专利类型 | 发明公开 | 法律事件 | 公开; |
专利有效性 | 公开 | 当前状态 | 公开 |
申请号 | CN202310950707.8 | 申请日 | 2023-07-31 |
公开(公告)号 | CN118440994A | 公开(公告)日 | 2024-08-06 |
申请人 | 康码(上海)生物科技有限公司; | 申请人类型 | 企业 |
发明人 | 郭敏; 周海恩; 江丹; 李春燕; 于雪; | 第一发明人 | 郭敏 |
权利人 | 康码(上海)生物科技有限公司 | 权利人类型 | 企业 |
当前权利人 | 康码(上海)生物科技有限公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
省份 | 当前专利权人所在省份:上海市 | 城市 | 当前专利权人所在城市:上海市闵行区 |
具体地址 | 当前专利权人所在详细地址:上海市闵行区南雅路2号 | 邮编 | 当前专利权人邮编:201321 |
主IPC国际分类 | C12P1/02 | 所有IPC国际分类 | C12P1/02 ; A23J1/18 ; A23L33/145 ; C12R1/645 |
专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
专利权利要求数量 | 24 | 专利文献类型 | A |
专利代理机构 | 专利代理人 | ||
摘要 | 本 发明 第一方面提供一种制备 酵母 提取物的方法,包括如下步骤:将酵母细胞渣采用酶处理后,经 超滤 ,去除内毒素,得到酵母提取物。本发明可以在不改变抽提物原有性质的条件下,有效地去除酵母抽提物含有的内毒素污染物,保留其中的有效成分,可以用于大规模酵母抽提物的生产,可以生产出高蛋白含量和极低内毒素含量的高品质酵母抽提物,提高产品品质和价值。其次,本发明所述的方法操作简便,所述的有机超滤膜可回收使用,进一步降低了操作成本。 | ||
权利要求 | 1.一种制备酵母提取物的方法,包括如下步骤:将酵母细胞渣采用酶处理后,经超滤去除内毒素,得到酵母提取物。 |
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说明书全文 | 一种酵母提取物及其制备方法和应用技术领域背景技术[0003] 目前,酵母抽提物的生产方法主要是自溶法、酶解法和酸解法。酵母自溶是指酵母在自身水解酶类(蛋白酶、核酸酶、糖水解酶等)的作用下细胞自我消解,将酵母体内高分子物质水解成为可溶性小分子物质的过程。酶解法是指加入外源酶如破壁酶、蛋白酶等,并控制一定温度和pH值,使得酵母释放内含物并分解成小分子氨基酸、肽类等物质,在经过下游一系列处理得到酵母抽提物的方法。酸碱法是以干酵母为原料,在一定的酸浓度、温度、压力和pH值条件下水解酵母,然后进行过滤、脱色、除臭、碱中和,最后浓缩或喷雾干燥制成酵母膏或酵母粉。 [0004] 从酵母提取的酵母提取物,以多糖、氨基酸和多肽等作为主要成分。已经有多个文献研究报道。例如,在专利文献1中,记载有加入N‑糖酰胺酶F在一定的温度和pH条件下对酵母对酵母进行酶解得到酵母抽提物。在专利文献2中,该方法通过活化、盐溶、酶解、灭酶、离心分离、浓缩以及复配反应等步骤,制备出的酵母抽提物富含多种营养物质,增强产品的鲜美味和醇厚感。在专利文献3中,涉及一种将酵母液pH值保持在弱酸性至中性进行自溶,有效激活酵母内源酶,提高了产品的转化率,该发明生产的酵母抽提物显著提高了蛋白质含量和氨基酸含量。 [0005] 然而上述任何一种方法均由于相对于处理成本而言产物的附加值低,市面上所有的酵母抽提物都未涉及到内毒素的去除,而利用细胞生产的生物医药制剂对内毒素的含量要求极为苛刻,在培养细胞的提供营养原料如酵母抽提物需求是低内毒素,这在国内目前还是一片空白,采用超滤法去除酵母抽提物的内毒素提高产品的品质,极大提升产品的价值。 [0006] 参考文献: [0007] 专利文献1:公开号:CN103923944A [0008] 专利文献2:公开号:CN106616949A [0009] 专利文献3:公开号:CN101513247A 发明内容[0010] 本发明所要解决的问题,是对作为酵母细胞渣的重复生产利用,即破碎提取酵母后剩下的细胞渣或者低活性的酵母菌体进行有效利用。此外,本发明所要解决的问题是采用超滤膜分离法去除酵母抽提物中的内毒素。 [0011] 本申请的发明人对采用酶解法生产酵母抽提物的进行了研究,结果发现通过使用破壁酶在一定温度和pH条件下对酵母菌体进行作用,菌体破碎释放内含物可以得到富含各种酵母蛋白质和酵母多糖等物质。而且,还发现通过使用酵母抽提酶(蛋白复合酶)对上述酵母蛋白质进行作用,可以得到含18种以上的氨基酸的酵母抽提物,尤其含有谷物中含量不足的赖氨酸,而且还富含完整的B族维生素和钙、镁、锌、铁、硒等微量元素。 [0012] 此外,即使上述细胞壁采用高压均质机进行破碎,在通过使用酵母抽提酶(蛋白复合酶)对上述酵母蛋白质进行作用,也可以生产出酵母抽提物。 [0013] 此外,酵母菌体细胞在经过破壁酶和酵母抽提酶作用后,对酶解液先进行离心预处理,在采用超滤膜分离法去除酶解液中的内毒素,最后得到高蛋白低内毒素的酵母抽提物。 [0014] 本发明涉及一种使用特定的酶对破碎提取后的酵母细胞渣进行酶解完后采用超滤膜分离法去除内毒素而得到一种高品质的酵母抽提物,具体地说是得到一种蛋白质含量高,富含完整B族维生素以及低内毒素的酵母抽提物。 [0015] 本发明第一方面提供一种制备酵母提取物的方法,包括如下步骤:将酵母细胞渣采用酶处理后,经超滤,去除内毒素,得到酵母提取物。 [0016] 进一步地,所述酶为破壁酶、酵母抽提酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、蜗牛酶、溶菌酶、纤维素酶、淀粉酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶、磷酸二酯酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶中的至少一种。 [0017] 进一步地,所述酶优选为酵母抽提酶。 [0018] 根据本发明第一方面提供一种制备酵母提取物的方法,进一步地,所述的酶选自破壁酶、酵母抽提酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、蜗牛酶、溶菌酶、纤维素酶、淀粉酶、糖化酶、内切酶、外切酶、风味酶、磷酸二酯酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶中的两种或两种以上。 [0019] 优选方案之一,所述酶处理是将两种或以上的酶分别加入或同时加入;进一步优选为将两种或以上的酶分别加入。 [0020] 优选方案之一,所述酶为破壁酶和酵母抽提酶。 [0021] 优选方案之一,采用酶处理时,先加入破壁酶,后加入酵母抽提酶。 [0022] 优选方案之一,所述的酵母选自毕赤酵母、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、科克拉马毕赤酵母(Pichia koclamae)、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、微小毕赤酵母(Pichia minuta)、甲醇诱导型酵母(Ogataeaminuta)、林氏毕赤酵母(Pichia lindneri)、仙人掌毕赤酵母(Pichia opuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、松栎毕赤酵母(Pichia g uercuum)、皮杰普毕赤酵母(Pichia pijperi)、树干毕赤酵母 (Pichiastiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母菌(Pichia sp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、啤酒酵母、甘蔗糖蜜酵母、酵母菌(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)、产朊假丝酵母、克鲁维酵母之一或其组合。 [0023] 优选方案之一,所述克鲁维酵母进一步包括:乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces,K.lactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、Kluyveromyces marxianus var.lactis、Kluyveromyces marxianus var.marxianus、Kluyveromyces marxianus var.vanudenii、多布克鲁维酵母(Kluyveromyces dobzhanskii)、海泥克鲁维酵母 (Kluyveromyces aestuarii)、非发酵克鲁维酵母(Kluyveromyces nonfermentans)、威克海姆克鲁维酵母(Kluyveromyces wickerhamii)、耐热克鲁维酵母(Kluyveromyces thermotolerans)、脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)、湖北克鲁维酵母 (Kluyveromyces hubeiensis)、多孢克鲁维酵母(Kluyveromyces polysporus)、暹罗克鲁维酵母(Kluyveromyces siamensis)、亚罗克鲁维酵母(Kluyveromyces yarrowii)之一或其组合。 [0024] 优选方案之一,所述超滤采用有机超滤膜。 [0025] 优选方案之一,所述有机超滤膜的过滤处理是错流过滤。 [0026] 优选方案之一,有机超滤膜的截留分子量为1kDa~50kDa,优选为5kDa~30kDa,更优选5kDa~20kDa,最优选为10kDa。 [0027] 优选方案之一,超滤操作压力为0~1.5MPa;进一步优选为0.1~1.5MPa;更优选为0.1~1MPa;特别优选地,操作压力为0.1MPa、0.2MPa、0.3MPa、0.4MPa、0.5MPa、0.6MPa、 0.7MPa、0.8MPa、0.9MPa或1MPa中的任一数值或任意两个数值之间的范围; [0028] 优选方案之一,超滤操作温度为5~60℃;进一步优选温度为5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃或60℃中的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0029] 优选方案之一,进一包括,将酵母细胞渣经破壁以及酵母抽提酶作用后,对酶解液进行离心预处理,经超滤后得到酵母抽提物。 [0030] 优选方案之一,所述破壁为采用酶、盐溶液或高压均质机破壁。 [0031] 优选方案之一,所述的酶选自破壁酶、蜗牛酶、溶菌酶、甘露聚糖酶或葡聚糖酶中的至少一种。 [0032] 优选方案之一,所述的盐溶液为钠盐溶液。 [0033] 优选方案之一,破壁处理的时间为1h~24h,优选为5~24h,进一步优选为5~12h。 [0034] 优选方案之一,所述离心预处理时离心的速率为1000rpm~20000rpm,更优选5000rpm~20000rpm,进一步优选10000rpm~20000rpm。 [0035] 优选方案之一,所述离心预处理时离心的时间为1min~60min,更优选5min~60min,进一步优选5min~30min,特别优选5min、10min、15min、20min、25min、30min的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0036] 优选方案之一,在破壁之前,需将酵母抽提物填加水制备悬浮液,并采用摇床振荡。 [0037] 优选方案之一,在破壁之前,需将酵母抽提物填加超纯水制备悬浮液,并采用摇床振荡。 [0038] 优选方案之一,填加超纯水制备悬浮液之后调整体系的温度为20℃~70℃,进一步优选为30℃~60℃,更优选为30℃~55℃,特别优选为30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0039] 选方案之一,填加超纯水制备悬浮液之后调整体系的pH值为6~7.5,进一步优选为6、6.5、7或7.5中的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0040] 优选方案之一,所述悬浮液的浓度为5%~30%,更优选为10%~30%,进一步优选为10%~20%。 [0041] 优选方案之一,所述摇床的转速为10rpm~500rpm,更优选为50rpm~500rpm,进一步优选为50rpm~300rpm。 [0042] 优选方案之一,离心之后,在使用摇床振荡之前,需要进一步将沉淀悬浮在水中,再次调整浓度、温度和pH值。优选悬浮液的浓度为5%~30%,更优选为5%~20%,进一步优选为10%~20%。优选温度为20℃~70℃,进一步优选为30℃~60℃,更优选为30℃~55℃,特别优选为30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃的任一数值或任意两个数值之间的范围。优选pH值为6~7.5,进一步优选为6、6.5、7或7.5中的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0043] 优选方案之一,超滤之后,采用对超滤膜进行清洗的方法。 [0044] 优选方案之一,对超滤膜清洗的方法为先用纯水洗,然后采用洗液进行洗涤。 [0046] 优选方案之一,所述洗液的浓度选自0.1%~10%。 [0047] 更优选地,浓度选自0.1%~5%,进一步选自浓度为0.1%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%中的任一数值或任意两个数值之间的范围。 [0048] 优选方案之一,所述碱洗液位氢氧化物溶液。 [0049] 优选方案之一,所述的氢氧化物选自氢氧化钠或氢氧化钾。 [0051] 优选方案之一,所述的酸洗液更优选为硝酸。 [0052] 优选方案之一,所述的氧化液选自次氯酸盐溶液或双氧水。 [0053] 优选方案之一,所述的氧化液更优选为次氯酸钠。 [0054] 优选方案之一,纯水洗涤的时间为1min~60min,优选10min~60min,更优选min~30min。 [0055] 优选方案之一,洗液洗涤的时间为1min~60min,优选10min~60min,更优选10min~30min。 [0056] 优选方案之一,所述酵母细胞渣与酶的质量比1000~10:1,优选为800~10:1,更优选500~10:1,进一步优选为100~10:1。 [0057] 优选方案之一,破壁采用的酶与酵母抽提酶的质量比为1~10:1~10,优选为1~5:1~5,更优选为1~3:1~3,最优选为1:1。 [0058] 本发明第二方面提供一种酵母提取物,其是由本发明第一方面提供的一种制备酵母提取物的制备方法制备而成。 [0059] 优选方案之一,酵母提取物中的总氮含量大于等于6.5%。 [0060] 优选方案之一,酵母提取物中的总氮含量大于等于9%。 [0061] 优选方案之一,酵母提取物中的内毒素含量小于等于10EU/g。 [0062] 优选方案之一,酵母提取物中的内毒素含量小于等于5EU/g。 [0063] 本发明第三方面提供一种蛋白粉,其含有本发明第二方面提供的一种酵母提取物或由第一方面提供的一种制备酵母提取物的方法制备后冻干得到。 [0064] 通过本发明,可以不必使用高成本的设备或化学试剂,而将以前作为产业废弃物或者价格低低活性酵母菌体,有效利用生产成酵母抽提物,一方面可以大幅度减少废弃物的量减少对环境的污染;另一方面可以变废为宝,利用废弃的细胞渣生产出的酵母抽提物可以自产自销,达到企业循环绿色生产的需求和节省原料购买成本的目的。 [0065] 所获得的酵母蛋白精华粉因其高蛋白含量和内毒素含量低可以满足高端产品的需求,提高其应用价值。 [0066] 还有,所获得的酵母细胞壁水解的多糖(甘露聚糖和β‑葡聚糖)成分,作为产品的附加产物,由于作为食品其安全性高,并能增强免疫力、提高巨噬细胞活性、抗病毒等功效,所以可以用作保健食品的材料。此外,还可以用作食品物性增稠剂等。 具体实施方式[0067] 下面结合具体实施方式和实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,优先按照、参考上文所述的具体实施方式指引的条件,然后可按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。 [0068] 除非另外说明,否则本发明中提及的百分比和份数是重量百分比和重量份数。 [0069] 如无特别说明,则本发明实施例中所用的材料和试剂均为市售产品。 [0070] 本申请中的温度单位如无特殊说明,均为摄氏度(℃)。 [0071] 名词和术语 [0072] 以下是针对本发明所采用的部分相关“名词”、“术语”的含义进行的解释或说明,以便于更好地理解本发明。相应的解释或说明适用于本发明的全文,既适用于下文,也适用于上文。本发明中涉及引用文献时,相关术语、名词、短语在引用文献中的定义也一并被引用,但是,与本发明中的定义相冲突时,以本发明中的定义为准。在引用文献中的定义与本发明中的定义发生冲突时,并不影响所引用的成分、物质、组合物、材料、体系、配方、种类、方法、设备等以引用文献中确定的内容为准。 [0073] 本发明中,“优选”、“较佳”、“更优选”、“更佳”、“最优选”、“进一步优选”等优选实施方式,不构成对发明的涵盖范围及保护范围的任何意义上的限制,并非用于限定本发明的范围和实施方式,仅用于提供一些实施方式作为举例。 [0074] 本发明的描述中,对于“优选之一”、“优选方式之一”、“优选实施方式之一”、“优选例之一”、“优选例”、“在一优选的实施方式中”、“一些优选例中”、“一些优选方式中”、“优选为”、“优选”、“优选地”、“更优选”、“更优地”、“进一步优选”、“最优选”等优选方式,以及“实施方式之一”、“方式之一”、“示例”、“具体示例”、“举例如”、“作为举例”、“例如”、“比如”、“如”等示意的列举方式,同样不构成对发明的涵盖范围及保护范围的任何意义上的限制,且各方式所描述的具体特征包含于本发明的至少一个具体实施方式中。本发明中,各方式所描述的具体特征可以在任何的一个或者多个具体实施方式中以合适的方式结合。本发明中,各优选方式对应的技术特征或技术方案也可以通过任意合适的方式结合。 [0075] 本发明中,“其任意组合”,在数量上表示“大于1”,在涵盖范围上表示以下情形构成的组:“任选其中一个,或者任选其中至少两个构成的组”。 [0076] 本发明中,“一个或多个”、“一种或多种”等“一或多”的描述,与“至少一个”、“至少一种”、“其组合”、“或其组合”、“及其组合”、“或其任意组合”、“及其任意组合”等具有相同含义,可以互换使用,表示数量上等于“1”或“大于1”。 [0077] 本发明中,采用“或/和”、“和/或”表示“任选其一或者任选其组合”,也表示至少其一。 [0078] 本发明所述的“通常”、“常规”、“一般”、“经常”、“往往”等方式描述的现有技术手段,也都被引用作为本发明内容的参考,如无特别说明,可视为本发明的部分技术特征的优选方式之一,且需要注意的是,不构成对发明的涵盖范围及保护范围的任何意义上的限制。 [0079] 在本发明提及的所有文献及这些文献直接引用或者间接引用的文献,都在本申请中被引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。 [0080] 应理解,在本发明范围内,本发明的上述各技术特征和在下文(包括但不限于实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方案,只要能够用于实施本发明的即可。限于篇幅,不再一一累述。 [0081] 作为优选之一,本发明使用的酵母是乳酸克鲁维酵母,作为本发明的酵母菌体,首先就是酵母细胞破碎提取后残渣。具体而言,酵母菌体经液氮冷却后破碎机破碎,加入适当的缓冲液进行提取后高速提心获得上清液后剩余的酵母细胞残渣。 [0083] 作为优选之一,获取本发明的酵母蛋白精华粉的步骤,首先在上述酵母细胞渣或低活性酵母细胞中添加超纯水,调整浓度为约10~20%悬浮液,添加破壁酶,在条件为温度55℃、pH为6.0,摇床转速为200r/min作用12小时。 [0084] 作为优选之一,本发明所添加的破壁酶,购于南宁庞博生物工程有限公司。在通过细胞破壁酶的反应之后,在70℃以上、优选为80~100℃的温度下进行5分钟以上加热处理,然后借助离心机将细胞壁组成成分的上清液除去,从而获得以蛋白质为主的沉淀组分。 [0085] 作为优选之一,获取本发明的酵母蛋白精华分的步骤,其次在上述获得沉淀中添加超纯水,调整浓度为约10~20%悬浮液,添加酵母抽提酶,在条件为温度55℃、pH为7.0,摇床转速为200r/min作用24小时。 [0086] 作为优选之一,本发明所添加的酵母抽提酶,同样购于南宁庞博生物工程有限公司。在通过酵母抽提酶的反应之后,在70℃以上、优选为80~100℃的温度下进行5分钟以上加热处理,然后借助离心机将细胞渣沉淀去除,从而获得以氨基酸为主的酶解上清液。 [0087] 一方面,借助上述离心机除去的细胞壁组成成分是以膳食纤维为主要成分的组分,将此组分直接或者浓缩后进行干燥,作为酵母细胞壁组分。 [0088] 另一方面,将上述含有大量以氨基酸为主上清液经过有机膜超滤机进超滤分离得到去除内毒素的上清液,最后可以将此上清液在去除内毒喷雾干燥机上喷雾干燥成高蛋白低内毒素的酵母抽提物粉末。 [0089] 作为优选之一,本发明所用的有机膜分离实验机,购买于山东博纳生物科技集团有限公司。作为优选之一,使用的膜元件采用进口10KD超滤膜元件。本发明可以针对生物医药制剂生产过程中的内毒素,根据其分子量大小、溶剂性质、有效成分性质,判断和选择有机超滤膜的材质。 [0090] 作为优选之一,本发明所述的有机超滤膜的过滤处理是错流过滤,操作压力为0~1.5MPa,温度为5~55℃,过滤速率为0.5‑10L/H,pH适用范围为2‑12。 [0091] 作为优选之一,本发明所述的有机膜超滤前的物料需要进行离心预处理,防止有机膜堵塞。 [0092] 作为优选之一,本发明所述的对超滤膜进行清洗的方法是:采用质量浓度为0.5~10%的NaOH溶液、HNO3溶液、NaClO溶液或H2O2溶液对有机超滤膜进行浸泡清洗。 [0093] 本发明的从酵母抽提物中去除内毒素的方法,可以在不改变抽提物原有性质的条件下,有效地去除酵母抽提物含有的内毒素污染物,保留其中的有效成分,可以用于大规模酵母抽提物的生产过程中,可以生产出高蛋白含量和极低内毒素含量的高品质酵母抽提物,提高产品品质和价值。其次,本发明所述的方法操作简便,所述的有机超滤膜可回收使用,进一步降低了操作成本。 [0094] 优选之一,作为代表性的实施例,以下实施例中使用的破壁酶和酵母抽提酶均购于南宁庞博生物工程有限公司。 [0095] <实施例1> [0096] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为15%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶,作用12小时,然后15000rpm离心15min分离成以酵母多糖为主的上清液和以蛋白质为主的沉淀。将沉淀悬浮在水中,调整浓度为10%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末15g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为8.1%。 [0097] <实施例2> [0098] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶,作用12小时,然后15000rpm离心15min分离成以酵母多糖为主的上清液和以蛋白质为主的沉淀。将沉淀悬浮在水中,调整浓度为15%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末18g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为8.6%。 [0099] <实施例3> [0100] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶,作用12小时,然后15000rpm离心15min分离成以酵母多糖为主的上清液和以蛋白质为主的沉淀。将沉淀悬浮在水中,调整浓度为15%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末16g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为2.5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为8.9%。 [0101] <实施例4> [0102] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加2%(20g)破壁酶,作用12小时,然后15000rpm离心15min分离成以酵母多糖为主的上清液和以蛋白质为主的沉淀。将沉淀悬浮在水中,调整浓度为15%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加2%(20g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末13g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为9.5%。 [0103] <实施例5> [0104] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为15%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶和1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末36g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为6.5%。 [0105] <实施例6> [0106] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整50℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶和1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末40g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为6.1%。 [0107] <实施例7> [0108] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加1%(10g)破壁酶和1%(10g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末43g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为5EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为5.7%。 [0109] <实施例8> [0110] 将1kg酵母细胞渣菌体悬浮在水中,调整浓度为20%,然后调整55℃、pH6.5之后200r/min摇床振荡,添加2%(20g)破壁酶和2%(20g)酵母抽提酶,作用24小时,然后 15000rpm离心15min分离成以氨基酸和多肽为主的上清液和以细胞壁为主的沉淀。将上清液采用截留分子量为10kDa的有机膜进行错流过滤,控制压力0.12MPa,温度20℃。采用去除过内毒素的塑封袋密封接住过滤上清液,过滤结束后,通过凝胶法检测上清液的内毒素含量为<0.125EU/ml。将过滤后的膜管先用纯水清洗管道10min,再用0.5%的NaOH溶液循环清洗30min,膜管通量即可恢复。上清液在用真空冷冻干燥机冻干成粉末50g,通过凝胶法检测粉末的内毒素含量为10EU/g,通过凯氏定氮法测得此酵母抽提物的总含氮量为5.1%。 [0111] 应当理解,上述仅为本发明的部分优选实施例,本发明并不仅限于上述实施例的内容。对于本领域中的技术人员来说,在本发明技术方案的构思范围内或指导、启示下,可以有各种变化和更改,所作的任何具有等同技术效果的变化和更改,均在本发明保护范围之内。 |