一种能防治线虫的微生物代谢产物及其应用
专利汇可以提供一种能防治线虫的微生物代谢产物及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种能防治 植物 寄生 线虫 的 微 生物 代谢产物，属微生物 农药 技术领域。本发明的代谢产物是一种化合物ANMY16，是通过黑曲霉(Aspergillus niger)D16菌株 发酵 培养后，从培养液中分离获得的。D16菌株已于2015年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC11340。本发明的代谢产物能杀死植物寄生线虫，对植物寄生线虫病的防治率>75%。，下面是一种能防治线虫的微生物代谢产物及其应用专利的具体信息内容。
1.一种由黑曲霉Aspergillus niger-D16菌株产生的能防治植物寄生线虫的代谢产物ANMY16，其特征在于：
1.1该化合物由黑曲霉Aspergillus niger-D16菌株产生，该菌株于2015年9月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC11340；
1.2 该化合物的分子式为C2H2O4•2(C2HO4)•C2O4•4(H2O)•2(Ca)，其数据信息已上传到剑桥晶体学数据中心(The Cambridge Crystallographic Data Centre)，编号为CCDC
1527786；
1.3 该化合物的获得方法：首先，无菌收集平板上D16菌株产生的孢子，将孢子接种到预先灭菌并含有玻璃珠的液体PDA培养基中，28℃150rpm/min培养2-3天，视培养基中长满细小的菌丝球、直径约为1-4mm时备用，此为液体种子；然后，将培养好的液体种子无菌接入预先灭菌的液体PDA培养基中，接入量按新培养基装液量的1-4%计算；27℃180rpm/min培养
3-6天，当液体中有白色晶体出现或线虫生测后线虫致死率超过80%时，即为D16有效液体培养物；最后，将D16有效液体培养物除去菌体，浓缩过滤液，化合物ANMY16随着液体量的减少能自然结晶析出，收集晶体即为本发明的目的化合物ANMY16；
1.4该化合物能抑制植物寄生线虫卵的孵化，抑制率超过95%；
1.5该化合物能杀死植物寄生线虫，对植物寄生线虫病的防治率超过75%。
2.权利1所述化合物在制备防治植物根结线虫制剂中的应用。
一种能防治线虫的微生物代谢产物及其应用
技术领域
背景技术
发明内容
本发明化合物ANMY16是一种化合物，分子式为C2H2O4•2(C2HO4)•C2O4•4(H2O)•2(Ca)，其数据信息已上传到剑桥晶体学数据中心(The Cambridge Crystallographic Data Centre)，编号为CCDC 1527786；
本发明的化合物ANMY16作用植物根结线虫卵，对线虫卵的孵化抑制率超过95%；作用线虫4小时，线虫致死率超过80%，12小时后线虫致死率超过90%，20小时后线虫致死率达到
99%。对植物根结线虫病的防治效果大于75%。
一、 D16菌株的培养：
首先，无菌收集平板上D16菌株产生的孢子，将孢子接种到预先灭菌并含有玻璃珠的液体PDA培养基中，28℃150rpm/min培养2-3天，视培养基中长满细小的菌丝球(直径约为1-
4mm)为止备用，此为液体种子。然后，将培养好的液体种子无菌接入预先灭菌的液体PDA培养基中，接入量按新培养基装液量的1-4%计算。27℃180rpm/min培养3-6天，当液体中有白色晶体出现或线虫生测后线虫致死率超过80%时，即为D16有效液体培养物。
2.在无菌条件下收集平板上的黑色孢子，将黑色孢子接入含有玻璃珠的PDA液体培养中，28℃150rpm/min培养；
3. 培养2天，视培养基中长满细小的菌丝球为止备用，此为液体种子；
4. 将长好的液体种子无菌接入预先灭菌的液体PDA培养基中，接入量按新培养基装液量的1%计算，27℃180rpm/min培养4天；
5. 用发明内容中线虫生测方法进行发酵液的线虫生测，120min后，线虫致死率达到
80%，停止发酵，即为D16有效培养物；
6.将D16液体培养物进行离心除去菌体。离心条件为：不低于3000rpm/min，时间不低于
3分钟（本步骤也可以用过滤除菌的方法进行）；
7.取离心上清液，通过低温真空浓缩或是加热蒸发的方法取其一进行浓缩，随着液体量的减少，白色的晶体会出现在液体中，该晶体即为目的化合物ANMY16；
8.取晶体用蒸馏水溶解，将该溶液按发明内容中的线虫生测方法进行杀线虫测定，作用4小时，根结线虫致死率超过80%；作用12小时，根结线虫致死率超过90%。
取代谢产物晶体用水溶解，按重量比分别配制成50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的溶液，按“化合物对植物根结线虫的作用测定”的方法进行杀线虫测定，作用4小时，四个浓度的溶液对根结线虫致死率分别为77%、90%、97%、100%；作用12小时，根结线虫致死率都超过90%。因而，该代谢产物作用于线虫的应用浓度应高于50μg/ml。
按100μg/ml的重量百分比浓度取代谢产物晶体用水溶解，配制成100μg/ml的溶液。以蕃茄种植为例，在移栽时间不超过5天的蕃茄植株每株根部用300ml该溶液灌根，也可按每穴用该溶液300ml喷撒处理穴内土后再移栽，蕃茄采收后调查线虫病发生情况，最终，线虫病防治率超过75%。
以蕃茄种植为例，在移栽时间不超过5天的蕃茄植株每株根部用300ml发酵液灌根，也可按每穴用发酵液300ml喷撒处理穴内土后再移栽，正常管理浇水。蕃茄采收后调查线虫病发生情况，最终，线虫病防治率超过75%。
该代谢产物可以按常规方法制成颗粒剂、水溶剂、可溶性粉剂、乳油剂中的一种进行田间应用，最终每株植物根部土壤中的终浓度为100μg/g×300g。如：将代谢产物与草碳混合配制成100mg/g含量的颗粒剂。以蕃茄种植为例，使用时按1:1000的比例与肥料或细土中的一种混匀，将混匀后的制剂在苗移栽前按每株苗300克用量投入穴中，然后再移栽苗，正常管理浇水。蕃茄采收后调查线虫病发生情况，最终，线虫病防治率超过75%。
将ANMY16在云南省陆良县大棚蕃茄种植地进行田间试验，结果如下：
D16有效培养物田间使用对根结线虫的防治效果
结果表明：目的化合物作用后作物的病株率13%、根结百分率9%都低于空白对照、阿魏菌素和呋喃丹，平均防效高于阿魏菌素和化学呋喃丹。用本发明在田间防治作物根结线虫，有较好的防治效果。
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