一种加强调节肠道菌群功能的保健食品及其制备方法 |
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| 申请号 | CN201610937952.5 | 申请日 | 2016-10-25 | 公开(公告)号 | CN106491657A | 公开(公告)日 | 2017-03-15 |
| 申请人 | 广西泰和制药有限公司; | 发明人 | 陈治伟; 张喜均; 韩宇强; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种加强调节肠道菌群功能的保健食品及其制备方法：1)取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过筛，备用；2)按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、麦芽糊精和苹果果粉加入混合机中混合，转速控制在120-150r/min，再与低聚果糖置总混机中混合，转速控制在120-150r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得；步骤2)所述的配方量是：嗜酸乳杆菌菌粉40-60份、两歧双歧杆菌菌粉40-60份、长双歧杆菌菌粉40-60份、低聚果糖1200-1600份、麦芽糊精200-300份、苹果果粉200-300份。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种加强调节肠道菌群功能的保健食品的制备方法，其特征在于： |
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| 说明书全文 | 一种加强调节肠道菌群功能的保健食品及其制备方法技术领域[0001] 本发明涉及保健食品技术领域，具体涉及一种加强调节肠道菌群功能的保健食品及其制备方法。 背景技术[0002] 生活在现今的都市，我们每个人的健康都容易受到许多威胁，包括空气污染、食水污染、环境污染、工作压力、经济压力、细菌病毒、饮食不当、令人寝食不安，所有这些不利健康的因素，都会导致免疫力低下。随着社会节奏的加快，免疫力低下是一普遍现象，严重地影响着人类的日常生活、工作和学习的机体障碍，同时可产一系列的亚健康临床症状，如记忆力减退、食欲不振、精神不振、嗜睡、多梦、乏力、易感冒、肠胃功能紊乱等。 [0003] 人体对于疾病具有自愈能力，而肠道在这方面扮演着重要角色。因为，肠道是人体最大的免疫器官，肠道黏膜免疫系统包括肠道相关淋巴组织和有关细胞、分子成分，它可抵御细菌、病毒和毒素从消化道入侵，担负着重要的免疫功能，成为防止外界致病因子入侵体内的一道坚固屏障。而由于环境的污染、生产制造食物所加入的各种外源性添加剂，滥用抗生素对肠道正常菌群的破坏，导致人们的免疫力低下，肠道菌群失衡。一些看似不起眼的小病正使人们从健康状态步入亚健康状态，进而感染疾病。 [0004] 益生菌是对机体健康有益的一类低致病性或无致病性微生物。作为促进机体健康的有益茵，益生菌具有多方面的功能：不仅可以促进营养物质消化吸收，减轻机体的应激反应，降低血胆固醇，还可以调节免疫功能。研究表明，益生菌一般能够在肠道内定植，维持肠道菌群平衡，刺激胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的发育，增强巨噬细胞的吞噬活性，活化肠道相关淋巴组织，促进免疫球蛋白A的生成，从而调节机体的免疫功能。 [0005] 人自出生起便有细菌定植于胃肠道中，在胃肠道中共寄生有300-500种微生物，总数约1×1014个左右。这些细菌由专性厌氧菌、兼性厌氧菌和需氧菌组成，其中专性厌氧菌占97％-99％。由于胃内独特的环境，绝大部分经口进入的细菌均被胃酸杀死而无法在胃黏膜定植，但有些细菌，如幽门螺杆菌可利用其分泌的尿素酶分解胃内尿素，使细菌周围pH值升高，从而可在充满胃酸的环境中生存。由于食入的细菌在胃内大部分被杀死，再加上小肠蠕动较快，因而小肠内细菌含量较少。结直肠由于与外界直接相通，又无特殊的保护机制，因此结直肠含有人体内绝大部分的细菌。粪便的有形物质一半为细菌菌体，主要为厌氧茵。益生菌能通过自身代谢维持肠道菌群平衡，抑制有害细菌生长。 [0006] 人体补充益生菌非常必要。人体在生病的时候，通常使用一些抗生素药品进行感染症治疗，不仅杀死了致病菌，同时也将一些原本对人体非常有益的益生菌一起给杀灭了，从而导致人体的抵抗力减弱，病越治越多。国家医药卫生管理部门对此己引起高度重视，并出台了一些相关规定，要求购买抗生素必须凭医师处方等，一方面防止患者滥用抗生素，同时也在警示大家：抗生素在治疗疾病的同时，也会给身体带来不可小视的副作用。在大量抗生素的作用下，非常有必要及时补充益生菌，以维护人体的动态平衡，恢复人体应有的抵抗力。另一方面，人体因逐步走向衰老，益生菌的数量也会不断减少，补充益生菌可以进一步提高“机体防御能力”，而对预防疾病有益处。 [0007] 乳杆菌和双歧杆菌一直被认为是最具代表性的益生菌。最新发表的数据表明，乳杆菌和双歧杆菌相关产品正日益成为极具市场前景的产业。其中，乳酸菌饮料、双歧杆菌发酵酸乳以独特的口感和健康理念为消费者及生产者所关注，发展迅速。 [0008] 全球产业分析公司(GIA)在前不久发表的《益生菌：全球战略经营报告》中指出，预计到2010年，全球益生菌市场的销售规模将达到200亿美元。消费者意识的提高、医疗保健费用的居高不下、益生菌有利于身体的特殊好处以及消费者对预防性医疗保健越来越感兴趣，正成为推动该市场发展的重要因素。不过，虽然益生菌市场在近年来取得了长足的发展，但整个市场仍然处于初级发展阶段。 [0009] 益生菌被视为21世纪重要的医疗保健概念。正如GIA公司指出的，随着人们对健康的认识日益提高，以益生菌产品为形式的预防性药物逐渐受宠。在亚洲和欧洲，益生菌早已得到了普遍的认可，亚洲人和欧洲人在广泛使用这种产品，这种流行趋势同时也在向全球各地蔓延。在全球益生菌市场上，欧洲市场规模最大、增长最快，预计该市场2007年的销售收入达到了57亿美元。美国是全球第二大益生菌市场，预计到2010年，这一市场的销售收入将达到46亿美元。在欧洲，市场规模最大的是德国，增长速度最快的则是英国，年均复合增长率(CAGR)在14％左右。随着国际市场上益生菌类产品的迅猛发展，势必会带动我国的益生菌类产品市场，所以该类产品前景看好。 [0010] 目前，市场上批准的同类产品较少，而市场上以双歧杆菌、乳酸杆菌、低聚糖等为主要原料，具有改善肠道菌群、增强免疫力功能的保健产品同类品种主要有：昂立一号(上海交大昂立生物制品有限公司)、合生元(广州市合生元生物制品有限公司)、生命卫士养生液(诸城市信得保健有限责任公司)、美康乐双歧杆菌活茵胶囊(广东健力宝有限公司)等，随着消费者对益生菌的逐步认识，益生菌类的保健产品还有很大的发展空间，目前的益生茵类产品还不能满足人们的需要。 发明内容[0011] 本发明要解决的技术问题是克服现有增强免疫力、调节肠道菌群的药物(保健食品)不足，提供一种具有增强免疫力、调节肠道菌群效果较好的又可长期使用副作用小的保健食品及其制备方法。 [0013] [0014] 优选地，它是由下列原料按重量份计制成： [0015] [0016] 优选的，本发明在配方中可以添加辅料400-600份，所述辅料为麦芽糊精200-300份、苹果果粉200-300份。 [0017] 进一步优选的，所述辅料为麦芽糊精250份、苹果果粉250份。 [0018] 本发明所述药物组合物的剂型可以是胶囊剂、片剂、冲剂等医学上可接受的剂型，它们的制备方法、辅料用量按现有常规工艺进行。 [0019] 本发明所述药物组合物优选按照以下方法制备：取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、麦芽糊精和苹果果粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在120-150r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在120-150r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得。 [0020] 组方依据及保健功能筛选： [0021] 免疫是人或动物在历史进化过程中，形成的一种保护自己、排除异己的重要生理功能。一般微生物进入人体内，由于免疫作用而产生抗体，人体就可以排斥这些微生物。但是人体对正常的生理菌像乳酸菌类，通常不会引起产生排斥它的抗体，相反，这些生理菌具有促进人体的免疫功能。这些细菌进入肠道以后会刺激肠道的免疫系统，淋巴组织，从而产生分泌性抗体——免疫球蛋白A(lgA)，而lgA对疾病及致病菌的入侵有抵抗作用，不仅如此，更重要的有益菌能激活T细胞的非特异性免疫功能，引起中性粒细胞、巨噬细胞增殖及促进PK细胞(自然杀伤细胞)，并能诱发产生多种细胞因子如干扰素、白介素、肿瘤坏死因子(TNF)等，增强了抗感染、抗细胞突变、抗肿瘤，抗衰老能力。 [0022] 肠道是人体最大的免疫器官。如何增强肠道免疫功能。如果想让肠道发挥出最大免疫功能，除了避免“菌从口入”外，还得采取一些积极的措施来帮助肠道建立起一个健康的免疫环境。第一，营造肠道内有益菌的生长环境。补充益生菌的同时添加益生元—低聚果糖。其通过促进双歧杆菌增殖来调节肠道微生态平衡，诱导肠粘膜淋巴系统的免疫活性，以及激活细胞免疫和体液免疫等多种方式，从局部或整体增强机体免疫功能。第二，不断地补充肠道内有益菌群的数量。当大病初愈，或大量使用抗生素后，有益细菌的存活量就会过低，这时为了让肠道迅速恢复健康，应该服用含有活的益生菌的食品或保健品，从而起到恢复肠道免疫力的作用。 [0023] 因此，本发明组方以益生菌嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉为主要原料，并结合益生元低聚果糖使本品达到更好的增强免疫力和调节肠道菌群的作用，具体文献依据如下： [0024] 一、益生菌 [0025] 乳酸菌为一群可代谢碳水化合物而产生大量乳酸的一类细菌的总称。乳酸菌通常为革兰氏阳性，营养要求复杂，不运动，无芽孢，接触酶阴性，细胞色素阳性，厌氧或兼性厌氧。乳酸菌群作为肠道正常菌群，许多临床与动物试验结果证实，具有刺激肠道粘膜组成，影响粘膜免疫系统，而具有调节免疫作用，包括细胞色素的分泌，调节Th1与Th2免疫反应的平衡，促进NK细胞和巨噬细胞活性，以及抗体的产生和作用。许多疾病可通过免疫调节作用而达到预防和治疗的目的，如消化道疾病，过敏性疾病，癌症，泌尿系统疾病等。 [0026] 目前应用于功能性食品的常见益生菌主要指两大类乳酸菌群：一类为双歧杆菌，该类乳酸菌为全球公认的益生菌，尚未见不利于人体的报道。常见的有婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌等；另一类为乳杆菌，如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物杆菌和罗伊氏乳杆菌等，其中较新型的2个菌种为植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌。 [0027] 1、双歧杆菌 [0028] 双歧杆菌(Bifidobacterium，BFB)是由法国巴斯德研究院学者Tissier于1899年用厌氧培养法首次从健康母乳婴幼儿的粪便中分离出来的一种专性厌氧菌，它是健康人肠道内定植数量占优势的一种益生菌，具有免疫调节、抗肿瘤、抗菌消炎、抗衰老、降血脂等一系列保健功能，与人类的许多病理、生理现象密切相关。现己确认BFB是人体健康的重要指标之一。 [0029] 双歧杆菌是任何动物肠道的优势菌群，是维持宿主健康最重要的细菌。作为益生菌定植于宿主胃肠道产生的有益作用包括：(1)维持健康的正常菌群；(2)通过产生细菌素和降低PH抑制病原菌生长；(3)改善乳糖耐受；(4)产生维生素；(5)刺激免疫系统等。 [0030] 双歧杆菌可以作为非特异性免疫调节因子，通过细菌本身或细胞壁成分刺激并激活宿主免疫细胞，使其产生促分裂因子，促进吞噬细胞活力或作为佐剂发挥作用。其免疫调节途径有两种，即全身性免疫调节作用和肠道免疫调节作用。已有的研究表明，双歧杆菌免疫功能的某些环节，这些影响涉及到免疫应答的3个方面，即体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫。双歧杆菌作为免疫原可诱导各种免疫功能，使淋巴细胞增殖，NK细胞活性增强，单核巨嗜系统的吞噬作用增强，抗体产生细胞活化，各种细胞因子增多，提高局部和全身的免疫功能。双歧杆菌还有可能通过调节肠道菌群来提高机体肠道非特异性免疫防御功能，进而对整个机体的免疫功能产生影响。 [0031] 研究表明：小鼠经口给予双歧杆菌能改变肠道菌群的组成和数量，肠道内的双歧杆菌和乳杆菌的数量明显增加，而肠杆菌的数量下降。说明双歧杆菌具有一定的调节肠道菌群、增殖双歧杆菌和乳杆菌、抑制腐败菌的作用。正常机体和腹泻患者服用双歧杆菌后可增强双歧杆菌和乳酸杆菌在肠道菌群中的优势，限制类杆菌、肠杆菌和产气荚膜梭菌生长，调解菌群紊乱。 [0032] 本发明中添加的双歧杆菌为长双歧杆菌和两歧双歧杆菌。长双歧杆菌是革兰氏阳性菌，不抗酸、不形成芽孢，不运动。长双歧杆菌的细胞呈纤细杆状，也有长而弯曲状的或呈各种分支或分叉形、棍棒状或匙形。单个或链状，V形、栅栏状排列，或聚集成星状。细胞直径为1.5至6微米。最适生长温度37℃。长双歧杆菌为人体肠道中的数量最多的5种双歧杆菌之一。两歧双歧杆菌是人和哺乳动物回肠末端及大肠内最主要的生理性菌群，与人体健康息息相关。 [0033] 2、乳杆菌 [0034] 乳杆菌是能定植于脊椎动物消化道内最有价值的益生菌种之一。乳杆菌通过粘附素(细胞壁中的脂磷壁酸(LTA)、细胞表面S层蛋白及具有甘露糖特异性的细菌表面分子)与宿主细胞的细胞膜或黏膜上的粘附素受体(糖脂或硫苷脂类分子)粘附，然后定为定植，通过粘附和粘附拮抗效应竞争排斥病原菌的粘附和定植，促使致病菌离开感染的肠道，保护宿主免受侵害，起到定植拮抗的作用；同时通过产生细菌素、类细胞素拮抗物质和其他具有抑菌作用的代谢物(如过氧化氢和某些有机酸等)，抑制肠道有害菌，使有益菌占优势，调节肠菌群平衡。 [0035] 乳杆菌不仅可以直接抑制病原微生物的生长，而且还是良好的免疫激活剂，可通过刺激宿主特异性及非特异性免疫功能增强宿主的抗病能力。乳杆菌对非特异性免疫的调节主要包括加强吞噬细胞的吞噬能力、刺激细胞产生各种细胞因子来控制炎症反应的强度等。研究表明，乳杆菌能够激活巨噬细胞、B淋巴细胞和NK细胞，增加IL-1、IL-2、IL-6、IL-5、TNF-a等细胞因子的产生量，其中IL-6和TNF-a是被激活的巨噬细胞分泌的两种重要的细胞因子，IL-6可以促进淋巴细胞的增殖并参与与T淋巴细胞、CTL、NK细胞和lak细胞的活化。乳杆菌可使Th的分化向Thl偏移，使Thl细胞因子减少并进而影响IgGI、IgE的生成。SIgA是黏膜免疫的重要抗体，在局部抗感染过程中起着关键的作用。乳杆菌的代谢物和整个细胞等抗原物质能通过M细胞进入回肠派伊尔结，激活Th2细胞，产生大量的IL-5，而IL-5是有效的IgA产生因子，能激活PP生发中心的B细胞，使其转化为浆细胞，在生产Ig的过程中向IgA转化，从而使SIgA水平上升，当SIgA抗体分泌增强时，提高免疫识别力，并诱导T、B淋巴细胞和巨噬细胞等产生细胞因子，通过淋巴再循环而活化全身免疫系统，从而增强机体的免疫功能。 [0036] 本发明中添加的乳杆菌为嗜酸乳杆菌。嗜酸乳杆菌属乳杆菌科中的乳杆菌属，为革兰氏阳性菌。广泛存在于人及一些动物的肠道中，是有益微生物茵群，可以通过生物屏障与化学屏障来阻止和抑制各种致病菌与条件致病菌在肠道的定植、入侵和生长繁殖，起到调整肠道微生态失衡及生物拮抗作用，对维持胃肠道的生理功能有重要作用。 [0037] 二、益生元 [0038] 本发明中采用的益生元为低聚果糖。 [0039] 低聚果糖，低聚果糖(FOS)是以蔗糖为原料通过果糖转移酶的作用在蔗糖残基上结合1-3个分子果糖而获得的低聚的混合物。是双歧杆菌的活化增殖因子，可刺激双歧杆菌生长，从而调整肠内菌群状态。低聚果糖能通过改变肠道微生态环境而促进肠粘膜的淋巴细胞亚群分泌IgA和白细胞介素IL-5、IL-6，并抑制Th2控制的免疫应答。FOS可增加PP淋巴细胞的分泌，不仅在大肠而且在小肠部位均能激活或诱导粘膜免疫系统，产生免疫调节的作用。FOS通过促进双歧杆菌增殖来调节肠道微生态平衡，诱导肠粘膜淋巴系统的免疫活性，以及激活细胞免疫和体液免疫等多种方式，从局部或整体增强机体免疫功能。 [0040] FOS促进双歧杆菌增殖的同时，产生的短链脂肪酸能使肠内的PH值降低，刺激肠道粘液分泌并促进粘液层的流动，有效地阻止细菌对肠粘膜的附着，抑制外源性病菌和肠内固有腐败细菌的生长增殖，减少肠内腐败有毒物质氨、胺、硫化氢、吲哚的生成，维护肠道健康。因而具有良好的调节肠道菌群、增殖双歧杆菌的作用。此外，低聚果糖还具有调节人体免疫力，降低血脂等多种重要生理功能。 [0041] 与现有技术相比，本发明的有益效果： [0042] 1、本发明在益生菌的基础上添加了益生元低聚果糖，低聚果糖是双歧杆菌的活化增殖因子，通过促进双歧杆菌增殖来调节肠道微生态平衡，诱导肠粘膜淋巴系统的免疫活性，以及激活细胞免疫和体液免疫等多种方式，从局部或整体增强机体免疫功能。故本品具有保健功能明确的特点，且具有食品的感官，口感良好，作为粉剂质量稳定，服用量小、易于携带服用和贮存。 [0043] 2、现有的混合机，如果容积在0.025-0.5m3，一般适合实验室使用，转速在60-110r/min之间，大生产用的混合机容积一般在1-15m3，转速在15-55r/min之间。本发明在原料混合的步骤，将混合机转速控制在120-150r/min，因为配方中各原料的差异比较大，如果转速低于120r/min，则混合不均匀，影响混合性；如果转速高于150r/min，则物料容易发热，产生结块，影响混合性。本发明通过对生产上混合机转速的控制，使得物料的混合性最优。 具体实施方式[0044] 下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。 [0045] 实施例1 [0046] [0047] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、淀粉和滑石粉加入混合机中混合10分钟，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟至色泽一致，无色差，装入成胶囊，即得。 [0048] 实施例2 [0049] [0050] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、淀粉和滑石粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在100r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在50r/min，至色泽一致，无色差，压片，即得。 [0051] 实施例3 [0052] [0053] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在150r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在120r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得。 [0054] 实施例4 [0055] [0056] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、麦芽糊精和苹果果粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在150r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在120r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得。 [0057] 实施例5 [0058] [0059] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、麦芽糊精和苹果果粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在130r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在140r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得。 [0060] 实施例6 [0061] [0062] 取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、低聚果糖分别过60目筛，备用；按配方量称取嗜酸乳杆菌菌粉、两歧双歧杆菌菌粉、长双歧杆菌菌粉、麦芽糊精和苹果果粉加入混合机中混合10分钟，转速控制在150r/min，再与低聚果糖置总混机中混合约30分钟，转速控制在120r/min，至色泽一致，无色差，分装，即得。 [0063] 实验例：本发明实施例3对增强免疫力、调节肠道菌群功能人体试食试验： [0064] 试验资料：共观察受试者116例，北京联合大学应用文理学院保健食品功能检测中心卫生部北京医院进行。 [0065] 1.对象和方法： [0066] 1.1受试物：本组方例3的冲剂，为淡橙黄色粉末，由广西泰和制药有限公司提供。2g/袋，批号：301F11040801，阴凉、干燥处保存，保存期18个月。人体推荐服用量为4g/日。 [0067] 1.2受试对象：健康成年志愿者 [0068] 1.2.1纳入者标准： [0069] 1.2.1.1一个月内未患过胃肠疾病者。 [0070] 1.2.1.2一个月内未服用过抗生素者。 [0071] 1.2.2排除者标准： [0072] 1.2.2.1年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，对本保健品过敏者。 [0074] 1.2.2.3停服受试物或中途加服其它药物，短期内服用与受试功能有关的物品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。 [0075] 1.3实验设计与分组：采用自身前后对照和组间对照两种形式。受试者随机分为试食组和对照组，试食组服用受试物，对照组为空白对照。 [0076] 1.4服用剂量及时间：每次1袋，每日2次，服用量为4g/日，连续14天，受试者在试食期间停止服用与受试功能有关的物品，并且不改变平时的饮食习惯。 [0077] 1.5仪器与试剂 [0078] 1.5.1仪器：CA-500型血球计数仪(日本)，BM-200尿十项分析仪(美国)，AUTOLAB全自动生化分析仪(意大利)。显微镜NIKOM(日本)，ES-500电子天平，洁净工作台、恒温培养箱、恒温水浴锅、高压灭菌锅、混合器等。 [0079] 1.5.2试剂：伊红美蓝琼脂培养基、改良GAM琼脂、结晶紫、草酸铵、碘、碘化钾、蛋白胨、乳糖、溴甲酚紫、蕃红、多价胨、酵母浸膏、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、叠氮化钠、七叶苷、柠檬酸铁铵、琼脂、牛肉膏、酵母粉、葡萄糖、吐温80、乙酸钠、柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、琼脂、过氧化氢、可溶性淀粉、L-半胱氨酸、西红柿浸出液、吐温80、肝提取液、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、无水亚硫酸钠、D-环丝氨酸、氯化血红素、万古霉素、卡那霉素、新霉素、维生素K1等。主要试剂购于北京化工厂、北京化学试剂公司、北京奥博星生物技术有限公司。生化试剂盒全部由北京中生生物工程高技术公司提供。 [0080] 2.观察指标： [0081] 2.1功效性观察： [0082] 以下观察指标实验前后各检查一次。 [0083] 2.2一般情况： [0084] 详细询问病史，了解受试者饮食情况，观察睡眠、大小便、血压、精神状况等主要临床症状。观察受试物对受试者是否有不良影响。 [0085] 2.2.1功效性指标：双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆茵、拟杆菌和产气荚膜梭菌。 [0086] 2.2安全性观察： [0087] 2.2.1血、尿及便常规检查：(实验前后各检查一次) [0088] 红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数，尿十项检测，大便镜检等。 [0089] 2.2.2生化指标测定： [0090] 血清白蛋白ALB，总蛋白TP，肝肾功能(总胆红素TBIL，谷丙转氨酶ALT，谷草转氨酶AST，尿素氮BUN，肌苷CRE)，血糖GLU、血脂(总胆固醇TC，甘油三脂TG)。(仅在试验开始前进行) [0091] 2.2.3腹部B超，心电图，X线胸部透视。(仅在试验开始前进行) [0092] 3.实验方法和观察指标 [0093] 2.1试验步骤 [0094] 试食组人群试食受试物前，无菌采取受试者粪便，检验肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌、乳杆菌等指标。受试者每日服用受试物，连续14天。于服受试物最后一次24h后，无菌采取受试者粪便，再次检验上述指标。对照组人群试验前后粪便无菌采集和检验指标均同试食组。 [0095] 3.2肠道菌群检验方法 [0096] 收集受试者新鲜粪便于便盒中，立即送检。定量称取标本，10倍递增稀释混匀后，选择合适的稀释度，分别接种至各选择性培养基。 [0097] [0098] 3.3试验数据的统计处理 [0099] 用SPSS 11.0软件对各试验原始数据进行统计处理。凡自身对照资料可采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大(如CV﹥50％)的资料应用秩和检验。 [0100] 3.4结果判定 [0101] 符合以下任一项，且试食组试食前后自身比较及试食后试食组与对照组比较，差异均有显著性，可以判定该受试样品具有调节肠道菌群功能的作用。 [0102] 3.4.1粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠球菌、肠杆菌和拟杆菌无明显变化。 [0103] 3.4.2粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭茵减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌和拟杆菌明显增加，但增加的幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。 [0104] 4.实验结果： [0105] 4.1受试人群安全性指标 [0106] 试食组有效试食者54例，对照组有效试食者53例。试食组男性14例，女性40例，年龄38-65岁，平均年龄(54.6士6.9)岁；对照组男性12例，女性41例，年龄21-64岁，平均年龄(53.3+9.9)岁。受试人群血、尿、便常规、血压和血生化安全性指标见表1和表2。 [0107] 表1受试人群血、尿和便常规及血压 [0108] [0109] 表2受试人群试食前血生化指标 [0110] [0111] 由表1和表2可见，受试人群试食前上述安全性指标均在正常值范围内。 [0112] 受试人群试食前精神、睡眠、饮食、大小便及血压情况良好；心电图、B超及胸透检查均正常。试食期间，未观察到对健康的不良反应。试食后血、尿和便常规指标及血压无异常改变。 [0113] 对人体肠道菌群的影响 [0114] 表3人体试食前后的肠道菌群变化(logcfu/g， ) [0115] [0116] ***试食组试食前后自身比较P [0117] ##试食组与对照组比较P<0.01，#试食组与对照组比较P<0.05； [0118] ★试食前后自身比较P>0.05、试食组与对照组比较P>0.05。 [0119] 由表3可知，在试食前后自身相比中，对照组各指标菌变化均无显著性差异(P>0.05)。试食组双歧杆菌的数量增加有显著性差异(P<0.05)；乳杆菌的数量增加有显著性差异(P<0.001)；产气荚膜梭茵、肠杆菌、肠球菌、拟杆菌数量变化差异无显著性(P>0.05)。服用受试物14天后，与对照组相比，试食组双歧杆菌和乳杆菌数量增加，均有显著性差异(P< 0.05和P 0.05)。 [0120] 4.2试食人群脱失率： [0121] 116例入选者中，试食组试食结束时有4例未在规定时间按时复查，符合受试者排除标准，有效试食人群54例，试食人群脱失率为6.9％；对照组有5例未在规定时间按时复查，符合受试者排除标准，有效试食人群53例，试食人群脱失率为8.6％；总脱失率为7.8％。 [0122] 5.结论： [0123] 5.1采用自身与组间两种对照设计，纳入试食人群116例，随机分为试食组和对照组。有效试食人群107例，试食组54例、对照组53例。试食组人群服用实施例3益生菌冲剂。14天后，试食组人群自身比较，粪便中乳杆菌数量增加有显著性差异(P<0.001)；双歧杆菌数量增加有显著性差异(P<0.05)；肠杆菌、产气荚膜梭菌、肠球菌和拟杆菌数量变化差异均无显著性(P>0.05)。与对照组人群相比，试食组人群粪便中双歧杆菌和乳杆菌的数量增加均有显著性差异(P<0.05和P<0.01)；肠杆菌、肠球菌、拟杆菌和产气荚膜梭菌数量变化差异均无显著性(P>0.05)。 [0124] 5.2实施例3益生菌冲剂试食前后，血常规、尿常规、便常规、血压及血生化指标均在正常范围，试验期间未观察到对健康有不良反应。 [0125] 5.3根据《保健食品检验与评价技术规范》-2003版中调节肠道菌群功能-人体试食试验结果判定：实施例3益生菌冲剂具有调节人体肠道菌群的作用，未观察到受试物对受试人群的健康有不良反应。 [0126] 实验例：混合性考察 [0127] 判断生产工艺中的混合粉是否混合均匀，一般从两个方面来进行判定：1产品的色泽均匀度；2混合粉各部分的成分含量是否一致。为了更好的判断总混粉的混合情况，我们在混合工艺完成后，从不同的位置，各抽取50g混合粉对标志性成分之--低聚果糖进行测定。 [0128] 检测结果如下： [0129] 标志性成分检测 低聚果糖，g/100g [0130] [0131] 从检测结果可以看出，各部分的混合粉色泽均匀一致，各部分的成分含量也分布均匀，因此，根据以上两个判断标准，可以判定本品总混粉混合均匀一致，色泽一致，实施例3结果(RSD％)明显好于实施例2。 [0132] 在混合粉混匀后，进行混合粉的休止角试验，以考察混合粉的流动性，保证装量的准确性。试验内容如下： [0133] 取本品总混粉3份，分别经口径7cm的长颈漏斗流下，并呈圆锥形状，测其休止角，结果如下： [0134] [0135] 本品总混粉休止角较小，说明总混粉的流动性较好，实施例3结果明显好于实施例2，从而更利于产品的装量控制。 |
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