神经自身免疫疾病的诊断 |
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| 申请号 | CN201610346537.2 | 申请日 | 2016-05-24 | 公开(公告)号 | CN106243211B | 公开(公告)日 | 2022-11-08 |
| 申请人 | 欧蒙医学实验诊断股份公司; | 发明人 | W·施特克尔; L·科莫罗斯基; M·沙甫; R·米思科; Y·丹诺; I-M·戴特曼; C·普洛布斯特; S·哈恩; S·凯德; G·特伦德伦堡; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及用于诊断 疾病 的方法，其包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身 抗体 的步骤；包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或者其变体的多肽，其优选地被固定化；所述多肽用于疾病诊断的用途；与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体；用于分离所述自身抗体的方法；以及包含所述多肽的药物组合物、医学装置或测试 试剂 盒 。 | ||||||
| 权利要求 | 1.与浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合的自身抗体， |
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| 说明书全文 | 神经自身免疫疾病的诊断[0001] 本发明涉及用于诊断疾病的方法，其包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤；包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或者其变体的多肽，其优选地被固定化；所述多肽用于疾病诊断的用途；与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体；用于分离所述自身抗体的方法；以及包含所述多肽的药物组合物、医学装置或测试试剂盒。 [0002] 开发用于神经病学疾病的诊断系统是生物医学科学中的一项持续的挑战，这在较大程度上是因为所遇到的许多症状可以由极其多样的原因(包括基因遗传疾病、药物滥用、营养不良、感染、损伤、精神性疾病、免疫缺陷和癌症)来解释说明。 [0003] 由于神经病学疾病很少与临床症状的独特的特征性模式相关联，所以通常难以仅基于受影响的患者的观察和检查或者其医疗史来提供可靠的诊断。 [0004] 不可过分强调早期诊断的重要性。许多神经病学病症，最显著地，阿尔茨海默病和帕金森病以及多发性硬化，不能被治愈，但是可以用于减缓其进展的药物是可得的。诊断越早，为了患者的充分益处而利用可得的药物谱的机会就越好。 [0005] 这在与自身抗体相关的神经病学疾病的情况下更是如此。在一些情况下，特异性的可检测的自身抗体与病况之间的关联足够强从而允许进行即刻的诊断。 [0006] 但是，即使不是这样，自身抗体的检测可以向主治医师指明可以用于改善患者病况的治疗手段。存在各种各样的广泛使用的免疫抑制剂，其可以不管自身抗体靶标的性质而进行使用。备选地，单采血液成分术(apheresis)可以用于从患者的血液中除去自身抗体。在许多情况下，患者在神经病学自身免疫疾病的早期诊断和治疗后继续过正常的生活。 [0007] 基于自身抗体检测的诊断测定法还可以确证除了与自身抗体相关的那些疾病之外的其他疾病的诊断。如果结果是血液样品没有特异性自身抗体，这可能帮助主治医师排除一系列的可能性并因此缩小似乎可能的病况的范围。 [0008] 与自身抗体的出现相一致的神经病学病况的实例包括：视神经脊髓炎(一种以视觉和脊髓功能的丧失为特征的疾病)，和抗‑NMDA受体脑炎(其与自主神经功能障碍相关)，通气不足，小脑性共济失调，轻偏瘫，意识丧失，或紧张症。虽然自身抗体的参与和这些病况本身的性质以前了解得很少，但是由于基于自身抗体检测的测定法的可得性，此类疾病中的许多现在可以被诊断和有效地治疗。 [0009] 多发性硬化是另一种被广泛认为与至关重要的身体结构的自身免疫性破坏相关的疾病。大约20％的患者遭受视觉损害，更特别地，视神经炎。特异性的诊断是困难的，这是由于宽范围的症状和疾病的性质，其中在发作之后有时候接着是症状的完全消失。 [0010] 因此，最重要的是用于区分与自身抗体相关的神经病学病况和未发展的那些的新方法。 [0011] 作为本发明之基础的问题是提供新的试剂、装置和方法，其可以用于支持神经病学疾病，特别是与视觉损害、头痛和/或脑损伤相关的疾病的诊断和治疗。 [0012] 作为本发明之基础的另一个问题是提供新的试剂、装置和方法，其可以用于区分自身免疫疾病(特别是神经病学自身免疫疾病)和除了自身免疫疾病之外的其他疾病，这在较大程度上是为了确定最有希望的治疗方案，更特别地，免疫抑制治疗是否适当。 [0014] 在第一个方面，作为本发明之基础的问题通过用于诊断疾病的方法而得到解决，所述方法包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0015] 在第二个方面，作为本发明之基础的问题通过包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或者其变体的多肽而得到解决，所述多肽优选地被固定化，更优选地在固体载体上。 [0016] 在第三个方面，作为本发明之基础的问题通过本发明的多肽用于疾病诊断的用途而得到解决，所述疾病诊断优选地包括在样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0017] 在第四个方面，作为本发明之基础的问题通过用于在疾病治疗中使用的本发明的多肽而得到解决。 [0018] 在第五个方面，作为本发明之基础的问题通过与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合，优选地与包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合的自身抗体，优选地分离的自身抗体而得到解决，其中所述自身抗体优选地处于与本发明的多肽的复合物之中。 [0019] 在第六个方面，作为本发明之基础的问题通过用于分离与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合，优选地与包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合的自身抗体的方法而得到解决，所述方法包括下列步骤： [0020] a)使包含该自身抗体的样品与本发明的多肽在与复合物形成相容的条件下相接触，其中所述自身抗体与所述多肽相结合， [0021] b)分离在步骤a)中形成的复合物， [0022] c)使在步骤b)中分离出的复合物解离，和 [0023] d)将该自身抗体与该多肽分开。 [0024] 在第七个方面，作为本发明之基础的问题通过包含本发明的多肽的药物组合物，或医学装置，优选地诊断装置而得到解决。 [0025] 在第八个方面，作为本发明之基础的问题通过用于疾病诊断的测试试剂盒而得到解决，所述测试试剂盒包含本发明的多肽，其中所述测试试剂盒优选地还包含用于检测复合物的工具，所述复合物包含本发明的多肽和与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体。 [0026] 在第九个方面，作为本发明之基础的问题通过本发明的多肽在制备用于在患者中进行疾病诊断的测试试剂盒中的用途而得到解决，所述疾病诊断优选地包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0027] 在第十个方面，作为本发明之基础的问题通过本发明的多肽在制备药物组合物中的用途而得到解决，所述药物组合物用于在患者的疾病治疗中使用。 [0028] 在一个优选的实施方案中，所述患者具有一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状，或者所述疾病与一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状相关：升高的CSF中的细胞数目，鞘内IgG合成，CSF中的寡克隆条带(oligoclonal bands，OCB)，CSF中的MRZ(M－麻疹，R－风疹，Z－水痘带状疱疹)反应，视觉损害，优选地视敏度损害，视神经炎，头痛，脊髓损伤，和脑损伤，优选地视觉损害，更优选地视敏度损害，头痛，脊髓损伤，和脑损伤。 [0029] 在一个优选的实施方案中，所述疾病为神经病学疾病，优选地脱髓鞘疾病，优选地CNS的疾病，优选地脑的疾病，优选地与视神经的炎症相关的疾病。 [0030] 在一个优选的实施方案中，所述多肽以包含编码所述多肽的核酸的细胞的形式或以包含所述多肽的组织的形式来提供。 [0031] 在一个优选的实施方案中，所述多肽为重组的和/或分离的多肽。 [0033] 在一个优选的实施方案中，包含浮舰蛋白1或其变体的多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的多肽两者都存在，并且优选地是复合物的一部分。 [0034] 在一个优选的实施方案中，所述自身抗体与包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合。 [0035] 本发明基于发明人的下述令人惊讶的发现：存在这样的神经病学自身免疫疾病，其与对于浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的自身抗体和选自下列的症状相关：升高的CSF中的细胞数目、鞘内IgG合成、CSF中的寡克隆条带、CSF中的MRZ反应、视觉损害、视神经炎、头痛、脊髓损伤和脑损伤。 [0036] 进一步地，本发明基于发明人的下述令人惊讶的发现：存在对于浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的自身抗体，并且所述自身抗体可以在来自许多遭受神经病学症状的患者的样品中检测到，但不在从健康受试者获得的样品中检测到。 [0037] 进一步地，本发明基于发明人的下述令人惊讶的发现：具有未知病因学的已知的神经病学疾病，特别是脱髓鞘疾病，与对于浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的自身抗体的存在相关。 [0038] 在不希望束缚于任何理论的情形下，此类自身抗体的存在暗示，浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2和/或下游效应子的活性和功能在具有此类自身抗体的患者中受到损害，以致于出现了神经病学症状，更特别地脱髓鞘疾病，特别是与视觉损害相关的那些。 [0039] 浮舰蛋白(flotillin)1和浮舰蛋白2(同义词：reggie‑2和reggie‑1)最初被发现在视神经的创伤性损伤后在金鱼视网膜神经节细胞的再生轴突中上调。然而，它们在许多真核生物(包括哺乳动物)中是非常保守的。在脊椎动物中，这两种蛋白质都是遍在地表达的，并且在横纹肌、脂肪组织和肺组织中最丰富。在分子水平上，浮舰蛋白附着于脂膜筏的胞质侧，并因此经常用作脂微域的标志物。与其他脂膜筏组成成分相似地，它们在蔗糖密度离心后在Triton X‑100中在很大程度上是不可溶的而是漂浮。从功能上来说，它们参与在神经元中的蛋白质相互作用、细胞信号传导、淀粉状蛋白前体的簇集和淀粉状蛋白生成性加工(Stuermer CA,Plattner H.The'lipid raft'microdomain proteins reggie‑1 and reggie‑2(flotillins)are scaffolds for protein interaction and signalling.Biochem Soc Symp 2005,(72):109‑18)。浮舰蛋白2的过表达在几种癌症中被看到，并且通常与更严重的进展相关(Arkhipova KA,Sheyderman AN,Laktionov KK,Mochalnikova VV,Zborovskaya IB.Simultaneous expression of flotillin‑1, flotillin‑2,stomatin and caveolin‑1 in non‑small cell lung cancer and soft tissue sarcomas.BMC Cancer 2014,14:100)。 [0040] 本发明涉及包含哺乳动物(优选地，人)的浮舰蛋白1或其变体和/或浮舰蛋白2或其变体的多肽，所述变体优选地为对于与浮舰蛋白1和浮舰蛋白2或其变体相结合的自身抗体具有反应性的免疫原性变体。哺乳动物浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的实例包括来自人、猴、小鼠、大鼠、兔、豚鼠或猪的那些。在一个最优选的实施方案中，浮舰蛋白1是由数据库代码O75955所编码的多肽或其变体，和/或浮舰蛋白2是由数据库代码Q14254所编码的多肽或其变体。在整个本申请中，任何所引用的数据库代码均涉及Uniprot数据库，更特别地，在2015年5月29日在线可获取的那个版本。NP_005794和NP_004466分别表示编码浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的核苷酸序列。 [0041] 在一个更优选的实施方案中，本发明的多肽包含直接地或通过连接体而相互融合的浮舰蛋白1或其变体和浮舰蛋白2或其变体这两者。在一个最优选的实施方案中，使用这样的复合物，其包含有直接地或通过另一个分子而相互结合的包含浮舰蛋白1或其变体的多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的多肽这两者。优选地，所述复合物不包含除了包含浮舰蛋白1或其变体的多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的多肽之外的其他蛋白质。这样的复合物可以用于捕获与所述复合物相结合的自身抗体，以用于疾病诊断。 [0042] 如果使用包含有包含浮舰蛋白1或其变体的第一多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的第二多肽的复合物，那么所述第一和第二多肽可以在同一个细胞中表达以形成这样的复合物。备选地，所述第一和第二多肽可以在不同的细胞中分开地表达并在表达后重构，任选地以经纯化的形式。 [0043] 本发明的教导不仅可以通过使用多肽，特别是包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的天然序列的多肽，或具有在本申请中明确地(例如通过功能、名称、序列或登录号)或隐含地提到的准确序列的核酸来实施，而且还可以通过使用此类多肽或核酸的变体来实施。 [0044] 在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“变体”可以是指所提到的全长序列的至少一种片段，更特别地一种或多种相对于全长序列而言在一个或两个末端处截短了一个或多个氨基酸的氨基酸或核酸序列。这样的片段包含或编码具有原始序列或其变体的至少6、7、8、10、12、15、20、25、50、75、100、150或200个连续氨基酸的肽。变体的总长度可以为至少6、7、8、9、10、11、12、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。 [0045] 在另一个优选的实施方案中，术语“变体”不仅是指至少一种片段，而且还是指这样的多肽或其片段，所述多肽或其片段包含与所提到的参考氨基酸序列或其片段至少40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的氨基酸序列，其中删除或置换除了对于生物学活性(例如，抗原结合(自身)抗体的能力)或者多肽的折叠或结构来说必需的那些氨基酸之外的其他氨基酸，和/或以保守的方式替换一个或多个这样的必需氨基酸和/或添加氨基酸，从而使得多肽的生物学活性得到保留。现有技术包括各种不同的可以用于比对两个给定核酸或氨基酸序列并计算同一性程度的方法，参见例如Arthur Lesk(2008),Introduction to bioinformatics,Oxford University Press,2008,第3版。在一个优选的实施方案中，使用ClustalW软件(Larkin,M.A.,Blackshields,G.,Brown,N.P.,Chenna,R.,McGettigan,P.A.,McWilliam,H., Valentin,F.,Wallace,I.M.,Wilm,A.,Lopez,R.,Thompson,J.D.,Gibson,T.J.,Higgins,D.G.(2007).Clustal W and Clustal X version 2.0.Bioinformatics,23,2947‑2948)，其中采用缺省设置。 [0046] 在一个优选的实施方案中，所述多肽和其变体还可以包含化学修饰，例如同位素标记，或者共价修饰例如糖基化、磷酸化、乙酰化、脱羧、瓜氨酸化、甲基化、羟基化等等。本领域技术人员熟悉用于修饰多肽的方法。对任何修饰如此地进行设计，从而使得其不取消变体的生物学活性。 [0047] 此外，变体还可以通过与其他已知多肽或其变体相融合来产生，并且包含具有活性的部分或结构域，优选地，所述具有活性的部分或结构域当与参考序列的具有活性的部分进行比对时，具有至少70％、75％、80％、85％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，其中此处所使用的术语“具有活性的部分”是指比全长氨基酸序列短的氨基酸序列，或在核酸序列的情况下编码比全长氨基酸序列短的氨基酸序列，和/或是天然序列的变体，但保留了至少一些生物学活性。 [0048] 在一个优选的实施方案中，术语“核酸的变体”包括这样的核酸，所述核酸的互补链与参考核酸或野生型核酸杂交，优选地在严紧条件下。杂交反应的严紧性是本领域普通技术人员可容易地确定的，并且通常是取决于探针长度、洗涤温度和盐浓度的根据经验的计算。通常，较长的探针需要较高的用于适当退火的温度，而较短的探针则需较低的温度。杂交通常取决于变性的DNA与在环境中存在的互补链在低于其解链温度的温度下再退火的能力：探针和可杂交序列之间的所希望的同源性程度越高，可以使用的相对温度就越高。因此，较高的相对温度将会倾向于使反应条件更严紧，而较低的反应温度将会更不严紧。关于杂交反应的严紧性的另外的细节和解释，参见Ausubel,F.M.(1995),Current Protocols in Molecular Biology.John Wiley&Sons,Inc。此外，本领域技术人员可以遵循在手册Boehringer Mannheim GmbH(1993)The DIG System Users Guide for Filter Hybridization,Boehringer Mannheim GmbH,Mannheim,Germany中和在Liebl,W., Ehrmann,M.,Ludwig,W.,and Schleifer,K.H.(1991)International Journal of Systematic Bacteriology 41:255‑260中所给出的关于如何借助于杂交来鉴定DNA序列的指导。在一个优选的实施方案中，将严紧条件应用于任何杂交，即仅如果探针与靶序列具有 70％或更高的同一性，杂交才出现。具有较低的相对于靶序列而言的同一性程度的探针可以杂交，但此类杂交体是不稳定的并且将会在严紧条件下的洗涤步骤中被去除，例如降低盐浓度至2×SSC或，任选地和随后，至0.5×SSC，而温度为大约50℃‑68℃，大约52℃‑68℃，大约54℃‑68℃，大约56℃‑68℃，大约58℃‑68℃，大约60℃‑68℃，大约62℃‑68℃，大约64℃‑68℃，大约66℃‑68℃，以优选度渐增的顺序。在一个特别优选的实施方案中，温度为大约64℃‑68℃或大约66℃‑68℃。可能的是，调节盐浓度至0.2×SSC，或甚至0.1×SSC。可以分离出具有至少70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的相对于参考序列或野生型序列而言的同一性程度的核酸序列。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“核酸序列的变体”是指任何这样的核酸序列，其按照遗传密码的简并性而编码与参考核酸序列所编码的相同的氨基酸序列及其变体。 [0049] 多肽的变体具有生物学活性。在一个优选的实施方案中，这样的生物学活性是特异性地结合目的自身抗体的能力，所述目的自身抗体优选地为在罹患由发明人所鉴定的疾病的患者中发现的与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的那些。 [0050] 当用于实施本发明的教导时，包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或其变体的本发明的多肽，或者本发明的自身抗体，可以以任何形式和以任何纯化程度来提供，从以内源形式包含所述多肽的液体样品、组织或细胞，更优选地，过表达所述多肽的细胞，此类细胞的粗制的或经富集的裂解物，直至经纯化的和/或分离的多肽，其任选地是基本上纯的。在一个优选的实施方案中，所述多肽是天然多肽，其中此处所使用的术语“天然多肽”是指经折叠的多肽，更优选地是指从组织或细胞中，更优选地从哺乳动物细胞或组织中，任选地从非重组的组织或细胞中纯化出的经折叠的多肽。在另一个优选的实施方案中，所述多肽是重组的蛋白质，其中此处所使用的术语“重组的”是指通过使用基因工程方法在生产过程的任何阶段而产生的多肽，例如通过将编码所述多肽的核酸与用于在细胞或组织中过表达的强启动子相融合或者通过改造所述多肽本身的序列。本领域技术人员熟悉用于改造核酸和所编码的多肽的方法(例如，在Sambrook,J.,Fritsch,E.F.和Maniatis,T.(1989),Molecular Cloning,CSH中或在Brown T.A.(1986),Gene Cloning–an introduction,Chapman&Hall中所描述的)和用于产生和纯化天然或重组多肽的方法(例如，由GE Healthcare Life Sciences公开的手册“Strategies for Protein Purification”,“Antibody Purification”“, Purifying Challenging Proteins”(2009/2010)，其在Burgess,R.R.,Deutscher,M.P.(2009),Guide to Protein Purification中)。在一个优选的实施方案中，多肽是纯的，如果在各自样品中至少60％、70％、80％、90％、95％或99％的多肽由所述多肽组成，如通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳以及随后的考马斯蓝染色和目视检定所判断的。 [0051] 如果本发明的多肽以组织的形式来提供，那么优选的是，所述组织为哺乳动物组织，例如人、大鼠、灵长类、驴、小鼠、山羊、马、绵羊、猪或奶牛，更优选地脑组织，最优选地小脑。如果使用细胞裂解物，那么优选的是，所述细胞裂解物包含与细胞表面相关的膜。如果所述多肽以重组细胞的形式来提供，那么优选的是，所述重组细胞为真核细胞例如酵母细胞，更优选地来自多细胞真核生物例如植物、哺乳动物、蛙或昆虫，最优选地来自哺乳动物例如大鼠、人、灵长类、驴、小鼠、山羊、马、绵羊、猪或奶牛的细胞。 [0052] 优选地，对用于实施本发明的教导的多肽(包括任何变体)如此地进行设计，从而使得其包含被与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体所识别的表位和/或特异性地结合与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体。在一个实施方案中，这样的多肽包含由来自浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的6、7、8、9、10、11、12、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个，优选地至少9个但不多于16个连续氨基酸构成的链段。本领域技术人员熟悉用于设计具有足够的免疫原性的肽的指导方针，例如在Jackson,D.C.,Fitzmaurice,C.J.,Brown,L.E.,Zeng,W.(1999),Preparation and properties of totally synthetic immunogenes,Vaccine,第18卷,第3‑4期,1999年9月,第355‑361页；和Black,M.,Trent,A.,Tirrell,M.和Olive,C.(2010),Advances in the design and delivery of peptide subunit vaccines with a focus on Toll‑like receptor agonists,Expert Rev Vaccines,2010年2月,9(2):157‑173中所描述的那些。简而言之，合乎希望的是，所述肽尽可能多地符合下列要求：(a)它具有高的亲水性程度；(b)它包含一个或多个选自天冬氨酸、脯氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的残基；(c)为了更高的特异性，它与其他已知的肽或多肽不具有同源性或具有很低的同源性；(d)它需要是足够可溶的；和(e)它不包含糖基化或磷酸化位点，除非由于特殊原因而需要。备选地，可以遵循生物信息学方法，例如由Moreau,V.,Fleury,C.,Piquer,D.,Nguyen,C.,Novali,N.,Villard,S.,Laune,D.,Granier,C.和 Molina,F.(2008),PEPOP:Computational design of immunogenic peptides,BMC Bioinformatics 2008,9:71所描述的那些。 [0053] 当根据本发明进行使用时，包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或其变体的本发明的多肽，优选地一种包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的多肽或者由两种或更多种包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的多肽构成的复合物，可以以任何种类的构象来提供。例如，所述多肽可以是基本上未折叠的、部分折叠的或完全折叠的多肽。在一个优选的实施方案中，所述多肽在这样的意义上进行折叠，即对于与本发明的自身抗体的结合来说必需的表位，或者该蛋白质或其变体以其整体，采取由天然蛋白质在其天然环境中所采取的折叠。本领域技术人员熟悉适合于测定多肽是否是折叠的，和如果是，那么它具有哪种结构的方法，例如有限蛋白酶解、NMR光谱学、CD光谱学或X‑射线晶体学(参见例如Banaszak L.J.(2008),Foundations of Structural Biology,Academics Press；或Teng Q.(2013),Structural Biology:Practical Applications,Springer)，优选地使用CD光谱学。 [0054] 本发明的多肽可以是融合蛋白，其包含除了取自浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的那些之外的其他氨基酸序列，特别是C‑末端或N‑末端标签，优选地C‑末端标签，其在一个优选的实施方案中为具有功能的额外的序列基元或多肽，其具有一些生物学或物理功能和可以例如用于纯化、固定化、沉淀或鉴定本发明的多肽。在一个更优选的实施方案中，所述标签是能够与配体特异性地结合的序列或结构域，例如选自His标签、硫氧还蛋白、麦芽糖结合蛋白、谷胱甘肽S‑转移酶的标签；荧光标签，其例如选自绿色荧光蛋白。SEQ ID NO 1、2和SEQ ID NO 5、6表示示例性的分别包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的融合多肽。 [0055] 本发明的多肽可以是经固定化的多肽。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“经固定化的”是指结合至在水溶液中不可溶的固体载体的分子，更优选地通过共价键、静电相互作用、包囊或包载(例如通过使球状多肽在凝胶中变性)，或通过疏水相互作用，最优选地通过一个或多个共价键。这样的载体优选地为人工载体，其在主体上不是生物学材料例如组织切片。各种不同的合适载体，例如纸、聚苯乙烯、金属、硅或玻璃表面、微观流体通道、膜、珠粒例如磁珠、柱色谱法介质、生物芯片、聚丙烯酰胺凝胶等，已在文献中进行了描述，例如在Kim,D.和Herr,A.E.(2013),Protein immobilizsation techniques for microfluidic assays,Biomicrofluidics 7(4),041501中。如此，可以以直截了当的方式将经固定化的分子连同不可溶的载体一起与水溶液相分开，例如通过过滤、离心或滗析。经固定化的分子可以是以可逆或不可逆的方式进行固定化的。例如，如果分子与载体通过可以经由添加高浓度的盐而掩蔽的离子相互作用来进行相互作用，或如果分子通过可裂开的共价键例如二硫桥(其可以通过添加含巯基的试剂来进行裂开)进行结合，那么固定化是可逆的。相反地，如果分子通过不能在水溶液中裂开的共价键(例如，通过经常用于将赖氨酸侧链偶联至亲和柱的环氧化物基团和胺基团的反应而形成的键)而拴系至载体，那么固定化是不可逆的。蛋白质可以间接地进行固定化，例如通过使抗体或其他对于该分子具有亲和力的实体固定化，随后是复合物的形成，以致于分子‑抗体复合物被固定化。各种不同的用于使分子固定化的方式描述在文献中，例如在Kim,D.,Herr和A.E.(2013),Protein immobilizsation techniques for microfluidic assays,Biomicrofluidics 7(4),041501中。另外，各种不同的用于固定化反应的试剂和试剂盒是商购可得的，例如从Pierce Biotechnology。 [0056] 必要的是，用于按照本发明进行诊断的样品包含抗体，其也称为免疫球蛋白。典型地，体液样品包含对于受试者免疫球蛋白的全体来说具有代表性的一组。但是，一旦提供了，可以使样品经历进一步的加工，其可以包括分级分离、离心、富集或分离受试者的全体免疫球蛋白或任何免疫球蛋白类别，这可以影响各种不同类别的免疫球蛋白的相对分布。 [0057] 在整个本申请中所描述的试剂、装置、方法和用途可以用于疾病诊断。在一个优选的实施方案中，所述疾病为神经病学疾病。在一个更优选的实施方案中，此处所使用的术语“神经病学疾病”是指任何与神经系统，更优选地对于视觉来说必需的神经系统的要素，更优选地视觉神经的缺陷相关的疾病。 [0058] 在一个优选的实施方案中，所述疾病，更优选地神经病学疾病，与一个或多个，更优选地两个或更多个，最优选地三个或更多个选自下列的症状相关：癌症、升高的CSF中的细胞数目，鞘内IgG合成，CSF中的寡克隆条带，CSF中的MRZ反应，视觉损害，优选地视敏度损害，视神经炎，头痛，脊髓损伤，和脑损伤。优选地，所述疾病对于免疫调节性的(优选地，免疫抑制性的)疗法作出响应。 [0059] 在另一个优选的实施方案中，所述疾病为神经病学疾病，其选自下列：阿尔茨海默病、孤独症、阿斯波哥尔综合征、失用症、失语症、小脑综合征、小脑炎、舞蹈症、脑炎、运动障碍、脊髓小脑性共济失调(优选地，非进行性的形式)、麻痹、截瘫、戈谢病、肌病、重症肌无力、多发性硬化、帕金森病、多发性神经病和痴呆，优选地小脑综合征、小脑炎、多发性硬化、运动障碍和痴呆，更优选地多发性硬化。在一个更优选的实施方案中，所述疾病为脱髓鞘疾病，更优选地影响CNS的脱髓鞘疾病，更优选地多发性硬化，更优选地与视神经炎相关的。 [0060] 在另一个优选的实施方案中，所述疾病为癌症，或优选地肿瘤形成征兆的神经病学综合征，其与一个或多个神经病学症状相关，和进一步地与癌症相关，所述神经病学症状优选地选自下列：升高的CSF中的细胞数目、鞘内IgG合成、CSF中的寡克隆条带、CSF中的MRZ反应、视觉损害、视神经炎、头痛、脊髓损伤和脑损伤。检测出对于浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的自身抗体可以指示增加的下列的可能性，即癌症是存在的(这是使用其他方法不能检测到的)或将会随疾病进展而出现。在一个优选的实施方案中，所述癌症为选自下列的肿瘤癌症：肺的肿瘤、胸腺的肿瘤、胸腺肿瘤、睾丸肿瘤、头和颈癌症肿瘤、乳腺癌症肿瘤、肛门‑生殖器癌症肿瘤、黑素瘤、肉瘤、癌、淋巴瘤、白血病、神经胶质瘤、生殖细胞肿瘤、绒毛膜癌、胰腺癌症、卵巢癌症、胃癌症、胰腺的癌性损伤、肺腺癌、结肠直肠腺癌、肺鳞状细胞腺癌、胃腺癌、卵巢表面上皮性瘤(例如，其良性的、增生性的或恶性的种类)、口腔鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、膀胱癌症、前列腺癌、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非小细胞肺癌症(NSCLC)、维尔姆斯肿瘤、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、间皮瘤(例如，恶性间皮瘤)、结肠癌症、肺癌症、乳腺癌症、子宫癌症、甲状腺癌症、肝细胞癌、肝癌症、肾癌症、卡波西肉瘤和其他癌或肉瘤。 [0061] 在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“诊断”是指任何类型的旨在下列目的的程序：获得在评估患者是否在过去、在诊断之时或在未来罹患或可能罹患或比平均或比较受试者(其优选地具有相似的症状)更可能罹患某种疾病或病症之中有帮助的信息；发现疾病如何正在进展或在未来可能如何进展；或者评价患者对于某一治疗(例如，施用免疫抑制药物)的应答性。换言之，术语“诊断”不仅包括诊断，而且还包括预测和/或监测疾病或病症的过程。 [0062] 在许多情况下，单纯的检测(换言之，测定样品中是否存在可检测水平的抗体)对于诊断来说是足够的。如果可以检测到自身抗体，那么这将是对于临床医师的诊断来说有帮助的信息，并且指明了增加的患者罹患疾病的可能性。在一个优选的实施方案中，可以测定相比于在平均健康受试者中可以发现的水平而言的在血清中抗体的相对浓度。尽管在许多情况下测定自身抗体在样品中是否存在或可检测可以是足够的，但是为了获得对于诊断来说有帮助的信息而实施的方法可以包括测定浓度是否以至少0.1倍，优选地以0.2、0.5、1、2、5、10、20、25、50、100、200、500、1000、10000或100000倍比在平均健康受试者中所发现的浓度高。 [0063] 本领域技术人员将会意识到，临床医师通常并不仅仅基于单一的诊断参数来对患者是否罹患或可能罹患疾病、病况或病症作出结论，而是需要考虑其他方面，例如其他自身抗体的存在、标志物、血液参数、患者症状的临床评估或者医学成像或其他非侵入性方法(例如，多导睡眠描记法)的结果，以便达到结论性的诊断。参见Baenkler H.W.(2012),General aspects of autoimmune diagnostics,Renz,H.,Autoimmune diagnostics,2012,de Gruyter,第3页。诊断试剂或方法的价值也可以在于可能排除一种疾病，因此允许间接诊断另一种疾病。在一个优选的实施方案中，在整个本申请中所提到的任何症状或疾病的含义与到2015年5月29日为止本领域技术人员的理解相一致，如由教科书和科学出版物所证明的。在一个优选的实施方案中，根据本发明的多肽或方法可以用于测定患者是否罹患以与MS的症状相似的症状为特征的疾病，更优选地为了区分MS和NMO。 [0064] 因此，术语“诊断”优选地不是暗示，根据本发明的诊断方法或试剂对于基于单一测试(更不必说参数)来完成诊断来说将会是确定的和足够的，而是可以是指对于所谓的“鉴别诊断”(即基于一系列诊断参数考虑了一系列可能病况的可能性的系统诊断程序)的贡献。因此，本发明的方法、多肽或用途(其任选地用于测定患者是否罹患疾病)可以包括：从患者(优选地人患者)中获得样品；测定在所述样品中是否存在与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体，其中所述测定通过下述方式来进行，使样品与本发明的多肽相接触并检测在所述多肽和所述自身抗体之间是否出现结合，优选地通过使用经标记的二抗来进行检测，其中所述自身抗体如果存在于样品中则与所述多肽相结合；和如果测定到自身抗体存在于样品中，则将患者诊断为罹患或更可能罹患所述神经病学病症或癌症。在一个优选的实施方案中，本发明的方法可以考虑下述步骤：检测对于a)水通道蛋白‑4的抗体，和对于b)浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的抗体，优选地以该顺序。 [0065] 术语“诊断”还可以是指用于在两个或更多个与相似或相同的症状相关的病况之间进行区分的方法或试剂。 [0066] 术语“诊断”还可以是指用于为患者选择最有希望的治疗方案的方法或试剂。换言之，所述方法或试剂可以涉及为受试者挑选治疗方案。例如，检测到自身抗体可以表明，将会选择免疫抑制疗法，其可以包括向患者施用一种或多种免疫抑制药物。 [0067] 本发明涉及包含与本发明的多肽相结合的抗体(优选地，自身抗体)的复合物。作为用于诊断疾病的方法的一部分，可以使用或检测这样的复合物。来自受试者的包含抗体的液体样品可以用于实施所述方法。这样的液体样品可以是任何来自受试者的包含具有代表性的一组抗体的体液，优选地来自受试者的包含IgG免疫球蛋白类别的抗体的样品。例如，样品可以是脑脊液(CSF)、血液或血清、淋巴、组织液，优选地是血清或CSF，更优选地是血清。 [0068] 使包含抗体的液体样品与本发明的多肽相接触的步骤可以通过下述方式来进行：在包含抗体的样品存在下，在与包含所述多肽和结合本发明多肽的抗体(优选地，自身抗体)的复合物形成相容的条件下，温育固定化形式的所述多肽。随后，可以移除在那时耗尽了与本发明的多肽相结合的抗体的液体样品，接着是一个或多个洗涤步骤。最后，可以检测包含所述抗体和所述多肽的复合物。在一个优选的实施方案中，术语“与复合物形成相容的条件”是这样的条件，其允许特异性的抗原‑抗体相互作用从而建立包含所述多肽和所述抗体的复合物。在一个优选的实施方案中，此类条件可以包括将所述多肽在于PBS缓冲液中以 1:100稀释的样品中在25℃下温育30分钟。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“自身抗体”是指与产生所述自身抗体的动物(优选地，哺乳动物)的内源性分子特异性地结合的抗体，其中此类抗体的水平更优选地相比于任何与此类内源性分子特异性地结合的其他抗体的平均值而言是升高的。在一个最优选的实施方案中，所述自身抗体为与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体。 [0069] 在一个优选的实施方案中，用于根据本发明的预后、诊断、方法或测试试剂盒的复合物的检测包括使用选自下列的方法：免疫扩散技术，免疫电泳技术，光散射免疫测定法，凝集技术，标记免疫测定法例如选自放射性标记免疫测定法、酶免疫测定法、化学发光免疫测定法和免疫荧光技术的那些。本领域技术人员熟悉这些方法，其也描述在现有技术中，例如在Zane,H.D.(2001),Immunology–Theoretical &Practical Concepts in Laboratory Medicine,W.B.Saunders Company中，特别是在第14章中。 [0070] 备选地，可以使用除了液体样品之外的包括包含本发明多肽的组织的样品。所述组织样品优选地来自表达内源性浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的组织。然后，可以使这样的样品(其可以以固定在载体例如用于显微分析的载玻片上的组织切片的形式)与结合本发明多肽的本发明抗体(优选地，自身抗体)相接触。优选地，对所述抗体进行标记以允许与结合本发明多肽的内源性抗体相区分，从而使得可以对新形成的复合物进行检测，和任选地进行定量。如果所形成的复合物的量低于在取自健康受试者的样品中所发现的量，那么受检查样品所取自的受试者可能罹患疾病。 [0071] 可以将任何证明包含抗体和本发明多肽的复合物存在或不存在的数据与参考数据相关联。例如，检测到所述复合物指示，提供所分析样品的患者已经罹患、正在罹患或在未来可能罹患疾病。如果患者以前已被诊断并且再次运行用于获得在诊断上有关的信息的方法，那么可以将在这两次运行中检测到的复合物的量相关联以获悉有关疾病进展和/或治疗成功的信息。例如，如果发现复合物的量增加，那么这暗示病症正在进展从而可能在未来显现，和/或所尝试的任何治疗是不成功的。 [0072] 在一个优选的实施方案中，使用微量培养板、膜ELISA、斑点印迹或线印迹(line blot)来实施根据本发明的诊断方法。本领域技术人员熟悉实验设置，其描述在现有技术(Raoult,D.和Dasch,G.A.(1989),The line blot:an immunoassay for monoclonal and other antibodies.Its application to the serotyping of gram‑negative bacteria.J.Immunol.Methods,125(1‑2),57‑65；WO2013041540)中。 [0073] 在另一个优选的实施方案中，按照本发明教导的预后、诊断、方法或测试试剂盒考虑使用间接免疫荧光。本领域技术人员熟悉此类技术和合适样品的制备，其描述在现有技术(US4647543；Voigt,J.,Krause,C., E,Saschenbrecker,S.,Hahn,M.,Danckwardt,M.,Feirer,C.,Ens,K,Fechner,K,Barth,E,Martinetz,T.和 W. (2012),Automated Indirect Immunofluorescence Evaluation of Antinuclear Autoantibodies on HEp‑2Cells,”Clinical and Developmental Immunology,第2012卷，doi:10.1155/2012/651058；Bonilla,E.,Francis,L.,Allam,F.等人,Immuno‑ fluorescence microscopy is superior to fluorescent beads for detection of antinuclear antibody reactivity in systemic lupus erythematosus patients,Clinical Immunology,第124卷,第1期,第18‑21页,2007)中。合适的试剂、装置和软件包是商购可得的，例如从EUROIMMUN,Lübeck,Germany。 [0074] 使样品经历仅测定是否存在与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的测试，但是优选的是，诊断方法、测试、装置等考虑测定针对各种各样涉及神经病学自身免疫疾病的抗原或其变体的自身抗体的存在，所述抗原优选地选自Hu、Yo、Ri、CV2、PNMA1、PNMA2、DNER/Tr、ARHGAP26、ITPR1、ATP1A3、NBC1、神经软骨蛋白、CARPVIII、Zic4、Sox1、Ma、MAG、MPO、MBP、GAD65、双载蛋白、恢复蛋白、GABA A受体、GABA B受体、甘氨酸受体、桥连蛋白、IgLON5、DPPX、水通道蛋白‑4、MOG、NMDA受体、AMPA受体、GRM1、GRM5、LGI1、VGCC和mGluR1和CASPR2，所述抗原优选地是经固定化的，例如在医学装置例如线印迹上。在诊断上有关的标志物神经软骨蛋白(EP15001186)、ITPR1(EP14003703.7)、NBC1(EP14003958.7)和ATP1A3(也称为人神经元Na(+)/K(+)ATP酶的α3亚基)(EP14171561.5)已经描述在现有技术中。 [0075] 根据本发明的教导，提供用于疾病诊断的与本发明的多肽相结合的抗体，优选地自身抗体。本领域技术人员熟悉用于纯化抗体的方法，例如在Hermanson,G.T.,Mallia,A.K.和Smith,P.K.(1992),Immobilized Affinity Ligand Techniques,San Diego:Academic Press中所描述的那些。简而言之，将与目的抗体(其抗原是本发明的多肽)特异性地结合的抗原固定化，并用于经由亲和层析来从适当的来源中纯化出目的抗体。来自罹患由发明人所鉴定的神经病学病症的患者的包含抗体的液体样品可以用作来源。 [0076] 根据本发明，提供能够与本发明的多肽特异性地结合的抗体，例如自身抗体。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“抗体”是指任何基于免疫球蛋白的结合部分，更优选地包含至少一个免疫球蛋白重链和至少一个免疫球蛋白轻链的结合部分，其包括但不限于单克隆和多克隆抗体以及抗体的变体，特别是片段，所述结合部分能够与各自的抗原相结合，更优选地与之特异性地结合。在一个优选的实施方案中，此处所使用的术语“特异‑5 ‑7 ‑8性地结合”表示，所述结合比以1×10 M，更优选地1×10 M，更优选地1×10 M，更优选地1‑9 ‑10 ‑11 ‑12 ×10 M，更优选地1×10 M，更优选地1×10 M，更优选地1×10 M的解离常数为特征的结合反应更强，所述解离常数通过使用Biacore设备在25℃下在PBS缓冲液(pH 7)中通过表面等离子体共振来测定。所述抗体可以是自身抗体制备物的一部分，所述自身抗体制备物是异源的或可以是同源的自身抗体，其中异源制备物包含许多不同的自身抗体种类，如通过从人供者血清进行制备而可获得的，例如通过使用经固定化的抗原进行亲和层析以纯化任何能够与所述抗原相结合的自身抗体。所述抗体可以是经糖基化的或非糖基化的。本领域技术人员熟悉可以用于鉴定、产生和纯化抗体及其变体的方法，例如在EP 2 423 226 A2以及其中的参考文献之中所描述的那些。所述抗体可以用作诊断试剂，单独地，或相组合地，例如处于与本发明的多肽的复合物之中。 [0077] 本发明提供了用于分离与本发明的多肽相结合的抗体(优选地，自身抗体)的方法，其包括下列步骤：a)使包含该抗体的样品与本发明的多肽相接触，从而形成复合物，b)分离在步骤a)中形成的复合物，c)使在步骤b)中分离出的复合物解离，和d)将该抗体与本发明的多肽分开。可以将来自罹患由发明人所鉴定的新的神经病学病症的患者的样品用作抗体的来源。合适的方法描述在现有技术中，例如在由GE Healthcare Life Sciences公开的手册“Affinity chromatography”、“Strategies for Protein Purification”和“Antibody Purification”(2009/2010)中，和在Philips,Terry,M.,Analytical techniques in immunochemistry,1992,Marcel Dekker,Inc中。 [0078] 本发明提供了包含本发明的多肽的药物组合物，所述组合物优选地适合于向受试者，优选地哺乳动物受试者，更优选地人进行施用。这样的药物组合物可以包含药学上可接受的载体。所述药物组合物可以例如经口服途径、经肠胃外途径、通过吸入喷雾剂、经局部途径、通过滴眼剂、经直肠途径、经鼻途径、经颊途径、经阴道途径或经由植入型储器进行施用，其中此处所使用的术语“经肠胃外途径”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、损伤内和颅内注射或输注技术。所述药物组合物可以以合适的剂型来提供，例如胶囊、片剂以及水性悬浮液和溶液，优选地以无菌的形式。它可以在治疗疾病的方法中进行使用，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的多肽。在一个优选的实施方案中，本发明提供了包含本发明的多肽的疫苗，其任选地包含辅助试剂例如佐剂或缓冲液；和本发明的多肽用于制备疫苗的用途。 [0079] 在本发明的范围内，提供了包含，优选地涂有本发明的(自身)抗体和/或本发明的多肽的医学或诊断装置。优选地，这样的医学或诊断装置以这样的形式包含本发明的多肽，所述形式允许使其与水溶液，更优选地液体人样品以直截了当的方式相接触。特别地，可以将本发明的多肽固定化在载体例如人工载体的表面上，所述人工载体优选地选自玻璃板或载玻片、生物芯片、微滴定板、珠粒例如磁珠、单采血液成分术装置、色谱柱、膜等。示例性的医学装置包括线印迹、微量培养板、用于显微术的载玻片、珠粒和生物芯片。除了本发明的多肽外，所述医学或诊断装置还可以包含额外的多肽，优选地以经富集的、分离的和/或重组的形式，例如阳性或阴性对照或者已知的具有诊断价值的与自身抗体相结合的其他抗原，特别是与其他与一种或多种相同或相似症状相关的疾病有关的那些。除了本发明的多肽外，所述医学装置(其优选地包含一种在诊断上有用的载体，所述载体包含一种或多种抗原，优选地多于一种抗原；或多于一种在诊断上有用的载体，所述载体中的每一种包含一种或多种抗原，优选地一种抗原)还可以包含一种或多种选自Hu、Yo、Ri、CV2、PNMA1、PNMA2、DNER/Tr、ARHGAP26、ITPR1、ATP1A3、NBC1、神经软骨蛋白、CARPVIII、Zic4、Sox1、Ma、MAG、MPO、MBP、GAD65、双载蛋白、恢复蛋白、GABA A受体、GABA B受体、甘氨酸受体、桥连蛋白、IgLON5、DPPX、水通道蛋白‑4、MOG、NMDA受体、AMPA受体、GRM1、GRM5、LGI1、VGCC和mGluR1和CASPR2的抗原，优选地包含至少包括根据本发明的多肽、水通道蛋白‑4和MOG的组合。可以使用每种抗原的具有与各自的对于所述抗原的自身抗体相结合的能力(作为生物学活性)的变体，以代替所述抗原。 [0080] 本发明的教导提供了试剂盒，其优选地用于诊断疾病。这样的试剂盒可以包含详细说明如何使用该试剂盒的说明书，和用于使本发明的多肽与来自受试者(优选地，人受试者)的体液样品相接触的工具，例如线印迹，其中本发明的多肽被固定化在线印迹上。进一步地，所述试剂盒可以包含阳性对照，例如一批已知与本发明的多肽相结合的自身抗体或重组抗体；和阴性对照，例如与本发明的多肽不具有可检测的亲和力的蛋白质例如牛血清白蛋白。最后，这样的试剂盒可以包含用于制备校准曲线的抗体或抗原的标准溶液。 [0081] 在一个优选的实施方案中，所述试剂盒包含用于检测与本发明的多肽相结合的抗体(更优选地，自身抗体)的工具，所述检测优选地通过检测包含本发明的多肽和与本发明的多肽相结合的抗体的复合物来进行。这样的工具优选地是这样的试剂，所述试剂与所述复合物相结合并且修饰该复合物或者携带标记从而使得该复合物可检测。例如，所述工具可以是经标记的抗体，其在除了被一抗所识别的结合位点之外的其他结合位点处与所述多肽相结合或者与一抗的恒定区相结合。备选地，所述工具可以是与所述自身抗体的恒定区相结合的二抗，优选地对于哺乳动物IgG类抗体来说特异的二抗。许多用于检测此类复合物的方法和工具在现有技术中已有描述，例如在Philips,Terry,M.,Analytical techniques in immunochemistry,1992,Marcel Dekker,Inc中。 [0082] 包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2的本发明的多肽可以以包含和/或表达编码所述多肽的核酸的细胞的形式来产生或提供。如果使用包含编码本发明的多肽或其变体的序列的核酸，那么这样的核酸可以是未修饰的核酸。在一个优选的实施方案中，所述核酸为这样的核酸，其本身不在自然界中出现，并且相比于天然核酸而言包含至少一个修饰，例如同位素内容物或化学修饰，例如甲基化、序列修饰、标记等，其指示了合成来源。在一个优选的实施方案中，所述核酸为重组核酸或核酸的一部分，和在一个更优选的实施方案中，为载体的一部分，在所述载体中它可以与允许所述核酸表达(优选地，过表达)的启动子功能性地相连接。本领域技术人员熟悉各种各样的合适的载体，其是商购可得的，例如从Origene。例如，可以使用编码具有C‑末端GFP的融合构建体的载体。所述细胞可以是真核或原核细胞，优选地真核细胞，例如酵母细胞，和更优选地为哺乳动物细胞，更优选地人细胞例如HEK293细胞。哺乳动物细胞的实例包括HEK293、CHO或COS‑7细胞。包含编码本发明的多肽的核酸的细胞可以是重组细胞或分离的细胞，其中术语“分离的”表示，所述细胞是经富集的，从而使得相比于所述细胞的野生型的环境而言，存在很少的其他分化或种类的细胞或者实际上不存在这样的其他细胞。 [0083] 本发明的教导可以不仅用于诊断，而且还用于预防或治疗疾病，更特别地，用于预防或治疗疾病的方法，其包括下列步骤：a)降低在受试者血液中与本发明的多肽相结合的自身抗体的浓度，和/或b)施用一种或多种免疫抑制药学物质，其优选地选自利妥昔单抗、波尼松、甲波尼龙、环磷酰胺、吗替麦考酚酯、静脉内免疫球蛋白、他克莫司、环孢菌素、氨甲蝶呤、硫唑嘌呤，和/或药物组合物。 [0084] 图1显示了在抗浮舰蛋白阳性的患者中的表现出多重脱髓鞘损伤的头部的MRI。该女性患者呈现出具有所怀疑的自身免疫来源的视神经炎。损伤在用干扰素β进行免疫调节疗法5个月的情况下保持稳定。在最初呈献时(A、B)和6个月之后(C、D)同一名34岁的女性患者的T2加权磁共振成像(A、C)和FLAIR成像(B、D)。 [0085] 图2显示了中枢神经组织的免疫荧光染色。在第一步中将冷冻切片与患者血清(1:100)或CSF(未稀释的)一起进行温育，和在第二步中与经FITC标记的山羊抗人IgG一起进行温育。通过与TO‑PRO‑3碘化物一起进行温育来对细胞核进行复染(蓝色)。获得分子层(ML)的细颗粒状染色和颗粒层的斑片状染色。在海马上，外部ML比内部ML更强烈。A)大鼠海马，B)大鼠小脑，C)猴小脑。 [0086] 图3显示了组织免疫沉淀和抗原鉴定。将大鼠或猪小脑的冷冻切片与患者血清(1:200)一起进行温育，在PBS中洗涤，并通过使用去污剂来增溶。将该溶液与包被有G蛋白的磁珠一起进行温育。通过SDS来洗脱免疫复合物，并其使经历SDS‑PAGE分析和Western印迹。 [0087] 图3A：左：用胶体考马斯蓝进行的染色。右：在与抗浮舰蛋白2一起进行温育后的Western印迹。泳道1：分子量标准参照物；泳道2和3：由大鼠小脑来获得的患者血清的组织免疫沉淀物；泳道4和5：对照样品的组织免疫沉淀物。箭头指明了50kDa的免疫沉淀出的抗原的位置，而虚线箭头指明了处于52kDa的IgG重链的位置。 [0088] 图3B：用患者血清(1和4)和抗浮舰蛋白2抗体(2和5)来进行的大鼠海马(1‑3)和小脑(4‑6)、猴肠神经(7‑9)和视神经(10‑12)组织切片的免疫荧光染色。经合并的照片显示了这两种反应性的共定位，包括在海马上外部分子层的更强烈的染色(3和6)。 [0089] 图4显示了重组浮舰蛋白的免疫荧光染色以及其在组织上对于抗体反应的中和。 [0090] 图4A：经转染的HEK293细胞的免疫荧光分析。将患者或对照血清(1:1000)(绿色)在经丙酮固定的表达浮舰蛋白1(A1)、浮舰蛋白2(A2)、浮舰蛋白1和2(A3)的重组HEK293细胞或经模拟物转染的对照(A4)上进行温育。 [0091] 图4B：在神经元组织上免疫荧光反应的中和。将患者血清(绿色)与用作为对照的空载体(B1‑B4)或用浮舰蛋白1/2(B5‑B8)进行转染的HEK293细胞的提取物一起进行预温育。包含浮舰蛋白1/2的提取物大大地降低了或取消了免疫反应。通过与TO‑PRO‑3碘化物一起进行温育来对细胞核进行复染(蓝色)。大鼠海马(B1和B5)，大鼠小脑(B2和B6)，猴小脑(B3和B7)，HEK293‑浮舰蛋白1/2(B4和B8)。 [0092] 在本申请中公开了许多序列，更特别地，SEQ ID NO 1，其表示表达载体“pTriEX‑1‑浮舰蛋白‑1[人]‑His”的核苷酸序列；SEQ ID NO 2，其表示附着至C‑末端His标签的人浮舰蛋白1的多肽序列；SEQ ID NO 3，其表示表达载体“pTriEX‑1‑浮舰蛋白‑1[人]”的核苷酸序列；SEQ ID NO 4，其表示人浮舰蛋白1的多肽序列；SEQ ID NO 5，其表示表达载体“pTriEX‑1‑浮舰蛋白‑2[人]‑His”的核苷酸序列；SEQ ID NO 6，其表示附着至C‑末端His标签的人浮舰蛋白2的多肽序列；SEQ ID NO 7，其表示表达载体“pTriEX‑1‑浮舰蛋白‑2[人]”的核苷酸序列；和SEQ ID NO 8，其表示人浮舰蛋白2的多肽序列。 实施例 [0093] 概述： [0094] 下面的实施例显示了，在临床上评估了罹患视神经炎，更特别地视觉损害、头痛和脑损伤的患者，但是他们的疾病的分子基础仍然是未知的。对他们的血液进行了筛选，但其不包含对于已知神经病学标志物的自身抗体。基于在与数种哺乳动物组织，更特别地来自大鼠和猪的小脑和海马进行反应后的特征性染色图式，分离出了自身抗体。 [0095] 使用重组浮舰蛋白1和浮舰蛋白2来进行的免疫沉淀、质谱法和竞争性结合研究将浮舰蛋白1和浮舰蛋白2揭示为所述抗体的靶标。当与重组浮舰蛋白1/2相接触时，来自具有各种神经自身抗体(抗‑NMDAR、抗‑Hu、抗‑Yo、抗‑Ri、抗‑AQP4、抗‑LGI1、抗‑CASPR2)的患者的34份血清和来自226名健康对照的血清未显示反应，这确认了本发明的方法是一种特异性的测定法。 [0096] 所述患者对于免疫抑制治疗作出正面响应直至达到效果。视觉症状完全消失。 [0097] 患者的表征 [0098] 一名在其他方面健康的女性患者(34岁)起初呈现出视力模糊、局部眼球后疼痛和右眼的红色视觉的强度减低(其在呈献之前五天开始)。除了存在有不值得注意的医疗史外，在近亲中没有关于任何自身免疫疾病的暗示，除了怀疑在外祖母中有多发性硬化。临床神经病学检查揭示了在右眼上视力受损(0.6；左：1.0)。视觉诱发电位测试揭示了光传入加工的严重扰乱。此外，进一步的电生理学测试也揭示了来自左腿的感觉传入的轻微紊乱，但在经颅磁力刺激后对于所有四肢的应答正常。颅MRI揭示了右视神经的炎症征象(对比度增强)以及几处小的皮质下白质损伤(没有血脑屏障损害的征象)，这对于脱髓鞘疾病例如多发性硬化来说是典型的(图1)。血液测试显示了关于肾和肝功能的正常值、正常的电解质以及正常的红细胞和白细胞的数目和分布。对于血清中自身抗体的测试没有揭示出明显的发现：类风湿因子、pANCA、AMA、抗磷脂、抗疏螺旋体(IgG/IgM)和抗密螺旋体是阴性的；ANA以1:320的滴度存在。CSF揭示了轻度的脑脊液淋巴细胞增多(9个细胞/μL)、正常的蛋白质(269mg/L)、局部IgG合成(53％)和寡克隆条带(其在血清中不存在)。抗‑AQP4在CSF中和在血清中都是不可检测的。 [0099] 在怀疑视神经的自身免疫性神经炎的情况下，用静脉内糖皮质激素脉冲疗法来治疗患者。假定是临床孤立综合征(Clinically Isolated Syndrome，CIS)，并且开始用倍泰龙进行免疫调节。5个月后，视觉症状完全消失。 [0100] 在最初症状开始后22个月，患者呈现出稳定的临床状态，没有神经病学症状的进一步进展。对照腰椎穿刺揭示了自身的抗体的产生，其中具有CSF中的寡克隆条带和5个细胞/μL CSF的轻度的脑脊液淋巴细胞增多。 [0101] 间接免疫荧光测定法(IFA) [0102] 将具有包括脑组织冷冻切片(大鼠的海马，大鼠、猴和猪的小脑)和HEK293细胞(其各自地表达30种重组的脑抗原)的生物芯片嵌合体的载玻片用于IFA。将所述载玻片与70μL的在PBS、0.2％Tween‑20(IFA缓冲液)中进行稀释的样品一起在室温下温育30分钟，用IFA缓冲液进行冲洗，并浸没在IFA缓冲液中5分钟。随后，将多克隆山羊抗人泛‑IgG(EUROIMMUN)或者单克隆鼠类抗人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(Sigma‑Aldrich)(其各自用异硫氰酸荧光素(FITC)进行标记)在室温下温育30分钟。然后将载玻片再次洗涤，包埋在经PBS缓冲的、包含DABCO的甘油(大约20μL/嵌合体)中，并且由两名独立的观察者通过使用激光扫描显微镜(LSM700,Zeiss,Jena,Germany)来进行检查。包括了阳性和阴性对照。基于组织图式和经转染的细胞的荧光强度(直接与未转染的细胞和对照样品相比较)来对样品进行分类。终点滴度是指显示出可见荧光的最高稀释度。进行采用原代海马神经元的活细胞IFA(Dalmau J,Gleichman AJ,Hughes EG,Rossi JE,Peng X,Lai M等人.Anti‑NMDA‑receptor encephalitis:case series and analysis of the effects of antibodies.Lancet Neurol.2008年10月11日)。 [0103] 在一些实验中，在第一步中使用针对浮舰蛋白2的多克隆兔抗体(Sigma‑Aldrich，稀释度1:100)，随后为与抗兔IgG‑Cy3(Jackson Research,Suffolk,United Kingdom)一起进行温育。通过用TO‑PRO3碘化物(稀释度1:2000)(ThermoFisher Scientific,Schwerte,Germany)进行DNA染色来使细胞核显现。在IFA之前1小时，将重组抗原与经稀释的血清样品相混合(参见 W,Otte M,Ulrich S,Normann D,Finkbeiner H, K等人.Autoimmunity to pancreatic juice in Crohn's disease.Results of an autoantibody screening in patients with chronic inflammatory bowel disease.Scand J Gastroenterol Suppl 1987,139:41‑52)，以用于中和实验。 [0104] 抗原的组织免疫沉淀和鉴定 [0105] 从大鼠或猪解剖出小脑，并将其在‑160℃的异戊烷中冲击冷冻。然后，将组织用SM2000R切片机(Leica Microsystems,Nussloch,Germany)进行冷冻切片(4μm)，放置在载玻片上，干燥，并贮存于‑196℃。对于HIP，将载玻片与患者的血清(以1:100进行稀释的)一起在4℃下温育3小时，随后为用IFA缓冲液的3个洗涤步骤。然后，将组织用增溶缓冲液(100mmol/L tris‑HCl pH 7.4、150mmol/L氯化钠、2.5mmol/L EDTA、0.5％(w/v)脱氧胆酸盐、1％(w/v)Triton X‑100，其包含蛋白酶抑制剂)在室温下提取30分钟。将得到的悬浮液均质化，并且以16,000×g在4℃下离心15分钟。在4℃下用G蛋白Dynabeads(ThermoFisher Scientific,Dreieich,Germany)使免疫复合物从清澈的上清液中沉淀过夜，用PBS洗涤3次，并且用PBS、5mmol/L二硫苏糖醇、1％(w/v)十二烷基硫酸钠在95℃下洗脱10分钟。洗脱物通过SDS‑PAGE和质谱法或Western印迹来进行分析。 [0106] 在HEK293中浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的重组表达 [0107] 使用标准方法来进行表达载体(编码包含浮舰蛋白1的多肽的SEQ ID NO 1和3；编码包含浮舰蛋白2的多肽的SEQ ID NO 5和7)的克隆。为了制备用于IFA的基底，将HEK293接种在无菌盖玻片上，进行转染，并且允许其单独地或者联合地表达浮舰蛋白1和浮舰蛋白2 48小时。将盖玻片用PBS进行洗涤，用丙酮在室温下固定10分钟，风干，切成毫米大小的生物芯片，并且在所描述的IFA中用作基底。备选地，将细胞在标准的T‑培养瓶中进行转染，并且在5天后收获细胞。将细胞沉降物用增溶缓冲液进行提取。将提取物以等分试样贮存于‑80℃直至进一步使用。 [0108] 用更大群的患者来进行的研究 [0109] 通过IFA来分析来自49名具有各种神经自身抗体的患者(包括20名具有针对AQP4的自身抗体(滴度达1:3200)的患者)和来自226名健康对照的血清。这些血清中没有一个与HEK293‑浮舰蛋白1、HEK293‑浮舰蛋白2和HEK293‑浮舰蛋白1/2反应。 [0110] 然后，在224份样品中回顾性地测定抗浮舰蛋白1/2的状态，对于所述样品已经在Clinical Immunological Laboratory Lübeck进行了全面的宽范围的神经自身抗体筛选(包括前面提及的参数)，和对于所述样品已经报道了没有已知抗原特异性的神经组织反应性IgG自身抗体。在四名患者中揭示了血清抗浮舰蛋白1/2(滴度：1:1000、1:1000、1:10000、1:10000)。患者P2、P3和P5也显示出在CSF中的抗浮舰蛋白1/2(滴度：1:3.2、1:100、1: 1000)。对于P4，CSF是不可得的。对于P1、P3和P5，计算出了>4的特异性抗体指数。分析了患者的额外的随访血清(当可得时)，并且显示P1、P2和P4的抗浮舰蛋白1/2滴度分别在18、24和72个月的时间段中是稳定的。P5的血清显示出在血浆交换后七周降低至1:320。 [0111] 然后，将HEK293‑浮舰蛋白1/2整合在参考实验室的宽范围自身抗体筛选方案中。在一群521名连续的患者(对于其要求测定抗‑AQP4)中，十八名患者对于抗‑AQP4来说是阳性的，而三名患者展示出抗浮舰蛋白1/2。对于所述三名患者之一，医疗记录是可取得的(血清：1:1000，CSF：无)。在150名连续的未选择的神经病学患者的诊断性病情检查期间鉴定出一名额外的患者(血清：1:10，CSF：阴性)，和通过筛选57份来自具有分离的ON(视神经炎)的患者的匿名的、抗‑AQP4和抗‑MOG阴性的血清而鉴定出了另一名患者(1:10，CSF不可得)。 [0112] 总之，所有七名患者(对于其可以评价医疗记录)具有播散性脱髓鞘的放射学征象、轻度的脑脊液淋巴细胞增多和CSF中的OCB，这与MS或暗示MS的CIS相一致。他们中的六名呈现出视神经炎。在所有情况中，自身抗体是IgG1亚类的并且结合至浮舰蛋白1/2，但不结合至独个的浮舰蛋白1或浮舰蛋白2。这些患者中没有一个展示出抗‑AQP4或抗‑MOG抗体。 [0113] 本发明的一些实施方案如下： [0114] 1.用于诊断疾病的方法，其包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0115] 2.包含浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2或者其变体的多肽，其优选地被固定化，更优选地在固体载体上。 [0116] 3.根据实施方案2的多肽用于疾病诊断的用途，所述疾病诊断优选地包括在样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0117] 4.根据实施方案2的多肽，其用于在疾病治疗中使用。 [0118] 5.与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体，优选地分离的自身抗体，其中所述自身抗体优选地处于与根据实施方案2的多肽的复合物之中。 [0119] 6.用于分离与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的方法，其包括下列步骤： [0120] a)使包含该自身抗体的样品与根据实施方案2的多肽在与复合物形成相容的条件下相接触，其中所述自身抗体与所述多肽相结合， [0121] b)分离在步骤a)中形成的复合物， [0122] c)使在步骤b)中分离出的复合物解离，和 [0123] d)将该自身抗体与该多肽分开。 [0124] 7.药物组合物，或医学装置，优选地诊断装置，其包含根据实施方案2的多肽。 [0125] 8.用于疾病诊断的测试试剂盒，所述测试试剂盒包含根据实施方案2的多肽，其中所述测试试剂盒优选地还包含用于检测复合物的工具，所述复合物包含根据实施方案2的多肽和与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体。 [0126] 9.根据实施方案1、3、4和8中任一项的方法、多肽、用途、自身抗体、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中所述患者具有一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状，或者所述疾病与一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状相关：升高的CSF中的细胞数目，鞘内IgG合成，CSF中的寡克隆条带，CSF中的MRZ反应，视觉损害，优选地视敏度损害，视神经炎，头痛，脊髓损伤，和脑损伤。 [0127] 10.根据实施方案1、3、4、8和9中任一项的方法、多肽、用途、自身抗体、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中所述疾病为神经病学疾病，优选地脱髓鞘疾病，优选地CNS的疾病，优选地脑的疾病，优选地与视神经的炎症相关的疾病。 [0128] 11.根据实施方案1至10中任一项的多肽、自身抗体、方法、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中所述多肽以包含编码所述多肽的核酸的细胞的形式或以包含所述多肽的组织的形式来提供。 [0129] 12.根据实施方案1至11中任一项的多肽、自身抗体、方法、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中所述多肽为重组的和/或分离的多肽。 [0130] 13.根据实施方案1、3、6和9至12的方法，其中所述样品为包含抗体的体液，其优选地选自全血、血清、脑脊液和唾液。 [0131] 14.根据实施方案6至13中任一项的方法、多肽、用途、自身抗体、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中包含浮舰蛋白1或其变体的多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的多肽两者都存在，并且优选地是复合物的一部分。 [0132] 15.根据实施方案1、5、6和9至14中任一项的方法、多肽、用途、自身抗体、药物组合物、装置或测试试剂盒，其中所述自身抗体与包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合。 [0133] 16.根据实施方案2的多肽在制备用于在患者中进行疾病诊断的测试试剂盒中的用途。 [0134] 17.根据实施方案16的用途，其中所述疾病诊断包括在来自患者的样品中检测与浮舰蛋白1和/或浮舰蛋白2相结合的自身抗体的步骤。 [0135] 18.根据实施方案2的多肽在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于在患者的疾病治疗中使用。 [0136] 19.根据实施方案16至18中任一项的用途，其中所述患者具有一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状，或者所述疾病与一个或多个，优选地两个或更多个选自下列的症状相关：升高的CSF中的细胞数目，鞘内IgG合成，CSF中的寡克隆条带，CSF中的MRZ反应，视觉损害，优选地视敏度损害，视神经炎，头痛，脊髓损伤，和脑损伤。 [0137] 20.根据实施方案16至18中任一项的用途，其中所述疾病为神经病学疾病，优选地脱髓鞘疾病，优选地CNS的疾病，优选地脑的疾病，优选地与视神经的炎症相关的疾病。 [0138] 21.根据实施方案16至18中任一项的用途，其中所述多肽以包含编码所述多肽的核酸的细胞的形式或以包含所述多肽的组织的形式来提供。 [0139] 22.根据实施方案16至18中任一项的用途，其中所述多肽为重组的和/或分离的多肽。 [0140] 23.根据实施方案17的用途，其中所述样品为包含抗体的体液，其优选地选自全血、血清、脑脊液和唾液。 [0141] 24.根据实施方案16至18中任一项的用途，其中包含浮舰蛋白1或其变体的多肽和包含浮舰蛋白2或其变体的多肽两者都存在，并且优选地是复合物的一部分。 [0142] 25.根据实施方案17的用途，其中所述自身抗体与包含浮舰蛋白1和浮舰蛋白2的复合物相结合。 |
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