包含菊苣酸和/或其衍生物的组合物 |
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| 申请号 | CN201080005552.1 | 申请日 | 2010-01-27 | 公开(公告)号 | CN102333455A | 公开(公告)日 | 2012-01-25 |
| 申请人 | 雀巢产品技术援助有限公司; | 发明人 | R·贝尔-赖利德; V·克雷斯派; T·W·拉布; N·佩奇-策尔克勒; R·菲莫克斯; M·马林-库安; D·皮盖; | ||||
| 摘要 | 本 发明 大体上涉及食品和饮料领域。特别地，例如提供了能够对受试者提供 酒石酸 和/或咖啡酸的组合物。本发明的一个实施方案是一种组合物，其包含含有菊苣酸和/或其衍 生物 的成分、和能够 水 解 菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。 | ||||||
| 权利要求 | 1.组合物，其包含含有菊苣酸和/或其衍生物的成分、和能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。 |
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| 说明书全文 | 包含菊苣酸和/或其衍生物的组合物[0001] 本发明大体上涉及食品和饮料领域。特别地，例如对受试者提供了能够提供酒石酸和/或咖啡酸的组合物。本发明的一个实施方案是一种组合物，其包含含有菊苣酸和/或其衍生物的成分、以及能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。 [0002] 研究显示咖啡酸(CA)具有缩小肿瘤的性能。CA的皮下和口服施用显著减少了肝转移。这些结果证实了CA的治疗潜力并提示CA的抗转移和抗肿瘤作用是通过MMP-9酶活性的选择性抑制和通过NF-κB和MMP-9催化活性的双重抑制进行转录下调来介导的。[Tae-Wook Chung，等人，FASEB Journal.2004；18：1670-1681] [0003] 已经知道咖啡酸衍生物咖啡酸苯乙酯(CAPE)具有抗有丝分裂、抗癌、抗炎症和免疫调节性能。[Natarajan等人，Proc Natl Acad Sci U S A.1996August 20；93(17)：90909095]CAPE也抑制急性免疫和炎症反应。[Orban等人，NeuroImmunoModulation 2000；7： 99-105] [0004] 研究也显示，当皮肤细胞暴露于紫外(UV)辐射，特别是UVC辐射[NERADIL，R.等人，Folia Biologica(Praha).2003；49：197-202]和UVB辐射[Stanifort等 人，Carcinogenesis 2006 27(9)：1803-1811]时，抗炎症和抗癌性能能够保护皮肤细胞。 [0005] 已经知道酒石酸提供以下健康益处：其可增加粪便软化物，减少肠通过时间(Spiller等人，British Journal of Nutrition(2003)，90，803-807)，且可能是以酸碱态参与这些过程的(Sabboh等人，(2007)，98，72-77)。 [0006] 因此，希望提供具有咖啡酸和/或酒石酸的可用食品以产生上述益处。然而，简单的对食品补充咖啡酸和/或酒石酸是不理想的，因为这些化合物可能随时间而释放活性。 [0007] 因此本发明的目的是制备可为受试者提供咖啡酸和/或酒石酸的食品，其可稳定贮存并且易于生产。 [0008] 本发明者可通过提供食品组合物实现此目的，所述食品组合物允许从前体菊苣酸和/或其衍生物原位产生咖啡酸和/或酒石酸。 [0009] 菊苣酸是 [0010] [0011] 菊苣酸的衍生物包括 [0012] [0013] R1、R2、R3和/或R4可为相同的或可彼此不同。 [0014] 在一个实施方案中，R1、R2、R3和/或R4可选自H；CH3；C1-C3烷基；芳基，例如苯基、苄基、甲苯基、邻位二甲苯基烷基；C1-C3酰基；氨基酸；单糖、二糖或寡糖。寡糖包含2至9个单糖单元。R1、R2、R3和R4可为相同的和/或可彼此不同。 [0015] 菊苣酸的一个典型衍生物为例如以下化合物： [0016] [0017] 然后菊苣酸和/或其衍生物可被能够水解菊苣酸和/或其衍生物的乳酸细菌水解。此水解步骤将产生酒石酸和/或咖啡酸。 [0018] 不希望受理论束缚，本发明者认为此水解如以下图所示发生。注意，所有由“酶”催化的反应步骤也可由本申请中描述的乳酸细菌和/或由乳酸细菌和酶的组合催化。 [0019] [0021] 此外，发现当人或动物摄取了包含菊苣酸和/或其衍生物和能够水解绿原酸以产生酚酸的乳酸细菌组合的组合物后，此处理可在体内进行。 [0022] 由此本发明的一个实施方案是一种组合物，其包含含有菊苣酸和/或其衍生物的成分、和能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。 [0023] 本发明的组合物可优选地作为食品、食品补充剂或饮料用于口服施用，或用于胃肠外应用。 [0024] 在优选的实施方案中所述成分富含菊苣酸和/或其衍生物。例如，所述成分和/或所述组合物可包含以下范围的量的菊苣酸和/或其衍生物，0.001-99.99重量％的干重，优选0.1-50重量％的干重，最优选0.1-10重量％的干重。所述成分和/或所述组合物可包含以下范围的量的能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌，0.001-99.99重量％的干重，优选0.1-50重量％的干重，最优选0.1-10重量％的干重。 [0025] 例如本发明的组合物可包含一种含有菊苣酸和/或其衍生物的成分、和另一种含有能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌的成分。 [0026] 含有菊苣酸和/或其衍生物的成分可为天然或以添加的形式含有菊苣酸和/或其衍生物的任意成分，但优选天然食品例如莴苣、菊苣、蒲公英、葡萄、葡萄果渣；或其组合或提取物。 [0027] 待与含有菊苣酸和/或其衍生物的成分混合的成分包含乳酸细菌，其能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸。这两种成分可在食用前不久混合或可作为可立即食用的组合物提供。 [0028] 优选的能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌是具有酯酶活性，例如绿原酸酯酶和/或阿魏酸酯酶的益生乳酸细菌，优选乳杆菌或双歧杆菌，例如约氏乳杆菌(L.Johnsonii)、长双歧杆菌(B.Longum)和乳双歧杆菌(B.Lactis)(CNCM I-3446)，更优选约氏乳杆菌La1(CNCM I-1225)、长双歧杆菌BB 536和乳双歧杆菌BB12。 [0029] 长双歧杆菌BB 536可购自Morinaga Nutritional Foods，Inc.。 [0030] 乳双歧杆菌BB12可购自例如Chr.Hansen，DK-2970 Horsholm。 [0031] 在本发明的一个实施方案中，乳酸细菌可以非复制形式使用。 [0032] 可如实施例2、3和/或4中对约氏乳杆菌(La1)的详细描述检测乳酸细菌或其部分水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的能力。 [0033] 在消化的时侯乳酸细菌应当以足够水解大部分菊苣酸以产生酒石酸和/或咖啡酸的量存在。需要的乳酸细菌和/或酶的量可例如由本领域技术人员测定，例如取决于待治疗的受试者或酒石酸和/或咖啡酸应当释放的速度。在组合物中存在的优选至少5％，例如至少30％，至少50％或至少75％的菊苣酸在食用前和/或食用时已被水解。 [0034] 在另一个实施方案中，对乳酸细菌进一步加入能够水解菊苣酸以产生酒石酸和/或咖啡酸的酶。优选地，这样的酶选自酯酶，例如绿原酸酯酶、鞣酸酶和/或阿魏酸酯酶。以使例如在组合物中存在的优选至少5％，例如至少30％，至少50％或至少75％的菊苣酸在食用前和/或食用时已被水解的量加入所述酶。 [0035] 在本发明的框架中可使用的合适的酶包括例如酯酶，例如来源于日本曲霉(Aspergillus japonicus)的绿原酸酯酶(可购自Kikkoman，Japan)，来自米曲霉(Aspergillus oryzae)的鞣酸酶(EC 3.1.1.20)(可购自Kikkoman，Japan)和Palatase20000L(EC 3.1.1.3)(可购自Novozymes A/S，Denmark)。酶可以纯化的酶或微生物的细胞裂解物的形式存在。合适的细胞可为例如上面提到的微生物的细胞。产生细胞裂解物的合适方法是本领域已知的。 [0036] 应当将本发明的组合物和/或成分配制为使乳酸细菌菌株在贮存期间不会发酵或不与组合物反应。这可通过例如将组合物配制为干粉和/或通过封装乳酸细菌使其仅在所述组合物与至少一种其他成分混合时或在消化时被释放而实现。 [0037] 本发明的组合物可为营养完全配方，乳制品，冷冻的或耐贮存饮料，用于授乳母亲的产品，液体饮料，汤，饮食补充剂，膳食替代物，营养棒，糕点糖果(confectionery)，乳制品或发酵乳制品，酸奶，基于奶的粉末，肠内营养产品，婴儿配方，婴儿营养产品，浓汤(puree)，谷类制品或发酵的基于谷类的产品，冰淇淋，糖果，甜食，饼干，蛋糕，巧克力，热牛奶咖啡，咖啡，烹饪产品例如蛋黄酱、番茄酱(tomato puree)或色拉酱，宠物食品或宠物饮料。 [0038] 如果产品是用于口服施用的营养补充剂，其可存在于胶囊、明胶胶囊、软胶囊、片剂、糖衣片剂、丸剂、糊剂或糖果锭剂、口香糖或可饮用溶液或乳剂、糖浆或凝胶。这样的补充剂可能也包括甜味剂、稳定剂、抗氧化剂、添加剂、调味剂和/或着色剂。 [0039] 每种成分可包含任意类型的可食用化合物。用于食品组合物特别是饮料的一般成分是本领域熟知的，例如奶、奶油、咖啡增白剂和咖啡奶精。可选地，成分也可为例如色拉酱或其部分。这些化合物可被消费者用于修饰例如组合物的香味、外观和质地。成分可为液体或干燥形式，例如作为在饮料中溶解和/或悬浮的粉末。 [0040] 本发明的组合物可进一步包含适于在食品组合物中包含的其他成分。通常成分可为例如糖、人工甜味剂、乳化剂、稳定剂、增稠剂、助流剂、色素、调料、芳香剂等等。合适的人工甜味剂包括糖精、甜蜜素、acetosulfame、基于L-天冬胺酰基的甜味剂例如阿斯巴甜和这些甜味剂的混合物。合适的乳化剂包括单甘酯、双甘酯、卵磷脂、单-双甘酯的二乙酰酒石酸酯、乳化淀粉及其混合物。合适的稳定剂包括磷酸氢二钾和柠檬酸钠。合适的助流剂为sodium silica aluminate。在一个实施方案中组合物包含乳蛋白和/或植物蛋白。在另一个实施方案中组合物包含乳脂和/或植物脂肪。 [0042] 例如蛋白质源可包含乳蛋白和/或植物蛋白，脂源可包含乳脂和/或植物脂肪，和/或碳水化合物源可包含奶和/或植物碳水化合物以保证最佳营养价值。 [0043] 此外，组合物可包含适于口服或肠内施用的有机或无机载体材料以及维生素、矿物质微量元素和其他微量营养素，例如依照政府部门例如USRDA的推荐。 [0044] 在一个实施方案中本发明涉及包含下述的饮料粉末：a)包含菊苣酸和/或衍生物提取物的干燥水溶性组合物；和b)能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。 [0045] 根据本发明的饮料粉末是用于制备饮料的粉末，通过在液体例如水或奶中溶解或悬浮所述粉末制备饮料。 [0046] 本发明的产品可用于提高食用例如从本发明的产品制备的饮料的人或动物体内的抗氧化能力，例如通过增强Nrf2介导的基因表达途径，即诱导解毒酶例如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。据报道，Nrf2相关基因的活性提高可增强解毒作用和刺激针对氧化应激的内源防御。 [0047] 本发明的组合物可用于例如减轻炎症，例如通过降低前列腺素E2水平。 [0048] 许多健康问题和疾病，特别是衰老相关疾病与氧化应激和炎症有关。本发明的产品可用于治疗或预防食用从本发明的产品制备的饮料的人或动物中的这些问题或疾病。相关问题和疾病是例如脑疾病；炎症；肥胖；和癌症。 [0049] 本发明的组合物可进一步用作抗糖尿病剂，例如通过降低血糖水平，和/或提高瘦素、胰岛素和/或c-肽的血液水平；作用骨重塑剂，例如通过提高骨矿物质密度，例如通过提高雌性激素和/或黄体酮的血清水平和/或提高碱性磷酸酶活性；作为抗转移剂，例如通过抗血管生成作用。 [0050] 因此，本发明的一个实施方案是如此处描述的组合物在制备组合物中的用途，所述组合物用于治疗或预防炎症疾病，特别是与细菌和/或病毒感染相关联的炎症疾病；用于增强人或动物的抗氧化能力；用于治疗或预防氧化应激相关疾病；用于治疗或预防代谢疾病，例如糖尿病；用于治疗或预防与骨矿物质密度相关的疾病；或用于治疗或预防癌症。 [0051] 在一个实施方案中本发明涉及用于制备食品例如饮料的试剂盒，其包含至少2个部分：a)包含含有菊苣酸和/或其衍生物的食品成分的第一部分；和b)包含能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌的第二部分。两部分可一起出售以制备食品例如饮料，但可在产品包装中是物理上分离的。通过在食用前不久混合两部分可制备待食用的最终食品。如果1个或2个部分是液体形式，它们可直接混合，可选地进一步加入其他液体，例如水或奶。也可通过将它们溶解或悬浮在液体例如水或奶中混合两部分。当使用液体时，其可为热的或冷的。如果使用热的液体，其可优选地具有不过高的温度以免在消化食品、食品补充剂或饮料前失活乳酸细菌和酶(如果有的话)。 [0052] 试剂盒的第一部分可包含含有菊苣酸和/或其衍生物的食品或提取物。在优选的实施方案中，第一部分是干燥的形式，例如粉末的形式。第一部分也可为液体形式。第一部分可另外包含任意其他合适的成分，例如香味添加剂、稳定剂、盐和/或甜味剂。可以任意合适的方式包装第一部分，例如在小袋、瓶或罐中。 [0053] 第二部分包含能够水解菊苣酸和/或其衍生物以产生酒石酸和/或咖啡酸的乳酸细菌。此部分可优选的为与第一部分混合的组合物的形式。其可为干燥的形式，例如粉末，或为液体形式，并可以任意合适的方式包装，例如在小袋、瓶或罐中。其应当配制为使乳酸细菌在贮存期间不会发酵或与其他成分反应。这可通过例如将组合物配制成干粉和/或通过封装乳酸细菌达到。 [0054] 可以任意合适的方式将至少2个部分包装在一起。它们可例如在组合的容器中包装，其中各部分在贮存期间物理地分离但当容器被打开时混合，或它们可在分别的容器中包装，其在一起出售以制备食品、食品补充剂或饮料。 [0055] 本领域技术人员将理解他们可自由组合此处描述的本发明的所有特征而不背离公开的本发明的范围。特别地，对于本发明的用途所描述的特征可应用于本发明的组合物和/或试剂盒，反之亦然。 [0056] 通过以下实施例和图，本发明的其他优势和特征显而易见。 [0057] 图1显示了菊苣酸(◆)至咖啡酸(▲)和咖啡酰酒石酸(●)的水解，使用绿原酸酯酶。 [0058] 图2显示了菊苣酸(◆)至咖啡酸(▲)和咖啡酰酒石酸(■)的水解，使用约氏乳杆菌的喷雾干燥制剂。 [0059] 图3显示了用菊苣酸处理AREc报告细胞系的结果。 [0060] 图4显示了用被La1水解的菊苣酸处理AREc报告细胞系的结果：(■)50％水解，(□)100％水解实施例： [0061] 1-使用绿原酸酯酶的菊苣酸的水解 [0062] 将在100μl磷酸缓冲液(50mM，pH7.0)中的绿原酸酯酶(0.8mg，24U/g，来自Kikkoman Japan)溶液加入在100μl磷酸缓冲液(50mM，pH7.0)中的菊苣酸(0.57mg)溶液。然后将混合物在37℃孵育4小时。在反应时间后，通过热处理(5分钟，90℃)终止酶活性并离心(microcon YM10，30分钟，14000g)混合物。然后通过HPLC分析上清。在相同反应条件下平行进行反应对照，但不含酶。 [0063] 2-使用约氏乳杆菌(La1)新鲜细胞的菊苣酸的水解 [0064] 培养(7.0 E08 cfu/ml)和离心(5000g，10分钟)约氏乳杆菌(CNCM I-1225)细胞，在磷酸缓冲液(50mM，pH7.0)中将沉淀重悬为0.61g/ml的浓度。对100μl此细胞溶液加入100μl菊苣酸溶液(12mM)并将混合物在37℃孵育。在不同反应时间取样，离心(3000g，5分钟)并过滤通过0.45μm孔径的注射滤器(Millipore SLHA 025 BS)，然后通过HPLC分析。 [0065] 在相同反应条件下平行进行反应对照，但不含细菌。 [0066] 3-使用约氏乳杆菌提取物(裂解细胞)的菊苣酸的水解 [0067] 培养(7.0 E08 cfu/ml)和离心(5000g，10分钟)约氏乳杆菌(CNCM I-1225)细胞，在磷酸缓冲液(50mM，pH7.0)中将沉淀重悬为0.61g/ml的浓度。然后使用玻璃珠方法裂解细胞。将600μl细胞制剂放进Mini-Beadbeater，强烈摇晃1分钟，在冰上冷却，然后放进Mini-Beadbeater再强烈摇晃1分钟。然后将粗细胞提取物(100μl)加入100μl菊苣酸溶液(12mM，磷酸缓冲液50mM，pH7.0)并将混合物在37℃孵育。在不同反应时间取样，离心(3000g，5分钟)并过滤通过0.45μm孔径的注射滤器(Millipore SLHA 025 BS)，然后通过HPLC分析。 [0068] 4-使用La1的喷雾干燥制剂的菊苣酸的水解 [0069] 将10mg La1的喷雾干燥制剂(3.3 E09 cfu/g)在100μl磷酸缓冲液(50mM，pH7.0)中溶解。对此溶液加入100μl菊苣酸溶液(12mM，磷酸缓冲液50mM，pH7.0)。然后将混合物在37℃孵育并在不同反应时间取样。离心(3000g，5分钟)和过滤(0.45μm孔径的注射滤器，Millipore SLHA025 BS)后通过HPLC分析样品。 [0070] HPLC分析 [0071] 在装备有Atlantis C18反相柱(4.6x100mm，颗粒大小3μm)和二极管矩阵检测器的Agilent 1100系统上进行菊苣酸和水解产物的HPLC-DAD分析。用含有0.1％甲酸的水平衡柱。注射后，在12分钟内以1ml/分钟的流速运行线性梯度至55％水和45％乙腈(含0.1％甲酸)的最终溶剂组成。通过320nm处的UV监测菊苣酸和咖啡酸并使用标准校准曲线定量。 [0072] 5-体外检测 [0073] 抗氧化应答元件(ARE)荧光素酶测定 [0074] 将含有在大鼠谷胱甘肽-S-转移酶A2(GSTA2)中的8个ARE拷贝的pGL-8xARE和含有新霉素选择标记的pcDNA3.1质粒稳定转染至人MCF7细胞(Wang等人，Cancer Res.66，10983-10994，2006)。ARE(抗氧化应答元件)是转录因子Nrf2的结合位点，Nrf2调节参与解毒和针对氧化应激的内源防御的基因。质粒pGL-8xARE在8个Nrf2结合位点下游包含使得能够监测Nrf2活性的荧光素酶基因。为了用菊苣酸和相关化合物处理，将AREc 32细胞在DMEM生长培养基中接种在96孔微滴定板上。用不同的制剂处理24小时后，测定萤火虫荧光素酶活性。 [0075] 结果 [0076] 检测的细菌 [0077] [0078] 约氏乳杆菌(La1)、长双歧杆菌BB 536和乳双歧杆菌BB12特别能够水解菊苣酸。使用约氏乳杆菌(La1)得到反应速率和反应产量方面的最佳结果。 [0079] 检测的酶 [0080] [0081] [0082] 只有绿原酸和阿魏酸酯酶能够将菊苣酸水解为咖啡酸和酒石酸。 [0083] 1-使用绿原酸酯酶的菊苣酸的水解 [0084] 表1：通过绿原酸酯酶将菊苣酸水解为咖啡酸和咖啡酰酒石酸。浓度以t＝0时相对未处理参考的％表示。 [0085]时间(分钟) 0 15 30 60 120 240 菊苣酸 98 85 83 77 65 50 咖啡酰酒石酸 0 6 7 10 16 24 咖啡酸 2 9 10 13 19 26 [0086] 2-使用La1新鲜细胞的菊苣酸的水解 [0087] 通过HPLC分析，在4小时反应时间后所有菊苣酸转化为咖啡酸。 [0088] 3-使用La1提取物(裂解细胞)的菊苣酸的水解 [0089] 与全细胞相比，使用裂解细胞水解菊苣酸导致提高的反应速率。事实上，仅2小时后所有菊苣酸就转化为咖啡酸。 [0090] 4-使用La1的喷雾干燥制剂的菊苣酸的水解 [0091] 表2：通过约氏乳杆菌的喷雾干燥制剂将菊苣酸水解为咖啡酸和咖啡酰酒石酸。浓度以相对t＝0时未处理参考的％表示。 [0092]0分钟 15分钟 30分钟 1小时 2小时 3小时 菊苣酸(毫摩尔) 365 172 137 91 49 23 咖啡酰酒石酸(毫摩尔) 0 62 63 50 31 15 咖啡酸(毫摩尔) 0 324 393 498 601 669 [0093] 5-体外检测： [0094] 抗氧化应答元件(ARE)荧光素酶测定 [0095] 使用由若干拷贝的大鼠GSTA2-ARE报告构建体稳定转染的人乳腺癌细胞(AREc32)证明菊苣酸和相关化合物对Nrf2-ARE途径的激活。未水解的菊苣酸和用La1水解的菊苣酸(50％和100％)产生了Nrf2-荧光素酶报告活性的正向剂量依赖性应答(见表3，4)并展示了在较高剂量下的饱和失活应答。 [0096] 表3：用菊苣酸处理的AREc报告细胞系 [0097]μg/ml F/C stdv 100 2580 592 200 4364 876 400 8810 492 600 558 105 800 251 166 1000 346 214 [0098] 表4：用La1水解的菊苣酸处理的AREc报告细胞系：(A)50％水解，(B)100％水解[0099]μg/ml F/C A F/C B Stdv-A Stdv-B 50 3584 3924 934 2070 75 3732 6157 812 3811 100 7230 14579 1141 9995 125 9797 24309 5387 12053 150 12208 16900 332 3903 200 764 4652 987 7151 |
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