一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物及其方法 |
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| 申请号 | CN201710237041.6 | 申请日 | 2017-04-12 | 公开(公告)号 | CN106967607A | 公开(公告)日 | 2017-07-21 |
| 申请人 | 四川新华扬山野生物有限公司; 武汉新华扬生物股份有限公司; | 发明人 | 徐凯; 袁志超; 詹泽涛; 詹志春; 周樱; | ||||
| 摘要 | 本 发明 了公开了一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物，通过添加该中药组合物的提取液来减少自溶法破壁的时间，破壁后有效增加酶活回收率，并大大的降低了生产成本，方法操作简单，生产效率大大提高。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为按重量比为 |
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| 说明书全文 | 一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物及其方法技术领域[0001] 本发明涉及酶制剂领域，具体涉及一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物及其方法。 背景技术[0002] 大肠杆菌产的酶大多为胞内酶，如要获得胞内酶，必须要使细胞破碎把酶释放出来，破壁的方法较多，比如超声法、自溶法、高压均质、酶法等，这几种方法都存在一定的弊端，超声法破壁能耗较高不适于工业化放大生产，自溶法破壁需要的时间较长，高压均质破壁产生的热量较高容易对酶造成伤害，而酶法破壁用的主要是蛋白酶，破壁后释放出来的酶会被其降解。现存的破壁方法在成本上或者规模上都不能达到最好的效果，所以急需寻找一种成本低又易于工业化生产的破壁方法。 [0003] 许多天然中草药具有抗菌效果，如黄连的有效成分小檗碱，对不同菌的抑制作用不同，对金黄色葡萄球菌的抑制作用机理为抑制金黄色葡萄球菌代谢的各个环节，包括细菌的呼吸、糖及糖代谢中间产物的氧化和脱氢过程以及蛋白质及核酸合成的抑制，小檗碱抑制福氏痢疾杆菌的抗菌机制为抑制痢疾杆菌的呼吸，特别是抑制天冬氨酸和琥珀酸钠的氧化过程。大蒜的抗菌作用机制为大蒜辣素分子中的氧原子与细菌生长繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巯基结合，使后者变为非活性物质，干扰了细菌代谢，而抑制细菌的生长和繁殖。目前已经报道的具有抗菌作用的中草药很多，但是单个的中药的破壁效果有限，找到有效的中药组方成为了关键。 发明内容[0004] 本发明目的在于提供一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物及方法，以解决现有技术中自溶法破壁时间较长、成本高的技术问题。 [0005] 一种用于大肠杆菌破壁的中药组合物，所述中药组合物为按重量比为1:1的黄莲和大蒜。 [0006] 一种产酶大肠杆菌的破壁方法，其方法包括如下步骤： [0007] (1).中药提取液的制备：准备黄连和大蒜，加入5～10倍的水煎煮20min～60min，倒出药液，再加入5～10倍水煎煮20min～60min，合并两次药液，过滤、浓缩后定容至生药浓度为1g/mL，备用； [0009] (3).破壁：按照所述发酵液重量的0.5～5％的比例添加所述步骤(1)中制备的中药提取液，搅拌均匀，保持温度在20℃～50℃，保温4～12h； [0010] (4).所述步骤(3)破壁结束后将溶液先絮凝再过滤，即得到粗酶液。 [0011] 如上所述的破壁方法，优选地，所述黄连和大蒜的重量比为1:1。 [0012] 如上所述的破壁方法，优选地，所述步骤(1)制备的中药提取液在灭菌条件为121℃、30min，后储藏。 [0014] 本发明提供的用于大肠杆菌破壁的中药组合物，通过添加该中药组合物的提取液来减少自溶法破壁的时间，破壁后有效增加酶活回收率，并大大的降低了生产成本，方法操作简单，生产效率大大提高。 具体实施方式[0015] 本发明通过对多种中药进行单一或多组合进行研究，最后确定选用黄连和大蒜的组合作为大肠杆菌破壁的中药组合物。本发明是在自溶法的基础上加入抗菌中草药组合物的提取液，增加菌体的死亡率，减少自溶破壁的时间，增加破壁的收率。 [0016] 通过下面给出的本发明的具体实施例以及比较实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。 [0017] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 [0018] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 [0019] 实施例1 [0020] 1、中药提取液制备:准备黄连和大蒜(其重量比为1:1)，加入10倍的水煎煮30min，倒出药液，再加入10倍水煎煮30min，合并两次药液，过滤、浓缩(加热蒸发水分)后用水定容至生药浓度为1g/mL，备用。为了能有效保存该中药提取液，将制备的中药提取液在灭菌条件为121℃、30min，后储藏。 [0021] 2、发酵液的制备：将斜面保存的大肠杆菌SHY191(由四川新华扬山野生物有限公司提供)接种到种子培养基(葡萄糖1％，蛋白胨1％，酵母粉0.5％)，37℃培养12h后接种到发酵罐中，发酵培养基：葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母粉0.5％，七水硫酸镁0.5％，磷酸氢二钾0.5％，37℃培养，搅拌300rpm，ph控制在6.5，发酵45h后放罐，获得大肠杆菌发酵液。 [0022] 3、破壁：收集大肠杆菌发酵液100kg，按照大肠杆菌发酵液的重量比添加0.5％步骤1制备的黄连和大蒜的提取液，pH显示为6.8，不调pH，保持温度50℃，时间控制在8h，然后将自溶后的发酵液加入絮凝剂，即按照发酵液重量比添加氯化钙0.5％，磷酸氢二钾1％，搅拌均匀后静置2h，絮凝后经过板框压滤，及得到粗酶液。 [0023] 对比例1 [0024] 自溶破壁：收集实施例1制备的大肠杆菌发酵液100kg，不调pH，保持温度50℃，时间控制在24h，然后将自溶后的发酵液加入絮凝剂，即按照发酵液重量比添加氯化钙0.5％，磷酸氢二钾1％，搅拌均匀后静置2h，絮凝后经过板框压滤，及得到粗酶液。 [0025] 对比例2 [0026] 与实施例1中的区别在于：a、黄连提取液制备：准备黄连，加入10倍的水煎煮30min，倒出药液，再加入10倍水煎煮30min，合并两次药液，过滤、浓缩(加热蒸发水分)后用水定容至生药浓度为1g/mL，备用。 [0027] b、加入黄连的破壁：收集大肠杆菌发酵液100kg，按照大肠杆菌发酵液的重量比添加0.5％步骤a制备的黄连的提取液，pH显示为6.8，不调pH，保持温度50℃，时间控制在15h，然后将自溶后的发酵液加入絮凝剂，即按照发酵液重量比添加氯化钙0.5％，磷酸氢二钾1％，搅拌均匀后静置2h，絮凝后经过板框压滤，及得到粗酶液。 [0029] 表1酶活检测结果 [0030] [0031] 上述结果说明：添加本发明的中药组合物可以大大减少破壁时间，降低成本，增加酶活回收率，创造价值，且操作方法简单、效率也大大提高。 |
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