丹参酮ⅡA衍生物及其应用 |
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| 申请号 | CN202210271652.3 | 申请日 | 2022-03-18 | 公开(公告)号 | CN116804039A | 公开(公告)日 | 2023-09-26 |
| 申请人 | 浙江泰莱医药科技有限公司; 浙江大学; | 发明人 | 崔孙良; 王真真; 樊成成; 万康林; 王瑞白; 周长新; 平渊; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种丹参 酮 ⅡA衍 生物 及其应用，属于制药技术领域。本发明提供一种式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮 氧 化物、 水 合物、 溶剂 化物、药学上可接受的盐或前药。以曼尼希反应作为关键合成步骤，实现丹参酮IIA的骨架跃迁，在丹参酮IIA的D环(呋喃环)上并入哌啶环及 侧链 ，和丹参酮IIA相比，本发明化合物对于全敏感型结核分枝杆菌和广泛耐药型结核分枝杆菌均能实现显著的抗菌作用。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合 |
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| 说明书全文 | 丹参酮ⅡA衍生物及其应用技术领域背景技术[0002] 丹参酮(Tanshinone)为丹参根部的提取物，是丹参的主要脂溶性有效成分，含有邻醌或对醌结构。丹参酮根据其不同的化学结构主要分为丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、 隐丹参酮、15,16‑二氢丹参酮等。其中，丹参酮IIA(PubChem CID:164676)是含量最高的单 体化合物，具有抗氧化、抗菌、消炎和免疫调节活性。丹参酮IIA具有广泛的药理作用，在临 床上用于治疗各种心脑血管疾病，还有很多报道丹参酮IIA具有抗肿瘤活性和抗结核杆菌 活性。但是丹参酮IIA脂溶性过高、几乎不溶于水，导致其在体内的代谢稳定性差、生物利用 度极低。因此，将丹参酮IIA进行结构改造和修饰，增强化合物的药效强度、提高其水溶性， 以便制成各种药物剂型，改善生物利用度，是充分发挥其治疗作用的最佳方法之一。已有丹 参酮IIA磺酸钠，通过在丹参酮IIA上引入水溶性磺酸基，解决了化合物的水溶性问题。但由 于磺酸基的强酸性，导致注射剂的pH值低，产品刺激性大，给患者带来痛苦；并且丹参酮IIA 磺酸钠的稳定性较差，药品放置过程中容易脱去磺酸基形成丹参酮IIA，在注射剂中会存在 析出的现象。 [0003] [0004] 除丹参酮IIA磺酸钠之外，各类结构修饰的丹参酮IIA衍生物及其生物活性评价被报道。由于丹参酮IIA的呋喃环2‑位是富电子位点，所以大多数工作都是通过酰化反应和 Mannich反应在呋喃环2‑位引入取代基。Huang通过Mannich反应在呋喃环2‑位引入四氢噻 吩[2,3‑C]吡啶取代基，可以增加化合物的水溶性并能抑制ADP诱导的血小板聚集和血栓生 成(专利CN110066310A，2019)，Song通过在该位置引入含五元或六元饱和含氮杂环并制备 成相应的盐酸盐，解决水溶性问题，并且部分化合物能够抑制HEK293细胞钙离子通道，半抑 制率IC50小于5微摩尔；此外，该报道中，部分化合物能够内皮细胞对抗氧化型低密度脂蛋白 ox‑LDL诱导的内皮损伤(专利：CN110016069A，2019)；Tan报道了在该位置氧甲基化的衍生 物，该类型衍生物能够显著抑制氯化钙诱导的心室颤动(专利：CN109369771A，2019)；Sun报 道了在该位置进行磷酸酰化反应，该类磷酸化衍生物能够在保护脑部缺血再灌注大鼠的脑 组织，减少脑梗死面积，效果与依达拉奉相当(专利：CN107540725A，2018)；Qin报道了在该 位置进行磺酰化反应，磺酰化的衍生物能够有效保护心肌细胞，防止心肌梗死(Yin‑Lin QinLei Chen，Wei He，Mei Su，Qiu Jin，Zheng Fang，Ping‑Kai Ouyang&Kai Guo(2018)， Continuous synthesis and anti‑myocardial injury of tanshinone IIA derivatives，Journal of Asian Natural Products Research，20:2，139‑147)。然而，这 些类似物虽然在水溶性和或生物活性上相比丹参酮IIA有了一定程度的改善；但是仍需要 新结构的、药效和成药性显著提升的丹参酮结构药物，这对于新一代的丹参酮药物研发依 然具有重要意义。 发明内容[0005] 基于上述分析，丹参酮ⅡA天然产物存在脂溶性过高、生物利用度低、成药性差等问题，有鉴于此，本发明通过全新的化学合成方法，以曼尼希反应作为关键合成步骤，实现 丹参酮IIA的骨架跃迁，在丹参酮IIA的D环(呋喃环)上并入哌啶环及侧链，从而极大提升丹 参酮IIA的化学空间，改善理化性质和类药性，并能调节侧链提高丹参酮IIA衍生物的的药 代动力学特性。通过活性测试以及成药性评价，该类化合物与丹参酮ⅡA相比，在抗结核杆 菌的治疗中，药理活性实现了显著提高。 [0006] 为实现上述目的，本发明的技术方案如下： [0007] 一方面，本发明提供一种式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药； [0008] [0009] 其中，R选自H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、取代或未取代的羰基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的环烯基、取代或未取代的芳 基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的杂芳基或卤素。 [0010] 进一步地，所述取代的取代基选自卤素、硝基、氰基、氨基、羟基、羟甲基、羟乙基、巯基、羧基、酯基、芳基、杂环基、烷基单取代胺基、烷基双取代胺基、烷氧基、烷基羰氧基、环烷基羰氧基、杂环基羰氧基、烷氧基羰基、环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、烷基羰胺基、环烷 基羰胺基、杂环基羰胺基、胺基羰基、烷氧甲酰胺基、烷巯基、羟基烷氧基、糖残基、磺酸基、 磷酸基、多羟基烷氧基羰基、羧基烷氧基、羧基烷基甲酰氧基中的一个或多个中的一个或多 个。 [0011] 更进一步地，R选自H、取代或未取代的C1‑C10烷基、取代或未取代的C2‑C10烯基、取代或未取代的C2‑C10炔基、取代或未取代的C1‑C10羰基、取代或未取代的C3‑C10环烷基、 取代或未取代的C3‑C10环烯基、取代或未取代的C6‑C12芳基、取代或未取代的C5‑C12杂环 基、取代或未取代的C5‑C12杂芳基或卤素； [0012] 所述取代的取代基选自卤素、硝基、氰基、氨基、羟基、羟甲基、羟乙基、巯基、羧基、酯基、芳基、杂环基、C1‑C10烷基单取代胺基、C1‑C10烷基双取代胺基、C1‑C10烷氧基、C1‑C10烷基羰氧基、C1‑C10环烷基羰氧基、杂环基羰氧基、C1‑C10烷氧基羰基、C1‑C10环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、C1‑C10烷基羰胺基、C1‑C10环烷基羰胺基、杂环基羰胺基、胺基羰基、 C1‑C10烷氧甲酰胺基、C1‑C10烷巯基、羟基烷氧基、糖残基、磺酸基、磷酸基、多羟基C1‑C10烷氧基羰基、羧基C1‑C10烷氧基、羧基C1‑C10烷基甲酰氧基中的一个或多个中的一个或多 个。 [0013] 再进一步地，R选自H、取代或未取代的C1‑C8烷基、取代或未取代的C2‑C8烯基、取代或未取代的C2‑C8炔基、取代或未取代的C1‑C8羰基、取代或未取代的C3‑C8环烷基、取代 或未取代的C3‑C8环烯基、取代或未取代的C6‑C10芳基、取代或未取代的C5‑C10杂环基、取 代或未取代的C5‑C10杂芳基或卤素； [0014] 所述取代的取代基选自卤素、硝基、氰基、氨基、羟基、羟甲基、羟乙基、巯基、羧基、酯基、苯基、杂环基、C1‑C6烷基单取代胺基、C1‑C6烷基双取代胺基、C1‑C6烷氧基、C1‑C6烷基羰氧基、C1‑C6环烷基羰氧基、杂环基羰氧基、C1‑C6烷氧基羰基、C1‑C6环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、C1‑C6烷基羰胺基、C1‑C6环烷基羰胺基、杂环基羰胺基、胺基羰基、C1‑C6烷氧 甲酰胺基、C1‑C6烷巯基、羟基烷氧基、糖残基、磺酸基、磷酸基、多羟基C1‑C6烷氧基羰基、羧基C1‑C6烷氧基、羧基C1‑C6烷基甲酰氧基中的一个或多个。 [0015] 再进一步地，所述式(I)所示的化合物选自： [0016] [0017] [0018] 除非有说明，本文所用的术语“烷基”包括具有特定数目碳原子的支链和直链饱和的脂肪烃基团，包括所有异构体，“烯基”为含有碳‑碳双键(烯键)的支链和直链脂肪烃基 团，“炔基”为含有碳‑碳三键(炔键)的支链和直链脂肪烃基团。烷基的常用缩写例如甲基可 以用“Me”或CH3表示，乙基可以用“Et”或CH2CH3表示，丙基可以用“Pr”或CH2CH2CH3表示，丁基可以用“Bu”或CH2CH2CH2CH3表示等。 [0019] 术语“羰基”是由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O)。 [0020] 术语“环烷基”、“环烯基”是指具有饱和或不饱和环的碳原子单环系统的烃基。 [0022] 术语“杂环基”是指碳原子及非碳原子构成的环状结构，环中的非碳原子举例如氮、氧和硫等。杂环基可以是具有4‑8个环原子的单环杂环基，或者具有7‑11个环原子的双 环杂环基。所述双环杂环基中只要一个环是杂环即可，另一个可以是芳香环或非芳香环的， 含杂原子的或不含杂原子的。此外，所述双环杂环基既可以是并环结构，也可以是螺环结 构，也可以是两个杂环直接相连。杂环基的例子包括但不局限于氮杂环丁基、吡咯烷基、吡 咯啉基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、哌嗪基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢噻吩基等。 [0023] 术语“杂芳基”是指在环中含有1‑4个杂原子作为环成员的芳香环基团。杂原子是指氮、氧或硫。杂芳基可以是具有5‑7个环原子的单环杂芳基，或者具有7‑11个环原子的双 环杂芳基。所述双环杂芳基中只要一个环是杂芳环即可，另一个可以是芳香环或非芳香环 的，含杂原子的或不含杂原子的。此外，所述双环杂芳基既可以是并环结构，也可以是螺环 结构，也可以是两个杂环直接相连。杂芳基的例子包括但不限于吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁 唑基、吡啶基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吲哚基等。 [0024] 术语“卤素”(或“卤代”)是指氟、氯、溴和碘(或者称为氟代(F)、氯代(Cl)、溴代(Br)和碘代(I))。 [0025] 在本发明中，“C1‑C8烷基”是指具有特定数目碳原子(1‑8个)的直链或支链烷基，包括所有异构体，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊 基等。“C2‑C8烯基”是指是指具有特定数目碳原子(2‑8个)的直链或支链烷基，包括所有异 构体，包括但不限于乙烯基、烯丙基等，“C3‑C8环烷基或环烯基”是指具有饱和或不饱和环 的3‑8个碳原子单环系统的烃基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环 丙烯基、环己烯基等。同样，术语“C1‑C10烷基”、“C2‑C10烯基”、“C1‑C8羰”、“C3‑C8环烯基”、“C6‑C10芳基”、“C5‑C10杂环基”、“C5‑C10杂芳基”等具有类似的含义。 [0026] 除非明确说明，本文列出的所有范围是包含性的。例如，“1‑4”包括1、2、3、4。 [0027] 术语“药学上可接受的盐”是指由药学可接受的无毒碱或酸制备的盐。当本发明的化合物是酸性时，其相应的盐可以容易地由无机碱或有机碱制备。衍生自这种无机碱的盐 包括铝、铵、钙、铜(铜和亚铜)、铁、亚铁、锂、镁、锰(锰和亚锰)、钾、钠、锌等盐。优选的为铵、钙、镁、钾和钠等盐。由有机碱制备的盐包括来源于天然和合成来源的伯胺、仲胺和叔胺。可 以形成盐的药学可接受的有机无毒碱包括精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′‑二苄基亚乙 基二胺、二乙基胺、2‑二乙氨基乙醇、2‑二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N‑乙基吗啉、N‑乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、二环己基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物是碱性时，其相应的盐可以容易地由无机酸或有机酸制 备。这种酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。本发明中，优选为与盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、马来酸、富马酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、甲磺酸、对甲苯磺酸，己二酸，棕榈酸，单宁酸、锂、钠、钾、钙、镁、赖氨酸成的盐。 [0028] 术语“溶剂化物”是指由溶质(即式I化合物)或其药学可接受的盐和不妨碍溶质生物活性的溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的实例包括但不限于水、乙醇和乙酸。当 溶剂是水时，该溶剂化物称为水合物。水合物包括但不限于半、一、一倍半、二和三水合物。 [0029] 术语“前药”是本发明化合物的功能性衍生物，其在体内容易转化为需要的化合物。在本发明中，优选为将醌还原为二酚之后的各种衍生物、其他取代基的前药形式衍生 物。 [0030] 再一方面，本发明提供一种药物组合物，包含有效量的式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前 药，以及一种或多种可药用载体、稀释剂、赋形剂。 [0031] 在药物组合物中，术语“组合物”包括包含活性成分和组成载体的惰性成分(药学可接受的赋形剂)的产品，以及任何由两种或多种成分的组合、络合或者聚集、或一种或多 种成分的分解、或由一种或多种成分的其它类型反应或相互作用直接或间接地得到的产 品。因此，本发明的药物组合物包括任何通过混合式I化合物、其它活性成分和药学可接受 的赋形剂制备的组合物。 [0032] 活性成分可以以固体剂型或液体剂型口服给药，所述固体剂型例如胶囊、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒和粉剂，所述液体剂型例如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散体和混悬液。 [0033] 当本发明的化合物逐步给药或与其它治疗剂结合给药时，可以使用和前述相同的剂型。当药物以物理组合给药时，剂型和给药途径应根据组合药物的相容性选择。本发明的 化合物可以作为唯一活性成分或与第二活性成分组合给药。 [0035] 术语“可药用载体”指的是一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组 分能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以 接受的载体部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)，纤 维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)明胶，滑石，固体润 滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油(如豆油，芝麻油，花生油，橄榄油等)，多元醇 (如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)，乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)，着色 剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。 [0036] 再一方面，本发明提供式(I)所示的化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，或者上述药物组合物在制备 抗结核杆菌药物中的应用。 [0037] 优选的，所述化合物选自S‑1、S‑2、S‑3、S‑10、S‑11、S‑12、S‑13、S‑15、S‑16、S‑17、S‑18、S‑19、S‑20、S‑21、S‑22、S‑23、S‑24、S‑25、S‑28、S‑29、S‑31、S‑32、S‑33、S‑34、S‑36、S‑37、S‑38、S‑39、S‑40。 [0038] 进一步优选为S‑1、S‑2、S‑3、S‑13、S‑16、S‑17、S‑21、S‑22、S‑23、S‑24、S‑25、S‑29、S‑33、S‑37、S‑38、S‑39、S‑40。 [0039] 再进一步优选为S‑1、S‑2、S‑13、S‑21、S‑22、S‑24、S‑25、S‑29、S‑33、S‑37、S‑38、S‑39、S‑40。 [0040] 再进一步优选为S‑21、S‑22、S‑25、S‑29、S‑40。 [0041] 再进一步优选为S‑21、S‑22。 [0042] 最优选为S‑21。 [0043] 本发明的有益效果为： [0044] 提出一种新的丹参酮IIA衍生物，具有较高的药理活性，药物敏感性检测结果显示，和丹参酮IIA相比，本发明化合物对于全敏感型结核分枝杆菌和广泛耐药型结核分枝杆 菌均能实现显著的抗菌作用。 具体实施方式[0045] 以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明，本领域技 术人员可以根据所公开的内容对本申请的发明作出多种改变和修饰，而其也应当属于本申 请要求保护的范围之中。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规 商业途径获得。 [0046] 下述制备例中，化合物氢核磁共振谱(1H NMR)由Bruker‑AV‑500核磁仪测定；质谱(ESI‑MS)由Agilent G1946D质谱仪测定。所有反应溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用 的无水溶剂均是按照标准方法干燥处理获得。所述室温为25℃。除说明外，所有反应均是在 氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水和无水硫酸钠干燥过程。产品的纯 化除说明外均使用硅胶(200‑300目)的柱色谱纯化。丹参酮ⅡA购自北京索莱宝科技有限公 司，货号为IT0530。 [0047] 通式(I)化合物合成路线(A系列化合物的制备)： [0048] [0049] 实施例1 [0050] 10,11‑双苄基保护丹参酮ⅡA(2)的制备 [0051] 称取丹参酮ⅡA(2.94g，10mmol)置于双口瓶中，加入25mL DMF溶解，加入0.294g钯碳(10％碳负载钯)，氢气、室温条件下反应。双口瓶中红色消失时，使用注射器将瓶中溶液 转移至另一氩气保护、装有碳酸铯(13.04g，40mmol)的双口瓶中(注意，此过程不能接触空 气，注射器、双口瓶事先氩气置换)，然后室温条件下使用注射器加入氯化苄(5.06g， 40mmol)。加入完毕后，将反应升温至75℃，反应4h。到达规定反应时间后，反应液经硅藻土 过滤，EA洗涤。有机层使用饱和食盐水萃取三次，除去DMF。收集有机层，无水硫酸钠干燥，旋 转蒸发除去EA，经硅胶柱层析提纯[展开剂：V(PE):V(EA)＝150:1]，得到目标产物化合物2 1 (2.84g，白色固体，产率：59.8％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.06(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(d,J ＝8.7Hz,1H),7.50–7.40(m,6H),7.33–7.27(m,2H),7.24–7.17(m,3H),5.15(s,2H),4.96 (s,2H),3.47(t,J＝6.2Hz,2H),2.29(d,J＝1.3Hz,3H),1.84–1.75(m,2H),1.74–1.67(m, + 2H),1.37(s,6H)；m/z(ESI‑MS):477.23[M+H]。 [0052] 2‑(7,8‑双(苄氧基))‑3,3‑二甲基‑3,5,6,9,10,12‑六氢菲[2',1':4,5]呋喃[2,3‑c]吡啶‑11(4H)‑基)乙酸酯甲酯(3a)的制备 [0053] 称取上述制备的中间体2(1.90g，4mmol)于耐压管中，加入甘氨酸甲酯盐酸盐(2.0g，16mmol)、多聚甲醛(0.96g，32mmol)和冰醋酸30mL，加热至90℃反应，TLC监测。反应 约1.5h，待TLC监测显示原料反应完全，旋转蒸发除去大部分冰醋酸后，EA 50mL溶解粗产 物，饱和碳酸氢钠水溶液调pH值至中性后，加入饱和食盐水洗涤。收集有机层，无水硫酸钠 干燥后，旋转蒸发除去EA。粗产品经硅胶柱层析提纯[展开剂：V(DCM):V(MeOH)＝100:1]，得 1 到3a(1.39g，白色固体，产率：59.0％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.59 (d,J＝8.6Hz,1H),7.63–7.48(m,5H),7.38–7.32(m,2H),7.27–7.20(m,3H),5.15(s,2H), 4.96(s,2H),3.82(t,J＝2.0Hz,2H),3.77(s,3H),3.51(s,2H),3.18(t,J＝6.4Hz,2H),2.94 (t,J＝5.6Hz,2H),2.84(m,2H),1.82–1.76(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z + (ESI‑MS):590.26[M+H]。 [0054] S‑1的制备 [0055] 称取上述步骤制备的中间体3a(0.59g，1mmol)于双口瓶中，加入钯碳0.06g和EA 15mL,氢气条件下(氢气置换若干次)、室温反应，TLC监测。监测方法：使用注射器抽取少许 反应溶液，暴露在空气中，静置若干秒，观察反应溶液是否变为深红色，TLC监测是原料是否 完全。反应完全后，加入EA稀释反应溶液，硅藻土过滤，浓缩样品，经硅胶柱层析提纯，得目 1 标产物S‑1(0.34g，红色固体，产率：83.2％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝ 8.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),3.82(t,J＝2.0Hz,2H),3.77(s,3H),3.51(s,2H),3.18 (t,J＝6.4Hz,2H),2.94(t,J＝5.6Hz,2H),2.84(m J＝5.9,3.7,2.8Hz,2H),1.82–1.76(m, + 2H),1.68–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):408.17[M+H]。 [0056] 实施例2 [0057] S‑2的制备 [0058] 用3‑氨基丙酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑1 1相同的制备方法制备化合物S‑2(0.31g，红色固体，产率：73.6％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),3.71(s,3H),3.64(s,2H), 3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.95(t,J＝7.2Hz,2H),2.82–2.78(m,4H),2.61(t,J＝7.2Hz,2H), + 1.82–1.77(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):422.20[M+H]。 [0059] 实施例3 [0060] S‑3的制备 [0061] 用4‑氨基丁酸甲酯盐酸盐(2.46g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑1 1相同的制备方法制备化合物S‑3(0.36g，红色固体，产率：82.7％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.66(s,3H),3.59(t,J＝ 1.9Hz,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.78(m,4H),2.63(t,J＝7.2Hz,2H),2.41(t,J＝7.3Hz, 2H),1.91(p,J＝7.2Hz,2H),1.82–1.77(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑ + MS):436.20[M+H]。 [0062] 实施例4 [0063] S‑4的制备 [0064] 用L‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑11 相同的制备方法制备化合物S‑4(0.34g，红色固体，产率：80.8％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.84(t,J＝2.0Hz,2H), 3.75(s,3H),3.61(q,J＝7.1Hz,1H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.99–2.94(m,1H),2.87–2.82 (m,1H),2.81–2.77(m,2H),1.82–1.77(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H), + 1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):422.19[M+H]。 [0065] 实施例5 [0066] S‑5的制备 [0067] 用L‑异氨酸甲酯盐酸盐(2.90g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑11 相同的制备方法制备化合物S‑5(0.31g，红色固体，产率：66.9％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.59(d,J＝8.1Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),3.80–3.72(2H),3.72(s,3H),3.17(t,J＝ 6.4Hz,2H),3.11(d,J＝10.7Hz,1H),2.96–2.86(m,1H),2.81–2.68(m,3H),2.05–1.94(m, 1H),1.83–1.76(m,2H),1.75–1.71(m,1H),1.68–1.62(m,2H),1.31(s,6H),1.24–1.12(m, + 1H),0.92–0.89(m,6H)；m/z(ESI‑MS):464.23[M+H]。 [0068] 实施例6 [0069] S‑6的制备 [0070] 用L‑缬氨酸甲酯盐酸盐(2.68g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑11 相同的制备方法制备化合物S‑6(0.32g，红色固体，产率：71.3％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.83(s,2H),3.72(s,3H),3.53(d,J＝ 7.5Hz,1H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.01–2.92(m,2H),2.86–2.69(m,2H),1.84–1.75(m, 3H),1.71–1.63(m,2H),1.31(s,6H),0.94(dd,J＝15.5,6.5Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):450.22[M + +H]。 [0071] 实施例7 [0072] S‑7的制备 [0073] 用L‑苯丙氨酸甲酯盐酸盐代替(3.45g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 物S‑1相同的制备方法制备化合物S‑7(0.43g，红色固体，产率：86.5％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.31–7.27(m,2H),7.24– 7.20(m,3H),3.93–3.82(m,2H),3.72(dd,J＝9.0,6.2Hz,1H),3.64(s,3H),3.21(d,J＝ 9.1Hz,1H),3.18–3.15t,6.6Hz,2H),3.07–3.01(m,2H),2.86(m,1H),2.77(m,1H),1.79(m, + 2H),1.67–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):498.22[M+H]。 [0074] 实施例8 [0075] S‑8的制备 [0076] 用L‑酪氨酸甲酯盐酸盐代替(3.70g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合S‑1 1相同的制备方法制备化合物S‑8(0.45g，红色固体，产率：87.7％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.5Hz, 2H),3.86(q,J＝14.9Hz,2H),3.91–3.82(4H),3.17(t,J＝6.3Hz,2H),3.11(dd,J＝13.6, 9.2Hz,1H),3.04–2.94(m,2H),2.87–2.76(3H),1.81–1.77(m,2H),1.68–1.62(m,2H),1.31 + (s,6H)；m/z(ESI‑MS):514.21[M+H]。 [0077] 实施例9 [0078] S‑9的制备 [0079] 用L‑谷氨酸二甲酯盐酸盐代替(3.38g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 S‑1相同的制备方法制备化合物S‑9(0.36g，红色固体，产率：73.0％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.90–3.72(m,2H),3.74(s, 3H),3.63(s,3H),3.51(dd,J＝8.6,6.8Hz,1H),3.17(t,J＝6.5Hz,2H),3.03–2.97(m,1H), 2.80–2.72(m,3H),2.45(td,J＝7.2,2.9Hz,2H),2.16–2.09(m,2H),1.82–1.76(m,2H), + 1.67–1.62(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):494.21[M+H]。 [0080] 实施例10 [0081] S‑10的制备 [0082] 用L‑天冬氨酸二甲酯盐酸盐代替(3.16g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化1 合S‑1相同的制备方法制备化合物S‑10(0.24g，红色固体，产率：50.1％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.90–3.72(m,2H),3.74(s, 3H),3.63(s,3H),3.51(dd,J＝8.6,6.8Hz,1H),3.17(t,J＝6.5Hz,2H),3.03–2.97(m,1H), 2.80–2.72(m,3H),2.45(td,J＝7.2,2.9Hz,2H),1.82–1.76(m,2H),1.67–1.62(m,2H),1.31 + (s,6H)；m/z(ESI‑MS):480.19[M+H]。 [0083] 实施例11 [0084] S‑11的制备 [0085] 用L‑亮氨酸甲酯盐酸盐代替(2.90g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合S‑1 1相同的制备方法制备化合物S‑11(0.38g，红色固体，产率：82.0％)。H NMR(500MHz,CDCl3) δ7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.83(t,J＝2.1Hz,2H),3.72(s,3H),3.53 (t,J＝7.5Hz,1H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.01–2.92(m,1H),2.86–2.69(m,3H),1.84–1.75 (m,2H),1.71–1.63(m,5H),1.31(s,6H),0.94(dd,J＝15.5,6.5Hz,6H)；m/z(ESI‑MS): + 464.24[M+H]。 [0086] 实施例12 [0087] S‑12的制备 [0088] 用D‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑11 相同的制备方法制备化合物S‑12(0.34g，红色固体，产率：80.8％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),3.83(t,J＝2.0Hz,2H), 3.76(s,3H),3.60(q,J＝7.1Hz,1H),3.20(t,J＝6.4Hz,2H),2.99–2.94(m,1H),2.86–2.83 (m,1H),2.81–2.78(m,2H),1.82–1.78(m,2H),1.67–1.62(m,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H), + 1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):422.19[M+H]。 [0089] 通式(I)化合物合成路线(B系列化合物的制备)： [0090] [0091] 实施例13 [0092] 2‑(7，8‑二(苄氧基)‑3,3‑二甲基‑3，5，6，9，10，12‑六氢菲[2',1':4,5]呋喃[2,3‑c]哌啶‑11(4H)‑基)乙基‑1‑醇(4a)的制备 [0093] 称取实施例1中制备的3a(1.18g，2mmol)溶于20mL干燥的THF中，分次加入LiAlH4(0.32g，8mmol)，常温下反应约15min。加入EA 100mL淬灭反应，再加入少量4N NaOH水溶液， 待白色沉淀完全，经硅藻土过滤，用饱和食盐水洗涤(3×50mL)后，收集有机层，无水硫酸钠 干燥后，浓缩样品。粗品经硅胶柱层析提纯[V(DCM):V(MeOH)＝100:1]后得醇类化合物4a 1 (0.96g，白色固体，产率：85.6％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J ＝8.6Hz,1H),7.63–7.48(m,5H),7.38–7.32(m,2H),7.27–7.20(m,3H),5.15(s,2H),4.96 (s,2H),3.82(t,J＝2.0Hz,2H),3.69(t,J＝1.9Hz,2H),3.51(s,2H),3.18(t,J＝6.4Hz, 2H),2.94(t,J＝5.6Hz,2H),2.84(m,2H),1.82–1.76(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.31(s, + 6H)；m/z(ESI‑MS):562.28[M+H]。 [0094] S‑13的制备 [0095] 称取上述步骤制得的4a(0.56g，1mmol)于双口瓶中，加入钯碳0.056g和THF 15mL,氢气条件下(氢气置换若干次)、室温反应，TLC监测。监测方法：使用注射器抽取少许反应溶 液，暴露在空气中，静置若干秒，观察反应溶液是否变为深红色，TLC监测是原料是否完全。 反应完全后，加入DCM稀释反应溶液，经硅藻土过滤后，浓缩样品，经硅胶柱层析提纯[V 1 (DCM):V(MeOH)＝100:1]，得目标产物S‑13(0.28g，红色固体，产率：73.9％)。H NMR (500MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(d,J＝8.2Hz,1H),3.73(t,J＝5.3Hz,2H), 3.68(s,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.86(t,J＝5.1Hz,2H),2.80(m,4H),1.84–1.75(m, + 2H),1.69–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):380.18[M+H]。 [0096] 实施例14 [0097] S‑14的制备 [0098] 用3‑氨基丙酸甲酯盐酸盐代替(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 物S‑13相同的制备方法制备化合物S‑14(0.30g，红色固体，产率：76.3％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.86–3.83(t,＝5.5Hz 2H),3.69(t,J＝1.9Hz,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.88–2.84(m,4H),2.83–2.80(m,2H), + 1.87–1.75(m,4H),1.68–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):394.19[M+H]。 [0099] 实施例15 [0100] S‑15的制备 [0101] 用4‑氨基丁酸甲酯盐酸盐代替(2.46g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 物S‑13相同的制备方法制备化合物S‑15(0.29g，红色固体，产率：71.3％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),3.66(s,2H),3.62(t,J＝ 5.1Hz,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.84(s,4H),2.66(t,J＝5.7Hz,2H),1.78–1.82(m,2H), + 1.78–1.71(m,4H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):408.20[M+H]。 [0102] 实施例16 [0103] S‑16的制备 [0104] 用L‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑131 相同的制备方法制备化合物S‑16(0.30g，红色固体，产率：76.3％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.60(d,J＝8.1,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),3.80–3.60(2H),3.55–3.45(m,2H),3.18(t,J ＝6.4Hz,2H),3.10–3.05(m,1H),2.97–2.93(m,1H),2.85–2.72(m,2H),2.67–2.63(m,1H), 1.83–1.77(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H),1.04(d,J＝6.7Hz,3H)；m/z(ESI‑MS): + 394.20[M+H]。 [0105] 实施例17 [0106] S‑17的制备 [0107] 用L‑异亮氨酸甲酯盐酸盐(2.90g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑1 13相同的制备方法制备化合物S‑17(0.26g，红色固体，产率：59.8％)。H NMR(500MHz, CDCl3)δ7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),3.80–3.72(2H),3.4(m,2H),3.17 (t,J＝6.4Hz,2H),3.12(d,J＝10.7Hz,1H),2.95–2.83(m,1H),2.82–2.69(m,3H),2.03– 1.96(m,1H),1.84–1.76(m,2H),1.74–1.71(m,1H),1.71–1.64(m,2H),1.32(s,6H),1.23– + + 1.11(m,1H),0.92–0.89(m,6H)；m/z(ESI‑MS):464.23[M+H]；m/z(ESI‑MS):436.24[M+H]。 [0108] 实施例18 [0109] S‑18的制备 [0110] 用L‑缬氨酸甲酯盐酸盐(2.68g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合物S‑131 相同的制备方法制备化合物S‑18(0.27g，红色固体，产率：64.1％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.83(s,2H),3.53(d,J＝7.5Hz,1H),3.5(d, J＝6.4Hz,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.01–2.92(m,2H),2.86–2.69(m,2H),1.84–1.75(m, 3H),1.71–1.63(m,2H),1.31(s,6H),0.94(dd,J＝15.5,6.5Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):422.22[M + +H]。 [0111] 实施例19 [0112] S‑19的制备 [0113] 用L‑苯丙氨酸甲酯盐酸盐代替(3.45g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 物S‑13相同的制备方法制备化合物S‑19(0.36g，红色固体，产率：76.8％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(d,J＝6.6Hz,1H),3.89–3.71(m,2H),3.54– 3.49(m,2H),3.18(m,3H),3.08–2.99(m,2H),2.87–2.72(m,3H),2.52(dd,J＝13.6,9.2Hz, + 1H),1.83–1.77(m,2H),1.68–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):470.23[M+H]。 [0114] 实施例20 [0115] S‑20的制备 [0116] 用L‑酪氨酸甲酯盐酸盐代替(3.70g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合S‑1 13相同的制备方法制备化合物S‑20(0.31g，红色固体，产率：63.9％)。H NMR(500MHz, Methanol‑d4)δ7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.11–7.05(m,2H),6.75– 6.69(m,2H),3.80(bs,2H),3.66(dd,J＝11.6,7.8Hz,1H),3.57(dd,J＝11.5,4.3Hz,1H), 3.08(t,J＝6.4Hz,2H),3.06–2.99(m,2H),2.94–2.84(m,2H),2.69–2.64(m,2H),2.60(dd,J ＝13.8,8.5Hz,1H),1.84–1.76(m,2H),1.69–1.64(m,2H),1.32(d,J＝4.0Hz,6H)；m/z(ESI‑ + MS):486.22[M+H]。 [0117] 实施例21 [0118] S‑21的制备 [0119] 用L‑谷氨酸二甲酯盐酸盐代替(3.38g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合1 S‑13相同的制备方法制备化合物S‑21(0.27g，红色固体，产率：61.8％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.59(d,J＝8.1Hz,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,1H),3.86–3.72(m,2H),3.71– 3.65(m,3H),3.55(dd,J＝11.0,9.3Hz,1H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.02–2.87(m,2H), 2.83–2.73(m,3H),1.83–1.77(m,2H),1.75–1.69(m,1H),1.68–1.64(m,3H),1.63–1.56(m, + 1H),1.49–1.41(m,1H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):438.22[M+H]。 [0120] 实施例22 [0121] S‑22的制备 [0122] 用L‑天冬氨酸二甲酯盐酸盐代替(3.16g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化1 合S‑13相同的制备方法制备化合物S‑22(0.24g，红色固体，产率：56.7％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.59(d,J＝8.1Hz,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,1H),3.86–3.72(m,2H),3.71– 3.65(m,3H),3.55(dd,J＝11.0,9.3Hz,1H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),3.02–2.87(m,2H), 2.83–2.73(m,3H),1.83–1.77(m,2H),1.75–1.69(m,1H),1.68–1.64(m,3H),1.31(s,6H)；m/ + z(ESI‑MS):424.20[M+H]。 [0123] 实施例23 [0124] S‑23的制备 [0125] 用D‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合S‑13相1 同的制备方法制备化合物S‑23(0.31g，红色固体，产率：78.9％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),3.84(t,J＝2.0Hz,2H), 3.74(s,3H),3.59(q,J＝7.1Hz,1H),3.22(t,J＝6.4Hz,2H),2.99–2.94(m,1H),2.86–2.84 (m,1H),2.81–2.77(m,2H),1.82–1.79(m,2H),1.67–1.63(m,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H), + 1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):394.19[M+H]。 [0126] 通式(I)化合物合成路线(C系列化合物的制备)： [0127] [0128] 实施例24 [0129] 7,8‑二(苄氧基)‑3,3,11‑三甲基‑3,4,5,6,9,10,11,12‑八氢菲[2',1':4,5]呋喃[2,3‑c]哌啶(5a)的制备 [0130] 称取实施例1中制备的中间体2(1.90g，4mmol)于耐压管中，加入甲胺盐酸盐(1.08g，16mmol)、多聚甲醛(0.96g，32mmol)和冰醋酸30mL，油浴加热至90℃反应。观察反 应，待溶液颜色变成深红色，TLC监测反应。反应约3h，待TLC监测显示原料反应完全，旋转蒸 发除去大部分冰醋酸后，EA 50mL溶解粗产物，饱和食盐水调pH值至中性后，加入饱和食盐 水洗涤。收集有机层，无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发除去EA。粗产品经硅胶柱层析提纯[展开 1 剂：V(PE):V(EA)＝4:1]，得到目标产物中间体5a(1.03g，白色固体，产率：48.5％)。H NMR (500MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.63–7.48(m,5H),7.38– 7.32(m,2H),7.27–7.20(m,3H),5.15(s,2H),4.96(s,2H),3.55(s,2H),3.17(t,J＝6.4Hz, 2H),2.81(d,J＝5.3Hz,2H),2.71(t,J＝5.6Hz,2H),2.52(s,3H),1.82–1.76(m,2H),1.68– + 1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):532.28[M+H]。 [0131] S‑24的制备 [0132] 称取上述步骤制备的5a(0.53g,1mmol)于双口瓶中，加入钯碳0.06g和THF 15mL,氢气下(氢气置换若干次)、室温条件下反应，TLC监测。监测方法：使用注射器抽取少许反应 溶液，暴露在空气中，静置若干秒，观察反应溶液是否变为深红色，TLC监测是原料是否完 全。反应完全后，加入DCM稀释反应溶液，经硅藻土过滤后，浓缩样品，经硅胶柱层析提纯，得 1 目标产物S‑24(0.29g，红色固体，产率：83.1％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ7.60(d,J ＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.55(s,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.81(d,J＝ 5.3Hz,2H),2.71(t,J＝5.6Hz,2H),2.52(s,3H),1.82–1.76(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.31 + (s,6H)；m/z(ESI‑MS):350.17[M+H]。 [0133] 实施例25 [0134] S‑25的制备 [0135] 以N‑(3‑氨丙基)吗啉盐酸盐(3.17g，16mmol)代替甲胺盐酸盐，以与实施例24中制1 备S‑24相同的方法制备S‑25(0.31g，红色固体，产率：67.1％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.1Hz,1H),3.73(t,J＝4.7Hz,4H), 3.60(t,J＝1.8Hz,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.81–2.75(m,4H),2.64(t,J＝7.4Hz,2H), 2.47(s,4H),2.47–2.40(m,2H),1.83–1.76(m,4H),1.68–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z + (ESI‑MS):463.25[M+H]。 [0136] 实施例26 [0137] S‑26的制备 [0138] 以2‑(甲砜基)乙胺盐酸盐(2.55g,16mmol)代替甲胺盐酸盐，以与实施例24中制备1 S‑24相同的方法制备S‑26(0.38g，红色固体，产率：86.2％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑ d)δ7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),3.70(t,J＝1.9Hz,2H),3.25(t,J＝ 6.3Hz,2H),3.16(dt,J＝7.7,6.3Hz,4H),3.05(s,3H),2.85(m,2H),2.81(m,2H),1.79(m, + 2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):442.16[M+H]。 [0139] 通式(I)化合物合成路线(D系列化合物的制备)： [0140] [0141] 实施例27 [0142] 2‑(7,8‑双(苄氧基)‑3,3‑二甲基‑3,5,6,9,10,12‑六氢菲[2',1':4,5]呋喃[2,3‑c]哌啶‑11(4H)‑基)‑N‑甲酰胺(7a)的制备 [0143] 称取实施例1中制备的3a(1.47g,2.5mmol)于双口瓶中加入THF 15mL溶解,称取氢氧化锂(0.24g,10mmol)溶于15mL去离子水中，将氢氧化锂水溶液加入至双口瓶中，反应加 热至70℃回流，反应过夜。待反应完全后，加入冰醋酸调节pH值至pH＝6‑7，加入EA 100mL和 饱和食盐水100mL萃取，收集有机层，再次使用饱和食盐水100mL洗涤一次。收集有机层，无 水硫酸钠干燥后，旋转蒸发除去乙酸乙酯得白色固体6a，无需纯化即可进行下一步反应。将 6a转移至双口瓶中，加入甲胺盐酸盐(0.34g,5mmol)、DIPEA(0.65g,5mmol)和HATU(1.9g, 5mmol)，加入DCM 25mL，室温下反应过夜。待反应完全，加入DCM 100mL稀释后，再加入饱和 食盐水100mL洗涤，收集有机层，无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发除去溶剂。经硅胶柱层析提纯 1 后，得7a(0.95g，白色固体，产率：64.6％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.02(d,J＝8.6Hz,1H), 7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.63–7.49(m,5H),7.39–7.33(m,2H),7.28–7.20(m,3H),5.15(s, 2H),4.97(s,2H),3.65(t,J＝1.9Hz,2H),3.28(s,2H),3.19(t,J＝6.4Hz,2H),2.91(d,J＝ 5.0Hz,3H),2.86(m,2H),2.83(td,J＝5.0,2.4Hz,2H),1.84–1.78(m,2H),1.69–1.65(m, + 2H),1.32(s,6H)；m/z(ESI‑MS):589.30[M+H]。 [0144] S‑27的制备 [0145] 称取上述步骤制备的7a(0.59g,1mmol)于双口瓶中，加入钯碳0.06g和THF 15mL,氢气下(氢气置换若干次)、室温条件下反应，TLC监测。监测方法：使用注射器抽取少许反应 溶液，暴露在空气中，静置若干秒，观察反应溶液是否变为深红色，TLC监测是原料是否完 全。反应完全后，加入DCM稀释反应溶液，经硅藻土过滤后，浓缩样品，经硅胶柱层析提纯，得 1 目标产物S‑27(0.35g，暗红色固体，产率：86.2％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ7.56 (d,J＝8.1Hz,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),3.65(t,J＝1.9Hz,2H),3.27(s,2H),3.17(t,J＝ 6.4Hz,2H),2.90(d,J＝5.0Hz,3H),2.85(m,2H),2.80(td,J＝5.0,2.4Hz,2H),1.84–1.78 + (m,2H),1.68–1.65(m,2H),1.32(s,6H)；m/z(ESI‑MS):407.19[M+H]。 [0146] 实施例28 [0147] S‑28的制备 [0148] 使用3‑氨基丙酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相1 同的制备方法制备化合物S‑28(0.35g，暗红色固体，产率：83.3％)。H NMR(500MHz, Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,1H),3.66(d,J＝1.9Hz,2H), 3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.90(t,J＝6.3Hz,2H),2.80–2.85(m,4H),2.79(d,J＝4.8Hz,3H), 2.49(t,J＝6.2Hz,2H),1.83–1.77(m,2H),1.69–1.64(m,2H),1.32(s,6H)；m/z(ESI‑MS): + 421.21[M+H]。 [0149] 实施例29 [0150] S‑29的制备 [0151] 使用4‑氨基丁酸甲酯盐酸盐(2.46g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相1 同的制备方法制备化合物S‑29(0.36g，暗红色固体，产率：82.9％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.59(d,J＝8.2Hz,1H),7.45(d,J＝8.1Hz,1H),3.61(s,2H),3.16(t,J＝6.4Hz,2H),2.80 (7H),2.67(t,J＝6.8Hz,2H),2.32(t,J＝7.2Hz,2H),1.93(p,J＝6.9Hz,2H),1.83–1.76(m, + 2H),1.69–1.62(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):435.22[M+H]。 [0152] 实施例30 [0153] S‑30的制备 [0154] 使用L‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相同1 的制备方法制备化合物S‑30(0.34g，暗红色固体，产率：81.0％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.57(d,J＝8.1Hz,1H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),3.72–3.60(dd,2H),3.35(q,J＝7.0Hz,1H), 3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.87(d,J＝5.0Hz,3H),2.82–2.72(m,4H),1.84–1.77(m,2H),1.68– + 1.65(m,2H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H),1.32(d,J＝3.2Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):421.22[M+H]。 [0155] 实施例31 [0156] S‑31的制备 [0157] 使用L‑亮氨酸甲酯盐酸盐(2.90g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相同1 的制备方法制备化合物S‑31(0.33g，暗红色固体，产率：71.4％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.56(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.06(q,J＝5.0Hz,1H),3.78–3.61(m,2H), 3.30–3.27(m,1H),3.16(t,J＝6.4Hz,2H),2.86(d,J＝4.9Hz,3H),2.83(t,J＝5.7Hz,2H), 2.79–2.74(m,2H),1.84–1.76(m,4H),1.69–1.63(m,2H),1.51(m,1H),1.32(d,J＝4.4Hz, + 6H),0.98(dd,J＝9.6,6.4Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):463.25[M+H]。 [0158] 实施例32 [0159] S‑32的制备 [0160] 使用L‑苯丙氨酸甲酯盐酸盐(3.44g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相1 同的制备方法制备化合物S‑32(0.39g，暗红色固体，产率：78.6％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.56–7.47(m,1H),7.34‑7.17(m,6H),3.67(s,3H),3.50(dd,J＝14.3,6.1Hz,1H),3.14(bs, 2H),2.98(dd,J＝14.2,7.3Hz,1H),2.90–2.76(m,5H),2.75–2.64(m,2H),1.83–1.76(m, + 2H),1.68–1.64(m,2H),1.31(d,J＝3.9Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):497.24[M+H]。 [0161] 实施例33 [0162] S‑33的制备 [0163] 使用L‑酪氨酸甲酯盐酸盐(3.70g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与S‑27相同1 的制备方法制备化合物S‑33(0.38g，暗红色固体，产率：74.2％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.07(d,J＝8.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.5Hz, 2H),3.67(s,3H),3.50(dd,J＝14.3,6.1Hz,1H),3.14(bs,2H),2.98(dd,J＝14.2,7.3Hz, 1H),2.90–2.76(m,5H),2.75–2.64(m,2H),1.83–1.76(m,2H),1.68–1.64(m,2H),1.31(d,J + ＝3.9Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):513.23[M+H]。 [0164] 实施例34 [0165] S‑34的制备 [0166] 用D‑丙氨酸甲酯盐酸盐(2.23g，16mmol)代替甘氨酸甲酯盐酸盐，以与化合S‑13相1 同的制备方法制备化合物S‑34(0.33g，红色固体，产率：78.6％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.56(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),3.72–3.59(dd,2H),3.34(q,J＝7.0Hz,1H), 3.15(t,J＝6.4Hz,2H),2.88(d,J＝5.0Hz,3H),2.81–2.70(m,4H),1.85–1.78(m,2H),1.67– + 1.64(m,2H),1.36(d,J＝7.0Hz,3H),1.32(d,J＝3.2Hz,6H)；m/z(ESI‑MS):421.20[M+H]。 [0167] 实施例35 [0168] S‑35的制备 [0169] 用吗啡啉(0.44g,5mmol)代替甲胺盐酸盐，以与S‑27相同的制备方法制备化合物1 S‑35(0.31g，暗红色固体，产率：67.1％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ7.60(d,J＝ 8.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),3.73(s,J＝1.9Hz,2H),3.72–3.59(m,8H),3.46(s,2H), 3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.87(d,J＝5.1Hz,2H),2.85–2.78(t,2H),1.83–1.77(m,2H),1.67– + 1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):463.22[M+H]。 [0170] 实施例36 [0171] S‑36的制备 [0172] 用吗啡啉(0.44g,5mmol)代替甲胺盐酸盐与羧酸进行缩合，以与S‑30相同的制备1 方法制备化合物S‑36(0.30g，暗红色固体，产率：63.0％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.60(d,J ＝8.2Hz,1H),7.48(d,J＝8.1Hz,1H),3.73(t,J＝2.0Hz,2H),3.71–3.60(m,8H),3.46(s, 2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.88(t,J＝5.7Hz,2H),2.85–2.78(m,2H),1.83–1.76(m,2H), + 1.69–1.63(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):477.23[M+H]。 [0173] 实施例37 [0174] S‑37的制备 [0175] 用N‑甲基哌嗪(0.50g,5mmol)代替甲胺盐酸盐，以与S‑27相同的制备方法制备化1 合物S‑37(0.32g，暗红色固体，产率：67.4％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.61(d,J＝8.2Hz, 1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),3.73(t,J＝2.2Hz,2H),3.66(t,J＝5.2Hz,2H),3.61(t,J＝ 5.0Hz,2H),3.46(s,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.86(d,J＝5.3Hz,2H),2.81(m,2H),2.40 (t,J＝5.0Hz,4H),2.30(s,3H),1.83–1.76(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z + (ESI‑MS):476.25[M+H]。 [0176] 实施例38 [0177] S‑38的制备 [0178] 用N‑甲基哌嗪(0.50g,5mmol)代替甲胺盐酸盐；以与S‑30相同的制备方法制备化1 合物S‑38(0.29g，暗红色固体，产率：59.3％)。H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.61(d,J＝8.2Hz, 1H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),3.71–3.60(m,8H),3.46(s,2H),3.17(t,J＝6.4Hz,2H),2.86 (d,J＝5.3Hz,2H),2.81(m,2H),2.40(t,J＝5.0Hz,4H),2.30(s,3H),1.83–1.76(m,2H), + 1.67–1.64(m,2H),1.31(s,6H)；m/z(ESI‑MS):490.26[M+H]。 [0179] 实施例39 [0180] S‑39的制备 [0181] 用二甲胺盐酸盐(0.41g,5mmol)代替甲胺盐酸盐，以与S‑27相同的制备方法制备1 化合物S‑39(0.29g，暗红色固体，产率：69.0％)。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ7.61(d,J ＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),3.74(s,J＝1.9Hz,2H),3.46(s,2H),3.17(m,8H), 2.87(d,J＝5.1Hz,2H),2.85–2.78(t,2H),1.83–1.77(m,2H),1.67–1.64(m,2H),1.31(s, + 6H)；m/z(ESI‑MS):421.20[M+H]。 [0182] 实施例40 [0183] S‑40的制备 [0184] 称取实施例1制备的S‑1(0.2g，0.5mmol)溶于15mL EA中，冰浴边搅拌边滴加新制备的氯化氢乙酸乙酯溶液，滴加时会有沉淀析出，待沉淀完全，旋转蒸发除去多余的EA和氯 化氢乙酸乙酯溶液。得到淡红色固体，加入EA 20mL进行洗涤，过滤得滤饼，使用EA再次进行 1 洗涤(20mL×3)，收集滤饼，即可得S‑40。H NMR(500MHz,DMSO)δ7.82(d,J＝8.2Hz,1H), 7.54(d,J＝8.2Hz,1H),4.45(s,2H),4.24(s,2H),3.76(s,3H),3.48(bs,2H),3.07(t,J＝ 6.3Hz,2H),2.93(s,2H),1.75–1.71(m,2H),1.65–1.59(m,2H),1.29(s,6H)；m/z(ESI‑MS): + 408.17[M+H]。 [0185] 检测例1抗结核分支杆菌效果检测 [0186] 方法: [0187] 1.在磨菌管内加入1‑2滴5％Tween‑80,取2‑3周龄的结核菌新鲜培养物，加入4‑5ml生理盐水并混匀；静置5‑10min； [0188] 2.取适量上清到25mL培养瓶中，用生理盐水调节浓度至1个麦氏浓度； [0189] 3.按照10％的比例在7H9培养基中加入OADC添加剂； [0190] 4.再取一个25mL培养瓶，按1:20比例用7H9培养基稀释4mL菌液； [0191] 5.试验药物浓度配置：(1)根据试验需求，采用电子天平称取适当量的药物；(2)根据药物溶解性，分别采用适量的无菌去离子蒸馏水或DMSO，室温条件下充分溶解，试验开始 前，稀释至256μg/ml，备用； [0192] 6.所有试验起始浓度为128μg/mL；采用7H9培养基连续测试10个浓度范围，即试验用药物浓度为128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL。在96孔板中除边缘各孔外每孔加入100μL 7H9培养基，第2列 再加入94.88μL(94.9μL)培养基；第2列每孔加入5.12μL利福平(10mg/mL)或其他药物贮存 液；按照2倍稀释原则依次稀释，至第11列，得到从128‑0.125μg/mL药液梯度，第12列为空白 药液孔做阴性对照；每株菌接种一行，每孔加入100μL稀释菌5液； [0193] 7.另做一块空白板(不含药)，每孔加入100μL 7H9培养基和100μL稀释菌液，每株菌至少添加4个孔； [0194] 8.微孔板第一行和最后一行加样孔滴加生理盐水以防干燥，用封口膜密封微孔板； [0195] 9.在37℃的培养箱中培养1天；从第2天开始，在空白板中加入70μL显色剂(Alarmar blue:5％Tween‑80＝2:5)，4个小时后(利用空白板确定观察时间)观察变色情 况。如颜色从蓝色变成紫红色或粉色，则在含药培养基中加入显色剂；若没有变色或变色程 度较浅，则继续在另一对照孔中加入显色剂，观察至变色为止。 [0196] 10.在含药培养基中加入显色剂4个小时(利用空白板确定观察时间)后观察结果。结果判读需参照对照空白孔变色情况。 [0197] 结果： [0198] 药物敏感性检测结果显示，式(Ⅰ)提供的化合物均对结核分枝杆菌具有良好的抗菌作用，其中选取的H37Rv为全敏感型结核分枝杆菌，T5为广泛耐药型结核分枝杆菌，详见 表1。 [0199] 表1.抗结核分枝杆菌体外试验结果(MIC值) [0200] [0201] |
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