Synthesis and screening methods for inhibitors of bacterial nad synthetase enzyme, methods of treating bacterial and microbial infections using the compounds, as well as inhibitors of bacterial nad synthetase enzyme

【発明の詳細な説明】

【０００１】 関連出願への相互参照 本願は、1998年8月25日に出願された米国仮出願、出願番号60/097,880および1
998年1月14日に出願された米国仮出願、出願番号60/071,399の優先権を主張する。 これら言及した仮特許出願の両方の内容は、ここで言及したことでその全体が本明細書に組み込まれるものである。

【０００２】 政府の関与に関するステートメント 本明細書の発明に寄与する研究のあるものは、米国国防省、アドバンスト・リサーチ・プロジェクツ・エージェンシーからの助成金によって一部支援された。

【０００３】 発明の背景 I. 発明の分野 本発明は、抗菌および抗微生物剤に関する。 特に、本発明は、細菌ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）シンテターゼ酵素阻害剤である化合物の合成およびスクリーニング方法を提供する。 本発明はまた、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を阻害する新規化合物を提供する。 本発明はまた、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤を含む化合物のライブラリーを提供する。 さらに、本発明は、抗菌剤、抗微生物剤および広域抗生物質として治療活性を示す化合物を提供する。
さらにまた本発明は、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を用いる哺乳類の治療方法を提供する。 本発明はまた新規な消毒薬を提供する。

【０００４】 II. 発明の背景 薬剤耐性感染性細菌、すなわち、現在存在する抗菌性および抗微生物性化合物では死滅または阻害されない細菌が、憂慮すべき重大な世界的な健康問題となっている (E. Ed. Rubenstein, Science , 264 , 360 (1994))。 実際、代替の薬物治療法がわからなければ、多くの細菌性感染症は近いうちに治療不可能となるかもしれない。

【０００５】 抗微生物剤または抗菌剤耐性は、５０年近く前にペニシリンが導入されて以来認識されてきた。 当時、黄色ブドウ球菌( Staphylococcus aureus )によるペニシ リン耐性感染症がすぐに出現した。 今日、世界中の病院が、現在一般に使用されている抗微生物剤および抗菌剤の１つ以上に対して耐性の微生物がすぐに出現し伝播することによる前例のない危機に直面している。 米国国立衛生研究所、アレルギーおよび感染性疾患国立研究所の抗微生物剤耐性に関する概況報告書(Fact
Sheet on Antimicrobial Resistance of the National Institute of Allergy a
nd Infectious Diseases, National Institutes of Health)で述べられているように、抗生物質耐性細菌の幾つかの株が今や出現し、人類および動物全体に対する脅威となりつつあるが、以下に要約するものがこれに含まれる。

【０００６】 1) メチシリンおよびその他の抗生物質に対して耐性の黄色ブドウ球菌の株は病院に特有である。 メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)株による感染は病院以外の環境においても増加している可能性がある。 バンコマイシンはMRSA感染に対して有効な唯一の処置である。 特に問題とされているのは、バンコマイシンに対する感受性が低下した黄色ブドウ球菌株が近年日本および米国で出現していることである。 バンコマイシン耐性株の出現は医師および患者にとって重大な問題を生じさせるだろう。

【０００７】 2) バンコマイシンに対する依存度の増加は、外傷、尿管およびその他の部位に感染する細菌であるバンコマイシン耐性腸球菌(VRE)の出現をまねいた。 1989年 までこのような耐性は米国の病院で報告されていなかった。 しかし、1993年までに、国立疾病対策センター(Centers for Disease Control) ("CDC")に報告され た院内腸球菌感染の１０％を越えるものが耐性であった。

【０００８】 3) ストレプトコッカス・ニュモニエ(Streptococcus pneumoniae )は、米国において毎年、数千例の髄膜炎および肺炎を引き起こし、７００万例の耳の感染症を引き起こしている。 現在、ストレプトコッカス・ニュモニエ分離株の約３０％が、この感染を治療するために用いられる第一選択薬であるペニシリンに対して耐性である。 多くのペニシリン耐性株は他の抗微生物剤または抗菌剤に対しても耐性である。

【０００９】 4) 多剤耐性結核(multi-drug resistant tuberculosis, MDR-TB)の株がここ１ ０年間で出現し、HIVに感染した人々に特に脅威をもたらしている。 薬剤耐性株 は、薬剤感受性株と同程度に伝染性である。 MDR-TBは治療がより困難であり、治療に非常に多くの費用がかかり、患者は不十分な治療によってより長い間感染状態が続くことがある。 マイコバクテリウム・ツベルクローシス( Mycobacterium t uberculosis )の多剤耐性株もまた、米国を含めた幾つかの国で出現している。

【００１０】 5) 下痢疾患は、シゲラ・ディセンテリエ( Shigella dysenteriae )、カンピロバクター( Campylobacter )、ビブリオ・コレラ( Vibrio cholerae )、大腸菌( Escheri chia coli )およびサルモネラ( Salmonella )のような病原性の高い細菌の耐性株が出現している開発途上国において主に、年間ほぼ３００万人の死者を出している。 さらにまた、最近米国においてサルモネラ食中毒が発生している。 アンピシリン、サルファ剤、ストレプトマイシン、テトラサイクリンおよびクロラムフェニコールに対して耐性であるサルモネラ・チフィムリウム( Salmonella typhimuriu m )として知られている潜在的に危険な「スーパーバグ(superbug)」が、ヨーロッパ、カナダおよび米国で疾病を引き起こしている。

【００１１】 抗微生物剤または抗菌剤耐性は、その公衆の健康に対する悪影響に加えて、医療費の増加の一因となっている。 耐性感染症の治療には、しばしばより高価な、
またはより毒性の高い薬物を使用する必要があり、感染患者がより長期間入院する原因となり得る。 米国科学アカデミー(the National Academy of Sciences)の部会である米国医学研究所(the Institute of Medicine)は、米国内における抗 生物質耐性感染症の治療のための年間コストが３００億ドルにものぼるだろうと概算した。

【００１２】 上記の点を考慮すると、現在使用されている抗菌剤および抗微生物剤とは異なるメカニズムにより作用する新規な抗菌剤および抗微生物剤が非常に望まれている。 さらに、このような新規化合物を合成できることが望まれる。 また、細菌Ｎ
ＡＤシンテターゼ阻害活性を示す化合物のライブラリーを開発することも望まれる。 このような新規薬剤は、細菌およびその他のタイプの有害微生物の抗生物質耐性株に対抗するために有用であるだろう。 さらにまた、細菌の必須代謝機構を阻害またはブロックし、その結果、哺乳類宿主の必須代謝活性に影響を及ぼすことなく、細菌の死または不活性化に到らせる抗菌剤を開発することが望まれる。
すなわち、細菌および他の微生物を優先的に攻撃し、ヒトまたは動物の患者において望ましくない副作用を伴うことなく、有害生物を死滅させるまたは不活性化する抗菌剤を開発することが望まれる。 また可能性のある新規な抗微生物剤および抗菌剤を迅速にスクリーニングする方法を開発することも望まれる。 また新規な消毒薬を開発することも望まれる。

【００１３】 発明の要旨 一つの側面において、本発明は次式で表されるＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物を提供する。

【００１４】

【００１５】

【００１６】

【００１７】

【００１８】

【００１９】

【００２０】

【００２１】

【００２２】

【００２３】

【００２４】

【００２５】

【００２６】

【００２７】

【００２８】

【００２９】

【００３０】 さらに別の側面において、本発明は構造２：

【００３１】

【００３２】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はそれぞれ独立して、Ｈ、
無置換または置換された環状または脂肪族基、分岐したまたは分岐していない基であり、リンカーは環状または脂肪族の分岐したまたは分岐していない、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基であり、当該リンカーはヘテロ原子を含んでいてもよい。 ）を有する、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を提供する。

【００３３】 さらにまた別の側面において、本発明は構造４：

【００３４】

【００３５】 （式中、Ｘは単環式または二環式部分内のＣ、Ｎ、ＯまたはＳであり、ＡおよびＢはリンカーに結合するそれぞれの部位を示し、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ１〜Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｈ、無置換または置換された環状基または脂肪族基、または分岐したまたは分岐していない基であり、リンカーは飽和または不飽和の環状基または脂肪族の分岐したまたは分岐していない、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基であり、当該リンカーはヘテロ原子を含んでいてもよい。）を有する、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を提供する。

【００３６】 さらに本発明は、治療有効量または予防処置量の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を哺乳類に投与することを含む、哺乳類における微生物感染を治療または予防する方法を提供する。 さらにまた、ＮＡＤの産生を減少させるかまたはなくし、それにより原核生物が死滅する量の原核生物ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤を用いて、原核生物を死滅させる方法が提供される。 さらに、ＮＡＤの産生を減少させるかまたはなくし、それにより原核生物の増殖を減少させるのに有効な量の原核生物ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤に原核生物を接触させることを含む、原核生物の増殖を減少させる方法が提供される。 さらに、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤を含む消毒薬化合物が提供される。 さらにまた本発明は、微生物で汚染された物を、当該微生物を死滅させるかまたは不活性化するのに十分な量の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物と接触させることを含む、微生物で汚染された物を消毒する方法を提供する。

【００３７】 さらにまた別の側面において、本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． ５−ニトロインドールを６−ブロモヘキシル アセタートでアルキル化して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル アセタートを形成する工程； ｂ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル アセタートを加水分解して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキサン−１−オールを形成する工程； ｃ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキサン−１−オールをニコチン酸でエステル化して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル ニコチナートを形成する工程；および ｄ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル ニコチナートをＮ−
メチル化する工程。

【００３８】 さらに、本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． ５−ニトロインドールをブロモアルキル アセタートでアルキル化し、得られたインドールアルキル アセタートをインドールアルキル アルコールに変換する工程； ｂ． 当該インドールアルキル アルコールを適当な試薬と反応させて、インドールアルキル エステルを形成する工程；および ｃ． Ｎ−

【００３９】 さらに、本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． インドールカルボン酸を適当な試薬と反応させて、インドールカルボン酸メチルエステルまたはインドールベンジルカルボン酸エステルを得る工程； ｂ． 当該インドールカルボン酸メチルエステルまたはインドールカルボン酸ベンジルエステルをブロモアルキル アセタートでＮ−アルキル化する工程； ｃ． 上記工程ｂで得た物質を適当な試薬と反応させて、インドールアルキル アルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドールアルキル アルコールを芳香族アミンとカップリングする工程；および ｅ． 当該インドールアルキル アルコールを適当な試薬と反応させて、当該メチルまたはベンジル インドールカルボキシラートをそれぞれインドールカルボン酸に変換する工程。

【００４０】 別の側面において、本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． アニリンをＮ−ブロモスクシンイミドで臭素化して、２−ブロモ−Ｒ ¹ −置 換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを形成する工程； ｂ． 当該２−ブロモ−Ｒ ¹ −置換−アニリンまたは当該２−ブロモ−Ｒ ² −置換−
アニリンを、ヘックカップリング反応(Heck coupling reaction)を用いて反応させて、アルキン−置換アニリンを形成する工程； ｃ． 当該アルキン−置換アニリンを、環化反応を用いて反応させて、インドール アルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドール アルコールを、アミンを用いて四級化する工程； ｅ． 当該インドール アルコールをメタンスルホニル クロリドと反応させて、
インドール メシラートを得る工程；および ｆ． 当該インドール メシラートをカルボン酸と反応させて、インドール エステルを形成する工程。

【００４１】 さらにまた、本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． アニリンをＮ−ブロモスクシンイミドで臭素化して、２−ブロモ−Ｒ ¹ −置 換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを形成する工程； ｂ． 当該２−ブロモ−Ｒ ¹ −置換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを、ヘックカップリング反応を用いて反応させて、アルキン−置換アニリンを形成する工程； ｃ． 当該アルキン−置換アニリンを、環化反応を用いて反応させて、インドール アルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドール アルコールを、アミンを用いて四級化する工程； ｅ． 当該インドール アルコールをトリフルオロメチルスルホン酸無水物と反応させて、トリフラートを得る工程；および ｆ． 当該インドール トリフラートをアミンと反応させて、インドール アルキルアンモニウム生成物を形成する工程。

【００４２】 さらにまた別の側面において、本発明は、次の工程を含む、少なくとも１つの細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を含むライブラリーを構築する方法を提供する。 ａ． 細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の結晶構造を得る工程； ｂ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の１つ以上の触媒活性のサイトを決定する工程； ｃ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒サイトの化学構造を決定する工程； ｄ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒サイトの少なくとも１つに対して親和性を示すであろう１つ以上の活性分子を選択する工程； ｆ． 少なくとも１つの活性分子を含み、当該活性分子化合物がｎ個のリンカー化合物（ここで、ｎは１から１２までの整数である）によって結合されている１つ以上のダイマー化合物を合成する工程；および ｇ． 当該１つ以上の化合物を、ＮＡＤシンテターゼ阻害剤活性についてスクリーニングする工程。

【００４３】 本発明のさらに別の側面においては、次の工程を含む、化合物を細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性についてインビトロスクリーニングする方法が提供される。 ａ． 純粋な細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を適当な緩衝液と混合することにより、
細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素溶液を調製する工程； ｂ． 当該細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素溶液を試験化合物と接触させる工程；および ｃ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素と当該試験化合物との間の酵素触媒反応の速度を測定する工程、ここで酵素触媒反応の速度は、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性値を含む。

【００４４】 本発明のさらなる有利な点は、一部は以下の説明の中で述べられ、また一部は当該説明から自明であるだろうし、あるいは本発明を実施することにより知ることができるだろう。 本発明の有利な点は、添付の請求の範囲の中で特に示した要素および組合わせによって実現されまた達成されるであろう。 前述の包括的な説明および以下の詳細な説明は共に単に例および説明のためであり、請求された発明を限定するものではないと理解すべきである。

【００４５】 発明の詳細な説明 本発明は、以下の発明の好ましい実施態様の詳細な説明および本明細書中に含まれる実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。

【００４６】 本方法、化合物、組成物および装置を開示し説明する前に、本発明が本明細書中に記載された特定の合成方法に限定されないことが理解されるべきである。 さらに、本明細書中で用いられる用語は特定の実施態様を説明する目的のためだけのものであって、限定する意図はないことが理解されるべきである。 明細書および添付の特許請求の範囲で用いられているように、単数形“ａ”“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、文脈がそれ以外のことを明確に指し示さない限り、複数の指示対象を包含することを留意しなければならない。

【００４７】 本明細書において範囲は、「約」ある特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして表現され得る。 そのような範囲が表現される場合、別の実施態様は、そのある特定の値からおよび／またはその別の特定の値までを含む。
同様に、この先行する「約」という語を用いることにより値が近似値として表現される場合、その特定の値が別の実施態様を構成することが理解されるだろう。

【００４８】 本出願全体を通じて、化学式が、化学構造から出る直線を有する場合、そのような線はＣＨ ₃基を表す。 例えば、次の式は、ｏ−メチル安息香酸を表す。

【００４９】

【００５０】 本明細書中で用いられる「アルキル」なる語は、例えば、メチル、エチル、ｎ
−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、オクチル、
デシル、テトラデシル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシル等の、炭素原子数１から２４の分岐したまたは分岐していない飽和炭化水素基をいう。 「シクロアルキル」なる語は、炭素原子数３から８までの、好ましくは５または６の環状アルキル基を意味する。

【００５１】 本明細書中で用いられる「アルコキシ」なる語は、単一の末端エーテル結合を介して結合されたアルキル基を意味する。 つまり、「アルコキシ」基は−ＯＲ（
ここでＲは上記で定義されたアルキルである）として定義され得る。 「低級アルコキシ」基は、１から６個までの、より好ましくは１から４個までの炭素原子を含むアルコキシ基を意味する。

【００５２】 本明細書中で用いられる「アルキレン」なる語は、二官能基性で飽和の、分岐したまたは分岐していない、１から２４個までの炭素原子を含む炭化水素鎖をいい、例えば、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２−ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−）、２−メチルプロピレン［−ＣＨ２−Ｃ
Ｈ（ＣＨ３）−ＣＨ２−］、ヘキシレン［−（ＣＨ２）６−］等を含む。 本明細書中で用いられる「シクロアルキレン」なる語は、環状アルキレン基、典型的には５または６員環をいう。

【００５３】 本明細書中で用いられる「アルケン」なる語は、炭素原子数２から２４の、モノ不飽和またはジ不飽和炭化水素基を意味する。 （ＡＢ）Ｃ＝Ｃ（ＣＤ）のような非対称構造は、ＥおよびＺ異性体の両方を含むことを意図する。 このことは、
本明細書中の非対称アルケンが存在する構造式において推定することができる。

【００５４】 本明細書中で用いられる「アルキニル」なる語は、炭素原子数１から２４の分岐したまたは分岐していない不飽和炭化水素基をいい、ここで当該基は少なくとも１つの三重結合を有する。

【００５５】 本明細書中で用いられる「環状」なる語は、１個以上の閉じた環で特徴付けられる構造を意味する。 本明細書中でさらに用いられるように、本明細書中で論じられる環状化合物は、飽和または不飽和であってよく、ヘテロ環であってもよい。 ヘテロ環とは、好ましくは５または６員の閉じた環構造であって、環中の１個以上の原子が炭素以外の元素（例えば、硫黄、窒素等）である、閉じた環構造を意味する。

【００５６】 本明細書中で用いられる「二環式」なる語は、２個の閉じた環を有する構造を意味する。 本明細書中でさらに用いられるように、二環式構造中の２個の環は同一でも異なっていてもよい。 二環式構造の環のいずれかがヘテロ環であってもよい。

【００５７】 本明細書中で提供される化合物の「有効量」なる語は、所望の治療または予防効果を与えるのに十分な化合物の量を意味する。 後記で指摘するように、必要とされる正確な量は、対象の種、年齢および一般状態、治療する疾患の重篤度、使用する特定の化合物、投与方法等に依存して、対象ごとに変化する。 従って、正確な「有効量」を特定することはできない。 しかしながら、適切な有効量は、ルーチンの実験法のみを用いて当業者により決定され得る。 有効量は対象にとって実質的に非毒性であることが好ましいが、より高用量が必要とされる状況では、
ある程度の毒性が許容され得ることが意図される。

【００５８】 「薬学的に許容される担体」なる語は、生物学的にまたはその他の意味で望ましくないものではない物質（すなわち、その物質が、どんな望ましくない生物学的効果も引き起こすことなく、またその物質が含まれている医薬組成物中の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用することなく、本発明化合物と共に個体に投与することができる）を意味する。

【００５９】 本明細書中で用いられるように、「ＮＡＤシンテターゼ酵素」は、ＮＡＤの生合成における最終反応、つまり、ＮａＡＤのＮＡＤへの変換を触媒する酵素として定義される。 本明細書中で用いられるように、「触媒サイト」なる語は、ＮＡ
Ｄシンテターゼ酵素の部分であって、細菌または微生物において、基質、ならびに補因子〔ニコチン酸ジヌクレオチド（ＮａＡＤ）、ＮＡＤ、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、ピロホスフェート、マグネシウムおよびアンモニアを含む〕に結合する部分として定義される。 「レセプターサイト」または「レセプターサブサイト」なる語は、本明細書中で開示される細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤が結合すると考えられている、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の部分のことをいう。 この開示の目的のために、「触媒サイト」、「
レセプターサイト」および「レセプターサブサイト」なる語が、互いに交換可能に用いることができる。

【００６０】 本明細書中で用いられる「ライブラリー」および「化合物のライブラリー」なる語は、異なった化合物の意図的に作製された集まりを意味し、当該化合物は本明細書中で提供される合成手段によって製造可能であるか、または、当分野で利用される合成方法を用いる別の方法で作製することが可能である。 ライブラリーは、（本明細書中以下で開示されるような）任意の種々の方法だけでなく、化合物の生物学的活性を評価するのに有用な他の方法で、生物学的活性について、スクリーニングすることができる。 当業者は、本明細書中のライブラリーを構築するのに使用される手段が、一般にコンビナトリアルケミストリー法（ Gallopら、
「コンビナトリアルテクニックの薬物発見への適用」("Applications of Combin
atorial Techniques to Drug Discovery")、「パート１ 背景およびペプチドコンビナトリアルライブラリー」("Part 1 Background and Peptide Combinatoria
l Libraries")、および「パート２：コンビナトリアル有機合成、ライブラリー スクリーニングストラテジーおよび将来の方向」("Part 2: Combinatorial Org
anic Synthesis, Library Screening Strategies, and Future Directions")、 J . Med. Chem. , Vol. 37(1994) pp. 1233 および 1385に開示されるような）を含むことを理解するだろう。本明細書中で用いられるように、「コンビナトリアルケミストリー」または「コンビナトリアル法」なる語は、多数の多様な分子物(m
olecular entities)を提供するために、様々な構造の異なる「ビルディングブロック」（例えば本明細書中で開示される活性分子）の一群を、系統的かつ反復的に共有結合により結合することとして定義される。 本明細書中で意図されるように、多数の多様な分子物が一体となって、本発明の化合物のライブラリーを構成する。

【００６１】 本明細書中で用いられる「抗菌性化合物(antibacterial compound)」なる語は、対象に対するまたは系内における細菌の有害効果を減少させるかまたはなくすために、細菌または微生物を死滅させるかまたは不活性化する物質を意味する。
そのような物質は、「静菌剤(bacteriostatic agents)」または「殺菌剤(bacter
iocidal agents)」としても当分野で知られている。 そのような効果が発揮され る細菌は、グラム陽性菌、グラム陰性菌またはそれらの組み合わせであり得る。
「抗微生物性化合物(antimicrobial compound)」および「広域抗生物質」なる語は、多種多様な微生物を死滅させるかまたは不活性化する物質を意味し、このような微生物には、グラム陽性またはグラム陰性の細菌、黄色ブドウ球菌( Staphyl ococcus aureus )、化膿連鎖球菌( Streptococcus pyogenes )、ヴィリダンス型連 鎖球菌( Streptococcus viridans )、腸球菌( Enterococcus )、嫌気性連鎖球菌( ana erobic Streptococcus )、肺炎球菌( Pneumococcus )、淋菌( Gonococcus )、髄膜炎 菌( Meningococcus )、 Mima 、炭疽菌( Bacillus anthracis )、ジフテリア菌( C. dip htheriae )、リステリア・モノシトゲネス( List. monocytogenes )、 Streptobacil lus monohiliformis 、豚丹毒菌( Erysipelothrix insidiosa )、大腸菌( E. coli ) 、 A. aerogenes 、アルカリゲネス・フェカーリス( A. faecalis )、プロテウス・ ミラビリス( Proteus mirabilis )、緑膿菌( Pseudomonas aeruginosa )、肺炎桿菌( K. pneumoniae )、サルモネラ( Salmonella )、シゲラ( Shigella )、インフルエンザ菌( H. influenzae )、デュクレー菌( H. ducreyi )、ブルセラ( Brucella )、ペスト 菌( Past. pestis )、野兎病菌( Past. tularensis )、パスツレラ・ムルトシダ( Pas t. multocida )、 V. comma 、鼻疽菌( Actinobacillus mallei )、偽鼻疽菌( Pseud. pseudomallei )、破傷風菌( Cl. tetani )、バクテロイデス( Bacteroides )、紡錘菌
( Fusobacterium fusiforme )、結核菌( M. tuberculosis )、非定型抗酸菌( atypica l mycobacteria )、イスラエル放線菌( Actinomyces israelii )、ノカルジア( Noca rdia )、梅毒トレポネーマ( T. pallidum )、 T. pernue 、回帰熱ボレリア( Borrelia recurrentis )、 Peptospira 、リケッチア( Rickettsia )および肺炎マイコプラズ マ( Mycoplasma pneumoniae )の１つ以上が含まれるが、これに限定されるもので はない。

【００６２】 改良された抗菌剤および抗微生物剤を開発することに対する要望に従って、本発明により、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素活性を阻害する新規化合物が同定された。 そのような活性は、広域抗生物質として有効であるのと同様に、殺菌剤としても有効である。 細菌のような原核生物における、それまで認識されていなかったターゲットを阻害して、必須の生物学的機能をブロックし、そしてそれにより、細菌の死を引き起こすか、または細菌もしくは他の微生物を不活性化する新規化合物が開発された。 詳細には、本発明は、グラム陽性菌およびグラム陰性菌の両方に見出される酵素であるＮＡＤシンテターゼ酵素を同定した。 当該酵素は、
細菌感染またはその他の微生物感染の防御および／または治療を提供するためのドラッグデザインのターゲットとして利用することができる。

【００６３】 ＮＡＤシンテターゼ酵素はニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）
の生合成の最終段階を触媒する。 細菌ＮＡＤシンテターゼは、「Ｎタイプ」ＡＴ
Ｐピロホスファターゼ類のファミリーに属する、アンモニア依存性のアミドトランスフェラーゼである。 このファミリーはアスパラギンシンテターゼおよびアルギニノコハク酸シンテターゼも含む。 ＮＡＤシンテターゼ酵素は、ＮＡＤ ⁺生合 成のデノボ経路およびサルベージ経路の両方の最終段階を触媒し、ＡＴＰおよびＭｇ ⁺²の存在下でニコチン酸アデニンジヌクレオチド（ＮａＡＤ）のカルボキシラートへのアンモニアの転移に関与する。 全体の反応をスキーム１に示す。

【００６４】

【００６５】 真核生物の（つまり哺乳類および酵母に見出されるＮＡＤシンテターゼであって、窒素源としてグルタミンを利用することができる）ＮＡＤシンテターゼとは異なり、細菌における原核生物のＮＡＤシンテターゼは、アンモニアを唯一の窒素源として利用する。 Ｘ線結晶学およびその他の方法によって、本発明は真核生物型および原核生物型のＮＡＤシンテターゼ酵素の構造における顕著な差異を同定した。 例えば、本発明において結晶化され、本明細書中でドラッグデザイン方法論に使用された枯草菌( B. subtilis )のＮＡＤシンテターゼ酵素は、分子量約 ６０，５００の二量体物質である。 それとは大きく異なり、酵母および哺乳類で見出される真核生物型のＮＡＤシンテターゼは多量体(multimeric)であり、少なくとも１０倍も大きな分子量を有する。

【００６６】 ＮＡＤシンテターゼ酵素の真核生物型と原核生物型との間の顕著な差異を利用することによって、本発明は、哺乳類宿主にも影響を及ぼすことなく、原核生物のＮＡＤシンテターゼ酵素を特異的に標的とする、抗菌剤および抗微生物剤として利用可能な新規化合物を提供する。 本発明により、細菌ＮＡＤシンテターゼの酵素活性を特異的に阻害することによって、成長および複製するために必要なエネルギーを細菌から奪うことが可能であることが見出された。 従って、本明細書中で開示され特許請求された発明により、同じ投与量で哺乳類のＮＡＤシンテターゼの酵素活性に対して容易に感知できる程度に影響を及ぼすことなく、細菌の有害な特性を減少させるかまたはなくすために細菌を優先的に攻撃して死滅させるかまたは不活性化する抗菌薬および抗微生物薬が開発された。 さらには、化合物を細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性について高速スクリーニング(rapid s
creening)することを可能にする新規な方法が提供される。 さらに本発明は、対 象における微生物感染の治療方法を提供する。

【００６７】 理論に拘束されることなく、化学分析およびＸ線結晶学法によって、細菌ＮＡ
Ｄシンテターゼ酵素上の少なくとも２つの別個の触媒サブサイトが特徴付けられた。 このサブサイトにおいて、少なくとも１つまたはそれ以上の小分子(small m
olecule)（「活性分子」）が結合可能である。 これらのサイトを、図２の画像により以下に例示する。

【００６８】

【００６９】 これらの触媒サイトは特定の構造を有するため、これらのサイトの少なくとも１つに親和性を示すであろう小分子を同定することが可能であるという結論が出された。 これらの触媒サイト（単数または複数）の構造によって決定される適切な立体配置をとる小分子が、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素上の１つまたは複数のレセプターサイトと結合し、それにより酵素の触媒活性をブロックするだろう。
図４は、本発明の化合物の一例によって触媒サイトがブロックされている細菌Ｎ
ＡＤシンテターゼ酵素を画像により例示する。

【００７０】

【００７１】 このような状況下で、芽胞形成細菌は発芽および生長を遂げることができず、
栄養細菌(vegetative bacteria)の必須細胞呼吸機能が停止されることにより、 細胞の死または不活性化がもたらされるだろう。 例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性菌ならびにその他の微生物は死滅するかまたは増殖が妨げられるだろう。 従って、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素に対して阻害活性を示す化合物は、広域抗生物質としてだけでなく、抗菌性化合物および抗微生物性化合物としての治療活性も示すであろうということを、本発明は見出した。

【００７２】 本発明により、驚くべきことに、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤として活性を示すであろう新規の繋がれた(tethered)ダイマー化合物が合成可能であることが見出された。 １つ以上の活性分子をリンカー分子を介して連結することによって、繋がれたダイマーの１つ以上の端部が個々のレセプターサイトまたはサブサイトに結合することが可能であり、それにより細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を不活性化する。 ２以上の活性分子が使用される場合、各活性分子は同一でも異なっていてもよい。 本明細書中で用いられる「活性分子」なる語は、単独で使用され得るか、または、リンカー（繋ぎ(tether)）フラグメントを介して一体に繋がれ、繋がれたダイマー化合物を形成してもよい小分子をいう。

【００７３】 本発明において、活性分子は、以下に開示されるような、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素のレセプターサイトのうちの少なくとも１つに結合するであろう置換基から構成される。 本発明において、１つ以上の活性分子が一体に繋がれて、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を阻害することができるダイマー分子を形成する。

【００７４】 さらに、本発明において、ある状況下においては、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素のレセプターサイトの異なった位置に異なった活性分子がより結合しやすいであろうということが見出された。 それは、これらのサイトのそれぞれの化学的構造が異なっているためである。 従って、一つの実施態様では、少なくとも２つの異なる活性分子を互いに繋ぐことが有利であって、各活性分子はレセプターの異なるサブサイトに対して選択的親和性を示す。 本明細書中の繋がれたダイマーを用いることは、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の単一のサイトをブロックすることに比べて、ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害の効力を強力に高めることが可能である。 本明細書中で用いられるように、「選択的親和性」なる語は、レセプターサブサイトと活性分子との間の化学的相補性のために、活性分子が、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素におけるレセプターの１つのサブサイトに結合する傾向をいっそう高く示すことを意味する。 繋がれたダイマー化合物を以下のスキーム２に例示する。

【００７５】

【００７６】 一つの実施態様では、ダイマー阻害剤化合物が、例えば、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒活性のサイトに結合し、それにより細菌によるＮＡＤ／ＮＡＤ
Ｈの産生を妨げる。 本発明におけるさらに驚くべき知見として、リンカー分子の長さを変化させることにより、従って、２つの活性分子間の距離を変化させることにより、繋がれた阻害剤化合物のＮＡＤシンテターゼ酵素に対する親和性も変動し得るという結論が出された。

【００７７】 新規のＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物のデザインに関連する本発明の実施において、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の少なくとも１つのレセプターサブサイトに結合する能力を持つ市販の小分子を同定することを可能にするために、タンパク質に対する分子の結合親和性の予測を容易にするソフトウェアプログラムを利用することができる。 そのようなコンピュータープログラムの一例がＤＯＣ
Ｋであり、これはカリフォルニア大学サンフランシスコ校の薬化学部から入手可能である。 ＤＯＣＫは、小分子と高分子の結合サイトとの間の化学的および幾何的相補性を評価する。 しかしながら、そのようなプログラムは、酵素の構造およびレセプターサイトの化学的構造についての完全な情報（本明細書中で初めて完全に同定され開示される）なしでは、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤のデザインに役立たない。

【００７８】 本発明により、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の１つのタイプ（例えば枯草菌）
の結晶構造が初めて完全に同定された。 枯草菌由来のＮＡＤシンテターゼ酵素のＸ線結晶構造は文献に報告されている。 その結果は、遊離形態ならびにＡＴＰおよびＭｇ ⁺²との複合体で、それぞれ２．６Åおよび２．０Åであった。 この構造は、ＡＴＰ結合サイトにおいて、ＡＴＰの加水分解された形態つまりＡＭＰおよびＰｐｉを含有しており、ＡＴＰはＮａＡＤ結合サイトに存在していた。 しかしながら、先行技術は、完全な同定を妨げる技術的な問題により、ＮａＡＤを含有する酵素複合体の構造を得ることができなかった。 ＮａＡＤを含有する酵素複合体の構造なしでは、本発明のＮＡＤシンテターゼ酵素を標的とする、構造に基づくドラッグデザインを開発することができなかっただろう。

【００７９】 細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を標的とする、構造に基づくドラッグデザインを実施するために、ＮａＡＤを含む全ての基質との複合体の状態での酵素の構造が本発明において解明された。 本発明で得られた付加的な構造情報は、ＮａＡＤと酵素との相互作用を初めて明確に定義し、コンビナトリアルライブラリーのデザインおよび阻害剤の同定を導くために重要な情報を提供した。 枯草菌の、オープンの、およびブロックされたレセプター／触媒サイトの結晶構造の概略図が図２
および４に前記されている。

【００８０】 本発明は、リード化合物の同定を容易にするために、文献（他の生物学的ターゲットに関する）で報告された２つのアプローチを利用する。 （１）一旦、細菌ＮＡＤシンテターゼ触媒サイトの構造が同定されたら、アベイラブルケミカルズディレクトリデータベース(Available Chemicals Directory database)を検索し、各構造について相対的結合親和性をコンピュータによりスコア化するために、
ソフトウェアＤＯＣＫ(ID Kunzら, J. Mol. Biol., 161, 269‐288 (1982))を利用した。 これらの結果および基質結合に関する構造情報に基づいて、購入し、
次いで酵素反応動力学的評価をするために、市販の化合物を選択した。 薬物の発見におけるそのようなデータベース検索ストラテジーは現在一般にドラッグデザインの当業者に用いられている(DT Manallack, Drug Discovery Today, 1, 23
1‐238 (1996))。 （２）生物学的活性分子を同定するための、選択された市販の化合物の生物学的スクリーニングの結果を用いて、本発明者らは次に、抗菌剤としてより有効なＮＡＤシンテターゼ酵素の阻害剤を迅速に同定するために、「繋がれたダイマー」からなるコンビナトリアルライブラリーをデザインした。 適当な効果を有する２つの小分子リガンド（同じ結合サイトで相互作用する）の結合親和性を高めるために「繋がれたダイマー」を使用することは、既に文献に記載されている(SB Stuker, PJ Hejduk, RP Meadows, および SW Fesik, Sc
ience, 274, 1531‐1534 (1996))。 しかしながら本発明は、繋がれたダイマーのコンビナトリアルアプローチ（細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の構造によって導かれ、かつ当該酵素を標的とする）と結び付けられたデータベース検索の初めての、従って新規の適用に関する。

【００８１】 例えばＤＯＣＫによって決定された、スコアが最高の小分子の例は、好ましくは本明細書中でさらに説明されるインビトロ酵素アッセイを用いて、プレスクリーニングされる。 本発明の重要な特徴としては、利用される好ましいスクリーニング方法は、阻害活性について多数の化合物を高速スクリーニングすることが可能でなければならない。 本発明の好ましい方法では、ＤＯＣＫ（または当業者に知られている他のプログラム）および本明細書のプレスクリーニング方法により同定され、活性分子として最も有望であるか、または基質タンパク質複合体構造に基づいてデザインされた、各サイトについての小分子阻害剤候補物を、本明細書中で以下に開示される方法に従って合成した。

【００８２】 一つの実施態様では、活性分子は、リンカー化合物により、互いに化学的に繋がれている。 さらなる実施態様では、リンカーは、好ましくは１から１２個の非水素原子、より好ましくは３から１０個の非水素原子、さらにより好ましくは５
から９個の非水素原子、またさらにより好ましくは６から９個の非水素原子の様々な長さの繋ぎを用いる、１つ以上のＣＨ ₂またはその他の基を含む。

【００８３】 本発明の別の実施態様では、上述の方法から決定された好ましい構造を有する新規化合物が、コンビナトリアル様式での、繋がれたダイマー化合物の高速液相パラレル合成(rapid, solution phase parallel synthesis)により合成される。
当業者はそのような手法を理解するだろう。 本発明に従ってデザインされたダイマー化合物の各クラスについて、新規合成ストラテジーが開発され、連結基(lin
king group)（これにより活性分子が繋がれている）の長さを変化させることを 可能とした。 これらの合成ストラテジーを、本明細書中で以下のスキーム３〜６
および実施例１〜４に示す。 変更可能な結合の好ましい方法を使用することにより、一対の同一または異なる活性分子から製造することのできる、異なった繋がれたダイマー化合物の数が大いに増加する。 本明細書中で具体的に開示された活性分子は、それらの任意の薬学的に許容される塩と同様に使用することができる。

【００８４】 記載の通り、本明細書中で以下に説明する本化合物の薬学的に許容される塩も本発明において使用されることが意図される。 そのような塩は、遊離酸を、適切な量の薬学的に許容される塩基で処理することにより調製される。 代表的な薬学的に許容される塩基は、水酸化アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化第一鉄、
水酸化亜鉛、水酸化銅、水酸化アルミニウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、リシン、アルギニン、ヒスチジン等である。 反応は、水単独、または不活性で水混和性の有機溶媒と組み合わせた水中で、約０℃から約１００℃までの温度で、好ましくは室温で行われる。 使用される塩基に対する構造式（Ｉ）の化合物のモル比は、任意の特定の塩に望ましい比を提供するために選択される。
例えば、遊離酸出発物質のアンモニウム塩（特定の好ましい実施態様）を調製するためには、出発物質は約１当量の薬学的に許容される塩基で処理して中性塩を得ることができる。 カルシウム塩を調製する場合には、約２分の１モル当量の塩基を使用して中性塩を得るが、アルミニウム塩については、約３分の１モル当量の塩基が使用されるだろう。

【００８５】 本発明のデザインおよび合成方法に従って調製された化合物は、特に興味深い。 なぜなら、それらは、好ましくは活性分子および／または連結基に置換基を導入することによって、さらに最適化され得るからである。 これらの後者の修飾もまた、好ましくは、本明細書中に開示されるコンビナトリアル法を用いることによって達成することができる。

【００８６】 本発明のさらなる実施態様では、構造が上記方法によってデザインされた選択された新規化合物が、連結基の長さの変化を可能にする新規ストラテジーを用いて個別に合成される。 一対の活性分子を用いて、本発明によるダイマーの１つのクラスを合成するために好ましく利用される経路の例を以下のスキーム３に要約する。

【００８７】

【００８８】 好ましい実施態様では本発明は、次の工程を含む、細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物の製造方法を提供する。 ａ． ５−ニトロインドールを６−ブロモヘキシル アセタートでアルキル化して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル アセタートを形成する工程； ｂ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル アセタートを加水分解して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキサン−１−オールを形成する工程； ｃ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキサン−１−オールをニコチン酸でエステル化して、６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル ニコチナートを形成する工程；および ｄ． 当該６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル ニコチナートをＮ−
メチル化する工程。

【００８９】 以下の化合物を、上記スキーム３に従って調製した。 ここで、ｎは、２つの活性分子を一体に繋げるリンカー基の数を表す。

【００９０】

【００９１】 本発明のライブラリーを作製するために利用される、さらなる好ましい合成手順の例をスキーム４〜６に示す。 スキーム４〜６において、例えば、パラレル液相合成手法（parallel solution phase synthesis techniques）を用いる合成のコンビナトリアル法を利用することが好ましい。 当業者は、以下に開示される合成経路を、本発明の新規かつ非自明な特徴から逸脱することなく、変更し得る方法を容易に理解するだろう。

【００９２】

【００９３】 好ましい実施態様では、本発明は、次の工程を含む、上記スキーム４に示した経路からＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物を合成する方法を提供する。 ａ． ５−ニトロインドールをブロモアルキル アセタートでアルキル化し、得られたインドールアルキル アセタートをインドールアルキル アルコールに変換する工程； ｂ． 当該インドールアルキル アルコールを適当な試薬と反応させて、インドールアルキル エステルを形成する工程；および ｃ． 当該インドールアルキル エステルをＮ−メチル化する工程。

【００９４】 さらに別の実施態様では、本発明は、次の工程を含む、上記スキーム４に示した経路からＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物を製造する方法を提供する。 ａ． ５−ニトロインドールをブロモアルキル アセタートでアルキル化し、得られたインドールアルキル アセタートをインドールアルキル アルコールに変換する工程； ｂ． 当該インドールアルキル アルコールを適当な試薬と反応させて、インドールアルキル エステルを形成する工程；および ｃ． 当該インドールアルキル アルコールをメシル クロリドと反応させ、引き続きアミンと反応させてアンモニウム生成物を製造する工程。

【００９５】

【００９６】 またさらになお好ましい実施態様では、本発明は、次の工程を含む、上記スキーム５に示した経路からＮＡＤシンテターゼ阻害剤を製造する方法を提供する。 ａ． インドールカルボン酸を適当な試薬と反応させて、インドールカルボン酸メチルエステルまたはインドールベンジルカルボン酸エステルを得る工程； ｂ． 当該インドールカルボン酸メチルエステルまたはインドールカルボン酸ベンジルエステルを、ブロモアルキル アセタートでＮ−アルキル化する工程； ｃ． 上記工程ｂで得た物質を適当な試薬と反応させて、インドールアルキル アルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドールアルキル アルコールを芳香族アミンとカップリングする工程；および ｅ． 当該インドールアルキル アルコールを適当な試薬と反応させて、当該メチルまたはベンジル インドールカルボキシラートをそれぞれインドールカルボン酸に変換する工程。

【００９７】

【００９８】 さらに好ましい実施態様では、本発明は、次の工程を含む、上記スキーム６に示した経路からＮＡＤシンテターゼ阻害剤を製造する方法を提供する。 ａ． アニリンをＮ−ブロモスクシンイミドで臭素化して、２−ブロモ−Ｒ ¹ −置 換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを形成する工程； ｂ． 当該２−ブロモ−Ｒ ¹ −置換−アニリンまたは当該２−ブロモ−Ｒ ² −置換−
アニリンを、ヘックカップリング反応を用いて反応させて、アルキン−置換アニリンを形成する工程； ｃ． 当該アルキン−置換アニリンを、環化反応を用いて反応させて、インドール アルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドール アルコールを、アミンを用いて四級化する工程； ｅ． 当該インドール アルコールをメタンスルホニル クロリドと反応させて、
インドール メシラートを得る工程；および ｆ． 当該インドール メシラートをカルボン酸と反応させて、インドール エステルを形成する工程。

【００９９】 さらに別の好ましい実施態様では、本発明は、次の工程を含む、上記スキーム６に示した経路からＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物を製造する方法を提供する。 ａ． アニリンをＮ−ブロモスクシンイミドで臭素化して、２−ブロモ−Ｒ ¹ −置 換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを形成する工程； ｂ． 当該２−ブロモ−Ｒ ¹ −置換−アニリンまたは２−ブロモ−Ｒ ² −置換−アニリンを、ヘックカップリング反応を用いて反応させて、アルキン−置換アニリンを形成する工程； ｃ． 当該アルキン−置換アニリンを、環化反応を用いて反応させて、インドールアルコールを形成する工程； ｄ． 当該インドール アルコールを、アミンを用いて四級化する工程； ｅ． 当該インドール アルコールをトリフルオロメチルスルホン酸無水物と反応させて、トリフラートを得る工程；および ｆ． 当該インドール トリフラートをアミンと反応させて、インドール アルキルアンモニウム生成物を形成する工程。

【０１００】 好ましい実施態様では、本発明は構造２：

【０１０１】

【０１０２】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はそれぞれ独立して、Ｈ、
無置換または置換された環状または脂肪族基、分岐したまたは分岐していない基であり、リンカーは環状または脂肪族の分岐したまたは分岐していない、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基であり、当該リンカーはヘテロ原子を含んでいてもよい。 ）の一般構造を有する化合物を提供する。 ヘテロ原子とは、１つ以上の原子が炭素以外の元素であることを意味する。

【０１０３】 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、以下の基のうちの１つであってよい：Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール。 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、ヒドロキシル、ケトン、
ニトロ、アミノ、アミジノ、グアニジノ、カルボキシラート、アミド、スルホナートもしくはハロゲン、またはこれらの基の慣用の誘導体であってよい。 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。 繋がれた活性分子（例えばこの例において「
アリール」で表される）部分は同一でも異なっていてもよい。

【０１０４】 さらなる実施態様では、本発明は構造４：

【０１０５】

【０１０６】 （式中、Ｘは単環式または二環式部分内のＣ、Ｎ、ＯまたはＳであり、ＡおよびＢはリンカーに結合するそれぞれの部位を示し、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はそれぞれ独立して、Ｈ、無置換または置換された環状基または脂肪族基、または分岐したまたは分岐していない基であり、リンカーは飽和または不飽和の環状基または脂肪族の分岐したまたは分岐していない、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基であり、当該リンカーはヘテロ原子を含んでいてもよい。）の化合物を提供する。

【０１０７】 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、以下の基のうちの１つであってよい：Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアリール基。 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、アミノ、アミジノ、グアニジノ、カルボキシラート、アミド、スルホナートもしくはハロゲン、またはこれらの基の慣用の誘導体であってよい。 当業者には、どのような部分がこれらの基の誘導体を構成するとみなされるかわかるだろう。 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１０８】 さらなる実施態様では、本発明は構造６：

【０１０９】

【０１１０】 （式中、ＸはＣ、Ｎ、ＯまたはＳであり、ＹはＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、カルボキシ、エステル、アミドまたはケトンであり、ＡおよびＢはリンカーに結合するそれぞれの部位を示し、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はそれぞれ独立して、Ｈ、無置換または置換された環状基または脂肪族基、分岐したまたは分岐していない基であり、リンカーは飽和または不飽和の環状または脂肪族基、分岐したまたは分岐していない、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基であり、当該リンカーはまたヘテロ原子を含んでいてもよい。）の化合物を提供する。

【０１１１】 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、以下の基のうちの１つであってよい：Ｈ、アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはアリール基。 Ｒ ₁ 〜Ｒ ₇はまた、Ｈ、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、アミノ、アミジノ、グアニジノ、カルボキシラート、アミド、スルホナートもしくはハロゲン、およびこれらの基の慣用の誘導体であってよい。 当業者には、どのような部分がこれらの基の誘導体を構成するとみなされるかわかるだろう。 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１１２】 さらなる実施態様では、本発明は構造８：

【０１１３】

【０１１４】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁はＨ、メトキシ、ベンジルオキ シまたはニトロであり、Ｒ ₂は３−ピリジル、Ｎ−メチル−３−ピリジル、３− キノリニル、Ｎ−メチル−３−キノリニル、３−（ジメチルアミノ）フェニル、
３−（トリメチルアンモニオ）フェニル、４−（ジメチルアミノ）フェニル、４
−（トリメチルアンモニオ）フェニル、４−（ジメチルアミノ）フェニルメチルまたは４−（トリメチルアンモニオ）フェニルメチルである。 ）の化合物を提供する。

【０１１５】 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１１６】 さらなる実施態様では、本発明は構造１０：

【０１１７】

【０１１８】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁はＨ、ＣＯ ₂ Ｈ、−ＯＣＨ ₃また は−ＯＣＨ ₂ Ｐｈであり、Ｒ ₂はＨ、ＣＯ ₂ ＨまたはＣＨ＝ＣＨＣＯ ₂ Ｈであり、Ｒ ₃はＨまたはＣＯ ₂ Ｈであり、ＹはＮ−結合ピリジン−３−カルボン酸、Ｎ−結合ピリジン、Ｎ−結合キノリンまたはＮ−結合イソキノリンである。 ）の化合物を提供する。 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１１９】 さらなる実施態様では、本発明は構造１２：

【０１２０】

【０１２１】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁はＨ、ＦまたはＮＯ ₂であり、Ｒ ₂はＨ、ＣＨ ₃ 、ＣＦ ₃ 、ＮＯ ₂ 、フェニル、ｎ−ブチル、イソプロピル、Ｆ、フェニルオキシ、トリフェニルメチル、メトキシカルボニル、メトキシ、カルボキシ、アセチルまたはベンゾイルであり、Ｒ ₃はＨまたはＣＦ ₃であり、ＹはＮ−結合ピリジン−３−カルボン酸、Ｎ−結合ピリジン、Ｎ−結合キノリンまたはＮ−結合イソキノリンである。 ）の化合物を提供する。 ｎはまた、３から１０までの、
より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１２２】 さらなる実施態様では、本発明は構造１４：

【０１２３】

【０１２４】 （式中、ｎは１から１２までの整数であり、Ｒ ₁はＨ、フェニルオキシ、イソプ ロピル、アセチルまたはベンゾイルであり、Ｒ ₂はＨまたはＣＦ ₃であり、Ｙは３
−（ジメチルアミノ）フェニル、３−（トリメチルアンモニオ）フェニル、４−
（ジメチルアミノ）フェニル、４−（トリメチルアンモニオ）フェニル、２−（
フェニル）フェニル、ジフェニルメチル、３−ピリジル、４−ピリジルまたはピリジン−３−メチルである。 ）の化合物を提供する。 ｎはまた、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１２５】 さらなる実施態様では、本発明は構造１６：

【０１２６】

【０１２７】 （式中、ＲはＨまたはＣＯ ₂ ＣＨ ₃であり、ｎは１から４までの、より好ましくは２から３までの整数であり、さらにより好ましくはｎは３である。）の化合物を提供する。

【０１２８】 さらなる実施態様では、本発明は構造１８：

【０１２９】

【０１３０】 （式中、ＲはＨまたはＣＯ ₂ ＣＨ ₃であり、ｎは１から４までの、より好ましくは２から３までの整数であり、さらにより好ましくはｎは３である。）の化合物を提供する。

【０１３１】 本発明のさらに好ましい実施態様では、表１０２〜１２８において、化合物１
〜２７４として示される構造の化合物を、本明細書中に開示した方法を利用して合成した。 化合物１〜２７４について、図６中、フラグメントＩ〜Ｘとして示される構造はそれぞれ、本明細書中で前記で定義した活性分子を表し、それらは、
それぞれの表中にさらに記載される本発明化合物に包含され得る。 図６のフラグメントＩ〜Ｘにおいて、リンカー化合物の結合点は窒素のところである。

【０１３２】 以下の化学構造において、本発明の化合物について意図されているように、記号Ｔ ^-は、アニオンの存在を一般的に示している。 本発明で意図されているよう に、本発明化合物におけるアニオンのタイプは重要ではない。 本化合物に存在するアニオンは、当業者に一般に知られているような部分、または本明細書中に開示された合成方法から理解されるような部分であれば、任意の部分から構成されていてよい。

【０１３３】

【０１３４】 本発明の好ましい実施態様では、本発明化合物は構造１００：

【０１３５】

【０１３６】 （式中、Ｒ'は、

【０１３７】

【０１３８】 であり、ｎは１から１２までの整数である。 ）に対応する。 ｎはまた、３から１
０まで、より好ましくは５から９まで、さらにより好ましくは６から９までであってよい。

【０１３９】 本発明のさらに好ましい実施態様では、本発明化合物は、構造１００に示され、さらに表１００で定義される構造に対応する。 構造１００に対応するこれらの化合物について、ｎはまた１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であってよい。

【０１４０】

【０１４１】

【０１４２】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、ｎは、化合物の２つの繋がれた活性分子基を隔てているリンカー基の数を示す。

【０１４３】 化合物２５〜２７４に関連して以下で説明するように、フラグメントＡ〜Ｇは図８に示されている。 図８のＡ〜ＧにおいてＲで表された基は、ベンジル基、メチル基または水素であり得る。 フラグメントＡ〜Ｇへのリンカー基の結合点は、
窒素基のところである。

【０１４４】 一つの実施態様では、本発明化合物は、構造１０１の化合物に対応する。 構造１０１に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 Ｒ１およびＲ'の両方についてリンカー基の結合点は、例示された各フラグメントのそれぞれの窒素基のところである。

【０１４５】

【０１４６】 〔式中、Ｒ'は、

【０１４７】

【０１４８】 であり、Ｒ１は、

【０１４９】

【０１５０】 （式中、フラグメントＡ〜ＧにおけるＲ基は、ベンジル基、メチル基または水素である。）である。 〕

【０１５１】 本発明の一つの実施態様では、本発明化合物は、以下の図８に示すフラグメントを含んでいてもよい。

【０１５２】

【０１５３】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１０２で示された構造に対応する。 構造１０２に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１０
２でさらに示された構造１０２に対応する。

【０１５４】

【０１５５】

【０１５６】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ａは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＡを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＡにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１５７】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１０４で示された構造に対応する。 構造１０４に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１０
４でさらに示された構造１０４に対応する。

【０１５８】

【０１５９】

【０１６０】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｂは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＢを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＢにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１６１】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１０６で示された構造に対応する。 構造１０６に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１０
６でさらに示された構造１０６に対応する。

【０１６２】

【０１６３】

【０１６４】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｃは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＣを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＣにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１６５】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１０８で示された構造に対応する。 構造１０８に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１０
８でさらに示された構造１０８に対応する。

【０１６６】

【０１６７】

【０１６８】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｄは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物においてグループＲ'とグループＤを隔てているリンカー基の数を表す。 図８のフラグメントＤにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１６９】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１１０で示された構造に対応する。 構造１１０に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１１
０でさらに示された構造１１０に対応する。

【０１７０】

【０１７１】

【０１７２】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｅは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＥを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＥにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１７３】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１１２で示された構造に対応する。 構造１１２に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１１
２でさらに示された構造１１２に対応する。

【０１７４】

【０１７５】

【０１７６】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｆは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＦを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＦにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１７７】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１１４で示された構造に対応する。 構造１１４に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１１
４でさらに示された構造１１４に対応する。

【０１７８】

【０１７９】

【０１８０】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｇは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＧを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＧにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩはそれぞれベンジル基を有し、各グループＩ ^* 、ＶＩＩ ^* 、ＶＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１８１】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１１６で示された構造に対応する。 構造１１６に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１１
６でさらに示された構造１１６に対応する。

【０１８２】

【０１８３】

【０１８４】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ａは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＡを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＡにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１８５】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１１８で示された構造に対応する。 構造１１８に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１１
８でさらに示された構造１１８に対応する。

【０１８６】

【０１８７】

【０１８８】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｂは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＢを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＢにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１８９】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１２０で示された構造に対応する。 構造１２０に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１２
０でさらに示された構造１２０に対応する。

【０１９０】

【０１９１】

【０１９２】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｃは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＣを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＣにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０１９３】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１２２で示された構造に対応する。 構造１２２に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１２
２でさらに示された構造１２２に対応する。

【０１９４】

【０１９５】

【０１９６】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｄは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＤを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＤにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ、ＩＩＩはそれぞれ水素を有する。

【０１９７】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１２４で示された構造に対応する。 構造１２４に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１２
４でさらに示された構造１２４に対応する。

【０１９８】

【０１９９】

【０２００】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｅは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＥを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＥにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０２０１】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１２６で示された構造に対応する。 構造１２６に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１２
６でさらに示された構造１２６に対応する。

【０２０２】

【０２０３】

【０２０４】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｆは、前記図８で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＦを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＦにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０２０５】 本発明のさらに好適な実施態様では、本発明化合物は、構造１２８で示された構造に対応する。 構造１２８に対応するこれらの化合物について、ｎは１から１
２までの、３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である。 さらなる実施態様では、本化合物は、表１２
８でさらに示された構造１２８に対応する。

【０２０６】

【０２０７】

【０２０８】 上記表中、Ｒ'は、前記図６で定義したフラグメントに対応し、Ｇは、前記図６で定義したフラグメントに対応し、ｎは、それぞれの化合物におけるグループＲ'とグループＧを隔てているリンカー基の数を示す。 図８のフラグメントＧにおけるＲで表された位置に、各グループＩ、ＩＩはそれぞれメチル基を有し、各グループＩ ^* 、ＩＩＩ ^*はそれぞれ水素を有する。

【０２０９】 ここで用いた次の用語は、以下のように定義される：Ｐｈ：フェニル；ｉ−プロピル＝イソプロピル；ＯＰｈ＝Ｏ−フェニル；およびジＮＯ ₂ ＝ジニトリック(
dinitric)

【０２１０】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１３０の化合物に対応する。 構造１３０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１３０に示す。

【０２１１】

【０２１２】

【０２１３】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが５−Ｈ、６−ＣＦ ₃ 、５−ＣＨ ₃ 、
５，７−ジＦ、５，７−ジＮＯ ₂ 、５−ブチル、５−イソプロピル、５−フェニ ル、５−ＮＯ ₂ 、５−トリチル、５−Ｆ、５−ＯＰｈ、５−ＣＯＰｈ、５−ＣＦ ₃ 、５−ＣＯＣＨ ₃ 、５−ＯＣＨ ₃ 、５−ＣＯＯＣＨ ₃または５−ＣＯＯＨである、 構造１３２の化合物に対応する。

【０２１４】 構造１３２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１３２に示す。

【０２１５】

【０２１６】

【０２１７】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが５−Ｈ、６−ＣＦ ₃ 、５−ＣＨ ₃ 、
５，７−ジＦ、５，７−ジＮＯ ₂ 、５−ブチル、５−イソプロピル、５−フェニ ル、５−ＮＯ ₂ 、５−トリチル、５−Ｆ、５−ＯＰｈ、５−ＣＯＰｈ、５−ＣＦ ₃ 、５−ＣＯＣＨ ₃ 、５−ＯＣＨ ₃ 、５−ＣＯＯＣＨ ₃または５−ＣＯＯＨである、 構造１３４の化合物に対応する。 構造１３４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１３４に示す。

【０２１８】

【０２１９】

【０２２０】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが５−Ｈ、６−ＣＦ ₃ 、５−ＣＨ ₃ 、
５，７−ジＦ、５，７−ジＮＯ ₂ 、５−ブチル、５−イソプロピル、５−フェニ ル、５−ＮＯ ₂ 、５−トリチル、５−Ｆ、５−ＯＰｈ、５−ＣＯＰｈ、５−ＣＦ ₃ 、５−ＣＯＣＨ ₃ 、５−ＯＣＨ ₃ 、５−ＣＯＯＣＨ ₃または５−ＣＯＯＨである、 構造１３６の化合物に対応する。 構造１３６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１３６に示す。

【０２２１】

【０２２２】

【０２２３】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが５−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−イ ソプロピル、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈであり、Ｙが３−Ｎ，Ｎ−ジメ チルアミノフェニル（３−Ｎ，Ｎ−ジＣＨ ₃ ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフ ェニル（４−Ｎ，Ｎ−ジＣＨ ₃ ）または２−Ｐｈである、構造１３８の化合物に 対応する。 構造１３８に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１３８に示す。

【０２２４】

【０２２５】

【０２２６】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが５−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−イ ソプロピル、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈであり、ＺがＣＨ（Ｐｈ） ₂または３−ピリジルである、構造１４０の化合物に対応する。 構造１４０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１４０に示す。

【０２２７】

【０２２８】

【０２２９】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−イ ソプロピル、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１４２の化合物に 対応する。 構造１４２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１４２に示す。

【０２３０】

【０２３１】

【０２３２】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−イ ソプロピル、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１４４の化合物に 対応する。 構造１４４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１４４に示す。

【０２３３】

【０２３４】

【０２３５】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１４６の化合物に対応する。 構造１４６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１４６に示す。

【０２３６】

【０２３７】

【０２３８】 さらなる実施態様では、本発明化合物は、好ましくは、表１４８でさらに定義した構造１４８の化合物に対応する。

【０２３９】

【０２４０】

【０２４１】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１５０の化合物に対応する。 構造１５０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１５０に示す。

【０２４２】

【０２４３】

【０２４４】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１５２の化合物に対応する。 構造１５２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１５２に示す。

【０２４５】

【０２４６】

【０２４７】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、ＺがＣＨ（ジＰｈ）、４−（Ｎ，Ｎ−
ジメチルアミノ）フェニル、ＣＨ ₂ ＣＨ ₂ −（３−ピリジル）または（２−フェニル）−フェニルである、構造１５４の化合物に対応する。 構造１５４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１５４に示す。

【０２４８】

【０２４９】

【０２５０】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１５６の化合物に対応する。 構造１５６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１５６に示す。

【０２５１】

【０２５２】

【０２５３】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１５８の化合物に対応する。 構造１５８に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１５８に示す。

【０２５４】

【０２５５】

【０２５６】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１６０の化合物に対応する。 構造１６０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１６０に示す。

【０２５７】

【０２５８】

【０２５９】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１６２の化合物に対応する。 構造１６２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１６２に示す。

【０２６０】

【０２６１】

【０２６２】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１６４の化合物に対応する。 構造１６４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１６４に示す。

【０２６３】

【０２６４】

【０２６５】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１６６の化合物に対応する。 構造１６６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１６６に示す。

【０２６６】

【０２６７】

【０２６８】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１６８の化合物に対応する。 構造１６８に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１６８に示す。

【０２６９】

【０２７０】

【０２７１】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１７０の化合物に対応する。 構造１７０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１７０に示す。

【０２７２】

【０２７３】

【０２７４】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１７２の化合物に対応する。 構造１７２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１７２に示す。

【０２７５】

【０２７６】

【０２７７】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが−ＯＣＨ ₃または−ＯＣＨ ₂ Ｐｈである、構造１７４の化合物に対応する。 構造１７４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１７４に示す。

【０２７８】

【０２７９】

【０２８０】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｚが３−キノリン、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニルまたは４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニルである、構造１７６の化合物に対応する。 構造１７６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１７６に示す。

【０２８１】

【０２８２】

【０２８３】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１７８の化合物に対応する。 構造１７８に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１７８に示す。

【０２８４】

【０２８５】

【０２８６】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１８０の化合物に対応する。 構造１８０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１８０に示す。

【０２８７】

【０２８８】

【０２８９】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数である、構造１８２の化合物に対応する。 構造１８２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１８２に示す。

【０２９０】

【０２９１】

【０２９２】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−Ｃ Ｈ（ＣＨ ₃ ） ₂ 、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１８４の化合物 に対応する。 構造１８４に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１８４に示す。

【０２９３】

【０２９４】

【０２９５】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−Ｃ Ｈ（ＣＨ ₃ ） ₂ 、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１８６の化合物 に対応する。 構造１８６に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１８６に示す。

【０２９６】

【０２９７】

【０２９８】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−Ｃ Ｈ（ＣＨ ₃ ） ₂ 、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１８８の化合物 に対応する。 構造１８８に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１８８に示す。

【０２９９】

【０３００】

【０３０１】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−Ｃ Ｈ（ＣＨ ₃ ） ₂ 、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１９０の化合物 に対応する。 構造１９０に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１９０に示す。

【０３０２】

【０３０３】

【０３０４】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒが６−ＣＦ ₃ 、５−ＯＰｈ、５−Ｃ Ｈ（ＣＨ ₃ ） ₂ 、５−ＣＯＣＨ ₃または５−ＣＯＰｈである、構造１９２の化合物 に対応する。 構造１９２に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１９２に示す。

【０３０５】

【０３０６】

【０３０７】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒ ¹がＨまたは−ＯＣＨ ₂ Ｐｈであり、
Ｒ ²がＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である、構造１９４の化合物に対応する。 構造１９４
に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１９４に示す。

【０３０８】

【０３０９】

【０３１０】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒ ¹がＨまたは−ＯＣＨ ₂ Ｐｈであり、
Ｒ ²がＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である、構造１９６の化合物に対応する。 構造１９６
に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１９６に示す。

【０３１１】

【０３１２】

【０３１３】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒ ¹がＨまたは−ＯＣＨ ₂ Ｐｈであり、
Ｒ ²がＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である、構造１９８の化合物に対応する。 構造１９８
に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表１９８に示す。

【０３１４】

【０３１５】

【０３１６】 さらなる実施態様では、好ましくは、本発明化合物は、ｎが１から１２までの、より好ましくは３から１０までの、より好ましくは５から９までの、さらにより好ましくは６から９までの整数であり、Ｒ ¹がＨまたは−ＯＣＨ ₂ Ｐｈであり、
Ｒ ²がＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である、構造２００の化合物に対応する。 構造２００
に対応する化合物のさらに好適な実施態様を表２００に示す。

【０３１７】

【０３１８】

【０３１９】 さらなる実施態様では、本発明化合物は、好ましくは構造２０２の化合物に対応する。

【０３２０】

【０３２１】 式中、Ｒ ₁はＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である。 Ｒ ₁がＨのとき、構造２０２の化合物 は化合物９９１である。 Ｒ ₁がＣＯＯＣＨ ₃のとき、構造２０２の化合物は化合物９９２である。

【０３２２】 さらなる実施態様では、本発明化合物は、好ましくは構造２０４の化合物に対応する。

【０３２３】

【０３２４】 式中、Ｒ ₁はＨまたはＣＯＯＣＨ ₃である。 Ｒ ₁がＨのとき、構造２０４の化合物 は化合物９９３である。 Ｒ ₁がＣＯＯＣＨ ₃のとき、構造２０６の化合物は化合物９９４である。

【０３２５】 本発明の特に好適な実施態様では、本発明は下記表２０１中の構造の化合物を含む。

【０３２６】

【０３２７】

【０３２８】

【０３２９】

【０３３０】

【０３３１】

【０３３２】

【０３３３】

【０３３４】

【０３３５】

【０３３６】

【０３３７】

【０３３８】

【０３３９】

【０３４０】

【０３４１】

【０３４２】 本発明の化合物は、合成有機化学者に一般に知られている技術を用いて、容易に合成され得る。 芳香族化合物を製造および誘導体化するのに適切な実験方法を記載する（例えば、本発明の特定のおよび好ましい化合物を製造するための方法を、下記の実施例１〜４に詳細に記載する）。

【０３４３】 本発明は、好ましくは、次の工程を含む、少なくとも１つの細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を含むライブラリーを構築する方法をさらに提供する。 ａ． 細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素の結晶構造を得る工程； ｂ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の１つ以上の触媒活性のサイトを決定する工程； ｃ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒サイトの化学構造を決定する工程； ｄ． 当該ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒サイトの少なくとも１つに対して親和性を示すであろう１つ以上の活性分子化合物を選択する工程； ｅ． 少なくとも１つの活性分子を含み、当該活性分子化合物がｎ個のリンカー化合物（ここで、ｎは１から１２までの整数である）によって結合されている１つ以上のダイマー化合物を合成する工程；および ｆ． 当該１つ以上の化合物を、ＮＡＤシンテターゼ阻害剤活性についてスクリーニングする工程。

【０３４４】 このライブラリーはさらに、上記表２０１に記載された１つ以上の化合物を含む。 一つの実施態様においては、本発明による化合物のライブラリーは、好ましくは、上記構造１〜９９４に記載した構造の化合物を含む。 さらに好ましくは、
このライブラリーは構造２の化合物を含み、なお好ましくは、構造４の化合物を含み、さらに好ましくは、構造６の化合物を含む。 さらに好ましい実施態様においては、このライブラリーは少なくとも１つの、構造８、構造１０、構造１２、
構造１６または構造１８の化合物を含む。

【０３４５】 本発明の別の好ましい実施態様においては、前記の１つ以上のダイマー化合物は、少なくとも２つの活性分子を含む。 なお好ましくは、これらの活性分子は同一である。 あるいは、これらの活性分子が異なることが好ましい。

【０３４６】 本発明はさらに、活性分子選択工程において利用される、タンパク質に対する分子の結合親和性を予測するソフトウェアプログラムを提供する。 さらに好ましくは、小分子と高分子結合サイトとの間の化学的および幾何的相補性を評価するソフトウェアプログラムが、活性分子の選択工程で利用される。

【０３４７】 さらに別の好ましい実施態様においては、これらの化合物を高速液相パラレル合成を利用して合成し、かつ当該化合物をコンビナトリアル方式で作製する。

【０３４８】 好ましい実施態様において、本発明は、治療有効量または予防処置量の細菌Ｎ
ＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を哺乳類に投与することを含む、哺乳類における微生物感染を治療または予防する方法を提供する。 特に好ましい実施態様において、本方法で投与される化合物は、表２０１において前述した化合物である。 別の実施態様において、本発明は、好ましくは、上記化合物１〜９９４を含む。 さらに好ましくは、投与される化合物は少なくとも１つの、構造２の化合物、
なお好ましくは構造４の化合物、さらに好ましくは構造６の化合物を含む。 さらに好ましい実施態様において、本方法で投与される化合物は、構造８、構造１０
、構造１２、構造１６または構造１８の化合物を含む。

【０３４９】 好ましい実施態様において、本発明は、そのような治療または予防が必要な哺乳類への広域抗生物質の投与を提供する。 さらに好ましい実施態様においては、
上記微生物感染は細菌感染である。 本発明のさらに別の実施態様においては、前記細菌感染は、グラム陰性菌またはグラム陽性菌である細菌によって引き起こされる。 前記細菌感染は、好ましくは、細菌の抗生物質耐性株によって引き起こされ得る。

【０３５０】 ＮＡＤの産生を減少させるかまたはなくし、それにより原核生物が死滅する量の原核生物ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を用いて、原核生物を死滅させる方法が、好ましくは、本発明によりさらに提供される。 ＮＡＤの産生を減少させるかまたはなくし、それにより原核生物の増殖を減少させるのに有効な量の原核生物ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤に原核生物を接触させることを含む、原核生物の増殖を減少させる方法もまた提供される。 原核生物を死滅させる方法において、および原核生物の増殖を減少させる方法において、本化合物は、１つ以上の表２０１の化合物を含む。 なお好ましくは、本発明は、上記化合物１〜９９４
の１つ以上を含む。 さらに好ましくは、投与される化合物は、構造２の化合物、
なお好ましくは構造４の化合物、さらに好ましくは構造６の化合物である。 さらに好ましい実施態様において、本方法で投与される化合物は、構造８、構造１０
、構造１２、構造１６または構造１８の化合物である。

【０３５１】 原核生物を死滅させる方法において、および原核生物の増殖を減少させる方法において、前記原核生物は細菌である。 さらに好ましくは、前記細菌は、グラム陰性菌またはグラム陽性菌である。 なお好ましくは、前記原核生物は、細菌の抗生物質耐性株である。

【０３５２】 また、原核生物を死滅させる方法において、および原核生物の増殖を減少させる方法において、ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤は、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素上の触媒サイトまたはサブサイトと選択的に結合して、細菌によるＮＡＤの産生を減少させるかまたはなくす化合物である。

【０３５３】 上記で論じた方法において、本化合物は、好ましくは、経口、直腸、筋肉内、
静脈内、小嚢内(intravesicular)または局所投与手段により投与される。 本発明の化合物は、インビボまたはエキソビボのいずれでも、対象の細胞に投与することができる。 インビボで対象の細胞に投与する場合、および対象に投与する場合、本発明の化合物は、経口的に、非経口的に（例えば、静脈内）、筋肉内注射により、腹腔内注射により、皮下注射により、経皮的に、体外的に、局所的に、粘膜的になどの経路で投与することができる。

【０３５４】 意図した投与様式に依存して、本発明の化合物は、固体、半固体、または液体剤形（例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液体、懸濁剤、ローション、クリーム、ゲルなど）の形態の、好ましくは、正確な投与量の単回投与に適切な単位投薬形態の医薬組成物であってよい。 これらの組成物は、上述のように、有効量の選択された組成物を、おそらく薬学的に許容される担体と組み合わせて含み、そしてさらに、他の医用薬物、薬学的薬物、担体、アジュバント、希釈剤などを含み得る。

【０３５５】 本発明の化合物の非経口投与は、もし用いられるならば、注射によって一般的に特徴付けられる。 注射剤は、慣用の形態で、液体の溶液もしくは懸濁液、注射前に液体の溶液もしくは懸濁液にするのに適した固体形態として、またはエマルジョンとしてのいずれでも調製することができる。 本明細書中で用いる「非経口投与」には、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、および気管内の経路が包含される。 非経口投与のための１つのアプローチには、一定の投与量を維持するような、緩慢な放出または徐放系の使用が含まれる。 例えば、米国特許第３，６１
０，７９５号を参照のこと（これはここで言及したことで本明細書に組み込まれる）。 これらの化合物は、薬学的に許容される担体（これにはまた、適切なアジュバントが含まれ得る）中に存在し得る。 「薬学的に許容される」とは、生物学的にまたは他の意味で望ましくないものではない物質（すなわち、その物質が、
実質的に有害な生物学的効果を引き起こすことなく、またその物質が含まれている組成物中の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用することなく、選択された化合物と共に個体に投与することができる）を意味する。

【０３５６】 本明細書中の化合物の投与経路は、好ましくは、適切なおよび薬理学的に許容される製剤形態である。 ヒトまたは動物の対象に投与する場合、本明細書中のライブラリーの細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物は、好ましくは、経口、
直腸、筋肉内、静脈内、小嚢内または局所（吸入を含む）投与により、動物またはヒトに与えられる。 投与量は、好ましくは、約０．１〜約１５ｇ／日を含み、
ここで、当該投与量は、約１〜約４回／日で投与される。 好ましい投与量はまた、０．００１ｇ／日と１ｇ／日との間、なお好ましくは約０．０１、０．０５、
０．１、および０．２５、０．５、０．７５および１．０ｇ／日を含み得る。 さらに好ましくは、投与量は、約１、２．５、５．０、７．５、１０．０、１２．
５および１５．０ｇ／日の量で投与され得る。 投与量は、なお好ましくは、１日あたり約１、２、３、４またはそれ以上の回数のペースで投与され得る。 さらに、ある状況では、本発明の化合物を、例えば、静脈内投与として、連続的に投与することが好ましいだろう。 必要な化合物の正確な量は、対象ごとに、対象の種、年齢、体重および一般状態、使用される特定の化合物、その投与様式等に依存して変化する。 従って、すべての化合物について正確な量を特定することはできない。 しかし、適切な量は、本明細書中の教示が与えられれば、ルーチンの実験法のみを用いて、当業者により決定され得る。

【０３５７】 エキソビボ法が用いられる場合、当分野でよく知られている標準的プロトコールに従って、細胞または組織が取り除かれ、投与対象の体外で維持することができる。 本発明の化合物は、細胞内への小分子の取り込みに関する公知の機構（例えば、ファゴサイトーシス、クラスＩ ＭＨＣ発現細胞へのパルシング(pulsing
)、リポソームなど）を介して、細胞内に導入することができる。 次いで、これ らの細胞は、細胞または組織のタイプに応じた標準的な方法によって、投与対象に注入（例えば、薬学的に許容される担体中で）または移植し戻すことができる。 様々な細胞を投与対象に移植または注入する標準的な方法は知られている。

【０３５８】 微生物で汚染された物を、当該微生物を死滅させるかまたは不活性化するのに十分な量の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物と接触させることを含む、
微生物で汚染された物を消毒する方法がさらに提供される。 さらに別の実施態様においては、接触に利用される化合物は、１つ以上の表２０１の化合物を含む。
接触に利用される化合物はまた、化合物１〜９９４の１つ以上を含み得る。 さらに好ましくは、接触に利用される化合物は、構造２の化合物、なお好ましくは構造４の化合物、さらに好ましくは構造６の化合物である。 さらに好ましい実施態様においては、本方法での接触に利用される化合物は、構造８、構造１０、構造１２、構造１６または構造１８の化合物を含む。

【０３５９】 本発明のなおさらに別の実施態様においては、本発明の化合物は、例えば、硬いまたは柔らかい表面、布帛、ならびに病院、家庭、学校、託児所、および任意の他の場所におけるもののような他の汚染された物に対する消毒物質として有効である。 さらに別の実施態様においては、本発明は、細菌で汚染された物と細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物とを接触させることを含む、消毒方法を提供する。

【０３６０】 本発明のさらなる側面では、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性について化合物をスクリーニングするインビトロ「一回一種」法("one-at-a-time" method)
を提供する。 好ましい実施態様において、そのような活性について化合物をスクリーニングするこのインビトロ法は、純粋な細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を含有する溶液を調製する工程、当該溶液を本明細書中で記載した化合物と接触させる工程、および酵素触媒反応の速度を測定する工程を含む。 好ましくは、酵素触媒反応の速度の測定は、ＮＡＤシンテターゼ阻害活性値を含む。 さらなる実施態様において、酵素触媒反応の速度は、抗菌活性値を含む。 なおさらなる実施態様において、酵素触媒反応の速度は、抗微生物活性値に対応する。

【０３６１】 好ましくは、このインビトロスクリーニング法で使用するための細菌酵素溶液を調製する方法は、大腸菌( E. coli )中で、例えば枯草菌( B. subtilis )からの細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素を過剰発現させるための分子生物学的方法を利用することを含む。 当業者は、そのようなプロセスに有用な技術を理解する。 特に好ましい方法は、ａ）ＮＡＤシンテターゼ酵素をコードするＯｕｔ Ｂ遺伝子をクローニングし、大腸菌中でその遺伝子を過剰発現させる工程；ｂ）クローニングされ過剰発現した当該遺伝子をイオン交換によって精製する工程；ｃ）イオン交換法を用いて工程ｂからの酵素物質をさらに精製する工程；ｄ）サイズ排除クロマトグラフィーを用いて工程ｃからの物質をさらに精製する工程（ここで、細菌Ｎ
ＡＤシンテターゼ酵素は実質的に純粋である）；およびｅ）発酵ブロス１リットルあたり純粋な細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素約１０〜１５ｍｇの量のアッセイ溶液を調製する工程を含む。 ここで用いる「実質的に純粋」とは、約９０％より高い純度、より好ましくは約９５％より高い純度、およびさらにより好ましくは約９９％より高い純度を意味する。

【０３６２】 上記インビトロスクリーニング法の一つの実施態様において、以下の手順が、
酵素触媒反応の速度を測定するために利用される。 ＫＣｌを含有するＨＥＰＰＳ
（ｐＨ８．５）の溶液を、以下の種（ＡＴＰ、ＮａＡＤ、ＭｇＣｌ ₂ 、ＮＨ ₄ Ｃｌ
、ＡＤＨ、およびＥＴＯＨ）を含有するように調製する。 次いで、試験阻害剤のストック溶液を、固体サンプルを１００％ＤＭＳＯに溶解して調製する。 次いで、この試験化合物ストック溶液を上記混合物に添加して最終試験化合物濃度を得る。 ＮＡＤシンテターゼ酵素溶液を添加し、混合物を３回混ぜ合わせ、次いで、
３４０ｎｍでの吸光度をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計を用いて反応動力学的にモニターする。 次いで、酵素添加後の初期反応動力学トレースを線形回帰を用いて直線にフィットさせ、次いで、阻害％を計算するための以下の式を用いて、この速度を阻害剤を含有しないコントロールの速度と比較する：｛（Ｖ ₀ −Ｖ）／Ｖ ₀ ｝＊
１００％（ここで、Ｖ ₀は試験化合物が存在しない場合の反応速度であり、Ｖは 試験化合物を添加した試験での反応速度である）。 各混合物を３回試験し、阻害％について得られた値を平均して、表記した値を得た。 ＩＣ ₅₀ （試験細菌を５０
％阻害するのに必要な濃度）値を、０．０と２．０ｍＭとの間の濃度で、６つの異なる試験化合物濃度を３回アッセイし、得られる阻害％値を試験化合物用量の−ＬＯＧに対してプロットして５０％阻害が観察される濃度を明らかにすることによって、選択化合物について得た。

【０３６３】 好ましくは、このインビトロ法はまた、他の形態の細菌および他のタイプの微生物において細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性を有する化合物をスクリーニングし得るように適応させることができる。 例えば、上記手順は、少なくとも以下の細菌型における阻害活性をスクリーニングするために適応させることができる。

【０３６４】

【０３６５】 このインビトロスクリーニング法のさらなる実施態様において、本方法は、既存の化合物（例えば、５−ニトロインドールおよびＮ−メチルニコチン酸等の市販の化合物）をスクリーニングするために使用され得る。 当業者は、本明細書中のデザインおよびスクリーニング法を、細菌および他の微生物の両方においてＮ
ＡＤシンテターゼ酵素阻害活性を示す市販の化合物（例えば、前記した非網羅的表）を同定するために利用し得る方法を理解するだろう。

【０３６６】 本発明の化合物のようなＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物のライブラリーを試験するために、迅速な（ハイスループット）スクリーニングの方法を利用することが特に好ましい。 この目的のために、一つの実施態様での合成化合物のライブラリーの潜在的阻害活性は、結合酵素アッセイ(coupled enzymatic assay) により評価される。 結合アッセイは以下に要約するような２つの工程を含む。

【０３６７】

【０３６８】 ライブラリー中の化合物の阻害活性を迅速に測定するために、本発明は、ハイスループットスクリーニングシステム（ＨＴＳシステム）を提供する。 ＨＴＳシステムは、好ましくは、液体ハンドラー(liquid handler)および分光光度計の働きを調和させる一体化ロボットシステムを利用する。 このロボットステーションは、好ましくは、作業台(worksurface)上のすべてのハードウェアの動きおよび 複数のステーションの統合の責任を負う。 液体ハンドラーは、好ましくは、液体の分配および混合のすべての段階を行うようにプログラムされる。 分光光度計は、好ましくは、９６ウェルプレートフォーマットでの吸光度をモニターするために備え付けられる。

【０３６９】 一つの実施態様において、このアッセイは、ＨＥＰＰＳ緩衝液（ｐＨ８．５）
、ＭｇＣｌ ₂ 、ＮＨ ₄ ＣＬ ₂ 、ＫＣＬ、ＮａＡＤ、ｎ−オクチル−Ｄ−グルコピラ ノシド、エタノール、ＮＡＤシンテターゼ、および酵母アルコール脱水素酵素を含有する９６ウェルプレートフォーマット反応緩衝液用に設計される。 次の段階では、液体ハンドラーは、ＤＭＳＯ（阻害剤を含有するまたは含有しない）を反応ウェルに分配する。 液体ハンドラーは、所定の混合プログラムを利用してこれらの成分を混合する。 反応を、緩衝液に溶解したＡＴＰ溶液の添加により開始する。 反応を、３４０ｎｍでの吸光度の増加を測定することによってモニターする。 反応の直線部分をある期間モニターする。 初期速度を、分光光度計とともに供給されたソフトウェアを用いて決定する。

【０３７０】 本明細書中のライブラリーの化合物を、ある濃度で１００％ＤＭＳＯに溶解したストックとして供給する。 初期スクリーニングを、２つまたは３つの濃度のスクリーニングを用いて、すべての化合物について行う。 ２つのパネルのスクリーニングには、その化合物に対して０．２ｍＭおよび０．１ｍＭの濃度を使用した。 ３つのパネルのスクリーニングには、０．２ｍＭ、０．１ｍＭ、および０．０
５ｍＭの濃度を使用した。 次いで、初期スクリーニングから、「リード化合物」
（例えば、最も大きな阻害能を示した化合物）を、好ましくは、濃度（０．１ｍ
Ｍ〜０．００１ｍＭ）のより広いスクリーニングに供して、各化合物について見かけのＩＣ−５０値を決定する。

【０３７１】 本発明のなおさらに好ましい実施態様においては、細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性について市販の化合物をスクリーニングするために、ハイスループット法を利用する。 さらなる実施態様においては、ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物を、多様な細菌型に対する細菌増殖の阻害剤として試験する。

【０３７２】 本発明のさらなる実施態様においては、ＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物のライブラリー内の化合物を、抗菌活性および抗微生物活性について評価する。 一つの実施態様においては、化合物を、好ましくは、枯草菌( Bacillus subtilis )、 緑膿菌( Pseudomonas aeruginosa )およびスタフィロコッカス・エピデルミティス
( Staphylococcus epidermitis)の増殖を阻害する化合物の可能性について評価する。 阻害剤を、好ましくは、１つの濃度で２回初期スクリーニングする。 試験阻害剤化合物を、固体サンプルをＤＭＳＯに溶解することによって調製する。 阻害剤ストックからのアリコートを、先に論じた液体ハンドラーにより滅菌９６ウェルプレートに配置する。 枯草菌、緑膿菌およびS.epidermitisの培養物を、液体 ブロス（ＬＢ）培地で調製し、オービタルシェーカー(orbital shaker)で一晩インキュベートする。 一晩培養物の（ＬＢ培地での）希釈物を、阻害剤を含有する９６ウェルプレートに添加する。 このプレートをインキュベートし、プレートリーダーで５９５ｎｍにおける吸光度を測定する。

【０３７３】 本発明のこの実施態様において、阻害剤を含有しない希釈した一晩培養物は、
この実験における３つのコントロールのうちの１つとして使える。 ポジティブコントロール（試験される阻害剤として等しい濃度の薬物トブラマイシン(Tobramy
cin)を含有する）およびＤＭＳＯコントロールもまた、各阻害剤スクリーニングにおいて実施される。 阻害剤を含有しないコントロールとの比較のために、ＤＭ
ＳＯコントロールを含めた。

【０３７４】 各阻害剤の阻害パーセントを以下の式により計算した：｛（Ａ _D −Ａ _I ）／Ａ _D ｝＊１００；ここで、Ａ _D ＝ＤＭＳＯコントロールの５９５ｎｍにおける吸光度 およびＡ _I ＝５９５ｎｍでの阻害剤の吸光度。

【０３７５】 さらなる実施態様において、用量反応を、初期スクリーニングにおいて８５％
より大きく阻害した化合物について行う。 用量反応は、５つの異なる濃度（１０
０ｍＭ〜０．１ｍＭ）の各阻害剤、およびポジティブコントロールであるトブラマイシンから構成された。 阻害剤スクリーニングと同様の様式で、培養物を調製し増殖させ、同一のコントロールを含ませた。 吸光度を、６時間の増殖の間、１
． ５時間ごとに測定する。 各試験濃度について阻害パーセントを再び計算する。
８５％以上の阻害が得られた最も低い濃度を、８５％の細胞増殖を阻害した最小阻止濃度（ＭＩＣ ₈₅ ）と名付ける。

【０３７６】 本明細書中のライブラリーのＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物をヒトまたは動物（例えば、哺乳類）に投与する場合、化合物が患者に対して毒性をほとんどまたは全く示さないことが好ましい。 それゆえ、本発明の一つの実施態様において、ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤の毒性を、下記の実施例１０に示すようなヒト上皮細胞を用いて評価する。

【０３７７】

【実施例】

以下の実施例を、ここで特許請求した組成物および方法をいかにして作製し評価するかの完全な開示および説明を当業者に提供するために記載する。 本実施例は、本発明を純粋に例示することを意図しており、本発明者らが彼らの発明と見なす範囲を限定することを意図するものではない。 数値（例えば、量、温度など）に関する精度を保証するための努力は行ったが、いくらかの誤差および偏差は釈明されるはずである。 断りのない限り、部は重量部であり、温度は℃であるかまたは室温であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。

【０３７８】 実施例１：スキーム３（Ｎ＝６）の化合物を個々に調製するための実験手順 以下の実施例１は、前述したスキーム３に記載した合成経路により調製される化合物についての、本発明の一つの実施態様を記載する。 この特定の実施態様の場合、リンカーの長さ（例えば、ｎ）は６に等しい。 本実施態様により調製される化合物を、個々に、すなわち、パラレル液相合成法を用いずに、調製した。 当業者は、本発明の範囲内のリンカーの長さを得るために以下の実施例を変化し得る方法を容易に理解するであろう。

【０３７９】 Ａ． ６−ブロモヘキシル アセタートを用いた５−ニトロインドールのアルキ ル化 。 ５−ニトロインドール（１．００ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２．
０ｍＬ）溶液を、添加ロート(addition funnel)を用いて、あらかじめＤＭＥ（ ３×３．０ｍＬ）を用いて洗浄したＮａＨ（０．２４ｇ、２．０ｍＬ ＤＭＥ中０．０１ｍｍｏｌ）懸濁液に滴下した。 添加ロートの側面をさらに２．０ｍＬのＤＭＥを用いてリンスした。 この添加の間、瞬間的なガスの発生が起こった。 次いで、反応フラスコをあらかじめ８０℃に加熱した油浴内に浸し、１５分間穏やかに還流させた。 次いで、フラスコを周囲温度まで冷却し、ＤＭＥ（２．０ｍＬ
）に溶解した５−ブロモヘキシル アセタート（１．３９ｇ、６．２２ｍｍｏｌ
）溶液を、添加ロートを用いて滴下した。 ロートの側面をさらにＤＭＥ（２．０
ｍＬ）で洗浄した。 次いで、反応フラスコをあらかじめ８０℃に加熱した油浴内に浸し、１８時間還流させた。 後処理は、飽和ＮＨ ₄ Ｃｌ（２５ｍＬ）を用いた 反応のクエンチング、および酢酸エチル（４×２５ｍＬ）での水層の抽出により行った。 有機層を合わせ、無水Ｎａ ₂ ＳＯ ₄で乾燥し、濾過し、減圧下で蒸発乾固させた。 次いで、生成物を、ヘキサン−アセトン（９：３）を用いたシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物（０．３９ｇ）および脱アセチル生成物（１．１１ｇ、合わせた収率９１．２％）を得た。 アセチル化生成物を黄色粘性オイルとして単離した。

【０３８０】 工程Ａからのアセチル化生成物を分析して、以下の確認データを得た：IR (KB
r) 1735 (C=O) cm ^-1 ; ¹ H-NMR (300 MHz) δ8.59 (d, 1H, H-4, J = 2.2 Hz), 8.
12 (dd, 1H, H-6, J = 9.1, 2.2 Hz), 7.35 (d, 1H, H-7, J = 9.1 Hz), 7.26 (
d, 1H, H-2, J = 3.2 Hz), 6.68 (d, 1H, H-3, J = 3.2 Hz); 4.17 (t, 2H, NC H ₂ , J = 7.1 Hz), 4.04 (t, 2H, OC H ₂ , J = 6.6 Hz), 2.03 (s, 3H, アセター ト), 1.90 (五重項, 2H, N-CH ₂ -C H ₂ , 2H, J = 7.2, 7.5 Hz), 1.61 (五重項, 2H
, O-CH ₂ -C H ₂ , J = 6.8, 7.1 Hz), 1.37 (m, 4H, N-CH ₂ -CH ₂ -C H ₂ ); ¹³ C-NMR (75
MHz) δ170.8 (アセタート), 141.0 (C-5), 138.5, 130.7, 127.4, 117.8, 116.
7, 108.9, 103.6, 63.9 (O- C H ₂ ), 46.4 (N- C H ₂ ), 29.8, 28.1, 26.2 (CH ₃ , アセタート), 25.3, 20.7; MS (ES, m/z) 327 amu (M + Na ⁺ ) (100), 305 (M + H ⁺ );
C ₁₆ H ₂₀ N ₂ O ₄に対する分析計算値: C,63.14; H, 6.65; N, 9.20。 実測値: C, 63.
09; H, 6.61; N, 9.14。

【０３８１】 Ｂ． ６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル アセタートのエステル 交換反応 。 工程Ａからのインドール アセタート（１．０７ｇ、３．５２ｍｍｏ
ｌ）をメタノール（２５ｍＬ）に溶解し、無水Ｋ ₂ ＣＯ ₃ （１．４６ｇ、１０．５
７ｍｍｏｌ）を添加した。 次いで、水（８．０ｍＬ）をこの懸濁液に添加した。
反応フラスコ中の内容物を周囲温度で２０時間攪拌した。 反応系を減圧下で溶媒留去することにより後処理した。 次いで、残渣を水（３０ｍＬ）に取り、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）およびエーテル（３×３０ｍＬ）で順次抽出した。 合わせた抽出物を無水Ｎａ ₂ ＳＯ ₄で乾燥し、濾過し、減圧下で溶媒留去した。 粗生成物を、酢酸エチル：ヘキサン（６：４）を用いたシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、化合物８６２を淡黄色固体（０．８５ｇ、９１．
６％）として得た。

【０３８２】 工程Ｂからの物質を分析して、以下の確認データを得た：mp 78.3-78.7℃.
IR (KBr) 3733 (OH) cm ^-1 ; ¹ H-NMR (300 MHz) 8.60 (d, 1H, H-4, J = 2.2 Hz),
8.12 (dd, 1H, H-6, J = 9.1, 2.2 Hz), 7.36 (d, 1H, H-7, J = 9,1 Hz), 7.2
5 (d, 1H, H-2, J = 3.3 Hz), 6.68 (d, 1H, H-3, J = 3.3 Hz), 4.18 (t, 2H,
NC H ₂ , J = 7.1 Hz), 3.63 (q, 2H, OC H ₂ , J = 6.1, 11.6 Hz), 1.88 (五重項,
2H, N-CH ₂ -C H ₂ , 2H, J = 7.2, 7.5 Hz), 1.56 (五重項, 2H, O-CH ₂ -C H ₂ , J = 6
.8, 7.1 Hz), 1.40 (m, 2H, N-CH ₂ -CH ₂ -C H ₂ ), 1.25 (t 1H, OH, J = 5.4 Hz); ^{1 3} C-NMR (75 MHz) 141.0 (C-5), 138.5, 130.9, 127.4, 118.0, 116.8, 109.0, 1
03.7, 62.4 (O- C H ₂ ), 46.6 (N- C H ₂ ), 32.3, 29.9, 26.5, 25.2, ; MS (ES, m/z)
263 amu (M + H ⁺ ) (100), 280 (M + NH ₄ ⁺ ), 285 (M + Na ⁺ ); C ₁₄ H ₁₈ N ₂ O3に対する分析計算値: C,64.10; H, 6.91; N, 10.68。 実測値: C, 64.21; H, 6.91; N,
10.69。

【０３８３】 Ｃ． ニコチン酸を用いた６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキサン−１ −オールのエステル化 。 工程Ｂからのアルコール（０．３５０ｇ、１．３７ｍｍ
ｏｌ）、ニコチン酸（０．２１０ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．３１０
ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１７．０ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）
をジクロロメタン（１２．０ｍＬ）に溶解した。 懸濁液を周囲温度で攪拌し、Ｔ
ＬＣでモニターした。 ２０時間後、白色固体を濾別し、フィルターをジクロロメタン（１５．０ｍＬ）で洗浄し、有機濾液を食塩水（３×２５ｍＬ）で洗浄することによって、反応系を後処理した。 次いで、濾液を無水Ｎａ ₂ ＳＯ ₄で乾燥し、
蒸発乾固させた。 生成物の精製を、酢酸エチル−ヘキサン（６：４）を用いたシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより行い、黄色固体（０．４５ｇ、
９０％）として生成物を得た。 工程Ｃからの物質を分析して、以下の確認データを得た：mp ℃; IR (KBr)
1717 (C=O) cm ^-1 ; ¹ H-NMR (300 MHz) δ9.13 (d, 1H, H-2', J = 1.9 Hz), 8.71
(dd, 1H, H-6', J = 4.8, 1.5, Hz), 8.51 (d, 1H, H-4, J = 2.2 Hz), 8.20 (
dt, 1H, H-4', J = 2.0, 6.0 Hz), 8.03 (dd, 1H, H-6, J = 9.1, 2.2 Hz), 7.3
2 (dd, 1H, H-5', J = 4.8, 1.1 Hz), 7.29 (d, 1H, H-7, J = 9.1 Hz), 7.17 (
d, 1H, H-2, J = 3.2 Hz), 6.60 (d, 1H, H-3, J = 3.2 Hz); 4.25 (t, 2H, NC H ₂ , J = 6.5 Hz), 4.11 (t, 2H, OC H ₂ , J = 7.0 Hz), 1.83 (五重項, 2H, N-CH ₂ -C H ₂ , 2H, J = 7.2, 7.5 Hz), 1.70 (五重項, 2H, O-CH ₂ -C H ₂ , J = 6.8, 7.1 H
z), 1.36 (m, 2H, N-CH ₂ -CH ₂ -C H ₂ ); ¹³ C-NMR (75 MHz) δ164.9 (ニコチナート
C=O), 153.1 (C-2'), 150.5 (C-6'),141.0 (C-5), 138.4(C-7), 136.7 (C4'), 1
30.8 (C-2), 127.3 (C-3'), 125.8 (C-3), 123.1 (C-5'), 117.8 および 116.8
(C-4,6), 108.9 (C-7), 103.6 (C-3), 64.9 (O- C H ₂ ), 46.5 (N- C H ₂ ), 29.7 (OC
H ₂ C H ₂ , 28.2 (N-CH ₂ C H ₂ ), 26.3 (O-CH ₂ CH ₂ - C H ₂ ), 25.4; MS (ES, m/z) 368 amu
(M + H ⁺ ) (100)。

【０３８４】 Ｄ． ６−［Ｎ−（５−ニトロインドリル）］ヘキシル ニコチナートのＮ−メ チル化 。 工程Ｃからのエステル（０．１０４ｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）をヨードメタン（０．０３６ｍＬ、０．５８９ｍｍｏｌ）と混合した。 反応系を油浴で６
０℃まで一晩（１８時間）加熱した。 後処理は、減圧下での溶媒の留去、次いで２−プロパノールを用いる残渣の再結晶により行い、黄色固体（０．１２０ｇ、
８２．３％）を得た。

【０３８５】 工程Ｄからの物質を分析して、以下の確認データを得た：mp 109.1-109.9℃
; IR (KBr) 1717 (C=O) cm ^-1 ; ¹ H-NMR (300 MHz) δ9.42 (sm 1H,H-2'), 9.11 (
d, 1H, H-6', J = 6.1 Hz), 8.63 (d, 1H, H-4', J = 8 Hz), 8.50 (d, 1H, H-4
, J = 2.0 Hz), 8.19 (dt, 1H, H-6, J = 6.3, 7.9 Hz), 8.01 (dd, 1H, H-5',
J = 2.3, 9.1 Hz), 7.56 (d, 1H, H-7, J = 9.1 Hz), 7.50 (d, 1H, H-2, J = 3
.1 Hz); 6.69 (d, 1H, H-3, J = 330 Hz); 4.50 (s, 3H, N ⁺ -CH ₃ ); 4.42 (t, 2H
, NC H ₂ , J = 6.4 Hz), 4.31 (t, 2H, OC H ₂ , J = 6.9 Hz), 1.95 (五重項, 2H,
N-CH ₂ -C H ₂ , 2H, J = 7.2, 7.5 Hz), 1.84 (五重項, 2H, O-CH ₂ -C H ₂ , J = 6.8,
7.1 Hz), 1.46 (m, 2H, N-CH ₂ -CH ₂ -C H ₂ ); ¹³ C-NMR (75 MHz) δ162.7 (ニコチナート C=O), 149.8 (C-), 148.2 (C-),142.7 (C-5), 140.5 (C-7), 133.2 (C-4')
, 132.2 (C-2), 129.4 (C-3'), 129.3 (C-3), 118.8 および 117.8 (C-4,6), 11
1.1 (C-7), 104.8 (C-3), 67.7 (O- C H ₂ ), 49.6 (N ⁺ -CH ₃ ), 47.5 (N- C H ₂ ), 30.9
(O-CH ₂ C H ₂ , 29.2 (N-CH ₂ C H ₂ ), 24.2 (O-CH ₂ CH ₂ - C H ₂ ); MS (ES, m/z) 368 amu (M ⁺ ) (100), 127 (I ^- ) (100); C ₂₀ H ₂₄ N ₃ O ₄ Iに対する分析計算値: C, 48.50; H, 4.
48; N, 8.48。 実測値: C, 48.36; H, 4.46; N, 8.34。

【０３８６】 スキーム４〜６に関して以下に記載される合成手順を、例えば、パラレル液相合成法を用いて、コンビナトリアルケミストリー法として使用するために開発した。 当業者はこれらの用語の意味を理解するだろう。

【０３８７】 実施例２：スキーム４に記載した液相コンビナトリアルライブラリーを調製するために使用される一般的実験手順 以下の実施例２は、前述したスキーム４に記載される合成経路により調製される化合物についての本発明の好ましい実施態様を記載する。 当業者は、本発明の新規かつ非自明な特徴から逸脱することなく、本実施態様の多くの可能な変形が存在することを理解するだろう。

【０３８８】 Ａ． ブロモアルキル アセタートを用いた５−ニトロインドールのアルキル化 およびインドールアルキル アセタートのアルコールへの変換 。 ５−ニトロインドール（１ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．０ｍＬ）溶液を、４ドラムバイアル（サイズ２８×５７ｍｍ）中に調製した。 次いで、この溶液をＮａＨ（
０．２２ｇ、９．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８．０ｍＬ）懸濁液を含有する第２
の４ドラムバイアルに移した。 その添加の間、瞬間的なガス発生が観察され、窒素インレットを使用しガス圧力の増加を防いだ。 次いで、ロボット合成装置を用いて、合成装置ブロックの５つの培養管（１６×１２５ｍｍ）に、インドールナトリウム塩溶液（３．０ｍＬ）を分配した。 ブロモアルキル アセタート（１．
３６ｍｍｏｌ）を、４ドラムバイアル中でＤＭＦ（８ｍＬ総容量、１．３６Ｍ溶液）に溶解し、この溶液のうち１ｍＬを、ロボット合成装置を用いて指定の試験管に移した。 反応系を、周囲温度で１５時間、振盪を止めておいた後、トリス（
２−アミノエチル）アミン樹脂（０．１５ｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）を添加し、
反応系を５５℃に加熱しながら１２時間振盪した。 それぞれ綿栓をし２４口の多岐管に接続した３ｃｃのシリンジを用いて、水流アスピレーターにより真空吸引しながら樹脂を濾過した。 濾液を培養管（１６×１２５ｍｍ）に集め、樹脂をＭ
ｅＯＨ（３．０ｍＬ）を用いて洗浄した。 管を反応ブロックに配置する前に、触媒量のＮａＨ（１０〜１２ｍｇ）を各管に添加して、周囲温度で１２時間振盪した。 後処理は、酢酸エチル（４．０ｍＬ）および水（３．０ｍＬ）の各サンプルへの添加、振盪、および有機層の除去、引き続いて、食塩水（２×３．０ｍＬ）
を用いた有機層の洗浄により行った。 有機層を無水Ｎａ ₂ ＳＯ ₄で乾燥し、濾過し（上記を参照）、そして溶媒を４ドラムバイアルに移し、高速真空(speed vac) を用いて溶媒留去して、固体残渣としてアルコールを得た（この残渣の重量範囲は１００ｍｇから２２６ｍｇまでであった）。

【０３８９】 Ｂ． インドールアルキル エステルの形成 。 上記アルコール（０．１００ｇ、
０．３８１ｍｍｏｌ）をアルゴンでパージして、ジクロロメタン（５．０ｍＬ）
に溶解し、１ｍＬのアリコートを５つの培養管（１３×１００ｍｍ）に移し、トリエチルアミン（１０６μＬ）を各管に添加し、次いで、管に蓋をして、１５分間氷浴中に置いた。 次いで、メタンスルホニル クロリド（３８μＬ）を各バイアルに添加し、次いで、１０秒間手で振盪し、１．８℃の冷蔵庫中に１２時間置いた。 各サンプルを酢酸エチル（５ｍＬ）の添加により後処理し、水（２×３ｍ
Ｌ）および食塩水（３ｍＬ）で洗浄した。 有機層を、無水Ｎａ ₂ ＳＯ ₄を含有するＢ−Ｄ ３ｃｃシリンジに、上記多岐管を用いて通し、培養試験管（１６×１２
５ｍｍ）に濾液を集めることによって乾燥した。 次いで、溶媒を４ドラムバイアルに移し、溶媒留去して（上記を参照）、０．１２８ｇ〜０．１５９ｇの重量の残渣を得た。 次いで、バイアル中の残渣（０．１２８ｇ、０．４９８ｍｍｏｌ）
をアルゴンでパージして、無水ＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。 次いで、この溶液を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２当量のニコチン酸（４５７ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ
）および１当量のＫ ₂ ＣＯ ₃ （１２０ｍｇ、０．８５８ｍｍｏｌ）を含有する培養管（１３×１００ｍｍ）に移した。 管を振盪し、デジタル制御されたヒートブロックで、５０℃で１５時間加熱した。 管の内容物を酢酸エチル（５ｍＬ）を含有する４ドラムバイアルに注ぎ入れることにより、反応系を後処理し、これを水（
２×５ｍＬ）および食塩水（２×５ｍＬ）で洗浄した。 有機層を、無水Ｎａ ₂ Ｓ Ｏ ₄を含有する３ｃｃのシリンジに通して乾燥した（上記を参照のこと）。 濾液 を培養管（１６×１２５ｍｍ）に回収し、４ドラムバイアルに移し、減圧下で溶媒留去して、重量範囲２７ｍｇ〜５９ｍｇの残渣としてエステルを得た。

【０３９０】 Ｃ． Ｎ−メチル化 。 上記工程Ｂからのエステル（３２ｍｇ、０．１０８ｍｍｏ
ｌ）を培養管（１３×１００ｍｍ）に移し、ＤＭＥ（１．５ｍＬ）に溶解し、続いて、５当量のヨードメタン（３６μＬ、０．０７７ｍｍｏｌ）を添加した。 管を振盪し、デジタルヒートブロックで５０℃で１２時間加熱した。 後処理は、管の内容物を１ドラムバイアルに移し、溶媒を減圧下で蒸発させることにより行い、これにより固体生成物としてＮ−メチル誘導体（重量範囲１７ｍｇ〜３９ｍｇ
）を得た（これは濾過により単離した）。

【０３９１】 実施例３：スキーム５に記載した液相コンビナトリアルライブラリーを調製するために使用される一般的実験手順 以下の実施例３は、前述したスキーム５に記載の合成経路により調製される化合物についての本発明の好ましい実施態様を記載する。 当業者は、本発明の新規かつ非自明な特徴から逸脱することなく、本実施態様の多くの可能な変形が存在することを理解するだろう。

【０３９２】 Ａ． インドール カルボキシラートのメチルおよびベンジルエステル 。 炭酸カリウム（０．５５当量）を、室温で乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中で攪拌したインドールカルボン酸（６．１ｍｍｏｌ）に添加した。 １０分後、ヨウ化アルキル（ベンジルまたはメチル）（１．１当量）を添加した。 これを、２４時間後、３０ｍ
Ｌの遠心管中で、ＲＭをとり、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で希釈し、そしてＮａＨ
ＣＯ ₃ （２×１０ｍＬ）、Ｈ ₂ Ｏ（２×１０ｍＬ）および食塩水（１０ｍＬ）で洗浄することにより後処理した。 得られた溶液を乾燥（Ｎａ ₂ ＳＯ ₄ ）し、蒸発乾固させて、ＥｔＯＡｃ−ヘキサンから再結晶した。

【０３９３】 Ｂ． ブロモアルキル アセタートを用いたインドールエステルのＮ−アルキル 化 。 ＮａＨ（２．９３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４ｍＬ）で洗浄し、乾燥ＤＭＦ
（７ｍＬ）中に再懸濁し、窒素雰囲気下０℃で冷却した。 乾燥インドールカルボキシラート エステル（１．９５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（７ｍＬ）溶液を、２
０ｍＬバイアルに入れたＮａＨ懸濁液にゆっくりと滴下した。 これをオービタルシェーカーで混合し、室温まで昇温した。 １時間後、各１４ｍＬ溶液のうち２ｍ
Ｌを７つの１００×１３培養管（各０．２８５ｍｍｏｌを含有する７×７＝４９
個の管）に分けた。

【０３９４】 各リンカーサイズ（例えば、ｎ＝５〜９）について、ブロモアルコール アセタート（７．７当量）を、乾燥ＤＭＦを用いて３．５ｍＬに希釈した。 この溶液の一部（０．５ｍＬ、１．１当量、０．３１３ｍｍｏｌ）を、インドールアニオンを含有する反応混合物にゆっくりと添加した。 混合物を室温で１５時間振盪した。 生成物のＴＬＣはＲｆ＝０．３〜０．７（３：７ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）
を示した。

【０３９５】 各培養管を、ポリマーで支持した捕捉樹脂、トリス（２−アミノエチル）アミン（０．１６当量、０．０４６ｍｍｏｌ）で処理し、そして管を５０℃で６．５
時間振盪した。 混合物を、２４口多岐管を用いて、１ｍＬシリンジ中の綿を通して濾過し、乾燥ＭｅＯＨ（２ｍＬ）でフィルターを洗浄し、そして、１００×１
３ｍｍ培養管に濾液を回収し、濃縮して、生成物を得た。

【０３９６】 Ｃ． インドールアルキル アセタートからのアルコールの形成 。 メチルエステルの場合、ＭｅＯＨ−ＭｅＯＮａ溶液を以下のように調製した：ＮａＨ（２．８
５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２×２ｍＬ）で洗浄し、乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）に懸濁し、０℃で冷却し、そして乾燥ＭｅＯＨ（８ｍＬ）をゆっくりと添加した。 次いで、得られた混合物を室温で３０分間振盪した。 この溶液の一部（０．２ｍＬ
、０．２当量）を、インドールアルキル アセタートを入れた各管に分け、そして得られた混合物を室温で１６時間振盪した。 この混合物を３０ｍＬ遠心管中、
ＥｔＯＡＣ（６ｍＬ）で希釈し、Ｈ ₂ Ｏ（５ｍＬ）で抽出した。 水性洗浄液をＥ ｔＯＡｃ（３×２ｍＬ）で再抽出した。 合わせたＥｔＯＡｃ層をＨ ₂ Ｏ（２×４ ｍＬ）および食塩水（２ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ ₂ ＳＯ ₄ ）し、そして２０ｍ
Ｌのバイアル中に濾過した。 溶媒を減圧下の高速真空で除去して、生成物を得た：Ｒｆ＝０．０５〜０．３５（３：７ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）。

【０３９７】 ベンジルエステルの場合、１Ｎ ＮａＯＨ溶液（５当量）をインドールアルキル アセタートに添加し、混合物を室温で２日間振盪した。 混合物を３０ｍＬ遠心管中、ＥｔＯＡＣ（６ｍＬ）で希釈し、Ｈ ₂ Ｏ（５ｍＬ）で抽出した。 水性洗 浄液をＥｔＯＡｃ（３×２ｍＬ）で再抽出した。 合わせたＥｔＯＡｃ層をＨ ₂ Ｏ （２×４ｍＬ）および食塩水（２ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ ₂ ＳＯ ₄ ）し、２０
ｍＬのバイアル中に濾過した。 溶媒を減圧下の高速真空で除去して、生成物を得た：Ｒｆ＝０．０５〜０．３５（３：７ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）。

【０３９８】 Ｄ． インドール アルコールと芳香族アミンとのカップリング 。 乾燥ＣＨ ₂ Ｃ ｌ ₂ （１ｍＬ）中の上記アルコール（０．１ｍｍｏｌ）に、芳香族アミン（１０ 当量のピリジン、キノリン、イソキノリン、またはニコチン酸メチル；４当量のベンジル ３−キノリンカルボキシラート）を添加した。 得られた混合物を０℃
で冷却して、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．３当量）をゆっくりと添加した。 混合物を０℃で２時間振盪し、次いで、室温で１４時間振盪した。 反応混合物をＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ（３×１ｍＬ）、水（
２×１ｍＬ）および食塩水（１ｍＬ）で洗浄した。 この溶液を乾燥（Ｎａ ₂ ＳＯ ₄ ）し、減圧下の高速真空で濃縮して、生成物を得た。

【０３９９】 Ｅ． メチルおよびベンジル インドールカルボキシラートのカルボン酸への変 換 。 メチルエステルの場合、メチル インドールカルボキシラート（０．１ｍｍ
ｏｌ）をＭｅＯＨ−Ｈ ₂ Ｏ（３：１、０．８ｍＬ）に可溶化し、そして１Ｎ Ｎ ａＯＨ（ジエステルの場合７当量、モノエステルの場合５当量）を添加した。 次いで、反応混合物をオービタルプラットフォームシェーカーで、４５℃で１４時間加熱した。 この溶液を高速真空で蒸発乾固させ、残渣を生物学的評価のためにＤＭＳＯに溶解した。

【０４００】 ベンジルエステル（０．０４〜０．０９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ−ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ −
Ｈ ₂ Ｏ（８：１：１）の混合物（１．５ｍＬ）に可溶化し、１０ガラスビーズ（ 直径３ｍｍ）を含む１００×１３ｍｍ培養管中で、Ｐｄ／Ｃ（１０％）（５０ｍ
ｇ）を用いて、４０ｐｓｉ Ｈ ₂下、室温で８時間水素化した。 これらの条件下 では、１４個の管を５００ｍＬ ＰＡＲ装置ボトルに配置することができた。 セライトパッドでの濾過および減圧下の高速真空での濃縮により、カルボン酸を得た。 還元されたピリジニウム環を含む生成物もまた生成した。

【０４０１】 実施例４：スキーム６に記載した液相コンビナトリアルライブラリーを調製するために使用される一般的実験手順 以下の実施例４は、前述したスキーム６に記載した合成経路により調製される化合物についての本発明の好ましい実施態様を記載する。 当業者は、本発明の新規かつ非自明な特徴から逸脱することなく、本実施態様の多くの可能な変形が存在することを理解するだろう。

【０４０２】 Ａ． アニリンの臭素化 。 市販のアニリン（０．０２ｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（４０ｍＬ）を、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ
、１．１当量）を用いて、室温で一晩処理した。 得られた混合物を氷中に注ぐことによりクエンチし、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、２×３０ｍＬ）で抽出した。 合わせた有機層を、水（３０ｍＬ）、食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ ₄で 乾燥し、濾過し、濃縮して、生成物を得た。

【０４０３】 Ｂ． ヘックカップリング 。 １０×１．３ｃｍ試験管中、２−ブロモ−Ｒ ¹ −置 換アニリン（０．００６ｍｏｌ）（１当量）の無水トリエチルアミン溶液（ＴＥ
Ａ、３ｍＬ）に、ビストリフェニルホスフィン パラジウム クロリド（２ｍｏ
ｌ％）を室温で添加し、続いて、ヨウ化銅（２ｍｏｌ％）を添加した。 この不均一な混合物に、対応する末端アルキノール（１．５当量）およびガラスビーズを添加した。 得られた混合物を、激しい渦振盪下、８０℃で６時間反応させた。 冷却後すぐに、反応混合物を（５ｍＬ使い捨てシリンジ中の）セライトベッドで濾過した。 高真空（高速真空）下で濃縮して、生成物を得た。

【０４０４】 Ｃ． インドールを形成するための環化 。 室温で、１０×１．３ｃｍ試験管中のアルキン−置換アニリンの無水アセトニトリル（３ｍＬ）溶液に、塩化パラジウム（２ｍｏｌ％）を添加し、続いて、ガラスビーズを添加した。 得られた混合物を、激しい渦振盪下、１時間６０℃まで加熱した。 冷却後すぐに、反応混合物を（５ｍＬ使い捨てシリンジ中の）セライトベッドで濾過した。 溶媒を高真空（高速真空）下で留去して、生成物を得た。

【０４０５】 Ｄ． アミンを用いる四級化 。 １０×１．３ｃｍ試験管中、窒素雰囲気下で、インドール アルコールの芳香族アミン（ピリジン、キノリンまたはイソキノリン）（２ｍＬ）の冷却（０℃）溶液に、トリフルオロメタンスルホニル無水物（Ｔ
ｆ ₂ Ｏ）（１．３当量）を添加した。 得られた溶液を６時間反応させた。 反応混 合物を、氷冷した１．５Ｎ ＨＣｌ溶液（３ｍＬ）の添加、続いて、ＥｔＯＡｃ
（４ｍＬ）の添加によりクエンチした。 有機層を水（３ｍＬ）、食塩水（３ｍＬ
）で洗浄し、ＭｇＳＯ ₄で乾燥し、そして未反応有機物質を除去するために（１ ×２ｃｍ、５ｍＬシリンジ中の）シリカゲルカラムを通して濾過した。 次いで、
カラムをジクロロメタン：メタノール（１９：１）溶液（４ｍＬ）で洗い流した。 この抽出物を濃縮して、生成物を得た。

【０４０６】 Ｅ． 単離されたメシラートの形成 。 １０×１．３ｃｍ試験管中、インドール
アルコールの無水ＤＣＭ溶液（２ｍＬ）に、室温で、ＴＥＡ（１．５当量）を添加した。 得られた溶液を０℃まで冷却し、メタンスルホニル クロリド（１．１
当量）で１時間処理した。 反応混合物を、水（３ｍＬ）、続いてＤＣＭ（３ｍＬ
）の添加によりクエンチした。 有機層を食塩水（３ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ ₄で乾燥し、（５ｍＬ使い捨てシリンジ中の）セライトベッドを通して濾過し、そして高真空（高速真空）下で濃縮して、インドール メシラートを得た。

【０４０７】 Ｆ． エステルの形成 。 １０×１．３ｃｍ試験管中のインドール メシラート（
１当量）の無水ＤＭＦ溶液（２ｍＬ）に、室温で、対応するカルボン酸（Ｒ ₃ − ＣＯＯＨ、２当量）、続いて、Ｋ ₂ ＣＯ ₃ （２当量）およびガラスビーズを添加した。 得られた懸濁液を激しい渦振盪下、１６時間５５℃まで加熱した。 冷却後すぐに、反応混合物を、水（３ｍＬ）、続いて酢酸エチル（３ｍＬ）の添加によりクエンチした。 有機層を食塩水（４ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ ₄で乾燥し、（５ ｍＬ使い捨てシリンジ中の）綿ベッドを通して濾過し、高真空（高速真空）下で濃縮して、最終物のエステルを得た。

【０４０８】 実施例５：結晶化、データ収集、およびＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物とＮＡ
Ｄシンテターゼ酵素との間の構造相関を決定するための一般的手順Ａ． 結晶化 。 タンパク質を文献に記載されたように発現させ、精製した。 （Ne
ssi, C., Albertini, A., Speranza, M..L.およびGalizzi, A. The out B gene of Bacillus subtilis codes for NAD ⁺ synthetase ． J. Biological Chemistry
270, 6181-6185）。 ２８℃での蒸気拡散(vapor diffusion)によって、２１〜２
３％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００、１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５
． ２）、５０ｍＭ ＭｇＣｌ ₂ 、２．５ｍＭ β−メルカプトエタノールから、 結晶を成長させた。 阻害剤を最小容量のＰＥＧ４００に溶解し、次いで、２３％
ｖ／ｖＰＥＧ４００中の最終濃度が５〜１０ｍＭとなるように結晶化媒体と混合した。 １０μｌのタンパク質溶液（結晶化緩衝液中１６ｍｇ／ｍｌ）を、２８℃
でインキュベートした結晶化媒体中の１０μＬの阻害剤と混合した。 阻害剤と複合体化したＮＡＤシンテターゼの得られた結晶は、文献に以前記載された空間群Ｐ２１に属した（Rizzi, M., Nessi, C., Matteve, A., Coda, A.およびGalizzi
, A. Crystal structure of NH ₃ -dependent NAD ⁺ synthetase from Bacillus su btilis . EMBO Journal 15, 5125-5134 (1996)）。

【０４０９】 Ｂ． データ収集 。 ＮＡＤシンテターゼと阻害剤との異なる複合体についての回折データを、Ｘｓｔｒｅａｍ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍ装置を用いて、Ｒ−ａｘｉ
ｓＩＩ ｉｍａｇｅ ｐｌａｔｅおよびＲ−ａｘｉｓＩＶ ｉｍａｇｅ ｐｌａ
ｔｅならびに回転アノードＸ線源を使用して、周囲温度または１２０ ^o Ｋで収集 した。 記載されたＤＥＮＺＯおよびＳＣＡＬＥＰＡＣＫを用いて、データを処理した。 （Otwinowski, Z.,およびMinor, W. Processing of X-ray data collecte
d in oscillation mode. in Carter CW Jr.およびSweet MM（編）, Methods o
f Enzymology,第76巻, 307-326, Academic Press, New York (1996)）。 引き続 くすべての計算を、ＣＣＰ４プログラムスイートを用いて行った。 （CCP4. The
SERC (UK) Collaborative Computing Project No. 4, A suite of Programs for Protein Crystallography , SERC Daresbury Laboratory, Warrington, UK, 197
9）。

【０４１０】 Ｃ． 分子構造精密化 。 ＮＡＤシンテターゼと阻害剤とのすべての複合体は、最近解析されたＡＭＰ、ＰＰｉ、ＡＴＰおよびＭｇ ²⁺と複合体化したＮＡＤシンテターゼの構造と同型であった(Rizzi, M., Nessi, C., Bolognesi, M., Coda, A.
およびGalizzi, A. Crystallization of NAD ⁺ synthetase from Bacillus subt ilis . Proteins 26, 236-238 (1996))。 リガンドおよび水分子を除くこの構造 から得た座標を、２．０Ａ分解における遊離酵素の開始モデルとして使用した。
剛体分子構造精密化(rigid-body refinement)、続いて、模擬アニーリングを、 Ｘ−ＰＬＯＲ (Brunger, AT, X-PLOR Version 3.1. A system for X-ray Crys
tallography and NMR ( Yale Univ Press, New Haven, CT, 1992))を用いて、２
． ０Ａ分解に対するすべての反射を用いて収束が達成されるまで行った。 ＮＡＤ
シンテターゼと阻害剤との複合体の位相調整および分子構造精密化に、遊離酵素のモデルを引き続いて用いた。 特定のモデルのＸ−ＰＬＯＲを用いた分子構造精密化の手順は、第１の模擬アニーリングサイクルおよびタンパク質の位置的分子構造精密化を含んでいた。 阻害剤を、ＱＵＡＮＴＡ（分子シミュレーション） (
Jones, T., Zou, J., Cowan, S.およびKjeldgaard, M. Improved method for bu ilding protein models in electron density maps and the location of the e rrors in these models . Acta Crystallogr. A 47, 110-119 (1991))およびＯを用いて、（Ｆ _o −Ｆ _c ）α _cディファレンスフーリエマップ(difference Fourier m
ap)に手動で組み込み、そして分子構造精密化を続けた。 次いで、バルク溶媒の 修正(bulk solvent correction）を適用し、標準的な基準に従い正しく配置された水分子を追加した。

【０４１１】 実施例６：「一回一種」インビトロスクリーニング法 下記した「一回一種」インビトロ細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素活性アッセイを、選択した活性分子および合成ダイマーの相対活性を試験するために用いた。 本明細書中のライブラリーのうちの選択したＮＡＤシンテターゼ阻害剤化合物および細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素活性阻害剤能を有することが予測される市販の化合物を試験するために、本方法を用いた。

【０４１２】 ２０ｍＭ ＫＣｌを含有する６０ｍＭ ＨＥＰＰＳ（ｐＨ８．５）溶液（１０
１４Ｌ）を、以下の種を含有するように調製した：０．２１０ｍＭ ＡＴＰ、０
． １５２ｍＭ ＮａＡＤ、４ｍＭ ＭｇＣｌ ₂ 、１０ｍＭ ＮＨ ₄ Ｃｌ、０．２１
ｍｇ／ｍＬ ＡＤＨ、および１％ ＥＴＯＨ。 次いで、試験阻害剤のストック溶液を、固体サンプルを１００％ＤＭＳＯに溶解することによって調製した。 次いで、２０Ｌの試験化合物ストック溶液をこの混合物に添加して、表記した最終試験化合物濃度を得た。 酵素アッセイを開始するために、１６Ｌの６５ｇ／ｍＬ
ＮＡＤシンテターゼ溶液を添加し、混合物を３回混合し、次いで、３４０ｎｍでの吸光度を、Ａｖｉｖ １４ＤＳ ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計を用いて、４００秒間、反応動力学的にモニターした。 次いで、酵素添加後３０秒から約２５０秒までの初期反応動力学トレースを、線形回帰を用いて直線にフィットさせ、次いで、この速度を、阻害％を計算するための以下の式を用いて、阻害剤を含有しないコントロールのものと比較した：｛（Ｖｏ−Ｖ）／Ｖｏ｝＊１００％（ここで、
Ｖｏは試験化合物が存在しない場合の反応速度であり、Ｖは試験化合物を加えた場合の反応速度である）。 各化合物を３回試験し、得られた阻害％の値を平均化して、表記した値を得た。 ６つの異なる試験化合物濃度（０．０と２．０ｍＭとの間の濃度）を３回アッセイし、得られた阻害％値を試験化合物用量の−ＬＯＧ
に対してプロットして５０％の阻害が観察された濃度を得ることによって、選択化合物についてのＩＣ ₅₀値を得た。

【０４１３】 実施例７：異なる細菌型における細菌ＮＡＤシンテターゼ活性の比較 アッセイにおいて活性であることが見出された化合物（化合物８６４）がまた、種々の異なる細菌の効果的な阻害剤であるか否かを最初に決定するために、標準的な抗生物質アッセイを行った。 結果を表２０６に要約した。 このアッセイにおいては、化合物８６４（ＤＭＳＯ中２５μｇ／ｍｌ）２５０μｇを６ｍｍまたは７ｍｍのペーパーディスク上にスポットした。 各ディスクを、細菌を層化した別々の３０ｍｌ固形培地プレート上に配置した。 ストレプトコッカス( Streptoco ccus )には血液寒天プレートを用い、表２０６のその他の微生物には最小グルコ ースプレートを用いた。 ＤＭＳＯコントロールは、ネガティブな結果を与えた。

【０４１４】

【０４１５】 化合物８６４が阻害活性を示したことから、種々の細菌における細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害活性を推定することができる。 さらに、このデータから細菌ＮＡ
Ｄシンテターゼ酵素の阻害が、グラム陽性菌およびグラム陰性菌の両方の阻害に対応することが明白である。 そのようなデータはまた、本明細書中の化合物の殺菌剤(bacteriacidal agent)、抗微生物剤および消毒薬としての有効性を示す。

【０４１６】 実施例８：阻害剤のハイスループットスクリーニングへの酵素アッセイの適合 「一回一種」インビトロアッセイとして先に論じた、プライマリ生物学的スクリーニングとして利用した細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害活性についての酵素反応動力学アッセイを、多くの化合物を短い時間で、すなわちハイスループットシステムでスクリーニングし得るように、マイクロタイタープレートフォーマットに適合させた。

【０４１７】 最終反応混合物は、０．２ｍｌの６０ｍＭ ＨＥＰＰＳ緩衝液（ｐＨ８．５）
、１０ｍＭ ＭｇＣｌ ₂ 、１９ｍＭ ＮＨ ₄ ＣＬ ₂ 、２０ｍＭ ＫＣＬ、０．１ｍ Ｍ ＮａＡＤ、０．３％ ｎ−オクチル−Ｄ−グルコピラノシド、１％ エタノール、１ｇ／ｍｌ ＮＡＤシンテターゼ、６２．５ｇ／ｍｌ 酵母アルコール脱水素酵素、０．２ｍＭ ＡＴＰおよび２．５％ ＤＭＳＯを含んでいた。

【０４１８】 試験化合物の阻害活性の測定を、ハイスループットスクリーニングシステム（
ＨＴＳシステム）を用いて行った。 ＨＴＳシステムは、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏ
ｍｅｋ ２０００液体ハンドラーおよびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ分光光度計の機能を調整する一体化Ｓａｇｉａ
ｎ ２Ｍ ＯＲＣＡロボットシステムを利用する。 ２Ｍ ＯＲＣＡロボットステーションは、作業台上のすべてのハードウェアの動きおよび複数のステーションの統合の責任を負った。 Ｂｉｏｍｅｋ ２０００を、液体の分配および混合のすべての段階を行うようにプログラムする。 ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ分光光度計を、９６ウェルプレートフォーマットでの吸光度をモニターするために取り付けた。

【０４１９】 本アッセイを９６ウェルプレートフォーマット用に設計し、そして６０ｍＭ
ＨＥＰＰＳ緩衝液（ｐＨ８．５）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ ₂ 、１９ｍＭ ＮＨ ₄ ＣＬ ₂ 、２０ｍＭ ＫＣＬ、０．１１８ｍＭ ＮａＡＤ、０．３％ ｎ−オクチル− Ｄ−グルコピラノシド、１．１８％ エタノール、１．１８ｇ／ｍｌ ＮＡＤシンテターゼ、および７３．７５ｇ／ｍｌ酵母アルコール脱水素酵素を含有する反応緩衝液０．１７０ｍｌを分配することによって開始した。 Ｂｉｏｍｅｋ ２０
００がこの液体操作の段階を終えるとすぐに、１００％ ＤＭＳＯ中の試験化合物０．００５ｍｌ容量またはＤＭＳＯ ０．００５ｍｌを反応ウェルに分配した。 Ｂｉｏｍｅｋ ２０００は、所定の混合プログラムを利用して、これらの成分を混合した。 反応を、６０ｍＭ ＨＥＰＰＳ緩衝液（ｐＨ８．５）、１０ｍＭ
ＭｇＣｌ ₂ 、１９ｍＭ ＮＨ ₄ ＣＬ ₂ 、２０ｍＭ ＫＣＬ、２．５％ ＤＭＳＯ、 および０．３％ ｎ−オクチル−Ｄ−グルコピラノシドに溶解した１．６ｍＭ
ＡＴＰ溶液０．０２５ｍｌを添加することによって開始した。 反応を３０４ｎｍ
での吸光度の増加を測定することによってモニターした。 反応の直線部分を１８
０秒間モニターした。 初期速度を、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ分光光度計とともに供給されるソフトウェア）を用いて決定した。

【０４２０】 化合物を、１００％ ＤＭＳＯに溶解した５０ｍＭの濃度を有するストックとして供給した。 初期スクリーニングを、２つまたは３つの濃度のスクリーニングを用いて、すべての化合物において行った。 ２つのパネルのスクリーニングは、
それらの化合物について濃度０．２ｍＭおよび０．１ｍＭを使用した。 ３つのパネルのスクリーニングは、濃度０．２ｍＭ、０．１ｍＭおよび０．０５ｍＭを使用した。 初期スクリーニングから、最も大きな阻害能を示したリード化合物を、
次いで、より広い濃度のスクリーニング（０．１ｍＭ〜０．００５ｍＭ）に供し、各化合物について見かけのＩＣ−５０値を決定した。

【０４２１】 初期速度の二重逆数プロットにより、２ｍＬキュベットアッセイについて以下の表に示した速度パラメータを得た。 ０．２ｍＬマイクロタイタープレートアッセイで得られたＫｍ値もまたこの表に含める。 この後者のアッセイでは、Ｂｅｃ
ｋｍａｎｎ／Ｓａｇｉａｎ自動化ロボットシステムが、本方法の１つの好ましい実施態様におけるハイスループットスクリーニングのために供給された。

【０４２２】

【０４２３】 好ましいハイスループットシステムおよび前述した細菌ＮＡＤシンテターゼ阻害酵素活性に適合させた酵素学的スクリーニングアッセイにより、多数の化合物を短い期間でスクリーニングすることができる。

【０４２４】 実施例９：化合物のＮＡＤシンテターゼ阻害活性 本明細書中のライブラリーの化合物を、実施例８に上記したハイスループット酵素反応動力学アッセイを用いてスクリーニングした。 以下の表２１０、２１２
、２１４および２１６は、０．２５ｍＭ、０．２ｍＭ、０．１ｍＭおよび０．０
５ｍＭ用量で試験した本明細書中のライブラリーの多数の化合物についてのＮＡ
Ｄシンテターゼ酵素阻害データをそれぞれ示す。

【０４２５】

【０４２６】

【０４２７】

【０４２８】

【０４２９】 表２１８は、本明細書中に開示したＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物ライブラリーの様々な効力のある化合物（「リード化合物」）を記載する。 化合物の効力をＩＣ ₅₀値により表す。 ＩＣ ₅₀値は、酵素を５０％阻害するために必要とされるＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物の量である。

【０４３０】

【０４３１】 表２２０は、本発明の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物のライブラリーからの化合物の選択についてのスクリーニング結果を記載する。 この表から明らかなように、試験したすべての化合物が、スタフィロコッカス・エピデルミティス ( Staphylococcus epidermitis )に対していくらかの阻害活性を示し、従っ て、これらの化合物が抗微生物剤、抗菌剤および消毒剤として有効であることを示す。

【０４３２】

【０４３３】 表２２２は、上記表２０１からのおよび本発明の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物のライブラリー内の多数のリード化合物についての、枯草菌 ( B.su btilis )（グラム陽性細菌）に対するＭＩＣ ₈₅ （８５％の阻害を達成する最小阻 止濃度）値を記載する。 この表は、本発明の化合物が、抗菌剤、抗微生物剤および消毒剤として有用であることを示す。

【０４３４】

【０４３５】 表２２４は、本発明の細菌ＮＡＤシンテターゼ酵素阻害剤化合物のライブラリー内の多数の化合物についての、スタフィロコッカス・エピデルミティス ( Stap hylococcus epidermitis )に対するＭＩＣ ₈₅ （８５％の阻害を達成する最小阻止 濃度）を記載する。 この表は、本発明の化合物が、抗菌剤、抗微生物剤および消毒剤として有用であることを示す。

【０４３６】

【０４３７】 実施例１０：化合物のライブラリー内の選択した化合物のヒト細胞におけるインビトロ毒性 Ｋ５６２ヒト骨髄細胞株を用いて、阻害剤のストック溶液（ＤＭＳＯ中）を、
１０％ウシ胎仔血清を含むＲＰＭＩ １６４０培地中の細胞培養物に添加し、１
０％ ＣＯ ₂雰囲気下で維持した。 ＤＭＳＯの最終濃度は５％未満であり、ＤＭ ＳＯコントロールを含めた。 混合物を、阻害剤の２倍希釈（およそ１０００μＭ
〜１０μＭの範囲）で、３７℃１５時間インキュベートした。 この時点で、ヨウ化プロピジウムを添加し（１μｇ／ｍＬ）、混合物を４℃で３０分インキュベートした。 細胞を培地で１回洗浄し、遠心分離し、２％ウシ血清アルブミン／リン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した。 次いで、細胞懸濁物を、ＦＡＣＳａｌｉｂｅｒ
フローサイトメーターを通し、およそ５０００細胞をカウントした。 死（染色された）細胞の割合を決定し、生細胞の割合をコントロールの％として表した。 最小毒性濃度は、コントロールと比較して有意に低い生細胞のパーセントを与えた最も低い阻害剤の試験濃度とした。

【０４３８】

【０４３９】 様々な改変および変形が、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、本発明になされ得ることは当業者に明らかである。

【０４４０】 本願全体にわたって、刊行物が参照される場合、これらの刊行物の開示は、本発明が関連する技術状態をより完全に説明するために、ここで言及したことでその全体が本願に組み込まれるものである。

【０４４１】 本発明の他の実施態様は、本明細書を考慮し、ならびに本明細書中に開示される発明を実施することにより当業者に明らかである。 この明細書および実施例は例示としてのみ考慮されるべきであり、本発明の真の範囲および精神は上記の特許請求の範囲により示されることが意図される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. ⁷識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4709 Ａ６１Ｋ 31/4709 31/4725 31/4725 Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｐ 31/00 31/04 31/04 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 209/08 Ｃ０７Ｄ 209/08 209/12 209/12 209/42 209/42 213/80 213/80 401/06 401/06 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ジェドゥルゼージャス、マーク ジェイ． アメリカ合衆国、アラバマ州 35124、バ ーミンガム、トレイル リッジ ドライヴ 1800 (72)発明者 ブルイレット、クリスティー ジー． アメリカ合衆国、アラバマ州 35124、ペ ルハム、キングス クレスト レイン 328 (72)発明者 デヴェディーエブ、ヤンチョー アメリカ合衆国、ヴァージニア州 22901、 シャーロッツヴィル、オウルド ブルック ロウド 890 (72)発明者 クリストフォリ、ウォルター アメリカ合衆国、アラバマ州 35205、バ ーミンガム、サウス、セヴンティーンス アヴェニュウ 2115 (72)発明者 デルーカス、ローレンス ジェイ． アメリカ合衆国、アラバマ州 35243、バ ーミンガム、アルタディーナ ロウド 2739 (72)発明者 ガルシア、ホセ ガブリエル アメリカ合衆国、アラバマ州 35205、バ ーミンガム、サウス、エイティーンス ア ヴェニュウ 1320 (72)発明者 シュミット、ローレント アメリカ合衆国、インディアナ州 47905、 ラファイエット、ショショーニ ドライヴ 1813、ナンバー22 Ｆターム(参考） 4C055 AA04 BA01 CA02 CA57 CB02 CB10 DA01 4C063 AA01 BB03 BB08 CC12 DD06 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 BC13 BC14 BC17 BC19 BC29 GA07 GA08 MA01 MA04 NA05 NA14 ZB35 ZC20 4C204 CB03 DB01 DB25 EB01 EB02 FB17 GB03 GB21 GB24 GB25 4H011 AA02 BA01 BB09 BC07 DA13