[0001] 本发明涉及通过提高食品或饲料产品中益生菌菌株存活率的乳杆菌(Lactobacillus)菌株来提高益生菌菌株诸如嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或双歧杆菌属(Bifidobacterium ssp.)的存活率。

[0002] 嗜酸乳杆菌和双歧杆菌亚种是最常用的益生菌。它们在胃肠道中的存在有助于维持所需的胃肠道微生物区系，帮助防止病原菌感染，以及在其他方面有益于宿主。

[0003] 活益生菌培养物尤其是嗜酸乳杆菌或双歧杆菌亚种可用于发酵乳制品，诸如酸奶。然而，在发酵乳制品的储藏期间，所述产品中嗜酸乳杆菌或双歧杆菌亚种的存活率会降低。因此，在消费者摄入成品时酸奶中活嗜酸乳杆菌的含量可能不足以对宿主胃肠道产生所期望的影响。这种情况在低温、干燥和恒温储藏困难的区域甚至更加突出。

[0004] EP 2194118描述了使用费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)提高乳酸菌在酸奶中的存活率。WO 2010/023290描述了使用乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)改善双歧杆菌菌株在发酵乳制品中的生长。WO 2008/148561描述了使用特定的嗜热链球菌改善双歧杆菌菌株在发酵乳制品中的生长。但这些文献均未提出乳杆菌菌株可提高益生菌菌株存活率的证据。

[0005] 要解决的问题是提高益生菌菌株在食品或饲料产品中的存活率。

[0006] 解决方案基于本发明人的如下发现：乳杆菌菌株具体地讲副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)或鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)菌株可提高食品或饲料产品储藏期间益生菌菌株具体地讲嗜酸乳杆菌和双歧杆菌亚种的存活率（或活力）。

[0007] 在第一方面，本发明涉及制备食品或饲料产品的方法，包括：

[0008] 使用益生菌菌株以及提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株接种培养基。

[0009] 在一个具体实施例中，提高益生菌菌株活力的乳杆菌菌株为副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株，而益生菌菌株为嗜酸乳杆菌菌株或双歧杆菌亚种菌株。

[0010] 在另一个方面，本发明涉及乳杆菌菌株在含有益生菌菌株的食品或饲料产品的制造中的用途，以提高所述益生菌菌株在所述食品或饲料产品储藏期间的存活率。

[0011] 本发明涉及制备食品或饲料产品的方法，包括：

[0012] 使用益生菌菌株以及提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株接种培养基。

[0013] 在本发明中，术语益生菌是指可对人体健康产生有益效果的微生物，或具体地讲是指选自以下属的乳酸菌：乳球菌属(Lactococcus)（诸如乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)），乳杆菌属（诸如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefiri)、双叉乳杆菌(Lactobacillus bfidus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)和詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)），明串珠菌属(Leuconostoc)，肉杆菌属(Carnobacterium)，肠球菌属(Enterococcus)，丙酸杆菌属(Propionibacteium)，小球菌属(Pediococcus)，链球菌属(Streptococcus)和双歧杆菌属（诸如乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidium)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、链状双歧杆菌(Bifidobacterium catenulatum)、假链双歧杆菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)和角双歧杆菌(Bifidobacterium angulatum)）。

[0014] 益生菌菌株有利地以108至1011cfu/L优选地109至1011cfu/L的量接种到奶中。

[0015] 提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株有利地以108至1011cfu/L优选地109至10
10 cfu/L的量接种到奶中。

[0016] 在奶中提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株与益生菌菌株之间的比率有利地为1:10至50:1，优选地1:1至20:1，更优选地5:1至15:1。

[0017] 提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株当然不同于益生菌菌株。所述乳杆菌菌株例如选自：副干酪乳杆菌菌株、干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株。

[0018] 益生菌例如选自：瑞士乳杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌亚种。

[0019] 有利的是，提高益生菌菌株活力的乳杆菌菌株为副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株，而益生菌菌株为嗜酸乳杆菌菌株或双歧杆菌亚种菌株。

[0020] 有利的是，副干酪乳杆菌菌株选自Lb2132、lbc-82、LC-10和Lpc-37菌株。lbc-82菌株可得自丹尼斯克(Danisco)商业化产品LBC 82Lyo或CHOOZIT ARO 21 LYO。LC-10菌株可得自丹尼斯克(Danisco)商业化产品FLAVO BAC LF 302和LbC81a。LB2132菌株可TM得自丹尼斯克(Danisco)商业化产品Holdbac YMC。可得自商业化混合物的菌株可使用技术人员熟知的方法诸如补充了万古霉素的MRS琼脂容易地分离，如Su等人（Lett Appl Microbiol2006,44:120-125（《应用微生物学快报》，2006年，第44卷，第120-125页））所述。Lpc-37菌株可从丹尼斯克公司(Danisco A/S)商购获得，并以ATCC保藏号PTA-4798在专利文献WO 04052462中有所描述。

[0021] 有利的是，鼠李糖乳杆菌菌株选自Lr-32和HN001菌株，它们可从丹尼斯克公司(Danisco A/S)商购获得。Lr-32以DSMZ保藏号DSM22193在专利文献EP2245943中有所TM描述。HN001菌株也称为HOWARU Rhamnosus，可从丹尼斯克公司(Danisco A/S)商购获得。

[0022] 有利的是，嗜酸乳杆菌菌株选自La-14和NCFM，它们可从丹尼斯克公司(Danisco A/S)商购获得。NCFM以ATCC保藏号PTA-4797在专利文献WO 04052462中有所描述。

[0023] 双歧杆菌亚种菌株有利地选自：乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、链状双歧杆菌、假链双歧杆菌、青春双歧杆菌和角双歧杆菌。优选地，双歧杆菌亚种菌株为动物乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium animalis lactis)菌株，具体地讲HN019或Bl-04菌株，它们可从丹尼斯克公司(Danisco A/S)商购获得。

[0024] 在本发明的一个具体方面，通过本发明的方法获得的食品或饲料产品不含费氏丙酸杆菌菌株。

[0025] 在一个具体实施例中，本发明涉及制备食品或饲料产品的方法，包括：

[0026] 使用嗜酸乳杆菌菌株以及选自副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株接种培养基。

[0027] 有利的是，副干酪乳杆菌菌株选自Lb2132、lbc-82、LC-10和Lpc-37菌株。

[0028] 有利的是，鼠李糖乳杆菌菌株选自Lr-32和HN001菌株。

[0029] 有利的是，嗜酸乳杆菌菌株选自La-14和NCFM。

[0030] 将副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株以108至1011cfu/L优选地109至10
10 cfu/L的量接种到奶中。

[0031] 将嗜酸乳杆菌菌株以108至1011cfu/L优选地109至1011的量接种到奶中。

[0032] 接种到奶中的副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株与嗜酸乳杆菌菌株之间的比率有利地为1:10至50:1，优选地1:1至20:1，更优选地5:1至15:1。

[0033] 在另一个具体实施例中，本发明涉及制备食品或饲料产品的方法，包括：

[0034] 使用双歧杆菌菌株以及选自副干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的乳杆菌菌株接种培养基。

[0035] 双歧杆菌菌株有利地选自：乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、链状双歧杆菌、假链双歧杆菌、青春双歧杆菌和角双歧杆菌。

[0036] 有利的是，双歧杆菌为动物乳酸双歧杆菌菌株，具体地讲HN019或Bl-04菌株，它们可从A/S商购获得。

[0037] 将双歧杆菌菌株以108至1011cfu/L优选地109至1011cfu/L的量接种到奶中。

[0038] 接种到奶中的副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株与双歧杆菌菌株之间的比率为1:10至50:1，优选地1:1至20:1，更优选地5:1至15:1。

[0039] 在又一个具体实施例中，本发明涉及制备食品或饲料产品的方法，包括：

[0040] 使用双歧杆菌菌株、嗜酸乳杆菌菌株以及选自副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株接种培养基。

[0041] 食品或饲料产品有利地选自饮料和乳制品。

[0042] 饮料可以是果汁、软饮料的成分或含乳清蛋白的饮料、保健茶、可可饮料、奶饮料和乳酸菌饮料、酸奶和饮用酸奶。

[0043] 有利的是，乳制品可以是发酵乳制品诸如酸奶和奶酪、酸奶饮料、凝乳酪、克非尔、基于发酵奶的饮料、脱脂乳、干酪、调料、低脂涂抹酱、新鲜奶酪、豆类饮料、冰淇淋等。

[0044] 在一个具体实施例中，发酵乳制品不是基于奶酪的蘸料。

[0045] 食品也可以是冰淇淋、刨冰和甜品、糖果、饼干蛋糕和蛋糕混合料、小吃、均衡食品和饮料、水果馅、调理糖浆、巧克力面包馅、奶酪蛋糕味馅、水果味蛋糕馅、蛋糕和甜甜圈糖衣、速食面包馅奶油、饼干馅、即用型面包馅、低卡路里馅、成人营养饮料、酸化大豆/汁饮料、无菌/蒸煮巧克力饮料、酒吧混合料、饮料粉、钙强化大豆/原味和巧克力奶、钙强化咖啡饮料。

[0046] 待接种的培养基可以是食品或饲料产品本身或食品或饲料产品的一种成分或多种成分混合物。培养基有利地选自奶、果汁或蔬菜汁或作为上述食品的一部分的任何成分或食品培养基。

[0047] 在一个优选的实施例中，食品或饲料产品为发酵乳制品，培养基为奶。因此，在该实施例中，本发明涉及制备发酵乳制品的方法，包括：

[0048] 使用益生菌菌株和乳杆菌菌株以及发酵剂培养物接种奶，以及

[0049] 发酵奶。

[0050] 在本发明中，术语发酵剂培养物是指单一的或混合的培养物，其包含德氏乳杆菌种(Lactobacillus delbrueckii ssp.)和/或链球菌种(Streptococcus sp.)和/或乳球菌种(Lactococcus sp.)或其他发酵乳制品的乳酸菌。

[0051] 在该实施例的第一替代形式中，本发明涉及制备发酵乳制品的方法，包括：

[0052] 使用嗜酸乳杆菌菌株、选自副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株以及发酵剂培养物接种奶，以及

[0053] 发酵奶。

[0054] 在该实施例的第二替代形式中，本发明涉及制备发酵乳制品的方法，包括：

[0055] 使用双歧杆菌菌株、选自副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株以及发酵剂培养物接种奶，以及

[0056] 发酵奶。

[0057] 在该实施例的第三替代形式中，本发明因此涉及制备发酵乳制品的方法，包括：

[0058] 使用双歧杆菌菌株、嗜酸乳杆菌菌株、选自副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株以及发酵剂培养物接种奶，以及

[0059] 发酵奶。

[0060] 将奶在本领域技术人员已知的合适条件下发酵，以获得所需的发酵乳制品。在一个具体实施例中，将奶在30至43℃下发酵5至10h的时间，直到达到4.7至4.2的pH值。随后冷却因此获得的发酵乳制品，并在该温度下储藏直至食用。储藏温度通常设为4-6℃，但会发生冷链打断，尤其是在低温、干燥和恒温储藏困难的区域。

[0061] 发酵乳制品可以是液体或固体形式，诸如酸奶、搅拌型酸奶、凝固型酸奶、酸奶类饮料、苦乳、酪乳、酸奶油、新鲜奶酪和奶酪。优选地，发酵乳制品选自酸奶、搅拌型酸奶、凝固型酸奶和酸奶类饮料。在具体实施例中，发酵乳制品为酸奶。在该情况下，其还可以包含通常用于酸奶制造的其他微生物，诸如嗜热链球菌和/或保加利亚乳杆菌，并呈4.2至4.6的pH值。

[0062] 奶可以是哺乳动物奶，诸如奶牛奶、山羊奶或绵羊奶，或植物奶，诸如豆奶。

[0063] 本发明方法的优点是乳杆菌菌株诸如副干酪乳杆菌菌株和鼠李糖乳杆菌菌株的存在提高了益生菌诸如嗜酸乳杆菌菌株或来自嗜酸乳杆菌相关种的菌株以及双歧杆菌亚种菌株的存活率。在本发明中益生菌的存活率表示在确定的储藏期后所述益生菌剩余的活细菌的比例。实际上，当考虑（例如）发酵乳制品时，益生菌诸如嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的生长在发酵步骤后逐渐变缓，发酵乳制品中活益生菌的比例开始降低。

[0064] 在本发明中所定义的“提高细菌存活率”因而表示在确定的温度下确定的储藏期内与食品或饲料产品刚好制造后（即，就发酵奶制品而言，刚好在发酵步骤后）的浓度尽可能相近地保持活细菌浓度。该温度可以为4-6℃或更高。例如，其可定义为在30天优选80天的储藏期后相对于刚好制造后的浓度而言保持至少2.5%、优选至少5%、更优选至少10%、甚至更优选30%、还更优选至少50%的活益生菌。

[0065] 在一个具体实施例中，所述食品或饲料产品在4-6℃下储藏30天后相对于不含提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株的食品或饲料产品而言所含的活嗜酸乳杆菌高至少三倍、优选地10倍、更优选地20倍。作为另外一种选择，所述食品或饲料产品在4-6℃下储藏30天后相对于刚好制造后的浓度保持至少2.5%、优选地至少5%、更优选地至少10%、甚至更
9
优选地至少50%的活嗜酸乳杆菌。作为另外一种选择，刚好在制造后含有10cfu/L的食品
9
或饲料产品在4-6℃下储藏30天后含有至少10cfu/L的活嗜酸乳杆菌。

[0066] 在另一个具体实施例中，所述食品或饲料产品在4-6℃下储藏30天优选80后相对于不含提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株的食品或饲料产品而言所含的活双歧杆菌高至少30%、优选地至少50%、更优选地100%。作为另外一种选择，所述食品或饲料产品在4-6℃下储藏30天优选80天后相对于刚好制造后的浓度保持至少50%、优选地至少75%、更优选地至少100%的活双歧杆菌。有利的是，食品或饲料产品中的双歧杆菌浓度相对于刚好
9
制造后的浓度有所提高。作为另外一种选择，刚好在制造后含有10cfu/L的食品或饲料产
9
品在4-6℃下储藏30天优选80天后含有至少10cfu/L的活双歧杆菌。

[0067] 含益生菌的食品或饲料产品的推荐储藏温度通常为4-6℃。然而，冷链可能被打断，特别是在低温和恒温储藏难以实现的区域。作为另外一种选择，储藏期可以发生冷链打断，限度是发酵乳制品例如处于最高30℃的温度下共计最长2天。实际上，诸如副干酪乳杆菌菌株和鼠李糖乳杆菌菌株的乳杆菌菌株在发酵乳制品遭受了温度波动时对保护诸如嗜酸乳杆菌菌株和双歧杆菌亚种菌株的益生菌尤其有效。这对于温度变化大或因冷链运输中的温度波动或打断等问题而导致益生菌难以保持稳定的地区尤其具有价值。

[0068] 益生菌的存活率还受食品或饲料产品的pH值影响。实际上，就发酵乳制品而言，特别是酸奶，pH值一般为4.6至4.2。这样的发酵奶制品的初始pH值（即，产品刚在发酵步骤后的pH值）通常保持在约4.5以改善益生菌存活。然而，从感觉的观点来看，较低的pH值通常是优选的。4.2的初始pH值对于包含在发酵乳制品中的益生菌菌株的存活率是更不利的。因此，存在对于增强这种发酵乳制品中益生菌菌株存活的解决方案的需要。

[0069] 在食品或饲料产品为发酵乳制品的一个优选实施例中，该发酵乳制品在4-6℃下储藏30天后相对于不含提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株的发酵乳制品而言所含的活嗜酸乳杆菌高至少三倍、优选地10倍、更优选地20倍，其中所述发酵乳制品的初始pH值为4.2。作为另外一种选择，在初始pH值为4.2的发酵乳制品中，于4-6℃下储藏30天后，相对于刚在发酵步骤后的浓度，该发酵乳制品保持至少2.5%、优选地5%、更优选地至少10%、甚至更优选地至少50%的活嗜酸乳杆菌。在另一个优选实施例中，该发酵乳制品在4-6℃下储藏80天后相对于不含提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株的发酵乳制品而言所含的活嗜酸乳杆菌高至少2.5倍并优选地3倍，其中所述发酵乳制品的初始pH值为4.5。作为另外一种选择，在初始pH值为4.5的发酵乳制品中，于4-6℃下储藏80天后，相对于刚在发酵步骤后的浓度，该发酵乳制品保持至少30%、优选地至少40%、更优选地至少50%、甚至更优选地至少60%的活嗜酸乳杆菌。

[0070] 作为另外一种选择，在初始pH值为4.2的发酵乳制品中，刚好在制造后含有9 9
10cfu/L的发酵乳制品在4-6℃下储藏30天后含有至少10cfu/L的活嗜酸乳杆菌，或优选
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地在初始pH值为4.5的发酵乳制品中，在4-6℃下储藏80天后含有至少10cfu/L的活嗜酸乳杆菌。

[0071] 在食品或饲料产品为发酵乳制品的另一个优选实施例中，该发酵乳制品在4-6℃下储藏30天优选80后相对于不含提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株的发酵乳制品而言所含的活双歧杆菌高至少30%、优选地至少50%、更优选地100%，其中所述发酵乳制品的初始pH值为4.2。作为另外一种选择，在初始pH值为4.2的发酵乳制品中，于4-6℃下储藏30天优选80天后，相对于刚在发酵步骤后的浓度，该发酵乳制品保持至少50、优选地75%、更优选地至少100%的活双歧杆菌。

[0072] 作为另外一种选择，在初始pH值为4.2的发酵乳制品中，于4-6℃下储藏30天优9 9
选80天后，刚好在制造后含有10cfu/L的发酵乳制品包含至少10cfu/L的活双歧杆菌。

[0073] 前述百分比分别基于刚在发酵步骤后的嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的量而表示。

[0074] 本发明还涉及乳杆菌菌株在含有益生菌菌株的食品或饲料产品的制造中的用途，以提高所述益生菌菌株在所述产品储藏期间的存活率。

[0075] 在一个实施例中，提高益生菌菌株存活率的乳杆菌菌株例如选自副干酪乳杆菌菌株（或干酪乳杆菌菌株）或鼠李糖乳杆菌菌株。

[0076] 益生菌例如选自：瑞士乳杆菌、卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌亚种。

[0077] 有利的是，增强益生菌菌株活力的乳杆菌菌株为副干酪乳杆菌菌株或鼠李糖乳杆菌菌株，而益生菌菌株为嗜酸乳杆菌菌株或双歧杆菌亚种菌株。

[0078] 优选地，益生菌菌株为嗜酸乳杆菌菌株或双歧杆菌亚种菌株。

[0079] 有利的是，副干酪乳杆菌菌株选自Lb2132、lbc-82、LC-10和Lpc-37菌株。

[0080] 有利的是，鼠李糖乳杆菌菌株选自Lr-32和HN001菌株。

[0081] 有利的是，嗜酸乳杆菌菌株选自La-14和NCFM嗜酸乳杆菌菌株。

[0082] 双歧杆菌亚种菌株有利地选自：乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌、动物双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、链状双歧杆菌、假链双歧杆菌、青春双歧杆菌和角双歧杆菌。优选地，双歧杆菌亚种菌株为动物乳酸双歧杆菌菌株，更优选地HN019或Bl-04菌株。

[0083] 展示本发明的以下实例代表了本发明的特定实施例，不旨在限制本发明的范围。

[0084] 实例1-4

[0085] 用于酸奶发酵的奶源由在蒸馏水中复溶的12%全脂奶粉(Fonterra,NZ)组成。将这些成分混合，在90℃下巴氏灭菌10分钟。将巴氏灭菌奶在30分钟内冷却到10℃，然后在4-6℃下过夜储藏，再进行发酵。

[0086] 将奶用单独的或与副干酪乳杆菌菌株（Lb2132、Lpc-37、Lbc-82或LC-10）组合的嗜酸乳杆菌(La-14)接种，然后在43℃下发酵直到达到4.2的pH值。之后，将发酵奶在30分钟内冷却到10℃，在4-6℃下储藏30天，除非另外说明。所有发酵均通过嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii bulgaricus)进行（对于嗜热链球9 7
菌为10cfu/L，对于德氏乳杆菌保加利亚亚种为10cfu/L）。嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种率（以cfu/L表示）在表1中给出。

[0087] 表1

[0088]对照 实例1实例2实例3实例4
La-14 109 109 109 109 109
Lb2132 - 1010 - - -
Lpc-37 - - 1010 - -
Lbc-82 - - - 1010 -
LC-10 - - - - 1010

[0089] 在发酵后第二天以及将酸奶储藏10、20和30天后对酸奶中的嗜酸乳杆菌的存活率进行了评估。嗜酸乳杆菌的存活率的评估方式为将酸奶的等分试样(1ml)稀释在蛋白胨水中（稀释比1/10）。将稀释液接种到补充了克林霉素(10μl/ml)的MRS琼脂（倾注平板）中。将接种琼脂板在37℃下厌氧温育48-72小时。将结果表示为相对于发酵后一天（第0天）时的嗜酸乳杆菌活细胞的嗜酸乳杆菌剩余活细胞百分比。结果在表2中给出。

[0090] 表2

[0091]

[0092] 鉴于这些结果，在初始pH值为不利于益生菌活力的4.2的酸奶中，副干酪乳杆菌有效提高了嗜酸乳杆菌的存活率。

[0093] 实例5-6

[0094] 除了以下方面外以与实例1-4相同的条件制备并储藏酸奶：将奶用单独的或与鼠李糖乳杆菌菌株（HN001或Lr-32）组合的嗜酸乳杆菌(La-14)接种。接种率（以cfu/L表示）在表3中给出。

[0095] 表3

[0096]对照 实例5实例6
La-14 109 109 109
HN001 - 1010 -
Lr-32 - - 1010

[0097] 酸奶中嗜酸乳杆菌的存活率如实例1-4中所述进行测量。结果表明因鼠李糖乳杆菌的存在嗜酸乳杆菌的存活率得到有效提高。

[0098] 实例7和8

[0099] 除了以下方面外以与实例1-4相同的条件制备并储藏酸奶：将奶用单独的或与副干酪乳杆菌（Lb2132、包含在HoldbacTM YM-C中或Lr-32）组合的动物乳酸双歧杆菌(Bl-04)接种。接种率（以cfu/L表示）在表4中给出。

[0100] 表4

[0101]对照 实例7 实例8
Bl-04 109 109 109
Holdbac YM-C - 1010 -
Lr-32 - - 1010

[0102] 在发酵后第二天以及将酸奶储藏30天后对酸奶中的动物乳酸双歧杆菌的存活率进行了评估。动物乳酸双歧杆菌的存活率的评估方式为将酸奶的等分试样(1ml)稀释在蛋白胨水中（稀释比1/10）。将稀释液接种到补充了莫匹罗星锂(0.05g/L)的TOS琼脂（倾注平板）中。将接种琼脂板在37℃下厌氧温育48-72小时。将结果表示为相对于发酵后一天（第0天）时的双歧杆菌活细胞的双歧杆菌剩余活细胞百分比。

[0103] 结果表明因副干酪乳杆菌的存在动物乳酸双歧杆菌的存活率得到有效提高。此外，与发酵后一天的动物乳酸双歧杆菌的浓度相比，动物乳酸双歧杆菌的浓度得以保持甚至有所提高。

[0104] 实例9

[0105] 用于酸奶发酵的奶源由在蒸馏水中复溶的12%全脂奶粉(Fonterra,NZ)组成。将这些成分混合，在90℃下巴氏灭菌10分钟。将巴氏灭菌奶在30分钟内冷却到10℃，然后在4-6℃下过夜储藏，再进行发酵。

[0106] 将奶用单独的或与费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.Shermanii)和/或副干酪乳杆菌(Lb2132)组合的嗜酸乳杆菌(La-14)接种，然后在43℃下发酵直到达到4.5的pH值。之后，将发酵奶在30分钟内冷却到10℃，在4-6℃下储藏80天。所有发酵均通过嗜热链球菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种在如上所述的相同条件下进行。嗜酸乳杆菌、费氏丙酸杆菌谢氏亚种和副干酪乳杆菌的接种率结果在表5中给出。

[0107] 表5