High-pressure treatment of the bioactive composition

本発明は、生物活性組成物の高圧処理、及び特に、少なくとも１つの生物活性成分の所望の活性を保持しながら、少なくとも１つの不要な微生物の成長を阻害するための生物活性組成物を加圧処理する方法に関する。

食品又は摂取可能な製品における生物活性成分（例えば、タンパク質、脂質又はその加水分解物、及びプロバイオティック微生物）の配達は、生物活性を保持しながら、安全な製品に実用的な保存期間を提供するための必要性に制約される。 実用的な保存期間を有する製品は、良い品質維持を有するといわれ、腐敗性の少ない傾向にある。

生物活性成分のデリバリーは、少なくとも、摂取されるときにかかる成分が生理的に活性状態であり、骨の健康、免疫利益、抗炎症活性、心臓の健康、及びがん治療における効果を非制限的に含む陽性健康効果を有し得るといった理由で望ましい。

有用な品質維持を保証するための伝統的手段は、食品などの生物活性に悪影響を有する。 特に、熱加工は、商業的に滅菌生物活性製品の製造に一般的に適さない。 例えば、商業的な乳製品における免疫グロブリンタンパク質の分析により明らかにされることには、低温殺菌を通して当該免疫グロブリンの６０％〜７５％は保持されるけれども、ＵＨＴ又は缶詰にした（蒸着した）ミルクにおけるレベルはごくわずかである（Ｌｉ−Ｃｈａｎら，１９９５）。 酸食品における商業的な滅菌は、缶詰において使用されるものよりも低温の加熱を使用することにより達成し得るが、加熱下での変性に対する免疫グロブリンの感受性は酸性化により悪化される（Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚら，２００１）。

プロバイオティック微生物は、十分量で投与されたとき宿主に健康効果を与えるものである。 生きているプロバイオティック微生物は生物活性効果を示す一方、不活性化されたプロバイオティック微生物は、使用及び販売のための安定し、技術的な制限のより少ない形式において生物活性を提供し得る。 不要な活性（例えば、酵素又は酸の分泌）を理由として生きている微生物を有することが望まれない適用において、不活性化された微生物は、それらの生存能力に由来する不要な活性なしに、生物活性をさらに提供することにおいて有利となり得る。

国際特許公開第ＷＯ２００４／０３２６５５号は、生存能力のある所望の培養物を保持しながら、食品における微生物腐敗を低減するため、及び／又は消費のための食品安全性を与えるための高加圧処理の使用を報告する。

部分的または完全な生物活性の損失をもたらし得る生物活性製品、原料、食品の製造においては多くの過程がある。 乳ベースの原料、及び食品の場合、生物活性に影響を与え得る加熱ステップを含む過程は、熱低温殺菌、均質化、熱化、蒸発、及び乾燥を含む。 食品加工の場合、生物活性に影響を与える加熱ステップの例示は、発酵、ＨＮＴ処理、乾留、熱充填及び熱パッキングに先立つ熱処理を含む。 生物活性成分は、通常、食品製造の間、１又は複数の加熱ステップに供されるだろう。 このことは、加工が常に最初の低温殺菌ステップを含み、パッケージング及び販売前に加熱ステップをさらに含む、とりわけ乳ベース製品にあてはまる。 Ｋｏｒｈｏｎｅｎら（１９９８）は、６０℃〜９０℃の範囲における温度への加熱は、タンパク質を変性し、その結果生物活性タンパク質の活性を低減することを報告する。

低温殺菌されたミルクを使用して製造された製品の乾燥は、免疫グロブリンの４０％までの損失で品質維持を向上するために使用され得るが（Ｌｉ−Ｃｈａｎ，１９９５）、商業的な適用は、次いで、当該生物活性原料がそれ以降連続的に加熱されない直接消費品（例えば、タブレット）又は生鮮食品（例えば、ヨーグルト）に限られる。 乾燥及び加熱に起因する損失は、着目の生物活性を有する中間生産物又は最終生産物を補完することにより補われるが、このことは、最終消費者にとっての費用を増大させ得る。

約３５０ＭＰａ超の圧力を有する加圧処理は、肉、野菜、及び果物ベースの製品（例えば、各々、加熱ハム、アボカド製品、及びジュース）の品質維持において商業的に有用な改良を達成すると報告されている。 しかしながら、Ｈｕｐｐｅｒｔｚら（２００２）が報告することには、高圧はミルク中のホエイタンパク質を変性する。 さらに、Ｋｏｒｈｏｎｅｎら（１９９８）が報告することには、約５００ＭＰａ、及びそれ超の加圧処理は、大抵の場合において、不可逆的にタンパク質を変性する。 Ｆｅｌｉｐｅら（１９９７）が報告することには、免疫グロブリン変性のかなりのレベルは、ヤギのミルクにおいて５００ＭＰａの圧力で生ずる。

Ｍａｓｕｄａら（２０００）が報告することには、４００ＭＰａおよびそれ超の圧力は、かかる圧力が免疫グロブリンタンパク質を変性するので、ウシコロストロムの品質維持を向上するために使用されない。

Ｔｏｎｅｌｌｏら（１９９２）が報告することには、コロストロムの微生物負荷が２ｌｏｇサイクル未満に低減されるけれども、２時間適用される２００ＭＰａの圧力が、免疫グロブリン活性の少なくとも８５％を保持するために使用され得る。 ６３℃での同様の過程は、微生物負荷を検出限界未満（７ｌｏｇサイクル超）に低減し得るが、免疫グロブリン活性の少なくとも５０％が損失する。

少なくとも１つの生物活性成分の生物活性を保持しながら、食品又は他の摂取可能な製品の如き生物活性製品のために商業的に有用な品質維持を提供し得る加工に対する必要性がある。

それ故、少なくとも１つの生物活性成分の少なくとも所望のレベルの活性を保持しながら、不要な微生物の成長を阻害する改良された又は別の方法を提供すること、あるいは有用な選択肢を有する公開を少なくとも提供することが本発明の目的である。

発明の概要
本発明は、組成物中に存在する少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、当該生物活性組成物の品質を保持又は向上するための方法に関する。

従って、ある態様において、本発明は、生物活性組成物の品質を保持又は向上するために当該生物活性組成物を処理する方法であって、以下のステップ：
（ａ）１若しくは複数のタンパク質、１若しくは複数の脂質、１若しくは複数のタンパク質加水分解物、１若しくは複数の脂質加水分解物、１若しくは複数の炭水化物、１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される少なくとも１つの生物活性成分を含む生物活性組成物を選択し、ここで、当該少なくとも１つの生物活性成分は、約３５０〜１０００ＭＰａの所定の圧力、及び約３．０〜８．０のｐＨで加圧処理後、所望のレベルの活性を保持され得る；そして、
（ｂ）前記少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、前記組成物中に存在し得る不要な生物の成長を阻害するために、前記組成物を所定の圧力、及びｐＨで加圧処理に供する、
を含む、上記方法に関する。

他の態様において、本発明は、生物活性組成物の品質を保持又は向上するために当該生物活性組成物を処理する方法であって、以下のステップ：
（ａ）１若しくは複数のタンパク質、１若しくは複数の脂質、１若しくは複数のタンパク質加水分解物、１若しくは複数の脂質加水分解物、１若しくは複数の炭水化物又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される少なくとも１つの生物活性成分を含む組成物を選択し、ここで、当該少なくとも１つの生物活性成分は、約３５０〜１０００ＭＰａの所定の圧力、約３．０〜８．０のｐＨ、及び約０〜５分間の保持時間で加圧処理後、所望のレベルの活性を保持され得る；そして、
（ｂ）前記少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、前記組成物中に存在し得る不要な生物の成長を阻害するために、前記組成物を所定の圧力、ｐＨ、及び保持時間で加圧処理に供する、
を含む、上記方法に関する。

他の態様において、本発明は、プロバイオティック組成物を処理する方法であって、以下のステップ：
（ａ）１又は複数のプロバイオティック因子を有するプロバイオティック微生物の１又は複数の株を含む組成物を選択し、ここで、当該プロバイオティック因子は、約３５０〜１０００ＭＰａの所定の圧力で加圧処理後、少なくとも所望のレベルの活性を保持され得る；そして、
（ｂ）前記１又は複数のプロバイオティック因子の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、前記プロバイオティック微生物の１又は複数の株の成長を阻害するために、前記組成物を所定の圧力で加圧処理に供する、
を含む、上記方法に関する。

他の態様において、本発明は、プロバイオティック組成物を処理する方法であって、以下のステップ：
（ａ）１若しくは複数のラクトバシラス・アシドフィルス株、１若しくは複数のラクトバシラス・ラムノサス株又は１若しくは複数のビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチス株、あるいはその混合物から選択されるプロバイオティック微生物の１又は複数の株を含む組成物を選択し、ここで、前記プロバイオティック微生物の１又は複数の株は１又は複数のプロバイオティック因子を有し、当該プロバイオティック因子は、約３５０〜１０００ＭＰａの所定の圧力で加圧処理後、少なくとも所望のレベルの活性を保持され得る；そして、
（ｂ）前記１又は複数のプロバイオティック因子の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、前記プロバイオティック微生物の１又は複数の株の成長を阻害するために、前記組成物を所定の圧力で加圧処理に供する、
を含む、上記方法に関する。

以下の態様は、上記又は下記の態様のいずれかに関し得る。

前記組成物は、液体中に固体の懸濁を含む液体となり得る。 当該組成物は、製品又は原料となり得る。 好ましくは、組成物の品質を保持又は向上するために当該組成物を処理することは、少なくとも１つの不要な微生物、好ましくは全ての不要な微生物の成長を低減、遅延、阻害又は排除するために処理することを含む。

ある態様において、処理後の好気性生菌数（ＡＰＣ）は、約１００，０００、７５，０００、５０，０００、２５，０００、１０，０００、５，０００、１，０００、１００又は１０の１ミリリットルあたりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）未満又は同等であり、好ましくは約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満又は同等である。

ある態様において、１又は複数のタンパク質は、組換え型、合成又は天然に生ずるタンパク質、あるいはその混合物である。

他の態様において、少なくとも１つの生物活性成分は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＤ、１若しくは複数のＩｇＥ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、１若しくは複数の成長因子由来のミルク、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される。

他の態様において、少なくとも１つの生物活性成分は、１又は複数のプロバイオティック因子を含む。

さらに他の態様において、生物活性組成物は、乳タンパク質組成物を含む。 好ましくは、この態様において、少なくとも１つの生物活性成分は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＤ、１若しくは複数のＩｇＥ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、１若しくは複数の成長因子由来のミルク、ＴＧＦβ１又はＴＧＦβ２、あるいはその混合物から選択される。

さらに他の態様において、前記生物活性組成物は、コロストロムＭＰＣ、コロストロムＭＰＩ、コロストロムＷＰＣ、コロストロムＷＰＩ、ＭＰＣ，ＭＰＩ、ＷＰＣ，ＷＰＩ、高免疫ＭＰＣ、高免疫ＭＰＩ、高免疫ＷＰＣ又は高免疫ＷＰＩ、あるいはその混合物から選択される。 好ましくは、この態様において、少なくとも１つの生物活性成分は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＤ、１若しくは複数のＩｇＥ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、ＴＧＦβ１又はＴＧＦβ２、あるいはその混合物から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは、異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、１若しくは複数の増殖因子（１若しくは複数のミルク由来増殖因子を含む）、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、１若しくは複数のプロバイオティック因子、１若しくは複数の非極性脂質又は１若しくは複数の非極性脂質（例えば、１若しくは複数のリン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド又はセラミド、あるいはその混合物）、あるいはその混合物から選択される。

好ましい態様において、前記生物活性成分は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＤ、１若しくは複数のＩｇＥ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、１若しくは複数の増殖因子、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、１若しくは複数のプロバイオティック因子、１若しくは複数の非極性脂質、１若しくは複数のリン脂質、１若しくは複数のスフィンゴ脂質、１若しくは複数のガングリオシド又は１若しくは複数のセラミド、あるいはその混合物から選択される。 ある好ましい態様において態様において、前記生物活性成分は、ラクトフェリン、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される。

ある態様において、前記組成物は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは、異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、１若しくは複数の増殖因子（ミルク由来増殖因子を含む、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２を含む）又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される生物活性成分を含み、から本質的になり、あるいはからなる。

他の態様において、前記組成物は、１若しくは複数の非極性脂質、１若しくは複数の極性脂質であって、例えばリン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド又はセラミド、あるいはその混合物から選択される生物活性成分を含み、から本質的になり、あるいはからなる。

ある態様において、前記組成物は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは、異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（ミルク由来増殖因子を含む、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２を含む）又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される生物活性成分について少なくとも約０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、９９．５又は１００重量％を含み、から本質的になり、あるいはからなる。

ある態様において、前記組成物は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは、異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（ミルク由来増殖因子を含む、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２を含む）、少なくとも約１％ｗ／ｗの免疫グロブリンを含む組成物、抗体レベルを増大するために動物に接種することにより作製される製品、免疫ミルク又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される生物活性成分から本質的になる又はからなる組成物で強化される。

すなわち、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは、異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（ミルク由来増殖因子を含む、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２を含む）、少なくとも約１％ｗ／ｗの免疫グロブリンを含む組成物、抗体レベルを増大するために動物に接種することにより作製される製品（高免疫ミルク又は高免疫コロストロム）、免疫ミルク又は１若しくは複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される生物活性成分から本質的になる又はからなる組成物は、当該組成物に添加され、当該生物活性成分の濃度を増大する。

ある態様において、前記プロバイオティック因子は、１若しくは複数の細菌のＤＮＡモチーフ、１若しくは複数の細菌の表面タンパク質、１若しくは複数の細菌小有機酸又は１若しくは複数の細菌細胞壁性分、あるいはその混合物から選択される。

ある態様において、前記不要な生物は、１若しくは複数の細菌（プロバイオティック細菌を含む）、１若しくは複数の糸状菌、１若しくは複数のかび又は１若しくは複数の酵母菌、及び１若しくは複数の藻類、あるいはその混合物から選択される。 ある態様において、前記不要な生物は、１若しくは複数の細菌、１若しくは複数の糸状菌、１若しくは複数のかび、１若しくは複数の酵母菌又は１若しくは複数の藻類、あるいはその混合物から選択される腐敗生物である。 ある態様において、前記不要な生物は、１若しくは複数の細菌、１若しくは複数の糸状菌、１若しくは複数のかび、１若しくは複数の酵母菌又は１若しくは複数の藻類、あるいはその混合物から選択される病原菌である。 他の態様において、前記不要な生物は、プロバイオティック生物、及び場合によりさらなる不要な生物を含む。

ある態様において、前記不要な生物又はプロバイオティック微生物は、ラクトバシラス、ストレプトコッカス、ラクトコッカス、リューコノストック、ペディオコッカス、ビフィドバクテリウム、プロピオニバクテリウム、エンテロコッカス又はバシラス、あるいはその混合物からなる群より選択される。 他の態様において、前記微生物は、ラクトバシラス・アシドフィルス、ラクトバシラス・デルブルエッキ亜種ブルガリカス、ラクトバチラス・カセイ、ラクトバシラス・クリスパタス、ラクトバシラス・ジョンソニー、ラクトバシラス・プランタラム、ラクトバシラス・ロウテリ、ラクトバシラス・ラムノサス、ラクトバシラス・サリバリウス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレベ、ビフィドバクテリウム・インファンチス、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチス、ビフィドバクテリウム・ロンガム又はストレプトコッカス・サーモフィラス、あるいはその混合物からなる群より選択される。

他の態様において、前記不要な生物又はプロバイオティック微生物は、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１（ＡＧＡＬ ＮＭ９７／０９５１４）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチスＨＮ０１９（ＡＧＡＬ ＮＭ９７／０９５１３）、ラクトバシラス・アシドフィルスＨＮ０１７（ＡＧＡＬ ＮＭ９７／０９５１５）、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ０６７（ＡＧＡＬ ＮＭ９７／０１９２５）（その全ては米国特許第６，３７９，６６３号に記載されている。）、ラクトバシラス・ジョンソニーＮＣＣ５３３（Ｌａ１）（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ラクトバシラス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチラス・カセイ・シロタ（ＦＥＲＭ−Ｐ４７５１）、ラクトバシラス・アシドフィルスＮＣＦＭ（ＡＴＣＣ７００３９６）、ラクトバシラス・プランタラム２９９ｖ（ＤＳＭＺ９８４３）、ラクトバチラス・カセイＤＮ１１４００１（ＣＮＣＭ Ｉ−１５１８）、ラクトバシラス・サリバリウスＵＣＣ４３３１（ＮＣＩＭＢ４０８２９）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチスＢＢ１２（ＡＴＣＣ２７５３６、及びＤＳＭＺ１０１４０）又はビフィドバクテリウム・インファンチス３５６２４（ＮＣＩＭＢ４１００３）、あるいはその混合物からなる群より選択される。 好ましい不要な生物又はプロバイオティック微生物は、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチスＨＮ０１９、ラクトバシラス・アシドフィルスＨＮ０１７又はラクトバシラス・ラムノサスＨＮ０６７、あるいはその混合物を含む。

ある態様において、前記プロバイオティック微生物は、不活性化されたプロバイオティック微生物である。 不活性化されたプロバイオティック微生物は、生育不能、生育不能であるがまだ代謝的に活性がある、又は死んでいるものとなり得る。

ある態様において、前記組成物は、１若しくは複数の細菌（１若しくは複数のプロバイオティック細菌を含む）の如き１若しくは複数の不要な微生物、１若しくは複数の糸状菌、１若しくは複数のかび、１若しくは複数の酵母菌又は１若しくは複数の藻類、あるいはその混合物を含む。 ある態様において、本明細書における有用な方法は、好ましくは、少なくとも１つの不要な微生物の成長を阻害することを目的とすることが理解されるべきである。 しかしながら、しばしば、当該方法は予防的に実施され得、いずれの不要な生物も実際には存在しないかもしれない。 かかる場合には、当該方法は、生物活性組成物の品質を保持又は向上するため、あるいは食品安全性の要求、医薬品適正製造基準又は規制基準に適合するために実施する。 不要な微生物の有無にかかわらず、本明細書中における有用な加圧処理方法は、少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持し、生物活性組成物の品質を保持又は向上するために有用である。

その結果、当該方法は、少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持しながら、少なくとも１つの不要な微生物の成長を好ましくは阻害する。

ある態様において、前記組成物は、ミルクであって、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトのミルク、あるいはその混合物を含むミルクである。 好ましくは、ミルクはウシのミルクである。

他の態様において、前記組成物は、乳タンパク質を含むか又は乳製品原料である。 好ましくは、当該乳タンパク質組成物又は乳製品原料は、還元又は新鮮な全乳、還元又は新鮮な脱脂粉乳、再構成された全脂粉乳又は脱脂粉乳、脱脂粉乳濃縮物、脱脂粉乳分離物、全脂粉乳又は脱脂粉乳、脱脂粉乳リテンテート（ｒｅｔｅｎａｔｅ）、濃縮乳、バターミルク、限外ろ過乳リテンテート、ミルクタンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、ミルクタンパク質分離物（ＭＰＩ）、カルシウム除去ミルクタンパク質濃縮物、カルシウム除去ミルクタンパク質分離物、低脂肪乳、低脂肪ミルクタンパク質濃縮物、低脂肪ミルクタンパク質分離物、コロストロム、コロストロム画分、コロストロム・タンパク質濃縮物（ＣＰＣ）、コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物、コロストロム・ミルクタンパク質分離物、コロストロム・ホエイ、コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物、コロストロム・ホエイタンパク質分離物、コロストロム由来の免疫グロブリン画分、ホエイ、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ）、スイートホエイ、乳酸ホエイ、鉱酸ホエイ、再構成ホエイ粉末、高免疫ミルク、高免疫ミルクタンパク質濃縮物、高免疫ミルクタンパク質分離物、高免疫ホエイ、高免疫ホエイタンパク質濃縮物、高免疫ホエイタンパク質分離物、高免疫コロストロム、高免疫コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物、高免疫コロストロム・ミルクタンパク質分離物、高免疫コロストロム・ホエイ、高免疫コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物、高免疫コロストロム・ホエイタンパク質分離物、いずれかのミルク又はコロストロムの処理過程由来の組成物、いずれかのミルクの限外ろ過若しくは精密ろ過又はコロストロム処理過程により得られたリテンテート又は浸透したもの由来の組成物、又はいずれかのミルク若しくはコロストロム処理過程のクロマトグラフ分離により得られたブレイクスルー若しくは吸着画分由来の組成物、あるいはこれらの組成物のいずれかの全体的又は部分的加水分解物、あるいはその混合物である。

好ましくは、前記乳タンパク組成物又は乳製品原料は、畜牛、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ又はヒト起源、あるいはその混合物由来ものである。

他の態様において、プロバイオティック組成物は、上記のものの如き乳組成物である。

他の態様において、前記組成物は、加圧処理に供する前に、低温殺菌され、乾燥され、蒸発され又はろ過（膜ろ過を含む）される。

他の態様において、前記活性の所望のレベルは、未処理の対照の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９又は１００％であり、そして有用な範囲として、これらの値のいずれかから選択し得る（例えば、約３５〜１００％、約５０〜１００％、約６０〜１００％、約７０〜１００％、約８０〜１００％、及び約９０〜１００％）。 好ましくは、前記少なくとも１つの生物活性成分はタンパク質であり、そして保持される活性は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ＨＰＬＣ又はＢｉａＣｏｒｅにより評価される。 好ましくは、前記少なくとも１つの生物活性成分は脂質であり、そして保持される活性は、フローサイトメトリー、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又はＨＰＬＣにより評価される。 好ましくは、前記プロバイオティック活性は、フローサイトメトリー又はＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイにより評価される。 好ましくは、前記活性の所望のレベルは、未処理対照の活性の少なくとも約３５％、未処理対照の活性の少なくとも約５０％、未処理対照の活性の少なくとも約６０％、未処理対照の活性の少なくとも約７０％、未処理対照の活性の少なくとも約８０％、あるいは未処理対照の活性の少なくとも約９０、９５、９９又は１００％である。

ある態様において、前記処理圧力は、少なくとも約３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、及び１０００ＭＰａ又はそれ超から選択され、そして有用な範囲は、これらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約３５０〜約４００ＭＰａ、約３５０〜約４５０ＭＰａ、約３５０〜約５００ＭＰａ、約３５０〜約５５０ＭＰａ、約３５０〜約６００ＭＰａ、約３５０〜約６５０ＭＰａ、約３５０〜約７００ＭＰａ、約３５０〜約７５０ＭＰａ、約３５０〜約８００ＭＰａ、約３５０〜約８５０ＭＰａ、約３５０〜約９００ＭＰａ、約３５０〜約９５０ＭＰａ、約３５０〜約１０００ＭＰａ、約４００〜約１０００ＭＰａ、約４５０〜約１０００ＭＰａ、約５００〜約１０００ＭＰａ、約５５０〜約１０００ＭＰａ、約６００〜約１０００ＭＰａ、約６５０〜約１０００ＭＰａ、約７００〜約１０００ＭＰａ、約７５０〜約１０００ＭＰａ、約８００〜約１０００ＭＰａ、約８５０〜約１０００ＭＰａ、約９００〜約１０００ＭＰａ、約９５０〜約１０００ＭＰａ、約５００〜約５５０ＭＰａ、約５００〜約６００ＭＰａ、約５００〜約６５０ＭＰａ、約５００〜約７００ＭＰａ、約５００〜約７５０ＭＰａ、約５００〜約８００ＭＰａ、約５５０〜約８００ＭＰａ、約６００〜約８００ＭＰａ、約６５０〜約８００ＭＰａ、約７００〜約８００ＭＰａ、約７５０〜約８００ＭＰａ、約４００〜約８００ＭＰａ、約４００〜約７５０ＭＰａ、約４００〜約７００ＭＰａ、約４００〜約６５０ＭＰａ、約４００〜約６００ＭＰａ、約４５０〜約８００ＭＰａ、約４５０〜約７５０ＭＰａ、約４５０〜約７００ＭＰａ、約４５０〜約６５０ＭＰａ、約４５０〜約６００ＭＰａ、約５００〜約８００ＭＰａ、約５００〜約７５０ＭＰａ、約５００〜約７００ＭＰａ、約５００〜約６５０ＭＰａ、約５００〜約６００ＭＰａ、約５２５〜約６７５ＭＰａ、約５５０〜約６５０ＭＰａ、及び約５７５〜約６２５ＭＰａ）。 好ましくは、当該処理圧力は、少なくとも、約３５０、４００、４５０、５００又は６００ＭＰａである。

他の態様において、好ましくは、前記組成物がプロバイオティック生物を含む場合、前記処理圧力は、少なくとも約５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、及び７００ＭＰａから選択され、そしてその有用な範囲は、これらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約５００〜約５５０ＭＰａ、約５００〜約６００ＭＰａ、約５００〜約６５０ＭＰａ、約５００〜約７００ＭＰａ、約５５０〜約７００ＭＰａ、約６００〜約７００ＭＰａ、約６５０〜約７００ＭＰａ、及び約５５０〜約６５０ＭＰａ）。 好ましくは、当該処理圧力は、少なくとも約５５０、６００又は６５０ＭＰａである。

ある態様において、加圧処理に供されるときの前記組成物のｐＨは、約５．０未満であり、好ましくは約４．６未満であり、より好ましくは約３．０〜約４．６であり、最も好ましくは約３．５〜約４．１である。

ある態様において、加圧処理に供されるときの前記組成物のｐＨは、少なくとも、約３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９又は８．０、あるいはそれ超であり、そして有用な範囲はこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約ｐＨ３．０〜約４．５、約ｐＨ３．０〜約５．０、約ｐＨ３．０〜約５．５、約ｐＨ３．０〜約６．０、約ｐＨ３．０〜約６．５、約ｐＨ３．０〜約７．０、約ｐＨ３．０〜約７．５、約ｐＨ３．０〜約８．０、約ｐＨ３．１〜約４．９、約ｐＨ３．２〜約４．８、約ｐＨ３．３〜約４．７、約ｐＨ３．４〜約４．６、約ｐＨ３．５〜約４．５、約ｐＨ３．６〜約４．４、約ｐＨ３．７〜約４．３、約ｐＨ３．８〜約４．２、及び約ｐＨ３．９〜約４．１）。 あるいは、さらに他の態様において、前記組成物のｐＨは、加圧処理の前に、上記のｐＨ範囲又は当該ｐＨ範囲内に調整される。

ある態様において、前記方法は、周囲温度で実施される。 好ましくは、前記加圧処理は、少なくとも約０、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０摂氏温度であり、そしてこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約５〜約４０摂氏温度）。 ある態様において、当該温度は、約０摂氏温度〜約４０摂氏温度である。 他の態様において、当該温度は、約４摂氏温度〜約２５摂氏温度である。

ある態様において、前記処理圧力は、約１秒〜約３０分間の処理時間、適用され得る。 好ましくは、当該処理時間は、約１、５、１０、２０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０又は３００秒又は約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０分間から選択され、そして有用な範囲はこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約１〜約１０分間、約１〜約５分間又は約２〜約４分間）。

他の態様において、前記処理圧力は、処理時間の間、ほぼ一定に維持される。 他の態様において、当該圧力は、周囲圧力（通常、大気圧）から処理圧力に増大され、次いで、処理時間内に周囲圧力に戻る。 周囲温度は、通常、大気圧であるだろう。

ある態様において、前記処理時間は前記圧力を大気圧から処理圧力に増大し、次いで当該圧力を大気圧に戻すことにかかる時間であることを理解するべきである。 従って、ある態様において、１分間の処理時間は、１分間以内に圧力を大気圧から処理圧力に増大させ、次いで大気圧に戻すことを意味する。

他の態様において前記期間の処理時間は、前記圧力が処理時間で保持される時間（「保持時間」）であることを理解すべきである。 従って、ある態様において、１分間の処理時間は、当該圧力を処理圧力で１分間保持することを意味する。 それ故、この態様において、処理時間０（又は保持なし）は、圧力を処理圧力まで上げるが保持せず、次いで当該圧力は大気圧に戻ることを意味する。 この態様において、好ましい処理時間は、０（保持なし）、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、及び１０分を含む。 好ましくは、当該圧力は、約０、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５又は５分の間、あるいは約０、０．５、１、１．５、２、２．５又は３分の間、あるいは約０分の間、保持される。

他の態様において、前記総処理時間は、約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５又は１０分未満である。 つまり、圧力が周囲圧力（通常は大気圧）から上げられ、そして周囲圧力に戻るのにかかる時間は、約０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５又は１０分未満である。 好ましくは、約８分未満、好ましくは約７分未満、好ましくは約６分未満又は好ましくは約５分未満である。

他の態様において、前記組成物をさらなる加圧処理に供し得る。 当該処理圧力は、最初の大気圧に戻ることなしに、ある処理圧力から他の圧力に変化し得る。 各加圧処理は、別個の処理時間の間、実施され得る。 従って、ある態様において、当該圧力を、第１処理時間の間、周囲圧力から第１処理圧力に増大させ、次いで、当該圧力を、第２処理時間の間、第２処理圧力に変化させる。 好ましくは、当該第１処理時間は、当該第２処理時間より長い。 好ましくは、当該第１処理時間は、当該第２処理時間より短い。 他の態様において、当該圧力を、処理時間内に、第１処理圧力まで増大し、次いで第２圧力に変化させた。

ある態様において、前記組成物を製品中への組み入れ前に処理圧力に供する。 他の態様において、前記組成物を製品中への組み入れ後に処理圧力に供する。 従って、前記方法は、当該組成物を製品中に組み入れる前後に、当該組成物を処理圧力に供することをさらに含む。 他の態様において、前記組成物をパッケージング前に処理圧力に供する。 他の態様において、前記組成物をパッケージング後に処理圧力に供する。 従って、前記方法は、当該組成物をパッケージング前後に、当該組成物を処理圧力に供することをさらに含む。

ある態様において、前記組成物は、安定剤をさらに含む。 好ましい安定剤は、ローカストビーンガム、グアーガム、キサンタンガム、カシアガム、コンニャクフラワー、ベータグルカン、タラガム、アラビアゴム、ジェランガム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、トラガカント・ゴム、カラヤゴム、アカシアゴム、キトサン、アラビノグラクチン（ａｒａｂｉｎｏｇｌａｃｔｉｎ）、アルギネート、ペクチン、カラギーナン又はサイリウム、あるいはその混合物から選択されるゴムである。 好ましくは、当該安定剤は、ペクチン又はカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、あるいはその混合物である。

ある態様において、前記組成物は、疎水性リガンドをさらに含む。 好ましくは、当該疎水性リガンドは、パルミチン酸、ミリスチン酸、リノール酸、共役リノール酸（ＣＬＡ）、１若しくは複数のリン脂質、１若しくは複数のホスファチジルコリン、１若しくは複数のスフィンゴミエリン、１若しくは複数のガングリオシド、酪酸、１若しくは複数のオメガ３脂肪酸｛エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を非制限的に含む｝、１若しくは複数のフィトステロール、１若しくは複数のフィトステロール・エステル、１若しくは複数のフィトステロール・アセテート、１若しくは複数のオメガ６脂肪酸（魚油を非制限的に含む。）、脂溶性疎水性ビタミン（ビタミンＡ［レチノール］、及びビタミンＤを含む）、リコピン又はドデシル硫酸ナトリウム、あるいはその混合物から選択される。 好ましくは、この態様における組成物のｐＨは、約５．０〜８．０である。

他の態様において、前記組成物は、上記乳タンパク組成物又は乳製品原料を非制限的に含む、生物活性タンパク質、脂質、タンパク質加水分解物、脂質加水分解物又は炭水化物、あるいはその混合物の少なくとも１つのさらなる源をさらに含む。

他の態様において、前記組成物は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数の免疫グロブリン（１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭの複数を含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（ミルク由来の増殖因子を含む、ＴＧＦβ１及びＴＧＦβ２を含む）、少なくとも１％ｗ／ｗの免疫グロブリンを含む組成物、抗体レベルを増大させるために動物に接種することにより作成される製品（高免疫ミルク又は高免疫コロストロム）、免疫ミルク、あるいは１又は複数のプロバイオティック因子、あるいはその混合物から選択される少なくとも１つのさらなる生物活性成分をさらに含む。

他の態様において、前記組成物は、１若しくは複数のリン脂質、１若しくは複数のスフィンゴ脂質、１若しくは複数のガングリオシド又は１若しくは複数のセラミド、あるいはその混合物の如き、１若しくは複数の非極性脂質、１若しくは複数の極性脂質から選択される少なくとも１つのさらなる生物活性成分をさらに含む。

他の態様において、前記組成物は、少なくとも約１％ｗ／ｗの免疫グロブリンをさらに含み、ここで、当該免疫グロブリンは、１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ、あるいはその混合物、あるいは異なるエピトープに特異的な１又は複数のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭの複数を含む。

ある態様において、前記組成物は食品である。 好ましくは、当該食品は飲料であり、好ましくは、酸性飲料又は炭酸飲料である。 好ましくは、当該食品は、規定の、撹拌された、フレーバーのついた、フルーツの、及びプロバイオティックなヨーグルト、フロマージュ・フレ、プティ・スイス、クワルク（ｑｕａｒｇ）、発酵食品又は飲物、酸性飲物、あるいは乳製品を含むヨーグルトである。 好ましくは、当該食品はゼリーである。

ある態様において、前記処理圧力は約４００、５００、６００又は７００ＭＰａであり、処理時間は約保持なし、１、２又は３分間である。 他の態様において、当該処理圧力は約３５０〜約５００ＭＰａであり、当該処理時間は約０分〜約５分間である。 好ましくは、当該組成物又は製品は、ヨーグルトである。

さらに他の態様において、当該処理圧力は約４００〜約７００ＭＰａであり、当該処理時間は約０分〜約５分間である。 好ましくは、当該組成物又は製品は、発酵飲料である。

さらに他の態様において、当該処理圧力は約４００〜約７００ＭＰａであり、当該処理時間は約０分〜約１０分間である。 好ましくは、当該組成物又は製品は、酸性飲料、濃縮液（ゲルを含む）又はヨーグルトである。

他の態様において、当該処理圧力は約３５０〜約８００ＭＰａであり、処理時間は約０分〜約１０分間であり、そして当該組成物又は製品のｐＨは約ｐＨ３．０〜約ｐＨ７．０である。

他の態様において、当該生物活性成分は免疫グロブリン又はラクトフェリンであり、製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．０〜約ｐＨ５．０、好ましくは約ｐＨ３．８〜約ｐＨ４．５、好ましくは約ｐＨ４．１であり、処理圧力は約５５０〜約６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり、そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分はラクトフェリンであり、そして製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜４．５、好ましくはｐＨ４．１であり、処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり、そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性組成物は、コロストロムＭＰＣ又はコロストロムＷＰＣであり；当該生物活性成分は免疫グロブリン、好ましくはＩｇＧであり；製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜７．０、好ましくはｐＨ３．５〜５．０、好ましくはｐＨ４．１であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり；そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロムＭＰＣ又はコロストロムＷＰＣであり；当該生物活性成分はラクトフェリンであり；製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜７．０、好ましくはｐＨ３．５〜５．０、好ましくはｐＨ４．１であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり；そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分は免疫ミルク又は免疫ミルクタンパク質濃縮物又は免疫ミルクホエイタンパク質濃縮物であり；製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜７．０、好ましくはｐＨ３．５〜５．０、好ましくはｐＨ４．１であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり；そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分は免疫ミルク又は免疫ミルクタンパク質濃縮物又は免疫ミルクホエイタンパク質濃縮物であり；当該生物活性成分はイムノグロブリン、好ましくはＩｇＧであり；製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜４．５、好ましくはｐＨ４．１であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり；そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分は免疫ミルク又は免疫ミルクタンパク質濃縮物又は免疫ミルクホエイタンパク質濃縮物であり；当該生物活性成分はラクトフェリンであり；製品又は組成物のｐＨは約ｐＨ３．５〜４．５、好ましくはｐＨ４．１であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは６００ＭＰａであり；そして処理時間は保持なし又は１、２又は３分間から選択される。

他の態様において、前記生物活性成分は１又は複数のＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜５．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物は生物活性乳タンパク質組成物であり；当該生物活性成分はＩｇＧ又はラクトフェリンであり；処理圧力は約３５０〜６５０ＭＰａ、好ましくは３５０〜５５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜４．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロムＭＰＣであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約３５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜４．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロムＭＰＣであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．８であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロムＭＰＣであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜７．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロム脱脂粉乳であり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約３５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロム脱脂粉乳であり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロム・ホエイであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約３５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロム・ホエイであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はコロストロム・ホエイＵＦリテンテートであり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物は高免疫ミルク、高免疫ミルクタンパク質濃縮物又は高免疫ホエイタンパク質濃縮物、高免疫コロストロム、高免疫コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物又は高免疫コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物であり；当該生物活性成分はＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ又はラクトフェリンであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．２〜５．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性成分はラクトフェリンであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜７．５であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性成分はＴＧＦ−β１又はＴＧＦ−β２であり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜８．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はヨーグルトであり；当該生物活性成分はラクトフェリンであり；処理圧力は約４５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜５．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物は飲料であり；当該生物活性成分はＩｇＧであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜５．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、前記生物活性組成物はゼリーであり；当該生物活性成分はラクトフェリンであり；処理圧力は約５５０〜６５０ＭＰａであり；ｐＨは約３．０〜５．０であり；そして処理時間は約０、１、２又は３分間である。

他の態様において、本発明は、本発明の方法によって処理又は製造される組成物に関する。 さらに他の態様において、本発明は、本発明の方法によって処理又は製造されるプロバイオティック組成物に関する。

他の態様において、本発明は、食品、飲み物、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、病人用特別食、栄養補給食品、薬剤又は調合薬の如き食用品の製造における、本発明の方法により処理又は製造される組成物の使用に関する。

さらなる態様において、本発明は、１若しくは複数のラクトバシラス・アシドフィルス株、１若しくは複数のラクトバシラス・デルブルエッキ亜種ブルガリカス株、１若しくは複数のラクトバチラス・カセイ株、１若しくは複数のラクトバシラス・クリスパタス株、１若しくは複数のラクトバシラス・ジョンソニー株、１若しくは複数のラクトバシラス・プランタラム株、１若しくは複数のラクトバシラス・ロウテリ株、１若しくは複数のラクトバシラス・ラムノサス株、１若しくは複数のラクトバシラス・サリバリウス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ビフィダム株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ブレベ株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・インファンチス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ロンガム株又は１若しくは複数のストレプトコッカス・サーモフィラス株、あるいはその混合物から選択され、かつ本発明の方法によって処理された１若しくは複数のプロバイオティック微生物を含む又はから本質的になる組成物に関する。

他の態様において、本発明は、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチスＨＮ０１９、ラクトバシラス・アシドフィルスＨＮ０１７又はラクトバシラス・ラムノサスＨＮ０６７、あるいはその混合物から選択され、かつ本発明の方法によって処理された１若しくは複数のプロバイオティック微生物を含む又はから本質的になる組成物に関する。

他の態様において、本発明は、ラクトフェリン、リゾチーム、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＤ、１若しくは複数のＩｇＥ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、１若しくは複数の増殖因子、ＴＧＦβ１又はＴＧＦβ２、あるいは、あるいはその混合物であり、かつ本発明の方法によって処理されたものを含む又はから本質的になる組成物に関する。 さらに他の態様において、本発明は、ラクトフェリン、１若しくは複数のＩｇＡ、１若しくは複数のＩｇＧ、１若しくは複数のＩｇＭ、ＴＧＦβ１又はＴＧＦβ２、あるいはその混合物であり、かつ本発明の方法によって処理されたものを含む又はから本質的になる組成物に関する。

他の態様において、本発明は、食品、飲み物、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、病人用特別食、栄養補給食品、薬剤又は調合薬の製造における本発明の組成物の使用に関し、好ましくは、当該使用はそれを必要とする対象を処置するためであり、好ましくは、それを必要とする対象の免疫系を刺激するためである。 従って、他の態様において、本発明は、本発明の組成物の投与を含む、それを必要とする対象の免疫系を刺激する方法に関する。

本発明の他の態様は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたゼリー、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたヨーグルト、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された飲料、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたゼリー、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたヨーグルト、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された飲料、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された飲料、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたヨーグルト、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された飲料、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたゼリー、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理されたヨーグルト、約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された飲料に関する。 かかる組成物のｐＨ、及びそれらが処理される圧力は、上記の範囲から選択され得る。

本発明の他の態様は、１若しくは複数の生育不能なプロバイオティック微生物培養物及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物；１若しくは複数のラクトバシラス・アシドフィルス株、１若しくは複数のラクトバシラス・デルブルエッキ亜種ブルガリカス株、１若しくは複数のラクトバチラス・カセイ株、１若しくは複数のラクトバシラス・クリスパタス株、１若しくは複数のラクトバシラス・ジョンソニー株、１若しくは複数のラクトバシラス・プランタラム株、１若しくは複数のラクトバシラス・ロウテリ株、１若しくは複数のラクトバシラス・ラムノサス株、１若しくは複数のラクトバシラス・サリバリウス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ビフィダム株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ブレベ株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・インファンチス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチス株、１若しくは複数のビフィドバクテリウム・ロンガム株又は１若しくは複数のストレプトコッカス・サーモフィラス株、あるいはその混合物からなる群より選択される１若しくは複数の生育不能なプロバイオティック微生物培養物、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物；ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクチスＨＮ０１９、ラクトバシラス・アシドフィルスＨＮ０１７又はラクトバシラス・ラムノサスＨＮ０６７、あるいはその混合物からなる群より選択される１若しくは複数の生育不能なプロバイオティック微生物培養物、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物；並びにラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１の生育不能なプロバイオティック微生物培養物、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物に関する。 かかる組成物のｐＨ、及びそれらが処理される圧力は、上記の範囲から選択され得る。

本明細書中に引用される全ての出願、特許、及び刊行物は、もしあれば、その全内容を引用することにより本明細書中に援用する。

本明細書中に開示される数字の範囲（例えば、１〜１０）への言及は、当該範囲内の全有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、及び１０）への言及をも含み、その範囲内の有理数のいずれかの範囲（例えば、２〜８、１．５〜５．５、及び３．１〜４．７）も含むことを意図する、それ故、本明細書中に明確に開示される全範囲の全ての部分的な範囲は本明細書中に明確に開示される。 これらは、特に意図されていることの例示に過ぎず、最低値と最高値との間の数値の全ての可能性のある組合せは、同じように本明細書中に明確に述べられると考えられる。

本発明の詳細な説明
１． 定義
生物活性成分の「活性」との言及は、摂取されたときに当該生物活性成分が生理的に活性であること、及びいずれかの手段、好ましくは経口でヒトを含む動物に投与されたときに陽性健康効果を有し得ることを意味することを目的とする。 様々な生物活性成分の活性の評価を以下に記載する。

持続する活性との言及は、加圧処理された生物活性成分が未処理の対照の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９又は１００％保持することを意味することを目的とし、有用な範囲はこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約３５〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、及び約９０％〜約１００％）。

多くの場合、タンパク質活性は、適切なタンパク質の折り畳みに関する。 研究が示すことには、ＵＨＴ（超加熱処理）ミルクにおける天然、及び鉄負荷ＬＦの変性はその活性に影響を与え様々な細菌種を結合し、その相互作用能力を低減する（Ｐａｕｌｓｓｏｎら、１９９３）。 それ故、活性の評価は、着目のタンパク質の構造的完全性の示唆を与える分析技術を使用して実施される。 放射線免疫拡散法（ＲＩＤ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、及びアフィニティＨＰＬＣ−ＭＣの如き免疫学的アッセイは、測定され得る前に完全な状態にあるＩｇＧを必要とする。 酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）において、適切に折り畳まれたＩｇＧ又はＬＦは、抗体により結合し、そして検出可能となり、そして酵素結合比色分析剤を使用して可視化されるだろう。 加熱処理された超免疫化乳製品の生物活性の損失に関する情報は、Ｌｉら、２００３においても与えられる。 それ故、ある態様において、加圧処理の前後に適切に折り畳まれたタンパク質の量を評価することは、保持された活性の評価を提供するだろう。 好ましくは、生物活性成分はタンパク質であり、保持された活性は、下記のようなＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ＨＰＬＣ又はＢｉａＣｏｒｅにより評価される。

脂質の生物活性は、無傷の脂質又は脂肪酸分子に関する。 脂質組成物を乾留すること（１２０℃で１5分間、加熱）は、リン脂質の分解に起因する組成物の過剰な褐色化（色の変化）を引き起こす。 例えば、１００ｇのＮＺＭＰリン脂質（ＰＣ５００）、及び２００ｇの無水乳脂肪のサンプルを、６００ＭＰａで０分間、６００ＭＰａで３分間、６００ＭＰａで１５分間加圧処理し、又は１２０℃で２０分間、乾留した。 乾留後、当該リン脂質サンプルは、暗褐色に色が変化した（データは示されていない）。 対照的に、加圧処理されたサンプルは影響を受けないままであった（データは示されていない）。 好ましくは、生物活性成分は脂質であり、保持された活性はガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又はＨＰＬＣにより評価される。

加水分解物の保持された生物活性は、下記のようなＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ＨＰＬＣ又はＢｉａＣｏｒｅを使用して、あるいは生体外又は生体内アッセイを使用して、所望のペプチドの存在を評価することにより評価され得る。

ある態様において、活性はプロバイオティック活性である。 プロバイオティック活性は、以下に記載される。 好ましくは、前記生物活性成分はプロバイオティックであり、プロバイオティック活性はＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイにより評価される。

本明細書、及び特許請求の範囲における用語「含む」は、「少なくともその一部からなる」ことを意味する。 当該用語を含む本明細書、及び特許請求の範囲中の記述を解釈するとき、各記述において当該用語により前置きされる特性の全てが存在することが必要であるが、しかし他の特性も存在し得る。 「含む」及び「含まれる」の如き関連用語は、同じように解釈される。

本明細書中における用語「生物活性組成物」又は「生物活性製品」又は「生物活性原料」は、生物活性成分の存在により生物活性である組成物又は製品又は原料を意味することを目的とし、食品及び食品原料を含む。 好ましい態様の焦点が食品及び食品原料、特に乳製品及び乳製品原料に関するが、本発明は、経口又は非経口投与のための医療品の如き食品ではない医療品を含む、生物活性成分を含む組成物又は製品又は原料のいずれかを加工するためにも有用であると理解するべきである。 ある態様において、当該生物活性製品が他の製品に組み込まれるための原料となるかもしれないことも理解すべきである。 有用な食品製品又は食品原料は、飲料（酸性飲料、炭酸飲料、消費可能な液体、及びゲルを含む）、栄養補給食品、及びかかる製品における使用のための原料を含むいずれかの食用品又は原料を含む。 ある態様において、食品は他の製品に組み込まれるための原料となり得ることを理解すべきである。 生物活性組成物は医薬組成物ともなり得る。

当該組成物は、液体における固体の懸濁液を含む液体（ペースト又はスラリーを含む）となり得る。 かかる組成物の例は、濃縮液（ゲルを含む）、飲料（酸性、及び炭酸飲料を含む）、ゼリー又はヨーグルトを含む。

生物活性組成物の例は、上記のような乳タンパク質組成物、及び乳製品原料を含む。

本明細書中に使用される用語「生物活性成分」は、摂取されたときに生理的に活性である、及びいずれかの方法、好ましくは経口により特に哺乳類でありヒトを含む動物に投与されたときに陽性な健康効果を有し得る、１若しくは複数のタンパク質（天然に生じたタンパク質又は組換え型、合成型、及び変性タンパク質の如きその変異体を含む）、１若しくは複数の脂質（変性脂質）、１若しくは複数のタンパク質加水分解物、１若しくは複数の脂質加水分解物又は１若しくは複数の炭水化物（変性炭水化物を含む)、あるいはその混合物を意味することを目的とする。 組換え型タンパク質の製造はＳａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）に記載される。

生物活性タンパク質の例は、非制限的に、ラクトフェリン、リゾチーム、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭを含む)、グリコマクロペプチド、及び増殖因子（ＴＧＦβ１、及びＴＧＦβ２を含むミルク由来の増殖因子を含む）を含む。

生物活性タンパク質加水分解物の例は、カゼイン加水分解物、加水分解されたホエイを含むホエイタンパク質加水分解物、加水分解されたホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、加水分解されたホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ）又はアルファ−ラクトアルブミン、ベータ−ラクトグロブリン、プロテオースペプトン、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（例えば、ＴＧＦβ１、及びＴＧＦβ２）、ウシ血清アルブミン、ラクトフェリン、及びラクトペルオキシダーゼの如き個別の加水分解されたホエイタンパク質を非制限的に含む。 他の例は、国際特許公開第９９／６５３２６号、及び同第０２／１９８３７に記載されるもの、ホエイ加水分解物（例えば、国際特許公開第０２／１９８３７号に記載されているもの）から単離されたＡＣＥペプチドを含む。 タンパク質加水分解物は、下記のように製造され得る。

生物活性脂質の例は、リン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド、及びセラミドの如き、非極性脂質及び極性脂質を非制限的に含む。

少なくとも１つの生物活性タンパク質、脂質、タンパク質加水分解物、脂質加水分解物又は炭水化物、あるいはその混合物を含む生物活性組成物の例は、乳タンパク質組成物、及び上記のものの如き乳製品原料を含む。

生物活性組成物のさらなる例は、少なくとも約１％ｗ／ｗの免疫グロブリンを含む組成物、ここで当該免疫グロブリンはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの１若しくは複数を含む；抗体レベルを増大するために動物に接種することにより製造される製品；及び免疫ミルクを非制限的に含む。

用語「保持時間」は、処理時間について圧力が処理圧力で保持される時間である好ましい態様を言及する。 例えば、１分間の保持時間は、圧力が処理圧力で１分間保持されることを意味する。 ０分間の保持時間（又は「保持なし」）は、圧力は処理圧力に上げられるが保持されず、次いで周囲圧（通常、大気圧）に戻ることを意味する。 この態様において、好まれる処理時間は、０（保持なし）、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、及び１０分間を含む。 圧力を処理圧力で意図的に保持しないけれども、使用される装置の性質に起因し非常に短い保持期間（もしかすると、１０００分の１秒）があり得ることを理解すべきである。 この非常に短い保持期間は、当該方法の実施に実質的に影響を与えそうにない。

本明細書中に使用される用語「品質保持」は、時間とともに不要な微生物が成長することに抵抗する組成物の能力を意味することを目的とする。 熱又は本明細書中に提供されるような受容される代替法で処理されない組成物は、商業的に受け入れら得る品質維持を有しそうもない。 品質を保持との言及は、本発明の方法が加圧処理された組成物の保存期間を拡張するにあたり加熱処理された対照と少なくとも同程度効果的であると意味することを目的とする。 増大する又は増大された、あるいは向上する又は向上された品質保持への言及は、時間とともに不要な微生物が成長することに抵抗する組成物の能力が未処理の組成物と比較して増強されることを意味するように意図される。 増強された品質維持は、好ましくは、例えば、延長された保存期間、及び温度差に抵抗する改良された能力の如き特性を導く。 温度差（例えば、冷蔵庫からの移動）は、いずれかの残余細菌の成長を誘導し得る。

好ましくは、品質維持は、好気性生菌数（ＡＰＣ）の基準で評価される。 ＡＰＣは、サンプル内の細菌密度を見積もるために使用される細菌計数法であり、さもなければ、総平板計数法、一般平板計数法又は総生菌数測定法として知られる。 サンプルは、回収され、混合され、希釈され、そして試験された細菌｛例えば、大腸菌、黄色ブドウ球菌、サルモネラ菌、赤痢菌、大腸菌（ｃｏｌｉｆｏｒｍｓ）、酵母菌、及びかび、中等温度好性菌、サーモフィラス菌の如き食品又は乳製品混入物質｝を検出するために好適なアガー培地に蒔かれる。 ＡＰＣの結果は、プレートに蒔き３２℃で７２時間インキュベートしたサンプルの１ミリリットルあたりのコロニー形成単位の数（ｃｆｕ／ｍｌ）である。 ５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ又はそれ未満のＡＰＣは、生存可能な培養物を含まない新鮮な乳製品として非常に好まれる。 ５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ又はそれ超のＡＰＣを有する製品は、もしその生物の存在が特にその製品にとって好適であるのでなければ、許容される品質維持を有しているとはされそうもない、後者のクラスの製品の例は、ヨーグルト又は発酵製品であり、その場合、生存可能な培養物が好まれる。

従って、ある態様において、好ましい方法は、処理後の好気性生菌数（ＡＰＣ）が約１００，０００、７５，０００、５０，０００、２５，０００、１０，０００、５，０００、１，０００、１００又は１０の１ミリリットルあたりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）未満又はそれと同等である。 好ましくは、ＡＰＣは、約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満である。

用語「ラクトフェリン」は、いずれかの非グリコシル化又はグリコシル化された、野生型の哺乳類（好ましくはウシ又はヒト）ラクトフェリンアミノ酸配列、あるいはその変異型である。

用語「ミルク由来の増殖因子」は、哺乳類のミルク又はコロストロム、好ましくはウシミルク又はコロストロムにおいて発見されたいずれかの増殖因子を含むことを目的とする、例えば、インスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様増殖因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）、形質転換増殖因子β１（ＴＧＦ−β１）、形質転換増殖因子β２（ＴＧＦ−β２）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、及びヘパリン結合増殖因子である。 上皮細胞増殖因子も含まれる。

用語「加圧処理」は、超高圧（ＵＨＰ）処理を言及する。 かかる処理は、少なくとも１００ＭＰａの圧力を使用することとして一般的に受け入れられる。 このことは、「高圧」処理、「高水圧（ＨＨＰ）」又は「高圧処理」（ＨＰＰ）としても知られる。 「加圧処理」された製品は、ＵＨＰ処理に供されるものである；すなわち、少なくとも１００ＭＰａの圧力での加圧処理、好ましくは、少なくとも約３５０、４００、４５０、５００、６００、７００又は８００ＭＰａ（又はさもなければ上記のようにこの範囲内）の圧力での加圧処理である。

用語「プロバイオティック活性」は、免疫系を刺激するためのある微生物の能力を言及する。 プロバイオティック微生物の活性の型とレベルを測定することは、当業者に知られている。 例えば、Ｍｅｒｃｅｎｉｅｒら（２００４）、Ｌｅｙｅｒら（２００４）又はＣｕｍｍｉｎｇｓら（２００４）を参照のこと。 好ましくは、プロバイオティック活性は、ＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイにより評価される。

プロバイオティック活性を保持することへの言及は、弱毒化又は死んだプロバイオティック微生物がいまだ有用なプロバイオティック活性を有していることを意味するように意図される。 プロバイオティック活性の調節に関与する細菌分子は、明確に特定されないけれども、可能な候補分子は、細菌DNAモチーフ、表面タンパク質、小有機酸、及び細胞壁成分、例えばリポタイコ酸、及びペプチドグリカンを含む。 前提となることには、これらは、宿主の免疫系の成分と相互作用し、免疫調節効果をもたらす。 好ましくは、保持された活性は、未処理対照の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９又は１００％であり、そして有用な範囲は、これらの値のいずれかの間から選択され得る（例えば、約３５〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、及び約９０〜約１００％）。

用語「プロバイオティック因子」は、プロバイオティック活性の調節に関与する細菌分子をいい、細菌DNAモチーフ、表面タンパク質、小有機酸、細胞壁成分、例えばリポタイコ酸、及びペプチドグリカン、あるいはその混合物を非制限的に含む。 上述のように、これらの分子は明確に特定されないが、もしプロバイオティック生物が存在するならば、かかる分子が存在するだろう。

用語「対象」は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくは哺乳類のペット又はヒトである。 好まれるペットは、ネコ、イヌ、及びウマを含む。

用語「不要な微生物」は、加圧処理の前に組成物中において成長し得る全ての微生物をいう。 かかる成長は望まないものであるけれども、生育不能な、弱毒化された又は死んでいる微生物を含む成長しない状態における微生物の存在は、重要なことではなく又は所望のものとなり得る。

不要な微生物の成長を阻害するとの言及は、細菌（プロバイオティック細菌を含む）、糸状菌、かび、酵母菌、及び藻類の如き微生物の成長を実質的に低減し、遅延し又は除去することを意味することを目的とする。 当該微生物は、腐敗性に関与する必要はなく又は病原菌である必要はない。 不要な微生物の成長は、目視検査により又は本分野において知られる標準的技術｛例えば顕微鏡法、染色、ＰＣＲ、細胞選別など（Ｌｕｎｄら2000を参照のこと）を非制限的に含む｝を使用することにより評価され得る。 好ましくは、加圧処理後の組成物のＡＰＣは、約１００，０００、７５，０００、５０，０００、２５，０００、１０，０００、５，０００、１，０００、１００又は１０ｃｆｕ／ｍｌ未満又は同等であり、好ましくは約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満である。

上記のように、加熱処理されない又は加圧処理されない組成物は、商業的に許容される品質維持を有しそうにない。 すなわち、未処理の組成物の品質維持は、不要な微生物の成長を阻害するために何らのステップもとられないので、通常、受け入れられない。 かかるステップを設ける際、当該品質維持が向上され得る。 約１００，０００、７５，０００、５０，０００、２５，０００、１０，０００、５，０００、１，０００、１００又は１０の１ミリリットルあたりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）未満又は同等の、好ましくは約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満又は同等の処理後好気性生菌数（ＡＰＣ）は、品質維持に影響を与えるために存在するいずれかの生物の能力を低減し、遅延させ又は除去するだろう。 低ｐＨ又は冷蔵（約１０℃未満、好ましくは約４℃未満の温度での保存）又はその両方の組合せにおいて、品質保持に影響を与えるそれらの能力は、さらに低減又は除去されるだろう。

プロバイオティック微生物を使用する態様において、プロバイオティック微生物の成長は不要であるが、プロバイオティック微生物の存在は望まれる。 従って、かかる態様における不要な微生物の成長を阻害することへの言及は、プロバイオティック微生物の成長が実質的に低減され、遅延され又は除去されることを意味することを目的とする。 好ましくは、加圧処理はプロバイオティック微生物を弱力化させ、より好ましくは当該プロバイオティック微生物を殺す一方で、プロバイオティック活性の少なくとも所望のレベルを保持する。

ある態様において、プロバイオティック微生物は、不活性化プロバイオティック微生物であるが、少なくとも所望のレベルのプロバイオティック活性を保持する。 不活性化プロバイオティック微生物は、生育不能、生育不能であるがいまだ代謝的に活性、又は死んでいるとなり得るが、全ての場合において、少なくとも所望のレベルのプロバイオティック活性を保持し得る。

他の態様において、プロバイオティック微生物は、加圧処理の前に不活性化されたプロバイオティック微生物である。 この態様における加圧処理は、存在するプロバイオティック因子のプロバイオティック活性を保持しながら、他の不要な微生物の成長を阻害する。

用語「変異型」は、１若しくは複数のアミノ酸の追加、欠失又は置換によりタンパク質の主な野生型アミノ酸配列と異なる天然に生ずるタンパク質（例えば、対立遺伝子多型）又は非天然に生ずるタンパク質（例えば、人工的に産生された変異型）をいう。

一般的に、タンパク質変異体は、下記の実施例によりアッセイされるとき、共通の定性的生物学的活性を有する。 さらに、これらの変異体は、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を共有し得る。 当該用語「変異型」の意味の中にはホモログも含まれる。 ホモログは、通常、異なる種由来であるが、初期タンパク質として実質的に同じ生物学的機能又は活性を共有しているタンパク質である。

好まれる変異型タンパク質は、野生型配列に対して、好ましくは、少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％の同一性、好ましくは約９０、９５又は９９％の同一性を有する。 同一性は、ＮＣＢＩから公的に入手可能なＢＬＡＳＴの一連のプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ２．２．１２；２８ Ａｕｇｕｓｔ ２００５）｛Ｔａｔｕｓｏｖａら（１９９９）；ＭｃＧｉｎｎｉｓら（２００４）｝（ｆｔｐ：／／ｆｔｐ．ｎｃｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／）を使用して、候補アミノ酸配列を比較するにより測定される。

生物学的活性を著しく変化させることなく、１若しくはいくつかのアミノ酸の同類置換も有用である。 当業者は、表現型としてサイレントなアミノ酸置換を作成するための方法を知っているだろう｛例えば、Ｂｏｗｉｅら（１９９０）を参照のこと｝。

２． 生物活性組成物の加圧処理
本発明は、生物活性成分の生物活性を維持しながら、商業的に有用な品質維持を達成する条件下、当該生物活性成分を含む生物活性組成物を加圧処理することが可能であることを示す。 下記の実施例１において、熱加工による活性の５０％超の損失と比較して、生物活性製品（コロストロムベースの飲料）を加圧処理に供した後は、当該生物活性成分の生物活性のたった４％が失われるに過ぎない。

例証として、本発明によって加工された生物活性組成物は、加圧処理された製品又原料内にデリバリーされ；その後加熱処理されない製品又原料に添加され；又はその後加圧処理される製品又は原料に添加され得る。

本発明者等は、加圧処理に供されたプロバイオティック微生物が免疫系を刺激する能力を保持することも示している。 それ故、加圧処理は、プロバイオティック微生物の成長が望まれないかもしれない適用において、かかる成長を阻害するために有用な道具である。

本発明者等は、疎水性リガンドの使用が、生物活性成分を、リガンドなしで容易に入手されるだろう活性のレベルより高いレベルを保持したまま、ｐＨ約７．０、好ましくはｐＨ５．０〜８．０でＵＨＰ処理することを可能にすることも示している。

従って、本発明は、本明細書中に記載されるように、組成物中に存在する少なくとも１つの生物活性成分の少なくとも所望のレベルを保持しながら、生物活性組成物の品質を保持又は向上する方法に関する。 本発明は、少なくとも所望のレベルのプロバイオティック活性を保持しながらプロバイオティック微生物の成長を阻害するためにプロバイオティック組成物を処理する方法にも関する。

限定することを目的とせず、本発明の方法における有用な加圧処理は、好ましくは以下のステップを含む：
（ｉ）加圧処理するために組成物を圧力容器のチャンバーの中に置き、そして当該チャンバーを密封する；
（ｉｉ）当該チャンバー内の圧力を所定のセットされた圧力（「処理圧力」）に上げる；
（ｉｉｉ）１分間未満を含む、所定の時間（「保持時間」）、この圧力で当該チャンバーを保持する；
（ｉｖ）当該チャンバーから圧力を放出する；そして （ｖ）加圧処理された組成物を取り出す。

かかるプロトコールは、バッチ又は連続処理装置を使用して実施され得る。

当該加圧処理は、処理の間、組成物又は製品又は原料における温度変動をもたらすことを理解すべきである。 そのようなものとして、加圧処理の間の好まれる温度への言及は、圧力を上げる前の組成物の温度をいう。

本発明に関する使用のための処理圧力を規定する方法は、生物活性組成物を選択し、そしてそれを１若しくは複数の不要な微生物を制御するために好適な処理圧力に供することである。 もし必要であれば、当該組成物を評価のために不要な生物で植菌し得る。 当該生物活性成分の保持された生物活性は、次いで、本明細書中に記載されるように評価され得る。

本発明に関する使用のための処理圧力を規定する他の方法は、生物活性組成物を選択し、そしてそれを少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも所望のレベルを保持する処理圧力に供することである。 いずれかの不要な微生物の成長又は生物活性成分の活性、あるいはその両方を、次いで、例えば、処理後の好気性生菌数を評価することのような本明細書に記載の通り評価する。 例えば、微生物の成長を評価する方法として、Ｌｕｎｄら（２０００）を参照のこと。 これらの評価方法は、以下に例示されるような、不要な生物の成長を阻害し、少なくとも所望のレベルの生物活性を保持する、その組合せを決定するために様々なｐＨ、及び保持時間によっても使用され得る。

３． 生物活性成分の生物活性
本発明の方法によって処理又は製造される生物活性組成物は、好ましくは、少なくとも１つの生物活性成分の少なくとも所望のレベルの活性を保持する。 ある好ましい態様において、当該所望のレベルの活性は、もし生物活性組成物を加熱処理したならば保持され得る活性と同等又はそれ超である。 例えば、実施例１に示されるように、生物活性組成物の加熱処理は、未処理の生物活性成分の活性と比較して、少なくとも１つの生物活性成分の活性の最高３４％まで保持する結果となる。 対照的に、本発明の方法は、実施例１に示されるように、少なくとも約３４％又はそれ超の生物活性成分の活性を保持する生物活性組成物の供給を可能とする。 いくつかの生物活性成分について、加熱処理は、なおさら有害とさえなり得る。

それ故、本出願におけるある態様において、未処理の対照における生物活性成分の活性と比較して、少なくとも１つの生物活性成分の少なくとも約３５％の活性を保持する。 好ましくは、少なくとも１つの生物活性成分の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％が保持され、そして好ましい範囲は、これらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約７０〜約１００％）。

他の態様において、好ましくは、当該生物活性成分は、加熱処理された生物活性成分より少なくとも約１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００又は１０００％超増の活性を保持し、そして好ましい範囲はこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約１００〜約４００％）。

本発明による加圧処理の前及び後の生物活性成分の生物活性は、上記及び下記のように、選択された生物活性成分の選択された活性をアッセイするために、知られた方法により測定され得る。

生物活性を測定するための許容された方法の例示は、ＨＰＬＣ、細胞ベースアッセイ、酵素ベースアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイ、フローサイトメトリー・アッセイ（ＥＬＩＳＡの代用として受け入れられる）、放射性免疫分析、及び動物モデルを使用する生体内アッセイを非制限的に含む。

例えば、ラクトフェリンの生物活性を測定する許容される方法は、クロマトグラフ法（Ｐａｌｍａｎｏら、２００２）、ＥＬＩＳＡを含む免疫学的方法（Ｄｅｓｍａｚｅａｕｄ，１９９３）、及びバイオセンサー免疫学的検定（Ｉｎｄｙｋら、２００５）を非制限的に含む。

免疫グロブリン、及び増殖因子の生物活性を、下記の実施例に記載されるように測定し得る。

プロバイオティック微生物の生物活性の型及びレベルを測定することは、当業者に知られている。 例えば、Ｍｅｒｃｅｎｉｅｒら（２００４）、Ｌｅｙｅｒら（２００４）、Ｃｕｍｍｉｎｇｓら（２００４）、及び下記のＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイを参照のこと。

４． 生物活性組成物
ミルクは、新生児の完全な栄養源であるだけでなく、生理的に生物活性な成分の豊富な源を提供し、そしてそのような「天然薬」として言及されている。 完全な栄養を提供することに加えて、ミルクは若者の発育、保護、及び修復において重要な役割をも担う。 成人健常者は、通常、ミルクの栄養面での恩恵しか必要としないが、慢性疾患の状態において、ミルク由来の生物活性は、疾患の予防及び治療の両方に関して提供するにとどまらない。 好ましくは、ミルクは、ヒツジ、ヤギ、ブタ、マウス、水牛、ラクダ、ヤク、ウマ、ロバ、ラマ、ウシ又はヒトのミルクであり、最も好ましくはウシのミルクである。 乳タンパク質は、免疫賦活性であることが知られる。

コロストロムは、出生直後、標準的乳製品となる前に製造されるプレミルクである。 最も重要な畜牛由来のコロストロムは分娩後最初の６時間内に得られるが、コロストロムは分娩後最初の２日間にも収集され得る。 最も重要なコロストロムは、通常、約４８時間後に得られる同じ畜牛由来のミルクにおいて見られるものの２倍超の乳固形分、及び４倍超のタンパク質を含む。 消化酵素、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含む）、サイトカイン、インターフェロン、増殖因子、糖タンパク質、プロリンリッチ・ペプチド、及びビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、及びＫの濃度は、標準的ミルクと比較して、最重要コロストロムにおいて全て高い。 コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、及びコロストロム・ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）は、Ｅｌｆｓｔｒａｎｄら、２００２により記載されるように製造され得る。

ミルク、及びコロストロム誘導体、並びにそれらの製造方法は、本分野において知られている。 かかる誘導体は、（脂肪除去のための）組合せ遠心、（酸又は酵素での）カゼイン沈殿、（ラクトース、ミネラル、及び水を除去するための、あるいは場合によりタンパク質を除去するための）ろ過、（タンパク質成分を精製するための）クロマトグラフィーにより一般的に得られ、還元若しくは新鮮な全乳、還元若しくは新鮮な脱脂粉乳、再構成された全脂若しくは脱脂粉乳、脱脂粉乳濃縮物、脱脂粉乳分離物、全脂若しくは脱脂粉乳、脱脂粉乳リテンテート、濃縮乳、バターミルク、限外ろ過乳リテンテート、ミルクタンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、ミルクタンパク質分離物（ＭＰＩ）、カルシウム除去ミルクタンパク質濃縮物、カルシウム除去ミルクタンパク質分離物、低脂肪ミルク、低脂肪ミルクタンパク質濃縮物、低脂肪ミルクタンパク質分離物、コロストロム、コロストロム画分、コロストロム・タンパク質濃縮物（ＣＰＣ）、コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物、コロストロム・ミルクタンパク質分離物、コロストロム・ホエイ、コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物、コロストロム・ホエイタンパク質分離物、コロストロムからの免疫グロブリン画分、ホエイ、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ）、スィートホエイ、乳酸ホエイ、鉱酸ホエイ、再構成されたホエイ粉末、ミルク又はコロストロム加工ストリーム由来の組成物、いずれかのミルク若しくはコロストロム加工ストリームの限外ろ過若しくは精密ろ過により得られたリテンテート若しくは浸透物由来の組成物、又はいずれかのミルク若しくはコロストロム加工ストリームのクロマトグラフ分離により得られたブレイクスルー若しくは吸収された画分由来の組成物、又はこれらの組成物のいずれかの全体的若しくは部分的加水分解物、及びその混合物を含む。 例えば、ｔｈｅ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｔｅｔｒａ Ｐａｋ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ，１９９５）を参照のこと。 他のかかる誘導体は、上記のような乳タンパク質組成物、及び乳製品原料を含む。

ミルク中に見られるタンパク質は、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含む）、増殖因子、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、アルファ−ラクトアルブミン、ベータ−ラクトグロブリン、及び多数のカゼインを含み、その全てはリンタンパク質である。 カゼインを例外として、これらのタンパク質は、ホエイ中にも存在する。 ミルクは、様々なマイトジェンタンパク質、及び骨再形成に直接的に関与し得るタンパク質を含むことが知られている。 増殖因子（ＩＧＦ−インスリン様増殖因子、ＴＧＦ−形質転換増殖因子など）、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含む）、ＢＳＡ、及びいくつかのベータ・ラクトグロブリンは、陽イオン交換クロマトグラフィーによりミルク又はホエイから回収される。 いくつかの増殖因子は、中性タンパク質として回収される。 カゼイノグリコマクロペプチド（ＣＧＭＰ）は、陰イオン交換により回収され得る酸性タンパク質画分である。 オステオポンチン（Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）は、全ての体液（ミルクを含む）において見つかる著しくリン酸化、及び糖化されたタンパク質である。

ＣＧＭＰは、チーズ製造方法のレンネット媒介カゼイン凝固ステップ（キモシンの活性を通して）の間に、カッパ−カゼインから解放されるペプチドであり、スィートホエイ又はチーズホエイとして知られるホエイ画分中に見られる。 ＣＧＭＰは、時々、ＧＭＰ（グリコマクロペプチド）として簡単に言及される。 チーズホエイタンパク質は、１５％〜２０％のＣＧＭＰからなる。 ＣＧＭＰは、国際特許公開第００／４９８８５号に報告されるように、ミルクの骨健康促進成分の内の１つとして示される。

乳酸ホエイは、カゼイネート又はカッテージ及びリコッタチーズの製造の間、乳酸細菌との発酵、あるいは乳酸の直接添加により製造される。 鉱酸ホエイは、カゼイネート製造間に鉱酸の添加により製造される。 乳酸ホエイ、及び鉱酸ホエイはＣＧＭＰを含まない。 これら２つの加工の基準は、沈殿を生じさせるためにキモシンの作用を使用することとは対照的に、カゼインを沈殿させるための約４．６までのより低いｐＨである。 それ故、キモシンにさらされるいずれかの乳製品はＣＧＭＰを含まない。

ホエイは、チーズ又はカゼイン製品の副産物であり、ホエイ由来のタンパク質は、タンパク質含量に基づき分類され得、少なくとも３０％のタンパク質を含むホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、少なくとも９０％のタンパク質を含むホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ）を含む（Ｈｕｆｆｍａｎ，１９９６；ＩＤＦ，１９９８）。

膜限外ろ過、及びダイアフィルトレーションは、通常、ホエイタンパク質を乾燥前に２５〜３５％固形に濃縮及び精製するために、かかる製品の製造に使用され、そして当該膜ろ過ステップ由来のタンパク質濃縮物は、リテンテートとして、本分野において知られる。 ホエイタンパク質は、いくつかの個々のタンパク質｛アルファ−ラクトアルブミン、ベータ−ラクトグロブリン、プロテオースペプトン、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含む）、グリコマクロペプチド、増殖因子（例えば、ＴＧＦβ１、及びＴＧＦβ２）、ウシ血清アルブミン、ラクトフェリン、及びラクトペルオキシダーゼを非制限的に含む｝を含む総称であり、本発明において、集合的にホエイタンパク質又はその画分を含み得る。

ホエイの商業的製造に好適な方法は、Ｚａｄｏｗ（１９９２）、及びＳｉｅｎｋｉｅｗｉｃｚら（１９９０）に記載される。 ＷＰＣ、及びＷＰＩの製造方法は本分野において知られており、ＵＳ Ｄａｉｒｙ Ｅｘｐｏｒｔ Ｃｏｕｎｃｉｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ Ｕ． Ｓ． Ｗｈｅｙ ａｎｄ Ｌａｃｔｏｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，７章： Ｗｈｅｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ−Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ；Ｐａｇｅ，Ｊ． ，Ｍｅｙｅｒ、D． ，Ｈａｉｎｅｓ、Ｂ． ，Ｌａｇｒａｎｇｅ、Ｖ． ，及びＫｅｎｎｅｙ，Ａ． （Ｅｄｓ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｅｌｍｈｕｒｓｔ，ＩＬ，ＵＳＡ，（２００４年６月） （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｓｄｅｃ．ｏｒｇ／ｆｉｌｅｓ／ｐｄｆｓ／ＵＳ０８Ｄ ０４．ｐｄｆのオンラインでも入手可能).において議論される。 Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｔｅｒｒａ Ｐａｋ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ，１９９５）も参照のこと。 ホエイタンパク質は、免疫賦活性として知られる。

高免疫ミルク、及び高免疫コロストロムは、懐妊したミルク産生哺乳類を病原菌由来の抗原で免疫化し、コロストロム、及びミルクにおける特異的抗体を増大させることにより製造される（かかる方法の再検討のために、Ｋｏｒｈｏｎｅｎら、２０００を参照のこと）。 高免疫製品のタンパク質濃縮物は、上記のように引用された知られた方法によって製造され得る。 高免疫ミルク、及び高免疫コロストロムは、免疫賦活性であることが知られる（Ｋｏｒｈｏｎｅｎら、２０００）。 高免疫ミルク、及び高免疫コロストロムは、普通のミルク、及びコロストロムのように加工され得、高免疫ミルクタンパク質濃縮物、高免疫ミルクタンパク質分離物、高免疫ホエイ、高免疫ホエイタンパク質濃縮物、高免疫ホエイタンパク質分離物、高免疫コロストロム、高免疫コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物、高免疫コロストロム・ミルクタンパク質分離物、高免疫コロストロム・ホエイ、高免疫コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物、又は高免疫コロストロム・ホエイタンパク質分離物、あるいはその混合物の如き誘導体を製造する。

ラクトフェリンは、哺乳類のミルク及びコロストロムに存在する８０ｋＤａの鉄結合糖タンパク質である。 ウシのミルク及びコロストロムにおけるラクトフェリン濃度は、各々、約０．２ｍｇ／ｍｌ、及び１．５ｍｇ／ｍｌである。 それは、鉄代謝の調節、免疫機能、及び胚発育を含む複合的な前提とされた生物学的役割を有する。 ラクトフェリンは、グラム陽性及びグラム陰性細菌、酵母菌、及び糸状菌を含む病原菌の種類に対する抗菌活性を有する。 ラクトフェリンの抗菌効果はその鉄結合能に基づき、そして当該鉄は病原菌の成長に必須である。 ラクトフェリンはいくつかのウイルスの複製も阻害し、そして、細菌の膜上でリポポリサッカリドの脂質Ａ成分に結合することにより、抗生物質及びリゾチームに対するいくつかの菌の感受性をも増大する。

ラクトフェリンは、陽イオン交換クロマトグラフィー、その後限外ろ過、そしてダイアフィルトレーションによりミルクから分離され得る。 野生型ラクトフェリン自体に加えて、有用な変異体は、ウシ・ラクトフェリン変異体、ｂＬｆ−ａ、及びｂＬｆ−ｂも含む｛Ｔｓｕｊｉら（１９８９）； Ｙｏｓｈｉｄａら（１９９１）｝。 さらに有用な変異体は、ラクトフェリンのグリコシル化型、及びグリコシル型｛Ｐｉｅｒｃｅら（１９９１）；Ｍｅｔｚ−Ｂｏｕｔｉｇｕｅら（１９８４）；ｖａｎ Ｖｅｅｎら（２００４）｝、並びにグリコシル化変異体（糖鎖形成又は種々のグリコシル側鎖の様々な位置を有する）を含む。 有用なラクトフェリン断片は、Ｎローブ、及びＣローブ断片（Ｂａｋｅｒら、２００２）、及びラクトフェリン結合ポケットを保持する他のラクトフェリンポリペプチド、例えば切断ラクトフェリンポリペプチドを含む。 ラクトフェリンの変異体又は断片は、知られた合成方法によっても製造され得る（例えばＫｉｍｍｅｒｌｉｎら、２００５を参照のこと）。 あるいは、ラクトフェリンポリペプチド、あるいはその機能的変異体又は断片は、Ｖｉｅｊｏ−Ｄｉａｚら，（２００３）によるヒト・カリオシン（ｋａｌｉｏｃｉｎ−１）及びラクトフェリシン由来のペプチド；Ｎｇｕｙｅｎら（２００５）により記載されるウシ・ラクトフェリシンペプチド；及びｖａｎ ｄｅｒ Ｋｒａａｎら（２００４）により記載されるラクトフェランピン（ｌａｃｔｏｆｅｒｒａｍｐｉｎ）及びより短い断片について記載される既に確立された合成Ｆｍｏｃ化学により製造され得る。

以下の記載は、ウシのミルクからラクトフェリンを分離するための例示的手順である。 新鮮な脱脂粉乳（７Ｌ、ｐＨ６．５）を、流速５ｍｌ／分、及び４℃で、ミリＱ水において平衡とされたＳ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗの３００ｍｌカラムに通す。 非結合タンパク質を２．５ｂｅｄ量で洗浄し、そして結合タンパク質を、各々約２．５ｂｅｄ量の０．１Ｍ、０．３５Ｍ、及び１．０Ｍの塩化ナトリウムで段階的に溶出する。 １Ｍの塩化ナトリウムにおいて控えめなピンク色のバンドとして溶出されるラクトフェリンを単一の画分として回収し、そしてミリＱ水に対して透析し、その後凍結乾燥する。 当該凍結乾燥された粉を、ｐＨ６．５の２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液中に溶解し、そして、上記緩衝液における塩化ナトリウムの１Ｍまでの勾配及び流速３ｍｌ／分でＳ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗのクロマトグラフィーに供する。 ゲル電気泳動、及び逆相ＨＰＬＣにより測定されるように十分な純度のラクトフェリンを含む画分を、混合し、透析し、そして凍結乾燥する。 ラクトフェリンの最終精製は、０．１５Ｍの塩化カリウムを含むｐＨ８．６の８０ｍＭリン酸二カリウムにおけるＳｅｐｈａｃｒｙｌ ３００によるゲルろ過により達成される。 選択された画分を混合し、ミリＱ水に対して透析し、凍結乾燥する。 この製造の純度は、ＨＰＬＣ分析、及びof ラクトフェリンの鉄飽和型の〜１９又はそれ未満のスペクトル比値（２８０ｎｍ／４６５ｎｍ）により示される通り９５％超である。

加水分解物は、トリプシン又はキモトリプシンの如き既知の開裂特異性に好適な酵素を選択すること、並びにｐＨ、温度、インキュベート時間、及び基質に対する酵素比率により制御すること／制限することにより製造され得る。 かかる分離ペプチドの精製は、特異的エンドペプチダーゼを使用して実施される。 一般的に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥは、分子量標準に対する加水分解物の比較により加水分解の度合いを評価するように使用され得る。 サイズ排除クロマトグラフィーは、加水分解物中の様々な種を分離するため、及び分子量分布形状を評価するために使用され得る。 タンパク質加水分解物、特に乳タンパク質加水分解物は、免疫賦活性であることが知られている。

実施例の目的で、本発明によって加工された組成物又は製品は、加圧処理された製品又は原料にデリバリーされ；その後加熱されない製品又は原料に添加され；その後加圧処理される製品又は原料に添加され得る。

本発明により処理された組成物中に存在するタンパク質に関する不要な効果を低減するために、ある態様において、当該組成物が安定剤を添加するような液体であることが望まれ得る。 例えば、安定させるために、いずれかのカゼインが当該組成物中に存在する。 従って、ある態様において、当該組成物は、ローカストビーンガム、グアーガム、キサンタンガム、カシアガム、コンニャクフラワー、ベータグルカン、タラガム、アラビアゴム、ジェランガム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、トラガカント・ゴム、カラヤゴム、アカシアゴム、キトサン、アラビノガラクチン、アルギネート、ペクチン、カラギーナン又はサイリウム、あるいはその混合物から選択されるゴムの如き安定剤をさらに含む。 好ましくは、当該安定剤は、ペクチン又はカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）である。 好ましくは、本発明の方法によって処理される組成物は、必要に応じて、約０．０１、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５％ｗ／ｖ又はそれ超の安定剤を含む。

約中性ｐＨで生物活性成分を安定化するために、ある態様において、当該組成物中に１又は複数の疎水性リガンドを含むことが望まれ得る。 疎水性リガンドの存在は、生物活性成分が、リガンドなしで容易に得られるだろうよりもより高いレベルの活性を保持しながら、約７．０のｐＨ、好ましくは約５．０〜８．０のｐＨで加圧処理され得ることを可能とする。 理論に拘束されずに、加圧処理の間、これらのリガンドが、生物活性成分中の疎水ポケットと結合し、変性に対する感受性を低減することが信じられる。 従って、ある態様において、当該組成物が、パルミチン酸、ミリスチン酸、リノール酸、共役リノール酸（ＣＬＡ）、１若しくは複数のリン脂質、１若しくは複数のホスファチジルコリン、１若しくは複数のスフィンゴミエリン、１若しくは複数のガングリオシド、酪酸、１若しくは複数のオメガ３脂肪酸｛エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を非制限的に含む｝、１若しくは複数のフィトステロール、１若しくは複数のフィトステロール・エステル、１若しくは複数のフィトステロール・アセテート、１若しくは複数のオメガ６脂肪酸（魚油を非制限的に含む）、脂溶性疎水性ビタミン（ビタミンＡ［レチノール］及びビタミンＤを含む）、リコピン又はドデシル硫酸ナトリウム、あるいはその混合物から選択される１又は複数の疎水性リガンドをさらに含むことが望まれ得る。 好ましくは、この態様における組成物のｐＨは約５．０〜８．０である。

本明細書中において有用な製品剤形の例は、飲料（酸性飲料、及び炭酸飲料を含む）、ヨーグルト、及びゼリーを含む。 かかる製品は下記のように説明され、上記及び実施例におけるように評価され得る。 従って、本発明は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、並びに約１．０ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのラクトフェリン、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物にも関する。 本発明は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物、並びに約１ｍｇ／ｍｌ〜１０００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ、及び約５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物にも関する。 当該組成物は、加圧処理されたゼリー、加圧処理されたヨーグルト又は加圧処理された飲料となり得る。 ラクトフェリン又はＩｇＧの濃度、及び微生物計数は、本明細書中に記載される方法により測定され得る。

本発明は、上記のように、１若しくは複数の生育不能なプロバイオティック微生物培養物、及び５０，０００ｃｆｕ／ｍｌ未満の微生物を含む加圧処理された組成物にも関する。 微生物計数は、本明細書中に記載される方法により測定され得る。 ある態様において、当該組成物は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．１、０．５、１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００又は１０００ｍｇ／ｍｌの生物活性成分を含み、有用な範囲はこれらの値のいずれかから選択され得る（例えば、約０．１〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、約２〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、約３〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、約４〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、約５〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、及び約１０〜約１０００ｍｇ／ｍｌ）

本発明の様々な態様は、以下の実施例の言及により非制限的に示されるだろう。

全乳製品をＦｏｎｔｅｒｒａ Ｃｏ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ，ニュージーランドから入手した。 加熱処理について、４ｍｌのサンプルを、８ｍｌのＷｈｅａｔｏｎガラス・スクリューキャップ・バイアルに移し、そして、３０℃で約５〜１０分間、平衡に供し、次いで、７５℃又は８５℃で維持されたオイルバス中に浸し、そして１０分間、振動させ、その後１０分間、氷中において急冷した。 サンプルを分析まで４℃で保存した。

サンプルの分析
加熱又は加圧処理の結果によるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、増殖因子又はＬＦにおける質的及び定量的変化を、目視観測、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、ＨＰＬＣ、ＢｉａＣｏｒｅ又はＥＬＩＳＡから選択される１若しくは複数の技術により評価した。 サンプルを、加圧処理の前、及び後に、様々な微生物の存在についても試験した（好気性生菌数、大腸菌群数、酵母、及びかびの計数、中温性胞子計数、好熱性胞子計数などを含む）。

１． ＥＬＩＳＡ：使用説明書に従って実施された。

２． ＨＰＬＣ−ＭＣ：サンプルを希釈し、そしてＣｏｐｅｓｔａｋｅら，２００６により記載されるＨＰＬＣ−ＭＣ方法により分析した。 カゼインは、ＨＰＬＣにより分析されたＩｇＧの精密度を妨げ得る。 コロストロム製品のＩｇＧ分析のより精密なかつ再現可能な方法を確立するため、事前にカゼインを除去して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣマイナス・カゼイン又はＨＰＬＣ−ＭＣ）を使用した。 このことは、測定されたＩｇＧ濃度が、ＲＩＤ、ＳＰＲ、及び他の免疫学的検定方法による測定をより厳密に反映することを確実にする。

３． ＢｉａＣｏｒｅ：Ｉｎｄｙｋ＆Ｆｉｌｏｎｚｉ（２００５）に記載されるように、サンプルをＰＢＳバッファー中に希釈し、そしてＢｉａＣｏｒｅ器具を使用して分析した。 計量法を、高純度ウシのラクトフェリン又はＩｇＧを使用して構築された標準曲線を参照することにより得た。

４． ＰＡＧＥ：選択されたサンプル（還元されたもの、及び非還元のもの）のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ＰＡＧＥを、Ｍａｎｄｅｒｓｏｎら（１９９８）に記載される方法を使用して実施した。

５． 微生物学的分析：微生物分析を、ＮＺＴＭ２ ４３．１−ＡＰＣ（好気性生菌数）；ＮＺＴＭ２ ４８．１−大腸菌群数；ＮＺＴＭ２ ６０．１−好熱性計数；ＮＺＴＭ２ ５９．１−中温性胞子計数；及びＮＺＴＭ２ ６１．１−酵母及びかび計数に従って実施した、ここでこれら全ては、ＮＴＺＭ２：Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｄａｉｒｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ（Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ ９８３，Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ)からものであり、国際酪農連盟、及びＡＯＡＣ国際方法に基づく。

実施例１：コロストロム原料を含む溶液
８０％タンパク質（及び６．６％の免疫グロブリン）を含むコロストロム・ミルクタンパク質濃縮物（Ｆｏｎｔｅｒｒａ ＣＯ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ）の粉末を、水で構成し、そしてｐＨを乳酸で３．５に調整し、３．６％のタンパク質溶液得た。 次いで、当該溶液のサンプルを、８３．５℃又は６００ＭＰａで各々、加熱処理又は加圧処理し、３分間保持し、そして、処理された飲料中の免疫グロブリンの量をＨＰＬＣにより測定し、そして未処理溶液における量と比較した。 結果を図１に示す。 Ｓｔａｎｓｔｅｄ Ｆｌｕｉｄ Ｐｏｗｅｒ Ｌｔｄ，ＵＫ由来のＨＰＰユニットを全ての実施例について使用した。

実施例２：コロストロムＭＰＣ原料を含む溶液
コロストロムＭＰＣを、０．３％ｗ／ｖのペクチン溶液中に溶解させ、コロストロムＭＰＣの６％ｗ／ｖ原液を製造した。 コロストロム原液のサンプルを、様々なｐＨ値に酸性化し、そして、８５℃で加熱処理し１０分間保持か又は下記のように加圧処理するかのいずれかとした。 同じｐＨでの未処理対照と比較した加熱、及び加圧処理された各サンプルの残余免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を、ＨＰＬＣ−ＭＣにより測定した。 当該溶液を、大腸菌、酵母、及びかびでもチャレンジさせ、そして６００ＭＰａでの加圧処理後のこれらの生物について数え上げた。

ｐＨ３．３で、４００ＭＰａで加圧処理され、そして３分間保持されたコロストロムサンプルは、加熱処理されたコロストロムの２％と比較して、６７％のＩｇＧ残余を有した。

ｐＨ４．１で、６００ＭＰａで加圧処理され、そして３分間保持されたコロストロムサンプルは、加熱処理されたコロストロムの２％と比較して、３７％のＩｇＧ残余を有した。

ｐＨ３．５で、６００ＭＰａで加圧処理され、そして３分間保持されたコロストロムサンプルは、加熱処理されたコロストロムの２％と比較して、３４％のＩｇＧ残余を有した。

ｐＨ４．１で、５００ＭＰａで加圧処理され、そして１分間保持されたコロストロムサンプルは、加熱処理されたコロストロムの２％と比較して、９１％のＩｇＧ残余を有した。

ｐＨ４．１で、保持なしの４００ＭＰａ、５００ＭＰａ、及び６００ＭＰａで加圧処理されたコロストロムサンプルは、表１Ａに簡易的に示されるように、加熱処理されたコロストロムの２％と比較して、４００ＭＰａで１００％、５００ＭＰａで９１％、及び６００ＭＰａで４８％保持した。

これらのサンプルの微生物的品質を比較し、そして表１Ａに示した。 未処理対照製品は、９×１０ ^３ ｃｆｕ／ｍＬの大腸菌カウント、およそ１００ｃｆｕ／ｍＬの中温性胞子、及び１×１０ ^６ ｃｆｕ／ｍＬの酵母菌／かびの両方、並びに好気性生菌数（ＡＰＣ）に関するコロニーを有した。 比較として、保持なしで５００ＭＰａ又は６００ＭＰａで加圧処理されたサンプルは、検出可能な大腸菌又は酵母菌／かびが無かった。 ６００ＭＰａで、中温性胞子又はＡＰＣを検出しなかった。 ５００ＭＰａで、およそ２０ｃｆｕ／ｍＬの中温性胞子、及び２７ｃｆｕ／ｍＬのＡＰＣだった。 ４００ＭＰａで、およそ４０ｃｆｕ／ｍＬの中温性胞子、及び２１００ｃｆｕ／ｍＬのＡＰＣだった。

さまざまなｐＨに渡る、６００ＭＰａでの残余免疫グロブリン活性、並びに大腸菌、及び酵母、及びかびの計数を、表１Ｂに示す。

実施例３：さまざまなｐＨでのコロストロムＭＰＣ原料
実施例２の原液からのコロストロムサンプルをｐＨ３．５〜４．１に酸性化し、４００〜６００ＭＰａ（保持なし）で加圧処理し、そして加熱処理した製品と比較した。 全ての場合において、加熱処理後、およそ２％の残余ＩｇＧが保持され、比較された加圧処理後は、４５〜１００％のＩｇＧが保持された、ここで、高いｐＨであればあるほど残余ＩｇＧも高くなった。 この結果を表２に示す。

実施例４：様々な原料の効果
様々なｐＨ値でコロストロム原料の一部から製造され、加熱処理（８５℃／１０分間）、及び加圧処理（６００ＭＰａ／３分間保持）に供されたコロストロム溶液を、ＨＰＬＣ−ＭＣにより分析した。 結果を図２（Ａ）コロストロム・ホエイ（ＣＷ）、図２（Ｂ）コロストロム・ホエイＵＦリテンテート（ＣＷＵＦＲ）（レンネット・ホエイは１０ｋＤＡ分子量切断を有するＵＦ膜で限外ろ過に供した）、図２（Ｃ）コロストロム脱脂粉乳、及び図２（Ｄ）コロストロムＭＰＣに示した。 加熱処理された製品における残余ＩｇＧの量は常に１０％未満だった。

コロストロム・ホエイＵＦリテンテート原料（図２Ｂ）は、他の原料からの溶液と比較して加圧処理後のＩｇＧの著しい損失を示した。 しかしながら、ｐＨ５．２及びそれ未満で、加圧処理されたコロストロム脱脂粉乳製品の有用なＩｇＧレベルがまだ保持した。

ｐＨ５．２及びそれ未満で、全ての他の加圧処理された製品において、ＩｇＧの実質的な保持がある。 特に、ｐＨ４．１及びそれ未満では、コロストロム脱脂粉乳（図２Ｃ）、及びコロストロムＭＰＣ（図２Ｄ）からの製品について、ｐＨ３．８及びそれ未満では、コロストロム・ホエイ（図２Ａ）からの製品について、残余ＩｇＧは約９０％超である。 コロストロム・ホエイ（図２Ａ）についてのｐＨ６．７での残余ＩｇＧレベルも有用なレベル（約７０％）である。

実施例５：高免疫（ＨＩ）コロストロム由来の原料
２つの７％ｗ／ｖ高免疫（ＨＩ）コロストロム原液を、１つは高免疫コロストロム・ミルクタンパク質濃縮物（ＨＩ−ＭＰＣ）から、もう１つは高免疫コロストロム・ホエイタンパク質濃縮物（ＨＩ−ＷＰＣ）から配合した。 これらの原液サンプルをｐＨ４．６に調整し、１０分間保持の８５℃の加熱処理、あるいは保持なしの６００ＭＰａ又は３分間保持の６００ＭＰａに供した。 微生物の計数のために、処理及び計数の前に、サンプルを周囲温度で１週間保存した。 様々な生物活性タンパク質の残余レベルを測定した、既に記載された免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＭはＥＬＩＳＡにより、そしてラクトフェリンはＢｉａＣｏｒｅによる。 当該微生物を、好気性生菌数（ＡＰＣ）として計数し、表３に示した。 保持なしで４００ＭＰａの処理後、ＡＰＣを、ＨＩ−ＭＰＣについて４ｌｏｇ及びＨＩ−ＷＰＣについて３ｌｏｇにより低減した。 ３分間保持で６００ＭＰａの処理後、ＡＰＣを、ＨＩ−ＭＰＣについて５．８ｌｏｇにより、ＨＩ−ＷＰＣについて＞５．６ｌｏｇにより低減した。

処理されたサンプルを、次いで、２０℃で、６週間保持し、次いで、さらなる計数を実施し、汚染微生物の増殖を評価した。 これらの結果を表４に示す。 当該残余生物活性タンパク質のレベルを、図３に示す（ｐＨ４．１で全て示す）。

非常にわずかな（２〜３％）の残余ＩｇＡが、８５℃で１０分間、加熱処理されたサンプル中に残った。 対照的に、加圧処理されたサンプルは、非常に高い残余ＩｇＡ活性を有した（８０〜８５％の残余ＩｇＡ）。

ほとんど類似の傾向が、ＩｇＭについても見られ、保持なしの６００ＭＰａ又は３分間保持の６００ＭＰａの加圧処理されたサンプルにおける９５％超の残余ＩｇＭ活性に比べて、加熱処理されたサンプルにおいては、ごくわずかな量の残余ＩｇＭ活性（〜１％の残余ＩｇＭが残った）しか示されなかった。

実施例６：生物活性に関する低ｐＨの効果
商業的ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）の７％ｗ／ｖ溶液を、ミリＱ水にＷＰＣ粉末の適量を溶解することにより製造した。 各溶液のｐＨを、それぞれ、３．８、５．２、６．０、６．７、及び７．５に調整し、次いで、当該溶液を、３分間保持の６００ＭＰａで加圧処理又は５分間保持の７５℃で加熱処理し、そして上記ＢｉａＣｏｒｅ法を使用して残余ＩｇＧ、及びラクトフェリン含量について分析した。 結果を図４に示す。

残余ＩｇＧ活性は、加熱処理されたサンプルにおいて、５〜３５％の範囲だった。 対照的に、３分間保持の６００ＭＰａで加圧処理されたサンプル（図４Ａ）は、５０〜９５％の残余ＩｇＧを示した。 より低いｐＨで加圧処理されたサンプルは、より高いｐＨ（例えば、ｐＨ６．７及びそれ超）で加圧処理されたサンプルと比較して、いくぶんより高い残余ＩｇＧを示した。 同様に、加熱処理されたＷＰＣ溶液における残余ラクトフェリン活性は、３分間保持の６００ＭＰａで加圧処理されたサンプルにおける６０〜９０％と比較して、５〜７０だった（図４Ｂ）。 より低いｐＨで加圧処理されたサンプルは、より高いｐＨ（例えば、ｐＨ６．０及びそれ超）で加圧処理されたサンプルと比較して、いくぶん高い残余ＬＦ（％）を示した。

実施例７：ラクトフェリンはｐＨ４．０で非常に圧力安定的である
５〜５０分間４００ＭＰａで加圧処理された、希釈ＬＦ溶液（０．２％ｗ／ｖ、ｐＨ４．０）の非還元ＳＤＳＰＡＧＥを、図５に示す（レーン１；未処理対照；レーン２：４００ＭＰａ／５分間；レーン３：４００ＭＰａ／１０分間；レーン４：４００ＭＰａ／２０分間；レーン５：４００ＭＰａ／３０分間；レーン６：４００ＭＰａ／４０分間；レーン７：４００ＭＰａ／５０分間）。 ゲルは、４００ＭＰａでの長時間の加圧処理の前後の残余ＬＦのバンド強度は大きく変化しないことを示した。 これらの結果は、当該溶液を長時間に渡り加圧処理したとしても、ＬＦがこの圧力において高い加圧耐性であることを示す。

実施例８：様々なｐＨでのラクトフェリンを含む溶液 ラクトフェリン溶液（６％ｗ／ｖ）を、ミリＱ水に溶解したラクトフェリン粉末から製造し、２〜３時間、穏やかに撹拌した。 当該溶液を、ｐＨ３．３、３．８、４．１又は７．０に調整し、それぞれ、加圧処理（最大４５分間の保持での６００ＭＰａ）又は加熱処理（５分間保持での８５℃）した。 残余ラクトフェリンをＢｉａＣｏｒｅ法により測定し、図６に示す。 ラクトフェリン溶液の色は、タンパク質鉄結合能を示し、加工により悪影響を受ける。 天然ラクトフェリン溶液の６％溶液は、およそ１５％の鉄飽和であり、濃いオレンジ色である。 一方、０％の鉄飽和である分離ラクトフェリン溶液は無色である。 当該加圧処理（５分又は３０分間の保持で６００ＭＰａ）、及び加熱処理（１０分間の保持で８５℃又は９０℃）された溶液を、ｐＨ３．８、４．８、及び７．０で、還元、及び非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいても比較した。

ｐＨ７．０で、５分間の保持で７５℃又はそれ超での加熱処理後、残余ラクトフェリンはほとんどない。 ３．３〜４．１のｐＨ範囲にかけて加熱されたサンプルは、より高い残余ラクトフェリンを示したが、かなりの保持時間でさえ、６００ＭＰａでの加圧処理後、同じｐＨ値での残余ラクトフェリンは常にさらに高くなった。

５分間の保持時間の７５℃での加熱処理は、未処理の対照と比較して、３．８〜７．０のｐＨ値に渡り、著しい色の喪失を引き起こし、ラクトフェリンにおける鉄又は配向鉄結合の喪失を示唆した（表５）。 留意すべきことは、ｐＨ３．３で、ラクトフェリンは、低減された鉄結合能を有することである。 ５分間の保持の８５℃及びそれ超での加熱処理は、当該ｐＨ範囲にかかる著しい色の喪失を引き起こした。 はっきりとした沈殿が、ｐＨ７．０で形成され、ラクトフェリンの著しい変性を示唆した。

対照的に、最大４５分間の保持の６００ＭＰａでの加圧処理は、ｐＨ３．８、及び４．０を除いて、未処理の対照と比較して、色の変化又は濁りを引き起こさず、色はより高いｐＨでの溶液と同程度だった（表６）。

上述のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（示されていない）の再検討に関して、加熱処理された溶液は、スタッキングゲル内の分離ゲルの始まりで追いつかれるか、ゲルに全く入らない非常に大きなポリマーのようになることのいずれかで、重合、及び凝集の証拠を示した。 ｐＨ３．８、及び４．８で、それらは、非還元ゲル内に入らず、還元ゲル内にない凝集された原料である。 このことは、凝集が熱誘導重合に起因することを示した。 ｐＨ７．０で測定される残余ラクトフェリンはほとんど無かった。 対照的に、加圧処理された溶液は、未処理の対照からほとんど変化のないことを示した。

ｐＨ３．３、３．８、４．０、５．０、６．０、７．０、及び８．０で調整されたラクトフェリン溶液（６％ｗ／ｖ）を、酵母、及びかびでチャレンジし、次いで、６００ＭＰａで０、５、及び１５分間加圧処理した。 未処理対照、及び加熱処理されたサンプルにおける酵母及びかびの計数は、未処理対照が１９０，０００酵母及びかび計数（ｃｆｕ／ｍｌ）を有し、一方、加圧処理されたサンプルは、試験された全加圧処理及びｐＨ範囲において、酵母及びかびを全く検出しなかったことを示した。

実施例９：増殖因子を含む溶液
ＨＩ−ＷＰＣ溶液（７％ｗ／ｖ）を、ｐＨ６．９でミリＱ水にＨＩ−ＷＰＣ粉末を溶解することにより製造した。 次いで、当該溶液を保持なしの６００ＭＰａで又は３分間保持の６００ＭＰａで加圧処理し、あるいは１０分間保持の８５℃で加熱処理した。 当該加圧処理された、及び加熱処理されたサンプルを、未処理対照と比較して、２つの主要なウシコロストロム増殖因子、ＴＧＦβ１、及びＴＧＦベータ２について分析した。 結果を、図７（Ａ）ＴＧＦβ１、及び図７（Ｂ）ＴＧＦβ２に示す。 加熱処理されたサンプルは、２７％の残余ＴＧＦβ１増殖因子を有し、及びＴＧＦβ２増殖因子は有さなかった。 対照的に、３分間保持の加圧処理されたサンプルは、両増殖因子の９３〜９９％を有した。

実施例１０：ラクトフェリンを含むヨーグルト
ラクトフェリン・ヨーグルトを、図８に示されるような３つの異なる方法により製造した。 第１には、ラクトフェリンをミルクに添加し、その後加熱処理した（標準的ヨーグルト）、第２には、発酵後、ラクトフェリンをヨーグルトに添加し（対照）、第３には、発酵後、ラクトフェリンをヨーグルトに添加し、そして当該強化ヨーグルトを、保持なし５００ＭＰａで加圧処理した（ＨＰＰ法）。 当該ヨーグルトの最終ｐＨを、測定し、４．５０にした。 当該ヨーグルト内のラクトフェリンをＢｉａＣｏｒｅ方法により測定し、そして結果を図９に示した。 標準的加熱処理されたラクトフェリン・ヨーグルトは、（対照方法と比較して）１〜２％の残余ラクトフェリン活性を有した。 対照的に、加圧処理により得られた残余ラクトフェリンは、８０％だった。 当該加圧処理されたヨーグルトを、４℃で１３０日間保存後、腐敗性微生物について分析した。 検出可能な大腸菌はなく、中温性胞子の６０のコロニーがあり、そして検出可能なブドウ球菌、酵母又はかびはなく、そして好気性抗菌数に関しておよそ１０のコロニーがあった。 対照的に、未処理の対照は、製造２１日以内に広範にわたり腐敗し、ガス生産及び悪臭の痕跡を伴った。

実施例１１：免疫グロブリンを含む飲料
免疫グロブリン（３％ＩｇＧ）を含む酸性飲料（ｐＨ４．０）を、図１０に示すように、コロストロム・ホエイ濃縮物から製造した。 当該飲料を、１０分間保持の８５℃で加熱処理、又は３分間保持の６００ＭＰａで加圧処理し、そして残余ＩｇＧを、未処理対照と比較して、ＨＰＬＣ−ＭＣ法により測定した。 結果を図１１に示す。 加熱処理により製造された飲料は、検出限界未満の残余ＩｇＧを有し、対照的に、加圧処理により製造された飲料は、対照と比較して〜９０％の残余ＩｇＧ（％）を保持した。 保持なしの５００ＭＰａで加圧処理された製品を、４℃で１３０日間保存した後、腐敗性微生物について分析した。 大腸菌は検出されず、中温性胞子の２つのコロニーが検出され、そしてブドウ球菌、酵母又はかびは検出されず、あるいは好気性生菌数に関するコロニーも検出されなかった。 対照的に、未処理対照製品は、製造後２１日未以内に広範にわたり腐敗し、ガス生産及び悪臭の痕跡を伴った。

実施例１２：ラクトフェリン含むゼリー
ｐＨ３．８でフルーツ風味のゼリー製品を、図１２に示すように、コロストロム・ホエイ濃縮物から製造した。 当該ゼリーを、３分間、６００ＭＰａで加圧処理し、そして残余ラクトフェリンを、未処理対照と比較して、ＢｉａＣｏｒｅ法により測定した。 結果を図１３に示す。 加熱処理により製造されたゼリーは、未処理の対照ゼリーと比較して９０％超の残余ラクトフェリンを有した。 当該製品を、冷蔵保存で１３０日間保存した後、腐敗性微生物について分析した。 大腸菌、中温性胞子、ブドウ球菌、酵母又はかびは検出されず、あるいは好気性生菌数に関するコロニーも検出されなかった。 対照的に、未処理対照製品は、製造後２１日未以内に広範にわたり腐敗し、ガス生産及び悪臭の痕跡を伴った。

実施例１３：プロバイオティック微生物の加圧処理
不活性化プロバイオティック細菌の製造
ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１（ＡＧＡＬ寄託番号ＮＭ９７／０９５１４、１９９７年８月１８日；Ｃｒｏｓｓら，２００２）の培養物を、１：１００接種から、３７℃で、１リットルの静的ＭＲＳブロス中で１８時間培養した。 当該培養物の成長後、別段の記述の無い限り、全ステップを氷上で実施した。 この培養物を、冷却した滅菌ＰＢＳでいったん洗浄し、そして最終総量１５０ｍｌで再懸濁し、およそ２×１０ ^１０ ｃｆｕ／ｍｌの推定濃度を得た。 次いで、これを、５０ｍｌのＳｔａｎｓｔｅｄ遠心チューブにおいて、５つの３０ｍｌ分割量に等分し、そしてそれらの内の３つを以下のように処理した。

熱不活性化ＨＮ００１
細胞の３０ｍｌ量を、７０℃で３０分間、ウォーターバス中にインキュベートし、次いで、氷中に移した。 次いで、これらの加熱処理された細胞の５００μｌ量を、ＰＢＳ中にさらに希釈し、１×１０ ^８ ｃｆｕ／ｍｌの推定濃度を得、そしてこの内の４００μｌ量を、Ｎａｌｇｅｎｅ低温バイアル中に分配し、液体窒素に放り込み凍結させ、そして−８０℃で、ＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイのために必要となるまで保存した。

生存ＨＮ００１
細胞の３０ｍｌ量を、加熱処理を受けないものを除いて、加熱処理された細胞として正確に処理した。

ＵＨＰ不活性化ＨＮ００１
細胞の３０ｍｌ等量を、Ｂｅｃｋｍａｎ遠心チューブにさらに等分し、封をし、そして３分間の保持時間の６００ＭＰａで加圧処理した。 処理後、当該加圧処理された細胞を、未使用のＳｔａｎｓｔｅｄ５０ｍｌ遠心チューブにため、混合した。 これらの細胞の５００μｌ量を、次いで、ＰＢＳ中にさらに希釈し、１×１０ ^８ ｃｆｕ／ｍｌの推定濃度を得、そしてこの内の４００μｌ量を、Ｎａｌｇｅｎｅ低温バイアル中に分配し、液体窒素に放り込み凍結させ、そして−８０℃で、ＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイのために必要となるまで保存した。

ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の製造
全血サンプルを、インフォームドコンセントを得た後、ボランティアから収集した。 血液を、抗凝血剤としてヘパリンを含むチューブ内に回収した。 ２０ｍｌ量を、滅菌５０ｍｌチューブに移し、そして滅菌ＰＢＳの３５ｍｌに希釈した。 希釈された血液を、約１５ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（ｄ＝１．０７７）と共におき、そして室温で、２０分間、１５００ｇで遠心した。 ＰＢＭＣを接触面から収穫し、一方、赤血球、及び好中球は、ペレットとして沈んだ。 回収されたＰＢＭＣをＰＢＳ中に少なくとも２倍に希釈し、次いで、遠心（４００ｇで５分間）によりペレットとした。 上清の吸引後、ＰＢＭＣを５０ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、カウントのために等分量を除去した。

細胞カウントに基づき、残りのＰＢＭＣをＲＰＭＩ１６４０／１０％ＦＣＳに希釈し、１×１０ ^６ ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度を得、そして当該細胞懸濁液の２ｍｌ量を、滅菌されたＦａｌｃｏｎ２０５４チューブに入れた。

細菌／ＰＢＭＣの共培養
製造された細菌調合液を解かし、そしてしっかりとボルテックスした。 細菌を、ＰＢＳ中に希釈し、当該ＰＢＭＣ培養物に２０μｌ量として添加し、１×１０ ^６ ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度又は不活性化細菌調合液としての１×１０ ^６不活性化ｃｆｕ／ｍｌの最終濃度を得た。 サイトカイン調合液に対する陽性対照として、１μｇ／ｍｌの細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）又は２５ｎｇ／ｍｌのホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）、及び１μｇ／ｍｌのイオノマイシンを、ＰＢＭＣに添加した。 陰性対照として、添加物のないＰＢＭＣのチューブとした。 全チューブを、３７℃で、２４時間インキュベートし、そして遠心によりその上清をとった。 上清を、少しの間−２０℃で保存し、その後、ＥＬＩＳＡによりサイトカインレベルの分析を実施した。

上清を、使用説明書に従って対応した捕捉及び検出抗体対（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を使用し、ＥＬＩＳＡによりインターフェロンγ（Ｉｆｎ−γ）、及びインターロイキン１０（ＩＬ−１０）のレベルについて評価した。 必要に応じて、上清を試薬希釈剤中に希釈し、特定のサイトカインのレベルをＥＬＩＳＡの標準曲線の検出範囲内にはいるようにした。

ＨＮ００１不活性化の評価
加熱処理又はＵＨＰ処理による不活性化の程度を測定するために、ＰＢＳに希釈する前に、未処理、及び処理されたＨＮ００１細胞に関してプレートカウントを実施した。 表７に示すように、ＵＨＰは、加熱処理よりも殺菌についてわずかにより効率的であることを示した。 それにもかかわらず、両方法は、出発培養物のものよりも少なくとも５ｌｏｇ低くなるように評価された培養可能細胞数と共に大量の殺菌率をもたらした。

不活性化ＨＮ００１に対するＰＢＭＣのサイトカイン反応
プロバイオティック生物活性のマーカーとして、上記のような生体外ＰＢＭＣによるＩＦＮ−γ、及びＩＬ−１０の産生を試験した。 ＰＢＭＣを健常者の一団（ｎ＝１３）から得られた末梢血サンプルから分離した、そしてＰＢＭＣの一定量を、生存細菌又は等量の死亡細菌との１：１の比率で共に培養した。 ２４時間後、培養物上清を除去し、そしてＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−γ、及びＩＬ−１０のレベルについて分析した。 各個体に交わる各処理の結果を、統計的に有意とみなされるｐ＜０．０５で、ＡＮＯＶＡ、及びＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ試験により多重比較について試験した。

Ｃｒｏｓｓら，２００２、及びその他による研究は、ＩＦＮ−γがプロバイオティック最近の生物活性の仲介において重要な役割を果たすことを示す。 図１４に示されるように、培地のみにおいて成長したＰＢＭＣは、２４時間後、ほとんど検出できないほどのＩＦＮ−γしか産生しない。 しかしながら、ＵＨＰ不活性化ＨＮ００１にさらされたＰＢＭＣは、培地のみのＰＢＭＣ（ｐ＝０．００６）又は熱不活性化ＨＮ００１と共培養されたＰＢＭＣ（ｐ＝０．０１３）よりも有意に多いＩＦＮ−γを産生した、しかし、生存ＨＮ００１と一緒に処理されたＰＢＭＣとしてのＩＦＮ−ガンマとは似たような結果だった（ｐ＝０．９１）。 培地のみ、及び加熱不活性ＨＮ００１処理と比較して、生存ＨＮ００１の反応において増大ＩＦＮ−γ産生の傾向があるけれども、当該結果は統計的に有意ではなかった（各々、ｐ＝０．２３、及びｐ＝０．４５）。

ＩＬ−１０は、ＴＨ１ Ｔ細胞の発達、及びＩＦＮ−γを含む多くのサイトカインの産生を阻害する抗炎症サイトカインと一般的に考えられている。 最近、ＩＬ−１０が、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を含む慢性炎症疾患を緩和することにおけるその潜在的な役割について多くの臨床研究の焦点となっている。 図１５に示されるように、培地のみにおいて「成長させたＰＢＭＣはほんの少量のＩＬ−１０しか産生しなかった。ＨＮ００１と共培養されたＰＢＭＣは、培地のみにおけるＰＢＭＣと比較して著しい増大されたＩＬ−１０産生を導く（ｐ＝０．０００１）。一方、熱不活性化ＨＮ００１の使用は、生存ＨＮ００１に関して統計的有意の境にある低減されたＩＬ−１０を導き（ｐ＝０．１２）、ＵＨＰ不活性化ＨＮ００１の使用は、培地のみのＰＢＭＣ（ｐ＜０．００００）と熱不活性化ＨＮ００１で培養されたＰＢＭＣ（ｐ＝０．００３）との両方より著しく高いＩＬ−１０レベルを導く、しかし、生存ＨＮ００１で培養されたＰＢＭＣとは似たようなレベルであった（ｐ＝０．９７）。従って、プロバイオティック因子は、加圧処理後、活性のままである。

モック処理のＵＨＰＨＮ００１（すなわち、増大した圧力にさらされることを除いてＵＨＰ処理されたＨＮ００１と同じように処理されたＨＮ００１細胞）は、生体外ＰＢＭＣによるサイトカイン産生を刺激する能力に関して、生存ＨＮ００１と著しい相違を示さなかった。

実施例１４：ＨＮ００１の不活性化に関するｐＨの効果
ＨＮ００１の２つの培養物を、１００接種材料の内１から１８時間、３７度で培養した。
一方の培養物を、ｐＨ５．０の酢酸・酢酸ナトリウム緩衝液（Ｐｅｒｒｉｉｉ＆Ｄｅｍｐｓｅｙ，１９７４によって製造された）でいったん洗浄し、次いで、１．６×１０ ^１１ ｃｆｕ／ｍｌの濃度と同等に再懸濁した。 他方を、ｐＨ５．０の酢酸・酢酸ナトリウム緩衝液に代えｐＨ７．４のＰＢＳを用いたことを除いて、同じように処理した。 各一連の細胞の１つの分量をＢｅｃｋｍａｎ遠心チューブに置き、封をし、そして３分間加圧処理し、４℃で一晩保存し、次いで不活性化の程度をプレートカウントにより測定した（表８）。

実施例１５：ＨＮ００１に関するＨＰＰ処理間のｐＨの効果
ＨＮ００１細菌細胞培養物を、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）又は酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）に各々再懸濁し、加圧処理（６００ＭＰａ／３分間）により不活性化させ、そして上記のように、ヒト生体外ＰＢＭＣによるＩＬ−１０産生を刺激する能力を測定することにより、生存、及び熱不活性化ＨＮ００１と生物活性について比較した。

図１６は、これらの個々の３つからの組み合わされた結果を示す。 ｐＨ７．４又はｐＨ５．０のいずれかでの加圧処理により不活性化されたＨＮ００１に反応して産生されるＩＬ−１０レベルは、生きているＨＮ００１について観察されるものと著しく異なっているわけではなかったが、加熱処理されたＨＮ００１についてのものとの比較では著しく高かった（各々、ｐ＝０．０４３、及びｐ＝０．０３７）。

実施例１６：リガンド結合による強化された生物活性保持力
ｐＨ６．８で、水中のホエイタンパク質濃度（ＷＰＣ）として、２％溶液（Ａｌａｃｅｎ ３４２，Ｆｏｎｔｅｒｒａ Ｃｏ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．）を製造した。 以下の疎水性リガンドを、（タンパク質に対して１：１モル比として）ＷＰＣ溶液に別々に添加した：共役リノール酸、ドデシル硫酸ナトリウム、レチノール、及びパルミチン酸。 次いで、これらの溶液を、１、２、３又は４分間保持される６００ＭＰａで各々加圧処理し、あるいは１、２、３又は４分間保持される９０℃で加熱処理した。 ＩｇＧ、ラクトフェリン、及び高分子量の凝集体のレベルを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で評価し、そして図１７において、未処理の対照溶液と、添加されたリガンドなしの２％ＷＰＣ溶液の両方を比較する。

バンドの強度は、溶液中に存在するタンパク質単量体の量を示す。 未処理対照サンプル（レーン１）において、（ｉ）の領域は高分子量凝集体であり、（ｉｉ）におけるバンドはＩｇＧであり、（ｉｉｉ）のバンドはラクトフェリンである。 加熱処理されたサンプル（上）において、ＩｇＧ、及びラクトフェリンのバンドの強度は、実質的に低減し、タンパク質の凝集、及び単量体タンパク質の損失を示す。 このことは、タンパク質の変性、及び凝集の結果である。 この凝集は、疎水性リガンドがあるか（Ｂ〜Ｅ）無いか（Ａ）に関係なく加熱処理サンプルに見られる。

対照的に、リガンドなしの加圧処理されたＷＰＣ溶液は、低減された強度（Ａ、レーン２〜５）を示し、一方様々な添加疎水性リガンドあり（Ｂ〜Ｅ）の加圧処理されたＷＰＣ溶液は、実質的により強い強度を示した。

生物活性含有溶液への疎水性リガンドの添加は、中性付近のｐＨでの加圧処理の後、生物活性の保持を強化する。

実施例１７
ＡＣＥ−Ｉ（アンジオテンシン転換酵素阻害剤）活性を有するホエイタンパク質加水分解物の溶液（６％ｗ／ｖ）を製造し、そしてｐＨ３．５、４．５又は７．０に調整した。 サンプルを加圧処理（６００ＭＰａで３分間又は６００ＭＰａで１０分間）、あるいは加熱処理（８５℃で１０分間、あるいは９０℃で１０分間）、そしてＡＣＥ−Ｉ活性、及び微生物含有量を、未処理対照と比較して評価した。 ＡＣＥ−Ｉ活性を、Ｄ． Ｗ． Ｃｕｓｈｍａｎ＆Ｈ． Ｓ． Ｃｈｅｕｎｇ（１９７１）の方法によって基質（製品３０５−１０ ｅｘ Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｐ，ＵＳＡ）としてＦＡＰＧＧを使用して測定した。

結果において、未処理対照と比較される加圧処理、及び加熱処理の両方について、大腸菌数、酵母菌及びかび、好気性生菌数、中温性胞子及び好熱性細菌数において３ｌｏｇ超の低減であった。 当該加圧処理、及び加熱処理されたサンプルのＡＣＥ−Ｉ活性は、未処理対照のＡＣＥ−Ｉ活性の＋／−２標準偏差以内であり、統計的相違ではなかった。

産業上の利用
本発明の方法は、存在し得る生物活性成分の効果を避け又は最小化しながら、食品産業、及び健康産業における使用を目的とした組成物における不要な微生物の成長を阻害するために使用され得る。

当業者は、上記記載が例示目的のみにより提供されるものであり、それにより本発明を限定するものではないことを理解するだろう。

図１は、６００ＭＰａ、３分間保持の加圧処理と比較した、８３．５℃、３分間保持の熱加工後、酸性乳飲料（ｐＨ３．５で３．６％タンパク質）中に残る免疫グロブリン画分（ＨＰＬＣにより測定されるように）を示したグラフである。

図２Ａは、６％ｗ／ｖのコロストロム・ホエイ組成物のＩｇＧ成分に関する、様々なｐＨでの加熱処理（８５℃／１０分間）、及び加圧処理（６００ＭＰａ／３分間保持）の効果を示すグラフである。

図２Ｂは、６％ｗ／ｖのコロストロム・ホエイＵＦリテンテート組成物（１０ｋＤａでの限外ろ過）のＩｇＧ成分に関する、様々なｐＨでの加熱処理（８５℃／１０分間）、及び加圧処理（６００ＭＰａ／３分間保持）の効果を示すグラフである。

図２Ｃは、６％ｗ／ｖのコロストロム脱脂粉乳組成物のＩｇＧ成分に関する、様々なｐＨでの加熱処理（８５℃／１０分間）、及び加圧処理（６００ＭＰａ／３分間保持）の効果を示すグラフである。

図２Ｄは、６％ｗ／ｖのコロストロムＭＰＣ組成物のＩｇＧ成分に関する、様々なｐＨでの加熱処理（８５℃／１０分間）、及び加圧処理（６００ＭＰａ／３分間保持）の効果を示すグラフである。

図３Ａは、７％ｗ／ｖのＨＩ−ＭＰＣ組成物の加圧処理（６００ＭＰａ／保持なし、及び６００ＭＰａ／３分間）サンプル、及び加熱処理（８５℃／１０分間）サンプルにおける残余ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びラクトフェリン（ＬＦ）の値（％）を示すグラフである。 結果を、未処理の対照のＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びラクトフェリンの値のパーセンテージとして示す。

図３Ｂは、７％ｗ／ｖのＨＩ−ＷＰＣ組成物の加圧処理（６００ＭＰａ／保持なし、及び６００ＭＰａ／３分間）サンプル、及び加熱処理（８５℃／１０分間）サンプルにおける残余ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びラクトフェリン（ＬＦ）の値（％）を示すグラフである。 結果を、未処理の対照のＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、及びラクトフェリンの値のパーセンテージとして示す。

図４Ａは、７％ｗ／ｖのＷＰＣ組成物の未処理、加圧処理（６００ＭＰａ／３分間）、及び熱処理（７５℃／５分間）のサンプルにおける残余ＩｇＧの値を示すグラフである。

図４Ｂは、７％ｗ／ｖのＷＰＣ組成物の未処理、加圧処理（６００ＭＰａ／３分間）、及び熱処理（７５℃／５分間）のサンプルにおける残余ラクトフェリン（ＬＦ）の値を示すグラフである。

図５は、以下のように加圧処理された６％ｗ／ｖのラクトフェリン溶液のサンプル中の残余ＬＦの値を示すグラフである：（１）対照、（２）６００ＭＰａ／５分間、（３）６００ＭＰａ／１５分間、（４）６００ＭＰａ／３０分間、（５）６００ＭＰａ／４５分間、（６）７５℃／５分間、（７）８５℃／５分間、及び（８）９０℃／５分間。

図６は、以下のように、様々なｐＨで加圧又は加熱処理した６％ｗ／ｖのラクトフェリン溶液のサンプル中の残余ＬＦの値（％）を示したグラフである：６００ＭＰａ／５分間、６００ＭＰａ／１５分間、６００ＭＰａ／３０分間、６００ＭＰａ／４５分間又は８５℃／５分間。 結果は、未処理の対照サンプルにおけるラクトフェリンの値のパーセンテージとして示される。

図７Ａは、ＨＩ−ＷＰＣの７％溶液ｗ／ｖの加熱処理又は加圧処理されたサンプルの残余増殖因子（ＴＧＦベータ１）の値を示すグラフである。

図７Ｂは、ＨＩ−ＷＰＣの７％溶液ｗ／ｖの加熱処理又は加圧処理されたサンプルの残余増殖因子（ＴＧＦベータ２）の値を示すグラフである。

図８は、対照ＬＦヨーグルト、加熱処理ＬＦヨーグルト、及びＨＰＰ処理ＬＦヨーグルトの製造を簡略化したフローチャートである。

図９は、対照、加熱処理された、及びＨＰＰ処理されたＬＦヨーグルトにおける残余ＬＦの値を示すグラフである。

図１０は、標準的（加熱処理された）酸性飲料、未処理（対照）の酸性飲料、及びＨＰＰ処理された酸性飲料の製造を簡略化したフローチャートである。

図１１は、対照である酸性飲料、加熱処理された酸性飲料、及びＨＰＰ処理された酸性飲料における残余ＩｇＧの値を示すグラフである。

図１２は、対照（未処理）となるＬＦゼリー、及びＨＰＰ処理されたゼリーを簡略化したフローチャートである。

図１３は、対照、及びＨＰＰ処理されたＬＦゼリーにおける残余ＬＦの値を示すグラフである。

図１４は、ラクトバシラス・ラムノサスＨＮ００１（Ｈ００１）処理に対する応答におけるヒト生体外ＰＢＭＣによるＩＦＮγ製造を示す箱ひげ図である、ここで各箱は中央値（水平線）の上下四分位を示し、縦線は全範囲を示し、そしてアスタリスクは異常結果を示し、そして結果を、ＨＮ００１なしで培養されたＰＢＭＣ（培地のみ）、生きているＨＮ００１と共に培養されたＰＢＭＣ（ＨＮ００１生存）、加熱不活性ＨＮ００１と共に培養されたＰＢＭＣ（ＨＮ００１加熱）又はＵＨＰ不活性ＨＮ００１と共に培養されたＰＢＭＣ（ＨＮ００１ＵＨＰ）について示す。

図１５は、ＨＮ００１処理に対する応答におけるヒト生体外ＰＢＭＣによるＩＬ−１０製造を示す箱ひげ図である。

図１６は、生存ＨＮ００１（生存）又は加熱不活性ＨＮ００１（加熱）と比較される、ｐＨ７．４、ＰＢＳバッファー（ＵＨＰ−ｐＨ７．４）における、あるいはｐＨ５．０、酢酸バッファー（ＵＨＰ−ｐＨ５．０）における、ＵＨＰ（６００ＭＰａ／３分間）により不活性化されたＨＮ００１処理に対する応答におけるヒト生体外ＰＢＭＣによるＩＬ−１０製造を示す箱ひげ図である。

図１７は、疎水性リガンドが追加された、加熱処理（９０℃／１〜４分間、上の列）又は加圧処理された（６００ＭＰａ／１〜４分間、下の列）７％ｗ／ｖのＷＰＣサンプルのＰＡＧＥゲルの１０枚の写真である。 各ゲルにおいて、各レーンは以下の処理時間に対応する：レーン１：未処理の対照；レーン２：１分間；レーン３：２分間；レーン４：３分間；レーン５：４分間。 高分子量集合体は（ｉ）で示され、ＩｇＧは（ｉｉ）で、及びラクトフェリンは（ｉｉｉ）である。