一种防治线虫病的生防菌株SFC-3及其应用
专利汇可以提供一种防治线虫病的生防菌株SFC-3及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及防治 线虫 病的生防菌株SFC-3及其应用，可有效解决现有防治根结线虫病害的生防菌株存在防效不稳定、使用成本高的问题，其分类命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum），保藏编号为：CGMCC NO.16097，生防菌株SFC-3在浓度为1×109CFU/mL下，对根结线虫虫卵孵化和二龄幼虫都有很好的抑制作用；该菌株能显著降低线虫的入侵，对根结线虫病害的防治效果为78.51%，本发明菌株可以在蔬菜 幼苗 移栽时灌根使用，且有促生作用。，下面是一种防治线虫病的生防菌株SFC-3及其应用专利的具体信息内容。
1.一种生防菌株SFC-3，其特征在于，其分类命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum），已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：
CGMCC NO .16097。
2.权利要求 1 所述的生防菌株SFC-3的分离方法，其特征在于，称取10g根结线虫病害严重的土壤样品加入装有90mL无菌水的三角瓶中，置摇床振荡25-35分钟，得到稀释倍数为
10-1的土壤稀释液，取1mL 10-1土壤稀释液加入到装有9mL无菌水的试管中，得到稀释倍数为10-2的土壤稀释液，取300μL该稀释液涂布到马丁氏培养基上，28℃培养3天，待长出真菌菌落后挑边缘菌丝转入PDA固体培养基进行纯化，获得纯化菌株；
所述的马丁氏培养基配制方法为：20g葡萄糖、5g蛋白胨、1g磷酸二氢钾、0 .5g七水硫酸镁、1%孟加拉红溶液3mL、20g琼脂，加入蒸馏水至1000mL，在121℃灭菌30min，使用时每
100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL；
所述的PDA固体培养基配制方法为：称取200g土豆削皮后切成小块放在水里煮沸
30min，用四层纱布过滤，向滤液中加入20g蔗糖和20g琼脂，定容至1000mL，pH值调为7.0，在
121℃灭菌30min。
3.权利要求1或2所述的生防菌株SFC-3在制备防治根结线虫病产品中的应用。
4.利用权利要求1或2所述的生防菌株SFC-3制备生防菌剂的方法，其特征在于，1）将生防菌株SFC-3接种到PDA液体培养基中于摇床上25℃，180r/min培养12～48h后，在超净工作台取样，采用血球计数板法测定活菌数；
2）当培养至活菌数在1×105CFU/mL以上时，将种子液按照1：100体积比加入PDA液体培养基中，于摇床上25℃，180r/min培养12～48h后，然后5000rpm离心10min，每1000mL培养基中获得10 15g湿菌，每克湿菌含5×109 1011个菌体，湿菌与无菌水按1g：50mL配成菌剂，成~ ~
品中活菌总浓度为1×108 1010 CFU/mL；
~
所述的PDA液体培养基配制方法为：称取200g土豆削皮后切成小块放在水里煮沸
30min，用四层纱布过滤，向滤液中加入20g蔗糖，定容至1000mL，pH值调为7.0，在121℃灭菌
30min。
5.权利要求4所述的生防菌剂在防治根结线虫病中的应用。
6.权利要求1或2所述的生防菌株SFC-3在浓度为1×109CFU/mL时，对根结线虫虫卵孵化和二龄幼虫抑制作用最好。
一种防治线虫病的生防菌株SFC-3及其应用
技术领域
背景技术
发明内容
25-35分钟，得到稀释倍数为10-1的土壤稀释液，取1mL 10-1土壤稀释液加入到装有9mL无菌水的试管中，得到稀释倍数为10-2的土壤稀释液，取300μL该稀释液涂布到马丁氏培养基上，
28℃培养3天，待长出真菌菌落后挑边缘菌丝转入PDA固体培养基进行纯化，获得纯化菌株；
所述的马丁氏培养基配制方法为：20g葡萄糖、5g蛋白胨、1g磷酸二氢钾、0 .5g七水硫酸镁、1%孟加拉红溶液3mL、20g琼脂，加入蒸馏水至1000mL，在121℃灭菌30min，使用时每
100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL；
所述的PDA固体培养基配制方法为：称取200g土豆削皮后切成小块放在水里煮沸
30min，用四层纱布过滤，向滤液中加入20g蔗糖和20g琼脂，定容至1000mL，pH值调为7.0，在
121℃灭菌30min。
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2）当培养至活菌数在1×10CFU/mL以上时，将种子液按照1：100体积比加入PDA液体培养基中，于摇床上25℃，180r/min培养12～48h后，然后5000rpm离心10min，每1000mL培养基中获得10 15g湿菌，每克湿菌含5×109 1011个菌体，湿菌与无菌水按1g：50mL配成生防菌~ ~
剂，成品中活菌总浓度为1×108 1010 CFU/mL；
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所述的PDA液体培养基配制方法为：称取200g土豆削皮后切成小块放在水里煮沸
30min，用四层纱布过滤，向滤液中加入20g蔗糖，定容至1000mL，pH值调为7.0，在121℃灭菌
30min。
具体实施方式
2）称取10g土壤样品加入装有90mL无菌水的三角瓶中，置摇床振荡25-35分钟，得到稀释倍数为10-1的土壤稀释液，取1mL 10-1土壤稀释液加入到装有9mL无菌水的试管中，得到-2
稀释倍数为10 的土壤稀释液，取300μL该稀释液涂布到马丁氏培养基上，28℃培养3天，待长出真菌菌落后挑边缘菌丝转入PDA固体培养基进行纯化，获得纯化菌株；
所述的马丁氏培养基配制方法为：20g葡萄糖、5g蛋白胨、1g磷酸二氢钾、0 .5g七水硫酸镁、1%孟加拉红溶液3mL、20g琼脂，加入蒸馏水至1000mL，在121℃灭菌30min，使用时每
100mL培养基中加入1%链霉素液0.3mL；
所述的PDA固体培养基配制方法为：称取200g土豆削皮后切成小块放在水里煮沸
30min，用四层纱布过滤，向滤液中加入20g蔗糖和20g琼脂，定容至1000mL，pH值调为7.0，在
121℃灭菌30min。
2）当培养至活菌数在1×105CFU/mL以上时，将种子液按照1：100体积比加入PDA液体培养基中，于摇床上25℃，180r/min培养12～48h后，然后5000rpm离心10min，每1000mL培养基中获得10 15g湿菌，每克湿菌含5×109 1011个菌体，湿菌与无菌水按1g：50mL配成生防菌~ ~
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剂，成品中活菌总浓度为1×10 10 CFU/mL。
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20g蔗糖，定容至1000mL，pH值调为7.0，在121℃灭菌30min。
1、微生物学特性
该菌在PDA固体培养基上培养，菌落初期为白色，中心浅绿色，气生菌丝纤细、羊毛状，由中心向四周散布，菌落背面无色，菌落中期逐渐转变为浅绿色，中心呈深绿色，气生菌丝转变为棉絮状，菌落后期整体呈深绿色，棉絮状菌丝减少，菌落背面无色，分生孢子梗主枝呈树状，含多级分枝，初级分枝多为三束互生，离主枝顶端越近的初级分枝长度越短，部分主枝顶端有簇生的小梗，各级分枝的顶端形成三个簇生的小梗，小梗近似安瓿状，而各级分枝中部无簇生安瓿状小梗，分生孢子呈球形、椭球形或卵形。
GCGGATCGACTTCACTCCAACCCAATGTGAACGTTACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGAACCAACCAAACTCTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGATCGGCGTTGGGGATCGGGACCCCTCACACGGGTGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTTCTGAAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAACCATATCAATAAGCGGAGAAAA
命名为棘孢木霉（Trichoderma asperellum），保藏编号为：CGMCC NO .16097。
将带有根结线虫的病根洗净，用剪刀剪碎根组织，经200目和500目网筛过滤，收集500目筛上物，经自来水冲洗收集于离心管中，在2500r/min下离心5min，弃上清，得到线虫虫卵。制备浓度为500粒/mL虫卵悬液，于4℃冰箱保存备用。
5.生防菌株SFC-3对根结线虫二龄幼虫的致死作用
取无菌12孔细胞培养板，每孔接种1mL孢子悬液和2mL二龄幼虫悬浮液，各处理做3个重复。以加无菌水作为对照。在温度为25℃条件下，分别在12h、24h、36h和48h后，观察二龄幼虫的致死情况，计算二龄幼虫的致死率。公式为：致死率=幼虫死亡数/幼虫总数×100%三、温室盆栽试验
1.番茄幼苗培育
番茄种子表面先用75%的酒精处理1min后无菌水冲洗，再用2%次氯酸钠溶液处理10min后无菌水冲洗，表面消毒处理后的种子于育秧盘中培育生长。
四、实验结果
离体实验表明（表1、表2）生防菌株SFC-3在浓度为1×109CFU/mL时，对根结线虫的虫卵孵化有很好的抑制作用，8天根结线虫卵的孵化率仅为7.24%。生防菌株SFC-3在浓度为1×
109CFU/mL时，对根结线虫的二龄幼虫有很强的致死作用，48小时后对二龄幼虫的致死率为
93.46%。
处理 2d 4d 6d 8d
CK 28.73 49.56 75.87 97.25
SFC-3 1.68 3.12 5.76 7 .24
表2生防菌株SFC-3对根结线虫二龄幼虫的致死作用
幼虫致死（%）
处理 12h 24h 36h 48h
CK 0 0.61 1.23 1.42
SFC-3 68.21 85.73 90.53 93.46
温室盆栽试验表明（表3）生防菌株SFC-3能显著降低对根结线虫对番茄根部的侵染，对根结线虫的防效为78.51%，并对番茄生长有明显的促生作用。
SFC-3 18.67 51.72 12.11 58.82 26 78.51
由以上离体试验表明，生防菌株SFC-3在浓度为1×109CFU/mL下，对根结线虫虫卵孵化和二龄幼虫都有很好的抑制作用；盆栽试验表明，该菌剂能显著降低线虫的入侵，对根结线虫病害的防治效果为78.51%，并具有促进番茄的生长作用；本发明菌株可以在蔬菜幼苗移栽时灌根使用，且有促生作用，可提高蔬菜产量30-50%以上，经济价值提高40%以上，同时利用本发明菌株制成的生防菌剂，在实验中均取得了相同或相近的结果，不再一一列举，防止累述，本发明菌株的发现具有实际的生产意义，适合大范围的推广和应用。
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