从川楝树中提取川楝素的方法 |
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| 申请号 | CN201710888535.0 | 申请日 | 2017-09-27 | 公开(公告)号 | CN107474100A | 公开(公告)日 | 2017-12-15 |
| 申请人 | 右江民族医学院; | 发明人 | 黄锁义; 黄与路; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开一种从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤：将川楝树的根皮和树皮 粉碎 ，用 水 浸没后加入复合酶酶解，酶解液采用高压脉冲 电场 提取，得到的提取液中加入 澄清剂 进行除杂，再利用 活性炭 进行脱色，浓缩得到浸膏，浸膏上大孔 吸附 树脂 ，得到的洗脱液减压浓缩得粗提物，粗提物溶解后，加入石油醚沉淀，沉淀经水洗干燥，再次溶解及干燥，得川楝素。本发明通过复合酶预处理、高压 脉冲电场 提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。 | ||||||
| 权利要求 | 1.从川楝树中提取川楝素的方法，其特征在于，包括以下步骤： |
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| 说明书全文 | 从川楝树中提取川楝素的方法技术领域[0001] 本发明涉及药物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从川楝树中提取川楝素的方法。 背景技术[0002] 川楝（Melia toosendan Sieb. et Zucc. ），为楝属植物川楝亚种，落叶乔木，高可达10米。川楝素是从楝属植物的根皮、枝皮和果实中提取出的四环三萜类化合物。川楝素具有驱虫、杀虫等功效，同时具有非常好的抗肉瘤效应，能够诱导细胞分化、凋亡并抑制人和动物的多种肿瘤细胞繁殖。目前，川楝素的提取方法主要由浸提法、索氏提取法、超声波提取法、微波辅助提取法和超临界二氧化碳萃取法等。 [0003] 中国专利2013106181608公开了一种从川楝皮中提取川楝素的方法，采用萃取和重结晶的方法获得。该方法简单，但是提取消耗的时间长，效率低，不能适用工业化生产的需要。中国专利201310423688X公开了一种从苦楝皮中提取川楝素的方法，是将干燥成熟的苦楝皮洗干净后用粉碎机打碎，磨成粉末，烘干，加入60% 的乙醇溶剂；调节溶液pH 值4 6，~加入纤维素酶酶解；将所述提取液置于双频超声提取器中，得到酶解液；将酶解液高温灭活，得到提取液，离心，取上清液；氯仿萃取，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，加入乙醇，加热溶解，滴入石油醚直到混合物变成混浊物，静置，析出淡黄色固体，即为川楝素。该方法通过酶解和双频超声波提取，虽然能提高川楝素的含量，但是分离纯化的效果不足，得到的川楝素纯度低。 发明内容[0004] 为了解决上述问题，本发明提供一种从川楝树中提取川楝素的方法。本发明通过复合酶预处理、高压脉冲电场提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。 [0005] 本发明通过以下技术方案实现：从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤： （1）：将川楝树的根皮和树皮洗净，晾干，粉碎； （2）：用水将步骤（1）粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01-0.05%的复合酶，酶解1- 3h，得酶解液； （3）：将步骤（2）的酶解液与无水乙醇按料液比1:15-20混合，放入高压脉冲电场中提取 6-12min，得粗提液； （4）：向步骤（3）的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.1-0.3g/L活性炭进行脱色10-20min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏； （5）：将步骤（4）的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物； （6）：将步骤（5）的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品； （7）：将步骤（6）的川楝素粗品用3-6倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。 [0006] 作为本发明的进一步说明，步骤（1）所述川楝树的根皮和树皮粉碎至60-100目。 [0007] 作为本发明的进一步说明，步骤（2）所述复合酶为纤维素酶、半纤维素没和果胶酶以任意比例混合。 [0008] 作为本发明的进一步说明，步骤（3）所述高压脉冲电场的电场强度为25-40kV/cm，脉冲数为6-10个。 [0009] 作为本发明的进一步说明，步骤（4）所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为2-5g/L。 [0010] 作为本发明的进一步说明，步骤（5）所述甲醛为60-100%甲醛。 [0011] 与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：1、本发明将川楝树粉碎后的物料，用复合酶进行处理，使物料细胞壁被破坏，再结合高压脉冲电场提取，脉冲电场产生的磁场与脉冲电场交替作用，使物料的细胞膜透性增加，振荡加剧，最终使细胞膜内物质流出。本发明通过酶解技术和高压脉冲电场技术，能够使川楝素溶出率达到最大，有效提高川楝素的提取率，而且提取时间较常规提取时间大大缩短。 [0012] 2、本发明引入天然中药澄清剂KBT-ZTC，对在乙醇提取的过程中存在的蛋白质、油脂、淀粉等大分子杂质，起到良好的澄清作用；提取液经过活性炭脱色，去除了色素，为后续分离纯化提供良好的基础。 [0013] 3、本发明利用大孔树脂对川楝素进行分离提纯，将川楝素从粗提液中分离，减少川楝素中杂质的含量。 [0014] 4、本发明通过复合酶预处理、高压脉冲电场提取、澄清剂澄清、活性炭脱色、大孔吸附树脂吸附、石油醚沉淀等步骤对川楝素进行提取，能够有效提高川楝素的纯度和提取率，提取得到的川楝素得率高，杂质少，纯度高。 [0015] 5、本发明川楝素的提取率为1.3-1.6mg/g，纯度大于96%。 具体实施方式[0016] 下面将结合具体实施例对本发明进一步详细说明，但不限于本发明的保护范围。 [0017] 实施例1从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤： （1）：将川楝树的根皮和树皮洗净，晾干，粉碎至60目； （2）：用水将步骤（1）粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01%的复合酶，酶解3h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素没和果胶酶以任意比例混合； （3）：将步骤（2）的酶解液与无水乙醇按料液比1:15混合，放入高压脉冲电场中提取 12min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为25kV/cm，脉冲数为6个； （4）：向步骤（3）的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为2g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.3g/L活性炭进行脱色10min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏； （5）：将步骤（4）的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用60%甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物； （6）：将步骤（5）的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品； （7）：将步骤（6）的川楝素粗品用3倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。 [0018] 通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.31%，纯度为96.4%。 [0019] 实施例2从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤： （1）：将川楝树的根皮和树皮洗净，晾干，粉碎至100目； （2）：用水将步骤（1）粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.01-0.05%的复合酶，酶解1h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素没和果胶酶以任意比例混合； （3）：将步骤（2）的酶解液与无水乙醇按料液比1:20混合，放入高压脉冲电场中提取 6min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为40kV/cm，脉冲数为10个； （4）：向步骤（3）的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为5g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.1g/L活性炭进行脱色20min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏； （5）：将步骤（4）的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用100%甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物； （6）：将步骤（5）的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品； （7）：将步骤（6）的川楝素粗品用6倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。 [0020] 通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.40%，纯度为96.5%。 [0021] 实施例3从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤： （1）：将川楝树的根皮和树皮洗净，晾干，粉碎至80目； （2）：用水将步骤（1）粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.02%的复合酶，酶解2h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素没和果胶酶以任意比例混合； （3）：将步骤（2）的酶解液与无水乙醇按料液比1:18混合，放入高压脉冲电场中提取 10min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为30kV/cm，脉冲数为8个； （4）：向步骤（3）的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为3g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.2g/L活性炭进行脱色15min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏； （5）：将步骤（4）的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用75%甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物； （6）：将步骤（5）的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品； （7）：将步骤（6）的川楝素粗品用5倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。 [0022] 通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.56%，纯度为97.1%。 [0023] 实施例4从川楝树中提取川楝素的方法，包括以下步骤： （1）：将川楝树的根皮和树皮洗净，晾干，粉碎至80目； （2）：用水将步骤（1）粉碎后的物料浸没，加入物料重量0.04%的复合酶，酶解2h，得酶解液；所述复合酶为纤维素酶、半纤维素没和果胶酶以任意比例混合； （3）：将步骤（2）的酶解液与无水乙醇按料液比1:17混合，放入高压脉冲电场中提取 8min，得粗提液；所述高压脉冲电场的电场强度为35kV/cm，脉冲数为9个； （4）：向步骤（3）的粗提液中加入天然中药澄清剂KBT-ZTC，所述天然中药澄清剂KBT-ZTC为科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂，加入量为4g/L；当絮凝物不再增加时，过滤，滤液中加入0.3g/L活性炭进行脱色15min，离心，上清液旋转蒸发浓缩，得浸膏； （5）：将步骤（4）的浸膏用乙醇溶解，溶液经大孔吸附树脂吸附，解吸时先用蒸馏水进行除杂，再用80%甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，减压浓缩，得粗提物； （6）：将步骤（5）的粗提物用甲醇溶解，再加入石油醚至溶液变浑浊，静置过夜，将析出的沉淀用蒸馏水洗涤，烘干，得川楝素粗品； （7）：将步骤（6）的川楝素粗品用4倍重量无水乙醇溶解，旋转蒸发，回收乙醇，得川楝素纯品。 [0024] 通过高效液相色谱检测，本实施例川楝素的提取率为1.53%，纯度为97.0%。 |
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