专利汇可以提供一种牡丹组织培养再生的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种牡丹组织培养再生的方法,包括以下步骤:1)将牡丹 种子 用浓 硫酸 浸泡处理、冲洗并消毒;2)培养所述牡丹种子产生胚根,然后诱导愈伤组织及 体细胞 胚;3)所述体细胞胚再生形成次生体细胞胚团;4)将所述次生体细胞胚团分化形成子叶胚;5)所述子叶胚进一步分化形成不定根;6)将分化形成不定根的外植体炼苗并形成完整植株。使用本发明的方法,在炼苗1个月后,植株成活率可达到95%,叶8‑10片,高6‑10cm,可获得大批组培苗满足种植需要。此外,该方法育苗速度快、效率高、受季节和环境影响小,便于随时进行大规模育苗种植,在牡丹新品种改良中有重要应用。,下面是一种牡丹组织培养再生的方法专利的具体信息内容。
1.一种牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将牡丹种子用浓硫酸浸泡处理、冲洗并消毒;
2)培养所述牡丹种子产生胚根,然后诱导愈伤组织及体细胞胚;
3)所述体细胞胚再生形成次生体细胞胚团;
4)将所述次生体细胞胚团分化形成子叶胚;
5)所述子叶胚进一步分化形成不定根;
6)将分化形成不定根的外植体炼苗并形成完整植株;
诱导愈伤组织使用的诱导培养基组分为:蔗糖30g/L,MSB 4.44g/L,2,4-D 40mg/L,凝胶2g/L,pH值7.0;
所述体细胞胚再生形成次生体细胞胚团使用的继代培养基组分为:蔗糖30g/L或60g/L,MSB 4.44g/L,凝胶2g/L,2,4-D 20mg/L,pH值7.0;
所述次生体细胞胚团分化形成子叶胚使用的分化培养基组分为:MSB 4.44g/L,麦芽糖
60g/L,活性炭5g/L,2g/L凝胶,pH值5.7;
所述子叶胚进一步分化形成不定根使用的生根培养基组分为:MSB 4.44g/L,蔗糖30g/L,2g/L凝胶,pH值5.7。
2.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤1)具体为:选用椭圆形或卵状球形牡丹种子,3-5℃低温处理80-100天后,于20-28℃条件下用浓硫酸浸泡2-3分钟,用流水冲洗3-4遍后用次氯酸钠溶液消毒15-25分钟,之后在无菌条件下用无菌水清洗3-4遍,用无菌滤纸吸干水分。
3.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤4)具体为:选择生长良好、表面光滑、黄绿色的、直径为2.5-3.5mm的所述次生体细胞胚团转入分化培养基中进行培养,直到可观察到带有两片子叶的子叶胚。
4.如权利要求3所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,所述次生体细胞胚团在所述分化培养基中培养的时间为2周。
5.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤6)具体为:当分化生根外植体长到高度5-7cm的植物体时,将幼苗暴露于空气中炼苗5-7天,然后转入湿润的蛭石中,一周后,将植株移入温室大田中培养。
6.如权利要求5所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,在所述温室大田中培养的条件为:温度20-25℃,空气湿度85%,每隔7天喷洒一次广谱杀菌剂。
7.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤2)中,所述牡丹种子在MSB培养基中培养13-15天,培养温度20-25℃,光照强度20000lux,每天光照15-17小时,诱导胚根生长;切取胚根置于诱导培养基中培养28-32天,诱导愈伤组织及体细胞胚生长。
8.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤3)中,将步骤2)中获得的表面光滑、颜色黄绿的体细胞胚从愈伤组织团上取下,并置于继代培养基中增殖培养19-21天,形成所述次生体细胞胚团。
9.如权利要求1所述的牡丹组织培养再生的方法,其特征在于,步骤5)具体为:将所述子叶胚放在表面铺有滤纸的分化培养基平皿中,黑暗培养3-7天后将干燥的所述子叶胚移入生根培养基中进行分化形成不定根。
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