含有黑芝麻、桑葚、蓝莓成分的高产纳豆激酶液态培养基 |
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| 申请号 | CN201710833237.1 | 申请日 | 2017-09-08 | 公开(公告)号 | CN107475232A | 公开(公告)日 | 2017-12-15 |
| 申请人 | 江苏大学; | 发明人 | 龚爱华; 朱沛煌; 严永敏; 曾建; 彭琬昕; 杜凤移; 崔恒林; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及含有黑芝麻、桑葚、 蓝莓 成分的高产纳豆激酶液态培养基，属于 生物 技术领域。 发酵 培养基包括以下组分：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉3.0％，桑葚粉2.0％，蓝莓粉2.0％， 葡萄糖 4.0％， 氯化钠 1.5％， 磷酸 氢二 钾 0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0。与 现有技术 相比，本发明的发酵培养基含有黑芝麻、桑葚、蓝莓三种药食同源的原料，经 微生物 发酵后在高产纳豆激酶的同时释放其中更多有益成分，利于人体更好地吸收，发酵液纳豆激酶活性达到28120u/ml。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种含有黑芝麻、桑葚、蓝莓成分的高产纳豆激酶液态培养基，其特征在于该培养基含有以下组分：黑豆(乌皮青仁)粉4.0-10.0％，黑芝麻粉2.0-5.0％，桑葚粉2.0-5.0％，蓝莓粉2.0-5.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾 |
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| 说明书全文 | 含有黑芝麻、桑葚、蓝莓成分的高产纳豆激酶液态培养基技术领域背景技术[0002] 血栓性疾病是中老年人群的高发病，是现今仅次于癌症的第二大病症，对中老年人具有很大的死亡威胁。截止到2016年，我国60岁以上老年人口为2.2亿人，占总人口的16.1％，中国已进入老龄化社会。目前，溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段，当今用于临床治疗的药物包括链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂、单链尿激酶型血纤溶酶原活剂、化学修饰的血纤溶酶一链激酶激活剂复合物等，但是这些药物都存在明显不足：全身性出血、药物半衰期短、价格昂贵等，因此，开发新型溶血栓药物已成为当前重要研究课题之一。 [0003] 纳豆激酶(Nattokinase，NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。纳豆激酶溶栓机理是：纳豆激酶通过刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，t-PA将纤溶酶原激活为纤溶酶，溶解纤维蛋白，直接溶解血栓；同时将人体内的尿激酶原激活为尿激酶，尿激酶与t-PA一同激活纤溶酶原，间接溶解血栓。纳豆激酶只溶解血栓的主体物质纤维蛋白，不水解血浆纤维蛋白原，所以不会引发出血的危险，同时，还能激活增强人体自身的溶栓能力，从而达到持久平稳的溶栓效果。 [0004] 枯草芽孢杆菌固态发酵含有纳豆激酶制品的工艺容易感染杂菌，散热和回收都有困难；而液态发酵方面的研究也多集中于优良菌种的选育、发酵工艺的优化与产物的分离纯化方面，对液态培养基成分筛选的研究较少，其中筛选纳豆激酶单位酶活力高，并且具有其他食疗保健作用的培养基的研究极少。 [0005] 黑芝麻具有丰富的植物油脂、蛋白质、维生素等，具有滋润肠胃、滋养肝肾、补血补钙、降血糖、,增强免疫力、滋润皮肤、乌发养颜、治疗便秘、健脑益智的功效。桑葚果营养丰富，含有丰富的维生素、蛋白质以及不饱和脂肪酸，中医学认为桑葚具有补益肝肾、滋阴养血、息风、清肝明目、解酒、改善睡眠、提高人体免疫力、延缓衰老、美容养颜、降低血脂、防癌的功效。蓝莓含有丰富的维生素和氨基酸以及花青素，具有清除氧自由基、保护视力、延缓脑神经衰老、提高记忆力的作用。 [0006] 目前市场上含有其他保健功能的纳豆激酶产品，大多数是在后期与纳豆粉或纳豆激酶纯粉简单混合后制成胶囊或者其他保健食品，这种工艺阻碍了原料中大分子、微量元素等有效成分的吸收和利用。进一步开发具有多种药食同源的培养基原料组合，在获得高产纳豆激酶的同时，通过微生物发酵释放出培养基中药食同源原料更多的有益成分，利于人体更好地吸收，对于纳豆激酶产品的开发具有重要意义。 发明内容[0007] 本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌发酵培养基，该发酵培养基含有黑芝麻、桑葚、蓝莓三种药食同源的原料，经微生物发酵后在高产纳豆激酶的同时释放其中更多有益成分，利于人体更好地吸收。 [0008] 本发明的技术方案为： [0009] 一种药食同源的纳豆激酶液态发酵培养基，含有以下组分：黑豆(乌皮青仁)粉4.0-10.0％，黑芝麻粉2.0-5.0％，桑葚粉2.0-5.0％，蓝莓粉2.0-5.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4，均为w/v。 [0010] 优选的培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉3.0％，桑葚粉2.0％，蓝莓粉2.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0011] 用于验证上述培养基的枯草芽孢杆菌株Bacillus subtilis subsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。 [0012] 本发明提供的发酵培养基含有黑芝麻、桑葚、蓝莓三种药食同源的原料，经微生物发酵后在高产纳豆激酶的同时释放其中更多有益成分，利于人体更好地吸收。 具体实施方式[0013] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明： [0014] 本发明用于验证实施例培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis subsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。 [0015] 实施例1 [0016] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0017] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法(参考谢平会等，2010，纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力)测得发酵液纳豆激酶酶活性为21000u/ml。 [0018] 实施例2 [0019] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉5.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0020] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为19150u/ml。 [0021] 实施例3 [0022] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉6.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0023] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为14920u/ml。 [0024] 实施例4 [0025] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，蓝莓粉2.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0026] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为20800u/ml。 [0027] 实施例5 [0028] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，蓝莓粉3.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0029] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为16600u/ml。 [0030] 实施例6 [0031] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，蓝莓粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0032] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为12880u/ml。 [0033] 实施例7 [0034] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，桑葚粉2.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0035] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为23800u/ml [0036] 实施例8 [0037] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，桑葚粉3.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0038] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为17600u/ml。 [0039] 实施例9 [0040] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，桑葚粉2.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0041] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为19500u/ml。 [0042] 实施例10 [0043] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉3.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0044] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为18820u/ml [0045] 实施例11 [0046] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0047] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为16980u/ml。 [0048] 实施例12 [0049] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉5.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0050] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为16240u/ml。 [0051] 实施例13 [0052] 培养基组成为：黑豆(乌皮青仁)粉4.0％，黑芝麻粉3.0％，桑葚粉2.0.5％，蓝莓粉2.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0053] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为28120u/ml。 [0054] 对比例 [0055] 培养基组成为：黄豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。 [0056] 用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.UJS-1，CGMCC No.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为9830u/ml。 |
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