一种雷公藤甲素的提取方法 |
|||||||
| 申请号 | CN201510912473.3 | 申请日 | 2015-12-11 | 公开(公告)号 | CN105348366A | 公开(公告)日 | 2016-02-24 |
| 申请人 | 许志强; | 发明人 | 许志强; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取：将雷公藤药材 粉碎 至20-30目，加入 乙醇 、 水 、1-辛基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，加入乙酸乙酯回流提取2-5次，每次提取1-1.5h，合并滤液，浓缩，加入二氯甲烷搅拌，加入NaOH溶液洗涤，浓缩；上正相 硅 胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合 溶剂 、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液；浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻 温度 为-20~-10℃，冷冻压 力 为60-100Pa， 升华 温度为55-60℃，解析温度为66-69℃，得到雷公藤甲素。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种雷公藤甲素的提取方法，其特征在于，采用如下工艺提取： |
||||||
| 说明书全文 | 一种雷公藤甲素的提取方法技术领域[0001] 本发明涉及抗癌药物技术领域，尤其涉及一种雷公藤甲素的提取方法。 背景技术[0002] 雷公藤甲素又称雷公藤内酯、雷公藤内酯醇，是从卫矛科植物雷公藤的根、叶、花及果实中提取的一种环氧二萜内酯化合物，与雷公藤碱、雷公藤次碱、雷公藤晋碱、雷公藤春碱、雷公藤增碱和雷公藤明碱等生物碱构成了雷公藤提取物的主要活性成分，难溶于水，易溶于甲醇、二甲基亚砜、无水乙醇、乙酸乙酯、氯仿等。具有抗炎及免疫抑制作用。 [0003] 大量体内和体外的研究证明，本品对多种癌症如白血病、乳腺癌、胰腺癌及肺癌等均有良好的抗肿瘤活性。最近的研究发现，雷公藤甲素除了特异地影响某些蛋白和信号通路以外，还会抑制广泛的基因转录，但其作用机理有待进一步明确。 [0004] 因为雷公藤甲素在植物中含量极低，目前提取效率低，步骤多，成本高，且对操作人员毒性大。 发明内容[0006] 本发明提出了一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取：S1、按重量份将20-50份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入60-100份乙醇、20-100份 2 水、15-40份1-辛基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度30-50W/cm，超声频率40-55kHz，超声温度为70-80℃，超声时间为100-150min； S2、加入100-200份乙酸乙酯回流提取2-5次，每次提取1-1.5h，合并滤液，浓缩得到浓度为5-10wt%的浸膏，加入20-60份二氯甲烷搅拌20-50min，搅拌温度为40-50℃，加入 20-90份浓度为1.2-2moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-20--10℃，冷冻压力为60-100Pa，升华温度为 55-60℃，解析温度为66-69℃，得到雷公藤甲素。 [0007] 优选地，在S1中，按重量份将40-43份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入80-90份乙醇、50-80份水、30-35份1-辛基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度2 40-46W/cm，超声频率50-53kHz，超声温度为72-76℃，超声时间为120-130min。 [0008] 优选地，在S2中，加入150-180份乙酸乙酯回流提取3-4次，每次提取1-1.5h。 [0009] 优选地，在S2中，合并滤液，浓缩得到浓度为6-6.8wt%的浸膏，加入40-50份二氯甲烷搅拌30-36min，搅拌温度为46-48℃，加入40-60份浓度为1.4-1.7moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩。 [0010] 优选地，在S4中，浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-14--12℃，冷冻压力为80-90Pa，升华温度为56-58℃，解析温度为67-68℃，得到雷公藤甲素。 [0011] 优选地，所述的一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取：S1、按重量份将40-43份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入80-90份乙醇、50-80份水、 2 30-35份1-辛基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度40-46W/cm，超声频率50-53kHz，超声温度为72-76℃，超声时间为120-130min； S2、加入150-180份乙酸乙酯回流提取3-4次，每次提取1-1.5h，合并滤液，浓缩得到浓度为6-6.8wt%的浸膏，加入40-50份二氯甲烷搅拌30-36min，搅拌温度为46-48℃，加入 40-60份浓度为1.4-1.7moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-14--12℃，冷冻压力为80-90Pa，升华温度为 56-58℃，解析温度为67-68℃，得到雷公藤甲素。 [0012] 本发明，步骤少、操作简便，大大降低了雷公藤甲素生产成本，提取分离效率高，其在人体内的稳定性和水溶性，对XPB蛋白亚基的结合能力强，本发明主要应用肿瘤治疗，特别是与铂金类抗癌药物对癌症的联合治疗中发挥作用。 [0013] 本发明制品可提高铂金类抗癌药物对癌细胞的杀伤效率。采用上述提取工艺制备的雷公藤甲素，通过合理控制各工艺参数与物料比例，可极大地提高铂金类抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤效率减少肿瘤细胞对铂金类抗癌药物的抗药性，提高肿瘤病人的治疗效果和生活质量，因为联合治疗所需的铂金类抗癌药物剂量的减少，其副作用会有显著降低，药品上的费用也会有所减少。本发明制品可有效增强铂金类抗癌药物肿瘤细胞杀伤力但不产生其他副作用，且工艺步骤少，成本较低，对操作人员的副作用小，便于不规模制备。 具体实施方式[0014] 实施例1一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取： S1、按重量份将20份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入100份乙醇、20份水、40份1-辛 2 基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度30W/cm，超声频率55kHz，超声温度为70℃，超声时间为150min； S2、加入100份乙酸乙酯回流提取5次，每次提取1h，合并滤液，浓缩得到浓度为10wt%的浸膏，加入20份二氯甲烷搅拌50min，搅拌温度为40℃，加入90份浓度为1.2moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-10℃，冷冻压力为60Pa，升华温度为60℃，解析温度为66℃，得到雷公藤甲素。 [0015] 实施例2一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取： S1、按重量份将50份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入60份乙醇、100份水、15份1-辛 2 基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度50W/cm，超声频率40kHz，超声温度为80℃，超声时间为100min； S2、加入200份乙酸乙酯回流提取2次，每次提取1.5h，合并滤液，浓缩得到浓度为 5wt%的浸膏，加入60份二氯甲烷搅拌20min，搅拌温度为50℃，加入20份浓度为2moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-20℃，冷冻压力为100Pa，升华温度为55℃，解析温度为69℃，得到雷公藤甲素。 [0016] 实施例3一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取： S1、按重量份将40份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入90份乙醇、50份水、35份1-辛 2 基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度40W/cm，超声频率53kHz，超声温度为72℃，超声时间为130min； S2、加入150份乙酸乙酯回流提取4次，每次提取1h，合并滤液，浓缩得到浓度为 6.8wt%的浸膏，加入40份二氯甲烷搅拌36min，搅拌温度为46℃，加入60份浓度为1.4moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-12℃，冷冻压力为80Pa，升华温度为58℃，解析温度为67℃，得到雷公藤甲素。 [0017] 实施例4一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取： S1、按重量份将43份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入80份乙醇、80份水、30份1-辛 2 基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度46W/cm，超声频率50kHz，超声温度为76℃，超声时间为120min； S2、加入180份乙酸乙酯回流提取3次，每次提取1.5h，合并滤液，浓缩得到浓度为 6wt%的浸膏，加入50份二氯甲烷搅拌30min，搅拌温度为48℃，加入40份浓度为1.7moL/LNaOH溶液洗涤，浓缩； S3、上正相硅胶柱，依次用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合溶剂、甲醇洗脱，浓缩洗脱液，上正相硅胶柱，用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱液； S4、浓缩，静置析晶，冷冻，冷冻温度为-14℃，冷冻压力为90Pa，升华温度为56℃，解析温度为68℃，得到雷公藤甲素。 [0018] 实施例5一种雷公藤甲素的提取方法，采用如下工艺提取： S1、按重量份将41份雷公藤药材粉碎至20-30目，加入86份乙醇、72份水、33份1-辛 2 基-3-甲基咪唑氯盐混合均匀后进行超声，超声功率密度44W/cm，超声频率52kHz，超声温度为74℃，超声时间为126min； S2、加入175份乙酸乙酯回流提取3次，每次提取1.2h，合并滤液，浓缩得到浓度为 |
||||||
