一种二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法
阅读：563发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一株二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法。本发明的菌株名称为二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)MesAdm 1，保藏编号为GDMCC No：60886，2019年10月29日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼的广东省 微 生物 菌种保藏中心。本发明的二孢拟奥德蘑菌株生长速度快，可达到8.2000±0.2830mm/d，可以不覆土出菇，产量高达17～22朵/单瓶，生长周期短，可达到58天。本发明的二孢拟奥德蘑菌株子实体呈伞状，菌柄长度15～23cm，菌柄直径0.5～1.5cm，菌盖直径4.0～12cm，菌盖均匀适中、品质好、 质量 稳定、发育一致。，下面是一种二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法专利的具体信息内容。
1.一株二孢拟奥德蘑菌株，其特征在于：名称为二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)MesAdm 1，保藏编号为GDMCC No：60886，该菌株于2019年10月29日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心。
2.根据权利要求1所述的二孢拟奥德蘑菌株，其特征在于：
所述的二孢拟奥德蘑菌株的母种液体PDA培养基：麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏
2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、瓜尔胶5～20g/L、氨基酸0.1mg/L、VB1 0.1mg/L，蒸馏水定容至1000mL，pH 7；
所述的二孢拟奥德蘑菌株的母种固体PDA培养基为母种液体PDA培养基中加入20g/L琼脂；
所述的氨基酸为天冬氨酸、丝氨酸和脯氨酸中的至少一种。
3.权利要求1所述的二孢拟奥德蘑菌株的选育方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)菌种分离
选取无开伞、菌柄无皲裂的二孢拟奥德蘑幼菇子实体，挑取其内部菌丝，接种于含有链霉素的PDA培养基中，于24℃～28℃培养7～10天，挑选出菌丝长势一致、洁白度高、菌落密度一致、无杂菌污染的菌落；
(2)菌种纯化
将步骤(1)挑选出的菌落中的气生菌丝接入PDA培养基，进行菌种纯化，转接入斜面试管中，24℃～26℃培养至斜面长满菌丝，即获得纯种菌株；
(3)菌种鉴定
获取步骤(2)中得到的纯种菌株的ITS序列，将其与亲缘关系近的种属进行ITS序列比较，获得菌株的分类信息；纯种菌株进行菌丝观察，确定为二孢拟奥德蘑菌株；
步骤(1)中所述的含有链霉素的PDA培养基为PDA培养基中加入50μg/mL链霉素得到；
步骤(1)和(2)中所述的PDA培养基：浸汁马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L、蒸馏水定容至1000mL，pH自然。
4.根据权利要求3所述的二孢拟奥德蘑菌株的选育方法，其特征在于：所述的二孢拟奥德蘑菌株在所述的母种固体PDA培养基中24℃～26℃避光培养。
5.根据权利要求3所述的二孢拟奥德蘑菌株的选育方法，其特征在于：步骤(2)中所述的菌种纯化的方法为涂布平板法，培养基为PDA培养基；菌种纯化的次数为3次。
一种二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法
技术领域
[0001] 本发明涉及食用菌育种技术领域，特别涉及一种二孢拟奥德蘑菌株及其选育方法。
背景技术
[0002] 二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)隶属于担子菌门(Basidiomycota)，伞菌目(Agaricales)，膨瑚菌科(pHysalacriceae)，小奥德蘑属(Oudemansiella)。近年来，国内对小奥德蘑属的部分菌株已实现了人工驯化栽培(李传华等，2011)，二孢拟奥德蘑菌株属于新发现的小奥德蘑属真菌，目前对二孢拟奥德蘑相关研究较少。
发明内容
[0003] 本发明的首要目的在于提供一种二孢拟奥德蘑菌株。
[0004] 本发明的另一目的在于提供上述二孢拟奥德蘑菌株的选育方法。
[0005] 本发明的目的通过下述技术方案实现：一种二孢拟奥德蘑菌株，名称为二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)MesAdm 1，保藏编号为GDMCC No：60886，该菌株于2019年10月29日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼的广东省微生物菌种保藏中心。
[0006] 该菌株是发明人从广西省桂林市猫儿山国家自然保护区采集的原始菌株中分离得到的一株二孢拟奥德蘑菌株。
[0007] 所述的二孢拟奥德蘑菌株的形态学特征如下：菌丝生长稠密、色泽洁白，基部菌丝粗大弯曲程度不明显，菌丝尖端部分分支较多且纤长；粗菌丝不易着色，细菌丝易着色。
[0008] 所述的二孢拟奥德蘑菌株的培养特征如下：在固体培养基上，有贴紧培养基表面稀疏平铺生长的形态，接种处为中心呈半球型向外生长，外层菌丝较为绵密、接种点周围一圈菌丝呈稀疏近透明的菌落形态；基内菌丝会分泌黑色物质，越接近接种点黑色物质越多。
[0009] 所述的二孢拟奥德蘑菌株的5.8S rDNA核苷酸序列如SEQ ID No.1的序列所示，序列长度为759bp。
[0010] 所述的二孢拟奥德蘑菌株与现有二孢拟奥德蘑菌株分为两支的置信度达到99％。
[0011] 上述二孢拟奥德蘑菌株的选育方法，包括如下步骤：
[0012] (1)菌种分离
[0013] 选取无开伞、菌柄无皲裂的二孢拟奥德蘑幼菇子实体，挑取其内部菌丝，接种于含有链霉素的PDA培养基中，于24℃～28℃培养7～10天，挑选出菌丝长势一致、洁白度高、菌落密度一致、无杂菌污染的菌落；
[0014] (2)菌种纯化
[0015] 将步骤(1)挑选出的菌落中的气生菌丝接入PDA培养基，进行菌种纯化，转接入斜面试管中，24℃～26℃培养至斜面长满菌丝，即获得纯种菌株；
[0016] (3)菌种鉴定
[0017] 获取步骤(2)中得到的纯种菌株的ITS序列，将其与亲缘关系近的种属进行ITS序列比较，获得菌株的分类信息；纯种菌株进行菌丝观察，确定为二孢拟奥德蘑菌株。
[0018] 步骤(1)中所述的含有链霉素的PDA培养基为PDA培养基中加入50μg/mL链霉素得到。
[0020] 步骤(2)中所述的菌种纯化的方法是涂布平板法，培养基为PDA培养基；菌种纯化的次数为3次。
[0021] 上述二孢拟奥德蘑菌株的母种液体PDA培养基：麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、瓜尔胶5～20g/L、氨基酸0.1mg/L、VB1 0.1mg/L，蒸馏水定容至1000mL，pH 7。
[0022] 所述的二孢拟奥德蘑菌株的母种固体PDA培养基为所述的母种液体PDA培养基中加入20g/L琼脂。
[0023] 所述的氨基酸为天冬氨酸、丝氨酸和脯氨酸中的至少一种。
[0024] 上述二孢拟奥德蘑菌株在所述的母种固体PDA培养基中24℃～26℃避光培养。
[0025] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0026] 1.本发明的二孢拟奥德蘑菌株生长速度快，达到8.2000±0.2830mm/d；生长周期短，可达到58天；产量高，可达到17～22朵/单瓶。
[0027] 2.本发明的二孢拟奥德蘑子实体呈伞状，菌柄长度可达15～23cm，菌柄直径可达0.5～1.5cm，菌盖直径可达4.0～12cm，菌盖均匀适中、品质好、质量稳定、发育一致。
[0028] 3.本发明的母种PDA培养基有利于培养出洁白且密度高的二孢拟奥德蘑菌丝，保证了在菌种传代过程中较少的菌种退化，促进了优良性状的表达，有利于二孢拟奥德蘑出菇时生物转化率的提升，进而培育出优质的二孢拟奥德蘑子实体。附图说明
[0029] 图1为二孢拟奥德蘑菌丝形态与培养特征照片图；其中，图A为菌丝形态图；图B为培养特征图。
[0030] 图2为二孢拟奥德蘑与其他已知真菌的ITS序列构建的同源树。
[0031] 图3为二孢拟奥德蘑菌丝微观结构照片图。
[0032] 图4为二孢拟奥德蘑子实体形态照片图。
[0033] 图5为二孢拟奥德蘑子实体的孢子印照片图。
[0034] 图6为二孢拟奥德蘑菌盖形态照片图。
[0035] 图7为采用培养基Ⅰ培养时，不同温度对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
[0036] 图8为采用培养基Ⅱ培养时，不同pH对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
[0038] 图10为采用培养基Ⅳ培养时，不同氮源对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
[0039] 图11为采用培养基Ⅰ培养时，不同瓜尔胶含量对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
[0040] 图12为采用培养基Ⅰ培养时，不同氨基酸对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
[0041] 图13为采用培养基Ⅰ培养时，不同维生素对二孢拟奥德蘑菌丝生长的影响结果图。
具体实施方式
[0042] 下面将结合实施方式对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0043] 二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)MesAdm 1是由华南农业大学食品学院应用真菌实验室分离、鉴定、保存。原始菌株由莫美华教授与其研究生采自广西省桂林市猫儿山国家自然保护区。
[0044] 实施例1
[0045] (1)菌种分离
[0046] 选择无开伞、菌柄无皲裂的蘑菇，同时对于有蚂蚁、果蝇幼虫等啃食的幼菇均舍去。用无菌纸或无菌棉擦拭幼菇子实体后，使用无菌镊子挑取内部菌丝，放置于含有链霉素的PDA培养基中，于26℃培养7天，选取具有菌丝长势一致、洁白度高、菌落各处密度一致、周围无杂菌污染等指标的菌落。
[0047] (2)菌种纯化
[0048] 从步骤(1)选取的菌落中挑取目标菌落中的气生菌丝接入新鲜的PDA培养基中，进行菌种纯化，将经过3次纯化后的菌种，转接入斜面试管中，24℃～26℃培养至斜面长满菌丝后获得纯种菌株，进行菌种保藏。菌丝形态与培养特征如图1所示。
[0049] 图1A显示，二孢拟奥德蘑的菌丝生长稠密、色泽洁白，在固体培养基上，有贴紧培养基表面稀疏平铺生长的形态，亦有以接种处为中心呈半球形向外生长的形态，更有外层菌丝较为绵密、接种点周围一圈菌丝稀疏近透明的菌落形态；基内菌丝会分泌黑色物质，越接近接种点黑色物质越多。图1B显示，在液体培养基中，二孢拟奥德蘑悬浮或沉底生长，呈球形，菌丝向外生长呈刺突状，二孢拟奥德蘑菌丝易断裂。
[0050] (3)菌种鉴定
[0051] 将步骤(2)中得到的纯种菌株进行ITS测序，将测序得到的ITS序列与亲缘关系近的种属的ITS序列共同构建同源树，从而获得菌株的分类信息。同源树如图2所示。
[0052] 同源树显示，该菌株与Hymenopellis raphanipes voucher HKAS95782(KX688236.1)和Hymenopellis chiangmaiae isolate TFB4107(GU980122.1)的同源率仅为86％，前三者与Xerula furfuracea strain QXW2446(AF321482.1)的同源率为85％，但是这四个菌株组成的分支与小奥德蘑属的Oudemansiella radicata isolate HKAS42522(AY665179.1)、Hymenopellis furfuracea isolate Q6(KC414260.1)、Xerula sp.HKAS 38707(AY436429.1)和Hymenopellis raphanipes SU41组成的分支同源性高达99％，结合试验菌株形态学，可以得出其为二孢拟奥德蘑(Hymenopellis raphanipes)。该菌株与Hymenopellis raphanipes SU41(CN 105062899B，一株二孢拟奥德蘑菌株及其粗多糖的提取和应用)在进化树上有一定的差别。
[0053] (4)菌种形态学鉴定
[0054] 将步骤(2)中得到的纯种菌株用光学显微镜进行菌丝观察，结果如图3所示。
[0055] 图3A显示，二孢拟奥德蘑的基部菌丝粗大弯曲程度不明显，菌丝尖端部分分支较多且纤长，粗菌丝不易着色，细菌丝易着色。图3B显示，二孢拟奥德蘑气生菌丝存在桥状突起的锁状联合结构，该结构为食用菌的特征结构之一。
[0056] 实施例2
[0058] 称取栽培原材料棉子壳，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，再加入适量石灰水拌匀，使其pH值为8.0，建堆发酵8天，去除棉子壳中的棉酚，同时增加材料的持水性，使材料软化。
[0059] 固体培养基配制：发酵后的棉子壳85.2％、麦麸10.2％、葡萄糖2.6％、硫酸镁0.3％、磷酸二氢钾1.2％、碳酸钙0.5％；含水量60％～75％，pH自然；按质量份配比称取固体培养基，加水拌匀，在加水过程中用搅拌机充分搅拌，使其充分吸收水份，将固体培养基含水量调节至68％，pH 8.5。
[0060] (2)栽培种培育
[0061] 选取干净无破损的工业化出菇瓶作为栽培瓶，将占工业出菇瓶体积84％的固体培养基装瓶，保持松紧度一致，瓶肩无空隙，中间打孔至瓶底，选取与瓶子配对的盖子密封瓶口。将栽培瓶采用高压蒸汽杀菌法(温度121℃、压力1.034MPa条件下灭菌2.5h，栽培瓶搬进冷却室，使料温冷却至30℃左右。采用培育的优质二孢拟奥德蘑二级种接种，接种量为菌料体积的5/100，用橡胶塞封闭瓶口，为防止污染可以采用2～4层报纸包裹瓶塞；接种时将菌球均匀分散在固体培养基表面，避免集中在一起，造成发育缓慢；接种过程中防止发生污染情况，所有相关设备、作业工具、器具及手(或手套)消毒。接种后于30℃的菌种培养室内进行避光培养，培养至菌丝吃透菌料，转入菌丝后熟阶段，二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生黄褐色液体，即食用菌菌种成熟度判断的指标“出黄水”；菌丝生长过程中会产生热量，加上栽培瓶堆放密度高，料内温度约高于室温2～3℃，需经常检查确保发菌料内温度低于32℃，湿度控制在60％～70％，二氧化碳浓度控制在3000ppm以下。
[0062] 根据二孢拟奥德蘑菌丝的吃料比，上述避光培养的培养室内的温度和瓶身翻转情况控制如下：
[0063] 1)培养1天，温度控制在26℃。
[0064] 2)培养5天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°。
[0065] 3)培养5天，温度控制在30℃，第5天瓶身水平翻转180°1～9天。
[0066] 4)培养4天，菌丝吃料占总培养基体积的92％时，温度控制在22℃。
[0067] 5)培养1天，菌丝吃透菌料时，瓶身水平翻转180°，温度控制在26℃，进行后熟阶段的培养。
[0068] 6)培养11天，温度控制在32℃，培养至二孢拟奥德蘑菌丝体表面产生“黄水”，得到无杂菌、成熟的栽培种。
[0069] 7)培养1天，将温度控制在32℃，结束该阶段的培养。
[0070] (3)菌丝扭结
[0071] 将步骤(2)得到的无杂菌、经过后熟的栽培种进行搔菌，搔菌深度为瓶口往下到料面2.0～2.5cm，瓶肩以上到料面1cm左右。搔去老菌后用高压纯净水冲洗瓶口，不再浇水，然后将栽培瓶倒置，放入育菇房，瓶子下垫一层吸水性强透气性好的湿布，保证瓶口环境处的空气湿度，同时需保持足够的通风量，使二氧化碳浓度控制在800ppm。保持黑暗培养，菌丝完全恢复后，通过控制温度和湿度，继续培育至二孢拟奥德蘑菌丝扭结形成原基。
[0072] 菌丝扭结过程中，育菇房内的温度和空气湿度控制如下：
[0073] 1)培养1天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％。
[0074] 2)培养6天，温度控制在24℃，空气湿度控制在90％。
[0075] 3)培养1天，温度控制在30℃，空气湿度控制在90％，使菌丝恢复并防止杂菌污染。
[0076] 4)培养7天，菌丝完全恢复后将温度控制在32℃，空气湿度控制在92％，菌丝形成的菌膜表面产生乳黄色亮点时，原基形成，结束此阶段的培养。
[0077] (4)催蕾
[0078] 将步骤(3)得到的原基继续避光培育，直到出现菇蕾，当菇蕾长至0.3～0.7cm时，取走湿布，将栽培瓶正立放置。
[0079] 催蕾过程中，育菇房内的温度、空气湿度及二氧化碳浓度控制如下：
[0080] 1)培养1天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm。
[0081] 2)培养4天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在1500ppm，菇蕾长至0.3～0.7cm时，结束该阶段的培养，取走湿布，将培养瓶正立放置，转入下一阶段培养。
[0082] (5)生育
[0083] 将步骤(4)得到的菇蕾进行培养；当幼菇有一定数量时，进行疏蕾处理，减少弱菇蕾数量的产生，疏蕾后调整培育条件，促进二孢拟奥德蘑菇体菇体生物量积累，形成灰褐的特征色，当菇伞完全展开且菇帽变为深褐色时，及时采收。
[0084] 生育过程中，育菇房内的温度、空气湿度、二氧化碳浓度、光照时间和强度和控制如下：
[0085] 1)培养3天，温度控制在30℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在700ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h。
[0086] 2)培养1天，进行疏蕾，温度控制在32℃，空气湿度控制在86％，二氧化碳浓度控制在1200ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h。
[0087] 3)培养6天，温度控制在32℃，空气湿度控制在95％，二氧化碳浓度控制在800ppm，光照强度控制在600lx，光照时间为8h，当二孢拟奥德蘑的菇体生长至15cm，生育完毕，及时采收。
[0088] 本实施例采用瓶栽的培育方法栽培二孢拟奥德蘑，子实体如图4所示，子实体孢子印如图5所示。子实体中等至稍大，半球形至渐平展，成熟后期边缘有一定程度的翘起，幼菇至成菇初期时期菌盖中部有一定程度的明显变化，成熟后期似脐状明显，菌盖表面平滑无粘稠物呈灰褐色。菌柄粗0.5～1.2cm，菌盖直径5～12cm，长10～17cm，菌肉白色，具有鸡肉的纤维状，条状纹理明显，成熟后期表面呈灰褐色且有皲裂的细小鳞片从中部向顶部分布在菌柄四周。菌盖形态如图6所示，二孢拟奥德蘑的菌褶近延生，稍密，不等长，菌柄细长，孢子颜色洁白，菌柄颜色从下到菌盖连接处颜色呈渐变状态，下部颜色偏褐色，与菌盖相连处为白色。产量如表1所示。
[0089] 表1二孢拟奥德蘑产量
[0090]
[0091] 实施例3
[0092] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅰ上(麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水定容至1000mL，pH自然)，分别在20℃、22℃、24℃、26℃、28℃和30℃温度下恒温避光培养7天，测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果如图7所示，可以看出二孢拟奥德蘑在20℃～30℃温度范围内均可以生长，其中，在26℃条件下生长速度最快，最适生长温度范围为24℃～26℃，低于22℃和高于28℃时二孢拟奥德蘑菌丝生长缓慢。
[0093] 实施例4
[0094] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅱ中(麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、蒸馏水定容至1000mL)，pH分别控制在pH 4、pH 5、pH 6、pH 7、pH 8，放置在温度恒定为26℃、转速120r/min的摇床中避光培养10天，将菌球沉淀转移至75℃的烘箱中，干燥至恒重，记录干重后的菌球质量，并求出平均每日生长速度。结果如图8所示，二孢拟奥德蘑菌丝的生物量在溶液环境为pH7时最大。
[0095] 实施例5
[0096] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅲ中(碳源15g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、蒸馏水定容至
1000mL，pH自然)，分别用麦芽浸膏、麦芽糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、葡萄糖和木糖作为培养基Ⅲ中的碳源，于26℃生化培养箱中培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。
结果如图9所示，以麦芽浸膏作为碳源，二孢拟奥德蘑菌丝生长最快。
1000mL，pH自然)，分别用麦芽浸膏、麦芽糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、葡萄糖和木糖作为培养基Ⅲ中的碳源，于26℃生化培养箱中培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。
结果如图9所示，以麦芽浸膏作为碳源，二孢拟奥德蘑菌丝生长最快。
[0097] 实施例6
[0098] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅳ中(氮源3g/L、麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、蒸馏水定容至
1000mL，pH自然)，分别用硫酸铵加酵母膏、胰蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、大豆蛋白胨、细菌学蛋白胨作为培养基Ⅲ中的氮源，于26℃生化培养箱中培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果如图10所示，以硫酸铵和酵母膏分别作为最佳的无机氮源和有机氮源，二孢拟奥德蘑菌丝生长最快。
1000mL，pH自然)，分别用硫酸铵加酵母膏、胰蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、大豆蛋白胨、细菌学蛋白胨作为培养基Ⅲ中的氮源，于26℃生化培养箱中培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果如图10所示，以硫酸铵和酵母膏分别作为最佳的无机氮源和有机氮源，二孢拟奥德蘑菌丝生长最快。
[0099] 实施例7
[0100] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅰ中(麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水定容至1000mL，pH自然)，添加瓜尔胶量分别为0％(空白对照)0、0.5％、
1％、2％、3％，于26℃生化培养箱中避光培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。
结果图11所示，培养基中添加0.5％～2％的瓜尔胶对二孢拟奥德蘑的生长有较明显的促进作用。
1％、2％、3％，于26℃生化培养箱中避光培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。
结果图11所示，培养基中添加0.5％～2％的瓜尔胶对二孢拟奥德蘑的生长有较明显的促进作用。
[0101] 实施例8
[0102] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅰ中(麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水定容至1000mL，pH自然)，分别添加0.1mg/L的天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、苏氨酸，同时增加一个PDA空白试验组，于26℃生化培养箱中避光培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果如图12所示，天冬氨酸、丝氨酸、脯氨酸对二孢拟奥德蘑有明显的促进生长作用。
[0103] 实施例9
[0104] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到培养基Ⅰ中(麦芽浸膏5g/L、、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水定容至1000mL，pH自然)，分别添加0.1mg/L的VB1、VB12、VB3、VB6、VB2、VB9、VBD，同时增加一个PDA空白试验组，于26℃生化培养箱中避光培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果图13所示，VB1为最佳的维生素，对于二孢拟奥德蘑菌丝长势有促进作用。
[0105] 实施例10
[0106] 将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝，接种到母种PDA培养基(麦芽浸膏5g/L、麦芽糖10g/L、酵母膏2.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硫酸镁1.7g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二钾1g/L、琼脂20g/L、瓜尔胶5～20g/L、氨基酸0.1mg/L、VB1 0.1mg/L，蒸馏水定容至1000mL，pH 7)中于26℃生化培养箱中避光培养7天。测量菌落直径，计算每日平均生长速度。结果显示，二孢拟奥德蘑的平均生长速度为8.2000±0.2830mm/d。
[0107] 对比例
[0108] 选择未发芽、无霉变、无虫蛀、颗粒饱满、大小均匀的麦粒作培养料。将麦粒用水洗去表面污物、杂质后，浸泡24h，每隔6～8h换一次清水，直至麦粒充分吸水膨胀。煮麦粒，保持水微沸，待麦粒全部变色，颗粒中间无白心(但不要煮烂)时捞出，晾至不再滴水，分装于组培瓶中，在高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌2h。将实施例1步骤(2)中得到的纯种菌丝接种到组培瓶中，于26℃生化培养箱中避光培养7天，测量菌丝的生长长度，计算每日平均生长速度。结果显示，二孢拟奥德蘑的平均生长速度为7.4444±0.1112mm/d。说明母种PDA培养基可明显提高二孢拟奥德蘑的生长速度。
[0109] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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