在药物制剂领域，通过冻干生产制剂的方法被广泛利用。然而，由 于碳青霉烯化合物在储存过程中容易化学分解，因此经常需要采取措施 以提供具有充分稳定性的制剂。
非专利文献1公开了一种帕尼培南(panipenem)和倍他米隆 (betamipron)按1:1(重量比例)配制的冻干制剂，帕尼培南是碳青 霉烯抗生素，具有下式表示的1-乙酰亚氨基吡咯烷结构：
化学式1：

和，倍他米隆是一种有机阴离子转运抑制剂。而且，该文献还公开了与 氯化钠一起配制提高帕尼培南在冻干制剂中的稳定性。
另一方面，专利文献1公开了一种冻干制剂，其混合了下式表示的 1-甲基碳青霉烯抗生素：
化学式2：

和无机盐(氯化钠)，并且实施例的表1公开了在不用糖类配制制剂的 情况下，用氯化钠配制降低了冻干制剂的稳定性。
相应地，用无机盐例如氯化钠配制制剂是提高还是降低冻干制剂的 稳定性，抑或对于稳定性几乎没有影响，将根据活性成分碳青霉烯化合 物的类型和其他生产条件而改变。因此，这是本领域技术人员不能预测 的，只有在进行了实验之后才可以理解。
(非专利文献1)Antibiotics & Chemotherapy Vol.10，NO.7， (1333-1341)89-97，1994
(专利文献1)日本专利申请(kokai)No.Hei8-231398

本发明要解决的技术问题
在对以包含1-烷基吡咯烷结构的特定碳青霉烯化合物或其盐作为 活性成分的稳定的冻干制剂进行各种研究所得结果的基础上，本发明的 发明人发现通过加入氯化钠可以提高稳定性，并且碳青霉烯化合物或其 盐可在长期储存中保持稳定性，因此导致本发明的完成。
解决问题的方式
本发明是一种包含碳青霉烯化合物和氯化钠的冻干制剂，所述碳青 霉烯化合物是(1R，5S，6S)-6-[(1R)-1-羟乙基]-1-甲基-2-[(2S，4S) -2-[(3S)-3-(2-胍基乙酰基氨基)吡咯烷-1-基羰基]-1-甲基吡咯烷-4-基 硫]-1-碳青霉-2-烯-3-羧酸(下文称作化合物(I))或其可药用盐。
另外，本发明是一种生产冻干制剂的方法，包括将化合物(I)或其 可药用盐的水溶液在氯化钠的存在下的冻干化。
如果必要，本发明的化合物(I)可被转化为可药用盐。
在碳青霉烯化合物(I)与酸性化合物形成盐的例子中，所述酸性化 合物可以是例如无机酸，例如氢氟酸，盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸， 硝酸，磷酸或碳酸；有机羧酸，例如甲酸，乙酸，三氟乙酸，草酸或酞 酸；或有机磺酸，例如甲磺酸，三氟甲磺酸，苯磺酸或对甲苯磺酸；优 选为无机酸，并且更优选盐酸，硫酸或碳酸。
而且，本发明的化合物(I)具有羧基基团，因此可以与碱性物质成 盐。所述盐可以是，例如，碱金属盐例如钠盐，钾盐或锂盐；碱土金属 盐例如钙盐或镁盐；或铵盐，优选是锂盐，钠盐，钾盐或镁盐。
此处，当本发明的化合物(I)暴露于空气进行从水溶液冻干或重结 晶时，它可能吸收湿气，可能发生吸水量增加，并且可能产生水合物。 所述水合物也包括在本发明中。
另外，本发明的化合物(I)吸收特定类型的溶剂并形成溶剂化物的 例子，所述溶剂化物也包括在本发明中。
本发明的化合物(I)是公开于日本专利申请(kokai)No.Hei 10-204086和日本专利申请(Kokai)No.Hei 11-071277中的化合物， 具有对于宽范围的细菌包括革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌强的抗 微生物活性。
pH越低(酸性越强)，本发明的化合物(I)在水中的溶解度越高。 另一方面，当水溶液接近中性时，溶解度变低。测量化合物(I)的溶解 度的方法描述于下面。化合物(I)的溶解度足以满足在pH为7或更低 的条件下配制的要求，并且随着pH的降低溶解度提高。
测量化合物(I)的溶解度的方法：
化合物(I)(使得水溶液中化合物(I)的浓度为300mg/g的量) 在烧杯中称重。添加15mL冷却到5℃的注射用水，并且利用搅拌器在 冰冷条件下搅拌溶液30分钟。搅拌时，通过逐滴添加1N的盐酸或1N 的氢氧化钠水溶液而调节至预定的pH，保持该pH。搅拌完成之后，利 用过滤滤器(例如，Ekicrodisc 0.45μm HT-Tuffryn，Gelman Science Japan， Ltd.)进行过滤，通过定量HPLC法测量滤液中化合物(I)的量，并且 由此获得化合物(I)的溶解度，所述HPLC方法类似于后面描述的测试 实施例1。
在本发明中，不特别限制添加的氯化钠的量，其下限可以是相对于 化合物(I)0.1当量(mol)，优选0.5当量(mol)，更优选0.7当量 (mol)，上限可以是相对于化合物(I)2.5当量(mol)，优选2.0当 量(mol)，更优选1.8当量(mol)。此处，若添加的氯化钠的量太大， 则担心冻干制剂质量会降低(外观差)例如产生冻干产品裂缝(冻干块)。
本发明的效果
本发明的冻干制剂与不包含氯化钠的冻干制剂相比具有高储存稳 定性，甚至在长期的储存过程中，活性成分的保持比例也很高。而且， 非常有利的是在使用时添加注射液即能快速溶解。
实施本发明的最佳方式
本发明的活性成分化合物(I)，可根据日本专利申请(kokai)No. Hei10-204086，日本专利申请(Kokai)No.Hei 11-071277，日本专利申 请(kokai)No.Hei 11-315021和日本专利申请(Kokai)No.2002-212183 中公开的方法，或以这些为基础的方法生产。
本发明的冻干制剂可通过以下方法生产：通过在适当的水溶剂例如 注射用水中溶解化合物(I)或其可药用盐和氯化钠制备水溶液(总体溶 液)，然后通过常规方法冻干总体溶液。特别地，本发明的冻干制剂可 通过以下方法生产：通过在适当的水溶剂例如注射用水中溶解化合物 (I)、氯化钠和必要时需添加的其他添加剂而制备水溶液(总体溶液)， 然后无菌过滤总体溶液并且将滤液装入容器例如小瓶或安瓿，然后冻 干。另外，所述制剂还可通过以下方法生产：无菌过滤总体溶液，然后 冻干滤液获得冻干粉末，然后将粉末装入容器例如小瓶或安瓿。或者， 粉末可作为试剂盒制剂而被填装。
在前述生产方法中，应该考虑化合物(I)的溶解度，优选利用下述 pH调节剂调节总体溶液的pH，使其满足下限pH为5.5，优选6.0，更 优选6.1，上限pH为7.0，优选6.6，更优选6.5。
另外，如果必要时可以添加本领域技术人员可获得的用于制剂的添 加剂，例如赋形剂，稳定剂，抗氧化剂，助溶剂，缓冲剂，pH调节剂， 等渗化试剂，和/或溶解剂，加，然后冻干。
本发明的赋形剂可以是，例如，糖类例如纯化的蔗糖，乳糖，麦芽 糖，海藻糖和甘露醇；葡聚糖；支链淀粉；磷酸盐衍生物例如磷酸钙； 碳酸盐衍生物例如碳酸钙；或硫酸盐衍生物例如硫酸钙，优选糖类，更 优选乳糖。
本发明的稳定剂可以是例如，糖类例如葡萄糖或纯化的蔗糖；乙二 胺四乙酸例如乙二胺四乙酸钠或乙二胺四乙酸四钠；对氧苯甲酸酯例如 对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；醇例如氯丁醇，苄基醇或苯乙 基醇；苯扎氯铵；酚类例如苯酚或甲酚；硫柳汞；乙酸酐；或山梨酸， 优选乙二胺四乙酸，更优选乙二胺四乙酸钠。
本发明的抗氧化剂可以是，例如，维生素例如L-抗坏血酸，生育酚 乙酸酯或维生素E；亚硝酸钠；硫酸氢钠；硫酸钠；乙二胺四乙酸例如 乙二胺四乙酸钠或乙二胺四乙酸四钠，优选乙二胺四乙酸，更优选乙二 胺四乙酸钠。
本发明的溶解辅助剂可以是，例如，非离子表面活性剂例如丙二醇， 聚氧乙烯-硬化的蓖麻油或聚山梨酸酯80，优选聚山梨酯80。
本发明的缓冲剂可以是，例如，乙酸，磷酸盐例如磷酸，磷酸氢钠 或磷酸二氢钾；或柠檬酸，优选磷酸，更优选磷酸氢钠。
本发明的pH调节剂可以是，例如，柠檬酸；乙酸；氢氧化钠；盐 酸；碳酸氢钠；磷酸盐例如磷酸，磷酸氢钠或磷酸二氢钾，优选氢氧化 钠或盐酸，更优选盐酸。
本发明的等渗化试剂可以是，例如，盐例如氯化钠或氯化钾；糖类 例如葡萄糖或蔗糖；或甘油，优选糖类，更优选蔗糖。
本发明的溶解剂可以是，例如，用于注射的溶解液体，例如注射用 水，生理盐溶液或葡萄糖溶液，优选注射用水。
冻干制剂可例如根据下列步骤生产。本发明的冻干制剂的生产不限 于这些步骤。
(1)总体溶液(当总量为100mL时)
化合物(I)和氯化钠在容器中称重。容器被冰冷却，然后添加事先 冷却到5℃的30mL注射用水。通过搅拌使化合物(I)分散并且氯化钠 溶解。在冰冷条件下搅拌时逐滴添加事先冷却的盐酸到混合物中而使化 合物(I)完全溶解。而且，使用事先冷却的盐酸调节pH，如果必要的 话，使用事先冷却的氢氧化钠水溶液调节pH。事先冷却的注射用水在 冰冷条件下添加到溶液中以使得总量成为100mL。获得的溶液无菌过滤 以产生总体溶液。
在前述步骤中，盐酸浓度通常是0.4到20N，优选0.75到5N。
在前述步骤中，氢氧化钠的浓度通常是0.4到10N，优选0.75到5N。
本发明的总体溶液的pH通常是5.5到7.0，优选6.0到6.6，更优选 6.1到6.5。
(2)冻干产品
将(1)中获得的总体溶液填装至小瓶然后使水升华制成冻干产品。 通常，冻干可仅仅通过初次干燥步骤而实施，或通过初次干燥步骤除去 游离水和二次干燥步骤除去不能被初次干燥步骤除去的湿气和结合水 而实施。此处，冻干该总体溶液时的最佳条件应考虑质量和生产时间。 该总体溶液可通过在-50℃到-40℃下冷冻干燥，然后在35℃到55℃(优 选40℃到50℃)的搁板温度下在高真空条件下(10Pa或更低，优选5Pa 或更低)实施初步干燥步骤。考虑到生产机器的质量一致性应进一步优 选控制恰当的温度和真空度。例如，本制剂是在5Pa到20Pa的真空度 和-20℃到25℃的搁板温度的初次干燥条件下冻干，然后维持高真空条 件(10Pa或更低，优选5Pa或更低)和35℃到55℃的搁板温度(优选 40℃到50℃)的二次干燥条件。
在前述步骤中，对于干燥时间没有特别限制，其可根据小瓶的大小 和填装的总体溶液的量而改变。此处，干燥时间是考虑到质量和生产时 间而最优化的，通常是5小时到1周。
在本发明的生产冻干制剂的方法中，既可单独实施初次干燥步骤也 可实施初次干燥步骤和二次干燥步骤的组合；然而，当考虑质量一致性 时，优选初次干燥步骤和二次干燥步骤的组合。
实施例
本发明将根据测试实施例更详细地描述；然而，本发明不应限于此。
测试实施例1：处方1到3的冻干产品
作为活性成分的化合物(I)(11.5g)和氯化钠(无，545mg或1.09g) 在玻璃烧杯中称重。烧杯被冰冷却，然后添加30mL已事先冷却到5℃ 的注射用水，然后利用搅拌器搅拌混合物以分散化合物(I)并且溶解氯 化钠。在冰冷条件下搅拌时，逐滴添加1N盐酸到混合物中，使化合物 (I)完全溶解。而且，用1N盐酸调节pH到6.0。利用pH计(型号： F-22，HORIBA，LTD.生产)(此后应用相同仪器)测量PH。在冰冷条 件下将注射用水添加到溶液中，使得总量为100g。利用0.22μm的微孔 滤器(Millidisk10筒式滤器，目录号MCGL10S03，Nkhon Milipore K.K. 生产)过滤获得的溶液以获得总体溶液。
20mL(规格)的小瓶每个填装5g获得的总体溶液，用橡皮塞半塞， 装入冷冻干燥机。冻干在-45℃的冷冻温度，45℃的干燥温度的条件下实 施。冻干之后，小瓶的顶部空间填充氮气，然后完全塞住，然后将小瓶 自冷冻干燥器中取出。处方1到3的冻干产品根据前述冻干法制备(配 方1是比较实施例)。
根据下面给出的条件确定储存在50℃下8周和储存在40℃下2个 月的冻干产品中保存的活性成分的比例。该比例为相对于储存前活性成 分的量的比例。结果显示于表2。在该表中，“-”表示不包含氯化钠。 从表2中可以明显看出，本发明的包含氯化钠的制剂(处方2和3)与 不包含氯化钠的比较实施例的制剂(配方1)相比具有更高的保持比例。
分析活性成分保持比例的方法
在下列条件下利用HPLC测量。
HPLC系统：SCL-10A(Shimadzu Corporation生产)
检测器：SPD-10AC(UV光谱仪，Shimadzu Corporation生产)
柱：Develosil RPAQUEOUS(4.6mm I.D.×150mm长，Nomura Chemical Co.，Ltd.生产)
柱温：60℃
进样量：10μL
流动相流速：1.0mL/min
流动相：0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)/乙腈(19：1)
检测波长：255nm
表2 处方1～3的冻结干燥品的稳定性测试

测试实施例2：处方4到8的冻干产品
作为活性成分的化合物(I)(60.05g)和氯化钠(2.83g，5.67g， 8.50g，11.30g或14.20g)在玻璃烧杯中称重。烧杯被冰冷却，然后添加 156mL已事先冷却到5℃的注射用水，然后利用搅拌器搅拌混合物以分 散化合物(I)并且溶解氯化钠。在冰冷条件下搅拌时，逐滴添加1N盐 酸到混合物中以使化合物(I)完全溶解。而且，用1N盐酸调节pH到 6.0。在冰冷条件下添加注射用水到溶液中，以使总量为520g。利用 0.22μm的微孔滤器过滤获得的溶液以获得总体溶液。
20mL的小瓶每个填装7.5g获得的总体溶液，以如测试实施例1类 似的方式冻干，获得处方4到8的冻干产品。
根据下面给出的条件确定冻干产品在60℃下储存8周的情况下活 性成分的保持比例和相关物质的总量(例如，在下面的HPLC条件下保 留时间分别为0.5，1.6，1.8和1.9的主峰对应的相关物质)。结果为相 对于储存前的活性成分的量的比例。结果显示于表3。从表3中明显可 见，包含氯化钠的本发明的制剂(处方4到8)甚至在60℃的苛刻条件 下保存8周仍具有高的活性成分保持比例和低的相关物质总量。
分析活性成分的保持比例的方法：与测试实施例1相同
利用HPLC在下列条件下分析相关物质总量的方法。
HPLC系统：SCL-10A(Shimadzu Corporation生产)
检测器：SPD-10AC(UV光谱仪，Shimadzu Corporation生产)
柱：Develosil RPAQUEOUS(4.6mm I.D.×150mm长，Nomura Chemical Co.，Ltd.生产)
柱温度：60℃
进样量：10μL
流动相流速：1.0mL/min
流动相A：0.02mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.0)/乙腈(19:1)
流动相B：0.02mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.0)/乙腈(1:1)
检测波长：210nm
表3 处方4～8的冻结干燥品的稳定性测试

测试实施例3：总体溶液的稳定性测试
活性成分化合物(1)(5.96g)和氯化钠(0.55g)在玻璃烧杯中称 重。烧杯被冰冷却，然后添加15mL事先冷却到5℃的注射用水，利用 搅拌器搅拌混合物以分散化合物(I)并且溶解氯化钠。在冰冷条件下搅 拌时逐滴添加1N的盐酸到混合物中以使化合物(I)完全溶解。而且， 用1N盐酸调节pH到6.0，6.25，6.5，6.7和6.9。在冰冷条件下将注射 用水添加到溶液中，以使总量为50g。利用0.22μm的微孔滤器过滤获得 的溶液以获得总体溶液。
根据下面给出的条件确定总体溶液储存在25℃下2天获得保持活 性成分的保持比例和相关物质的总量。结果为相对于储存前活性成分量 的比例。结果显示于表4。从表4明显可见，pH越高，活性成分的保持 比例越高。
分析活性成分的保持比例的方法：与测试实施例1和2相同
分析相关物质总量的方法：与测试实施例2相同
表4 总体溶液的稳定性测试

产业实用性
本发明的冻干制剂在作为碳青霉烯化合物的冻干制剂的实际应用 中是非常有用的，因为它具有优良的储存稳定性。