[0001] 相关申请的交叉引用本申请要求2015年3月9日提交的美国临时申请号62/130,428的优先权，其全部内容经此引用并入本文。

[0002] 本公开涉及烟酰胺核苷（nicotinamide riboside）、特别是烟酰胺核苷氯化物的结晶形式，以及含有该结晶形式的组合物和使用该结晶形式的方法。

[0003]有用的分子的结晶形式相对于此类分子的非晶形式可以具有有利的性质。例如，晶体形式通常更容易处理和加工，例如，当制备包含该晶体形式的组合物时。结晶形式通常具有更大的储存稳定性，并且更容易纯化。使用药学上有用的化合物的结晶形式还可以改善包含所述化合物的药学产品的性能特征。获得结晶形式还有助于扩充制剂科学家可用于制剂优化的材料的选材范围，例如通过提供具有不同性质（例如，更好的加工或处理特征、改进的溶解曲线（profile）或改进的贮存寿命）的产品。

[0004] 烟酰胺核苷(CAS编号：1341-23-7)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的前体，并且代表维生素B3的来源。最近的研究已表明，摄取比食品中天然存在的更大量的烟酰胺核苷，可以获得新的健康益处。例如，烟酰胺核苷已经涉及提高组织NAD浓度和诱发胰岛素敏感性以及增强去乙酰化酶（sirtuin）功能。参见Chi Y等人，Curr Opin Clin Nutr Metab Care. 2013年11月；16(6):657-61。其增加NAD产生的能力表明，烟酰胺核苷还可以提高线粒体健康状态、刺激线粒体功能和诱导产生新的线粒体。在阿尔茨海默氏病模型中采用烟酰胺核苷进行的其它研究已表明，该分子对于脑部具有生物可用性，并且可能通过刺激脑部NAD合成来提供神经保护作用（出处同上）。此外，2012年的研究观察到，食用补充有烟酰胺核苷的高脂肪饮食的小鼠与食用不含烟酰胺核苷的相同高脂肪饮食的小鼠相比，体重增加减少
60%。

[0005] 烟酰胺核苷氯化物（3-氨基甲酰基-1-[(2R,3R,4S5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)氧杂环戊烷-2-基]-吡啶-1-鎓氯化物；还称为1-(β-D-呋喃核糖基)烟酰胺氯化物）是烟酰胺核苷的已知盐形式，并且具有下面描绘的结构∶尽管存在烟酰胺核苷及其氯化物盐的有用属性（例如在药物或营养增补剂方面），但通常需要改进。

[0006] 发明概述本公开涉及烟酰胺核苷的结晶形式，包括烟酰胺核苷氯化物的晶形II
 烟酰胺核苷氯化物。

[0007] 还公开了包含烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的药物组合物，以及制造此类药物组合物的方法。

[0008] 在其它方面，本公开涉及包括将烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II给药至对象的方法。

[0009] 本公开还提供了制备烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的方法。还提供了根据所公开的用于制备结晶形式II的方法中的任一种制备的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II。

[0010] 附图概述图1提供了本发明公开的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II的X射线粉末衍射图。

[0011] 图2显示了本发明公开的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II的固态IR光谱。

[0012] 图3提供了先前描述的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形I的X射线粉末衍射图。

[0013] 图4显示了先前描述的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形I的固态IR光谱。

[0014] 图5显示了涉及使用差示扫描量热法（DSC）测量本发明公开的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II样品的熔点的研究结果。

[0015] 图6示出了本发明公开的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II的扫描电子显微镜法（SEM）图像。

[0016] 说明性实施方案的详细描述通过结合构成本公开的一部分的附图和实施例参照下面的详细描述，可以更容易地理解本发明。要理解的是，本发明不限于本文中描述和/或显示的具体产品、方法、条件或参数，并且本文中所用的术语仅用于通过举例的方式描述特定的实施方案的目的，并非意在限制所请求保护的发明。

[0017] 本文中引用或描述的各专利、专利申请和出版物的全部公开内容经此引用并入本文。

[0018] 除非另行说明，否则如上文和本公开通篇中所用的以下术语和缩写应理解为具有以下含义。

[0019] 在本公开中，除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代对象，并且对具体数值的提及包括至少该具体值。由此，例如，提及“一种溶剂”指的是一种或多种此类溶剂及其本领域技术人员已知的等效物，等等。此外，当指示特定元素“可以是”X、Y或Z时，并非意在通过这种用法在所有情况下排除该元素的其它选择。

[0020] 当通过使用在前的“大约”将值表示为近似值时，要理解的是该具体数值构成另一实施方案。如本文中所用的“大约X”（其中X是数值）优选是指所述值的±10%（含端点）。例如，短语“大约8”指的是7.2至8.8的值（含端点）；作为另一实例，短语“大约8%”指的是7.2%至8.8%的值（含端点）。当存在时，所有范围是含端点并可以组合的。例如，当记述范围“1至5”时，所述范围应解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1-2”、“1-2 & 4-5”、“1-3 & 5”等等。此外，当肯定地提供替代方案列表时，这样的列举还可以包括其中排除任何替代方案的实施方案。例如，当描述范围“1至5”时，这样的描述可以支持由此排除1、2、3、4或5中任一个的情况；由此，“1至5”的记述可以支持“1和3-5，但没有2”，或简单地说“其中不包括2”。

[0021] 如本文中所用的术语“治疗”或“疗法”（以及其不同的词语形式）包括预防性（例如预防的）、治愈性或姑息性治疗。这样的预防性、治愈性或姑息性治疗可以是完全或部分的。例如，完全消除不合意的症状，或部分消除一种或多种不合意的症状代表本文中所预期的“治疗”。

[0022] 如上文和本公开通篇中所用的术语“有效量”指的是在治疗相关的障碍、病症或副作用方面经必要的时间段有效实现所需结果的以剂量计的量。要理解的是，本发明的组分的有效量不仅随所选择的具体化合物、组分或组合物、给药途径和组分在个体中引起所需响应的能力，而且还随某些因素，例如待缓解的疾病状态或病症的严重程度、个体的激素水平、年龄、性别、体重、患者所处的状态、以及所治疗的病症的严重程度、同时给药的药物或特定饮食、然后接着是具体的患者及本领域技术人员将认识到的其它因素而根据不同的患者变化，最终由主治医师来慎重决定适当的剂量。可以调整剂量方案以提供改善的治疗响应。有效量还是其中治疗有益效果超出组分的任何有毒或不利影响的量。作为一个实例，可用于本发明的方法的化合物以一定的剂量给药一段时间，以使得血小板的活化水平和粘附活性与治疗开始之前的活性水平相比降低。

[0023] “可药用”指的是在在可靠的医学判断范围内适于与人类和动物的组织接触，而不具有过度的毒性、刺激、过敏响应或其它问题并发症，与合理的收益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

[0024] 过程中使用的溶剂量可以指代为“体积”或“vol”的数量，例如材料可以悬浮在5体积的溶剂中。本领域技术人员理解这是指每克该材料的溶剂毫升数，使得在5体积的溶剂中悬浮10克材料表示以每克材料5毫升溶剂，即50毫升溶剂的量使用该溶剂。

[0025] 本文中提供的是烟酰胺核苷氯化物的结晶形式。尽管烟酰胺核苷及其氯化物盐以其非结晶形式式为本领域普通技术人员所熟知，并具有例如由此类分子提高NAD产生的能力衍生出的大量用途，但本公开涉及呈新结晶形式的这些分子。烟酰胺核苷的结晶形式具有有利性质，包括例如改善的化学纯度、流动性、溶解度、形貌或晶体习性、和/或稳定性（如例如储存稳定性、对脱水的稳定性、对多晶型转化的稳定性、低吸湿性和/或低残留溶剂含量）。

[0026] 晶体形式在本文中可以被指代为通过基本上如附图“所描绘”的图形数据来表征。此类数据包括例如粉末X射线衍射图和固态IR光谱。本领域技术人员将理解，数据的此类图形表示可能由于某些因素（例如仪器响应变化以及样品浓度和纯度变化）而发生小的改变，例如峰的相对强度和峰位置的改变，这是本领域技术人员所熟知的。尽管如此，本领域技术人员能够容易地将本文附图中的图形数据与未知晶体形式所生成的图形数据进行比较，并确认两组图形数据表征的是相同的晶体形式还是两种不同的晶体形式。

[0027] 本公开涉及烟酰胺核苷的结晶形式，包括烟酰胺核苷氯化物的晶形II 烟酰胺核苷氯化物。

[0028] 结晶形式II的特征可在于在21.9、22.1和24.7°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。结晶形式II的特征也可以或替代地在于在21.2、21.9、22.1、24.7和33.8°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。结晶形式II的特征也可以或替代地在于在21.2、
21.9、22.1、23.9、24.7、29.6和33.8°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。结晶形式II的特征也可以或替代地在于在10.2、10.7、13.8、21.2、21.9、22.1、23.2、23.9、24.7、29.6和33.8°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。

[0029] 在其它实施方案中，结晶形式II的特征可在于基本上如图1中所示的粉末X射线衍射图。结晶形式II的特征也可以或替代地在于具有基本上如下表1中所提供±0.2°2θ的峰的粉末X射线衍射图。

[0030] 表1峰编号 位置[°2θ] d间距[Å] 高度[cts] I/Imax [%]
1 10.1734 8.69516 8872.54 22
2 10.7297 8.24557 2372.38 6
3 13.7715 6.43035 3169.12 8
4 15.9419 5.55947 6917.89 17
5 16.6967 5.30981 1563.42 4
6 17.7158 5.0066 2459.58 6
7 18.6608 4.75513 6371.29 16
8 18.8034 4.71939 5490.51 14
9 19.3122 4.5962 2506.58 6
10 19.7836 4.48773 3889.72 10
11 20.0386 4.43118 1145.59 3
12 21.1597 4.19886 11308.49 28
13 21.8511 4.06755 33267.81 83
14 22.0897 4.02416 40217.89 100
15 22.6246 3.93021 1364.78 3
16 23.175 3.8381 6832.75 17
17 23.9172 3.72065 10856.41 27
18 24.7373 3.59913 31585.49 79
19 25.5431 3.48738 6010.22 15
20 25.7087 3.4653 2181.9 5
21 26.1736 3.4048 161.7 0
22 26.7038 3.33838 1130.84 3
23 27.1486 3.28469 3669.91 9
24 27.3393 3.26221 3272.49 8
25 27.7904 3.21027 6906.48 17
26 28.36 3.14708 19.68 0
27 29.1148 3.06719 3478.41 9
28 29.6458 3.01345 10547.46 26
29 30.2267 2.95685 6815.84 17
30 30.77 2.90587 8214.63 20
31 31.2086 2.86602 2303.64 6
32 31.7408 2.81918 2534.77 6
33 32.1698 2.78255 8968.05 22
34 32.387 2.76438 4483.56 11
35 32.7107 2.73776 3274.16 8
36 33.3382 2.68765 2487.62 6
37 33.8022 2.65181 10970.51 27
38 34.0407 2.63378 4906.24 12
39 34.2927 2.61284 3948.22 10
40 34.4374 2.60434 3138.89 8
41 35.2006 2.54961 2072.88 5
42 36.3793 2.46966 358.75 1
43 36.8234 2.44089 3401.32 8
44 37.2034 2.41683 3062.55 8
45 37.6795 2.38738 5964.24 15
46 38.1272 2.36036 1617.57 4
47 38.4674 2.34027 1518.92 4
48 39.0706 2.30552 817.46 2
49 39.4693 2.28126 3195.69 8
50 39.5912 2.28016 1727.69 4
51 39.8916 2.25807 807.25 2
52 40.3086 2.23567 574.64 1
53 40.3937 2.2367 505.4 1
54 40.6826 2.21598 236.57 1
55 41.1003 2.19442 1994.57 5
56 41.6694 2.16575 910.04 2
57 42.4 2.13011 853.49 2
58 43.2915 2.08829 2010.71 5
59 43.4766 2.08499 1760.75 4
60 43.8176 2.06442 366.03 1
61 44.1054 2.05162 305.69 1
62 44.8767 2.01813 1102.42 3
63 45.0048 2.01768 407.94 1

[0031] 烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征也可以或替代地在于在678.3、695.6和1097.5 cm-1 ± 0.2 cm-1处具有峰的固态IR光谱。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征-1 -1
也可以或替代地在于在678.3、695.6、930.1、1084.7和1097.5 cm  ± 0.2 cm 处具有峰的固态IR光谱。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征也可以或替代地在于在678.3、
695.6、930.1、998.6、1084.7、1097.5和1412.6 cm-1 ± 0.2 cm-1处具有峰的固态IR光谱。
在某些实施方案中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征可在于基本上如图2中所示的固态IR光谱。在另外的实施方案中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征可在于具有基本上如下表2中所提供±0.2 cm-1的峰的固态IR光谱。

[0032] 表2IR (cm-1)
3368.98
3151.73
3041.76
2160.79
1678.65
1637.22
1583.98
1501.94
1463.57
1412.55
1390.1
1343.99
1289.17
1271.66
1215.75
1195.17
1132.1
1097.53
1084.69
1067.89
1036.88
1026.24
998.64
961.66
947.86
930.11
870.21
835.91
823.25
781.92
748.14
730.95
711.73
695.56
678.34

[0033] 在一些实施方案中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征在于具有126.4℃至126.7℃之间的吸热峰的差示扫描量热法（DSC）热分析图。例如，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征可在于在大约126.57℃处具有峰的DSC热分析图。该特征还可以表示为显示熔点，即烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的特征可在于具有大约126.57℃的熔点。

[0034] 本发明的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II可以以几种不同形貌中的一种来提供。图4示出了一种可能形貌下的本发明的结晶烟酰胺核苷氯化物的扫描电子显微镜法（SEM）图像。

[0035] 在一些实施方案中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II是至少部分水合的，并且在其它实施方案中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II是无水的。

[0036] 本发明公开的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II代表与先前已经公开的烟酰胺核苷氯化物不同的结晶形式。2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,685和2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,702公开了烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I，其代表与本发明公开的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II不同的结晶形式。烟酰胺核苷氯化物的晶形I可以根据下文题为“实施例”的本公开的章节中提供的描述来表征。

[0037] 本公开还涉及包含烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的药物组合物。该药物组合物可以包含任一上述实施方案中的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II，以及可药用赋形剂。该药物组合物应包含治疗有效量的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II。

[0038] 本文中所用的短语“治疗有效量”是指引发由研究者、兽医、医生或其它临床医生在组织、系统、动物、个体或人类体内寻求的生物或药物响应的活性化合物的量，所述生物或药物反应包括以下的一种或多种：（1）预防疾病或病症；例如在可能易患疾病、病症或障碍但尚未经历或显示出疾病的病理或症候的个体中预防疾病、病症或障碍；
（2）抑制疾病或病症；例如在经历或显示出疾病、病症或障碍的病理或症候的个体中抑制疾病、病症或障碍（即包括阻止病理和/或症候的进一步发展）；和
（3）改善疾病或病症；例如在经历或显示出疾病、病症或障碍的病理或症候的个体中改善疾病、病症或障碍（即包括逆转病理和/或症候）。

[0039] 本组合物可以经配制用于任何类型的给药。例如，该组合物可以经配制用于口服给药、局部给药、胃肠外给药、肠内给药或通过吸入来给药。结晶形式II可以经配制用于净给药，或与常规药物载体、稀释剂或赋形剂（其可以为液体或固体）结合。可适用的固体载体、稀释剂或赋形剂尤其可以充当结合剂、崩解剂、填料、润滑剂、助流剂、压缩助剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、防腐剂、悬浮/分散剂、片剂崩解剂、包封材料、成膜剂或包衣、增香剂或印刷墨水。用于制备任何单位剂型的任何材料优选是药学上纯净的，并且在所采用的量内基本无毒。此外，可以将结晶形式II并入缓释配制品和制剂中。在这方面的给药包括尤其通过以下途径的给药：静脉内、肌内、皮下、眼内、滑膜内、经上皮，包括透皮、经眼、舌下和含服；局部给药，包括经眼、经皮、眼用、直肠和经由吹入法、气雾剂的鼻腔吸入，以及直肠系统给药。

[0040] 在粉剂中，载体、稀释剂或赋形剂可以是与细碎的活性成分混合的细碎固体。在片剂中，活性成分与具有必要压缩性质的载体、稀释剂或赋形剂以合适的比例混合并以所需的形状和尺寸压实。对于口服治疗性给药，活性化合物可以与载体、稀释剂或赋形剂合并，并以可摄取的片剂、含片、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂（wafers）等等的形式使用。此类治疗有用的组合物中（一种或多种）活性化合物的量优选使得能够获得合适的剂量。

[0041] 液体载体、稀释剂或赋形剂可用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、酏剂等等。本发明的活性成分可以溶解或悬浮在可药用液体，如水、有机溶剂、两者的混合物，或可药用油或脂肪中。液体载体、赋形剂或稀释剂可以含有其它合适的药物添加剂，如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、增香剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。

[0042] 合适的固体载体、稀释剂和赋形剂可以包括例如磷酸钙、二氧化硅、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、聚乙烯基吡咯烷、低熔点蜡、离子交换树脂、交联羧甲基纤维素碳（croscarmellose carbon）、阿拉伯胶、预胶凝淀粉、交联聚维酮（crospovidone）、HPMC、聚维酮、二氧化钛、多晶纤维素、甲基氢氧化铝（aluminum methahydroxide）、琼脂、黄蓍胶或其混合物。

[0043] 例如，对于口服、局部或胃肠外给药，液体载体、稀释剂和赋形剂的合适实例包括水（特别含有如上所述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液）、醇（包括一元醇和多元醇，例如二醇）和它们的衍生物，以及油（例如分馏椰子油和花生油）或其混合物。

[0044] 对于胃肠外给药，载体、稀释剂或赋形剂还可以是油性酯，如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。还可预期的是无菌液体载体、稀释剂或赋形剂，其用于胃肠外给药的无菌液体形式组合物中。可以在适当地与表面活性剂（如羟丙基纤维素）混合的水中制备游离碱或可药用盐形式的活性化合物的溶液剂。还可以在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和在油中制备分散体。在通常的储存与使用条件下，这些配制品可以含有防腐剂以防止微生物生长。

[0045] 适于注射用途的药物形式包括例如无菌水溶液或分散体，和用于临时制备无菌可注射溶液剂或分散体的无菌粉剂。在所有情况下，该形式优选是无菌的和流质的以提供易注射性。其优选在制造和储存条件下稳定，并优选防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体、稀释剂或赋形剂可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等等）、其合适的混合物、以及植物油。例如通过使用包衣（如卵磷脂）、通过保持所要求的粒度在分散体情况下以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等等来防止微生物的作用。在许多情况下，其优选包括等渗剂，例如糖或氯化钠。可以通过使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现可注射组合物的延长吸收。

[0046] 可以通过将烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II以药学上适宜的量根据需要与上文列举的各种其它成分一起并入到合适的溶剂中，并随后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液剂。通常，可以通过将灭菌的活性成分并入无菌媒介物（其含有基础分散介质和来自上文列举的那些的所需其它成分）来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液剂的无菌粉末的情况下，优选的制备方法可以包括真空干燥和冷冻干燥技术，其产生一种或多种活性成分加上来自其先前的无菌过滤溶液的任何另外的所需成分的粉末。

[0047] 由此，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II可以通过医药领域中既定的任何常规技术以有效量来给药。例如，给药量可以为大约50毫克/天至大约50,000毫克/天。在一些实施方案中，给药量可以为大约250毫克/千克/天。由此，给药量可以为大约50毫克/天、大约100毫克/天、大约200毫克/天、大约250毫克/天、大约300毫克/天、大约500毫克/天、大约700毫克/天、大约800毫克/天、大约1000毫克/天、大约2000毫克/天、大约4000毫克/天、大约5000毫克/天、大约10,000毫克/天、大约20,000毫克/天、大约30,000毫克/天、大约40,000毫克/天或大约50,000毫克/天。

[0048] 还公开了生产此类药物组合物的方法，其包括将烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的先前公开的实施方案中的任一种与可药用赋形剂组合。可以根据本发明的方法使用任何可接受的将活性剂与可药用赋形剂组合的方法，并且本领域的普通技术人员可以容易地理解合适的组合技术。在一些实施方案中，组合的步骤可以这样简单：将所需量的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II添加到现存物质如液体饮料或粉末状饮料混合物中。在其它实施方案中，组合的步骤包括常规用于将活性剂与赋形剂混合以制备药物剂型（例如固体、半固体、液体或呈适合于吸入的形式）、化妆品（如粉末、霜剂、洗剂或润肤剂）或食品（例如固体、半固体或液体）的任何技术。

[0049] 在其它方面，本公开涉及包括将烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II给药至对象的方法。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的给药可以通过与本发明的药物组合物相关的任何上述途径来进行。例如，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II可以口服给药、局部给药、胃肠外给药、肠内给药或通过吸入来给药。鉴于本发明公开的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的异乎寻常的稳定性，可以针对任何已知的给药途径使用或以其它方式制备该活性剂，并且可以根据本发明的方法使用任何已知的给药途径。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II可以与可药用赋形剂组合给药。

[0050] 其中该治疗性化合物的给药是对疾病或障碍的有效治疗方案的对象或患者优选为人，但也可以是任何动物，包括在临床试验或筛选或活性实验情况下的实验室动物。因此，如本领域普通技术人员可以容易地理解那样，本发明的方法、化合物和组合物特别适合于给药至任何动物，特别是哺乳动物，并且包括但决不限于：人、家畜（例如猫或犬对象）、农场动物（例如但不限于牛、马、山羊、绵羊和猪对象）、野生动物（无论在野外还是在动物园中）、研究动物（例如小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、猪、狗、猫等等）、鸟类（例如鸡、火鸡、鸣禽等等），即用于兽医用途。

[0051] 本公开还提供了制备烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的方法。该方法可以包括以下步骤：形成包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的混合物的步骤，任选分离包含烟酰胺核苷氯化物和任选一部分极性溶剂的湿滤饼并形成包含分离的材料和额外量的所述具有氢键的极性溶剂或不同的具有氢键的极性溶剂的第二混合物，使混合物或第二混合物的温度升高，并从混合物或第二混合物中分离结晶的烟酰胺核苷氯化物。

[0052] 在一些实施方案中，用于形成混合物和/或第二混合物的具有氢键的极性溶剂可以是极性醇。示例性极性醇包括甲醇、1-丁醇、2-丁醇、叔丁醇、二乙二醇、乙醇、乙二醇、丙三醇、1-丙醇、2-丙醇。用于形成溶液和/或第二溶液的具有氢键的极性溶剂可以具有高水溶性。例如，具有氢键的极性溶剂可以是丙酮、乙腈、二甘醇二甲醚（二乙二醇二甲醚）、1,2-二甲氧基乙烷（DME）、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亚砜（DMSO）、二氧杂环己烷、六甲基磷酰胺（HMPA）、六甲基磷酰三胺（HMPT）、N-甲基-2-吡咯烷酮（NMP）或吡啶。具有氢键的极性溶剂可以与水结合。

[0053] 在一些实施方案中，形成混合物包括将粗烟酰胺核苷氯化物（即原始的或未精制的烟酰胺核苷氯化物）与具有氢键的极性溶剂组合。在其它实施方案中，通过将结晶烟酰胺核苷氯化物的另一种晶形与极性溶剂组合来形成混合物。在此类情况下，起始材料结晶烟酰胺核苷氯化物可以是如上所述并公开在2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,685中的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形I，可以是公开在2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,702中的结晶烟酰胺核苷氯化物，或可以是结晶烟酰胺核苷氯化物的此类晶形的混合物。

[0054] 包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的混合物的形成可以在大约15℃、大约10℃、大约0℃、大约-10℃、大约-15℃、大约-20℃或大约-25℃的温度下发生。在一个示例性实施方案中，温度范围为大约15℃至大约-25℃。在其它实施方案中，温度范围为大约-10℃至大约-20℃，或大约-5℃至大约-15℃。在形成包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的混合物之后，可以使溶液保持在所需温度下，所需温度可以是例如大约15℃、大约10℃、大约0℃、大约-10℃、大约-15℃、大约-20℃或大约-25℃。使混合物保持在所需温度下持续的时间可以为大约10小时、大约12小时、大约18小时、大约20小时、大约24小时、大约30小时、大约36小时或大约40小时。在一个实施方案中，使混合物保持在所需温度下大约10至大约40小时。在使混合物保持在所需温度下的同时可以对其施以搅拌。

[0055] 在形成包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的混合物并任选使该混合物保持在所需温度下之后，可以任选从该混合物中分离包含烟酰胺核苷氯化物和在一些实施方案中包含一部分极性溶剂的湿滤饼。可以随后将分离的材料与额外量的第一具有氢键的极性溶剂、与不同的具有氢键的极性溶剂、或与原始的极性溶剂和不同的极性溶剂的组合结合以形成第二混合物。在一个实施方案中，不同的极性溶剂是丙酮。第二混合物的温度可以与包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的原始混合物的温度大致相等、低于该温度或高于该温度。优选地，第二混合物的温度与包含烟酰胺核苷氯化物和具有氢键的极性溶剂的原始混合物的温度大致相等。

[0056] 无论是否从第一混合物中分离湿滤饼并与额外量的具有氢键的极性溶剂或与不同的极性溶剂组合，均使混合物或第二混合物的温度升高。该温度可以升高大约10℃、大约15℃、大约20℃、大约25℃、大约30℃、大约35℃或大约40℃。例如，该温度可以从-10℃的起始温度升高至大约20-25℃。

[0057] 在使温度升高之后或在升温过程中，可以对混合物或第二混合物施以搅拌。

[0058] 无论是否搅拌混合物或第二混合物，均可以任选加入水，直到混合物或第二混合物相对于极性溶剂或极性溶剂混合物含有所需量的水。例如，可以加入水，直到相对于极性溶剂或极性溶剂混合物的体积存在按体积计大约1%、大约1.5%、大约2%、大约2.5%、大约3%、大约3.5%、大约4%、大约4.5%、大约5%、大约5.5%或大约6%的水。

[0059] 无论是否加入水，均可以使混合物或第二混合物在预先升高达到的温度下保持所需时间段。混合物或第二混合物在升高温度下保持的时间段可以为大约10至大约40小时。例如，该温度可以为大约10小时、大约12小时、大约18小时、大约20小时、大约24小时、大约
30小时、大约36小时或大约40小时。在使混合物或第二混合物保持在升高温度下的同时可以对其施以搅拌。

[0060] 在使混合物或第二混合物保持在升高温度下的时间段之后，可以随后分离固体烟酰胺核苷氯化物。任选用例如任选含有水的极性溶剂或极性溶剂混合物来洗涤固体。还可以干燥固体，例如通过真空干燥。

[0061] 还公开了根据上述方法制备的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II可以根据本文中公开的用于形成该结晶形式的方法的任一实施方案来制备。

[0062] 在下面的实施例中进一步限定本发明。应当理解的是，这些实施例虽然表示本发明的优选实施方案，但仅以说明的方式给出，并且不应被解释为限制所附权利要求。由上述讨论和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不背离其精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种改变和修改以使其适应各种用途和条件。实施例

[0063] 起始材料 – 粗烟酰胺核苷已经公布了合成粗烟酰胺核苷及其氯化物盐的许多途径。可以使用任何已知途径或任何其它可接受的途径来制备相关化合物的非结晶形式。用于合成烟酰胺核苷或其氯化物盐的示例性途径公开在下列出版物中：Jarman等人, J. Chem. Soc. (1969), (2), 199-203（氯化物盐）；Yang等人 J. Med. Chem. 2007, 50, 6458-6461；美国公开号2007/0117765；
Franchetti等人, Bioorg Med Chem Lett. 2004年9月20日; 14(18):4655-8；Saunders PP等人, Cancer Res. 1989年12月1日; 49(23):6593-9；Dowden J等人, Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2005;24(5-7):513-8；Schlenk, F., Archives of 
Biochemistry (1943), 3, 93-103；Freyne等人, Carbohydr. Res., 78:235-242 
(1980)；Tanimori等人, Bioorg. Med. Chem. Lett., 12:1135-1137 (2002)；WO 2010/
017374；Davies LC, Nucleosides & Nucleotides 14(3-5), 311-312 1995；Kam BL等人, Carbohydrate Research, 77 (1979) 275-280；Viscontini M等人, Volumen XXXIX, Fasciculus VI (1956) - No. 195, 1620-1631。上面列举的参考文献各自的整体公开内容经此引用并入本文。

[0064] 可以用不同于Cl-的阴离子，例如三氟甲磺酸根或三氟甲烷磺酸根来初始合成烟酰胺核苷。在合成烟酰胺核苷的这一替代形式后，可以通过离子交换色谱法用氯根阴离子或具有更高亲合力的其它阴离子将初始离子“交换”出去，占据其位置。本领域的普通技术人员可以容易地理解如何实施离子交换色谱法。

[0065] 或者，可以由商业来源获得非晶的烟酰胺核苷氯化物。

[0066] 制备结晶烟酰胺核苷氯化物晶形I如上所述，用于制备结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II的起始材料可以是结晶烟酰胺核苷氯化物的另一种晶形。例如，起始材料结晶烟酰胺核苷氯化物可以是2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,685中公开的结晶烟酰胺核苷氯化物，可以是2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,702中公开的结晶烟酰胺核苷氯化物，或者可以是结晶烟酰胺核苷氯化物的此类晶形的混合物。上文引用的临时申请公开了烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I，其代表了与本发明公开的烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II不同的结晶形式。

[0067] 用于形成烟碱核苷氯化物的结晶形式I的示例性方法如下。形成包含甲醇和粗烟酰胺核苷氯化物的混合物。在形成溶液之后，将该溶液冷却至-10℃并保持在该温度下。经过接下来的12-24小时的过程，产物开始结晶。可以通过例如使用已知技术向溶液中加入晶种（seeding）来提高结晶发生的速率。在这一阶段后，确认该混合物成为浆料，并经 6-12小~时缓慢地加入3份（该体积可以根据甲醇的量而改变，例如1-5份）甲基叔丁基醚。MTBE充当反溶剂以使大部分产物从溶液中析出。然后将该反应混合物在-10℃下保持额外的12小时。
然后将固体过滤并用MTBE冲洗。所得固体代表结晶烟酰胺核苷氯化物晶形I。

[0068] 烟酰胺核苷氯化物的晶形I的特征可在于在5.1、15.7和21.7°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。结晶形式I的特征也可以或替代地在于在5.1、15.7、21.7、23.5和26.4°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。结晶形式I的特征也可以或替代地在于在5.1、15.7、18.6、21.7、23.5、26.4和28.0°2θ ± 0.2°2θ处具有峰的粉末X射线衍射图。

[0069] 在其它情况下，结晶形式I的特征可在于基本上如图3中所示的粉末X射线衍射图。结晶形式I的特征也可以或替代地在于具有基本上如下表3中所提供±0.2°2θ的峰的粉末X射线衍射图。

[0070] 表3峰编号 位置[°2θ] d间距[Å] 高度[cts] I/Imax
1 5.0847 17.36541 29562 87%
2 10.09 8.75955 158 0%
3 12.194 7.25232 4234 12%
4 14.141 6.25817 2433 7%
5 15.662 5.65364 19978 59%
6 17.4 5.09227 576 2%
7 18.573 4.77348 9176 27%
8 19.415 4.56839 2563 8%
9 20.35 4.36098 831 2%
10 21.685 4.09491 33878 100%
11 21.919 4.05175 4369 13%
12 22.148 4.01031 5971 18%
13 22.842 3.89009 4521 13%
14 23.519 3.77954 10585 31%
15 23.825 3.73181 8674 26%
16 24.103 3.68936 4752 14%
17 24.47 3.63519 434 1%
18 25.05 3.55221 5408 16%
19 25.149 3.53825 107 0%
20 25.244 3.52517 8758 26%
21 25.438 3.4987 4768 14%
22 25.836 3.44564 2741 8%
23 26.035 3.41975 2662 8%
24 26.43 3.36953 18356 54%
25 28.016 3.1823 9628 28%
26 28.164 3.16597 3910 12%
27 29.13 3.06327 552 2%
28 29.7 3.00557 799 2%
29 30.02 2.97428 2725 8%
30 30.628 2.91661 3400 10%
31 30.996 2.88284 2421 7%
32 31.576 2.8312 2259 7%
33 32.658 2.73983 850 3%
34 32.95 2.71631 431 1%
35 33.295 2.6888 1887 6%
36 33.8 2.64976 2964 9%
37 35.06 2.55763 1199 4%
38 35.426 2.53179 3426 10%
39 35.586 2.5208 4384 13%
40 35.92 2.49794 500 1%
41 36.534 2.45752 2679 8%
42 37.074 2.42298 1143 3%
43 37.616 2.3893 536 2%
44 38.13 2.35799 1057 3%
45 38.56 2.33306 1731 5%
46 39.218 2.29527 980 3%
47 39.729 2.26696 1467 4%
48 40.624 2.21904 2257 7%
49 41.32 2.18334 890 3%
50 42.2 2.13986 1389 4%
51 42.76 2.11298 1812 5%
52 43.79 2.06588 681 2%
53 44.58 2.03105 1628 5%
54 44.68 2.02661 1483 4%
55 45.083 2.00939 363 1%
56 45.857 1.97724 2012 6%
57 46.63 1.9463 858 3%
58 46.95 1.93366 455 1%
59 47.67 1.90628 518 2%
60 48.08 1.89074 630 2%
61 49.69 1.83344 442 1%
62 49.96 1.82422 354 1%
63 50.3 1.81235 222 1%

[0071] 烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I的特征也可以或替代地在于在671.7、1035.6和-1 -11061.8 cm  ± 0.2 cm 处具有峰的固态IR光谱。烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I的特征也可以或替代地在于在671.7、1035.6、1061.8、1398.9和1649.3 cm-1 ± 0.2 cm-1处具有峰的固态IR光谱。在某些情况中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I的特征可在于基本上如图
4中所示的固态IR光谱。在另外的情况中，烟酰胺核苷氯化物的结晶形式I的特征可在于具有基本上如下表4中所提供±0.2 cm-1的峰的固态IR光谱。

[0072] 表4IR (cm-1)
3307.91
3236.09
3150.27
2967.14
1702.35
1667.56
1649.34
1611.33
1582.94
1468.53
1436.77
1398.92
1324.43
1291.92
1263.29
1215.24
1179.00
1148.84
1135.31
1110.95
1101.18
1061.82
1035.62
986.71
926.55
899.63
852.33
830.75
779.75
760.46
734.93
705.48
671.72
3307.91
3236.09
3150.27
2967.14
1702.35
1667.56
1649.34
1611.33
1582.94
1468.53
1436.77
1398.92
1324.43
1291.92
1263.29
1215.24
1179.00
1148.84
1135.31
1110.95
1101.18
1061.82
1035.62
986.71
926.55
899.63
852.33
830.75
779.75
760.46
734.93
705.48
671.72

[0073] 制备结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形II形成包含甲醇、如公开在2014年7月24日提交的美国临时申请号62/028,685中的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形I以及温度为-10℃的5体积的含有3.5体积%的水的甲醇的混合物。该混合物在保持在-10℃下的同时搅拌至少12小时，随后分离烟酰胺核苷氯化物固体。
然后将分离的含甲醇的湿滤饼装料至2.5体积的冷（-10℃）丙酮中。将该结合物的温度随后调节至20-25℃。在对该结合物施以搅拌的同时，加入温度为20-25℃的水，直到该混合物相对于丙酮的体积含有3.5体积%的水。然后将该混合物在20-25℃下搅拌至少12小时。将烟酰胺核苷氯化物固体分离并用丙酮和3.5体积%的水洗涤。分离、洗涤过的湿滤饼在35℃下真空干燥至干。干燥的材料为烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II。

[0074] 前述反应/冷却时间基于成百上千千克的工厂生产。如本领域技术人员容易理解的那样，当以较小规模进行该反应时，可以减少许多时间，而不会对形貌和物理晶形产生显著的影响。

[0075] 评价烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的DSC热分析图产生在126.57℃处的峰。这可以据称代表烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的熔点，并且高于晶形I的熔点大约4℃。

[0076] 获得了烟酰胺核苷氯化物的结晶形式II的扫描电子显微镜法图像。图4示出了本发明公开的结晶烟酰胺核苷氯化物的晶形的扫描电子显微镜法（SEM）图像。

[0077] 仪器X射线粉末衍射.使用PANalytical X-PertPRO多功能衍射仪（型号#PY3040）获得关于结晶烟酰胺核苷氯化物的X射线粉末衍射信息。不需要特殊的样品制备。

[0078] SEM.使用Hitachi FE-SEM（型号#S-4500）获得扫描电子显微镜法图像。不需要特殊的样品制备。

[0079] 红外光谱法. 使用具有通用衰减全反射的Spectrum One™ FTIR仪器（Perkin-Elmer, Inc., Waltham, MA）获得傅里叶变换红外光谱法（FTIR）谱图。

[0080] 差示扫描量热法（DSC）.使用Q2000差示扫描量热计, V24.11, Build 124（TA Instruments, New Castle, DE）获得热分析图。