一种高产纳豆激酶的液态培养基 |
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| 申请号 | CN201710830145.8 | 申请日 | 2017-09-08 | 公开(公告)号 | CN107475234A | 公开(公告)日 | 2017-12-15 |
| 申请人 | 江苏大学; | 发明人 | 龚爱华; 朱沛煌; 严永敏; 曾建; 彭琬昕; 杜凤移; 崔恒林; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种高产纳豆激酶的液态培养基，属于 生物 技术领域。 发酵 培养基包括以下组分：红芸豆粉4.0％， 葡萄糖 4％， 氯化钠 1.5％， 磷酸 氢二 钾 0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4。与 现有技术 相比，该培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活 力 高，制作工艺简单，发酵液纳豆激酶活性达到33160u/ml。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于含有以下组分：红芸豆粉4.0- |
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| 说明书全文 | 一种高产纳豆激酶的液态培养基技术领域背景技术[0002] 血栓性疾病是中老年人群的高发病，已成为致死和致残的主要原因之一。截止到2016年，我国60岁以上老年人口为2.2亿人，占总人口的16.1％，中国已进入老龄化社会。此外，随着生活水平的提高，更多高脂高糖高胆固醇的食物被纳入餐桌，不良的饮食搭配更加剧了血栓性疾病的发生。目前，溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段，当今用于临床治疗的药物包括链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂、单链尿激酶型血纤溶酶原活剂、化学修饰的血纤溶酶一链激酶激活剂复合物等，但是这些药物都存在明显不足：价格昂贵、药物半衰期短、全身性出血副作用等，因此，开发新型溶血栓药物已成为当前重要研究课题之一。 [0003] 纳豆激酶(Nattokinase，NK)是枯草芽孢杆菌发酵过程中形成的一种丝氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。纳豆激酶可以刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，t-PA将纤溶酶原激活为纤溶酶，溶解纤维蛋白从而直接溶解血栓；纳豆激酶同时将人体内的尿激酶原激活为尿激酶，尿激酶与t-PA一同激活纤溶酶原，达到间接溶解血栓的目的。并且纳豆激酶只溶解血栓的主体物质纤维蛋白，不水解血浆纤维蛋白原，因此没有引发出血的危险。 [0004] 多年来发酵生产含有纳豆激酶食品的培养基的多为固体发酵，而固态发酵工艺具有易感染杂菌，散热难和回收难的缺陷，不能满足相关药品与保健品的生产要求；目前工业化生产纳豆激酶的主要方式为液态发酵，而液态发酵方面的研究也多集中于优良菌种的选育、发酵工艺的优化与产物的分离纯化，对液态培养基成分筛选的研究较少，因此筛选出来源丰富，组分简单，成本低廉，纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单的液态培养基具有重要的意义。 发明内容[0005] 本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌液态发酵培养基，该液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。 [0006] 本发明的技术方案为： [0007] 一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，含有以下组分：红芸豆粉4.0-10.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值 7.0-7.4，均为w/v。 [0008] 优选的培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0009] 用于验证上述培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis subsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。 [0010] 本发明提供的液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。 具体实施方式[0011] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明 [0012] 本发明用于验证实施例培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis subsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。 [0013] 实施例1 [0014] 培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0015] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法(参考谢平会等，2010，纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力)测得发酵液纳豆激酶酶活性为33160u/ml。 [0016] 实施例2 [0017] 培养基组成为：红芸豆粉5.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0018] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为29170u/ml。 [0019] 实施例3 [0020] 培养基组成为：红芸豆粉6.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0021] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为26720u/ml。 [0022] 实施例4 [0023] 培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，PH值7.0，均为w/v。 [0024] 用上述成分配比配成的培养基进行草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为22060u/ml [0025] 对比例 [0026] 培养基组成为：黄豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0027] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为9830u/ml。 |
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