酵母经常存在于人类居住环境和器官系统中。甚至，健康的个体也有 生长在粘膜上和胃肠道整个区域中的白色念珠菌(Candida albicans) (Shay K，Truhlar MR，Renner RP.老人中的口咽念珠菌病.J Am Geriatr Soc 1997；45：863-870)。口腔和牙齿之间的组织也给大量物种的微生物提供 了优良的生长培养基，例如，其中可以发现的微生物是白色念珠菌(Candida albicans)物种，较少数量的光滑念珠菌(C.glabrata)和热带念珠菌(C. tropicalis)酵母。正常地，酵母细胞处于钝态，并且它们的生长不会伤害 健康个体。在不利情况下，酵母诸如白色念珠菌(C.albicans)开始形成 菌丝，因此更深地穿透到粘膜中。这引起了局部酵母感染，在口腔中这表 现为例如口腔念珠菌病，口炎或舌炎。
通常酵母感染前是下降的抵抗力，这可以由糖尿病、恶性肿瘤、免疫 缺陷或一些药物，例如广谱抗生素、皮质类固醇或细胞生长抑制剂引起。 口腔微生物通过血液循环携带方式容易传播到器官系统的其它部分，特别 是在一般性健康状态已经恶化的人中，这可能产生严重的后果，诸如败血 症、心内膜炎和脑膜炎(Shay等1997)。
人类中酵母感染的最常见和最重要的原因是白色念珠菌(Candida albicans)(Mkel等.1988.Lketieteellinen mikrobiologia(Medical microbiology)，第5次修订版，270-271页.Published by Kustannus Oy Duodecim 1988)。在健康人胃肠道中可以比较经常地发现白色念珠菌(C. albicans)：30到50％的人的口腔中带有该酵母，约1％的在健康皮肤上 和尿道中带有该酵母。偶尔也可以发现念珠菌属(Candida)的其它物种， 最重要的念珠菌属(Candida)物种是：热带念珠菌(C.tropicalis)，假热 带念珠菌(C.pseudotropicalis)，近平滑念珠菌(C.parapsilosis)，克鲁斯 氏念珠菌(C.krusei)，和季也蒙氏念珠菌(C.guilliermondi)，它们与白 色念珠菌(C.albicans)相似，是人类中的机会病原体(Mkel等，1988)。
老年人通常患有多种疾病，这些疾病和用于治疗所述疾病的药物一起 可能削弱他们的免疫力，同时还有他们的牙齿健康(Pajukoski H，Meurman JH，Snellman-Grhn S，Sulkava R.医院和非医院社区居住的老年患者的 口腔健康.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Ra-diol Endod 1999：88： 437-443)。此外，不健康的口腔卫生也会使老人受到酵母感染 (Budtz-Jorgensen E，Mojon P，Banon-Clement JM，Baehni P.长期住院治 疗中的口腔念珠菌病：无齿和有齿个体比较.Oral Dis 1996；2：285-290)。 老化本身增加了酵母的出现和其数量，这表明器官系统抑制酵母生长的能 力随着年龄而减弱(Lockhart SR，Joly S，Vargas K，Swails-Wenger J， Enger L，Soil DR.老年人口腔中对抗念珠菌定居的天然防御的崩溃.J Dent Res 1999；78：857-868)。
居住在芬兰，赫尔辛基的老人中，在75％的老人中发现了酵母生长， 在33％的老人中发现了高数量的酵母生长(Nrhi TO，Ainamo A， Meurman JH.老人中的唾液酵母、唾液和口腔粘膜.J Dent Res 1993；72： 1009-1014)。在带有酵母的老人中，发现60％的老人有念珠菌属(Candida) 酵母感染(Wilkieson C，Samaranayake LP，MacFarlane TW，Larney PJ 等.长期住院治疗的老人中口腔念珠菌病.J Oral Pathol Med 1991；20： 13-16)。排在白色念珠菌(Candida albicans)之后的最常见的酵母是平 滑念珠菌(C.glabrata)(29％)，热带念珠菌(C.tropicalis)(13％)， 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(11％)和近平滑念珠菌(C. parapsilosis)(89％)(Lockhart等.1999)。
引起口腔酵母生长增加的一个重要因素是减少的唾液分泌(Nrhi等. 1993)。老化影响的5年跟踪研究表明随着老化，刺激的总唾液分泌减少， 而缓冲能力(buffer capacity)增加(Nrhi TO，Kurki N，Ainamo A.5年跨度 研究——在家居住的老人的唾液、唾液微生物和口腔健康，J Dent Res 1999； 78：1640-1646)。内分泌疾病和药物的大量应用尤其会减少唾液分泌 (Pajukoski H，Meurman JH，Snellman-Grhn S.Keinnen S，Sulkava R. 急性老人护理病房中老年患者中的唾液流和组成.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 1997；84：265-71)。唾液分泌率和缓冲能力降低 的人，酵母含量明显较高(Nrhi等.1993)。芬兰老人的唾液分泌率在0.6 和1.0ml/mm之间变化(Pajukoski等.1997)；发现多达55％的老人具有 减少的唾液分泌(＜0.7ml/mm)，并且34％老人具有低的缓冲能力 (Pajukoski等.1997)。
常规用抗真菌剂，诸如制霉菌素治疗念珠菌病，并且在更严重的情况 下，用氟康唑或伊曲康唑治疗(Shay等，1997)。而且，更有效的口腔卫 生能够减少长期处于护理中的老年人的口腔粘膜中念珠菌的集群 (Budtz-Jorgensen E，Mojon P，Rentsch A，Deslauriers N.口腔健康程序对 长期疗养所中口腔念珠菌病发生的影响.Community Dent Oral Epidemiol 2000；28：141-149)。双氯苯双胍己烷/木糖醇口香糖的使用也能使酵母的 数量减少22％(Simons D，Kidd EAM，Beighton D，Jones B.双氯苯双胍己 烷/木糖醇口香糖对生龋齿唾液微生物菌群的作用：老年患者中的临床试验. Caries Res 1997；31：91-96)。
一些群体诸如长期护理的患者和老人由于降低的免疫力，营养不良和 慢性疾病也易受一般的感染。此外，发现老年人中口腔卫生和口腔微生物 菌群与下呼吸道感染，诸如肺炎和支气管炎有关(参见，Scannapieco FA. 口腔细菌在呼吸感染中的作用，J Periodontol 1999；70：793-802)。推测， 感染由致病性微生物通过呼吸从口腔转移到呼吸道而引起。影响长期护理 患者的最常见感染是：上和下呼吸道感染(70％)，尿道感染(12％)， 胃肠炎和腹泻(12％)及皮炎和软组织感染(6％)(Orr PH，Nicolle LE， Duckworth H，Brunka J，Kennedy J，Murray D等.养老院老人中发热性泌 尿系统感染.Am J Med 1996；100：71-77)。卫生保健的介入能将长期住院 护理的老人的上呼吸道感染减少16％(Makris AT，Morgan L，Gaber DJ， Richter A，Rubino JR，综合感染控制方法对长期护理院中的感染发生率的 影响.Am J Infect Control 2000；28：3-7)。
酵母出现的另一个主要区域是生殖区；特别是在女性中常见酵母感染。 最常见的妇科学症状是阴道炎；它也是寻求医疗咨询的患者的主要症状之 一(Mkel等.1988)。阴道炎最常由细菌引起，其次的最常见因素是酵母 真菌，其中最常出现的物种是白色念珠菌(C.albicans)和光滑念珠菌 (C.glabrata)。白色念珠菌(Candida albicans)是一种属于阴道正常微生 物菌群的酵母，正常地它不引起感染。通常，阴道的细菌菌群限制酵母生 长，但是在一些情况下，酵母生长变得过度。引起酵母感染的危险因素包 括抗生素(特别是广谱抗生素)的应用，怀孕，糖尿病，引起免疫缺陷的 疾病和皮质类固醇的应用。在妇科门诊部，在10到20％的患者中可以发 现酵母真菌，但是仅仅她们中一些人受到酵母引起的临床外阴阴道炎影响。 碱性pH有利于酵母生长。酵母的毒力取决于例如，酵母含量，它的菌丝 体侵入，它的类固醇受体和酵母形成蛋白酶的能力。研究已经表明真菌菌 丝能穿透阴道上皮(Mkel等.1988)。
已经使用乳酸菌，它们对预防阴道炎具有不同的结果。6个月酸奶摄 取减少了念珠菌建群和阴道炎的发生(Hilton等.1992，摄食含有嗜酸乳杆 菌(Lactobacillus acidophilus)的酸奶预防念珠菌阴道炎.Ann Intem Med 1992；116：353-357)。另一方面，根据Shalev小组(1996)进行的研究， 嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)酸奶与巴氏灭菌酸奶比较，减少了 细菌引起的阴道炎，而不是念珠菌属酵母引起的阴道炎(Shalev等.1996. 摄食含有嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的酸奶与摄食巴氏灭菌酸 奶比较对复发性念珠菌阴道炎和细菌性阴道病的预防.Arch Fam Med 1996； 5.593-596；Sieber R，Dietz U-T.细菌性阴道病预防和治疗中的嗜酸乳杆菌 和酸奶.Int Dairy J 1998；8：599-607；也参见Redondo-Lopez等.1990.乳杆 菌在阴道细菌微生物菌群的控制和维持中的新作用，Rev Infect Dis 1990； 12：856-872)。
酵母真菌也引起尿道炎。
几个研究已经表明20-40％的人在胃肠道中带有白色念珠菌(Lennette 等.1985.临床微生物学手册，第4版.American Society for Microbiology， Washington D.C.，1985)。酵母在胃肠道中的过度生长通常显现为腹泻。
术语“酵母综合症”通常指胃肠道中白色念珠菌(Candida albicans) 增加的生长，据认为该增加的生长可以抑制免疫系统，并且引起不同的综 合症。酵母过度生长与多种系统性症状，诸如中枢神经系统症状、不同的 疼痛、疲劳和肠道症状有关。据认定所述症状是由于酵母释放的毒素引起 的。然而，在这些症状和酵母之间尚不存在科学的相关性证据。用低碳水 化合物、无酵母的饮食，可能地有利的酸化的和/或富含纤维的营养物质治 疗酵母综合症。特别地，酸化食物和酸化乳制品形成了饮食治疗的重要成 分。因此，乳酸细菌常常用于平衡扰乱的肠内菌群。
因此，酵母间接地和直接地引起许多种类的疾病。因此，持继需要发 现新的方法以抑制酵母生长和活性，预防和治疗酵母引起的疾病，和缓解 酵母相关的症状。
做为药物治疗的替代方案或者附加方案，现今在进行利用其它卫生保 健方法的尝试。最近的方法之一是利用实际上已受到消费者热烈欢迎的促 进健康的营养物质或天然产品。因此，将抑制酵母生长和活性的促进健康 的产品添加至一系列市售产品中是高度受欢迎的。优选地，这些产品应该 是令人喜受的，并且是消费者有些熟悉的，从而使得例如消费者容易采用 它们做为正常的每日饮食的一部分。
在现有技术文献中描述了益生菌做为抗微生物剂的作用。乳酸细菌能 产生抗微生物的化合物、有机酸、乳酸、脂肪酸、过氧化氢、双乙酰、二 氧化碳和细菌素，这使得它们能抑制致病性微生物的生长(McGroarty JA. 人类女性泌尿生殖道中乳杆菌的益生菌作用，FEMS Immunol Med Microbiol 1993；6：251-264)。有些嗜酸乳杆菌株系通过产生过氧化氢体外 防止念珠菌生长(Jack M，Wood JB，Berry DR.硫氰酸酯参与酸乳杆菌对 白色念珠菌的抑制的证据.Microbios 1990；62：37-46；Fitzsimmons N， Berry DR.通过嗜酸乳杆菌抑制白色念珠菌：过氧化物酶系统参与的证据. Microbios 1994；80：125-133)。已发现鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)LGG ATCC 53103也产生抗微生物的化合物，可能是短链脂 肪酸，其体外抑制例如大肠杆菌(Escherichia coli)，假单胞菌属 (Pseudomonas)，沙门氏菌属(Salmonella)，链球菌属(Streptococcus)， 芽孢杆菌属(Bacillus)，梭菌属(Clostridium)和双歧杆菌属 (Bifidobacteriutm)的生长(Silva M，Jacobus NV，Deneke C，Gorbach SL. 来源于人类乳杆菌属株系的抗微生物物质.Antimicrobial Agents Chemother 1987；31：1231-1233)。
乳酸细菌也可以阻止其它微生物附着到上皮细胞上。例如，已经发现 在体外条件下，一些嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和干酪乳杆菌 (L.casei)株系阻止22-46％白色念珠菌附着到尿道上皮细胞(uroepithelial cell)上(Reid G，Tieszer C，Lam D.乳杆菌对金黄色葡萄球菌 (staphylococcus aureus)和白色念珠菌(C.albicans)附着到纤维和上皮 细胞上的影响.J Indust Microbiol 1995；15：248-253)。在动物试验中发现 鼠李糖乳杆菌LGG通过刺激细胞介导的白色念珠菌抗体免疫应答可以减 少小鼠胃肠道中白色念珠菌的数量和口腔区域的念珠菌病(Wagner RD， Pierson C，Warner T，Dohnalek M，Farmer J，Roberts L等.免疫缺陷小鼠 中益生细菌对念珠菌病的生物治疗作用.Infect Immun 1997；65： 4165-4172；Wagner RD，Pierson C，Warner T，Dohnalek M，Hilty M， Balish E.喂食热灭活的嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌对定居了白色念珠菌的免 疫缺陷小鼠的益生菌作用.J Food Protect 2000；63：638-644)。
已发现乳杆菌LC 705和费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii ssp.shermanii)PJS一起作用时可以在酸奶和凝乳酪中抑制 酵母生长(Suomalainen T，Myr-Mkinen A.丙酸细菌做为发酵牛奶和面 包中的保护性培养物.Lait 1999；79：165-174)。
通过增加巨噬细胞和天然杀伤细胞的活性，T和B细胞的数量和抗体 比例，乳酸细菌和它们的细胞结构可以激活器官系统的抗性(Perdigon G， Alvarez s，Rachid M，Agüero G，Gobbato N.专题论文：人类的益生细菌： 用于有效性评估的临床系统；益生菌对免疫系统的刺激.J Dairy Sci 1995； 78：1597-1606)。
也已经发现鼠李糖乳杆菌LGG增强肠道对有害细菌、病毒和酵母的 正常抵抗力(Kaila M，Isolauri E，Soppi E等.人类乳杆菌株系对人类腹泻 中循环抗体分泌细胞应答的增强.Pediatr Res 1992；32：141-144；Wagner 等.1997)。在动物试验中，乳杆菌GG也增加了唾液中分泌性IgA含量 (Negretti F，Casetta P，Clerici-Bagozzi D，Marini A.在兔中用乳杆菌GG 口服治疗后关于肠和系统免疫应答的研究.Phisiopath Clin 1997；7： 15-21)。已知粘膜的分泌性IgA保护呼吸道、胃肠道和泌尿生殖器官不受 感染(Nagura H.粘膜防御机理和分泌性lgA系统，Bifidobacteria Microflora 1990；9：17-25)。因此，乳酸细菌也可以减少呼吸道和胃肠道感染，在对 日托儿童进行的研究中已经获得了这种指示((Hatakka K，Savilahti F， PnkA，Meurman JH，Poussa T，Nse L，Saxelin M，Korpela R.长期食 用益生菌牛奶对参加日托中心的儿童的感染的影响：双盲随机试验.在 2000年5月提交给BMJ)。
发明简述
本发明目的是提供能够抑制或减少人类和动物中酵母生长和活性的手 段。通过如独立权利要求中所述特征的本发明的产品，用途和方法达到该 目的。从属权利要求中公开了本发明优选的实施方式。
本发明基于：利用特定的益生菌抑制酵母生长和活性，预防和治疗酵 母引起的疾病和缓解人类和动物中酵母相关的症状。
因此，本发明涉及微生物鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus) LGG，ATCC 53103，鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)LC705， DSM 7061和费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii)PJS，DSM 7067用于抑制人类和动物中的酵母的用途。
对于本发明的目的，可以单独或联合摄取这些细菌。可以就此，例如 以冻干产品形式摄取这些细菌，或者这些细菌可以用做可食性产品，诸如 乳制品和饮料的添加剂或组分。对于制备菌株联合，可以使用每种细菌的 混合培养物或纯培养物。也可以制备单位剂量形式诸如胶囊形式的组合。 胶囊可以含有优选地冻干培养物形式的所有上述细菌，或者可以制备一系 列3种胶囊，每种胶囊一种细菌。
因此，本发明也涉及细菌鼠李糖乳杆菌LGG，ATCC 53103，干酪 乳杆菌鼠李糖亚种(Lactobacillus casei ssp.rhamnosus)LC705，DSM 7061 和费氏丙酸杆菌谢氏亚种PJS，DSM 7067用于制备抑制酵母的产品的用 途。
产品可以是例如，食品工业产品或制药工业产品，或者促进健康的产 品或天然产品。优选的产品包括促进健康的奶制品诸如干酪，其中与产品 制造相关向其中添加微生物。这些微生物也可以用作引子(starter)和作 为构成干酪或其它产品结构的元件。第二组优选的产品包括药物制剂，特 别是片剂和胶囊，它们除了含有上述微生物外，还含有这些产品中常常使 用的助剂和添加剂，并且也可能含有其它活性组分。特别地，优选的产品 包括口服食用的制剂，诸如片剂和胶囊，它们除了含有LGG，LC705和PJS 外，还含有木糖醇。除了本发明使用的微生物外，产品也可以含有其它微 生物。
这里公开的细菌、组合和其它产品对出现在人类器官系统中的酵母的 生长和活性有作用，并且它们可以预防酵母感染。因此，它们可以用于预 防酵母引起的病症和疾病，用于缓解与此相关的症状，和用于一般的健康 改善。
本发明还涉及在人类和动物中抑制酵母生长和预防或治疗酵母引起的 疾病或缓解酵母相关症状的方法，该方法包括以足以产生期望效果的量给 需要的个体施用微生物鼠李糖乳杆菌LGG，ATCC 53103，干酪乳杆菌鼠 李糖亚种LC705，DSM 7061和费氏丙酸杆菌谢氏亚种PJS，DSM 7067。
发明详述
因此，本发明涉及特定益生力用于抑制人类或动物器官系统中的酵母 生长和活性的用途。
益生菌是活的微生物，当将其施用给人类或动物时，其通过改善肠内 微生物平衡可以促进宿主健康；在这方面，或者除了这方面外，益生菌还 可以具有许多其它有用的特性。
最重要的益生菌是乳酸细菌，丙酸细菌和双歧杆菌。这些细菌本质上 属于人类和动物的器官系统。乳杆菌是人类器官系统正常细菌菌群中重要 的部分(Redondo-Lopez V，Cook RL，Sobel JD.乳杆菌在阴道细菌微生物 菌群控制和维持中的新作用.Rev Infect Dis 1990；12：856-872)。而丙酸细 菌出现在皮肤上和胃肠道中(MacFarlane GT，Allison C，Gibson SAW， Cummings JH.微生物菌群有助于人类大肠中蛋白质水解.J Appl Bacteriol 1988；64：37-46)。由于它们的安全性和促进健康的作用，益生菌常常用 在食品中。
在现有技术中已经描述了本发明将要使用的鼠李糖乳杆菌LGG， ATCC 53103，干酪乳杆菌鼠李糖亚种LC705，DSM 7061和费氏丙酸杆菌 谢氏亚种PJS，DSM 7067。
例如，在美国专利5,032,399，Gorbach & Goldin中描述了鼠李糖乳杆 菌GG(LGG)。已经从人粪便分离了该株系，它能在pH3中很好地生长， 并且即使在更低pH值及高胆汁酸含量下它也能存活。该株系显示了对粘 液和上皮细胞优良的附着。从葡萄糖产生乳酸的产率良好：当在MRS肉 汤中生长时，该株系产生1.5-2％的乳酸。该株系不发酵乳糖。该株系利用 下面的碳水化合物：D-阿拉伯糖、核糖、半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D- 甘露糖、鼠李糖、半乳糖醇、肌醇、甘露醇、山梨糖醇、N-乙酰葡糖胺、 苦杏仁苷、熊果苷、七叶苷、水杨苷、纤维二糖、麦芽糖、蔗糖(慢慢地)、 海藻糖、松三糖、龙胆二糖、D-塔格糖、L-岩藻糖和葡糖酸。在+15-45℃， 该株系生长良好，最适温度是30-37℃。鼠李糖乳杆菌GG保藏在保藏机 构美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号是ATCC 53103。
鼠李糖乳杆菌GG是人体中的天然细菌株系，并且已经广泛地研究了 它的益生菌作用(Saxelin M.乳杆菌GG-具有详尽临床文献记载的人类益 生菌.Food Rev Int 1997；13：293-313)。它在胃肠道中保持生活力，并且 能临时定居在肠内(Goldin BR，Gorbach SL，Saxelin M，Barakat S， Gualtieri L，Salminen S.人类胃肠道中乳杆菌属物种(株系GG)的存活. Dig Dis Sci 1992；37：121-128)。LGG看起来至少也能临时定居在口腔中， 因为为期7天的LGG酸奶摄取结束后，长达两周长的时间在受试者的唾 液中发现了该细菌(Meurman JH，Antila H，Salminen S.在食用乳杆菌 GG(ATCC 53103)制备的酸乳后，从健康志愿者唾液中回收该乳杆菌株 系GG(ATCC 53103).Microbiol Ecol Health Dis 1994；7：295-298)。 目前，LGG被添加到大量商业销售的酸奶和果汁产品(Gefilus)中。
在芬兰专利92498，Valio Oy中更详细地描述了干酪乳杆菌鼠李糖亚 种LC705。LC705是以链的形式存在的革兰氏阳性短杆菌；同型发酵；弱 蛋白水解；在+15-45℃，该株系生长良好；不从精氨酸产生氨；是过氧氢 酶阴性；当在MRS肉汤(LAB M)中生长时，该株系产生具有L(+)构 型光学活性的乳酸(1.6％)；该株系分解柠檬酸盐(0.169％)，因此产生 双乙酰和3-羟基丁酮；该株系发酵至少下面碳水化合物(糖，糖醇)：核 糖、半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-山梨糖、鼠李糖、甘露醇、 山梨糖醇、甲基-D-葡糖苷、N-乙酰葡糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶苷、 水杨苷、纤维二糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、龙胆二糖、 D-松二糖和D-塔格糖。LG705弱附着到粘液细胞上，但是适度地附着到上 皮细胞上。在低pH和高胆汁酸含量中，该株系的生存力良好。该株系在5 ％的盐度中存活良好，在10％的盐度中存活得相当好。干酪乳杆菌鼠李糖 亚种LC705保藏在德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM))，保藏号是DSM7061。
鼠李糖乳杆菌LC705可以例如用在瑞士埃曼塔尔干酪的制造中以防 止梭菌(Clostridia)引起的丁酸发酵。该株系也用在食品中，在食品中， 它做为酵母和霉菌生长的抑制剂。在生物保存中，LC705株系与费氏丙酸 杆菌谢氏亚种PJS联合(FI92498)。
在芬兰专利92498，Valio Oy中也更详细地描述了费氏丙酸杆菌谢氏 亚种JS(PJS)。PJS是革兰氏阳性短杆菌；它发酵葡萄糖、果糖、半乳 糖和乳糖；它很好地发酵乳酸盐；并且它的最适生长温度是32℃。该株系 在低pH值和高胆汁酸含量中的生存力是优良的。费氏丙酸杆菌谢氏亚种 JS保藏在德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM))，保藏号是DSM 7067。
除了根据本发明使用的微生物外，制造的产品也可以含有其它微生物， 诸如乳业中所使用的引子中含有的微生物和益生菌。存在大量有文献详尽 记载的引子菌株，这些菌株可以从生产者诸如丹麦的Hansen A/S和德国的 Danisco/Wiesby GmbH商购。
可以以纯培养物或不同混合的培养物形式，利用常规方法培养本发明 使用的微生物。可以就这样使用培养物，或者如所期望的处理培养物，例 如纯化、浓缩、冻干或成品化以产生不同的产物。例如，在公开的文献 FI92498和FI 20010157中详细地描述了本发明所用微生物的制备。
根据本发明，足够量的益生菌用于产生期望的酵母抑制作用。因此， 可以例如，根据益生菌细胞的总数、总日剂量和产品的其它特性和组分， 在大的范围内变化每种益生菌的数量。对于菌株组合，日剂量中益生菌含 量通常是约106-1010cfu。
根据本发明，益生菌适于就这样消费，或者例如，在常规用于制备药 品的方法中制成胶囊、丸或片剂。本发明所用益生菌也可以添加到不同食 用产品，诸如食品、饮料和糖食工业产品中，添加到健康促进产品、天然 产品等中。在本发明范围中，含有特定益生菌的乳制品，特别地，干酪和 涂抹食品、酸奶和其它酸化乳产品及儿童食品，果汁和汤、以及胶囊、丸 和片被认为是优选的实施方式。
利用常规方法生产成品，其中在制备产品的过程中或在之后，在成品 化过程中，添加益生菌。
进行了试验以研究本发明所用益生菌抑制口腔酵母生长的作用，其中 所述试验在公开文献中有更详细的描述。这些酵母中最常见的一种酵母是 白色念珠菌(Candida albicans)，它是酵母物种好的代表，并且广泛地 存在于人类生物体中，也是最有用的口腔和器官系统的其它部分中出现的 其它酵母物种的模型生物体。实施例中所示结果表明本发明所用益生菌对 口腔酵母数量具有统计学上显著的降低作用。根据初步的结果，显然，本 发明可以应用于大程度地抑制、减少和减慢酵母的生长和活性，其中该酵 母也出现在器官系统的其它部分中，诸如肠道和泌尿生殖区中。
现在参考下面的实施例更详细地描述本发明，提供这些实施例只是示 例本发明，而不应该认为这些实施例以任何方式限制了本发明的保护范围。
实施例1
益生菌对白色念珠菌(Candida albicans)出现的影响
该研究的主要目的是查明是否含有乳杆菌和丙酸细菌的益生菌联合可 以用于减少口腔中白色念珠菌的出现。选定含有活鼠李糖乳杆菌LGG， ATCC 53103，鼠李糖乳杆菌LC705，DSM 706l和费氏丙酸杆菌谢氏亚种 PJS，DSM 7067微生物的瑞士埃曼塔尔干酪(Emmental cheese)做为试 验材料。选择干酪是因为它是属于日常饮食的产品，它吃起来味道很好， 并且根据本研究的目的容易分配。用做对照的干酪是荷兰艾丹姆干酪 (Edam cheese)，它不含有所述的三种细菌株系，但是含有正常的引子微 生物，该引子微生物是乳球菌(Lactococci)。
入选240名个体用于该研究，他们的年龄从70岁到100岁。
该研究以安慰剂对照的双盲试验形式实施，具有平行的研究组。总的 研究期是19周，其中3周的导入期(run-in period)和16周的介入。在 整个研究中禁止使用含有益生菌的食品。禁止的食品列表包括例如 Emmental干酪和Polar干酪、凝乳酪、含有活乳酸菌的酸化乳产品、益生 菌果汁和各种胶囊及相似的压缩产品。
在整个研究期间，受试者坚持他们通常的口腔卫生习惯和他们正常的 生活方式。
介入：干酪介入持续了16周(wk)。在该期间，每天，一半受试者 食用50g(＝6-7片)含有益生菌的干酪，另一半食用相同量的对照干酪。 在早餐和晚餐，用药和洗牙后食用未加热的干酪。益生菌干酪含有107cfu/g 鼠李糖乳杆菌LGG，107cfu/g鼠李糖乳杆菌LC705，和107cfu/g费氏丙酸 杆菌谢氏亚种PJS。因此，细菌总数是109-1010cfu/天。
临床口腔对照：进行口腔对照，并且在受试者居住的养老院/疗养所取 唾液样品。临床检查包括记录填充牙(filled teeth)和除去的牙(removed teeth)及龋齿(DMF)。也检查牙周组织的情况，并且根据CPI指数分 类。如果在口腔粘膜中有变化，记录这些变化(包括感染、变色、创伤、 苔癣样损伤和溃疡，增生、粘膜白斑(leucoplakia)、粘膜红斑和其它变 化)。在研究开始(0wk)和研究结束(16wk)时都进行临床对照。
唾液样品：在每天早晨，上午8点和11点间取唾液样品以测定酵母、 唾液分泌率和缓冲能力。总是尝试在相同时间从各个体取样。在取样前l 小时，不允许受试者食用食物或洗牙。在研究开始(0wk)时，在研究的 中期(8wk)和结束(16wk)时，采取用于酵母分析的唾液样品。从第一 个样品(0wk)和最后一个样品(16wk)测定唾液分泌速率和缓冲能力。 从唾液检测酵母，其中用棉签从口腔粘膜取样。利用Dentocult CA培养方 法，其中在37℃，在培养箱中温育试管2天，然后以0-3的等级(0＝无菌 落，1＝1-20cfu/条(slip)，2＝21-50cfu/条，3＞50cfu)半定量地测定酵 母生长，由此检测酵母(主要是白色念珠菌)。
通过测量静止性(resting)唾液和刺激性唾液确定唾液分泌速率。唾 液分泌过少的限值被认为是0.1ml/min静止性唾液；因此收集静止性唾液 15分钟(1.5ml/15min)。收集刺激性唾液5分钟(唾液过少的限值是 3.5ml/5min)。
唾液缓冲能力与分泌速率有关。为此，用Dentobuff试验测量缓冲能 力。对刺激性唾液进行该试验，因为静止性唾液的缓冲能力总是很低的。
在介入期结束时，酵母的数量形成了该研究中的初级应答变量。利用 卡方检验，检测组之间的酵母出现和数量的差异。此外，利用逻辑回归分 析，考虑基线情况下的酵母出现或数量及人口统计因素(诸如年龄、性别、 假体(prosthesis))，如果这些存在的话。在这方面，也将唾液分泌率和 缓冲能力考虑为解释性因素。相应地分析高唾液含量。描述了唾液分泌率 和缓冲能力的改变。
在下面的表中示出了结果，其中A代表食用益生菌干酪的组，B是对 照组。
菌落数量表示如下：
0＝无菌落；
1＝1-20cfu/条；
2＝20-50cfu/条；
3＝大于50cfu/条；。
表1表示在研究开始时和介入的第8和16周后受试者的精确酵母测量 值，其中从该受试者获得所有3次测量值(组A，n＝92，组B，n＝100)。 表2表示在研究开始时和介入的第8和16周后受试者的分类酵母数量，其 中从该受试者获得所有3次测量值(组A，n＝92，组B，n＝100)。
表1在研究开始时和介入的第8和16周后的精确酵母结果
 A  n     ％  B  n    ％ 基线    0         1         2         3  27    29.3  37    40.2  17    18.5  11    12.0  30    30.0  42    42.0  14    14.0  14    14.0 8wk     0         1         2         3  32    34.8  37    40.2  10    10.9  13    14.1  37    37.0  32    32.0  15    15.0  16    16.0 16wk    0         1         2         3  35    38.0  38    41.3  11    12.0  8     8.7  33    33.0  33    33.0  17    17.0  17    17.0
表2在研究开始时和介入的第8和16周后分类的酵母含量 0比1-4
 A  n     ％  B  n     ％ 基线  0       1-4  27    29.3  65    70.7  30    30.0  70    70.0 8wk   0       1-4  32    34.8  60    65.2  37    37.0  63    63.0 16wk  0       1-4  35    38.0  57    62.0  33    33.0  67    67.0
0-1比2-4
 A  n     ％  B  n     ％ 基线 0-1      2-4  64    69.6  28    30.4  72    72.0  28    28.0 8wk  0-1      2-4  69    75.0  23    25.0  69    69.0  31    31.0 16wk 0-1      2-4  73    79.3  19    20.7  66    66.0  34    34.0
0-2比3-4
 A  n      ％  B  n     ％ 基线 0-2      3-4  81     88.0  11     12.0  86    86.0  14    14.0 8wk  0-2      3-4  79     85.9  13     14.1  84    84.0  16    16.0 16wk 0-2      3-4  84     91.3  8      8.7  83    83.0  17    17.0
直接地和在考虑了干扰因素(如果有)的情况下，对介入的第8和16 周后组A和B的酵母出现进行比较。如果有干扰因素，这些因素为年龄、 性别、居住的类型、诊断的次数、药物的数量、BMI、唾液流速、缓冲能 力和假体。利用逐步逻辑回归考虑这些干扰因素。使该组和基线酵母情况 进入模型(块1)，逐步考虑列表上的干扰因素(块2：显著性标准p小于 0.15)。在下表中示出了该结果，其中表3显示较高酵母出现的组，即2-4 类组中的直接比较，表4考虑了干扰因素，表5表示高酵母出现组，即3-4 类组中的直接比较，表6考虑了干扰因素。在这些表中，缩写OR＝优势 率(odds ratio)，用于OR的缩写CI＝优势率的置信区间。
              表3  较高的酵母出现(2-4类)
a)8周后
  B     p值     OR  OR的95％  CI 组A   -0.469     0.178     0.625  0.316-1.239 起始的酵母2-4   2.382     ＜0.0001     10.825  5.450-21.500 常量   -1.520     ＜0.0001
a)16周后
    B     p值     OR  OR的95％  CI 组A     -0.946     0.014     0.388  0.182-0.826 起始的酵母2-4     2.244     ＜0.0001     9.4355  4.461-19.957 常量     -1.390     ＜0.0001
            表4  较高的酵母出现(2-4类)，考虑了干扰因素
B p值  OR   OR的95％CI 步骤1 组A 起始酵母2-4 缓冲能力 缓冲能力(H) 缓冲能力(M) 常量 -1.229 1.911 -2.318 -1.614 0.481 0.0082 ＜0.0001 0.0002 ＜0.0001 0.0113 0.3896  0.293  6.757    0.098  0.199  1.617   0.118-0.728   2.875-15.884     0.032-0.299   0.057-0.694 步骤2 组A 起始酵母2-4 缓冲能力 缓冲能力(H) 缓冲能力(M) 假体(状态1) 常量 -1.378 1.845   -2.388 -1.588 1.117 -0.246 0.0043 ＜0.0001 0.0003 ＜0.0001 0.0152 0.0390 0.7165  0.252  6.325    0.092  0.204  3.057  0.782   0.098-0.649   2.636-15.178     0.029-0.290   0.057-0.737   1.058-8.831
                         表5  高酵母出现(3-4类)
a)8周后
    B     p值     OR     OR的95％CI 组A     0.029     0.956     1.029     0.373-2.837 起始的酵母3-4     4.022     ＜0.0001     55.8     18.7-166.8 常量     -2.782     ＜0.0001
a)16周后
    B     p值   OR   OR的95％CI 组A     -0.824     0.098   0.439   0.165-1.164 起始的酵母3-4     2.420     ＜0.0001   11.244   4.186-30.208 常量     -2.142     ＜0.0001
                 表6  高酵母出现(3-4类)，考虑了干扰因素
B  p值  OR  OR的95％CI 步骤1 组A 起始酵母3-4 缓冲能力 缓冲能力(H) 缓冲能力(M) 常量 -1.067 2.221   -1.629 -0.551 0.982  0.0657  0.0003  0.0370  0.0142  0.4525  0.1136  0.344  9.216    0.196  0.576  0.375  0.110-1.072  2.798-30.359    0.053-0.721  0.137-2.428 步骤2 组A 起始酵母3-4 缓冲能力 缓冲能力(H) 缓冲能力(M) 女性的产生 常量 -1.213 2.300   -1.807 -0.726 -0.956 -0.154  0.0437  0.0002  0.0238  0.0080  0.3339  0.0991  0.8452  0.297  9.974    0.164  0.484  0.385  0.857  0.091-0.966  2.979-33.396    0.043-0.624  0.111-2.109  0.124-1.197 步骤3 组A 起始酵母3-4 缓冲能力 缓冲能力(H) 缓冲能力(M) 女性的产生 假体(状态1) 常量 -1.475 2.213   -1.846 -0.781 -1.371 1.274 -0.713  0.0222  0.0004  0.0256  0.0086  0.3151  0.0305  0.1003  0.4344  0.229  9.145    0.158  0.458  0.254  3.576  0.490  0.065-0.810  2.704-30.924    0.040-0.625  0.100-2.101  0.073-0.879  0.782-16.350
结果表明老化、假体的应用和减少的唾液分泌明显地与增加数量的酵 母有关。而且发现声称在研究前有规律地地使用含有乳酸细菌产品的受试 者具有较低的起始酵母数量。
当单独检查酵母结果而不考虑干扰因素时，可以看到酵母数量在益生 菌组中比在对照组中减少更多。无论关注于研究酵母出现(1-4)、较高酵 母出现(2-4)还是高酵母出现(3-4)，结果表明随着介入的进行，在所 有这些组中属于益生菌组的比例均降低了。而属于对照组的比例明显地没 有同样地变化。相反，对照组中属于较高酵母出现组的比例似乎甚至增加 了。
当考虑干扰因素时，观察到与对照组比较，在较高(2-4)和高(3-4) 酵母数量出现上，益生菌介入引起了统计学上显著的降低。
因此，这些结果表明通过利用含有上述益生菌的干酪，可以显著地减 少酵母数量。因此，与本发明目的相符，本发明可以用于抑制酵母。