带有修饰结构的多肽及其应用

申请号 CN202410061582.8 申请日 2024-01-16 公开(公告)号 CN118056839A 公开(公告)日 2024-05-21
申请人 广东众生睿创生物科技有限公司; 发明人 陈小新; 黄建洲; 刘名; 刘为顺; 黄仕海; 文康; 黎振美; 陈明鲁; 张倩茹; 刘苗; 刘卓伟; 龙超峰;
摘要 本 发明 提供了一系列含修饰结构的多肽,该系列多肽作用于GLP‑1、GIP和GCG三个靶点,具有开发成 预防 或 治疗 代谢性 疾病 药物的前景,其中该多肽序列如式Z‑3所示。X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8KX9X10X11X0X4FX12X13X14LLX15GG PSSGAPPPS0式Z‑3。
权利要求

1.一种带修饰结构的多肽及其药学上可接受的盐,其多肽序列如式Z‑3所示:
X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GGPSSGA PPPS0
式Z‑3
其中:
X5选自为络酸(Tyr,Y)或组氨酸(His,H);
X0独立选自为 或Aib或丙氨酸(Ala,A);
X6选自谷氨酰胺(Gln,Q)或组氨酸(His,H);
X1可独立选自为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL)或络氨酸(Tyr,Y);
X7选自亮氨酸(Leu,L)或赖氨酸(Lys,K);
X8选自天冬氨酸(Asp,D)或谷氨酸(Glu,E);
X9选自赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
X10选自丙氨酸(Ala,A)或络氨酸(Tyr,Y);
X11选自赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或丙氨酸(Ala,A);
X4选自α甲基取代赖氨酸(α‑MeLys,α‑MeK)、D‑赖氨酸(d‑K)、L‑氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn)、丙氨酸(Ala,A)、赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
X12选自为缬氨酸(Val,V)或异亮氨酸(Ile,I);
X13选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
X14选自为赖氨酸(Lys,K)、色氨酸(Trp,W)、络氨酸(Tyr,Y)、谷氨酸(Glu,E)或苯丙氨酸(Phe,F);
X15选自为赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
S0选自 (即:C末端氨基酸任选被酰胺化为C末端伯酰
胺);
且所述多肽化合物具有以下修饰:
1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为14,17,19,21,24或25,j独立选自3,4,5或7,
2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
X2选自
其中,
“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;X3选自:
R1和R2独立选自 m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
2.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,多肽序列中S0为
3.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,多肽序列中第2位氨基酸X0选自Aib。
4.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,多肽序列中第20位氨基酸X0选自Aib或A。
5.根据权利要求1‑2任意一项所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,所述多肽序列选自以下序列:
YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:1)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib AFIKW LLKGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:2)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib AFIEK LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:3)HAibHGT FTSDY SIYLE KKYAAib EFVKW LLKGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:4)HAibHGT FTSDY SIYLE KKYAAib KFVQW LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:5)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:15)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:16)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib AFIKY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:17)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:18)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAKAib AFIKY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:19)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib KFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:20)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQA α‑MeKFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:21)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib d‑KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:22)YAibQGT FTSDY SIα‑MeLLD KKAQAib L‑OrnFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:
23)
YAibQGT FTSDY SIα‑MeLKD KKAQAib AFIEY LLEGGPSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:24)。
6.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为14,j为3。
7.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为17,j为4。
8.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为17,j为7。
9.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为19,j为5。
10.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为21,j为7。
11.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为24,j为4。
12.根据权利要求5所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,i为25,j为4。
13.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,m选自1,2。
14.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,p选自1。
15.根据权利要求1所述多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,n选自9。
16.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,X3选自:
进一步优选为:
17.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,结构单元 选自:
进一步优选为:
18.根据权利要求1所述的多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,所述钉合体结构选自:
19.下式所示多肽化合物及其药学上可接受的盐:
20.根据权利要求1‑19任意一项所述多肽及其药学上可接受的盐,其特征在于,所述盐可为与以下酸所成盐:无机酸包括盐酸氢溴酸硝酸酸,碳酸氢根,磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸亚磷酸有机酸包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、异丁酸、来酸、丙二酸、苯甲酸琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、甲苯磺酸、柠檬酸酒石酸、甲磺酸、甲磺酸、双羟酸、精氨酸、葡糖酸。
21.一种药物组合物,其特征在于所述药物组合物含有权利要求1‑20任意一项所述多肽或其药学上可接受的盐。
22.权利要求1‑20任意一项所述的多肽或其药学上可接受的盐、及权利要求21所述药物组合物在制备治疗代谢性疾病及其相关疾病的药物上的应用。
23.根据权利要求22所述应用,所述代谢性疾病包括糖尿病、肥胖症和非酒精性脂肪肝炎及其相关疾病。

说明书全文

带有修饰结构的多肽及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一系列带有修饰结构的多肽及其应用,具体的,本发明涉及一系列带有订书钉结构的多肽,含有该系列多肽的药物组合物及其在治疗代谢性疾病方面的应用。

背景技术

[0002] 胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)和促胰岛素肽(GIP)属于肠促胰岛素,胰高血糖素(GCG)由胰岛α细胞分泌,前述物质均能直接或间接影响人体糖代谢和/或脂代谢,因此作用于GLP‑1、GIP、GCG的化合物具有开发成治疗代谢性疾病药物的前景,如已上市作用于GLP‑1的化合物(多肽)塞那肽、利拉鲁肽、索鲁肽即为治疗II型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)和/或肥胖症(obesity)的药物。
[0003] 但是,作用于单一GLP‑1、GIP或GCG的化合物通常在治疗领域、治疗效果、代谢行为等方面具有不足,进而影响化合物的成药性或上市后临床应用,因此,尝试开发作用于多作用靶点的化合物,以期从多个作用机制同时介入,达到更好的临床效果。礼来开发的GLP‑1/GIP双重激动剂替尔泊肽(Tirzepatide),在头对头的临床实验中体现出优于索马鲁肽的效果,目前已经获批上市;再如礼来开发的GLP‑1/GIP/GCG三重激动剂LY3437943,亦在临床研究中体现为较好的临床效果,具有较好的开发前景。
[0004] GLP‑1R/GIPR/GCGR多重激动剂可激活血糖调控受体分子机制,通过不同的机制影响食物摄入和饱腹感,它们在维持体重稳态方面发挥作用。同时研究过程中亦发现,由于GLP‑1受体激动剂能通过激动GLP‑1受体促进发挥肠促胰岛素而产生良好降糖和减肥效果,同时可以通过多途径协同作用治疗NASH(非酒精性脂肪性肝炎),提示作用于该靶点或多靶点的化合物具有开发成预防和/或治疗糖代谢和/或脂代谢异常相关的一系列具体疾病药物的前景。

发明内容

[0005] 本发明从解决现有技术的不足出发,提供了一系列带有修饰结构的多肽及其药学上可接受的盐,该系列多肽在体外实验中体现为较好的GLP‑1受体(GLP‑1R)、GIP受体(GIPR)和GCG受体(GCGR)的作用效果,具有较好的成药前景。
[0006] 本发明提供式Z所示多肽序列的带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐:
[0007] X5X0X6GT XaTSDY SXbX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 XcXdX15GG PSSGA PPPS0[0008] 式Z
[0009] 其中:
[0010] X0独立选自为 或Aib或丙酸(Ala,A),所述Aib的结构为
[0011] X1独立选自为α‑甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL)、络氨酸(Tyr,Y)或Aib,所述α‑MeL其结构为
[0012] X4选自α‑甲基取代赖氨酸(α‑MeLys,α‑MeK)、D‑赖氨酸(d‑K)、L‑氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn)、丙氨酸(Ala,A)、赖氨酸(Lys,K)、谷氨酸(Glu,E)或亮氨酸(Leu,L);所述α‑甲基取代赖氨酸的结构为 D‑赖氨酸(d‑K)结构为 L‑鸟氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn)结构为
[0013] X5选自为络氨酸(Tyr,Y)或组氨酸(His,H);
[0014] X6选自为谷氨酰胺(Gln,Q)或组氨酸(His,H);
[0015] X7选自为亮氨酸(Leu,L)或赖氨酸(Lys,K);
[0016] X8选自为天冬氨酸(Asp,D)或谷氨酸(Glu,E);
[0017] X9选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0018] X10选自为丙氨酸(Ala,A)或络氨酸(Tyr,Y);
[0019] X11选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或丙氨酸(Ala,A);
[0020] X12选自为缬氨酸(Val,V)或异亮氨酸(Ile,I);
[0021] X13选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0022] X14选自为赖氨酸(Lys,K)、色氨酸(Trp,W)、络氨酸(Tyr,Y)、谷氨酸(Glu,E)或苯丙氨酸(Phe,F);
[0023] X15选自为赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
[0024] Xa选自为苯丙氨酸(Phe,F)或α‑甲基取代苯丙氨酸(α‑MePhe,α‑MeF),α‑甲基取代苯丙氨酸结构为
[0025] Xb选自为赖氨酸(Lys,K)或异亮氨酸(Ile,I);
[0026] Xc选自为亮氨酸(Leu,L)或苯丙氨酸(Phe,F);
[0027] Xd选自为亮氨酸(Leu,L)或异亮氨酸(Ile,I);
[0028] S0选自 (即:C末端氨基酸任选被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0029] 且所述化合物(多肽)具有以下修饰:
[0030] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构(肽钉合)的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自2,3,4,5或7,
[0031] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0032] X2选自其中,
“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;
[0033] X3选自
[0034] R1和R2独立选自
[0035] m选自1、2或3;
[0036] p选自1或2;
[0037] n选自8、9或10。
[0038] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列如式Z‑1所示:
[0039] X5X0X6GT FTSDY SXbX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 XcXdX15GG PSSGA PPPS0[0040] 式Z‑1
[0041] 所述化合物(多肽)具有以下修饰:
[0042] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”(肽钉合)结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自2,3,4,5或7,
[0043] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;其他变量如本发明所定义。
[0044] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列如式Z‑2所示:
[0045] X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0[0046] 式Z‑2
[0047] 所述化合物(多肽)具有以下修饰:
[0048] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24,25,j独立选自2,3,4,5,7,[0049] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;其他变量如本发明所定义。
[0050] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列分别如式Z‑3所示:
[0051] X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0[0052] 式Z‑3
[0053] 且所述多肽化合物具有以下修饰:
[0054] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为14,17,19,21,24或25,j独立选自3,4,5或7,[0055] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0056] X2选自
[0057] 其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;
[0058] X3选自:
[0059]
[0060] R1和R2独立选自
[0061] m选自1、2或3;
[0062] p选自1或2;
[0063] n选自8、9或10;其他变量如本发明所定义。
[0064] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列分别如式Z‑4所示:
[0065] YX0QGT FTSDY SXbX1LD KKAQX0 X4FX12X13X14 XcXdX15GG PSSGA PPPS0
[0066] 式Z‑4
[0067] S0选自 (即:C末端氨基酸任选被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0068] 且所述多肽化合物具有以下修饰:
[0069] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,17,21或25;j独立选自3,4或7,
[0070] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0071] X2选自 和;其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;
[0072] X3选自:
[0073] m选自1、2或3;
[0074] p选自1或2;
[0075] n选自8、9或10;其他变量如本发明所定义。
[0076] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列分别如式Z‑5所示:
[0077] YX0QGT XaTSDY SIX1KD KKAQX0 X4FIX13Y LLX15GG PSSGA PPPS0
[0078] 式Z‑5
[0079] 且所述多肽化合物具有以下修饰:
[0080] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构,其中i独立选自为14;j独立选自3,
[0081] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0082] X2选自 其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;
[0083] X3选自:
[0084] m选自1、2或3;
[0085] p选自1或2;
[0086] n选自8、9或10;其他变量如本发明所定义。
[0087] 在本发明的一些方案中,带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其多肽序列分别如式Z‑6、Z‑7、Z‑8、Z‑9、Z‑10、Z‑11、Z‑12、Z‑13所示:
[0088] X5X0X6GT FTSDY SIX1LX8 KKX10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0
[0089] 式Z‑6
[0090] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAX11X0 X4FIX13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0
[0091] 式Z‑7
[0092] YX0QGT FTSDY SIX1X7D KKAQX0 X4FIX13Y LLX15GG PSSGA PPPS0
[0093] 式Z‑8
[0094] YX0QGT FTSDY SXbX1LD KKAQX0 X4FX12EX14 XcXdX15GG PSSGA PPPS0
[0095] 式Z‑9
[0096] YX0QGT FTSDY SXbX1LD KKAQX0 KFX12EX14 LXdX15GG PSSGA PPPS0
[0097] 式Z‑10
[0098] YX0QGT FTSDY SXbX1KD KKAQX0 X4FIEY LLX15GG PSSGA PPPS0
[0099] 式Z‑11
[0100] YX0QGT FTSDY SIX1KD KKAQX0 X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0101] 式Z‑12
[0102] YX0QGT XaTSDY SIX1KD KKAQX0 X4FIEY LLX15GG PSSGA PPPS0
[0103] 式Z‑13
[0104] 所述化合物(多肽)具有以下修饰:
[0105] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自2,3,4,5或7,
[0106] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0107] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;
[0108] X3选自:
[0109]
[0110] R1和R2独立选自
[0111] m选自1、2或3;
[0112] p选自1或2;
[0113] n选自8、9或10;其他变量如本发明所定义。
[0114] 在本发明的一些方案中,上述多肽序列中S0为 即:C末端氨基酸被酰胺化为伯酰胺,其他变量如本发明所定义。
[0115] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第2位氨基酸X0为Aib,其他变量如本发明所定义。
[0116] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第20位氨基酸X0为Aib,其他变量如本发明所定义。
[0117] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第2和20位氨基酸X0同时为Aib,其他变量如本发明所定义。
[0118] 在本发明的一些方案中,所述i为12,j为4,i+j为16,其他变量如本发明所定义。
[0119] 在本发明的一些方案中,所述i为14,j为3,i+j为17,其他变量如本发明所定义。
[0120] 在本发明的一些方案中,所述i为16,j为3,i+j为19,其他变量如本发明所定义。
[0121] 在本发明的一些方案中,所述i为17,j为4,i+j为21,其他变量如本发明所定义。
[0122] 在本发明的一些方案中,所述i为17,j为7,i+j为24,其他变量如本发明所定义。
[0123] 在本发明的一些方案中,所述i为19,j为5,i+j为24,其他变量如本发明所定义。
[0124] 在本发明的一些方案中,所述i为21,j为7,i+j为28,其他变量如本发明所定义。
[0125] 在本发明的一些方案中,所述i为24,j为4,i+j为28,其他变量如本发明所定义。
[0126] 在本发明的一些方案中,所述i为25,j为3,i+j为28,其他变量如本发明所定义。
[0127] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第1位氨基酸X5为Y,其他变量如本发明所定义。
[0128] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第1位氨基酸X5为H,其他变量如本发明所定义。
[0129] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第3位氨基酸X6为Q,其他变量如本发明所定义。
[0130] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第3位氨基酸X6为H,其他变量如本发明所定义。
[0131] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第6位氨基酸Xa为F,其他变量如本发明所定义。
[0132] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第6位氨基酸Xa为α‑MeF,其他变量如本发明所定义。
[0133] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第12位氨基酸Xb为I,其他变量如本发明所定义。
[0134] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第12位氨基酸Xb为K,其他变量如本发明所定义。
[0135] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第13位氨基酸X1为α‑MeL,其他变量如本发明所定义。
[0136] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第13位氨基酸X1为Y,其他变量如本发明所定义。
[0137] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第13位氨基酸X1为Aib,其他变量如本发明所定义。
[0138] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第14位氨基酸X7为L,其他变量如本发明所定义。
[0139] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第14位氨基酸X7为K,其他变量如本发明所定义。
[0140] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第15位氨基酸X8为D,其他变量如本发明所定义。
[0141] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第15位氨基酸X8为E,其他变量如本发明所定义。
[0142] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第17位氨基酸X9为K,其他变量如本发明所定义。
[0143] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第17位氨基酸X9为Q,其他变量如本发明所定义。
[0144] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第17位氨基酸X9为E,其他变量如本发明所定义。
[0145] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第18位氨基酸X10为A,其他变量如本发明所定义。
[0146] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第18位氨基酸X10为Y,其他变量如本发明所定义。
[0147] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第19位氨基酸X11为Q,其他变量如本发明所定义。
[0148] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第19位氨基酸X11为A,其他变量如本发明所定义。
[0149] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第19位氨基酸X11为K,其他变量如本发明所定义。
[0150] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为K,其他变量如本发明所定义。
[0151] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为A,其他变量如本发明所定义。
[0152] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为E,其他变量如本发明所定义。
[0153] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为a‑MeK,其他变量如本发明所定义。
[0154] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为d‑K,其他变量如本发明所定义。
[0155] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为L‑Orn,其他变量如本发明所定义。
[0156] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第21位氨基酸X4为L,其他变量如本发明所定义。
[0157] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第23位氨基酸X12为I,其他变量如本发明所定义。
[0158] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第23位氨基酸X12为V,其他变量如本发明所定义。
[0159] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第24位氨基酸X13为E,其他变量如本发明所定义。
[0160] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第24位氨基酸X13为K,其他变量如本发明所定义。
[0161] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第24位氨基酸X13为Q,其他变量如本发明所定义。
[0162] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第25位氨基酸X14为Y,其他变量如本发明所定义。
[0163] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第25位氨基酸X14为W,其他变量如本发明所定义。
[0164] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第25位氨基酸X14为K,其他变量如本发明所定义。
[0165] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第25位氨基酸X14为E,其他变量如本发明所定义。
[0166] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第25位氨基酸X14为F,其他变量如本发明所定义。
[0167] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第26位氨基酸Xc为L,其他变量如本发明所定义。
[0168] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第26位氨基酸Xc为F,其他变量如本发明所定义。
[0169] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第27位氨基酸Xd为L,其他变量如本发明所定义。
[0170] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第27位氨基酸Xd为I,其他变量如本发明所定义。
[0171] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第28位氨基酸X15为E,其他变量如本发明所定义。
[0172] 在本发明的一些方案中,多肽序列中第28位氨基酸X15为K,其他变量如本发明所定义。
[0173] 在本发明一些方案中,上述X3选自:
[0174]其他变量如本发明所定义。
[0175] 在本发明的一些方案中,上述X3结构中m选自1或2,其他变量如本发明所定义。
[0176] 在本发明的一些方案中,上述X3结构中p选自1,其他变量如本发明所定义。
[0177] 在本发明的一些方案中,上述X3结构中n选自9,其他变量如本发明所定义。
[0178] 在本发明一些方案中,上述X3选自:
[0179]他变量如本发明所定义。
[0180] 在本发明一些方案中,上述X3选自:
[0181]其他变量如本发明所定义。
[0182] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为:
[0183]其他变量如本发明所定义。
[0184] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为:
[0185]其他变量如本发明所定义。
[0186] 本发明提供式I所示的带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐:
[0187] 式I:X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0[0188] 其中:
[0189] X0独立选自为 或Aib或丙氨酸(Ala,A),所述Aib的结构为
[0190] X1独立选自为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL)或络氨酸(Tyr,Y),所述α‑MeL其结构为
[0191] X4选自α甲基取代赖氨酸(α‑MeLys,α‑MeK),其结构为 或D‑赖氨酸(d‑K),其结构为 或L‑鸟氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn),其结构为
或丙氨酸(Ala,A)、赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
[0192] X5选自为络氨酸(Tyr,Y)或组氨酸(His,H);
[0193] X6选自为谷氨酰胺(Gln,Q)或组氨酸(His,H);
[0194] X7选自为亮氨酸(Leu,L)或赖氨酸(Lys,K);
[0195] X8选自为天冬氨酸(Asp,D)或谷氨酸(Glu,E);
[0196] X9选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0197] X10选自为丙氨酸(Ala,A)或络氨酸(Tyr,Y);
[0198] X11选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或丙氨酸(Ala,A);
[0199] X12选自为缬氨酸(Val,V)或异亮氨酸(Ile,I);
[0200] X13选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0201] X14选自为赖氨酸(Lys,K)、色氨酸(Trp,W)、络氨酸(Tyr,Y)、谷氨酸(Glu,E)或苯丙氨酸(Phe,F);
[0202] X15选自为赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
[0203] S0选自 (即:C末端氨基酸任选被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0204] 且所述化合物具有以下修饰:
[0205] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自2,3,4,5或7,
[0206] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0207] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;
[0208] X3选自:
[0209]
[0210] R1和R2独立选自
[0211] m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
[0212] 在本发明一些方案中,上述X3选自其他变量如本发明所定义。
[0213] 在本发明一些方案中,上述X3选自其他变量如本发明所定义。
[0214] 在本发明一些方案中,上述X3选自其他变量如本发明所定义。
[0215] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0216] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0217] 本发明提供式I所示的带修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐:
[0218] 式I:X5X0X6GT FTSDY SIX1X7X8 KX9X10X11X0 X4FX12X13X14 LLX15GG PSSGA PPPS0[0219] 其中:
[0220] X0可独立选自为 或Aib或丙氨酸(Ala,A),所述Aib的结构为
[0221] X1可独立选自为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL)或络氨酸(Tyr,Y),所述α‑MeL其结构为
[0222] X4选自α甲基取代赖氨酸(α‑MeLys,α‑MeK),其结构为 或D‑赖氨酸(d‑K),其结构为 或L‑鸟氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn),其结构为
或丙氨酸(Ala,A)、赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
[0223] X5选自为络氨酸(Tyr,Y)或组氨酸(His,H);
[0224] X6选自为谷氨酰胺(Gln,Q)或组氨酸(His,H);
[0225] X7选自为亮氨酸(Leu,L)或赖氨酸(Lys,K);
[0226] X8选自为天冬氨酸(Asp,D)或谷氨酸(Glu,E);
[0227] X9选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0228] X10选自为丙氨酸(Ala,A)或络氨酸(Tyr,Y);
[0229] X11选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或丙氨酸(Ala,A);
[0230] X12选自为缬氨酸(Val,V)或异亮氨酸(Ile,I);
[0231] X13选自为赖氨酸(Lys,K)、谷氨酰胺(Gln,Q)或谷氨酸(Glu,E);
[0232] X14选自为赖氨酸(Lys,K)、色氨酸(Trp,W)、络氨酸(Tyr,Y)、谷氨酸(Glu,E)或苯丙氨酸(Phe,F);
[0233] X15选自为赖氨酸(Lys,K)或谷氨酸(Glu,E);
[0234] S0选自 (即:C末端氨基酸任选被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0235] 且所述化合物具有以下修饰:
[0236] 1)序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自为12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自2,3,4,5或7,
[0237] 2)所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0238] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;X3选自:
[0239] m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
[0240] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列中的上标编号相同的氨基酸可以通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团(钉合体),即序列中i位置和i+j位置的氨基酸侧链可通过修饰连接形成类似“订书钉”结构的修饰结构(钉合体),其中i独立选自10‑28中任意的整数,例如10,12,14,16,17,19,21,24或25,j独立选自1‑8中任意的整数,例如1,2,3,4,5,7或8。所述“订书钉”结构的个数为1‑2个。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的25位,第二氨基酸在肽的28位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的24位,第二氨基酸在肽的28位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的17位,第二氨基酸在肽的21位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的16位,第二氨基酸在肽的19位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的17位,第二氨基酸在肽的24位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的19位,第二氨基酸在肽的24位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的21位,第二氨基酸在肽的28位。在一些实施方案中,第一氨基酸在肽的19位,第二氨基酸在肽的24位。
[0241] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列可具有至多0、1、2、3或4个氨基酸插入、缺失、修饰或替换。例如,12位上的异亮氨酸(I)可以替换为赖氨酸(K);26或27位上的亮氨酸(L)可以替换成异亮氨酸(I)或苯丙氨酸(F);13位上的X1可以替换为X0;20位上的X0可以替换为天然氨基酸丙氨酸(A)等。
[0242] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示:
[0243] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1EGG PSSGA PPPS0
[0244] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1KW LL1KGG PSSGA PPPS0
[0245] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0246] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFV1KW LL1KGG PSSGA PPPS0
[0247] HX0HGT FTSDY SIYLE K1KYAX0 1KFVQW LLEGG PSSGA PPPS0
[0248] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIQ1K LL1KGG PSSGA PPPS0
[0249] YX0QGT FTSDY SIX1LD 1KQA1QX0 AFIE2K LL2KGG PSSGA PPPS0
[0250] YX0QGT FTSDY SIX1LD KEAQX0AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS0
[0251] HX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS0
[0252] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKYQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS0
[0253] YX0QGT FTSDY SIX1LE KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS0
[0254] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFVQ1E LL1KGG PSSGA PPPS0
[0255] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1E LL1KGG PSSGA PPPS0
[0256] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1EW LL1KGG PSSGA PPPS0
[0257] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS0
[0258] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1EFIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0259] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 AFI1KY LLEGG PSSGA P PPS0
[0260] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEY LLEGG PSSGA P PPS0
[0261] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKA1KX0 AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS0
[0262] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFIEY LL1KGG PSSGA PPPS0
[0263] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQA 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0264] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0265] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0266] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLEGG PSSGA PPPS0
[0267] 序列中的上标(左上标)指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代1 1
通过修饰基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团(钉合体),如上述序列中K和E表示
1 1
修饰的赖氨酸及谷氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑E修饰);又如上述序列中K和K表示
1 1
修饰的赖氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑K修饰);又如上述序列中K和X4表示修饰的赖氨酸和X4,且二者通过修饰基团相连(K‑X4修饰);其中X0,X1,X4和S0以及修饰方式如本发明所定义。
[0268] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示:
[0269] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS0
[0270] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LIEGG PSSGA PPPS0
[0271] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFVEF LIEGG PSSGA PPPS0
[0272] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K FI1KGG PSSGA PPPS0
[0273] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFIEF LL1KGG PSSGA PPPS0
[0274] YX0QGT FTSDY SIX0LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS0
[0275] YX0QGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQX0 AFIEF LLEGG PSSGA PPPS0
[0276] 其中X0,X1和S0以及修饰方式如前述定义。
[0277] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示:
[0278] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0279] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0280] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFVEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0281] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K FI1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0282] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFIEF LL1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0283] YX0QGT FTSDY SIX0LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0284] YX0QGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQX0 AFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0285] 其中,S0为 (即:C末端氨基酸被酰胺化为C末端伯酰胺),X0,X1和S0以及修饰方式如前述定义。
[0286] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示,其中部分X0为Aib:
[0287] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0288] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0289] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFVEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0290] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K FI1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0291] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFIEF LL1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0292] YX0QGT FTSDY SIAibLD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0293] YX0QGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQAib AFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0294] 其它变量如前述定义。
[0295] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示,其中X0全部为Aib,X1为α‑MeL:
[0296] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0297] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0298] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFVEF LIEGG PSSGA PPP‑NH2
[0299] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K FI1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0300] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFIEF LL1KGG PSSGA PPP‑NH2
[0301] YAibQGT FTSDY SIAibLD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0302] YAibQGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQAib AFIEF LLEGG PSSGA PPP‑NH2
[0303] 其它变量如前述定义。
[0304] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示:
[0305] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0306] 其中,
[0307] S0为 (即:C末端氨基酸被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0308] X0独立选自为 或Aib,所述Aib的结构为
[0309] X1为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL),其结构为
[0310] 序列中的上标指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰1 1
连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团,如上述序列中K和K表示修饰的赖氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑K修饰);
[0311] 所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0312] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;X3选自
[0313] m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
[0314] 本发明提供了一系列多肽的序列如下所示:
[0315] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1EGG PSSGA PPPS‑NH2
[0316] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0317] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0318] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFV1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0319] HX0HGT FTSDY SIYLE K1KYAX0 1KFVQW LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0320] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIQ1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0321] YX0QGT FTSDY SIX1LD 1KQA1QX0 AFIE2K LL2KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0322] YX0QGT FTSDY SIX1LD KEAQX0AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0323] HX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0324] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKYQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0325] YX0QGT FTSDY SIX1LE KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0326] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFVQ1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0327] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0328] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1EW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0329] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0330] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0331] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0332] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0333] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKA1KX0 AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0334] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFIEY LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0335] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQA 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0336] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0337] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0338] 其中,
[0339] S0为 (即:C末端氨基酸被酰胺化为C末端伯酰胺);
[0340] X0独立选自为 或Aib,所述Aib的结构为
[0341] X1为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL),其结构为
[0342] X4可独立选自α甲基取代赖氨酸(α‑MeLys,α‑MeK),其结构为 或D‑赖氨酸(d‑K),其结构为 或L‑鸟氨酸(L‑Ornithine,L‑Orn),其结构为
[0343] 序列中的上标指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰1 1
基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团,如上述序列中K和E表示修饰的赖氨酸及谷
1 1
氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑E修饰);又如上述序列中K和K表示修饰的赖氨酸,且二
1 1
者通过修饰基团相连(K‑K修饰);又如上述序列中K和X4表示修饰的赖氨酸和X4,且二者通过修饰基团相连(K‑X4修饰);
[0344] 所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0345] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;X3选自
[0346] m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
[0347] 本发明还提供系列多肽的序列如下所示:
[0348] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1EGG PSSGA PPPS‑NH2
[0349] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0350] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0351] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFV1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0352] HX0HGT FTSDY SIYLE K1KYAX0 1KFVQW LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0353] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIQ1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0354] YX0QGT FTSDY SIX1LD 1KQA1QX0 AFIE2K LL2KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0355] YX0QGT FTSDY SIX1LD KEAQX0AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0356] HX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0357] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKYQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0358] YX0QGT FTSDY SIX1LE KKAQX0 AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0359] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAX0 EFVQ1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0360] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFIE1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0361] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 AFI1EW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0362] 其中,
[0363] X0独立选自为 或Aib,所述Aib的结构为
[0364] X1为α甲基取代亮氨酸(α‑MeLeu,α‑MeL),其结构为
[0365] 序列中的上标指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰1 1
基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团,如上述序列中K和E表示修饰的赖氨酸及谷
1 1
氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑E修饰);又如上述序列中K和K表示修饰的赖氨酸,且二者通过修饰基团相连(K‑K修饰)。
[0366] 所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0367] X2选自其中,“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相
连的位置;X3选自
[0368] m选自1、2或3;p选自1或2;n选自8、9或10。
[0369] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列如下所示:
[0370] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K LL1EGG PSSGA PPPS‑NH2
[0371] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFI1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0372] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0373] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAAib EFV1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0374] HX0HGT FTSDY SIYLE K1KYAAib 1KFVQW LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0375] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIQ1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0376] YX0QGT FTSDY SIX1LD 1KQA1QAib AFIE2K LL2KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0377] YX0QGT FTSDY SIX1LD KEAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0378] HX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0379] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKYQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0380] YX0QGT FTSDY SIX1LE KKAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0381] HX0HGT FTSDY SIYLE KKYAAib EFVQ1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0382] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0383] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFI1EW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0384] 其他变量如本发明所定义。
[0385] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列如下所示:
[0386] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0387] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0388] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0389] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0390] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKA1KAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0391] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFIEY LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0392] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQA 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0393] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0394] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0395] 其他变量如本发明所定义。
[0396] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列如下所示:
[0397] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0398] 其他变量如本发明所定义。
[0399] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其肽链序列如下任一所示:
[0400] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0401] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib AFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0402] 其他变量如本发明所定义。
[0403] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其X0全部为Aib,X1为α‑MeL,即其肽链序列如下任一所示:
[0404] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0405] YAibQGT FTSDY SIX1 1KD K1KAQAib AFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0406] 其他变量如本发明所定义。
[0407] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其X0全部为Aib,X1为α‑MeL,即:其肽链序列如下所示:
[0408] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K LL1EGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:3)[0409] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFI1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:2)[0410] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:1)[0411] HAibHGT FTSDY SIYLE KKYAAib EFV1KW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:4)[0412] HAibHGT FTSDY SIYLE K1KYAAib 1KFVQW LLEGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:5)[0413] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIQ1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:6)[0414] YAibQGT FTSDY SIX1LD 1KQA1QAib AFIE2K LL2KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:7)
[0415] YAibQGT FTSDY SIX1LD KEAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:8)[0416] HAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:9)[0417] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKYQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:10)
[0418] YAibQGT FTSDY SIX1LE KKAQAib AFIE1K LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:11)
[0419] HAibHGT FTSDY SIYLE KKYAAib EFVQ1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:12)[0420] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFIE1E LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:13)
[0421] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib AFI1EW LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2(SEQ ID NO:14)
[0422] 其他变量如本发明所定义。
[0423] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其X0全部为Aib,其肽链序列如下所示:
[0424] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0425] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0426] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0427] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0428] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKA1KAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0429] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFIEY LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0430] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQA 1X4KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0431] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0432] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1X4FIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0433] 其他变量如本发明所定义。
[0434] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,X1为α‑MeL,其肽链序列如下所示:
[0435] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0436] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1EFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0437] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0438] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0439] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKA1KAib AFI1KY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0440] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFIEY LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0441] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQA 1α‑MeKFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0442] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1d‑KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0443] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1L‑OrnFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0444] 其他变量如本发明所定义。
[0445] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽,其X0全部为Aib,其肽链序列如下所示:
[0446] YAibQGT F TSDY SIX11KD K1KAQAib AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0447] 其他变量如本发明所定义。
[0448] 本发明还提供系列带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐:
[0449] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LL1KGG PSSGA PPPS0
[0450] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LI1KGG PSSGA PPPS0
[0451] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLKGG PSSGA PPPS0
[0452] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIKF LLEGG PSSGA PPPS0
[0453] YX0QGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQX0 KFIEF LLEGG PSSGA PPPS0
[0454] 且所述化合物具有以下修饰:
[0455] 所述修饰为两个氨基酸单元结构侧链上的氨基或羧基与 缩合相连;
[0456] X2选自其中,
“*”表示与X3相连的位置,两端为与修饰氨基酸中对应氨基或羧基相连的位置;
[0457] X3选自
[0458] m选自1、2或3;p选自1、2;n选自8、9或10,其他变量如本发明所定义。
[0459] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其肽链序列如下所示:
[0460] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0461] YX0QGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LI1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0462] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0463] YX0QGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIKF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0464] YX0QGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQX0 KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0465] ,其他变量如本发明所定义。
[0466] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其中部分X0为Aib,即其肽链序列如下所示:
[0467] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0468] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQX0 1KFVEF LI1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0469] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIEF LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0470] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQX0 1KFIKF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0471] YAibQGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQX0 KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0472] 其他变量如本发明所定义。
[0473] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其中X0全为Aib,X1为α‑MeL,即其肽链序列如下所示:
[0474] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFVEF LL1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0475] YAibQGT FTSDY SIX1LD KKAQAib 1KFVEF LI1KGG PSSGA PPPS‑NH2
[0476] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIEF LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0477] YAibQGT FTSDY SIX1LD K1KAQAib 1KFIKF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0478] YAibQGT FTSDY S1KX1LD 1KKAQAib KFIEF LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0479] 其他变量如本发明所定义。
[0480] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其肽链序列如下所示:
[0481] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIQY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0482] ,其他变量如本发明所定义。
[0483] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,X0部分为Aib,其肽链序列如下所示:
[0484] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIQY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0485] ,其他变量如本发明所定义。
[0486] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,X0全部为Aib,X1为α‑MeL,其肽链序列如下所示:
[0487] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib AFIQY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0488] ,其他变量如本发明所定义。
[0489] 在本发明的一些方案中,上述m选自1或2,其他变量如本发明所定义。
[0490] 在本发明的一些方案中,上述p选自1,其他变量如本发明所定义。
[0491] 在本发明的一些方案中,上述n选自9,其他变量如本发明所定义。
[0492] 在本发明的一些方案中,上述X3选自其他变量如本发明所定义。
[0493] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为
[0494] 其他变量如本发明所定义。
[0495] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0496] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0497] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0498] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0499] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0500] 在本发明的一些方案中,上述结构单元其他变量如本发明所定义。
[0501] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为其他变量如本发明所定义。
[0502] 在本发明的一些方案中,上述结构单元 为
[0503] 其他变量如本发明所定义。
[0504] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0505]
[0506]
[0507]
[0508] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0509]
[0510]
[0511] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0512]
[0513]
[0514] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0515]
[0516]
[0517] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0518]
[0519] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)为以下任一,其他变量如本发明所定义:
[0520]
[0521]
[0522] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)如下所示,其他变量如本发明所定义:
[0523]
[0524] 本发明的一些具体方案,带有修饰结构的多肽结构如下表1所示,所述Aib的结构为 所述α‑MeL为α甲基取代亮氨酸,其结构为 所述α‑MeK为α甲基取代赖氨酸,其结构为 其他变量如本发明所定义,例如序列中的上标指代修饰
的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团等。
[0525] 表1带有修饰结构的多肽
[0526]
[0527]
[0528]
[0529] 本发明的一些具体方案,带有修饰结构的多肽结构如下表2所示,所述Aib的结构为 所述α‑MeL为α甲基取代亮氨酸,其结构为 所述α‑MeK为α甲基取代赖氨酸,其结构为 所述d‑K为D‑赖氨酸,其结构为 所述L‑
Ornithine或L‑Orn为L‑鸟氨酸,其结构为 其他变量如本发明所定义,例如
序列中的上标指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰基团连接形成类似“订书钉”(钉合体)结构的修饰基团等。
[0530] 表2带有修饰结构的多肽
[0531]
[0532]
[0533]
[0534] 本发明的一些具体方案,带有修饰结构的多肽结构如下表3所示,所述Aib的结构为 所述α‑MeL为α甲基取代亮氨酸,其结构为 所述α‑MeK为α甲基取代赖氨酸,其结构为 其他变量如本发明所定义,例如序列中的上标指代修饰
的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团等。
[0535] 表3带有修饰结构的多肽
[0536]
[0537]
[0538] 本发明的一些具体方案,X1为α‑MeL,带有修饰结构的多肽结构如下表4所示,所述Aib的结构为 所述α‑MeL为α甲基取代亮氨酸,其结构为 其他变量如本发明所定义,例如序列中的上标指代修饰的氨基酸单元结构,上标编号相同的氨基酸指代通过修饰基团连接形成类似“订书钉”结构的修饰基团等。
[0539] 表4带有修饰结构的多肽
[0540]
[0541]
[0542]
[0543] 本发明的一些具体方案,X1为α‑MeL,带有修饰结构的多肽结构如下表5所示:
[0544] 表5带有修饰结构的多肽
[0545]
[0546]
[0547] 本发明的一些具体方案,X1为α‑MeL,带有修饰结构的多肽结构如下表6所示:
[0548] 表6带有修饰结构的多肽
[0549]
[0550]
[0551] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)如下所示,其他变量如本发明所定义:
[0552]
[0553] 本发明的一些具体方案,X1为α‑MeL,带有修饰结构的多肽结构如下表7所示:
[0554] 表7带有修饰结构的多肽
[0555]
[0556]
[0557] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,其肽链序列如下所示:
[0558] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0559] YX0QGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 LFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0560] YX0QGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0561] YX0QGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0562] ,其他变量如本发明所定义。
[0563] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,X0部分为Aib,其肽链序列如下所示:
[0564] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0565] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQX0 LFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0566] YAibQGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0567] YAibQGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQX0 AFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0568] ,其他变量如本发明所定义。
[0569] 在本发明的一些方案中,所述带有修饰结构的多肽或其药学上可接受的盐,X0全部为Aib,X1为α‑MeL,其肽链序列如下所示:
[0570] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib KFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0571] YAibQGT FTSDY SIX11KD K1KAQAib LFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0572] YAibQGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQAib AFIEY LLEGG PSSGA PPPS‑NH2
[0573] YAibQGT a‑MeFTSDY SIX11KD K1KAQAib AFIEY LLKGG PSSGA PPPS‑NH2
[0574] ,其他变量如本发明所定义。
[0575] 在本发明的一些方案中,上述带有修饰结构的多肽中“订书钉”结构(钉合体)如下所示,其他变量如本发明所定义:
[0576]
[0577] 本发明的一些具体方案,带有修饰结构的多肽化合物结构如下表8所示:
[0578] 表8带有修饰结构的多肽
[0579]
[0580]
[0581]
[0582] 本发明还提供了上述药物组合物,包括作为活性成分的治疗有效量根据上述的多肽化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
[0583] 在本发明的一些方案中,上述多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在制备预防或治疗代谢性疾病及其相关疾病的药物上的应用。
[0584] 在本发明的一些方案中,上述多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在制备预防或治疗糖尿病及其相关疾病的药物上的应用。
[0585] 在本发明的一些方案中,上述多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在制备预防或治疗肥胖症及其相关疾病的药物上的应用。
[0586] 在本发明的一些方案中,上述多肽化合物或其药学上可接受的盐或者上述的组合物在制备预防或治疗NASH(非酒精性脂肪肝炎)及其相关疾病的药物上的应用。
[0587] 技术效果
[0588] 本发明的多肽对GLP‑1R/GIPR/GCGR具有很强的体外激动活性,本发明化合物具有优异的体外和体内药代动学性质;本发明化合物具有明显减重、降糖和降血脂等效果。
[0589] 定义和说明
[0590] 除非另有说明,本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的,而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时,意在指代其对应的商品或其活性成分。
[0591] 本发明所述“多肽”、“肽”、“多肽化合物”,除非另有说明,本领域技术人员可以结合上下文理解为相同含义。
[0592] 本发明所述“多肽序列”、“肽链”,除非另有说明,本领域技术人员可以结合上下文理解为相同含义。
[0593] 本发明所述“订书钉”、“钉书钉”、“钉合体”、“订书钉”,除非另有说明,本领域技术人员可以结合上下文理解为相同含义。
[0594] 除非另有说明,本发明中对化合物的实施例编号和所述化合物编号顺序保持一致,即所述“实施例1”与“化合物1”所指示化合物为同一结构化合物。
[0595] 这里所采用的术语“药学上可接受的”,是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言,它们在可靠的医学判断的范围之内,适用于与人类和动物的组织接触使用,而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症,与合理的利益/险比相称。
[0596] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐,由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时,可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时,可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐,所述无机酸包括例如盐酸氢溴酸硝酸酸,碳酸氢根,磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸亚磷酸等;以及有机酸盐,所述有机酸包括如乙酸、三氟乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、甲苯磺酸、柠檬酸酒石酸、甲磺酸和双羟酸等类似的酸;还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐,以及如葡糖酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团,从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0597] 本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下,这样的盐的制备方法是:在有机溶剂或两者的混合物中,经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0598] “氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸,以及起到与天然存在的氨基酸类似的作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸,以及后来修饰的那些氨基酸,例如,羟脯氨酸、γ‑羧基谷氨酸和O‑磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(例如与氢、羧基基团、氨基基团和R基团结合的α碳)的化合物,例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有修饰的R基团(例如,正亮氨酸)或修饰的肽骨架,但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指其结构不同于一般的氨基酸化学结构,但起到与天然存在的氨基酸相似的作用的化学化合物。
[0599] 本文所述的天然氨基酸及其各种表达形式为本领域技术人员公知,其具体对应情况如下表:
[0600]
[0601]
[0602] 某些其他非天然氨基酸,如2‑氨基异丁酸(Aib)等,对应方式如下表:
[0603]
[0604]
[0605] 术语“治疗”包括抑制、减缓、停止或逆转现有症状或病患的进展或严重程度。
[0606] 除非另有说明,术语“异构体”意在包括几何异构体、顺反异构体、立体异构体、对映异构体、旋光异构体、非对映异构体和互变异构体。
[0607] 本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物,包括顺式和反式异构体、(‑)‑和(+)‑对映体、(R)‑和(S)‑对映体、非对映异构体、(D)‑异构体、(L)‑异构体,及其外消旋混合物和其他混合物,例如对映异构体或非对映体富集的混合物,所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物,均包括在本发明的范围之内。
[0608] 除非另有说明,术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
[0609] 除非另有说明,术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
[0610] 除非另有说明,术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心,并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
[0611] 除非另有说明,“(+)”表示右旋,“(‑)”表示左旋,“(±)”表示外消旋。
[0612] 除非另有说明,用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型,用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型,用波浪线 表
示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 或直形虚
线键
[0613] 除非另有说明,术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100%,并且,该异构体或对映体的含量大于等于60%,或者大于等于70%,或者大于等于80%,或者大于等于90%,或者大于等于95%,或者大于等于96%,或者大于等于97%,或者大于等于98%,或者大于等于99%,或者大于等于99.5%,或者大于等于99.6%,或者大于等于99.7%,或者大于等于99.8%,或者大于等于99.9%。
[0614] 除非另有说明,术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如,其中一种异构体或对映体的含量为90%,另一种异构体或对映体的含量为10%,则异构体或对映体过量(ee值)为80%。
[0615] 可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)‑和(S)‑异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体,可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备,其中将所得非对映体混合物分离,并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者,当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时,与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐,然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分,然后回收得到纯的对映体。此外,对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的,所述色谱法采用手性固定相,并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
[0616] 本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原3 125 14
子同位素。例如,可用放射性同位素标记化合物,比如氚(H),碘‑125( I)或C‑14( C)。又例如,可用重氢取代氢形成氘代药物,氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固,相比于未氘化药物,氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换,无论放射性与否,都包括在本发明的范围之内。
[0617] 当所列举的连接基团没有指明其连接方向,其连接方向是任意的,例如,中连接基团L为‑M‑W‑,此时‑M‑W‑既可以按与从左往右的读取顺序相同
的方向连接环A和环B构成 也可以按照与从左往右的读取顺序相
反的方向连接环A和环B构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的
组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0618] 除非另有规定,当某一基团具有一个或多个可连接位点时,该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。当该化学键的连接方式是不定位的,且可连接位点存在H原子时,则连接化学键时,该位点的H原子的个数会随所连接化学键的个数而对应减少变成相应价数的基团。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形实线键直形虚线键 或波浪线 表示。例如‑OCH3中的直形实线键表示通过该基团中的
原子与其他基团相连; 中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子的两端与其他
基团相连; 中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与其他基团相连。
[0619] 除非另有规定,术语“C1‑3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑3烷基包括C1‑2和C2‑3烷基等;其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n‑丙基和异丙基)等。
[0620] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构,如果本发明涉及化合物的绝对构型,则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法(SXRD),把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据,光源为CuKα辐射,扫描方式: 扫描,收集相关数据后,进一步采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构,便可以确证绝对构型。
[0621] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备,包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式,优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
[0622] 本发明所使用的物料和溶剂可经市售获得。
[0623] 化合物依据本领域常规命名原则或者使用 软件命名,市售化合物采用供应商目录名称。
[0624] 在本发明中,本领域技术人员所熟知化合物基团或试剂可以使用缩略词表示,包括但不限于化合物基团:叔丁氧羰基(BOC)、苄基(Bn)、对甲苯磺酸基(Tos)、苄氧羰基(Cbz)、芴甲氧羰基(Fmoc)、对甲苯磺酰基(Ts)、烯丙氧羰基(Alloc)等;包括但不限于常规试剂:二甲亚砜(DMSO)、二氯甲烷(DCM)、N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、三氟乙酸(TFA)、N,N’‑二异丙基碳二亚胺(DIC)、1‑羟基苯并三唑(HOBt)、苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、1‑羟基‑7‑氮杂苯并三唑(HOAT)、四三苯基膦钯(Pd(PPh3)4);Fmoc‑AEEA‑OH: 二十烷二酸单叔丁酯:
N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH:
19‑(bis(benzyloxy)phosphoryl)nonadecanoic acid:
等等。

具体实施方式

[0625] 下面通过实施例对本发明进行详细描述,但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明,其中也公开了其具体实施例方式,对本领域的技术人员而言,在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。本发明所描述的具体合成步骤还包括可用于合成本发明多肽化合物或其药学上可接受盐的新的中间体和方法。在下面的实施例具体合成步骤中,本领域普通技术人员可以不同的方式组合,以制备本发明的多肽化合物或其盐。
[0626] 总体上,本发明所述系列带有修饰结构的多肽采用多肽固相合成法制备,从MBHA树脂开始,采用Fmoc‑策略,按肽序列从C端到N端,采用保护氨基酸逐一缩合(包括缩合,脱保护,洗脱循环,脱侧链保护成内酰胺环),裂解、过滤浓缩、沉淀过滤干燥得带支链环肽裂解粗品,再经纯化,浓缩冻干,得到成品。
[0627] 实施例1
[0628]
[0629] 肽树脂合成采用常规固相合成工艺,在底部具有烧结筛板的固相反应柱内氮气鼓泡反应,使用MBHA Resin为起始树脂,常规Fmoc保护氨基酸投料,缩合剂采用DIC/HOBt体系,DMF为主要反应溶剂,20%PIP‑DMF溶液为脱Fmoc溶剂,从肽主链C端向N端逐一缩合,主链合成完成后,接着脱除A‑23位Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH的ε位氨基上的‑Mtt后,依次缩合侧1至侧5位((2‑2‑oxoethyl)‑glycine,AEEA,AEEA,γGlu,二十烷二酸单叔丁基),然后再脱除A‑19位Lys的ε位氨基保护基与侧1位(2‑2‑oxoethyl)‑glycine的羧基保护基后,加入缩合剂形成内酰胺环,得到目标肽树脂。
[0630] 具体步骤如下:
[0631] 步骤1:树脂偶联Fmoc‑Rink Linker
[0632] 1.取MBHA Resin(S=0.49mmol/g)10.2g(5mmol)加入固相反应柱,加入DCM 70mL静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入60mL DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。称取Fmoc‑Rink Linker 10.8g(20mmol,4.0eq)溶于40mL DMF中加入到上述树脂中,加入DIC 2.78g(22mmol,4.4eq)并补加10mL DMF至反应柱中,鼓氮气,待完全溶解后加入HOBt 2.70g(20mmol,4.0eq),继续通氮气鼓泡反应;
[0633] 2.在25℃的环境中反应2h以上,取样茚三检测阴性(树脂无色或浅黄色)结束反应;
[0634] 3.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0635] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[0636] 1.加入20%的哌啶/DMF(100mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(100mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应5min,取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0637] 2.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 7.66g(4.0eq)、DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq),用60mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0638] 3.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0639] 4.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0640] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0641] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0642]
[0643]
[0644] 步骤3.支链偶连
[0645] 1.向反应柱中依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液300mL,通氮气鼓泡反应两次,每次30min;
[0646] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0647] 3.依次加入DCM 300mL和DMF 300mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[0648] 4.称取Fmoc‑(2‑(allyloxy)‑2‑oxoethyl)glycine(Fmoc‑Ida(OAll)‑OH)7.9g(4.0eq)、DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq),用100mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0649] 5.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0650] 6.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0651] 其余支链偶联步骤
[0652] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[0653]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑AEEA‑OH
Fmoc‑AEEA‑OH
Fmoc‑Glu‑OtBu
二十烷二酸单叔丁酯
[0654] 步骤4.:环合
[0655] 1.向反应柱中依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[0656] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2加入此混合溶剂400ml,再加入Pd(PPh3)4 0.58g(0.1eq),氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出;
[0657] 3.重复前述步骤1~2次;
[0658] 4.取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0659] 5.依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂8次;
[0660] 6.将DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq)溶解与150mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应48h,取样茚三酮检测,树脂无色;
[0661] 7.依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂8次;
[0662] 8.依次加入MeOH 200mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次;
[0663] 9.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂17.8g;
[0664] 得到中间体(肽树脂)结构式如下:
[0665] Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp17
(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Leu‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys ‑Ala‑Gln
21
(Trt)‑Aib‑Lys ‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(17,21(Nε(Na‑OC‑(CH2)18‑COOtBu)‑Glu(ε‑OtBu)‑AEEA‑AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))[0666] 步骤5.肽树脂裂解
[0667] 配制250ml裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基烷(TIS)、1,2‑乙二硫醇(EDT)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:EDT:TIS:ArOH=86.5:5:2.5:1:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应4h。将裂解液滤出、浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品
7.9g。
[0668] 步骤6.色谱纯化
[0669] 将上述7.9g环肽粗品用10%乙腈和10%醋酸水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C18硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[0670]工序 水相 有机相 梯度
一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑70min):41%‑51%
二次纯化 35mmol/L K2HPO4(pH 7.4) 乙腈 B%(0‑50min):33%‑44%
转盐 0.6mmol/L NaOH 乙腈 B%:45%
[0671] 步骤7.浓缩冻干
[0672] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到目标多肽成品0.93g(纯度为94.97%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1258.7,检测值为1258.7。
[0673] 实施例2
[0674]
[0675] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例2所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1249.7,检测值为1249.4。
[0676] 实施例3
[0677]
[0678] 步骤1:树脂偶联Fmoc‑Rink Linker
[0679] 1.取MBHA Resin(S=0.49mmol/g)10.2g(5mmol)加入固相反应柱,加入DCM 70mL静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入60mL DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。称取Fmoc‑Rink Linker 10.8g(20mmol,4.0eq)溶于40mL DMF中加入到上述树脂中,加入DIC 2.78g(22mmol,4.4eq)并补加10mL DMF至反应柱中,鼓氮气,待完全溶解后加入HOBt 2.70g(20mmol,4.0eq),继续通氮气鼓泡反应;
[0680] 2.在25℃的环境中反应2h以上,取样茚三酮检测阴性(树脂无色或浅黄色)结束反应;
[0681] 3.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0682] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[0683] 1.加入20%的哌啶/DMF(100mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(100mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应5min,取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0684] 2.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 7.66g(4.0eq)、DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq),用60mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0685] 3.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0686] 4.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0687] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0688] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0689]
[0690]
[0691] 步骤3.支链偶连
[0692] 1.向反应柱中依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液300mL,通氮气鼓泡反应两次,每次30min;
[0693] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0694] 3.依次加入DCM 300mL和DMF 300mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[0695] 4.称取Alloc‑Lys(Fmoc)‑OH 9.05g(4.0eq)、DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq),用100mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0696] 5.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0697] 6.抽掉反应液,用DMF(300mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0698] 其余支链偶联步骤
[0699] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[0700] 所用含保护基团的氨基酸 备注Fmoc‑AEEA‑OH
Fmoc‑Glu‑OtBu
二十烷二酸单叔丁酯
[0701] 步骤4.:环合
[0702] 1.向反应柱中依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[0703] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2制备混合溶剂400mL,并加入反应柱中,再加入Pd(PPh3)4 0.58g(0.1eq),氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出;
[0704] 3.重复前述步骤1~2次;
[0705] 4.取样茚三酮检测,树脂呈蓝色;
[0706] 5.依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂8次;
[0707] 6.将DIC 2.78g(4.4eq)和HOBt 2.70g(4.0eq)溶解与150mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应48h,取样茚三酮检测,树脂无色;
[0708] 7.依次加入DMF 300mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂8次;
[0709] 8.依次加入MeOH 200mL和DCM 300mL交叉洗涤树脂4次;
[0710] 9.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂19.2g;
[0711] 得中间体(肽树脂)结构式如下:
[0712] Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Leu‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑Ala‑Gln25 28
(Trt)‑Aib‑Ala‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Lys ‑Leu‑Leu‑Glu ‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(25,28(Nε(COOH‑(CH2)18‑COOtBu)‑Glu(ε‑OtBu)‑AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))
[0713] 步骤5.肽树脂裂解
[0714] 配制250mL裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基硅烷(TIS)、1,2‑乙二硫醇(EDT)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:EDT:TIS:ArOH=86.5:5:2.5:1:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应4h。将裂解液滤出,浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品
8.2g。
[0715] 步骤6.色谱纯化
[0716] 将上述8.2g环肽粗品用10%乙腈和10%醋酸水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C18硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[0717]工序 水相 有机相 梯度
一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑70min):41%‑51%
二次纯化 35mmol/L K2HPO4(pH 7.4) 乙腈 B%(0‑50min):33%‑44%
转盐 0.6mmol/L NaOH 乙腈 B%:45%
[0718] 步骤7.浓缩冻干
[0719] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到实施例3所示成品1.01g(纯度为94.97%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1202.6,检测值为1202.6。
[0720] 实施例4
[0721]
[0722] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例4所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1277.7,检测值为1277.6。
[0723] 实施例5
[0724]
[0725] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例5所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1277.7,检测值为1277.5。
[0726] 实施例6
[0727]
[0728] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例6所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1122.4,检测值为1122.5。
[0729] 实施例7
[0730]
[0731] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例7所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1250.2,检测值为1250.2。
[0732] 实施例8
[0733]
[0734] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例8所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Glu(OAll)‑OH,Fmoc‑AEEA‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1225.9,检测值为1226.0。
[0735] 实施例9
[0736]
[0737] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例9所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1218.4,检测值为1218.3。
[0738] 实施例10
[0739]
[0740] 参考实施例3多肽的合成,得到实施例10所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1225.9,检测值为1224.2。
[0741] 实施例11
[0742]
[0743] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例11所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1244.2,检测值为1242.7。
[0744] 实施例12
[0745]
[0746] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例12所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Glu‑OAll,Fmoc‑AEEA‑OH,Fmoc‑AEEA‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1262.2,检测值为1262.2。
[0747] 实施例13
[0748]
[0749] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例13所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1244.2,检测值为1244.2。
[0750] 实施例14
[0751]
[0752] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例14所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1258.5,检测值为1258.4。
[0753] 实施例15
[0754]
[0755] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例15所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1258.7,检测值为1258.6。
[0756] 实施例16
[0757]
[0758] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例16所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1258.7,检测值为1258.6。
[0759] 实施例17
[0760]
[0761] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例17所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1255.2,检测值为1255.1。
[0762] 实施例18
[0763]
[0764] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例18所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1235.7,检测值为1234.7。
[0765] 实施例19
[0766]
[0767] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例19所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1250.0,检测值为1249.0。
[0768] 实施例20
[0769]
[0770] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例20所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1250.2,检测值为1249.2。
[0771] 实施例21
[0772]
[0773] 肽树脂合成采用常规固相合成工艺,在底部具有烧结筛板的固相反应柱内氮气鼓泡反应,使用MBHA Resin为起始树脂,常规Fmoc保护氨基酸投料,缩合剂采用DIC/HOBt体系,DMF为主要反应溶剂,20%PIP‑DMF溶液为脱Fmoc溶剂,从肽主链C端向N端逐一缩合,主链合成完成后,接着脱除A‑26位Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH的ε位氨基上的‑Mtt后,依次缩合侧1至侧4位((2‑2‑oxoethyl)‑glycine,AEEA,γGlu,二十烷二酸单叔丁基),然后再脱除A‑23位Lys的ε位氨基保护基与侧1位(2‑2‑oxoethyl)‑glycine的羧基保护基后,加入缩合剂形成内酰胺环,得到目标肽树脂。
[0774] 具体步骤如下:
[0775] 步骤1:树脂活化脱保护
[0776] 1.取MBHA Resin(S=0.34mmol/g)15g(5.1mmol)加入固相反应柱,加入DCM 225ml静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入150ml DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应5min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应15min,取样茚三酮检测,树脂呈灰红色,抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤7次,调节pH=7,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0777] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[0778] 1.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 5.75g(3.0eq)、DIC 2.52g(4.0eq)和HOBt 2.03g(3.0eq),用80mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0779] 2.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0780] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0781] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0782] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0783]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑Pro‑OH
Fmoc‑Pro‑OH
Fmoc‑Pro‑OH
Fmoc‑Ala‑OH HPLC检测合成
Fmoc‑Gly‑OH
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH
Fmoc‑Pro‑OH
Fmoc‑Gly‑OH
Fmoc‑Gly‑OH HPLC检测合成
[0784] 得到AA‑11肽。
[0785] 步骤3:AA‑11肽脱保护
[0786] 1.向合成的AA‑11肽中,加入DMF(80mL)活化10min,抽干至无液体流出,加入20%的哌啶/DMF(80mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(80mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈黄色偏墨色;抽掉反应液,用DMF(100mL)洗涤8次,调节pH=7左右,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0787] 步骤4:Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH偶联
[0788] 1.称取Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH 3.04g(3.0eq)、DIC 1.20g(4.0eq)和HOBt 0.965g(3.0eq),用50mLDMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0789] 2.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0790] 3.抽掉反应液,用DMF(80mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0791] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0792] 参考步骤4中Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH偶联的方法及投料顺序依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0793]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH. AA‑12肽
Fmoc‑Leu‑OH
Fmoc‑Leu‑OH
FmocTyr(tBu)‑OH
Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH
Fmoc‑Ile‑OH
Fmoc‑Phe‑OH
Fmoc‑Ala‑OH
Fmoc‑Aib‑OH
Fmoc‑Gln(Trt)‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ala‑OH
Fmoc‑Lys(Alloc)‑OH
Fmoc‑Lys(Boc)‑OH
Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH
Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH
Fmoc‑α‑Me‑Leu‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ile‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH
Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH
Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH
Fmoc‑Thr(tBu)‑OH
Fmoc‑Phe‑OH
Fmoc‑Thr(tBu)‑OH
Fmoc‑Gly‑OH
Fmoc‑Gln(Trt)‑OH
Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑OH 采用HPLC监控
[0794] 步骤5.支链偶连
[0795] 1.向反应柱中加入DCM 300mL洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液80ml,通氮气鼓泡反应5次,每次30min;
[0796] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈灰绿色;
[0797] 3.依次加入DCM 80mL和DMF 80mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[0798] 4.称取Fmoc‑(2‑(allyloxy)‑2‑oxoethyl)glycine(Fmoc‑Ida(OAll)‑OH)4.7g(5.0eq)、DIC 1.67g(6.0eq)和HOBt 1.49g(5.0eq),用100mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0799] 5.在25℃的环境中反应5.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0800] 6.抽掉反应液,用DMF(80mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0801] 其余支链偶联步骤
[0802] 参考步骤4中Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[0803]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑AEEA‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Glu‑OtBu  
二十烷二酸单叔丁酯  
[0804] 步骤6.环合
[0805] 1.向反应柱中依次加入DMF 80mL和DCM 80mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[0806] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2制备混合溶剂300mL并加入反应柱中,再加入Pd(PPh3)4 0.74g(0.27eq),氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出;
[0807] 3.取样茚三酮检测,树脂呈黄色偏紫色;
[0808] 4.依次加入DMF 80mL和DCM 80mL交叉洗涤树脂8次;
[0809] 5.将DIC 1.67g(6.0eq)和HOBt 1.49g(5.0eq)溶解与80mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应22h,取样茚三酮检测,树脂无色;
[0810] 6.依次加入DMF 80mL和DCM 80mL交叉洗涤树脂8次;
[0811] 7.依次加入MeOH 80mL和DCM 80mL交叉洗涤树脂4次;
[0812] 8.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂19.3g;
[0813] 得中间体(肽树脂)结构式如下:
[0814] Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp14 17
(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Lys ‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys ‑Ala‑Gln(Trt)‑Aib‑Ala‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(14,17(Nε(HOOC‑(CH2)18‑COOtBu)‑Glu(ε‑OtBu)‑AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))
[0815] 步骤7.肽树脂裂解
[0816] 配制289mL裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基硅烷(TIS)、3‑(三苯甲硫基)丙酸(Mpa(Trt)‑OH,MRP)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:Mpa(Trt)‑OH:TIS:ArOH=82.5:2.5:5:5:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应4h。将裂解液滤出,浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品7.5g。
[0817] 步骤8.色谱纯化
[0818] 将上述2.1g环肽粗品用5%乙腈和2%氨水水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C8硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[0819] 工序 水相 有机相 梯度一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
二次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
三次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
[0820] 步骤9.浓缩冻干
[0821] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到目标多肽成品0.133g(纯度为94.2%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1211.9,检测值为1210.9。
[0822] 实施例22
[0823]
[0824] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例22所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1246.2,检测值为1245.1。
[0825] 实施例23
[0826]
[0827] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例23所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1246.2,检测值为1245.2。
[0828] 实施例24
[0829]
[0830] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例24所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1242.7,检测值为1241.6。
[0831] 实施例25
[0832]
[0833] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例25所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1235.4,检测值为1234.3。
[0834] 实施例26
[0835]
[0836] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例26所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1246.0,检测值为1250.0。
[0837] 实施例27
[0838]
[0839] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例27所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1235.7,检测值为1234.6。
[0840] 实施例28
[0841]
[0842] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例28所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1235.7,检测值为1238.6。
[0843] 实施例29
[0844]
[0845] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例29所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1242.5,检测值为1241.5。
[0846] 实施例30
[0847]
[0848] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例30所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1242.5,检测值为1241.6。
[0849] 实施例31
[0850]
[0851] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例31所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1246.0,检测值为1244.9。
[0852] 实施例32
[0853]
[0854] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例32所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1218.2,检测值为1217.4。
[0855] 实施例33
[0856]
[0857] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例33所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1246.0,检测值为1245.9。
[0858] 实施例34
[0859]
[0860] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例34所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1218.2,检测值为1218.1。
[0861] 实施例35
[0862]
[0863] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例35所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1250.0,检测值为1250.0。
[0864] 实施例36
[0865]
[0866] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例36所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值
[0867] [M+4H]/4为1222.2,检测值为1222.1。
[0868] 实施例37
[0869]
[0870] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例37所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值
[0871] [M+4H]/4为1226.4,检测值为1226.3。
[0872] 实施例38
[0873]
[0874] 与前述实施例21多肽采用类似合成过程,使用MBHA Resin为起始树脂,常规Fmoc保护氨基酸投料,缩合剂采用DIC/HOBt体系,DMF为主要反应溶剂,20%PIP‑DMF溶液为脱Fmoc溶剂,从肽主链C端向N端逐一缩合,主链合成完成后,接着脱除A‑26位Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH的ε位氨基上的‑Mtt后,依次缩合侧1至侧4位((2‑2‑oxoethyl)‑glycine,AEEA,γGlu,二十烷二酸单叔丁酯),然后再脱除A‑23位Lys的ε位氨基保护基与侧1位(2‑2‑oxoethyl)‑glycine的羧基保护基后,加入缩合剂成内酰胺环,得到目标肽树脂。
[0875] 具体步骤如下:
[0876] 步骤1:树脂活化脱保护
[0877] 1.取MBHA Resin(S=0.34mmol/g)15g(5.1mmol)加入固相反应柱,加入DCM 225mL静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入150mL DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈灰红色,抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0878] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[0879] 1.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 5.86g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt 2.07g(3.0eq),用80mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0880] 2.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0881] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0882] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0883] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0884]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑Pro‑OH  
Fmoc‑Pro‑OH  
Fmoc‑Pro‑OH  
Fmoc‑Ala‑OH  
Fmoc‑Gly‑OH  
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH  
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH  
Fmoc‑Pro‑OH  
Fmoc‑Gly‑OH  
Fmoc‑Gly‑OH HPLC检测合成
[0885] 得到AA‑11肽。
[0886] 步骤3:AA‑11肽脱保护
[0887] 1.向合成的AA‑11肽中,加入DMF(150mL)活化10min,抽干至无液体流出,加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈深黄色;抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7左右,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0888] 步骤4:Fmoc‑Lys(Boc)‑OH偶联
[0889] 1.称取Fmoc‑Lys(Boc)‑OH 7.17g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt2.07 g(3.0eq),用150mL,DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0890] 2.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0891] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0892] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0893] 参考步骤4中Fmoc‑Lys(Boc)‑OH偶联的方法及投料顺序依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0894]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑Leu‑OH AA‑13肽
Fmoc‑Leu‑OH  
Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH  
Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH  
Fmoc‑Ile‑OH  
Fmoc‑Phe‑OH  
Fmoc‑Ala‑OH  
Fmoc‑Aib‑OH  
Fmoc‑Gln(Trt)‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ala‑OH  
Fmoc‑Lys(Alloc)‑OH  
Fmoc‑Lys(Boc)‑OH  
Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH  
Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH  
Fmoc‑α‑Me‑Leu‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ile‑OH 采用HPLC监控
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH  
Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH  
Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH  
Fmoc‑Ser(tBu)‑OH  
Fmoc‑Thr(tBu)‑OH  
Fmoc‑Phe‑OH  
Fmoc‑Thr(tBu)‑OH  
Fmoc‑Gly‑OH  
Fmoc‑Gln(Trt)‑OH  
Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑OH 采用HPLC监控
[0895] 步骤5.支链偶连
[0896] 1.向反应柱中加入DCM 300mL洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液150mL,通氮气鼓泡反应5次,每次30min;
[0897] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈灰绿色;
[0898] 3.依次加入DCM 150mL和DMF 150mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[0899] 4.称取Fmoc‑Ida(Oall)‑OH 10.08g(5.0eq)、DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq),用150mLDMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0900] 5.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0901] 6.抽掉反应液,用DMF(180mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0902] 其余支链偶联步骤
[0903] 参考步骤5中Fmoc‑Ida(Oall)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[0904]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑AEEA‑OH  
Fmoc‑Glu‑OtBu  
二十烷二酸单叔丁酯 采用HPLC监控
[0905] 步骤6.环合
[0906] 1.向反应柱中依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[0907] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2制备混合溶剂300mL并加入反应柱中,再加入Pd(PPh3)4 1.59g(0.27eq),氮气鼓泡反应30min,排废,直至没有液体流出;
[0908] 3.取样茚三酮检测,树脂呈紫红色;
[0909] 4.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[0910] 5.将DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq)溶解与250mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应22小时,取样茚三酮检测,树脂极淡紫色;
[0911] 6.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[0912] 7.依次加入MeOH 200mL和DCM 200mL交叉洗涤树脂4次;
[0913] 8.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂32.5g;
[0914] 得中间体(肽树脂)结构式如下:
[0915] Nε(Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp14 17
(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Lys ‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys ‑Ala‑Gln(Trt)‑Aib‑Ala‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Leu‑Lys(Boc)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(14,17(Nε(HOOC‑(CH2)18‑COOtBu)‑Glu(ε‑OtBu)‑(AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))
[0916] 步骤7.肽树脂裂解
[0917] 配制500mL裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基硅烷(TIS)、3‑(三苯甲硫基)丙酸(Mpa(Trt)‑OH)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:Mpa(Trt)‑OH:TIS:ArOH=82.5:2.5:5:5:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应4h。
[0918] 将裂解液滤出浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品9.8g。
[0919] 步骤8.色谱纯化
[0920] 将上述9.8g环肽粗品中的1/6用5%乙腈和2%氨水水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C18硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[0921]工序 水相 有机相 梯度
一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):30%‑55%
二次纯化 50mmol/L磷酸氢二铵 乙腈 B%(0‑50min):31%‑65%
三次纯化 0.2mmol/L氢氧化钠 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
[0922] 步骤9.浓缩冻干
[0923] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到目标多肽成品144mg(纯度为96.69%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4]/4为1211.6,检测值1211.5。
[0924] 实施例39
[0925]
[0926] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例39所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1239.7,检测值为1239.7。
[0927] 实施例40
[0928]
[0929] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例40所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1254.2,检测值为1254.1。
[0930] 实施例41
[0931]
[0932] 参考实施例38多肽的合成,得到实施例41所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(OAll)‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,Fmoc‑Glu‑OtBu,二十烷二酸单叔丁酯。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1239.4,检测值为1239.3。
[0933] 实施例42
[0934]
[0935] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例42所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1211.6,检测值为1211.5。
[0936] 实施例43
[0937]
[0938] 使用MBHA Resin为起始树脂,常规Fmoc保护氨基酸投料,缩合剂采用DIC/HOBt体系,DMF为主要反应溶剂,20%PIP‑DMF溶液为脱Fmoc溶剂,从肽主链C端向N端逐一缩合,主链合成完成后,接着脱除A‑26位Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH的ε位氨基上的‑Mtt后,依次缩合侧1至侧4位((2‑2‑oxoethyl)‑glycine,AEEA,γGlu,19‑(bis(benzyloxy)phosphoryl)nonadecanoic acid),然后再脱除A‑23位Lys的ε位氨基保护基与侧1位(2‑2‑oxoethyl)‑glycine的羧基保护基后,加入缩合剂成内酰胺环,得到目标肽树脂。
[0939] 具体步骤如下:
[0940] 步骤1:树脂活化脱保护
[0941] 1.取MBHA Resin(S=0.34mmol/g)15g(5.1mmol)加入固相反应柱,加入DCM 225mL静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入150ml DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈灰红色,抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0942] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[0943] 1.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 5.86g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt 2.07g(3.0eq),用80mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0944] 2.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0945] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0946] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0947] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0948]
[0949]
[0950] 得到AA‑11肽。
[0951] 步骤3:AA‑11肽脱保护
[0952] 1.将合成的AA‑11肽,加入DMF(150mL)活化10min,抽干至无液体流出,加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈深黄色;抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7左右,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0953] 步骤4:Fmoc‑Glu(tBu)‑OH偶联
[0954] 1.称取Fmoc‑Glu(tBu)‑OH 6.51g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt2.07 g(3.0eq),用150mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0955] 2.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0956] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0957] 主链其余氨基酸偶联步骤
[0958] 参考步骤4中Fmoc‑Glu(tBu)‑OH偶联的方法及投料顺序依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[0959]
[0960]
[0961] 步骤5.支链偶连
[0962] 1.向反应柱中加入DCM 300mL洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液150mL,通氮气鼓泡反应5次,每次30min;
[0963] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈灰绿色;
[0964] 3.依次加入DCM 150mL和DMF 150mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[0965] 4.称取Fmoc‑Ida(Oall)‑OH 10.08g(5.0eq)、DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq),用150mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[0966] 5.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[0967] 6.抽掉反应液,用DMF(180mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[0968] 其余支链偶联步骤
[0969] 参考步骤5中Fmoc‑Ida(Oall)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[0970]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑AEEA‑OH  
Fmoc‑Glu‑OtBu  
19‑(bis(benzyloxy)phosphoryl)nonadecanoic acid 采用HPLC监控
[0971] 步骤6.环合
[0972] 1.向反应柱依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[0973] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2制备混合溶剂300mL并加入反应柱中,再加入Pd(PPh3)4 1.59g(0.27eq),氮气鼓泡反应30min,排废,直至没有液体流出;
[0974] 3.取样茚三酮检测,树脂呈黄色偏紫色;
[0975] 4.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[0976] 5.将DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq)溶解与250mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应23h,取样茚三酮检测,树脂无色;
[0977] 6.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[0978] 7.依次加入MeOH 200mL和DCM 200mL交叉洗涤树脂4次;
[0979] 8.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂33g;
[0980] 得中间体(肽树脂)结构式如下:
[0981] Nε(Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp14 17
(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Lys ‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys ‑Ala‑Gln(Trt)‑Aib‑Ala‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(14,17(Nε(HOOC‑(CH2)18‑PO(OBn)2)‑Glu(ε‑OtBu)‑(AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))[0982] 步骤7.肽树脂裂解
[0983] 配制500mL裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基硅烷(TIS)、3‑(三苯甲硫基)丙酸(Mpa(Trt)‑OH)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:Mpa(Trt)‑OH:TIS:ArOH=82.5:2.5:5:5:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应8h。将裂解液滤出,浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品8.8g。
[0984] 步骤8.色谱纯化
[0985] 将上述环肽粗品取2.0g出来用5%乙腈和2%氨水水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C18硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[0986]工序 水相 有机相 梯度
一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):30%‑55%
二次纯化 50mmol/L磷酸氢二铵 乙腈 B%(0‑50min):31%‑65%
三次纯化 0.2mmol/L氢氧化钠 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
[0987] 步骤9.浓缩冻干
[0988] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到目标多肽成品28mg(纯度为97.67%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为1220.9,检测值[M+H]为1219.8。
[0989] 实施例44
[0990]
[0991] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例44所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1259.2,检测值为1258.0。
[0992] 实施例45
[0993]
[0994] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例45所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M+4H]/4为1248.2,检测值为1248.1。
[0995] 实施例46
[0996]
[0997] 参考实施例1多肽的合成,得到实施例46所示多肽,其中支链偶联中使用的保护基氨基酸依次为Fmoc‑Ida(Oall)‑OH、Fmoc‑AEEA‑OH、Fmoc‑AEEA‑OH、Fmoc‑Glu‑OtBu、19‑(bis(benzyloxy)phosphoryl)nonadecanoic acid。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为5067.61,检测值为5066.61。
[0998] 实施例47
[0999]
[1000] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例47所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4900.56,检测值为4900.62。
[1001] 实施例48
[1002]
[1003] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例48所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4885.56,检测值为4885.50。
[1004] 实施例49
[1005]
[1006] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例49所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4857.51,检测值为4857.55。
[1007] 实施例50
[1008]
[1009] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例50所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为5002.59,检测值为5002.62。
[1010] 实施例51
[1011]
[1012] 参考实施例21多肽的合成,得到实施例51所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4856.57,检测值为4856.48。
[1013] 实施例52
[1014]
[1015] 使用MBHA Resin为起始树脂,常规Fmoc保护氨基酸投料,缩合剂采用DIC/HOBt体系,DMF为主要反应溶剂,20%PIP‑DMF溶液为脱Fmoc溶剂,从肽主链C端向N端逐一缩合,主链合成完成后,接着脱除A‑26位Fmoc‑Lys(Mtt)‑OH的ε位氨基上的‑Mtt后,依次缩合侧1至侧4位((2‑2‑oxoethyl)‑glycine,AEEA,N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH,γGlu,二十烷二酸单叔丁基),然后再脱除A‑23位Lys的ε位氨基保护基与侧1位(2‑2‑oxoethyl)‑glycine的羧基保护基后,加入缩合剂成内酰胺环,得到目标肽树脂。
[1016] 具体步骤如下:
[1017] 步骤1:树脂活化脱保护
[1018] 1.取MBHA Resin(S=0.34mmol/g)15g(5.1mmol)加入固相反应柱,加入DCM 225mL静置20min使树脂充分溶胀,抽干DCM,加入150mL DMF通氮气鼓泡洗涤树脂,重复以上步骤一次,抽干溶剂。加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈灰红色,抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[1019] 步骤2:Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联
[1020] 1.称取Fmoc‑Ser(tBu)‑OH 5.86g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt 2.07g(3.0eq),用80mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[1021] 2.在25℃的环境中反应2.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[1022] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[1023] 主链其余氨基酸偶联步骤
[1024] 参考步骤2中Fmoc‑Ser(tBu)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[1025]
[1026]
[1027] 得到AA‑11肽。
[1028] 步骤3:AA‑11肽脱保护
[1029] 1.向合成的AA‑11肽,加入DMF(150mL)活化10min,抽干至无液体流出,加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中,氮气鼓泡反应10min,排废,直至没有液体流出,再次加入20%的哌啶/DMF(150mL)至反应柱中继续氮气鼓泡反应10min,取样茚三酮检测,树脂呈深黄色;抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤8次,调节pH=7左右,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[1030] 步骤4:Fmoc‑Glu(tBu)‑OH偶联
[1031] 1.称取Fmoc‑Glu(tBu)‑OH 6.51g(3.0eq)、DIC 2.57g(4.0eq)和HOBt2.07 g(3.0eq),用150mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[1032] 2.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[1033] 3.抽掉反应液,用DMF(150mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[1034] 主链其余氨基酸偶联步骤
[1035] 参考步骤4中Fmoc‑Glu(tBu)‑OH偶联的方法及投料顺序依次接入氨基酸序列,顺序及所用到含保护基团的氨基酸依次如下:
[1036]
[1037]
[1038] 步骤5.支链偶连
[1039] 1.向反应柱中加入DCM 300mL洗涤树脂4次,抽干溶剂后加入20%六氟异丙醇(HFIP)‑DCM溶液150mL,通氮气鼓泡反应5次,每次30min;
[1040] 2.排废,直至没有液体流出,取样茚三酮检测,树脂呈灰绿色;
[1041] 3.依次加入DCM 150mL和DMF 150mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出。
[1042] 4.称取Fmoc‑Ida(Oall)‑OH 10.08g(5.0eq)、DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq),用150mL DMF溶解后加入反应柱,鼓氮气,调节好氮气使树脂均匀鼓起;
[1043] 5.在25℃的环境中反应3.0h,取样茚三酮检测,树脂无色透明;
[1044] 6.抽掉反应液,用DMF(180mL)洗涤5次,每次1min,排废,直至没有液体流出。
[1045] 其余支链偶联步骤
[1046] 参考步骤5中Fmoc‑Ida(Oall)‑OH偶联的方法及投料当量依次接入下表化合物:
[1047]所用含保护基团的氨基酸 备注
Fmoc‑AEEA‑OH
N‑Boc‑N’‑Fmoc‑Lys‑OH
Fmoc‑Glu‑OtBu
二十烷二酸单叔丁酯 采用HPLC监控
[1048] 步骤6.环合
[1049] 1.向反应柱中依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂4次,排废,直至没有液体流出;
[1050] 2.以体积比DCM:CH3CN:NMP:DEA=3:3:2:2制备混合溶剂300mL并加入反应柱中,再加入Pd(PPh3)4 1.59g(0.27eq),氮气鼓泡反应30min,排废,直至没有液体流出;
[1051] 3.取样茚三酮检测,树脂呈黄色偏紫色;
[1052] 4.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[1053] 5.将DIC 3.86g(6.0eq)和HOBt 3.45g(5.0eq)溶解与250mL DMF中,加入反应柱,通氮气反应22h,取样茚三酮检测,树脂无色;
[1054] 6.依次加入DMF 250mL和DCM 250mL交叉洗涤树脂8次;
[1055] 7.依次加入MeOH 200mL和DCM 200mL交叉洗涤树脂4次;
[1056] 8.取出树脂真空干燥至重量不再下降,称量,得到肽树脂25.5g;
[1057] 得中间体(肽树脂)结构式如下:
[1058] Nε(Boc‑Tyr(tBu)‑Aib‑Gln(Trt)‑Gly‑Thr(tBu)‑Phe‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Asp14 17
(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ile‑a‑MeLeu‑Lys ‑Asp(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys ‑Ala‑Gln(Trt)‑Aib‑Ala‑Phe‑Ile‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑Leu‑Glu(OtBu)‑Gly‑Gly‑Pro‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Gly‑Ala‑Pro‑Pro‑Pro‑Ser(tBu)‑Rink Linker‑MBHA Resin(14,17(Nε(HOOC‑(CH2)18‑COOtBu)–Boc(Lys)‑Glu(ε‑OtBu)‑(AEEA)‑(2‑2‑oxoethyl)glycine))[1059] 步骤7.肽树脂裂解
[1060] 配制500mL裂解试剂,试剂配方为三氟乙酸(TFA)、纯化水(H2O)、三异丙基硅烷(TIS)、3‑(三苯甲硫基)丙酸(Mpa(Trt)‑OH)、苯酚(ArOH),按体积比TFA:H2O:Mpa(Trt)‑OH:TIS:ArOH=82.5:2.5:5:5:5,配好后预冷至10±3℃。搅拌下,将树脂缓慢加入至裂解试剂中,继续搅拌至反应体系温度稳定;然后控温在18±3℃下,继续搅拌反应4h。将裂解液滤出,浓缩至稠状,采用12‑15倍浓缩液体积量的甲基叔丁醚将其沉淀,滤出沉淀物洗涤后于室温减压干燥,得环肽粗品8.6g。
[1061] 步骤8.色谱纯化
[1062] 将上述8.6环肽粗品用5%乙腈和2%氨水水溶液溶解,再经高效液相色谱,采用C18硅胶基质填料进行纯化,收集纯度>90%流份合并,纯化色谱体系列表如下:
[1063] 工序 水相 有机相 梯度一次纯化 0.2%TFA 乙腈 B%(0‑50min):30%‑55%
二次纯化 50mmol/L磷酸氢二铵 乙腈 B%(0‑50min):31%‑65%
三次纯化 0.2mmol/L氢氧化钠 乙腈 B%(0‑50min):41%‑55%
[1064] 步骤9.浓缩冻干
[1065] 上步所得流份浓缩除去乙腈,0.22μm微孔滤膜过滤,装入挂瓶式冻干机,冻干得到目标多肽成品1.1g(纯度为99.12%);多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4972.62,检测值为4971.42。
[1066] 实施例53
[1067]
[1068] 参考实施例52多肽的合成,得到实施例53所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4985.61,检测值为4985.42。
[1069] 实施例54
[1070]
[1071] 参考实施例52多肽的合成,得到实施例54所示多肽。多肽分子量经ESI‑MS进行确认,计算值[M]为4970.65,检测值为4969.65。
[1072] 生物测试数据
[1073] 试验1:体外GLP‑1R/GIPR/GCGR激动活性测试
[1074] 方法1:
[1075] A:主要材料:
[1076] 1)细胞株
[1077] 该细胞株由康龙化成构建。详情见下表。
[1078]靶点 宿主细胞 克隆
GLP‑1R HEK293 N/A
GCGR HEK293 N/A
GIPR CHO N/A
[1079] 2)试剂与耗材
[1080]名称 批次. 货号 厂家
cAMP检测盒 3053757 TRF0263 Perkin Elmer
1M HEPES 2458415 15630‑080 Gibco
Hanks平衡盐溶液(HBSS) 2193007 14025‑076 Gibco
血清白蛋白(BSA) 2888494 CR84‑100 Perkin Elmer
3‑异丁基‑1‑甲基黄嘌呤(IBMX) 102433079 I5879 Sigma
TrypLE 2492769 12604‑021 Invitrogen
96孔板 1363672 249944 Thermo
CulturPlate‑384 8213‑22291 6007680 Perkin Elmer
[1081] 3)仪器
[1082]
[1083] B.方法
[1084] Ⅰ)实验材料
[1085] 实验缓冲液
[1086]
[1087] 检测试剂制备
[1088] 试剂 储存浓度 体积 终浓度细胞裂解液 1x 9.73mL ≈1x
Eu‑cAMP溶液 50x 200μL 1x
Ulight‑anti‑cAMP溶液 150x 66.7μL 1x
[1089] Ⅱ)实验方法
[1090] a)制备化合物板:
[1091] 待测化合物做10个点5倍稀释,起始浓度为200nM。
[1092] b)细胞悬液的制备
[1093] 1)细胞株分别培养于37℃,5% CO2环境下的完全培养基中。
[1094] 2)TrypLE消化处理后将细胞分别重悬于实验缓冲液中,接种到CulturPlate‑384细胞培养板中,接种密度为每孔2000个细胞,接种体积为每孔15μL。
[1095] c)激动活性测定
[1096] 1)冻融Eu‑cAMP tracer,用detection buffer稀释50倍;冻融Ulight‑anti‑cAMP,用detection buffer稀释150倍。
[1097] 2)加入5μL待测化合物至CulturPlate‑384细胞培养板各实验孔中,200g离心30s,37℃静置30min。
[1098] 3)加入10μL Eu‑cAMP tracer至各实验孔,然后加入10μL Uligh‑anti‑cAMP至各实验孔中。
[1099] 4)将反应板于室温200g离心30s,25℃静置1h后。
[1100] 5)利用Envision 2105收集数据,激发光:340nm,发射光:665nm和615nm。
[1101] C实验结果
[1102]
[1103]
[1104] 结论:本发明多肽化合物对GLP‑1R/GIPR/GCGR具有很强的激动活性,整体上优于或不差于LY3437943的活性,特别是“订书钉”结构及位置的引入,对多肽的活性存在影响。进一步,在重复实验中及测试其他化合物所得实验结果趋势一致。在较优的情况,与对照品LY3437943的活性相比,本发明化合物对GLP‑1R的激动活性是LY3437943的0.05~5倍,对GIPR的激动活性是LY3437943的0.1~5倍;对GCGR的激动活性是LY3437943的0.2~5倍。
[1105] 综上,本发明化合物具有较优的体外GLP‑1R/GIPR/GCGR激动活性,且整体优于或不差于对照品LY3437943。
[1106] 试验2:化合物在食蟹猴中的药代动力学性质
[1107] A.实验目的
[1108] 测试化合物在食蟹猴体内药代动力学
[1109] B.实验操作
[1110] 使用非幼年的食蟹猴,雄性,3只/化合物;给药后1h、2h、4h、8h、16h、24h、48h、72h、120h、168h和240h时间点收集全血,制备得到血浆,以LC‑MS/MS方法分析药物浓度,并用Phoenix WinNonlin软件计算药代参数。
[1111] C.实验结果
[1112] 实验结果如下表所示。
[1113] 表食蟹猴药代动力学测试结果
[1114]
[1115] 结论:在食蟹猴的药代动力学性质中,本发明化合物半衰期T1/2为大于70h,相对LY‑3437943具有明显优异的半衰期T1/2和暴露量,且整体优势不差于LY‑3437943。
[1116] 进一步,在重复实验中,测试其他化合物所得实验结果趋势一致。在较优的情况,与对照品LY3437943相比,本发明化合物半衰期T1/2和暴露量值AUCINF是LY3437943的1.1~2.5倍,整体性质优于LY3437943。
[1117] 此外,进一步研究中,将本申请的化合物在C57BL/6小鼠体内和SD大鼠体内进行药代动力学测试,得到的实验结果与在食蟹猴药代动力学性质趋势一致,均体现出具有较优的小鼠和大鼠药代动力学性质,相对于LY‑3437943化合物,具有更优或相当的半衰期T1/2和暴露量。
[1118] 试验3:人肾S9代谢稳定性测试
[1119] A.实验目的
[1120] 评估化合物在人体肾脏中的代谢稳定性,确定药物是否会被肾脏代谢酶降解,从而影响其药效和药代动力学。
[1121] B.实验操作
[1122] 1.配置好相关溶液。
[1123] 2.a)有辅助因子(NADPH&UDPGA):孵育过程中加入NADPH和UDPGA。KS9 Fractions、NADPH和UDPGA的最终浓度分别为1mg/mL、1mM和2mM。b)无辅助因子(NADPH&UDPGA):向培养液中加入H2O。KS9 Fractions的最终浓度为1mg/mL。混合物在37℃预热10min。
[1124] 3.加入20μM对照化合物或100μM试验化合物溶液开始反应。本研究使用7‑羟基香豆素(7‑Hydroxyc‑ourmarin)和雷洛昔芬(Raloxifene)作为阳性对照。阳性对照化合物的最终浓度为0.2μM,测试化合物的最终浓度为1μM。培养液在37℃水浴中培养。
[1125] 4.在0.5、5、15、30和60min时,从反应溶液中取体积等分样品,加入乙腈停止反应。样品离心30min。取上清液与超纯水混合,然后用于LC‑MS/MS分析。
[1126] 5.数据分析:所有计算均使用Microsoft Excel进行。根据提取的离子色谱图确定峰面积并计算斜率值。
[1127] C.实验结果
[1128] 表肾S9代谢稳定性测试结果
[1129]
[1130] 结论:本发明化合物具有优异的体外药代动力学性质。
[1131] 试验4:化合物在DIO肥胖小鼠模型中的药效学研究
[1132] 实验目的:评价受试物(化合物)多次给药对体重、糖脂代谢的影响。
[1133] 本试验采用高脂饲料(Research Diets:D12492)从4‑5周龄开始诱导8周的小鼠作为受试动物,根据动物体重和空腹血糖水平进行分组,模型动物平均体重为47.2±0.3g,对照动物平均体重为27.9±0.3g,模型动物平均空腹血糖为8.8±0.2mmol/L,对照动物平均空腹血糖为6.0±0.2mmol/L。每组6只动物,分组后立即给药,均采用皮下注射的给药方式,每3天给药1次,连续给药22天,正常对照组和模型组均给予溶媒(20mM柠檬酸缓冲液),每周检测2次体重和摄食量,在给药D10、D20检测空腹血糖,在D20进行OGTT试验,在D23天采集血液检测肝功能指标(ALT、AST、ALP)、血清脂质代谢指标(TC、TG、HDL、LDL)、取肝脏组织计算脏器指数,检测肝脏脂质代谢指标(肝脏TC、TG),并对肝脏组织进行病理学检查(HE、油红),评价受试物在高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型中对体重、糖脂代谢的影响。
[1134] 各组动物实验数据采用均数±标准误(X±SEM)描述。P<0.05为差异具有统计学意义。所有的统计分析,均使用Graphpad 8.0软件完成。
[1135] 表化合物对DIO小鼠体重变化的影响
[1136]
[1137]
[1138] 结论:从表结果来看,本发明化合物有明显的减重效果,且体现出与LY3437943相当或更优的减重效果。此外,测试本发明其他化合物所得实验结果表明,在减重效果上,体现出与LY3437943相当或更优的效果。
[1139] 表化合物对DIO小鼠空腹血糖变化的影响
[1140]
[1141] 结论:从表可以看出,本发明的化合物具有明显的降糖作用,且体现出与LY3437943相当或更优的降糖效果。此外,测试本发明其他化合物所得实验结果表明,在降糖效果上,体现出与LY3437943相当或更优的效果。
[1142] 表化合物对DIO小鼠肝体比变化的影响
[1143]
[1144] 结论:从表结果来看,本发明化合物有明显的改善肝体比的效果,且体现出与LY3437943相当甚至更优的降糖效果。此外,测试本发明其他化合物所得实验结果表明,在改善肝体比效果上,体现出与LY3437943相当或更优的效果。
[1145] 表化合物对DIO小鼠肝脏指标变化的影响
[1146]
[1147]
[1148] 结论:从表结果来看,本发明化合物有明显降低肝脏甘油三脂的效果,此外,测试本发明其他化合物所得实验结果表明,在降低肝脏甘油三脂效果上,体现出与LY3437943相当或更优的效果。
[1149] 进一步,参考类似实验方案,测试实施例38和实施例52的化合物,其中对DIO小鼠体重变化的影响情况如下:
[1150] 表化合物对DIO小鼠体重变化的影响
[1151]化合物 剂量 D22体重变化率(%)
Control ‑ ‑1.90±2.67
Model ‑ ‑0.85±1.75
实施例38 10nmol/kg ‑29.87±1.30
实施例52 10nmol/kg ‑30.26±2.80
LY3437943 10nmol/kg ‑26.32±1.91
[1152] 结论:从表结果来看,本发明实施例38和实施例52的化合物也有明显的减重效果,且体现出与LY3437943相当或更优的减重效果。
[1153] 此外,进一步对本申请化合物在IPGTT试验中进行药效学研究,结果表明与溶媒组相比,本发明化合物均表现出优异的降糖能力,其体现出与LY3437943相当或更优的降糖效果。
[1154] 综上所述,本申请新设计和合成了系列带有修饰结构的多肽化合物。该多肽对GLP‑1R/GIPR/GCGR具有很强的体外激动活性,优异的体外和体内药代动力学性质,较佳的稳定性性质,且具有明显减重、降糖和降血脂等效果。本发明的多肽化合物具有作为长效GLP‑1/GIP/GCG多重激动剂的成药前景。
QQ群二维码
意见反馈