一种提高尿激酶稳定性的方法 |
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申请号 | CN201611134813.5 | 申请日 | 2016-12-11 | 公开(公告)号 | CN107058276A | 公开(公告)日 | 2017-08-18 |
申请人 | 青岛冠龙生物制药有限公司; | 发明人 | 刘乃山; 王庆; 陈娥功; | ||||
摘要 | 本 发明 公开了一种提高尿激酶 稳定性 的方法,技术方案是采用肝素对尿激酶进行化学修饰,提高其抗 水 能 力 并使其对热和PH都有较好的稳定性。经肝素修饰后的尿激酶 半衰期 明显延长,有较好的临床应用价值。 | ||||||
权利要求 | 1.一种提高尿激酶稳定性的方法,其特征包括如下步骤: |
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说明书全文 | 一种提高尿激酶稳定性的方法技术领域背景技术[0002] 尿激酶是从成年男性尿液里提取的一种能使纤维蛋白原活化并生成具有溶解性纤维蛋白原能力的纤维蛋白原溶解酶,临床上广泛应用于治疗新鲜血栓性闭塞疾病、肺栓塞、急性脑血栓形成、脑血管栓塞以及视网膜中央静脉血栓形成。 [0003] 尿激酶与其它纤维蛋白酶相比,具有无热原、无抗原性、毒副作用小、特异性高和疗效确切等优点,但其在人体内半衰期短、活性不稳定。将尿激酶侧链基团化学修饰,尤其是与一些有活性的分子基团通过共价键连接,可增强其构象稳定性、耐酸碱性、耐热性和抗蛋白酶水解能力,加强其临床疗效。 发明内容[0004] 本发明提供了一种用提高尿激酶稳定性的方法。在这一条件下,使提高其抗水能力并使其对热和PH都有较好的稳定性,肝素修饰后的尿激酶半衰期明显延长。为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案予以实现:一种用提高尿激酶稳定性的方法, 在发明的技术方案中,包括如下步骤: (1)、将低分子肝素溶于水中配成10%的低分子肝素溶液,加入15%的高碘酸钠溶液使高碘酸钠含量为1%-5%,调节PH至3-7。 [0006] (3)、将尿激酶溶于PH为5.5-9的缓冲盐溶液中,配成3%-5 %的尿激酶溶液。 [0007] (4)、将步骤(2)获得的活化低分子肝素溶液和骤(3)获得的尿激酶溶液按体积为1:1-1:3的比例混合,4℃温度下搅拌反应24h。 具体实施方式[0010] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。 [0011] 实施例1(1)、将低分子肝素溶于水中配成10%的低分子肝素溶液,加入15%的高碘酸钠溶液使高碘酸钠含量为3%,调节PH至5。 [0012] (2)、4℃温度下搅拌反应24h,然后滴加15%亚硫酸氢钠溶液至变色。 [0013] (3)、将尿激酶溶于PH为6的缓冲盐溶液中,配成4 %的尿激酶溶液。 [0014] (4)、将步骤(2)获得的活化低分子肝素溶液和骤(3)获得的尿激酶溶液按体积为1:2的比例混合,4℃温度下搅拌反应24h。 [0015] (5)、步骤(3)获得的反应液经葡聚糖凝胶G-150分离,收集活性洗脱液,真空冷冻干燥获得冻干粉。 [0016] 实施例2(1)、将低分子肝素溶于水中配成10%的低分子肝素溶液,加入15%的高碘酸钠溶液使高碘酸钠含量为3%,调节PH至5.2。 [0017] (2)、4℃温度下搅拌反应24h,然后滴加15%亚硫酸氢钠溶液至变色。 [0018] (3)、将尿激酶溶于PH为6.5的缓冲盐溶液中,配成4 %的尿激酶溶液。 [0019] (4)、将步骤(2)获得的活化低分子肝素溶液和骤(3)获得的尿激酶溶液按体积为1:2的比例混合,4℃温度下搅拌反应24h。 [0020] (5)、步骤(3)获得的反应液经葡聚糖凝胶G-150分离,收集活性洗脱液,真空冷冻干燥获得冻干粉。以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明作其它形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。 |