维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途
阅读：1027发布：2020-05-27
专利汇可以提供维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 医药技术领域，提供了维生素C在制备抑制人 口腔 鳞癌产品中的用途，所述的抑制人口腔鳞癌产品包括 治疗 人口腔鳞癌的药物、 预防 人口腔鳞癌的保健食品或保健饮料。经细胞实验、动物实验证实，维生素C可以抑制人口腔鳞癌细胞的生长，增加人口腔鳞癌细胞的凋亡，同时抑制了裸鼠移植瘤的生长，与 顺铂 合用对 肿瘤 的抑制效果更优，说明维生素C具有抑制人口腔鳞癌的作用。因此，维生素C将成为一种新型的抑制人口腔鳞癌的药物，为预防或治疗人口腔鳞癌提供了新的探索。，下面是维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途专利的具体信息内容。
1.维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途。
2.根据权利要求1所述的维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途，其特征在于，所述的抑制人口腔鳞癌产品包括治疗人口腔鳞癌的药物、预防人口腔鳞癌的保健食品或保健饮料。
3.根据权利要求1所述的维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途，其特征在于：
所述用途为维生素C作为顺铂协同剂的用途。
4.根据权利要求1所述的维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途，其特征在于：
所述的人口腔鳞癌为人口腔鳞状细胞癌。
5.一种抗人口腔鳞癌的药物组合物，其特征在于，包括：维生素C以及药学上可接受的载体。
6.根据权利要求5所述的抗人口腔鳞癌的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为以维生素C作为唯一活性成分或包含维生素C的药物组合物。
7.根据权利要求5所述的抗人口腔鳞癌的药物组合物，其特征在于，在所述药物组合物中，维生素C的含量大于50％。
8.根据权利要求5所述的抗人口腔鳞癌的药物组合物，其特征在于，维生素C按常规药剂学制成各种药物剂型。
9.根据权利要求8所述的维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的应用，其特征在于，所述的药物剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、膏剂、贴剂或注射剂。
维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途
技术领域
背景技术
[0002] 口腔颌面部恶性肿瘤是头颈部常见的恶性肿瘤，其中约90％以上为口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma，OSCC)。口腔鳞癌是全球第八大恶性肿瘤，其发病主要诱因包括吸烟、饮酒和病毒感染。目前口腔鳞癌的主要治疗方法为手术、放化疗和免疫治疗等，对于复发转移和晚期患者，仍是以化疗为主。然而目前经综合治疗后，口腔鳞癌患者的5年生存率仍然维持在40％～50％。因此，寻找新的副作用小、疗效好的药物，具有重要的临床意义。
[0004] 多项研究表明，食用富含抗氧化剂的食物可以降低患某些慢性病的风险。因此，人们对水果、蔬菜、植物中天然存在的抗氧化剂越来越感兴趣。维生素C(Vitamin C，Ascorbic Acid)又叫L-抗坏血酸，L(+)－苏阿糖型－2,3,4,5,6－五羟基－2－己烯酸－4－内酯，相对分子量为176.12，是一种水溶性维生素,是重要的天然抗氧化剂，具有抗氧化、抗炎、提高免疫力等多种生物学作用，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：
[0005]
[0006] Lv等报道了维生素C在肝癌的治疗中具有抗肿瘤活性，维生素C通过SVCT-2摄取增加肝癌细胞内ROS，进而引起DNA损伤和ATP耗竭，导致肝癌细胞凋亡(Lv H,et al.Vitamin C preferentially kills cancer stem cells in hepatocellular carcinoma via SVCT-2.NPJPrecis Oncol.2018.2(1):1)。Du等报道了维生素C还能有效抑制胰腺癌细胞系的生长，诱导其凋亡(Du J,et al.Mechanisms ofascorbate-induced cytotoxicity in pancreatic cancer.Clin Cancer Res.2010.16(2):509-20)。
[0007] 目前尚无文献报道维生素C与抑制人口腔鳞癌相关。
发明内容
[0008] 本发明是为解决上述问题而进行的，目的在于提供维生素C在制备抑制人口腔鳞癌产品中的新用途，同时本发明的目的也在于提供一种以维生素C作为活性成分的药物组合物。
[0009] 发明人经过查阅相关文献，发现维生素C具有抑制肝癌细胞的作用，推测维生素C也可能具有抑制人口腔鳞癌的作用。经发明人反复实验，发现了维生素C具有抑制人口腔鳞癌作用，并且发现维生素C与顺铂合用抑制人口腔鳞癌的作用强于单用顺铂的作用。此外，通过实验，将维生素C给予人口腔鳞癌细胞或移植了人口腔鳞癌细胞的动物，能够增强人口腔鳞癌细胞的凋亡并抑制裸鼠移植瘤的生长，表明维生素C对人口腔鳞癌具有一定的抑制作用。
[0010] 本发明的第一方面，提供了维生素C的新用途，即在制备抑制人口腔鳞癌产品中的用途。
[0011] 具体的，抑制人口腔鳞癌产品包括治疗人口腔鳞癌的药物、预防人口腔鳞癌的保健食品或保健饮料。
[0012] 优选的，该用途为维生素C作为顺铂协同剂的用途。人口腔鳞癌为人口腔鳞状细胞癌。
[0013] 发明人以人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞为实验对象，对维生素C的效果进行验证。结果表明，维生素C能够抑制人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的克隆形成，且该抑制作用具有明显的浓度依赖性；能够显著降低人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的活性，抑制细胞增殖，也呈明显的浓度依赖性和时间依赖性；能明显诱导人口腔鳞癌细胞凋亡，且呈浓度依赖性。
[0014] 随后，通过荷瘤小鼠进行动物实验，结果表明，维生素C组肿瘤体积小于生理盐水对照组，但比顺铂组略大，维生素C和顺铂联合组肿瘤体积最小，差异具有统计学意义(P<0.05)。
[0015] 由此可知，维生素C具备制备治疗人口腔鳞癌的药物的前景。因此，本发明的第二方面提供了一种抗人口腔鳞癌的药物组合物，包括维生素C以及药学上可接受的载体。
[0016] 优选的，该药物组合物为以维生素C作为唯一活性成分或包含维生素C的药物组合物。
[0017] 优选的，在所述药物组合物中，维生素C的含量大于50％wt％，最优为≥98％wt％。
[0018] 在该药物组合物中，维生素C按常规药剂学制成各种药物剂型。如可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、膏剂、贴剂或注射剂。采取口服、外用、注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种)等中的一种或多种给药途径进行人口腔鳞癌及其直接相关疾病的预防、保护或治疗。
[0019] 本发明的有益保障及效果如下：
[0020] 本发明经细胞实验、动物实验证实，维生素C可以抑制人口腔鳞癌细胞的生长，增加人口腔鳞癌细胞的凋亡，同时抑制了裸鼠移植瘤的生长，与顺铂合用对肿瘤的抑制效果更优，说明维生素C具有抑制人口腔鳞癌的作用。因此，维生素C将成为一种新型的抑制人口腔鳞癌的药物。
[0022] 图1为本发明实施例中维生素C对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的克隆形成抑制实验结果；其中，A为培养皿克隆实验结果，B为不同浓度的维生素C的抑制效果对比。
[0023] 图2为本发明实施例中维生素C对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的增殖抑制结果；其中，A为经维生素C干预48h后不同浓度维生素C对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制效果；B为经维生素C干预72h后不同浓度维生素C对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制效果。
[0024] 图3为本发明实施例中维生素C对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞凋亡影响图；其中，A为流式细胞术检测结果，B为不同浓度的维生素C对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞凋亡促进效果对比。
[0025] 图4为本发明实施例中维生素C对裸鼠移植瘤生长的影响；其中，A为不同实验组肿瘤尺寸实测结果，B为柱状分析结果。
具体实施方式
[0026] 现结合实施例对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
[0027] 本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按体积计算。
[0028] 实施例1.维生素C对人口腔鳞癌细胞生长的影响
[0029] 1.1实验材料
[0030] 维生素C，购自上海生工生物工程股份有限公司。
[0031] 人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞系均购自美国模式培养物集存库(American type culture collection，ATCC)。
[0032] 1.2实验方法
[0033] 1.2.1克隆形成抑制实验
[0034] 分别取CAL27、SCC9、SCC25的对数生长期细胞，接种于6孔板，每孔细胞数为150个，置于5％CO2的37℃培养箱中培养。分别设置一个不加药对照组和两个药物干预组，药物干预组中维生素C浓度分别为0.3mg/ml、0.6mg/ml，每组3个复孔。
[0036] 1.2.2CCK8试剂检测维生素C对人口腔鳞癌细胞增殖抑制的作用
[0037] 分别取CAL27、SCC9、SCC25的对数生长期细胞，接种于96孔板，每孔100μL，细胞数3
为4×10个。分别设置一个不加药对照组、五个药物干预组和1个空白组，药物干预组浓度分别为0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml，每组5个复孔。
为4×10个。分别设置一个不加药对照组、五个药物干预组和1个空白组，药物干预组浓度分别为0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml，每组5个复孔。
[0038] 分别于加药48h、72h后，于每孔加入10μLCCK8溶液，培养箱中继续培养2h，酶标仪检测在450nm处的吸光度值。计算抑制率，以抑制率为纵坐标，药物浓度为横坐标。抑制率＝[(对照孔-干预孔)/(对照孔-空白孔)]。
[0039] 1.2.3流式细胞术检测细胞凋亡
[0040] 分别取CAL27、SCC9、SCC25的对数生长期细胞，以1.0×105个/ml的密度接种于6孔板中，每孔2ml。分别设置一个不加药对照组和两个药物干预组，药物干预组浓度分别为0.3mg/ml、0.6mg/ml，每组3个复孔。
[0041] 24h细胞贴壁生长后，移除培养基，药物干预组分别加入含有上述浓度维生素C的细胞培养液，共同孵育48h后，消化细胞并离心收集，按AnnexinⅤ-PI凋亡检测试剂盒说明书操作，分别加入AnnexinⅤ-FITC和PI Staining Solution混匀，用流式细胞仪检测，得到细胞凋亡率。
[0042] 1.3统计学处理
[0044] 1.4实验结果
[0045] 1.4.1克隆形成抑制实验
[0046] 根据图1，经维生素C干预后，人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的克隆形成率较正常对照组均显著减少，差异具有统计学意义(P<0.05)。实验结果表明维生素C可抑制人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的克隆形成，且该抑制作用具有明显的浓度依赖性。
[0047] 1.4.2CCK8试剂检测维生素C对人口腔鳞癌细胞增殖抑制的作用
[0048] 采用CCK8试剂检测维生素C对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞增殖能力的影响。根据图2，经维生素C干预48h和72h后，人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的抑制率均较对照组显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。实验结果表明维生素C可显著降低人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的活性，抑制人口腔鳞癌细胞增殖，且该抑制作用具有明显的浓度依赖性和时间依赖性。
[0049] 1.4.3流式细胞术检测各组细胞凋亡情况
[0050] 对人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞进行了凋亡检测。根据图3，经维生素C干预后，人口腔鳞癌CAL27、SCC9、SCC25细胞的凋亡率较正常对照组均显著增加，差异具有统计学意义(P<0.05)。实验结果表明维生素C能明显诱导人口腔鳞癌细胞凋亡，且呈浓度依赖性。
[0051] 实施例2.维生素C对裸鼠移植瘤生长的影响
[0052] 2.1实验材料
[0053] 维生素C，购自上海生工生物工程股份有限公司。
[0055] 2.2实验方法
[0056] 取人口腔鳞癌CAL27细胞对数生长期细胞，0.25％胰蛋白酶消化后收集细胞，PBS吹打细胞制成细胞悬液，调整悬液密度为8×107个/ml。分别于16只裸鼠左腋部皮下注入100ul细胞悬液，当肿瘤大小长至50mm3开始腹腔注射药物。将裸鼠随机分为4组，每组4只。
各组分别注射生理盐水(100ul，2次/天)、维生素C(4g/kg，2次/天)、顺铂(4mg/kg，3次/周)、维生素C+顺铂(同前)。在注射药物的第22天时，测量每组肿瘤的最终大小。
各组分别注射生理盐水(100ul，2次/天)、维生素C(4g/kg，2次/天)、顺铂(4mg/kg，3次/周)、维生素C+顺铂(同前)。在注射药物的第22天时，测量每组肿瘤的最终大小。
[0057] 2.3统计学处理
[0058] 实验数据均以均数±标准差 表示，各组间数据比较用SPSS 17.0软件包，采用单因素方差分析(ANOVA)进行显著性分析。
[0059] 2.4实验结果
[0060] 将人口腔鳞癌CAL27细胞移植于裸鼠腋下后，建立人口腔鳞癌裸鼠皮下种植瘤模型。我们使用顺铂作为对照来更好地评价维生素C的疗效。实验结果表明，维生素C组肿瘤体积小于生理盐水对照组，但比顺铂组大，维生素C和顺铂联合组肿瘤体积最小，差异具有统计学意义(P<0.05)(图4)。结果说明维生素C具有抑制人口腔鳞癌的作用，并且维生素C与顺铂合用抑制人口腔鳞癌的作用强于单用顺铂的作用，维生素C能够增强顺铂的抑制人口腔鳞癌的作用。
[0061] 从以上实验可以得出如下结论：经维生素C干预后，人口腔鳞癌细胞增殖受到明显抑制，细胞凋亡显著增加，裸鼠移植瘤的生长受到抑制，且能增加顺铂化疗药的疗效。结果表明，维生素C具有抑制人口腔鳞癌的作用。
[0062] 以上实验结果说明，维生素C具有抑制人口腔鳞癌作用，可将维生素C制成生物体抗人口腔鳞癌药物，并用可行的剂量和剂型对生物体进行干预，以达到预防与治疗人口腔鳞癌的目的。这些均属于本发明的保护范围。
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