的增加和暴发，尤其是在危险人群中。 根据本发明的组合物和制剂还可以用于急性砂眼衣原体感染的治疗和 预防以及用于随后并发症如不育、宫外孕和宫颈癌的预防，还可用于 其他衣原体相关的感染与并发症的治疗和预防。

本发明在下面的实施例中进行更详细地证明，但是本发明无论如 何也不是只局限于这些实施例。在实施例中，描述了根据本发明的化 合物和植物提取物对于肺炎衣原体与砂眼衣原体的直接的抗衣原体效 用，以及化合物和提取物对于所用的宿主细胞(HL细胞、人的肺组织、 标准二倍体细胞系)的毒性。

实施例1 源于植物的酚类化合物的直接的抗衣原体效用(抑制包涵体的形成)/ 肺炎衣原体K7菌株(临床分离) 结果/浓度50μM：

化合物                                以DMSO为对照的抑制率(％)

           以DMSO为对照的抑制率(％)    (浓度50μM)                                    (预处理)*

栎精                    90                        90

桑色素                  99                        96 

鼠李黄素                99                        59

辛基棓酸                100                       100

DMSO                    0                         0 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。 结果/浓度0.5μM：

化合物                                 以DMSO为对照的抑制率(％)

            以DMSO为对照的抑制率(％)

(浓度0.5μM)                                    (预处理)*

栎精                   68                          77

桑色素                 80                          62

鼠李黄素               73                          50

辛基棓酸               82                          62

DMSO                   0                           0 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。

实施例2 感染性的抑制/肺炎衣原体 结果/浓度50μM：

化合物                               以DMSO为对照的抑制率(％)

         以DMSO为对照的抑制率(％)

(浓度50μM)                                  (预处理)*

栎精               76                             0

桑色素             94                             76

鼠李黄素           100                            67

辛基棓酸           100                            100

DMSO               0                              0 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。 结果/浓度0.5μM：

化合物                           以DMSO为对照的抑制率(％)

          以DMSO为对照的抑制率(％)

0.5μM                                   (预处理)*

栎精               58                       0

桑色素             81                       53

鼠李黄素           100                      75

辛基棓酸           59                       42

 DMSO              0                        0 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。

实施例3 对砂眼衣原体的直接的抗衣原体效用

砂眼衣原体，在McCoy细胞中培养。测试程序的其他方面和肺炎 衣原体一样。 结果/浓度50μM：

化合物                           以DMSO为对照的抑制率(％)

         以DMSO为对照的抑制率(％)

(浓度50μM)                               (预处理)*

栎精                0                        100

桑色素              0                        100

鼠李黄素            0                        100

辛基棓酸            14                       88 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。 结果/浓度0.5μM：

化合物                          以DMSO为对照的抑制率(％)

       以DMSO为对照的抑制率(％)

(浓度0.5μM)                            (预处理)*

栎精              0                         20

桑色素            0                         100

鼠李黄素          0                         17

OG                0                         0 *宿主细胞和待研究的化合物于感染前一起培养一天。将1ml维持培养 基中待研究的化合物按照和测试程序本身中一样的浓度加入到含有宿 主细胞的24孔平板中。这样做的目的是为了研究化合物对于宿主细胞 本身的可能的影响，该影响可能成为抑制感染的一个因素。测试程序 按照测定方法中所描述的方式继续进行。

实施例4 某些所研究的样品对于宿主细胞的毒性的测定

该测定按前面的测试方法进行，但是不经任何感染。生存力通过 锥虫蓝染色确定。 样品： Q＝栎精 M＝桑色素 R＝鼠李黄素 OG＝辛基棓酸 HL-C＝单独的营养培养基中的HL细胞 HL-CD＝添加了DMSO的HL细胞 毒性测试HL-C Q50    Q5     Q0,5     Q0,05     Q0,005      HL-C    HL-CD    μM 10.5   9.2    7.0      11.7      7.4         19.7    9.6      ％ M50    M5     M0,5     M0,05     M0,005      HL-C    HL-CD    μM 11.2   8.3    8.4      9.0       8.3         19.0    9.0      ％ R50    R5     R0,5     R0,05     R0,005      ″      ″       μM 15.7   9.6    10.0     9.5       10.9                         ％ OG50   OG5    OG0,5    OG0,05    OG0,005     HL-C    HL-CD    μM 16.4   8.8    7.9      7.4       8.0         5.7     7.8      ％ 毒性测试HL-C(预处理) Q50    Q5     Q0,5     Q0,05     Q0,005              HL-CD    μM 10.5   8.1    3.3      7.2       7.9                 30.1     ％ M50    M5     M0,5     M0,05     M0,005              ″       μM 9.7    12.7   6.4      8.1       14.4                         ％ R50    R5     R0,5     R0,05     R0,005    HL-C      HL-CD    μM 16.9   8.0    10.6     7.6       6.6       10.8      10.7     ％ OG50   OG5    OG0,5    OG0,05    OG0,005   HL-C               μM 14.8   8.5    5.0      7.1       7.0       7.9                ％

实施例5 源于植物的酚类化合物、某些合成化合物和混和物对肺炎衣原体直接 的抗衣原体效用 所用浓度为50μM 化合物                               抑制率(％) 1.天然类黄酮

芹黄素                        100

藤黄菌素                      100

黄酮                          90

牡荆碱                        3

牡荆碱-2″-O-鼠李糖苷         11

藤黄菌素-7-葡萄糖苷           23

藤黄菌素-3′，7-葡萄糖苷      45

栎精                          90

鼠李黄素                      100

异鼠李黄素                    70

桑色素                        100

栎苷                          50

芸香苷                        46

柚皮素                        16

柚皮苷                        66

大豆黄素                      51

染料木黄酮                    60

大豆苷                        0

染料木苷                      37

矢车菊苷配质B1                30

矢车菊苷配质B2                0 2.天然酚酸

苯甲酸                        44

五倍子酸                      27

丁香酸                        32

咖啡酸                        78

阿魏酸                        14

甲基棓酸                      100

丙基棓酸                                 100

辛基棓酸                                 100

十二烷基棓酸                             100 3.天然三萜

白藜芦醇                                 54 4.天然香豆素和儿茶素

莨菪亭                                   96

甲氧基补骨脂素                           100

繖形酮                                   75

花椒毒素                                 94

香豆素                                   28

(-)-表儿茶素棓酸                         85

(-)-表棓儿茶素                           58

(-)-表儿茶素                             75

(+)-儿茶素                               76 5.合成的类黄酮和香豆素

3-(α-丙酮基苄基)-4-羟基香豆素           0

香豆素102                                63

香豆素106                                100

2′-甲氧基-α-萘并黄酮                   100

6，2′-二甲氧基黄酮                      73

6-甲基香豆素                             71

α-萘并黄酮                              92

鱼藤酮                                   100

7-二乙基氨基-3-噻吩甲酰基香豆素          100

3-(2-苯并噁唑基(benzoxazoyl))繖形酮      28

香豆素30                                  50

3-苯甲酰苯并(F)香豆素                     62

6，8-二溴香豆素-3-羧酸                    0

4-甲基-3-苯基香豆素                       0 6.混和物

辛基棓酸                                  100

辛基棓酸1/10                              53

辛基棓酸1/100                             17

大蒜                                      26

大蒜1/10                                  25

大蒜1/100                                 19

辛基棓酸50％+大蒜50％                     100

辛基棓酸50％+大蒜50％1/10                 47

辛基棓酸50％+大蒜50％1/100                34

辛基棓酸50％+大蒜50％1/1000               6

实施例6 植物提取物的抗肺炎衣原体效用

实施了从61种天然和食用植物材料中制备的101种提取物抗肺炎 衣原体的初始筛选。所用浓度为40μg/孔。

下面显示的是经挑选的最具活性的天然植物提取物抗肺炎衣原体 的结果，该结果从四种不同的评定计算而得。 植物 科 抑制率(％) 生存力 N48.欧薄荷 唇形科(Labiateae) 100 好 N53.龙脑薄荷 唇形科(Labiateae) 100 好 N44.大花鼬瓣花 唇形科(Labiateae) 100 好 N57.撒尔维亚 唇形科(Labiateae) 100 好 N57.撒尔维亚 唇形科(Labiateae) 100 好 N58.麝香草 唇形科(Labiateae) 100 好 N34.小酸模 蓼科 100 稍低 N30.玫瑰 蔷薇科 100 好 N28.兔儿尾苗 玄参科 100 稍低 N8.多刺紫草 紫草科 100 稍低 N22.北艾 菊科 100 好 N37.铃兰 铃兰科(convallariaceae) 100 - 夏栎 壳斗科 100 -

下面显示的是经挑选的最具活性的食用植物提取物表现出对肺炎 衣原体100％抑制的结果，该结果从四种不同的评定计算而得。 植物 科 抑制率(％) 生存力 D8.野胡萝卜 伞形科 100 D14.草莓 蔷薇科 100 稍低 D16.甘蓝 十字花科 100 好 D17.欧洲油菜 十字花科 100 好 D21.紫苜蓿 豆科 100 好 D23.甜橙 芸香科 100 稍低 D25.Phloem flour 蓼科 100 好 D30.黑果越桔 杜鹃花科 100 好 D31.黑果越桔 杜鹃花科 100 好

在有机地和正常地生长的植物之间没有观察到显著的活性上的差 异。

在该研究中，认为显示出对肺炎衣原体包涵体(n＝4)100％抑制 的植物提取物是有活性的。发现五种属于唇形科的植物具有特别的活 性。不管提取的方法，经过水蒸馏和浸渍或只经过水蒸馏的撒尔维亚 提取物具有抗肺炎衣原体的活性。

下面提供了所用微生物学方法的描述。 1.HL细胞的培养和传代

每隔3天进行HL细胞的传代培养。在感染前一天将宿主细胞接 种。细胞经一次10ml的PBS漂洗，并通过胰蛋白酶消化(1∶10， 1.5-2.0ml/瓶；在+37℃大约于层流柜中5分钟或于CO2中2分钟)而 收获。细胞悬浮液稀释至大约每毫升营养培养基(RN)350000个细胞 的水平。在+37℃条件下培养，每星期换1-2次RN培养基和CO2(5.0％)。HL细胞可以冷冻于液氮(1ml 7.5％FCS(RN)+1ml DMSO) 中。 2.衣原体的纯化

EB(原体)＝衣原体具传染性的细胞外形式。在前一天，取出所 需数量的被衣原体感染的HL细胞的悬浮液解冻。将细胞良好地悬浮， 并在超声波床内保持总共2分钟[20秒的超声处理(振幅为24-25)和 10秒的冷却，共进行6次]。细胞破裂了，而衣原体未被破坏。

悬浮液在1600rpm(550xg)离心10分钟，其中衣原体在上清液 中(丢弃HL细胞残留物)。将上清液吸出，并在上清液中加入5ml PBS， 然后悬浮并超声处理1分钟(10秒的超声处理-5秒的冷却，共进行6 次)。

衣原体可以于-70℃冷冻储存。 3.衣原体检验程序

培养的HL细胞用肺炎衣原体EB′s感染。已经侵入细胞的EB′s 转变成具代谢活性的网状体(RB)，该网状体经过二分裂在内体液泡 或包涵体中分开。经过一段时间(大约72小时)，肺炎衣原体的RB′s 浓缩成EB′s，在这之后包涵体破裂，宿主细胞破裂，EB′s释放出来。 在该方法中目的是为了检验宿主细胞破碎前的包涵体。

HL细胞作为肺炎衣原体在体外条件下的宿主细胞。McCoy细胞 通常作为砂眼衣原体在体外条件下的宿主细胞 HL细胞和McCoy细胞的感染

在感染前一天，宿主细胞于24孔平板上接种：通过胰蛋白酶消化 收获细胞，然后将它们悬浮于大约5ml营养液中并在Burker氏室中 计数。每一个孔按照每孔250000-400000个细胞的浓度接种以便培养。 如有必要，可在细胞加入小孔之前放上圆的盖玻片(直径13mm)用 于染色。加入了营养液，以使体积为1ml/孔。第二天，用所要的细菌 感染细胞。

将用于感染的含有衣原体颗粒的溶液彻底混和。吸去旧的营养液。 在感染之前将储存于-70℃的接种物稀释至大约103的IFU浓度，以使 24孔平板上溶液的体积至少为200μl/孔。通过1小时于1600rpm (550xg)的离心，细胞受到感染。吸去营养培养基，并换成含有环己 酰胺(cyclohexamide)及所研究化合物(DMSO浓度0.2％)的维持 培养基，体积为1ml/孔。细胞于+35℃在含5％CO2的气体中培养。将 受到肺炎衣原体感染的细胞培养3天。2-3天后，移去维持培养基并将 细胞用1ml PBS洗涤一次。向小孔中加入200μl SPG用于进一步的感 染，再用吸管头收集并转移到试管中。这些按照上面的同样方法去感 染新细胞，以便测试对感染性的抑制(chlamydiasidic效用)。 衣原体染色

将留在盖玻片上用于染色的营养培养基吸出。受感染的细胞在盖 玻片上用甲醇固定10分钟。将盖玻片从孔中移出，然后以含有细胞的 那面朝下的方式转移到于潮湿的室中在Parafilm上合适的结合有荧光 素的单克隆抗体上。盖玻片于+37℃孵育30分钟，然后用PBS洗涤两 次和用水洗涤一次。最后将它干燥。将盖玻片以含有细胞的那面朝下 的方式放在含有固定剂(例如封固剂)的载玻片上。当在荧光显微镜 下观察时，受到衣原体感染的细胞培养物样品显示出在红色的复染色 背景下的包涵体特有的苹果绿色荧光。 化学药品和试剂

RN＝FCS营养培养基：100ml RPMI 1640(Sigma)，已加入了 3.5％L-谷氨酰胺和10mg链霉素(最终浓度为20μg/ml)，7.5ml FCS。 制备好的溶液储存于+8℃。

维持培养基：加入了50μg环己酰胺(最终浓度为0.5μg/ml)的 100ml FCS营养培养基。制备好的溶液储存于+8℃。

PBS(Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水，Gibco)，pH7.4

SPG＝蔗糖0.2M(37.5g)，KH2PO4 3.8mM(0.26g)， Na2HPO4·2H2O 6.7mM(0.61g)，谷氨酸(C5H9NO4)5mM(0.36g) 混和入500ml milli-Q水中。经灭菌后储存于-20℃。

FCS，胎牛血清(Gibco，Scotland)于56℃失活30分钟， 然后过滤并储存于-70℃。