[0001] 本申请是申请号为201680012567.8，申请日为2016年4月13日，发明名称为“胆酸衍生物及其制备方法和医药用途”的中国专利申请的分案申请。

[0002] 本发明属于药物合成领域，具体涉及一种胆酸衍生物及其制备方法和应用。

[0003] 法尼酯衍生物X受体(FXR)属于激素核受体超家族的一员，其主要在肝脏、小肠、肾脏和肾上腺表达，在脂肪组织和心脏中较少表达。最初认为法尼醇是其配体，并由此得名。
当FXR配体与FXR羧基末端配体结合区(LBD)直接结合后,核受体空间构象发生改变并与视
黄醛衍生物受体(RXR)形成异源二聚体,最后与靶基因特定FXR DNA反应元件结合从而调节
靶基因的转录，参与糖、脂代谢的调控，是重要的能量调节器。初级胆汁酸鹅脱氧胆酸是FXR
最有效的配体,次级胆汁酸石胆酸和脱氧胆酸也可以激活FXR。目前还有合成FXR配体(如6‑
ECDCA、GW4064等),其与FXR结合力比天然配体强数倍。FXR的主要靶基因包括胆盐输出泵
(BSEP)、胆酸结合蛋白(IBABP)和小异源二聚体伴侣受体(SHP)等,FXR通过和这些基因启动
子上的FXR反应元件(FXRE)结合从而调控这些基因的表达。但如胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)
等主要FXR调控基因的启动子序列中没有典型FXR结合反应序列,FXR则是间接通过诱导转
录抑制因子SHP表达,然后SHP与CYP7α1启动子肝受体同源物(LRH‑1)形成抑制性复合物,从
而阻断CYP7α1和其它LRH‑1靶基因转录。由于FXR在胆汁酸及胆固醇代谢中的重要作用,这
将使其和肝脏相关疾病关系日益受到关注。寻找FXR新型激动剂成了治疗包括胆汁淤积综
合症等肝脏疾病的研究热点,6‑乙基鹅脱氧胆酸(奥贝胆酸)作为治疗原发性胆汁性肝硬化
(PBC)已经完成III期临床试验,最早将于2015年上市，而且该化合物在非酒精性脂肪性肝
炎患者中也表现出令人满意的治疗效果。FXR激动剂既可以通过刺激胆盐输出泵(BSEP)增
加胆汁酸依赖性胆流和也可以刺激MRP2增加非胆汁酸依赖性胆流以减轻胆汁淤积。FXR有
望成为筛选治疗包括胆汁淤积性疾病和非酒精性脂肪性肝炎等其它代谢疾病的新的药物
靶点。不仅如此，目前的研究已经表明，FXR激动剂可能在以下疾病中具有治疗和研究价值，
包括动脉粥样硬化，胆汁酸紊乱引起的胆汁淤积性疾病、肝纤维化、肝硬化，癌症等(见表
1)。

[0004] 表1.FXR激动剂可以对治疗有所帮助的疾病

[0005]

[0006] 发明人在研究过程中发现一类具有式(I)结构的胆酸衍生物。该类化合物对FXR活性具有明显地激动作用，可以用来治疗用于治疗FXR介导的疾病，包括心血管疾病、动脉粥
样硬化、动脉硬化、高胆甾醇血、高血脂慢性肝炎疾病、慢性肝病、胃肠疾病、肾病、心血管疾病、代谢疾病、癌症(例如结直肠癌)或神经迹象如中风等疾病，具有广泛医学应用，有望开
发成新一代FXR激动剂。

[0007] 本发明第一方面提供一种具有如下式(I)结构的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐：

[0008]

[0009] 其中，

[0010] R1、R2、R3选自氢、氟、溴、三氟甲基或C1‑8烷基；

[0011] R4选自如下结构：

[0012]

[0013] X1选自氮或CR8；

[0014] X2选自CR8R9、NR10、氧或硫；

[0015] Y1、Y2各自独立的选自CR8R9、NR10、氧或硫；

[0016] Z选自CR8R9、NR10、氧或硫；

[0017] R5选自氢、羟基、氰基、氨基、C1‑8烷氧基或SO2R11；

[0018] R6选自SO2R11、SO3R11、C(O)OR11、C(O)R12或C0‑4‑P(O)R13R14；

[0019] R7选自羟基、羟基取代C1‑8烷基或卤取代C1‑8烷基；

[0020] R8、R9各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、氰基、硝基、C1‑8烷基、C2‑8链烯基、C2‑8链炔基、C3‑8环烷基、C1‑8烷氧基、C3‑8环烷氧基、SO2R11、C(O)OR11、C(O)R12或P(O)R13R14，其中烷基、环烷基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、C1‑8烷基、C1‑8烷氧基、卤取代C1‑8烷氧基、C3‑8环烷基或C3‑8环烷氧基的取代基所取代；

[0021] R10选自氢、C1‑8烷基、C3‑8环烷基、卤取代C1‑8烷基或C1‑8烷氧基；

[0022] R11选自氢、C1‑8烷基、C3‑8环烷基、卤取代C1‑8烷基、苯基或对甲基苯基；

[0023] R12、R13、R14各自独立的选自羟基、C1‑8烷基、C3‑8环烷基、卤取代C1‑8烷基、C1‑8烷氧基、氨基或C1‑8烷基双取代氨基；

[0024] n选自0或1。

[0025] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，C1‑8烷基优选C1‑6烷基，更优选C1‑3烷基；C1‑8烷氧基优选C1‑6烷氧基，更优选C1‑3烷氧基；C3‑8环烷基优选C3‑6环烷基；C3‑8环烷氧基优选C3‑6环烷氧基；C2‑8链烯基优选C2‑4链烯基；C2‑8链炔基优选C2‑4链炔基。

[0026] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自氢、氟、甲基、三氟甲基、乙基或异丙基；R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如式(I)化合物所定义。

[0027] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R2选自氢、甲基、乙基或异丙基；R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如权利要求1所定义。

[0028] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3选自H、甲基、乙基或异丙基；R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如式(I)化合物所定义。

[0029] 作为更进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3选自H或甲基；R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如式(I)化合物所定义。

[0030] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅱ)结构化合物：

[0031]

[0032] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自H；R3选自H或甲基；R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如式(I)化合物所定义。

[0033] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅲ)结构化合物：

[0034]

[0035] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅳ)结构化合物：

[0036]

[0037] 其中，R4选自如下结构：

[0038]

[0039] R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z、n如式(I)化合物所定义。

[0040] 作为更进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，

[0041] 当R4选自如下结构： 时，n为1；当R4选自如下结构： 时，n为0；

[0042] R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z如式(I)化合物所定义。

[0043] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：

[0044]

[0045] 或者，选自如下化合物：

[0046]

[0047] 或者，选自如下化合物：

[0048]

[0049] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅴ)结构化合物：

[0050]

[0051] 其中，X1、X2、R2、R8、R9、R10如式(I)化合物所定义。

[0052] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：

[0053]

[0054] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅵ)结构化合物：

[0055]

[0056] 其中，Y1、Y2、R2、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14如式(I)化合物所定义。

[0057] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：

[0058]

[0059] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下式(Ⅶ)结构化合物：

[0060]

[0061] 或表述为：

[0062] 包含如下两个异构体：

[0063]

[0064] 其中，R2、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、Z如式(I)化合物所定义。

[0065] 作为最优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：

[0066]

[0067] 本发明另一方面提供了式(Ⅷ)结构的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，式(Ⅷ)结构如下：

[0068]

[0069] Z氧或硫；

[0070] R2选自氢、氟、溴、三氟甲基或C1‑8烷基。

[0071] 作为进一步优选的方案，所述的胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：

[0072]

[0073] 本发明另一方面提供了前述胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，相应化合物的制备方法包括如下步骤之一：

[0074]

[0075]

[0076] 其中，R2、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、X1、X2、Y1、Y2、Z如式(I)化合物所定义。

[0077] Pg1为羟基保护基，优选自C1‑4烷基或苄基，Pg2为羟基保护基，优选自C1‑4烷基或乙酰基。

[0078] 本发明另一方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的前述胆酸衍物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。

[0079] 本发明另一方面提供一种前述胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物在制备用于预防或治疗FXR介导的疾病或状况的药物中的应用。

[0080] 作为进一步优选的方案，FXR介导的疾病或状况选自心血管疾病、高胆甾醇血症、高血脂慢性肝炎疾病、慢性肝病、胃肠疾病、肾病、脑血管疾病、代谢疾病或癌症。

[0081] 作为更进一步优选的方案，慢性肝病选自原发性硬化(PBC)、脑脏性黄瘤症(CTX)、原发性硬化性胆囊炎(PSC)、药物导致的胆汁郁积、妊娠肝内胆汁淤积症、肠外吸收相关胆
汁郁积(PNAC)、细菌过度生长或脓血症胆汁郁积、自身免疫肝炎、慢性病毒性肝炎、酒精性
肝病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝移植相关移植物抗宿
主病、活供体肝移植再生、先天性肝纤维化、胆总管结石、肉芽性肝病、肝内或外恶性肿瘤、
Sjogren综合征、结节病、Wilson's疾病、Gaucher's疾病、血色病或α1一抗膜蛋白酶缺乏症。

[0082] 作为更进一步优选的方案，胃肠疾病选自炎症性肠病(IBD)(包括Crohn's疾病和溃病性肠炎)、肠易激综合征(IBS)、细菌过度生长、营养吸收不良、反射后结肠炎或微小性
结肠炎。

[0083] 作为更进一步优选的方案，肾病选自糖尿病肾病、局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)、高血压肾病、慢性肾小球炎、慢性移植性肾小球病、慢性间质性肾炎或多囊肾病。

[0084] 作为更进一步优选的方案，心血管疾病选自动脉硬化症、动脉硬化、动脉粥样硬化、血脂障碍、高胆固醇血症或高甘油三酯血症。

[0085] 作为更进一步优选的方案，代谢疾病选自胰岛素抗性、I型糖尿病、II型糖尿病或肥胖。

[0086] 作为更进一步优选的方案，脑血管疾病选自中风。

[0087] 作为更进一步优选的方案，癌症选自结直肠癌或肝癌。

[0088] 本发明另一方面提供一种预防或治疗FXR介导的疾病或状况的方法，包括施用治疗有效量的前述胆酸衍生物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物。

[0089] 详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。

[0090] “C1‑8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1‑二甲基丙基、1，2‑二甲基丙基、2，2‑二甲基丙基、1‑乙基丙基、2‑甲基丁基、3‑甲基丁基、正己基、
1‑乙基‑2‑甲基丙基、1，1，2‑三甲基丙基、1，1‑二甲基丁基、1，2‑二甲基丁基、2，2‑二甲基丁基、1，3‑二甲基丁基、2‑乙基丁基、2‑甲基戊基、3‑甲基戊基、4‑甲基戊基、2，3‑二甲基丁基、正庚基、2‑甲基己基、3‑甲基己基、4‑甲基己基、5‑甲基己基、2，3‑二甲基戊基、2，4‑二甲基戊基、2，2‑二甲基戊基、3，3‑二甲基戊基、2‑乙基戊基、3‑乙基戊基、正辛基、2，3‑二甲基己基、2，4‑二甲基己基、2，5‑二甲基己基、2，2‑二甲基己基、3，3‑二甲基己基、4，4‑二甲基己基、2‑乙基己基、3‑乙基己基、4‑乙基己基、2‑甲基‑2‑乙基戊基、2‑甲基‑3‑乙基戊基或其各种支链异构体等。

[0091] “环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3‑8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，例如：

[0092] 单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。

[0093] 多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭
的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基
基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：

[0094]

[0095] “稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电
子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制
性实施例包含：

[0096]

[0097] “桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以
分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：

[0098]

[0099] 所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。

[0100] “烷氧基”指‑O‑(烷基)，其中烷基的定义如上所述。“C1‑8烷氧基”指含1‑8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。

[0101] “环烷氧基”指和‑O‑(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。“C3‑8环烷氧基”指含3‑8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。

[0102] “卤取代的C1‑8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1‑8个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。

[0103] “C(O)R12”指R12取代的羰基。

[0104] “P(O)R12R13”指R12、R13取代的磷酰基，R12、R13任选相同或不同的取代基。“PE”指石油醚。

[0105] “EA”指乙酸乙酯。

[0106] “THF”指四氢呋喃。

[0107] “DCM”指二氯甲烷。

[0108] “CDI”指N,N‑羰基二咪唑

[0109] “DMF”指N、N‑二甲基甲酰胺。

[0110] “Dioxane”指1,4‑二氧六环。

[0111] “DMAP”指4‑二甲氨基吡啶。

[0112] “DIPEA”指二异丙基乙胺。

[0113] “TMSCl”指三甲基氯硅烷。

[0114] “LDA”指二异丙基胺基锂。

[0115] “Selectflour”指选择性氟试剂。

[0116] “EDC·HCl”指1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐。

[0117] “TBTU”指O‑苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲四氟硼酸。

[0118] “NBS”指N‑溴代丁二酰亚胺。

[0119] “任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以
但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

[0120] “取代的”指基团中的一个或多个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的
情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具
有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

[0121] “药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药
物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

[0122] 下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。

[0123] 本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC‑MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE‑400核
磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO‑d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)内标为
四甲基硅烷(TMS)。

[0124] 液质联用色谱LC‑MS的测定用Agilent 1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695‑
2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。

[0125] 薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟
台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

[0126] 本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。

[0127] 在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。

[0128] 实施例1

[0129] (4R)‑4‑((3R,4R,5S,6R,7R,10R,13R)‑6‑乙基‑4‑氟‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)戊酸的制备

[0130]

[0131] 第一步：

[0132] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，6.0g，14.2mmol)溶解在4N HCl的甲醇溶液中回流搅拌2小时，TLC(PE:EA＝1:2)显示反应完全，旋去甲醇，加入饱和碳酸氢钠调节到碱性，用
50mL的乙酸乙酯提取，有机相硫酸钠干燥后旋干得化合物1‑ii(6.0g，98％)。

[0133] 第二步：

[0134] 称取化合物1‑ii(4.0g,9.2mmol)溶解在40mL的甲苯中，依次加入碳酸银(5.0g,18.4mmol)和硅藻土(10g)后回流搅拌24小时，TLC(PE:EA＝2:1)显示反应完全，过滤除去硅
藻土，用乙酸乙酯多次洗涤后有机相旋干并经过柱层析得化合物1‑iii(1.0g,25％)。

[0135] 第三步：

[0136] 称取化合物1‑iii(100mg,0.21mmol)溶解在2mL的四氢呋喃中，在‑78℃下依次加入TMSCl(200μL,1.05mmol)和LDA(90μL,0.42mmol)，继续搅拌3小时，加入饱和碳酸氢钠淬
灭，然后用乙酸乙酯提取，硫酸钠干燥后旋干得中间体。所得产物溶在2mL的乙腈中，
selectflour(105mg,0.29mmol)加入后室温搅拌1小时，TLC(PE:EA＝5:1)显示反应完全，加
入10mL的水，并用乙酸乙酯提取，有机相旋干得100mg化合物1‑iv，粗产品直接用于下步反
应。

[0137] 第四步：

[0138] 称取化合物1‑iv(300mg,0.6mmol)溶解在dioxane/H2O(10mL/0.5mL)中，分批加入硼氢化钠(49mg,1.3mmol)，然后室温搅拌过夜，补加1当量硼氢化钠，继续搅拌4小时，TLC
(PE:EA＝5:1)显示原料消失，加入10mL的水淬灭，用乙酸乙酯提取，有机相用硫酸钠干燥后
柱层析得化合物1‑v(40mg,15％)。

[0139] 第五步：

[0140] 化合物1‑v(40mg,0.088mmol)溶解在1mL的四氢呋喃中，加入1mL的1N NaOH后室温搅拌2小时，TLC(PE:EA＝1:1)显示反应完全，加1N HCl调节到酸性，乙酸乙酯提取，有机相
硫酸钠干燥后柱层析得化合物1(5mg,12％)。

[0141] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.35–5.13(m,1H),3.75(s,1H),3.56–3.36(m,1H),2.40–2.28(m,1H),2.23–2.11(m,1H),0.90(s,3H),0.88–0.83(m,6H),0.59(s,3H)。

[0142] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ178.50,99.65(d,J＝168.8Hz),74.89(d,J＝20.0Hz),70.96,55.78,50.45,49.37(d,J＝13.6Hz),42.77,42.10,40.33,39.48,39.00(d,J＝
9.4Hz),35.39,35.33,34.44,30.78,29.69,28.15,26.02(d,J＝8.5Hz),24.28(d,J＝
8.3Hz),23.60,23.28,20.75,18.23,12.48,11.83。

[0143] 19F NMR(376MHz,CDCl3)δ‑188.73。

[0144] 实施例2

[0145] (4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)‑N‑羟基戊酰胺的制备

[0146]

[0147] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，100mg，0.24mmol)溶于2毫升N,N‑二甲基甲酰胺，再加入N,N‑羰基二咪唑(77mg，0.48mmol)，室温搅拌0.5小时。然后加入盐酸羟胺(66mg，
0.95mmol)，室温反应0.5小时，反应完全。加水淬灭，乙酸乙酯萃取3次。有机相用无水硫酸
钠干燥。过滤，浓缩，柱层析分离，得化合物2(16mg，15％)。

[0148] 1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.29(d,J＝4.2Hz,1H),4.04(d,J＝5.0Hz,1H),3.50(brs,1H),3.20–3.10(m,2H),2.05–1.61(m),1.60–0.76(m),0.60(s,3H)。

[0149] 13C NMR(101MHz,DMSO)δ169.99,71.08,68.89,56.02,50.60,45.83,42.50,41.77,36.01,35.70,35.42,34.05,33.14,31.94,30.93,29.68,29.44,28.29,23.57,22.63,
20.89,18.76,12.22,12.17。

[0150] 实施例3

[0151] (4R)‑N‑氰基‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)戊酰胺的制备

[0152]

[0153] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，60mg，0.14mmol)、DMAP(21mg，0.17mmol)、EDC·HCl(38mg，0.20mmol)以及NH2CN(12mg，0.28mmol)，溶于2毫升二氯甲烷，加入DIPEA(50μL，
0.28mmol)，室温搅拌过夜，反应完全。加入二氯甲烷稀释，依次用稀盐酸和饱和食盐水洗
涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，柱层析分离，得化合物3(25mg，39％)。

[0154] 1H NMR(400MHz,DMSO)δ4.28(brs,1H),3.50(brs,1H),3.13(brs,1H),2.30(dd,J＝9.6,5.1Hz,2H),2.20(dd,J＝14.1,5.8Hz,2H),1.96–1.59(m),1.60–0.76(m),0.61(s,
3H)。

[0155] 13C NMR(101MHz,DMSO)δ175.28,71.08,68.89,55.92,50.59,45.82,42.53,41.76,36.02,35.70,35.30,34.04,33.14,32.40,30.92,29.44,28.24,23.57,22.63,20.89,
18.69,12.18,12.17。

[0156] 实施例4

[0157] (4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)‑N‑甲氧基戊酰胺的制备

[0158]

[0159] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，42mg，0.1mmol)溶于1mL N,N‑二甲基甲酰胺，再加入三乙胺(0.03mL，0.2mmol)，冰浴下加入氯甲酸乙酯(0.01mL，0.11mmol)搅拌0.5h。称取甲氧基胺盐酸盐(9mg，0.11mmol)溶于1mL N,N‑二甲基甲酰胺，再加入三乙胺(0.03mL，
0.2mmol)，将此溶液逐滴加入前述反应容器，反应温度逐步提高至室温，3‑4h基本反应完
全。加入饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液经
柱分离浓缩得化合物4(19.2mg，43％)。

[0160] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.69(brs,3H),3.63(brs,1H),3.40–3.27(m,1H),1.96–1.02(m),1.00–0.75(m),0.59(s,3H)。

[0161] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ171.86,71.81,69.79,62.89,55.87,50.29,45.57,42.38,41.78,40.19,39.66,35.41,35.26,33.15,33.05,31.50,29.88,29.39,27.89,23.18,
22.39,22.11,20.60,17.51,10.87,10.66。

[0162] 实施例5

[0163] ((4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)戊酰氨基)甲磺酸的制备

[0164]

[0165] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，42mg，0.10mmol)溶于1mL干燥N,N‑二甲基甲酰胺，冰水浴冷却下依次加入三乙胺(28μL，0.20mmol)，氯甲酸乙酯(11μL，0.11mmol)，低温下反应30分钟。再加入氨基甲磺酸(12mg，0.11mmol)，加完后，恢复室温反应5小时。反应完全，浓缩，粗产品经柱层析分离，得化合物5(35mg，68％)。

[0166] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.42–4.25(m,2H),3.67(brs,1H),3.33(brs,1H),2.48–2.31(m,1H),2.28–2.13(m,1H),2.11–1.70(m),1.68–0.84(m),0.71(s,3H)。

[0167] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ175.42,71.84,69.86,56.00,55.50,50.30,45.57,42.41,41.75,40.19,39.69,35.59,35.45,35.30,33.15,33.07,32.71,31.59,29.93,27.95,
23.25,22.51,22.12,20.64,17.68,11.03,10.77。

[0168] 实施例6

[0169] (((4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)戊酰氨基)甲基)膦酸的制备

[0170]

[0171] 第一步：

[0172] 6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，40mg，0.046mmoL)溶解在二氯甲烷中，依次加入碳酸二(N‑琥珀酰亚胺基)酯(20mg,0.051mmol)和三乙胺(40L,0.14mmol)，室温搅拌4小时，TLC
(PE:EA＝1:2)显示原料消失，加入2mL水和10mL二氯甲烷，有机相硫酸钠干燥并旋干得化合
物6‑ii。

[0173] 第二步：

[0174] 将上述产物6‑ii溶在DMF/H2O(1mL/1mL)中，加入碳酸钠(12mg,0.11mmol)和氨甲基磷酸，室温搅拌24小时后TLC(PE:EA＝2:1)显示反应完全，用1N HCl调节到酸性，加入
10mL的乙酸乙酯，有机相用2mL水洗涤3次后硫酸钠干燥并旋干得化合物6(5.4mg,22％)。

[0175] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.55(s,1H),3.48(d,J＝12.5Hz,2H),3.23–3.19(m,1H),0.88(d,J＝6.4Hz,3H),0.85–0.74(m,6H),0.60(s,3H)。

[0176] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ175.22,71.81,69.81,56.01,50.28,45.57,42.36,41.77,40.18,39.67,36.78,35.52,35.39,35.25,33.15,33.04,32.48,31.71,29.87,27.89,
23.18,22.36,22.10,20.59,17.52,10.85,10.63。

[0177] 31P NMR(162MHz,MeOD)δ20.49(s)。

[0178] 实施例7

[0179] (2‑((4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)戊酰氨基)乙基)膦酸的制备

[0180]

[0181] 第一步：

[0182] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，40mg，0.046mmoL)溶解在二氯甲烷中，依次加入碳酸二(N‑琥珀酰亚胺基)酯(20mg,0.051mmol)和三乙胺(40μL,0.14mmol)，室温搅拌4小时，
TLC(PE:EA＝1:2)显示原料消失，加入2mL水和10mL二氯甲烷，有机相硫酸钠干燥并旋干得
化合物7‑ii。

[0183] 第二步：

[0184] 将上述产物7‑ii溶在DMF/H2O(1mL/1mL)中，加入碳酸钠(12mg,0.11mmol)和氨甲基磷酸，室温搅拌24小时后TLC(PE:EA＝2:1)显示反应完全，用1N HCl调节到酸性，加入
10mL的乙酸乙酯，有机相用2mL水洗涤3次后硫酸钠干燥并旋干得化合物7(1.9mg,7％)。

[0185] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.62–3.52(m,1H),3.38–3.27(m,1H),3.24–3.20(m,2H),0.92–0.84(m,3H),0.84–0.76(m,6H),0.60(s,3H)。

[0186] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ175.31,71.81,69.81,60.13,55.96,50.28,45.58,42.36,41.78,40.19,39.66,35.51,35.39,35.25,33.15,33.05,31.79,29.87,29.32,27.90,
23.17,22.34,22.10,20.58,17.52,13.05,10.84,10.61。

[0187] 31P NMR(162MHz,MeOD)δ25.30(s)。

[0188] 实施例8

[0189] (4R)‑4‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)‑N‑(2‑羟基乙氧基)戊酰胺的制备

[0190]

[0191] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，30mg,0.07mmol)和化合物8‑ii(6.5mg,0.085mmoL)溶在二氯甲烷中，依次加入TBTU(40mg,0.11mmoL)和DIPEA(30μL,0.21mmoL)，室
温下搅拌过夜，TLC检测，原料消失。加水，乙酸乙酯萃取。有机相浓缩，柱层析分离得化合物
8(10mg,30％)。

[0192] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.95–3.85(m,1H),3.74(dt,J＝16.4,4.7Hz,2H),3.67(s,1H),3.35–3.32(m,1H),1.00(d,J＝6.5Hz,3H),0.95–0.89(m,6H),0.72(s,3H)。

[0193] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ172.75,77.45,71.80,69.78,59.02,55.86,50.29,48.46,45.57,42.37,41.77,40.17,39.65,35.40,35.25,33.15,33.04,31.49,29.87,29.32,
27.90,23.17,22.36,22.10,20.59,17.47,10.85,10.64。

[0194] 实施例9

[0195] (3R)‑3‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丁烷‑1‑磺酸的制备

[0196]

[0197] 第一步：

[0198] 称取化合物9‑i(1.5g,3.58mmol)溶于20mL吡啶，加入15mL乙酸酐，室温搅拌过夜，TLC(PE:EA＝2:1)显示反应完全，减压旋去溶剂并柱层析得化合物9‑ii(700mg,42％)。

[0199] 第二步：

[0200] 称取化合物9‑ii(100mg,0.21mmol)溶于2mL二氯甲烷，滴入一滴DMF，再加入草酰氯(18μL,0.21mmoL)，室温搅拌1小时后TLC(PE:EA＝5:1)显示反应完全。旋干溶剂，然后将
粗产品溶在2mL的乙腈中，加入化合物9‑iii(38mg,0.25mmol)和DMAP(1mg,0.05％)，置换氮
气后回流搅拌2小时，TLC(PE:EA＝5:1)显示反应完全，直接柱层析得化合物9‑iv(110mg,
90％)。

[0201] 第三步：

[0202] 称取化合物9‑iv(300mg,0.66mmol)溶在12mL乙醇中，加入12mL亚硫酸钠水溶液(20％)，回流反应24小时。TLC(PE:EA＝10:1)显示反应完全，加20mL水，酸性，用乙酸乙酯提
取后硫酸钠干燥并旋干得化合物9‑v(200mg,76％)。

[0203] 第四步：

[0204] 称取化合物9‑v(70mg,0.14mmol)溶在THF/H2O(4mL/0.4mL)中，加入18mg的硼氢化钠后室温搅拌2小时，加水淬灭，乙酸乙酯提取后将有机相旋干，柱层析分离得化合物9‑vi
(30mg,50％)。

[0205] 第五步：

[0206] 称取化合物9‑vi(30mg,0.06mmol)溶在THF中，氮气保护下加入氢化铝锂(10mg,0.27mmol)，所得溶液在70℃下搅拌过夜，然后加水淬灭，乙酸乙酯萃取。有机相旋干，柱层
析分离，得化合物9(1mg,3％)。

[0207] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.70–3.51(m,3H),3.42–3.27(m,1H),0.91–0.87(m,3H),0.85–0.79(m,6H),0.61(s,3H)。

[0208] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ72.36 70.93,60.90,56.38,50.58,45.25,42.83,41.23,40.09,39.67,39.02,35.56,34.07,33.29,32.94,30.70,29.69,28.40,23.74,23.15,
22.25,20.77,18.84,11.77,11.65。

[0209] 实施例10

[0210] 5‑((3R)‑3‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丁基)‑1,3,4‑噁二唑‑2(3H)‑酮的制备

[0211]

[0212] 第一步：

[0213] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸甲酯10‑i(96mg，0.22mmol)溶于2.5mL乙醇，再加入水合肼(0.5mL，85％)，加热回流7小时，基本反应完全。冷却后加入饱和水盐水洗涤，乙酸乙酯萃
取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液浓缩，得化合物10‑ii(87mg，91％)。

[0214] 第二步：

[0215] 称取上述粗产品(43mg，0.10mmol)溶于2mL干燥四氢呋喃，再加入N,N‑羰基二咪唑(19mg，0.12mmol)，室温搅拌过夜。反应完全后加入饱和水盐水洗涤，二氯甲烷萃取三次。合
并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，粗产品经柱层析分离，得化合物10(20mg，43％)。

[0216] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.64(s,1H),3.65(brs,1H),3.44–3.25(m,1H),2.54(ddd,J＝15.2,10.5,4.5Hz,1H),2.38(ddd,J＝15.7,9.9,6.2Hz,1H),2.12–1.01(m),1.00–0.75
(m),0.59(s,3H)。

[0217] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ158.71,155.39,72.31,71.14,55.62,50.45,45.17,42.78,41.23,39.98,39.60,35.54,35.51,35.30,33.91,33.28,31.38,30.58,28.22,
23.67,23.39,23.14,22.23,20.75,18.25,11.79,11.65。

[0218] 实施例11

[0219] (3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑17‑((R)‑4‑(4H‑1,2,4‑三唑‑3‑基)丁烷‑2‑基)‑6‑乙基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑3,7‑二酚的制备

[0220]

[0221] 第一步：

[0222] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸(OCA，42mg，0.10mmol)溶于1mL干燥N,N‑二甲基甲酰胺，冰水浴冷却下依次加入三乙胺(28μL，0.20mmol)，氯甲酸乙酯(11μL，0.11mmol)，反应30分钟后加入2.0M氨气甲醇溶液(0.10mL，0.20mmol)。恢复至室温，反应2小时。反应完全，浓缩
后直接用于下步反应。

[0223] 第二步：

[0224] 在上述粗产品中加入N,N‑二甲基甲酰胺二甲基缩醛(2mL)，加热回流2小时。反应完全后，冷却至室温，浓缩，所得粗产品溶于2mL醋酸，再加入盐酸肼(21mg，0.20mmol)，加热
90℃反应90分钟。冷却至室温，加水淬灭。乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和NaHCO3水溶液洗
涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，粗产品经柱层析分离，得化合物11(21mg，47％)。

[0225] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.67(brs,1H),2.94–2.80(m,1H),2.73–2.66(m,1H),2.09–0.97(m),0.96–0.85(m,6H),0.70(s,3H)。

[0226] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ124.72,71.80,69.79,55.87,50.28,45.57,42.38,41.77,40.18,39.66,35.40,35.25,34.19,33.15,33.05,29.88,29.52,27.92,23.18,22.37,
22.10,20.59,17.50,10.83,10.64。

[0227] 实施例12

[0228] 3‑((3R)‑3‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丁基)‑1,2,4‑噁二唑‑5(4H)‑酮的制备

[0229]

[0230] 第一步：

[0231] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酰胺12‑i(210mg，0.50mmol)溶于5毫升四氢呋喃，冰水浴冷却下依次加入三乙胺(0.56mL，4.0mmol)和三氟乙酸酐(0.28mL，2.0mmol)。加完后室温反
应3小时。反应完全后，加入饱和NaHCO3水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取2次。有机相浓缩后溶于5
毫升四氢呋喃，再加入5毫升0.5N氢氧化钠水溶液，加热60℃反应3小时。反应完全后乙酸乙
酯萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，柱层析分离，得氰基化合物12‑ii(167mg，
83％)。

[0232] 第二步：

[0233] 称取化合物12‑ii(20mg，0.05mmol)、盐酸羟胺(4mg，0.055mmol)以及NaHCO3(5mg，0.06mmol)，加入2毫升甲醇中，微波120℃反应15小时，反应约一半。补加盐酸羟胺(4mg，
0.055mmol)、NaHCO3(5mg，0.06mmol)，继续微波120℃反应12小时，基本反应完全。浓缩，乙
酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩，所得粗产品溶于2毫升1,4‑二氧六环，加入CDI(12mg，0.075mmol)，加热至回流，反应2小时，原料消失。加入3毫升0.1N氢氧
化钠水溶液，加热50℃反应1小时。冷却后加入稀盐酸中和，再用乙酸乙酯萃取2次。有机相
用饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩，柱层析分离，得化合物12(15mg，65％)。

[0234] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.53(s,1H),3.63(brs,1H),3.46–3.30(m,1H),2.62–2.48(m,1H),2.47–2.35(m,1H),2.11–0.71(m),0.60(s,3H)。

[0235] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ161.06,159.69,72.46,70.93,55.64,50.58,45.14,42.83,41.19,40.03,39.65,35.51,35.34,33.83,33.30,31.94,31.44,30.38,30.21,
29.69,28.30,23.69,23.12,22.24,22.09,20.75,18.26,11.80,11.66。

[0236] 实施例13

[0237] 5‑((3R)‑3‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丁基)‑1,3,4‑噁二唑‑2‑羧酸的制备

[0238]

[0239] 第一步：

[0240] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸甲酯10‑ii(43mg，0.10mmol)溶于2mL氯仿，再依次加入吡啶(12μL，0.15mmol，1.5eq.)和草酰氯单乙酯(13μL，0.12mmol，1.2eq.)加热80℃反应2小时，基本反应完全。浓缩后加入饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸
钠干燥。过滤，滤液浓缩，柱层析分离(CH2Cl2/MeOH 30:1)得化合物13‑ii(22mg，43％)。

[0241] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.31(q,J＝7.1Hz,2H),3.63(brs,1H),3.40–3.28(m,1H),2.31(ddd,J＝14.9,10.3,4.8Hz,1H),2.16(ddd,J＝14.7,9.6,4.7Hz,1H),1.94–1.00(m),
1.00–0.71(m,H),0.58(s,3H)。

[0242] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ170.45,158.61,152.39,72.34,70.87,63.61,55.75,50.54,45.21,42.77,41.23,40.06,39.66,35.51,35.41,33.90,33.26,31.34,30.88,
30.59,30.33,28.23,23.70,23.15,22.25,20.77,18.37,13.97,11.82,11.67。

[0243] 第二步：

[0244] 称取13‑ii(16mg，0.031mmol)溶于1mL四氢呋喃，再加入1mL氢氧化钠水溶液(0.5N)，加热60℃反应2小时，反应完全后加入稀盐酸酸化，乙酸乙酯萃取。柱层析分离
(CH2Cl2/MeOH 5:1)，得化合物13(14mg，93％)。

[0245] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ3.56(brs,1H),2.31–2.17(m,1H),2.17–2.03(m,1H),1.99–0.73(m),0.61(s,3H)。

[0246] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ173.80,160.17,157.52,71.81,69.82,55.97,50.28,45.57,42.38,41.77,40.18,39.67,35.40,35.25,33.15,33.05,31.39,30.36,29.87,
27.87,23.18,22.37,22.10,20.59,17.50,10.88,10.64。

[0247] 实施例14

[0248] 5‑((2R)‑2‑((3R,5S,6R,7R,10S,13R)‑6‑乙基‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丙基)噻唑烷‑2,4‑二酮的制备

[0249]

[0250] 第一步：

[0251] 称取6α‑乙基‑鹅去氧胆酸甲酯1‑ii(845mg,1.94mmoL)，溶于10mL干燥四氢呋喃中，干冰‑乙醇冷却至‑72℃。滴加LDA溶液(4.9mL，9.72mmol，2M)，15分钟加完，继续搅拌15分钟后滴加三甲基氯硅烷(1.0mL，11.7mmol)，维持低温反应4小时。将N‑溴代丁二酰亚胺
(692mg，3.89mmol)溶于5毫升四氢呋喃，再滴加入反应体系，加完后自然升至室温，反应过
夜。TLC显示反应完全，加入10毫升水淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗
涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗产品14‑ii，直接用于下步反应。

[0252] 第二步：

[0253] 化合物14‑ii溶于20毫升乙醇，再加入硫脲(443mg,5.82mmol)和乙酸钠(477mg，5.82mmol)，加热回流，反应过夜。冷却后加入2N盐酸(20mL)，继续回流，反应24小时。冷却，减压浓缩，除去乙醇。乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗产品经柱层析分离，得非对应异构体14‑α与14‑β的混合物(487mg,52％)。

[0254] 14‑α：1H NMR(400MHz,MeOD)δ4.13(dd,J＝7.4,5.8Hz,1H),3.60(brs,1H),3.31–3.20(m,1H),2.30(ddd,J＝14.3,5.6,3.6Hz,1H),1.96–1.02(m),1.02–0.75(m,12H),0.61
(s,3H)。

[0255] 13C NMR(101MHz,MeOD)δ177.04,172.50,71.95,70.57,56.15,50.36,49.34,45.24,42.90,41.33,40.17,39.91,39.56,35.48,35.44,35.22,33.32,33.14,30.17,
28.36,23.53,23.06,22.10,20.71,18.76,11.60,11.46。

[0256] 14‑β：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.31(dd,J＝11.3,3.3Hz,1H),3.70(brs,1H),3.53–3.37(m,1H),2.02–1.08(m),1.08–0.78(m,12H),0.67(s,3H)。

[0257] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ176.05,171.36,72.51,71.02,56.25,50.49,50.09,45.10,42.90,41.24,40.20,39.97,39.57,35.54,35.51,35.45,33.60,33.08,30.27,
28.39,23.70,23.09,22.21,20.72,17.58,11.81,11.65。

[0258] 实施例15

[0259] 5‑((2R)‑2‑((3R,5S,7R,10S,13R)‑3,7‑二羟基‑10,13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丙基)噻唑烷‑2,4‑二酮的制备

[0260]

[0261] 第一步：

[0262] 称取鹅去氧胆酸甲酯15‑i(348mg,0.86mmoL)，溶于5mL干燥四氢呋喃中，干冰‑乙醇冷却至‑72℃。滴加LDA溶液(2.1mL，4.28mmol，2M)，15分钟加完，继续搅拌15分钟后滴加
三甲基氯硅烷(0.44mL，5.14mmol)，维持低温反应4小时。将N‑溴代丁二酰亚胺(305mg，
1.71mmol)溶于5毫升四氢呋喃，再滴加入反应体系，加完后自然升至室温，反应过夜。TLC显
示反应完全，加入10毫升水淬灭，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫
酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗产品15‑ii，直接用于下步反应。

[0263] 第二步：

[0264] 化合物15‑ii溶于10毫升乙醇，再加入硫脲(196mg,2.58mmol)和乙酸钠(222mg，2.58mmol)，加热回流，反应6小时。冷却后加入2N盐酸(10mL)，继续回流，反应过夜。冷却，减压浓缩，除去乙醇。乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗产品经柱层析分离，得非对映体15‑与15‑的混合物(220mg,57％)。

[0265] 15‑α：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(s,1H),4.16(dd,J＝7.1,6.1Hz,1H),3.79(d,J＝2.3Hz,1H),3.48–3.35(m,1H),2.32(ddd,J＝14.3,5.8,3.6Hz,1H),2.13(dd,J＝24.6,
12.8Hz,1H),1.96–1.02(m),1.02–0.73(m),0.62(s,3H).

[0266] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.14,170.32,72.01,68.54,56.15,50.45,49.20,42.99,41.47,40.25,39.89,39.64,39.41,35.33,35.25,35.05,34.75,32.87,30.67,
28.42,23.74,22.75,20.59,18.89,11.76.

[0267] 15‑β：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.87(s,1H),4.23(dd,J＝11.5,3.8Hz,1H),3.79(brs,1H),3.53–3.28(m,1H),2.32–0.98(m),0.98–0.70(m),0.60(s,3H).

[0268] 13C NMR(101MHz,CDCl3)δ176.19,171.57,72.12,68.62,56.15,50.33,50.09,42.81,41.42,40.26,39.56,39.31,35.45,35.33,35.06,34.78,32.70,30.37,29.69,
28.41,23.67,22.74,20.57,17.58,11.78.

[0269] 生物学实验例1

[0270] FXR受体结合活性测试(时间分辨荧光检测方法TR‑FRET法)

[0271] 为了测试化合物对FXR受体结合的影响，我们选用商业化的FXR受体结合活性测试试剂盒来测试化合物对FXR与其结合蛋白片段的影响(LBD结构域与SRC1片段结合)(试剂盒
供应商life technology Invitrogen Catalog：PV4835；cisbio Catalog：610SAXLA和
61GSTKLA)。具体方法见试剂盒说明书。操作如下：

[0272] 1、准备2x GST标签的FXR‑LBD/抗GST的Eu混合液至所需体积，GST‑FXR‑LBD的浓度为6nM，Eu为50nl/孔。

[0273] 2、准备2x生物素标记的SRC1/链霉素‑别藻蓝素(SA‑APC)混合液至所需体积，SRC1浓度为1000nM，链霉素‑别藻蓝素为50nl/孔。

[0274] 3、将2x GST‑FXR/Eu和SRC1/SA‑APC两种混合液1：1混合。

[0275] 4、将20μl GST‑FXR/Eu和SRC1/SA‑APC混合液加到含有待测化合物的384孔板。

[0276] 5、1000rpm离心1min；室温孵育180min后，

[0277] 6、时间分辨荧光检测：EnVision读板器读板

[0278] 7、结果分析：

[0279] (1)665nm处数值除以615nm处数值；

[0280] (2)计算激动率

[0281] 激动率＝(X‑Min)/(Max‑Min)*100％

[0282] ■X代表每个浓度的665/615值；

[0283] ■Min代表未加化合物的665/615值；

[0284] ■Max代表参照化合物的665/615值。

[0285] 本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的EC50值见下表。

[0286]实施例编号 EC50(uM)
1 0.214
2 0.167
3 0.016
4 0.054
5 0.031
6 1.267
7 0.552
8 0.228
9 0.432
10 0.061
11 0.366
12 0.052
13‑ii 0.070
13 0.283
14‑α 0.013
14‑β 0.004
15‑α 0.143
15‑β 0.312

[0287] 结论：本发明实施例化合物对FXR活性均有明显地激动作用。

[0288] 生物学实验例2

[0289] FXR报告基因表达测试

[0290] 为了分析测试化合物对FXR调控的基因表达的影响，我们利用Promega公司的双荧光素酶检测系统(Promega#E1980)在瞬时转染了FXR Gal4报告基因片段的HepG2肝癌细胞
株(ATCC#HB‑8065)中检测化合物对FXR报告基因的影响。具体实验方法如下：

[0291] 1.HepG2细胞培养和维护

[0292] 消化细胞并以10ml完全培养基种植合适密度的细胞，然后37度5％CO2潮湿条件下培养24小时。

[0293] 2.细胞种植和转染。转染试剂为Fugene HD(Promega#E231A)

[0294] (1)根据下表准备转染混合物

[0295] pBIND‑FXR(ng/孔) 25pG5Luc(ng/孔) 25
FuGENE HD(μl/孔) 0.15
无血清培养基(μl/孔) 1.85
总混合物(μl/孔) 2.5

[0296] (2)剧烈地混匀管内的混合物，室温孵育15分钟；

[0297] (3)消化培养皿内的细胞并计数；

[0298] (4)稀释细胞混悬液至密度为60万/ml的所需体积(96孔板100μl/孔)；

[0299] (5)将所需体积的转染混合物加到细胞混悬液中，然后100μl/孔铺板；

[0300] (6)37度5％CO2潮湿条件下孵育24小时。

[0301] 3.处理化合物

[0302] (1)准备10mM的化合物母液，然后用DMSO 3倍连续稀释

[0303] (2)加10μl的化合物至90μl完全培养基(10x)

[0304] (3)每孔加5μl的化合物溶液(21x)

[0305] (4)37度5％CO2潮湿条件下孵育18小时

[0306] 4.双荧光素酶检测

[0307] 由Promega公司的双荧光素酶检测系统检测萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶信号(Promega#E1980)。

[0308] 5.结果分析

[0309] (1)检测得到的数值由萤火虫荧光素酶信号(F)除以海肾荧光素酶信号(R)，即F/R。这种数据处理排除了细胞数量和转染效率带来的差异。

[0310] (2)计算激动率

[0311] 激动率＝(X‑Min)/(Max‑Min)*100％

[0312] ■X代表每个浓度的F/R值；

[0313] ■Min代表未加化合物的F/R值；

[0314] ■Max代表参照化合物的F/R值。

[0315] (3)根据GraphPrism 5.0计算EC50

[0316] 本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的EC50值见下表。

[0317]

[0318]

[0319] 结论：本发明实施例化合物对FXR活性均有明显地激动作用。

[0320] 生物学实验3

[0321] (大鼠药代动力学研究试验)

[0322] 本发明药代动力学研究以大鼠为受试动物，研究阳性参考药物INT‑747以及代表性化合物例如实施例14‑β在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。

[0323] 1.试验方案

[0324] (1)每例使用SD大鼠3只，雄性，由西普尔‑必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号SCXK(沪)2008‑0016。

[0325] (2)称取样品10毫克，加入0.5％CMC‑Na水溶液10毫升，充分震荡均匀，

[0326] 制成1mg/ml溶液，剩余药液留样用于定量分析。

[0327] (3)SD大鼠3只，雄性；禁食一夜后分别灌胃给药，剂量为10mg/kg，给药体积10ml/kg。

[0328] (4)于给药前和给药后0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,24.0,30.0h下颌静脉采血～0.05ml，置于EDTA‑K2试管中试管中，收集血样均6500rpm离心5min分离血浆，于‑80度保存。
给药后4h进食。

[0329] 2.分析方法

[0330] (1)仪器设备：API 4000三重四级杆质谱仪，美国Applied Biosystems公司；Shimadzu LC‑20AD高效液相色谱系统，日本Shimadzu公司。

[0331] (2)色谱条件：色谱柱采用Phenomenex gemiu 5um C18 50X4.6mm；流动相为乙腈：0.1％TFA水溶液(梯度洗脱)；流速(ml/min)为0.8ml/min。

[0332] (3)质谱条件：

[0333]入口电位 10psi
碰撞池出口电位 12psi
气帘气 15psi
碰撞气 中等
扫描方式 ESI(+),MRM
离子喷雾电压 5500V
温度 550℃
离子源气1 50psi
离子源气2 50psi

[0334] 3.药物代谢实验结果：

[0335] (1)试验结果表明，大鼠灌胃给予10mg/kg阳性参考药物INT‑747后，血药浓度达峰时间tmax为0.5h，峰浓度Cmax为4413ng/ml，血药浓度‑时间曲线下面积AUC0‑t为9028ng/ml·
h。

[0336] (2)试验结果表明，大鼠灌胃给予10mg/kg实施例14‑β后，血药浓度达峰时间tmax为1h，峰浓度Cmax为7577ng/ml，血药浓度‑时间曲线下面积AUC0‑t为41796ng/ml·h。

[0337] 大鼠药代试验表明，本发明实施例14‑β化合物在受试动物体内暴露量要大大优于阳性参考药物INT‑747。