Growth promotion for food composition comprising a whey separation fraction from colostrum or milk of mammals

本発明は哺乳動物の初乳又は乳汁由来の乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物に関する。 より具体的には本発明は哺乳動物の初乳又は乳汁由来の乳清から分離され、α−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが除去された１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有する、乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物、前記食品組成物を、それらを必要とする哺乳動物に投与することを含む、成長促進方法及び前記成長促進用食品組成物を製造する為の乳清分離分画の用途に関するものである。

最近の社会は持続的な経済成長と食習慣の西欧化、栄養状態の改善等により、小児及び青少年の成長発育が大きく増加する趨勢である。 さらに、マスメディアを通じて背丈の高いことを選好する社会的雰囲気が形成されることにより、大部分の人達が成長に多くの関心を有している。

成長とは、人間の身体を成している細胞の数が増加し、細胞の大きさが大きくなりながら背丈が高くなることをいう。 背丈が高くなるというのは小児及び青少年期にのみ存在する特別な組織である成長板内造骨細胞等の爆発的な分化、発達及び増殖による結果として、骨が伸び骨の周囲に筋肉が発達することをいう。 特に、このような過程は成長ホルモンの作用により起る。

一方、今まで成長を促進する為の方法としては、成長ホルモン製剤投与法、イリジャノフ手術法及び健康補助食品服用法等が利用されてきた。 しかしながら、前記成長ホルモン製剤投与法は、成長ホルモンが不足する人の場合には優れた効果を呈するものの、ホルモン分泌が正常な大多数の人達には末端肥大症、成長ホルモン抗体形成、全身性アレルギー反応、甲状腺機能低下症等の多くの副作用を引起こす問題点がある。 さらに、イリジャノフ手術は、足の骨を切断して延ばす手術であり、患者の苦痛及び費用の面で一般人に適用するには多くの無理があり、成長促進用健康補助食品は科学的に検証されていない場合が大部分である。

乳清は哺乳動物の乳汁より分離されるものであり、主に、チーズやカゼイン製造の際収得される液状の副産物である。 一般的に、チーズ製造の際原料乳の８５〜９０％が乳清として収得されることが知られている。 前記乳清は乳加工業、特に、チーズ工業の発達により年々その生産量が漸次増加しているものの、一部が飼料として利用されるのみで産業的に活用度が微々たるもので、大部分が廃棄されているのが実情である。 最近に至り乳清に蛋白質、乳糖、無機質及び水溶性ビタミンのような有用な成分等が含まれていることが知られるようになり、それを利用する為の多様な研究が進められている。 つまり、乳清を含む飲料を製造したり、又は乳清チーズ、乳清バター、乳清粉末及び濃縮乳清等に製造して、製菓原料や発酵工業原料に利用しようとする研究がなされている。

しかしながら、このような努力にも拘らず前記乳清は加工に対する限界により、大部分が廃棄されているのが実情である。

発明の詳細な説明 ここに、本発明者等は副作用がなく成長を効果的に促進し得る活性を有する食品を開発する為に長年研究した結果、哺乳動物の初乳又は乳汁由来の乳清から分離した、１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有する乳清分離分画が成長を促進させる活性を有することを確認することにより、本発明を完成した。

従って、本発明の目的は哺乳動物の乳清から分離された乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物を提供することである。

さらに、本発明の他の目的は前記食品組成物を、それらを必要とする哺乳動物に投与することを含む成長促進方法を提供することである。

さらに、本発明の他の目的は前記成長促進用食品組成物を製造する為の、乳清分離分画の用途を提供することである。

前記のような本発明の目的を達成する為に、本発明は哺乳動物の乳清から分離された乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物を提供する。

さらに、本発明は前記食品組成物を、それらを必要とする哺乳動物に投与することを含む成長促進方法を提供する。

さらに、本発明は前記成長促進用食品組成物を製造する為の、乳清分離分画の用途を提供する。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明による食品組成物に含まれる乳清分離分画は、哺乳動物の乳清から分離されたものであって、α−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが除去され、１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有することを特徴とする。

好ましくは、本発明の組成物に含まれる乳清分離分画は、（ａ）哺乳動物の乳汁から脂肪とカゼインを除去して乳清を収得する段階；
（ｂ）前記（ａ）段階の乳清からα−ラクトアルブミンとβ−ラクトグロブリンを除去する段階；及び （ｃ）前記（ｂ）段階のα−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが除去された乳清から、１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有する分画を分離して収得する段階を含む方法により製造できる。

前記（ａ）段階における哺乳動物とは、乳汁を分泌する全ての動物を意味し、例えば、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ヒト等が含まれる。 本発明では特にウシが好ましい。

さらに、前記（ａ）段階における乳汁は初乳が好ましい。 前記初乳は哺乳動物が分娩後３日までの母体の乳腺を通じて分泌される乳汁成分をいう。

さらに、前記（ａ）段階は（ｉ）哺乳動物の乳汁を遠心分離してクリーム層を除去することにより、脱脂乳を収得する段階；及び （ｉｉ）前記（ｉ）段階の脱脂乳のｐＨを４〜５に調整してカゼインを凝固させ、遠心分離して上澄液を収得する段階でなされたものが好ましい。

前記（ｂ）段階でのα−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンの除去は、当業界で公知の蛋白質の分離方法、好ましくは、蛋白質の等電点を利用した分離方法を利用して実施し得る。 前記蛋白質の等電点を利用した分離方法としては、電気泳動法、塩析法及びイオン交換クロマトグラフィー法等がある。

前記電気泳動法は蛋白質分子の電荷を利用した分離・分析法である。 蛋白質分子は一般的に、等電点以外のｐＨではプラス又はマイナスの電荷を有していて、一定したｐＨの緩衝液の中で直流電流を印加すると陽極又は陰極方向に移動する。 つまり、前記電気泳動法はこのような原理を利用して、蛋白質分子の電荷量及び分子の大きさにより電場の中で移動する速度が異なる点を利用して、分離・分析する方法である。

前記塩析法は水に溶解し易い塩（硫酸アンモニウム等）を蛋白質混合液に加えて、イオン強度を増加させることにより蛋白質を沈澱させて分離する方法である。

前記イオン交換クロマトグラフィーは蛋白質が適当なｐＨ条件下ではプラス又はマイナスの電荷を有する特徴を利用して、カラムに高分子電解質を充填剤として入れ、各種蛋白質の電荷量と充填剤とのイオン相互作用の差により、蛋白質を分画する方法である。

好ましくは、前記（ｂ）段階でのα−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンの除去は、塩析法を利用して行うことができ、より好ましくは、（ｉ）前記（ａ）段階の脂肪とカゼインが除去された乳清のｐＨを５．０〜７．０に調整し、前記ｐＨを再度２．５〜４．２に調整することにより、α−ラクトアルブミンを沈澱させ、上澄液を収得する段階；及び （ｉｉ）前記（ｉ）段階で収得した上澄液のｐＨを４．５〜７．０に調整し、β−ラクトグロブリンを沈澱させ、上澄液を収得する段階でなされた塩析法により行われる。

前記にてｐＨの調整は、塩基性化合物又は酸性化合物を添加することにより行われる。 塩基性化合物としては、これに限定はされないものの、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムからなる群より選ばれたものを使用できる。 酸性化合物としてはこれに限定はされないものの、クエン酸、塩酸、硫酸及び硝酸からなる群より選ばれたものが使用できる。

上述した塩析法により、乳清分離分画を製造する場合、乳汁の中に一般的に、モノマーの形態で存在していたα−ラクトアルブミンとβ−ラクトグロブリンが重合体の形態に転換され、沈澱が形成されることにより乳清からα−ラクトアルブミンとβ−ラクトグロブリンを容易に除去できるようになる。

前記（ｃ）段階で１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有する乳清分離分画の分離は、当業界で公知の蛋白質の分子量の大きさによる分離方法を利用することができ、好ましくは、限外濾過又はゲル濾過方法を利用することもできる。

さらには、本発明の組成物に含まれる乳清分離分画は、前記（ｃ）段階で収得した分画を乾燥して粉末化する段階を追加して行うことにより収得されるものでもあり得る。 前記乾燥方法としては当業界で公知の方法を利用することができ、好ましくは、噴霧乾燥、熱風乾燥及び凍結乾燥からなる群より選ばれた方法が利用できる。

前記のような方法により製造された乳清分離分画は、成長を促進させる活性がある。 より具体的には前記乳清分離分画は体重を増加させ、大腿骨の長さを伸長させ、血清内のインシュリン様成長因子−I及び成長ホルモンの生成を促進する活性がある。

前記インシュリン様成長因子（Iｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ；IＧＦ）は成長を促進する作用を有するペプチドであり、大別してIＧＦ−IとIＧＦ−IIの２つの群に分類される。 前記IＧＦ−Iは７０個のアミノ酸からなるポリペプチドホルモンであり、ヒトの血漿に存在して成長ホルモンの成長促進作用を媒介する。 前記IＧＦ−Iは特に出生後の成長に重要な役割を担っている。 IＧＦ−IIは６７個のアミノ酸からなるポリペプチドホルモンであり、長期的には分裂促進効果を有し、短期的には代謝促進効果を有している。

前記成長ホルモン（Ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ）は、脳の脳下垂体前葉において分泌されるホルモンであり、血液中に少量含有されながら肝臓において成長を促す因子に転換される。 このような成長ホルモンは、骨の先で成長板の軟骨細胞分化を刺戟して、直接的に骨の成長を促進するのみならず、肝臓及び腎臓等に作用してインシュリン様成長因子等の生成を促進することにより、蛋白質の吸収を促進して筋肉を成長させ、軟骨細胞の増殖を刺激して骨の成長を促す。

本発明の一実験例では、一般食餌又は本発明の乳清分離分画が濃度別に含まれた実験食餌を成長期の白鼠に摂取させた後、体重（実験例＜１−２＞参照）及び大腿骨の長さの変化を測定した（実験例＜１−３＞参照）。 その結果、本発明に伴う乳清分離分画を含む実験食餌を摂取させた白鼠の場合、一般食餌を摂取させた対照群に比べて体重が増加し（表２参照）、大腿骨の長さが伸長することが示された（表３及び図１参照）。

さらには、本発明の他の実験例では一般食餌又は本発明の乳清分離分画が濃度別に含まれた実験食餌を成長期の白鼠に摂取させ、血清内IＧＦ−I（実験例＜１−４＞参照）及び成長ホルモンの濃度を測定した（実験例＜１−５＞参照）。 その結果、本発明に伴う乳清分離分画を含む実験食餌を摂取させた白鼠の場合、一般食餌を摂取させた対照群に比べて血清内IＧＦ−I濃度（表４及び図２参照）及び成長ホルモン濃度が増加したことが示された（表５及び図３参照）。

前記実験結果から本発明者等は本発明の乳清分離分画が成長を促進する活性を有することを確認できた。

従って、本発明は前記乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物を提供する。 好ましくは、本発明の食品組成物は成長期の幼小児及び青少年の成長及び骨格形成促進に効果的である。

前記本発明の食品組成物は機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ ｆｏｏｄ）及び食品添加剤（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）等の全ての形態を含む。 前記類型の食品組成物は当業界で公知の通常的な方法により多様な形態で製造できる。

例えば、健康食品としては本発明の乳清分離分画自体を、お茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用に供するか、又はペースト化、顆粒化、カプセル化、錠剤化及び粉末化して摂取することができる。

さらに、前記乳清分離分画は粉末又は濃縮液形態で製造して、幼小児及び青少年の成長促進を目的とする食品に添加できる。 例えば、飲料、果実及びその加工食品（例：果物缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレード等）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コーンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用植物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：味噌、醤油、ソース等）等に添加できる。

本発明の食品組成物の内、乳清分離分画の含量は特に制限されるものではないものの、食品全体の重量を基準に０．０１〜９０％、好ましくは、０．１〜５０％の比率で含まれ得る。 さらには、本発明の食品組成物は乳清分離分画成分以外に、微量のミネラル、ビタミン、脂質、糖類及び公知の成長促進活性を有する成分等を追加して含め得る。

前記ミネラルはカルシウム、鉄等成長期に必要とする栄養成分が含まれ、ビタミンとしてはビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ _１ 、ビタミンＢ _２ 、ビタミンＢ _６等が含められる。 脂質としてはアルコキシグリセロール又はレシチン等が含められ、糖類としては、プラクトオリゴ糖等が含まれる。

好ましくは、本発明の食品組成物は本発明の乳清分離分画０．１〜５０重量％、食用乳清カルシウム０．５〜６０重量％、アルコキシグリセロール粉末０．０１〜３０重量％、レシチン粉末０．１〜８０重量％、乳蛋白加水分解物粉末０．０１〜３５重量％、クロレラ抽出物粉末０．０１〜２０重量％、フラクトオリゴ糖０．１〜５０重量％、ヘム鉄０．０１〜３５重量％、ビタミン類０．００１〜２０重量％及び乳糖０．１〜９９重量％からなる。

前記食用乳清カルシウムは牛乳乳清の内、主に無機質成分を濃縮したものにして、カルシウムの他にも水溶性ビタミン類や、非蛋白質形態の窒素化合物を含み、カルシウム供給と共に有用な微量栄養成分を提供する。

前記アルコキシグリセロール粉末は、鮫の肝油から抽出して製造されたものであり、ヒトの骨髄細胞を刺激して白血球、血小板等ヒトの免疫因子の生成を促進させる生体防御因子である。

前記レシチン粉末は複合脂質の一種であるリン脂質の主成分であり、大豆や卵黄から分離して製造されたものである。 前記レシチンはコレステロールの主な機能である体内細胞膜を構成し、細胞信号伝達体系で重要な役割をする中性脂肪と共に、体内で最も多く使用される重要脂肪成分である。

前記乳蛋白加水分解物粉末は乳蛋白を酵素又は酸で加水分解し、食用に適するように加工したものであり、カルシウムの体内吸収を促進する、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）が含まれている。 従って、本発明の組成物に前記乳蛋白加水分解物を添加して、本発明の乳清分離分画の成長促進効果が相乗作用を表すようにすることができる。

前記クロレラ抽出物粉末はクロレラを熱水抽出後遠心分離して、食餌繊維等のようなクロレラ菌体の不溶性物質を除去して有用物質である蛋白質、アミノ酸、糖類、水溶性ビタミン、無機塩類、核酸関連物質等を抽出して濃縮したものである。 特に、前記クロレラ抽出物には、小児の成長促進効果を有するＣＧＦという成長因子が含まれている。

前記ヘム鉄は、ウシ、ブタの血液を酵素等で処理して分離した、ヘム蛋白部分を食用に適するように精製して鉄分強化の目的で使用されるものである。

前記ビタミン類はビタミンＣ、ビタミンＥ、ニコチン酸アミド、ビタミンＡ、ビタミンＢ _１ 、ビタミンＢ _６ 、及びビオチンからなされたものであることもあり得、前記ビタミン類等は全てカルシウムの吸収を促進させる作用をする。

前記乳糖は、脱脂牛乳又は乳清から炭水化物成分のみを分離して粉末化したものをいう。

さらに、本発明は前記乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物、又は乳清分離分画成分以外に微量のミネラル、ビタミン、脂質、糖類及び公知の成長促進活性を有する成分等を追加して含む食品組成物を、それらを必要とする哺乳動物に有効量で投与することを含む成長促進方法を提供する。

好ましくは、前記成長促進は体重増加、骨の長さの増加、内在性IＧＦ−I水準の増加及び内在性成長ホルモン水準の増加によるものであることを特徴とする。

前記にて哺乳動物としては特に限定はされないものの、例えば、ヒト、ウシ、ウマ、ブタ、齧歯類、ヤギ等が挙げられる。 好ましくは、前記哺乳動物はヒトである場合もあり得て、より好ましくは、成長期の健康な幼小児及び青少年の場合もあり得る。

前記有効量とは哺乳動物の成長が促進できる程度の量をいい、好ましくは、０．１ｍｇ／体重ｋｇ／ｄａｙ〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ／ｄａｙの場合もあり得る。
さらに、前記にて投与は経口投与が好ましい。

さらに、本発明は上述した成長促進用食品組成物を製造する為の哺乳動物の乳清から分離され、α−ラクトアルブミン及びβ−ラクトグロブリンが除去された１ＫＤ〜３０ＫＤの分子量を有する乳清分離分画の用途を提供する。
前記乳清分離分画は前記に記載されたような方法で製造することができる。

以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
但し、下記実施例は本発明を例示するものにして、本発明の内容がこれに限定されるものではない。

＜実施例１＞
本発明の乳清分離分画の製造 分娩後４８時間の間分泌されるウシの初乳を収集後遠心分離して、クリーム層を除去することにより、脂肪が除去された脱脂初乳を製造した。 前記脱脂初乳に１Ｎ塩酸を添加してｐＨを４．６に調整することにより、カゼインを凝固させ、遠心分離して上澄液である初乳乳清を収得した。 分離された乳清に１．５Ｍクエン酸三ナトリウム（ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ ｃｉｔｒａｔｅ）を添加してｐＨを５．５に調整し、さらに、１．５Ｍクエン酸（ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）を添加してｐＨを３．９に調整して、３５℃で１５０分間加熱し、α−ラクトアルブミンを沈澱させた。 これを遠心分離してα−ラクトアルブミンを除去して上澄液を回収した。 上澄液に１Ｎ ＮａＯＨを添加してｐＨ４．５に調整することにより、β−ラクトグロブリンを沈澱させ遠心分離して上澄液を収得した。 収得した上澄液を３０ＫＤ限外濾過膜を通過させ、濾過液を得た後前記濾過液を再度１ＫＤ限外濾過膜を通過させて残留物を得た。 前記残留物を凍結乾燥して粉末状態の１ＫＤ乃至３０ＫＤの分子量を有する乳清分離分画を収得した。

＜実験例１＞
動物モデルを利用した乳清分離分画の成長促進効果調査 ＜１−１＞乳清分離分画の供給 成長期のＳＤ（Ｓｐａｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）雄白鼠（３週齢、体重５０〜６５ｇ）２８匹を１週間の間適応させ、７匹ずつ４グループに分けて実験に使用した。 実験の際、飼育条件としては、温度２３±１℃、湿度４０〜６０％及び明暗周期を１２時間とした。 適応期間である１週間は一般食餌と水を制限なく供給し、実験期間である６週間は各実験群別に製造された食餌を水と共に制限なく供給した。

対照群には、食餌内蛋白質が２０重量％含まれた一般食餌を供給し、蛋白質供給源としてはカゼインを用いた。 実験群には食餌内総蛋白質含量が２０重量％になるように、実施例１の乳清分離分画とカゼインを混合して供給した。 つまり、一般食餌に蛋白質供給源として乳清分離分画０．０５重量％とカゼイン１９．９５重量％（実験群１）、乳清分離分画０．５重量％とカゼイン１９．５重量％（実験群２）及び乳清分離分画５重量％とカゼイン１５重量％（実験群３）をそれぞれ混合して供給した（表１参照）。

２）３１００２５ ＡIＮ−ＶＸ ビタミンミキス（ｖｉｔａｍｉｎ ｍｉｘ）

＜１−２＞乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の体重変化 実験例＜１−１＞の各グループの食餌投与前体重と６週間食餌投与後、体重を測定した。 測定値は統計処理して平均値と標準偏差を計算し、測定された体重から下記式を利用して体重増加量を計算した。
平均体重増加量＝（実験完了時最終平均体重−実験開始時平均体重）
対照群と各実験群間の有意性検定はスチューデントＴ−テスト（Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ−ｔｅｓｔ）を利用して統計処理した後、信頼区間（Ｐ ｖａｌｕｅ）が０．０５より小さい場合、統計学的に有意な意味があるものと判定した。

実験結果は、本発明の乳清分離分画を摂取させた実験群の場合、対照群に比べて全て体重が増加していた。 特に、乳清分離分画を５重量％含有した食餌を摂取させた実験群３の場合、対照群に比べて体重が有意に増加していた（表２参照）。

＊＊Ｐ＜０．０１において有意な差がある。

＜１−３＞乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の大腿骨の長さの変化測定 前記実施例＜１−１＞で６週間の実験が完了した後、本発明の分離分画を摂取させた実験群及び対照群の左右大腿骨を摘出して、骨組織に付着している筋肉、脂肪、靭帯等を全て除去し、７５℃の乾燥天火で３時間乾燥した後大腿骨の長さを測定した。

実験結果は、本発明の乳清分離分画を摂取させた実験群の場合、対照群に比べて摂取容量に依存的に大腿骨の長さが増加していた。 特に、乳清分離分画０．５重量％と５重量％をそれぞれ含有した食餌を摂取させた実験群２及び実験群３の場合、実験動物の大腿骨の長さが対照群に比べて有意に増加していた（表３及び図１参照）。

＊ Ｐ＜０．０５において有意な差がある。

＊＊ Ｐ＜０．０１において有意な差がある。

＜１−４＞乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の血清内IＧＦ−I濃度測定 本発明の乳清分離分画がIＧＦ−Iの分泌を促進し、成長を促進させる効果があるか否かを確認する為に、前記実験例＜１−１＞において６週間の実験を完了した対照群及び実験群の血液を採取し、ＯＣＴＥIＡ Ｒａｔ IＧＦ−１キット（IＤＳ Ｃｏ．， ＵＳＡ）を使用して血清内IＧＦ−Iの濃度を測定した。

つまり、試験管に血清２５μＬと放出試薬（Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ）１００μＬを入れ、１８〜２８℃で１０分間反応させ、０．０５％アジ化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ）を含むＰＢＳ（ｐｈｏｓｐａｈｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）１ｍＬを入れて混合した。 次に、９６ウェルマイクロプレートに前記混合物を２５μＬずつ入れて、抗ラットIＧＦ−１ビオチン（Ａｎｔｉ−ｒａｔ IＧＦ−１ Ｂｉｏｔｉｎ）１００μＬを添加し、１８〜２８℃で２時間マイクロプレート撹拌器（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｓｈａｋｅｒ，５００−７００ｒｐｍ）で反応させた。 反応が完了した後、各ウェルを３回洗浄後酵素コンジュゲート（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）２００μＬを添加し、１８〜２８℃で３０分間反応させて３回洗浄した。 ここに、基質としてＴＭＢ（ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉ ｄｉｎｅ）２００μＬを添加し、１８〜２８℃で３０分間反応させてＨＣｌ １００μＬを添加して反応を停止させ、マイクロプレートリーダー（ＥＬｘ８００， Ｂｉｏ−ｔｅｃ， ＵＳＡ）を利用して４５０ｎｍで吸光度を測定した。

実験結果は、血清内IＧＦ−Iの濃度は、本発明の乳清分離分画を摂取させた実験群の場合、対照群に比べて摂取容量に依存的に増加した。 特に、乳清分離分画を０．５重量％及び５重量％の濃度で摂取させた実験群２及び実験群３の場合、血清内IＧＦ−Iの濃度が対照群に比べて有意に高く表れた（表４及び図２参照）。

＊ Ｐ＜０．０５において有意な差がある。

＊＊ Ｐ＜０．０１において有意な差がある。

＜１−５＞乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の血清内成長ホルモン濃度測定 本発明の乳清分離分画が成長ホルモンの分泌を促進して成長を促進させる効果があるか否かを確認する為、前記実験例＜１−１＞で６週間の実験を完了した実験群及び対照群の血液を採取し、ＤＳＬ−１９００ ＡＣＴIＶＥキット（ＤＳＬ Ｃｏ．，ＵＳＡ）を利用して血清内成長ホルモン濃度をIＲＭＡ（ｉｍｍｕｎｏ ｒａｄｉｏ ｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ）法で測定した。

つまり、血清５０μＬを抗体がコーティングされたチューブに入れ、抗−ｈＧＨ２００μＬを添加した。 引続きチューブをカバーで覆い、室温で４時間、マイクロプレート撹拌器（１８０ｒｐｍ）で反応させ、上澄液を除去して蒸留水を利用して３回洗浄した。 その後γ−カウンター（ＣＯＢＲＡ５０１０、ＰＡＣＫＡＲＤ、ＵＳＡ）を利用して１分間血清内成長ホルモンの濃度を測定した。

実験結果は、血清内成長ホルモンの濃度は本発明の乳清分離分画を摂取させた実験群の場合、対照群に比べて摂取容量に依存的に増加していた。 特に、乳清分離分画を５重量％の量で摂取させた実験群３の場合、血清内成長ホルモンの濃度が対照群と比べて有意に高く表れた（表５及び図３参照）。

＊＊ Ｐ＜０．０１において有意な差がある。

＜実施例２＞
乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物の製造 実施例１で製造した乳清分離分画を含む成長促進用食品組成物を、下記表６のような組成比で配合して通常の方法により打錠及びコーティングして錠剤に製造した。

上述した通り、本発明の乳清分離分画は体重を増加させ、大腿骨の長さを伸長させ、インシュリン様成長因子−I及び成長ホルモンの生成を促進させる活性を有している。 従って、前記乳清分離分画を含む食品組成物は成長期の幼小児及び青少年の成長を促進し得る。

図１は本発明の乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の大腿骨の平均長さを測定した結果である。 実験群１：乳清分離分画０．０５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群２：乳清分離分画０．５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群３：乳清分離分画５重量％を含む食餌を摂取させた群

図２は本発明の乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の血清内IＧＦ−Iの濃度を測定した結果である。 実験群１：乳清分離分画０．０５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群２：乳清分離分画０．５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群３：乳清分離分画５重量％を含む食餌を摂取させた群

図３は本発明の乳清分離分画の摂取に伴う実験動物の血清内成長ホルモンの濃度を測定した結果である。 実験群１：乳清分離分画０．０５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群２：乳清分離分画０．５重量％を含む食餌を摂取させた群 実験群３：乳清分離分画５重量％を含む食餌を摂取させた群