P38 kinase inhibitor |
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| 申请号 | JP2009522869 | 申请日 | 2007-08-01 | 公开(公告)号 | JP2009545598A | 公开(公告)日 | 2009-12-24 |
| 申请人 | プリーシス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドPraecis Pharmaceuticals,Inc.; | 发明人 | マシュー・クラーク; | ||||
| 摘要 | 式（Ｉ）および（ＩＩ）で示される化合物、ならびにそれらの同定方法、それらの製造方法、それらを含有する医薬組成物、および疾患の治療におけるそれらの使用が開示される。 該化合物は、ｐ３８キナーゼの阻害によりＴＮＦ−αおよびインターロイキン（ＩＬ）の生産を阻害する。 それらは、 炎症 および関節炎の治療に有用である。 | ||||||
| 权利要求 | 式Ｉ： Ｚ 1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく；. Ｒ 1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； Ｒ 2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； Ｒ 3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく； Ｒ 4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり； Ｒ 4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）； Ｒ 5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり； Ｒ 6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、 −ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく； Ｒ 7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルである］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩。 式ＩＩ： Ｚ 1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく； Ｒ 1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； Ｒ 2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； Ｒ 3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく； Ｒ 4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり； Ｒ 4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）； Ｒ 5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり； Ｒ 6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、 −ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく； Ｒ 7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルであり； Ｒ 8は、水素、ハロゲン、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルおよび(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシから選択される］ で示される化合物またはその医薬上許容される塩。 Ｒ 1が、１個または２個のアミノ、ハロゲンまたはアルコキシで置換されていてもよいメチルからなる群から選択される、請求項１または２記載の化合物。 Ｒ 2が水素またはメチルである、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物。 Ｒ 3が、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＮＨ 2 、−ＮＨＭｅ、−ＮＭｅ 2および−ＮＨ−ＯＭｅからなる群から選択される、請求項１〜５いずれか１項記載の化合物。 Ｒ 5が、水素、メチルおよびシクロヘキシルからなる群から選択される、請求項１〜６いずれか１項記載の化合物。 Ｒ 6が、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノおよびメチルからなる群から選択される、請求項１〜７いずれか１項記載の化合物。 Ｒ 7が、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロおよびヒドロキシルからなる群から選択される、請求項１〜８いずれか１項記載の化合物。 式ＩＩ−１： 式ＩＩ−２： 式ＩＩ−３： 請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。 対象体または生物学的試料中におけるｐ３８キナーゼ活性の阻害方法であって、請求項１４記載の組成物または請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物を該対象体に投与して、または、該生物学的試料に接触させて、結果としてｐ３８キナーゼ活性が阻害されることを含む方法。 対象体における炎症の治療方法であって、該対象体に請求項１４記載の組成物または請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物の有効量を投与して、結果として炎症が治療されることを含む方法。 対象体における関節炎の治療方法であって、該対象体に請求項１４記載の組成物または請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物の有効量を投与して、結果として関節炎が治療されることを含む方法。 ｐ３８媒介状態の治療を必要とする対象体におけるｐ３８媒介状態を治療するための薬剤の製造のための請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物または請求項１４記載の組成物の使用。 炎症の治療を必要とする対象体における炎症を治療するための薬剤の製造のための請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物または請求項１４記載の組成物の使用。 関節炎の治療を必要とする対象体における関節炎を治療するための薬剤の製造のための請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物または請求項１４記載の組成物の使用。 治療における請求項１４記載の組成物または請求項１〜１３いずれか１項記載の化合物の使用。 |
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| 说明书全文 | （関連出願） マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰ）は、二重リン酸化によってそれらの基質を活性化するプロリン指向性セリン／スレオニンキナーゼのファミリーを形成する。 該キナーゼは、栄養的および浸透圧的ストレス、ＵＶ光、成長因子、エンドトキシンおよび炎症性サイトカインを含む様々なシグナルによって活性化される。 ＭＡＰキナーゼの１つのグループであるｐ３８キナーゼは、転写因子および他のキナーゼのリン酸化および活性化に関与しており、自身は、物理的および化学的ストレス、炎症誘発性サイトカインおよび細菌性リポ多糖によって活性化される。 ｐ３８リン酸化の生産物は、ＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６、ならびにシクロオキシゲナーゼ−２を含む炎症性サイトカインの生産を媒介することが示されている。 これらのサイトカインの各々は、多くの病態および状態に関与している。 例えば、ＴＮＦ−αは、主に活性単球およびマクロファージによって生産されるサイトカインである。 その過剰なまたは未制御の生産は、関節リウマチの発病に関与している。 さらに最近では、ＴＮＦ生産の阻害が、とりわけ、炎症、炎症性腸疾患、アルツハイマー病、クローン病、多発性硬化症および喘息の治療において幅広い用途を有することが示された。 ＴＮＦはまた、ウイルス感染症、例えば、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、およびヘルペスウイルス、とりわけ、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス、ヒトヘルペスウイルス−６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス−７（ＨＨＶ−７）、ヒトヘルペスウイルス−８（ＨＨＶ−８）、仮性狂犬病および鼻気管炎にも関与している。 同様に、ＩＬ−１は、活性単球およびマクロファージによって生産され、関節リウマチ、発熱および骨吸収の低下を含む多くの病態生理学的応答において役割を果たす。 かくして、ｐ３８キナーゼを阻害することによってＴＮＦおよびＩＬを阻害する化合物が必要とされている。 一の実施態様では、本発明は、式Ｉ：
1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく；
1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； は、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリール、ヘテロサイクリル、またはヘテロアリールであるか；または１、２または３ 1 〜Ｃ 6 )アルキルと置き換わっていてもよく；
2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり；
3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく；
4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり；
4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；
5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり；
6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく；
7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルである］
一の実施態様では、本発明は、式ＩＩ：
1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく；
1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； 6で置換されていてもよい、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリール、ヘテロサイクリル、またはヘテロアリールであるか；または１、２または３ 1 〜Ｃ 6 )アルキルと置き換わっていてもよく；
2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり；
3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく；
4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり；
4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；
5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり；
6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく；
7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルであり；
8は、水素、ハロゲン、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルおよび(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシから選択される］
本発明はまた、 いくつかの態様では、本発明また、式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を対象とする。 いくつかの態様では、本発明はまた、対象体または生物学的試料におけるｐ３８キナーゼ活性の阻害方法であって、式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物を該対象体に投与するかまたは生物学的試料に接触させて、結果としてｐ３８キナーゼ活性が阻害されることを含む方法を対象とする。 いくつかの態様では、本発明はまた、対象体におけるｐ３８キナーゼ媒介状態の治療方法であって、式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物を含む組成物を該対象体に投与して、結果としてｐ３８キナーゼ媒介状態が治療されることを含む方法を対象とする。 いくつかの態様では、本発明はまた、患者におけるｐ３８キナーゼ媒介状態を治療するための薬剤の製造のための式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物の使用を対象とする。 いくつかの態様では、本発明はまた、患者におけるｐ３８媒介状態を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体を含む組成物の使用を対象とする。 いくつかの態様では、本発明はまた、本明細書に、例えばスキーム１において、記載されるような化合物および組成物の製造方法を対象とする。 50値を示す。 プロットは、オーロラＡキナーゼに対する化合物１〜８の阻害曲線を示す。 （発明の詳細な説明） 「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、またはヨード（Ｉ）を意味する。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「炭化水素」なる用語は、炭素原子１４個までの炭素原子および水素原子だけを含む構造をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「炭化水素基」または「ヒドロカルビル」なる用語は、炭化水素から１個またはそれ以上の水素を取り除いた結果としての構造をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキル」なる用語は、１〜約１２個の炭素原子を含む一価の直鎖または分枝鎖炭化水素基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキレン」なる用語は、２つの構造を一緒に連結する役割を果たす、１〜約１２個の炭素原子を含む二価の直鎖または分枝鎖炭化水素基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「シクロアルキル」なる用語は、少なくとも３個であって約１２個までの炭素原子を含む飽和もしくは部分不飽和の一価の環含有炭化水素基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アリール」なる用語は、芳香族性を有する１個またはそれ以上の多不飽和炭素環を有しており、５個〜約１４個までの炭素原子を含む一価の炭化水素基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクル」なる用語は、環構造の一部としてＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１個またはそれ以上の多価ヘテロ原子を有しており、環中に少なくとも３個であって約２０個までの原子を含む環含有構造または分子をいう。 ヘテロサイクルは、飽和であっても、１個またはそれ以上の二重結合を含有する不飽和であってもよく、また、ヘテロサイクルは、２個以上の環を含有していてもよい。 ヘテロサイクルが２個以上の環を含有する場合、これらの環は、縮合されていても、縮合されていなくてもよい。 縮合環とは、一般的に、それらの間で２個の原子を共有する少なくとも２個の環をいう。 ヘテロサイクルは、芳香族性を有していても、有していなくてもよい。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクリック基」、「ヘテロサイクリック部分」、「ヘテロサイクリック」または「ヘテロシクロ」なる用語は、１個またはそれ以上の水素を取り除くことによりヘテロサイクルから誘導された基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクリル」なる用語は、１個の水素を取り除くことによりヘテロサイクルから誘導された一価の基をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロアリール」なる用語は、芳香族性を有するヘテロサイクリルをいう。 ヘテロサイクルは、例えば、単環式ヘテロサイクル、例えば、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ジオキソラン、スルホラン、２,３−ジヒドロフラン、２,５−ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、チオファン、ピペリジン、１,２,３,６−テトラヒドロ−ピリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、ピラン、チオピラン、２,３−ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、１,４−ジヒドロピリジン、１,４−ジオキサン、１,３−ジオキサン、ジオキサン、ホモピペリジン、２,３,４,７−テトラヒドロ−１Ｈ−アゼピン、ホモピペラジン、１,３−ジオキセパン、４,７−ジヒドロ−１,３−ジオキセピン、およびヘキサメチレンオキシドを包含する。 さらに、ヘテロサイクルは、芳香族ヘテロサイクル（ヘテロアリール基）、例えば、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、チオフェン、フラン、フラザン、ピロール、イミダゾール、チアゾール、オキサゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、１,２,３−トリアゾール、テトラゾール、１,２,３−チアジアゾール、１,２,３−オキサジアゾール、１,２,４−トリアゾール、１,２,４−チアジアゾール、１,２,４−オキサジアゾール、１,３,４−トリアゾール、１,３,４−チアジアゾール、および１,３,４−オキサジアゾールを包含する。 さらに、ヘテロサイクルは、多環式ヘテロサイクル、例えば、インドール、インドリン、イソインドリン、キノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、１,４−ベンゾジオキサン、クマリン、ジヒドロクマリン、ベンゾフラン、２,３−ジヒドロベンゾフラン、イソベンゾフラン、クロメン、クロマン、イソクロマン、キサンテン、フェノキサチイン、チアントレン、インドリジン、イソインドール、インダゾール、プリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、フェナントリジン、ペリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェノチアジン、フェノキサジン、１,２−ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、チオキサンチン、カルバゾール、カルボリン、アクリジン、ピロリジジン、およびキノリジジンを包含する。 上記多環式ヘテロサイクルに加えて、ヘテロサイクルは、２個またはそれ以上の環の間の環縮合が両方の環に共通している２つ以上の結合および両方の環に共通している３個以上の原子を含む多環式ヘテロサイクルを含む。 かかる架橋ヘテロサイクルの例としては、キヌクリジン、ジアザビシクロ[２.２.１]ヘプタンおよび７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタンが挙げられる。 ヘテロサイクリルは、例えば、単環式ヘテロサイクリル、例えば、アジリジニル、オキシラニル、チイラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ジオキソラニル、スルホラニル、２,３−ジヒドロフラニル、２,５−ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、チオファニル、ピペリジニル、１,２,３,６−テトラヒドロ−ピリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピラニル、チオピラニル、２,３−ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、１,４−ジヒドロピリジニル、１,４−ジオキサニル、１,３−ジオキサニル、ジオキサニル、ホモピペリジニル、２,３,４,７−テトラヒドロ−１Ｈ−アゼピニル、ホモピペラジニル、１,３−ジオキセパニル、４,７−ジヒドロ−１,３−ジオキセピニル、およびヘキサメチレンオキシジルを包含する。 さらに、ヘテロサイクリルは、芳香族ヘテロサイクリルまたはヘテロアリール、例えば、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、チエニル、フリル、フラザニル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−トリアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、および１,３,４−オキサジアゾリルを包含する。 さらに、ヘテロサイクリルは、多環式ヘテロサイクリル（芳香族または非芳香族の両方を含む）、例えば、インドリル、インドリニル、イソインドリニル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、１,４−ベンゾジオキサニル、クマリニル、ジヒドロクマリニル、ベンゾフラニル、２,３−ジヒドロベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、クロマニル、イソクロマニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、チアントレニル、インドリジニル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、フェナントリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、１,２−ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、チオキサンチニル、カルバゾリル、カルボリニル、アクリジニル、ピロリジジニル、およびキノリジジニルを包含する。 上記多環式ヘテロサイクリルに加えて、ヘテロサイクリルは、２個またはそれ以上の環の間の環縮合が両方の環に共通している２つ以上の結合および両方の環に共通している３個以上の原子を含む多環式ヘテロサイクリルを包含する。 かかる架橋ヘテロサイクルの例としては、キヌクリジニル、ジアザビシクロ[２.２.１]ヘプチル；および７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプチルが挙げられる。 接頭辞として使用される「６員」なる用語は、６個の環原子を含有する環を有する基をいう。 接頭辞として使用される「５員」なる用語は、５個の環原子を含有する環を有する基をいう。 ５員ヘテロアリール環は、５個の環原子（ここで、１、２または３個の環原子は、独立して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される）を有する環を有するヘテロアリールである。 代表的な５員環ヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−トリアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、および１,３,４−オキサジアゾリルである。 ６員環ヘテロアリールは、６個の環原子（ここで、１、２または３個の環原子は、独立して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される）を有する環を有するヘテロアリールである。 代表的な６員環ヘテロアリールは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニルおよびピリダジニルである。 「アラルキル」なる用語は、アリール基で置換されているアルキル基をいう。 「ヘテロアラルキル」なる用語は、ヘテロアリール基で置換されているアルキル基をいう。 他に特記しない限り、「置換されている」なる用語は、接頭辞として用いられる場合には、１個またはそれ以上の水素が１個またはそれ以上のアルキル基、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびＰから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子を含有する１個またはそれ以上の化学基と置き換わっている、構造、分子または基をいう。 １個またはそれ以上のヘテロ原子を含有する代表的な化学基としては、ヘテロサイクリル、−ＮＯ 2 、−Ｏ−アルキル、ハロ、−ＣＦ 3 、−ＣＯ 2 Ｈ、−ＣＯ 2 Ｒ、−ＮＨ 2 、−ＳＨ、−ＮＨＲ、−ＮＲ 2 、−ＳＲ、−ＳＯ 3 Ｈ、−ＳＯ 2 Ｒ、−−Ｓ(Ｏ)Ｒ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ 2 、−−ＮＲＣ(Ｏ)Ｒ、オキソ（＝Ｏ）、イミノ（＝ＮＲ）、チオ（＝Ｓ）、および オキシイミノ（＝Ｎ−ＯＲ）（ここで、各「Ｒ」は、上記で定義したアルキルである）が挙げられる。 例えば、置換フェニルは、ニトロフェニル、ピリジルフェニル、メトキシフェニル、クロロフェニル、アミノフェニルなどをいうことができる（ここで、該ニトロ、ピリジル、メトキシ、クロロ、およびアミノ基は、フェニル環上の適当な水素と置き換わることができる）。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルコキシ」なる用語は、一般的な−Ｏ−アルキルで示される基をいう。 代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキシ、イソブトキシ、シクロプロピルメトキシ、アリルオキシ、およびプロパルギルオキシが挙げられる。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アミン」または「アミノ」なる用語は、−ＮＨ 2をいう 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキルアミノ」なる用語は、−ＮＨ(アルキル)をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ジアルキルアミノ」なる用語は、−ＮＨ(アルキル) 2をいう。 単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アシル」は、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ（ここで、Ｒは、水素、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはアルコキシであり、これらは、上記「置換されている」の定義によって規定されているように置換されていてもよい）を意味する。 アシル基としては、例えば、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、フェニルアセチル、カルボエトキシ、およびジメチルカルバモイルが挙げられる。 本発明の化合物には、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび幾何異性体を包含する立体異性体として存在するものがある。 (Ｒ)、(Ｓ)、エピマー、ジアステレオマー、シス、トランス、syn、anti、溶媒和物（水和物を含む）、互変異性体、およびその混合物を包含するこれらの形態はすべて、本発明の化合物において意図される。 本発明はまた、本発明の化合物の塩、特に、医薬上許容される塩に関する。 「医薬上許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ、望ましくない毒物学的効果をもたらさない塩である。 該塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸および同類のもの；酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、安息香酸、パモン酸、アルギン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸および同類のもののような適当な酸との塩であり得る。 また、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、銅、バリウム、ビスマス、カルシウムおよび同類のもののような陽イオンの塩；またはテトラアルキルアンモニウム陽イオンおよびトリアルキルアンモニウム陽イオンのような有機陽イオンの塩が挙げられる。 上記の塩の組合せもまた有用である。 トリフルオロ酢酸、クロロ酢酸、およびトリクロロ酢酸との塩のような他の酸および／または陽イオンの塩もまた包含される。 本発明はまた、本発明の化合物の種々の結晶形態、水和物、および溶媒和物にも関する。 本発明の化合物 一の実施態様では、本発明は、式Ｉ：
1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく；
1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； 6で置換されていてもよい、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリール、ヘテロサイクリル、またはヘテロアリールであるか；または１、２または３ 1 〜Ｃ 6 )アルキルと置き換わっていてもよく；
2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり；
3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく；
4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり；
4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；
5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり；
6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく；
7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルである］
いくつかの実施態様では、本発明は、式ＩＩ：
1 、Ｚ 2およびＺ 3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルで置換されていてもよく；
1は、１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり； 6で置換されていてもよい、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリール、ヘテロサイクリル、またはヘテロアリールであるか；または１、２または３ 1 〜Ｃ 6 )アルキルと置き換わっていてもよく；
2は、水素、または炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルであり；
3は、−ＯＨ、−Ｏ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ 2 、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ(Ｏ−Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｏ−アラルキルであり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよく；
4aは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）であり；
4bは、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；または Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を形成し（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ 6で置換されていてもよい）；
5は、水素、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、または(Ｃ 3 〜Ｃ 6 )シクロアルキルであり；
6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ 3 〜Ｃ 7 )シクロアルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニル、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルケニルオキシ、(Ｃ 2 〜Ｃ 6 )アルキニルオキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルチオ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルフィニル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、カルボキシ、−ＣＯ 2 (Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ 2 、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＣＯＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ 2 、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ 2 、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、−Ｎ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル) 2 、−ＮＨ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル]スルファモイル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル−(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルスルホニルアミノであり、これらは、炭素上にてＲ 7で置換されていてもよく；
7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキル、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルであり；
8は、水素、ハロゲン、(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルキルおよび(Ｃ 1 〜Ｃ 6 )アルコキシから選択される］
いくつかの実施態様では、Ｚ 1はＮである。 他の実施態様では、Ｚ 1はＣ−Ｈである。 いくつかの実施態様では、Ｚ 2はＮである。 他の実施態様では、Ｚ 1はＣ−Ｈである。 いくつかの実施態様では、Ｚ 3はＮである。 他の実施態様では、Ｚ 1はＣ−Ｈである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 1はメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 1はＮＨ 2 −ＣＨ 2である。 いくつかの実施態様では、 はピリジルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 2は水素である。 他の実施態様では、Ｒ 2はメチルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 3は−ＯＨである。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＯＭｅである。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＯＥｔである。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＮＨ 2である。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＮＨＭｅである。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＮＭｅ 2である。 他の実施態様では、Ｒ 3は−ＮＨ−ＯＭｅである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 4aは水素である。 他の実施態様では、Ｒ 4aはメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4bは水素である。 他の実施態様では、Ｒ 4bはメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4bはエチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4bは、ｎ−プロピルおよびイソプロピルを包含するプロピルである。 他の実施態様では、Ｒ 4bは、ｎ−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチルを包含するブチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロヘキシルおよびメチル−置換シクロヘキシルである。 他の実施態様では、Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロペンチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロブチルである。 他の実施態様では、Ｒ 4aおよびＲ 4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 5は水素である。 他の実施態様では、Ｒ 5はメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 5はシクロヘキシルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 6はクロロである。 他の実施態様では、Ｒ 6はフルオロである。 他の実施態様では、Ｒ 6はトリフルオロメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 6はトリフルオロメトキシである。 他の実施態様では、Ｒ 6はシアノである。 他の実施態様では、Ｒ 6はニトロである。 他の実施態様では、Ｒ 6はヒドロキシルである。 他の実施態様では、Ｒ 6はアミノである。 他の実施態様では、Ｒ 6はメチルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 7はクロロである。 他の実施態様では、Ｒ 7はフルオロである。 他の実施態様では、Ｒ 7はトリフルオロメチルである。 他の実施態様では、Ｒ 7はトリフルオロメトキシである。 他の実施態様では、Ｒ 7はシアノである。 他の実施態様では、Ｒ 7はニトロである。 他の実施態様では、Ｒ 7はヒドロキシルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 8はメチルである。 いくつかの実施態様では、Ｒ 8は水素である。 いくつかの実施態様では、本発明の化合物は、式Ｉ−１： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式Ｉ−２： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式Ｉ−３： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式Ｉ−４： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式Ｉ−５： いくつかの実施態様では、本発明の化合物は、式ＩＩ−１： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式ＩＩ−２： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式ＩＩ−３： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式ＩＩ−４： 他の実施態様では、本発明の化合物は、式ＩＩ−５： 本発明の化合物の同定および製造 ７,０００,０００を超えるメンバーを含むＤＮＡコード化小分子ライブラリーから本発明の化合物を同定した。 概括的な注釈として、極めて大規模な小分子のライブラリーを創造しスクリーンする能力は、新しい化合物の同定に関する念願の目標であった。 この構想を達成する方法として、１９８０年代および１９９０年代初期にコンビナトリアル・ケミストリーが開発され受け入れられたが、小さい混合物からでさえ活性成分を同定するのに利用可能な無益な方法が大いに起因して支持が減った（P. Landers, “Drug Industry's Big Push Into Technology Falls Short,” Wall Street Journal, Feb. 24, 2004）。 一方、同じ時代に、ペプチドおよびタンパク質に由来する療法の発見へのロバストでかつ有益な取り組みとしてコンビナトリアル生物学的方法が現れた（N. Scheinfeld, J. Drugs Dermatol. 2, 375 (2003)；J.-H. Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 18902 (2005)）。 これらの生化学的技術の成功は、複雑な混合物をデコンボリュートするための核酸ベースのコード化スキームの顕著な使用が大いに起因した。 コンビナトリアル・ケミストリーに関するデコンボリューション問題に取り組むために、ペプチドライブラリーに関するいくつかのグループによって、核酸をベースとする標識法が開発された（S. Brenner, RA Lerner, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 5381 (1992)；SE Cwirla, EA Peters, RW Barrett, WJ Dower, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 6378 (1990)；DR Halpin, JA Lee, S. J, Wrenn, PB Harbury, PLoS Biology, 2, 1031 (2004)；S. Wilson, AD Keefe, JW Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 3750 (2001)；A. Frankel, S. Li, SR Starck, RW Roberts, Curr. Opin. Struct. Biol. 13, 506 (2003)）。 最近では、化学反応を駆動するための鋳型としてＤＮＡを利用する方法が開発されており、その結果、ＤＮＡで標識される小分子ライブラリーを生成することができるようになった（X. Li, DR Liu, Angew. Chem. Int. Ed. 43, 4848 (2004)）。 これらの進歩にもかかわらず、核酸標識化を使用して大規模な小分子のライブラリーを創造し、スクリーンし、デコンボリュートする能力は制限されていた。 核酸コード化スキームを使用して、７,０７７,８８８個の成分からなる小分子ライブラリーが開発された（以下、「ケミカルディスプレイライブラリー」と呼ぶ）。 該ライブラリーは、化学的合成法と酵素的合成法を組み合わせて使用して構築されており、図２に示すように、アフィニティーに基づく捕獲を使用して、オーロラＡキナーゼおよびｐ３８ ＭＡＰキナーゼ（医薬的に重要なターゲット）に対してスクリーンされた。 該アフィニティー工程の後に、結合分子をコードする核酸をＰＣＲにより増幅した。 ウルトラハイスループットＤＮＡ配列決定法を用いてデコンボリューションが行われた。 配列決定データの解析および翻訳は、ターゲット酵素と結合した推定構造体のファミリーを同定した。 これらの分子は、ＤＮＡ標識を用いずに合成され、慣用の生化学的および細胞ベースの方法を使用して試験された。 これらの研究は、ケミカルディスプレイライブラリーが２つのキナーゼの新規な阻害剤を同定する能力を立証した。 特に、該ライブラリースクリーンから直接、構造活性相関（ＳＡＲ）が得られた。 ケミカルディスプレイライブラリーの構築 ケミカルディスプレイライブラリーの作成のためのスキームを図２に示す。 ライブラリー合成のための前駆体（「ヘッドピース」と称される）は、短い共有結合ＤＮＡ二本鎖であった（アイオワ州コーラルビルのIDT, Inc.から購入）（ここで、共有結合性リンカーは、スペーサー鎖にぶら下がっている第一級アミンを含んでいた）。 相補ＤＮＡ鎖間の共有結合は、鎖交換を伴わずにライブラリー合成の間に用いられる高温化学反応を可能にするように特異的に選択された。 ヘッドピースは、６組の塩基対および二塩基不対３'オーバーハングを含有していた。 該オーバーハングは、さらなるＤＮＡコード種のライゲーションのための基質を提供する（Y. Kinoshita K. Nishigaki. Nucleic Acids Symposium Series No. 34, Oxford University Press, 1995, pp 201-202）。 ＤＮＡから距離を置いて化学合成の位置を定めるために、さらなる１６原子スペーサー鎖をもって該ヘッドピースを付加した。 さらに、ライブラリー合成の前に、ＰＣＲのためのプライマー配列としての役割を果たすために２０ｂｐ配列を該ヘッドピースにライゲートした。 該ライブラリーの作成に用いたＤＮＡ標識は、合成、選択および配列決定の間に最適な特性を有するように設計された。 該標識は、一定のＧ／Ｃ含量を含有しており、その結果、全てのライブラリーメンバーは、同様の融解温度を有した。 オーバーハング配列は、各サイクルに特有のものであって、その結果、各標識セットは、先行サイクルからのセットとだけライゲートすることができ、切断配列とはライゲートすることができなかった。 該ライブラリーの化学的多様性要素（本明細書では、「シントン」という）は、いくつかの基準を念頭に置いて選択された。 サイクル１で使用されるＦｍｏｃ−アミノ酸ならびにサイクル２および３で使用されるアミンは、全て、商業的に入手可能であり、ニトロ基のような毒性または変異原性官能基を含まなかった。 該ライブラリーにおいては、高収率で反応することが立証されたシントンだけが許された。 各潜在的シントンを１種類またはそれ以上の代表的な反応で試験し、実施例のセクションに示されるように８０％またはそれ以上の変換をもたらしたものだけが含まれた。 ４００種類を超えるＦｍｏｃ−アミノ酸を求電子試薬および求核試薬として試験して、サイクル１で１９２個のシントンを得た。 １０００種類を超えるアミンを試験して、サイクル２およびサイクル３のアミンセットを得た。 ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害剤がライブラリー中に存在する可能性を増加させるために、サイクル２では３−アミノ−４−メチル−Ｎ−メトキシベンズアミドを含んだ（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。 該合成を行うためにスプリット・アンド・プール法の溶液変種を用いた。 かくして、合成の第一サイクルを以下のとおり行った：修飾ヘッドピース２０μｍｏｌをライゲーション・バッファーに溶解し、４つの９６ウェルプレート中に整列させた。 各ウェルに３８４個の特有の二本鎖ＤＮＡ標識の１つを移した（各々、出発二本鎖に対して相補的な二塩基３'オーバーハング、および次の標識とアニール化するための別の３'オーバーハングを含有していた）。 各標識をヘッドピースの２倍過剰で加えた。 酵素的ライゲーションを行い、ゲル電気泳動法によって確認した。 次いで、伸長したＤＮＡをエタノールの添加によって沈殿させた。 遠心分離後、整列したＤＮＡペレットを反応バッファー（ｐＨ９.５、１５ｍＭボラート）に溶解した。 次いで、各ウェルに５０倍過剰の１９２種類のＦｍｏｃ保護アミノ酸の１つ（１つのシントンにつき２つのウェル）およびカップリング試薬を添加した。 逆相ＨＰＬＣ／エレクトロスプレー質量分析法により、該化学反応をモニターした（Y. Kinoshita K. Nishigaki. Nucleic Acids Symposium Series No. 34, Oxford University Press, 1995, pp 201-202；M. Hail, B. Elliot, K. Anderson, Amer. Biotech. Laboratory, January 2004, p.12）。 完了後、ウェルをプールし、逆相液体クロマトグラフィーによりライブリーを精製した。 この方法で、コード化標識配列とシントンとの間で特有の一致が確立された。 各シントンは、２つの標識配列によってコードされた；かかる二重標識化は、その後のＰＣＲバイアスをモニターする一手段として用いられた。 その後の２回の合成サイクルは、異なる合成化学を用いるが、操作的には最初の合成サイクルと同様であった。 該合成の注目すべき一の態様は、サイクル３の反応が８０℃で行われたことである。 実施例に示すように、比較的厳しい反応条件下でもＤＮＡ損傷は観察されなかった。 図１Ｂにまとめて記載するように、合成の各サイクルで１９２個のシントンを使用し、最終収量３.９μｍｏｌ（１９％）を得た（２６０ｎｍで光学密度により測定した）。 ７,０７７,８８８成分ライブラリーにおいて得られた小分子は、各々、特有の５３ｂｐＤＮＡ二本鎖に結合していた。 アフィニティー選択の前に、該ライブラリーのアリコートを密接なプライマー配列とライゲートした。 該プライマーは、縮重領域を含有しており、その後の増幅および配列決定の間にＰＣＲ複製を評価するために用いられた。 Ｐ３８に対するアフィニティー選択 本明細書に記載のケミカルディスプレイライブラリー法を使用してｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害物質を同定した。 トリアジン骨格に基づくｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害剤は記載されている（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。 ６Ｈｉｓ標識ｐ３８ ＭＡＰキナーゼに対する該ライブラリーの選択、次いで、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定により、ファミリー内に属する数千個の分子を同定した（図３Ｊ）。 該方法を使用して同定されたＰ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、スキーム１に記載する化合物を包含する。 トリアジン上における３−アミノベンズアミド誘導体での置換は、阻害にとって非常に重大であることは従前に分かっており、実際に、選択された集団は、サイクル２におけるシントン、３−アミノ−４−メチル−Ｎ−メトキシベンズアミドに支配されていた。 加えて、トリアジン上での第２の置換基としては短い分枝アルキルアミンが好ましく、第３の置換基としてはジアミンが好ましいことが分かった。 このファミリーのいくつかのメンバーの合成によって、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの強力な阻害剤であり（ＩＣ 50 ＝４〜１０ｎＭ、図４）、ＬＰＳ刺激ヒト単球からのＴＮＦ−αの分泌を阻害した化合物が得られた。 例えば、化合物９は３３ｎＭのＥＣ 50を有しており、一方、化合物１０、１１および１２は、それぞれ、２２ｎＭ、１１ｎＭおよび１２２ｎＭのＥＣ 50値を有していた。 ライブラリー選択によって定義されたＳＡＲは、概して先の報告と一致した。 加えて、選択された化合物の効力は、慣用的な医薬化学法によって得られたものと比べて遜色がなかった（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。 オーロラＡキナーゼに対するアフィニティー選択 ケミカルディスプレイライブラリーにオーロラＡキナーゼに対するアフィニティー選択を行った（E. Harrington, et. al., Nature Med. 10, 262 (2004)）。 選択条件を実証するために、オーロラＡの公知の阻害剤であるＶＸ−６８０の誘導体を合成し、特異的標識化ＤＮＡ二本鎖と結合させた（J.-D. Charrier, F. Mazzei, D. Kay, A. Miller、ＷＯ ２００４／０００８３）。 コード化したポジティブコントロール分子は、ターゲットキナーゼに対するアフィニティーを保持することが立証され（データは示さない）、他の７００万個の分子の濃度と同等の濃度にてケミカルディスプレイライブラリーで希釈された。 ２つのアフィニティー選択法を調べた。 方法Ａでは、ライブラリーのアリコート（５ｎｍｏｌの全ライブラリー、またはライブラリーメンバー１つにつき７００ａｍｏｌ、ポジティブコントロールを含む）を選択バッファー６０μＬ中にて６Ｈｉｓ標識化オーロラＡキナーゼタンパク質（３０ｐｍｏｌ）と一緒にインキュベートした。 該ＤＮＡのターゲーットとの非特異的会合を最小限にするために、該バッファー中には遮断薬（剪断されたサケ精子ＤＮＡ、ウシ血清アルブミン）が含まれていた。 次いで、ターゲットおよびターゲット結合ライブラリーメンバーを磁気ＩＭＡＣ（固定化金属アフィニティークロマトグラフィー）ビーズ上で捕獲した。 方法Ｂでは、まず、該タンパク質を飽和濃度（理論値約９００ｐｍｏｌ）でＩＭＡＣピペットチップ（５μＬ、Phynexus, Inc.）上に固定化した。 次いで、捕獲されたターゲットを選択バッファー中にてライブラリーと一緒にインキュベートした。 両方の方法では、洗浄により非結合ライブラリーメンバーを取り除き、結合した集団をタンパク質ターゲットの熱変性によって回収した。 次いで、回収した集団に対してさらに２回のアフィニティー選択のサイクルを行った。 アフィニティー選択のサイクルの回数は、ＰＣＲおよび配列決定のための分子の産出量、ならびに潜在的ＳＡＲ分析のための低および高アフィニティー分子を保持するという要求に基づいて経験的に決定した。 対照として、対応する選択をオーロラＡキナーゼの存在無しで行った（ノー・ターゲット・コントロール）。 最終的な濃縮集団にＰＣＲを行い、増幅したアウトプットを配列決定した（M. Margulies, et. al., Nature 437, 26(2005)）。 ３回のアフィニティー選択サイクルの後に得られた濃縮ライブラリー集団は、典型的には、選択のストリンジェンシーに依存して、１０ 4 〜１０ 6個のメンバーからなっていた。 慣用の配列決定技術は、かかる多量のＤＮＡ配列を調査することはできない。 したがって、ウルトラハイスループット配列決定技術を使用した；選択試料１つにつき約５０,０００個の独立した配列を評価した。 未選択ライブラリーとオーロラＡ選択による増幅したアウトプットとの比較により、方法Ａを用いて選択を３回行った後、ポジティブコントロールの１００,０００倍の濃縮が明らかになった。 ポジティブコントロールは１：７×１０ 6の割合でスパイクされた。 選択を３回行った後、ポジティブコントロールは、６６,２０１個の配列中に９７１回、または１：７０の割合で観察された。 これは、１００,０００倍の濃縮に想到する。 この結果は、酵素が選択の間にその活性コンフォメーションを保持していることを示した；その結果として、次に、濃縮ライブラリー集団を試験した。 これらの実験からそれらのコード化分子への配列の翻訳は、多くの濃縮分子が構造的に関連しており、しばしば１または２個のシントン（図３におけるグラフにて面または線として表されている）を享有することを示した。 図３Ｅおよび３Ｆは、方法Ａを用いる２つの独立した選択の後のライブラリー集団を示す。 選択された集団の分析は、ノー・ターゲット・コントロールと比べて高い頻度で生じた分子のファミリーを明らかにした。 ２つの実験の間に良好な再現性があり、選択された分子の６３％が両方の集団において生じた。 方法Ｂを用いて得られた濃縮集団が図３Ｇに示される。 図３Ｅおよび３Ｆに示されるものと構造的に酷似しているものがある化合物のファミリーを再び選択した。 別の実験では、ＶＸ−６８０（１０〜５０μＭ、ＤＮＡと共有結合していない）の存在下でオーロラキナーゼと一緒にアフィニティー選択を繰り返した（方法Ａを使用）。 この集団のＰＣＲ、配列決定およびデータ解析は、濃縮ファミリーが識別できなかったことを示した（図３Ｈ）。 この実験は、選択されたファミリーの構造がＶＸ−６８０としてオーロラキナーゼの同様の部位と結合することができることを示した。 Ｐ３８阻害剤とオーロラキナーゼ阻害剤との比較 ｐ３８ ＭＡＰおよびオーロラＡキナーゼの両方に対するケミカルディスプレイライブラリーの選択による結果は、図３Ｋに重ねて示される。 これらのデータは、各キナーゼに関して選択されたファミリーが重複しなかったことを示しており、選択性についての可能性を示唆している。 各ファミリーのメンバーについてのキナーゼ阻害能を表１に示しており、アッセイの濃度範囲内では、阻害活性の重複がないことが明らかである。 ｐ３８阻害剤は、オーロラＡの阻害を示さず（＞１０,０００の選択性比）、オーロラ阻害剤は、ｐ３８を阻害しない（少なくとも１０〜２００の選択性比）。 医薬製剤 本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物が提供される。 本発明の組成物は、経口使用に適した剤形（例えば、錠剤、ロゼンジ剤、ハードもしくはソフトカプセル剤、水性もしくは油性懸濁剤、乳剤、分散可能な散剤もしくは顆粒剤、シロップ剤、またはエリキシル剤）、局所使用に適した剤形（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性もしくは油性液剤もしくは懸濁剤）、吸入による投与に適した製剤（例えば、微粉または液体エアゾール剤）、インサフレーションによる投与に適した剤形（例えば、微粉）または非経口投与に適した剤形（例えば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与もしくは筋肉内投与用の滅菌水性もしくは油性液剤、または直腸投与用の坐剤）であり得る。 本発明の組成物は、当該技術分野で周知の慣用の医薬賦形剤を使用して慣用の方法によって得ることができる。 かくして、経口使用のための組成物は、例えば、１種類またはそれ以上の着色剤、甘味剤、香味剤、および／または保存剤を含有することができる。 錠剤のための適当な医薬上許容される賦形剤としては、例えば、ラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウムのような不活性希釈剤；コーンスターチまたはアルギン酸のような顆粒化剤および崩壊剤；デンプンのような結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような滑沢剤；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはプロピルのような保存剤；およびアスコルビン酸のような抗酸化剤が挙げられる。 錠剤は、被覆されていなくてもよいか、または、消化器官内でのそれらの崩壊および活性成分の次なる吸収を改変するために、または、それらの安定性および／または外観を改良するために、どちらの場合にも当該技術分野で周知の慣用的なコーティング剤およびコーティング方法を使用して被覆されていてもよい。 経口使用のための組成物は、活性成分を不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合したハードゼラチンカプセル剤の剤形であり得るか、または、活性成分を水または油（例えば、落花生油、流動パラフィン、大豆油、ヤシ油、または好ましくはオリーブ油）または他の許容されるビヒクルと混合したソフトゼラチンカプセル剤としてであり得る。 水性懸濁剤は、一般的に、微粉形態の活性成分を、１種類またはそれ以上の懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガム；分散剤または湿潤剤、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）と一緒に含有する。 該水性懸濁剤はまた、１種類またはそれ以上の保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはプロピル）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色剤、香味剤、および／または甘味剤（例えば、シュークロース、サッカリンまたはアスパルテーム）を含有することもできる。 油性懸濁剤は、植物油（例えば、アラキス油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油）または鉱油（例えば、流動パラフィン）に活性成分を懸濁することによって製剤化することができる。 該油性懸濁剤はまた、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールのような増粘剤を含有することもできる。 上記したような甘味剤、および香味剤を加えて美味な経口製剤を提供することができる。 これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存され得る。 水の添加による水性懸濁剤または液剤の製剤化に適した分散可能なまたは凍結乾燥した粉末および顆粒剤は、一般的に、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種類またはそれ以上の保存剤と一緒に活性成分を含有する。 適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上記したものによって例示される。 甘味剤、香味剤および着色剤のようなさらなる賦形剤が存在してもよい。 本発明の医薬組成物は、水中油滴型エマルションの形態であってもよい。 油性相は、植物油、例えば、オリーブ油またはアラキス油、または鉱油、例えば、流動パラフィンまたはこれらの混合物であり得る。 適当な乳化剤は、例えば、天然ガム、例えば、アカシアガムまたはトラガカントガム、天然リン脂質、例えば、大豆、レシチン、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導したエステルまたは部分エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート）および該部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。 該乳剤はまた、甘味剤、香味剤および保存剤を含有することもできる。 シロップ剤およびエリキシル剤は、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテームまたはシュークロースのような甘味剤を用いて製剤化することができ、粘滑薬、保存剤、香味剤および／または着色剤を含有することもできる。 該医薬組成物はまた、滅菌注射用水性または油性懸濁剤、液剤、乳剤または特定の系の剤形であり得、上記した１種類またはそれ以上の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の方法に従って製剤化され得る。 滅菌注射用製剤はまた、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、ポリエチレングリコール中溶液であり得る。 坐剤製剤は、活性成分を、常温で固体であるが直腸温度で液体であり、したがって、直腸で融解して薬物を放出するであろう適当な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。 適当な賦形剤としては、例えば、カカオ脂およびポリエチレングリコールが挙げられる。 クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤および水性または油性液剤または懸濁剤のような局所製剤は、一般的に、当該技術分野に周知の慣用の方法を用いて慣用の局所的に許容されるビヒクルまたは希釈剤で活性成分を製剤化することによって得られる。 インサフレーションによる投与のための組成物は、活性成分を単独でまたは１種類またはそれ以上の生理学的に許容される担体（例えば、ラクトース）で希釈して含む微粉の形態であり得る。 次いで、インサフレーション用の粉末は、好都合には、例えば、公知の剤であるクロモグリク酸ナトリウムのインサフレーションのために使用されるようなターボ吸入装置と一緒に用いるために活性成分１〜５０ｍｇを含有するカプセル中に保持される。 吸入による投与のための組成物は、微細な固体または液滴を含有するエアゾールとして活性成分を投薬するようにアレンジされた慣用の加圧式エアゾールの剤形であり得る。 揮発性フッ化炭化水素または炭化水素のような慣用のエアゾール噴射剤を使用することができ、エアゾール装置は、好都合には、定量した量の活性成分を投薬するようにアレンジされている。 製剤についてさらなる情報について、読者は、Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990の第５巻の第２５.２章を参照する。 したがって、本発明のさらなる態様では、治療において用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。 用途 また、薬剤として用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。 本発明の別の態様は、ヒトまたは他の哺乳動物における障害または病態（かかる哺乳動物による過剰なまたは未制御のＴＮＦまたはｐ３８キナーゼ生産によって悪化するかまたは引き起こされる）の治療のための薬剤として用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。 式Ｉで示される化合物は、インビトロ・アッセイでｐ３８キナーゼを阻害する。 したがって、本発明は、式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩またはその互変異性体の有効なサイトカイン干渉量を投与することを含むサイトカイン媒介疾患の治療方法を提供する。 さらに、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩は、治療によるヒトのような温血動物の治療方法において用いるために提供される。 本発明の別の態様は、対象体における炎症の治療のための、および、発熱の治療のための解熱剤として用いるための、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。 本発明の化合物はまた、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風関節炎、変形性関節症、全身性紅斑性狼瘡および若年性関節炎を包含するがこれらに限定されない関節炎、ならびに他の関節炎状態の治療に有用である。 また、本発明の化合物は、成人呼吸窮迫症候群、肺サルコイドーシス、喘息、珪肺症、および慢性肺炎症性疾患を包含する肺障害または肺炎症の治療に有用である。 さらにまた、本発明の化合物はまた、敗血症、敗血症性ショック、グラム陰性菌敗血症、マラリア、髄膜炎、感染症または悪性腫瘍に続発する悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に続発する悪液質、ＡＩＤＳ、ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連症候群）、肺炎およびヘルペスウイルスを包含するウイルスおよび細菌感染症の治療に有用である。 さらにまた、本発明の化合物はまた、骨吸収疾患、例えば骨粗鬆症、エンドトキシンショック、トキシックショック症候群、再灌流傷害、移植片対宿主反応および同種移植片拒絶を包含する自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症、血栓、うっ血性心不全、および心臓再灌流傷害、腎再灌流傷害、肝疾患および腎炎を包含する心血管疾患、ならびに感染症に起因する筋肉痛の治療に有用である。 本発明の化合物はまた、インフルエンザ、多発性硬化症、癌、糖尿病、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、皮膚関連状態、例えば乾癬、湿疹、火傷、皮膚炎、ケロイド形成、および瘢痕組織形成の治療に有用である。 本発明の化合物はまた、胃腸障害、例えば、炎症性腸疾患、クローン病、胃炎、過敏性腸症候群および潰瘍性大腸炎の治療に有用である。 本発明の化合物はまた、眼疾患、例えば、網膜炎、網膜炎、ブドウ膜炎、眼羞明、および眼組織の急性損傷の治療に用いることができる。 本発明の化合物はまた、新生物を含む血管新生；転移；眼科的状態、例えば、角膜移植片拒絶反応、眼血管新生、損傷または感染後血管新生を含む網膜血管新生、糖尿病性網膜症、後水晶体線維増殖症および血管新生緑内障；潰瘍性疾患、例えば、胃潰瘍；病理的であるが非悪性の状態、例えば、小児血管腫を包含する血管腫、上咽頭の血管線維腫および無血管性骨壊死；糖尿病性腎症および心筋症；ならびに子宮内膜症のような女性の生殖系の障害の治療に有用であろう。 さらに、本発明の化合物は、シクロオキシゲナーゼ−２の生産を予防するのに有用である。 上記治療用途のために、投与量は、用いられる化合物、投与形態、望ましい治療、所定の障害、ならびに動物または患者の年齢および性別に応じて異なるであろう。 かくして、投薬のサイズは、周知の医薬原理に従って算出されるであろう。 本明細書で定義した治療は、単独の療法として施されてもよいか、または、本発明の化合物に加えて、慣用の外科手術または放射線療法もしくは化学療法を含むことができる。 かかる化学療法は、以下のカテゴリーの抗腫瘍剤の１つまたはそれ以上を含むことができる。 治療薬におけるそれらの用途に加えて、式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬上許容される塩はまた、新しい治療薬の探索の一環としての、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラットおよびマウスのような研究動物における細胞周期活性の阻害剤の効果の評価のためのインビトロおよびインビボ試験システムの開発および標準化における薬理学的ツールとして有用である。 上記の他の医薬組成物、プロセス、方法、使用および薬剤製造特性には、本明細書に記載した本発明の化合物の別の好ましい実施態様もまた当てはまる。 ヒト治療に有用であることに加えて、本発明の化合物はまた、哺乳動物、齧歯類、およびその類のものを包含する、コンパニオンアニマル、珍しい動物および家畜の獣医学的治療にも有用である。 さらに好ましい動物としては、ウマ、イヌおよびネコが挙げられる。 本発明の化合物の特性は、例えば、以下に記載する方法の１つまたはそれ以上を使用して評価することができる。 参照による援用 本願の全体にわたって引用される全て文献、特許および特許出願の内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる。 本発明の化合物およびそれらの製造は、これらの化合物が製造または使用される方法のいくつかを例示する実施例によってさらに理解され得る。 しかしながら、当然のことながら、これらの実施例は本発明を限定するものではない。 現在知られているかまたはこれから生じる本発明の変更は、本明細書および特許請求の範囲に記載されるように本発明の範囲内となるとみなされる。 本明細書に記載のスキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例示であり、これらのスキームの対する様々な変更を行うことができると解すべきである。 シントン検証 ライブラリー様条件を使用して９６ウェルプレートにて全てのシントンを検証した。 分析は、ＨＰＬＣ／ＥＳＭＳ（陰イオン）を使用して行った。 一例として、単一ウェル分析法を下記スキーム２に示す： ライブラリー合成 材料 全ての化学的構成要素（Ｆｍｏｃ保護アミノ酸；アミン）は商業的供給源から入手した。 ＤＮＡヘッドピースおよび様々なＤＮＡ標識は、アイオワ州コーラルビルのIDT, Inc.から入手した。 Ｔ４ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅは、Fermentasから入手した（３０ｕ／ｕｌまたは５０００ｕ／管）。 ライブラリー合成前に、ＤＮＡヘッドピースを、標識長ピースのＤＮＡとのライゲーションによって伸長した。 この目的は、最終的３サイクル生成物の長さを４サイクル・ライブラリーを用いて得られたものと同一に保持するためであった。 ＤＮＡ「ヘッドピース」： 塩基対の観点から： 化学構造： 化学的スペーサーの設置 ヘッドピースＤＮＡの１ｍＭ溶液（４３μｍｏｌ、４３ｍＬ）を、４０当量のＦｍｏｃ−１５アミノ−４,７,１０,１３−テトラオキサペンタデカン酸（２００ｍＭ ＤＭＦ溶液８.６ｍＬ）、次いで、４０当量の４−(４,６−ジメトキシ−１,３,５−トリアジン−２−イル)−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ、Acros）（２００ｍＭ水溶液８.６ｍＬ）でアシル化した。 該アシル化反応は、室温で１８時間行った。 完了後、該反応物をエタノールで沈殿させた。 次いで、凍結乾燥ペレットを水中１０％ピペリジン２０ｍＬに暴露することにより脱保護した。 脱保護生成物をエタノール中にて沈殿させ、逆相ＨＰＬＣにより精製して、下記化合物を得た。 プレライブラリー・プライマー・ライゲーション ヘッドピース（２０μｍｏｌ）を水１８ｍＬに溶解した。 伸長配列を加え（水中１ｍＭ溶液２８ｍＬ、１.４当量）、次いで、水（２５ｍＬ）および１０Ｘライゲーションバッファー（８ｍＬ、２ｍＭ ＡＴＰを含有）を添加した。 該溶液を１分間９５℃に加熱し、次いで、１０分間にわたって１６℃に冷却した。 次いで、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの溶液（８００μＬ、３０Ｕ／μＬ）を添加し、該ライゲーションを１６℃で１６時間インキュベートした。 ＤＮＡ生成物をエタノールで沈殿させ、さらなる精製は行わずにライブラリー合成の第１サイクルに用いた。 伸長配列の配列： 伸長したヘッドピースの配列： 標識 標識は、２つの２塩基３'オーバーハングが両側にある７塩基対コード領域を含有していた： ５'末端はすべてリン酸化された。 標識配列は、一定のＧ／Ｃ含量を有し、パリンドロームを有さず、ホモポリマーストレッチを有しないように設計された。 化学的構成要素 全ての化学的構成要素を貯蔵溶液として調製した（Ｆｍｏｃ−アミノ酸に対してＤＭＦ、アミンに対してＭｅＣＮ）。 貯蔵溶液をバーコード付追跡管（ペンシルベニア州マクマレーのMicronic North America, LLC）中にて−２０℃で貯蔵した。 サイクル１ サイクル２ サイクル３ ライブラリーの分析 精製したライブラリーのＵＶトレース、ライブラリーの正味のマススペクトログラムおよびライブラリーのデコンボリュートされた質量は、それぞれ、図６、７および８に見ることができる。 観察された平均質量は、３４,８３５ダルトンであり、予想された平均質量は、３４,７９５ダルトンであった。 ポストライブラリー・プライマー・ライゲーション プライマーライゲーションを、通常の条件を使用して１００ｎｍｏｌのアリコートに対して行った。 ポジティブコントロール合成 最後の工程を除いて文献に従ってポジティブコントロールＶＸ−６８０を合成した（例えば、J.-D. Charrier, F. Mazzei, D. Kay, A. Miller、ＷＯ ２００４／０００８３を参照）。 かくして、シクロプロパンカルボン酸｛４−[４−クロロ−６−(５−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ)−ピリミジン−２−イルスルファニル]−フェニル｝アミド（２０ｍｇ）および２−(ピペラジン−１−イル)酢酸ｔ−ブチル（１００ｍｇ）をＤＭＦ（１ｍｌ）と混合した。 該混合物にジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（０.４ｍｌ）を添加した。 反応混合物を１１０℃で１時間加熱した後、ＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。 溶媒を蒸発させて、粗生成物を得、さらに、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、所望の生成物を得た。 上記生成物を、ＴＩＰＳ（１４μｌ）の存在下、ジクロロメタン中５０％トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）で室温にて４時間処理した。 溶媒を蒸発させ、生成物をＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、純粋な生成物を得た。 ｐＨ９.４のリン酸バッファー中ヘッドピース溶液（１ｍＭ、１００μl、１００ｎｍｏｌ）にＤＭＦ（２０μl）中の小分子阻害剤（２ｍｇ、４μｍｏｌ、４０当量）を添加した。 該溶液を０℃に冷却し、水（２０μl）中ＤＭＴ−ＭＭ（１.２ｍｇ、４μｍｏｌ、４０当量）を添加した。 反応混合物を４℃で一夜撹拌した。 エタノールクラッシュにより粗生成物を得、ＲＰ−ＨＰＬＣでさらに精製して、所望の生成物を得た。 ＭＳ：(Ｍ−３)／３＝１８８９.９１（計算値１８９０.３）、(Ｍ−４)／４＝１４１７.４５（計算値１４１７.５）、(Ｍ−５)／５＝１１３３.９３（計算値１１３３.８）、(Ｍ−６)／６＝９４４.８７（計算値９４４.７）。 アフィニティー選択 オーロラＡキナーゼ選択実験（方法Ａ） オーロラキナーゼ選択実験（方法Ｂ） ｐ３８選択実験 選択バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、and １ｍＭ βＭＥ）中にて室温で１時間、ＤＥＬライブラリー（１１.７ｐＭ濃度の各ライブラリー分子）を５００ｎＭ Ｈｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒にインキュベートした。 該溶液をＩＭＡＣ樹脂（＞２０ｎｍｏｌのＨｉｓ標識タンパク質結合能；Phynexus）５μＬと一緒に５分間インキュベートし、次いで、選択バッファー１００μＬで１０回洗浄した。 タンパク質／結合ライブラリー分子を溶離するために、該樹脂をイミダゾールバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、１ｍＭ βＭＥ、および１００ｍＭイミダゾール）６０μＬと一緒に５分間インキュベートした。 該溶出液を７２℃で５分間加熱して、ｐ３８αタンパク質を変性させた。 ＩＭＡＣ樹脂上に変性タンパク質を再捕獲するために、溶出液を選択バッファーで１０倍希釈して、イミダゾール濃度を１０ｍＭに低下させた。 次いで、希釈溶出液をＩＭＡＣ樹脂（Phynexus）と一緒に１５分間インキュベートして、ＩＭＡＣ樹脂に結合した変性タンパク質およびライブラリー分子を取り出した。 後の回の選択は、先行の回からの溶出液を、２回目の選択については選択バッファー中２００ｎＭ Ｈｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒に、そして、３回目の選択については選択バッファー中０.２ｎＭ〜２００ｎＭ（１０倍間隔で）のＨｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒にインキュベートし、次いで、上記の洗浄および溶離工程を行うことにより行った。 溶出した分子を、選択分子のＤＮＡコードのＰＣＲ増幅のための鋳型として使用した。 解読 選択後、プライマー５'Ｏ（５'−ＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＣＣＣＡＡＡＴＣＧＡＴＧＴＧ−３'；４００ｎＭ；ＩＤＴ）および３'Ｏ（５'ＧＣＣＴＣＣＣＴＣＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＧＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＧ−３'；４００ｎＭ；ＩＤＴ）を使用して、ＰＣＲ（９５℃で５分間、次いで、９２℃で３０秒間；５５℃で１５秒間；７２℃で１５秒間のサイクルを２０回、次いで、７２℃で１０分間）によってライブラリー分子を増幅した。 ＰＣＲ生成物を精製して、プライマーおよびヌクレオチド（Qiagen）を除去し、配列決定した（４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。 化合物の合成 小分子の一般的な合成方法 注意：一般に、化合物合成の目的のためにサイクル１のアミノ酸をそれらのデス−カルボキシ類似体と交換した。 例えば、分子が最初のポジションでフェニルアラニンを用いてライブラリーから選択された場合、それは、フェネチルアミンを使用して合成された。 まれに、連結しているカルボキシアミドは、活性について重要であることが観察された。 １回目の置換 アセトニトリル：水性バッファー（２５０ｍＭボラート、ｐＨ９.４）（１：１）中にて塩化シアヌルおよびアミン＃１の８０ｍＭ貯蔵溶液を新しく調製した。 氷上で冷却した後、等量の２つの貯蔵溶液を合わせた。 混合するとすぐにモノ付加物が沈殿した。 得られたコロイド溶液を室温に加温した。 ２回目の置換 １０ｍＬ容器中にて上記モノ付加物溶液（１００μｍｏｌ）１.２５ｍＬ、１当量のアミン＃２、アセトニトリル５ｍＬ、およびＫ 2 ＣＯ 3 （過剰）５０ｍｇを合わせた。 該混合物を１時間撹拌した。 ３回目の置換 粗ジ付加物反応混合物にアミン＃３（５当量）５００μｍｏｌを添加した。 該反応混合物を室温で一夜放置した。 次いで、該溶液を濃縮し、１０％アセトニトリル（水溶液）５ｍＬ中にて復元し、逆相ＨＰＬＣにより精製して、生成物１８.１８ｍｇ（３８％）を得た。 生化学アッセイ オーロラキナーゼアッセイ ｐ３８キナーゼアッセイと同様の９６ウェルプレート放射測定キナーゼアッセイを使用して、オーロラキナーゼ活性の阻害について化合物をアッセイした。 ２ｎＭ活性ｐ３８キナーゼ（R&D Systems）を含有するアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ７.４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ 2 、２５ｍＭ β−ＧＰ、１ｍＭ ＤＴＴ、０.１ｍｇ／ｍｌ ＭＢＰ）でオーロラキナーゼ（Upstate）を予備希釈し、ウェルに添加し、次いで、１０％ＤＭＳＯを含むアッセイバッファー（アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度１％）で予備希釈した化合物を添加した。 化合物をキナーゼと一緒に室温で２０分間予備インキュベートした後、１０μＭ ＡＴＰ／０.０２μＣｉ／μｌ[γ−３３Ｐ]ＡＴＰの添加により反応を開始させた。 反応プレートを３０℃で４時間インキュベートした。 ２００ｍＭリン酸の添加により反応を停止させ、９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅホスホセルロース・フィルタープレートに移した。 該フィルタープレートを１００ｍＭリン酸で繰り返し洗浄して、過剰の[γ−３３Ｐ]ＡＴＰを除去し、次いで、該フィルターを乾燥させ、各ウェルにシンチレーション液（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ４０）２０μｌを添加した。 該フィルタープレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ−ＮＸＴシンチレーションカウンターで計数し、Ｐｒｉｓｍ曲線適合ソフトウエアを使用して該データを処理した。 Ｐ３８キナーゼアッセイ ９６ウェルプレート放射測定キナーゼアッセイを用いてｐ３８キナーゼ活性の阻害について化合物をアッセイした。 ２ｎＭ活性ｐ３８キナーゼ（R&D Systems）を含有するアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ７.４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ 2 、２５ｍＭ β−ＧＰ、１ｍＭ ＤＴＴ、０.１ｍｇ／ｍｌ ＭＢＰ）をウェルに添加し、次いで、１０％ＤＭＳＯを含むアッセイバッファー（アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度１％）で予備希釈した化合物を添加した。 化合物をキナーゼと一緒に室温で２０分間予備インキュベートした後、１０μＭ ＡＴＰ／０.０２μＣｉ／μｌ[γ−３３Ｐ]ＡＴＰの添加により反応を開始させた。 反応プレートを３０℃で４時間インキュベートした。 ２００ｍＭリン酸の添加により反応を停止させ、９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅホスホセルロース・フィルタープレートに移した。 該フィルタープレートを１００ｍＭリン酸で繰り返し洗浄して、過剰の[γ−３３Ｐ]ＡＴＰを除去し、次いで、該フィルターを乾燥させ、各ウェルにシンチレーション液（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ４０）２０μｌを添加した。 該フィルタープレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ−ＮＸＴシンチレーションカウンターで計数し、Ｐｒｉｓｍ曲線適合ソフトウエアを使用して該データを処理した。 濃度対阻害パーセントのグラフを図９に示す。 Ｐ３８ビアコア・アッセイ ビアコアＣＭ５チップを使用して、１０μＭ ＳＢ２０３５８０の存在下で、Casper（Analytical Biochem. 2004, 325: 126-136）によって記載されるような標準的なアミンカップリングによりｐ３８ａ表面を調製し、次いで、続く洗浄工程で除去した。 公表されたプロトコールに対して行われた唯一の変更は、活性ｐ３８を使用し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５.０を含有するバッファーを用いて固定化したことであった。 固定化レベルは、３０００〜５０００共鳴単位（ＲＵ）の範囲であった。 非誘導化フローセルは、参照表面としての役割を果たした。 速度定数および解離定数は、データをＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに適合させることによって算出した。 使用した異なるチップの各々を、最初に、ＳＢ２０３５８０の非リン酸化ｐ３８への結合について報告された１１ｎＭの数値（Casper）と同様に本願の系ではＫｄ＝５ｎＭを有したＳＢ２０３５８０を使用してアッセイした。 細胞アッセイ ＨＣＴ−１１６ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ ＨＣＴ１１６（ヒト結腸直腸癌細胞）を用いるオーロラＡ化合物についての細胞増殖アッセイをＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した（Ｃａｔ. Ｎｏ. ＣＣＬ−２４７、メリーランド州ロックビル）。 ３７℃で９５％空気および５％ＣＯ 2の加湿インキュベーター中にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Omega Scientific、カリフォルニア州ターザナ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Gibco/Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド）を補充したＭｃＣｏｙ'ｓ ５Ａ中の単層培養物中に細胞を保持した。 トリプシン化により単一細胞懸濁液を調製して、それらの各培養培地中にて１ｍＬ当たり１.２５Ｅ４細胞を得た。 ９６ウェルプレートに２００μｌ／ウェルの細胞懸濁液を播種して、初期播種密度２５００細胞／ウェルを得た。 該プレートを組織培養インキュベーター（５％ＣＯ 2 、３７℃）中に一夜置いて、細胞を付着させた。 試験化合物の段階希釈液を１０ｍＭ貯蔵溶液から培養培地中にて最終濃度で調製し、三重にアッセイした。 試験化合物を有するウェル中のＤＭＳＯの濃度に相当する０.１％ｖ／ｖＤＭＳＯに培養培地を調整することによってビヒクルを調製した。 次いで、試験プレートを３日間組織培養インキュベーター（５％ＣＯ 2 、３７℃）中に置いた後、ＭＴＴアッセイを行った。 ＭＴＴアッセイは、生成物を分光光度法で測定するＭＴＴにおけるテトラゾリウム環の細胞デヒドロゲナーゼ酵素開裂に基づく細胞生存率の測定である。 ＰＢＳ中にて調製した５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ（３'[４,５−ジメチルチアゾール−２−イル]−２,５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド、Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ. Ｎｏ. Ｍ２１２８）の２５μＬアリコートをウェルに直接添加した。 該プレートを３７℃で２時間インキュベートし、ＭＴＴ溶液を除去し、イソプロパノール１５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間振動させた。 Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎプレート分光光度計で５７０ｎｍにてウェルの光学密度を定量化した。 二重の測定値の平均値を求めた。 結果は、対照からのＯＤシグナルのパーセントとして表される。 ヒトＴＨＰ−１細胞株におけるＬＰＳ誘発性ＴＮＦα生産 ＴＨＰ−１（ヒト、単球）細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ. Ｎｏ. ＴＩＢ ２０２）から購入した。 ３７℃で９５％空気および５％ＣＯ 2の加湿インキュベーター中にて、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Omega Scientific、カルフォルニア州ターザナ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Gibco/Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド）を補充したＲＰＭＩ １６４０（GIBCO）中にて１週間に３回、細胞を継代した。 該アッセイのために、ＴＨＰ−１細胞を収穫し、計数し、培養培地中にて１ｍｌ当たり１Ｅ６細胞で懸濁した。 細胞懸濁液２００μｌを９６ウェルプレートにて各ウェルに添加して、１ウェルにつき２×１０ 5細胞の密度を得た。 １０ｍＭ貯蔵溶液から培養培地中にて最終濃度でＰ３８化合物の段階希釈液を調製し、三重にアッセイした。 試験化合物を有するウェル中のＤＭＳＯの濃度に相当する０.１％ｖ／ｖＤＭＳＯに培養培地を調整することによってビヒクルを調製した。 Ｐ３８阻害物質の存在下で３０分間、細胞をインキュベートした。 その後、５％ＣＯ 2 −インキュベーター中にて３７℃で４時間、細胞をＬＰＳ（イー・コリ（E.coli） ０２６：Ｂ６、１μg／ｍｌ）で刺激した。 試料を氷上に置き、４℃にて１５００×ｇで１０分間遠心分離することによって反応を停止させた。 細胞上清を収穫し、製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡ（BD Pharmingen、カリフォルニア州サンディエゴ、Ｃａｔ. Ｎｏ. ５５５２１２）によってＴＮＦの濃度を測定した。 分光光度ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＣＣ／３４０）にて４５０ｎｍで吸光度を測定および分析した。 二重の測定値の平均値を求めた。 結果を対照からのＯＤシグナルのパーセントとして表す。 |
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